DE1543601C - Process for the production of peptides - Google Patents

Description

Bei der Synthese von asparagin- und glutaminhaltigen Peptiden treten Schwierigkeiten dadurch auf, daß sich Imide bilden können und die Dehydratisierung zu Nitrilen auftritt (vgl. hierzu E. Schröder und K. L ü b k e, The Peptides, Vol. I, Academic Press, New York und London, 1965, S. 110, 203 bis 204 und 191). Außerdem sind die asparagin- und glutaminhaltigen Zwischenprodukte häufig in aprotischen Lösungsmitteln schwer löslich, was die Verwendung von ungewöhnlich großen Mengen Lösungsmittel erforderlich macht.Difficulties arise in the synthesis of asparagine- and glutamine-containing peptides because that imides can form and dehydration to nitriles occurs (cf. E. Schröder and K. L ü b k e, The Peptides, Vol. I, Academic Press, New York and London, 1965, pp. 110, 203-204 and 191). In addition, the asparagine and glutamine-containing intermediates are often in aprotic solvents poorly soluble, which necessitates the use of unusually large amounts of solvent power.

Es wurde nun ein Verfahren zur Herstellung von Peptiden durch Kondensation 'von N-Acylaminosäuren oder N-Acylpeptiden mit einer freien oder aktivierten Carboxylgruppe und Aminosäuren oder Peptiden mit einer substituierten Aminogruppe gefunden, das dadurch gekennzeichnet ist, daß in den eingesetzten Aminosäure- und/oder Peptid-derivaten — CO — NH — und/oder — CONH₂-Gruppen vollständig oder teilweise durch 2,4-Dimethoxy-benzyl-Reste substituiert sind und man' gegebenenfalls anschließend die 2,4-Dimethoxy-benzyl-Reste durch Behandlung mit anorganischen' oder organischen starken Säuren, im Falle der Verwendung als ν ■:■:...,'.'., There has now been found a process for the preparation of peptides by condensation 'of N-acylamino acids or N-acyl peptides with a free or activated carboxyl group and amino acids or peptides with a substituted amino group, which is characterized in that in the amino acid and / or Peptide derivatives - CO - NH - and / or - CONH ₂ groups are completely or partially substituted by 2,4-dimethoxy-benzyl radicals and you 'optionally then the 2,4-dimethoxy-benzyl radicals by treatment with inorganic 'or organic strong acids, if used as ν ■: ■: ..., '. '.,

ΐ : , ^: ^ ■-TrCO'-i NH —-Substituienten ν ■ -.: ^;' oxybenzxl-amin oder Bis-2,4-dimethoxy-benzyl-säureamiden umsetzt. Zur Herstellung der entsprechenden Derivate des Asparagins oder Glutamins geht man von den N-Acyl-Λ-estern der Asparaginsäure und Glutaminsäure aus und setzt sie in derselben Weise mit 2,4-Dimethoxybenzyl-amin oder ■ Bis-2,4-dimethoxybenzyl-amin um. - _{t s r}· 'ΐ:, ^: ^ ■ -TrCO'-i NH - substituents ν ■ - .: ^; 'oxybenzxl-amine or bis-2,4-dimethoxy-benzyl-acid amides implemented. To prepare the corresponding derivatives of asparagine or glutamine, one starts from the N-acyl-Λ-esters of aspartic acid and glutamic acid and sets them in the same way with 2,4-dimethoxybenzylamine or bis-2,4-dimethoxybenzylamine around. - _{t sr} · '

2,4-pirriethoxybenzyl-amin wird beispielsweise aus 2,4-Dimethoxybenzaldehyd-oxim .durch ;katalytische2,4-pirriethoxybenzyl-amine, for example, is made from 2,4-dimethoxybenzaldehyde oxime .by; catalytic

ίο Hydrierung gewonnen und Bis-2,4-dimethoxybenzylamin aus dem i^-Dimethoxybenzoesäure-^-dimethoxybenzylamid mit Lithiumaluminiumhydrid. .ίο obtained hydrogenation and bis-2,4-dimethoxybenzylamine from the i ^ -dimethoxybenzoic acid - ^ - dimethoxybenzylamide with lithium aluminum hydride. .

Für die praktische Verwendbarkeit der 2,4-Dimethoxybenzyl-amide in der synthetischen Peptidchemie ist von Bedeutung, daß sie von Trifluoressigsäure bei 0°C innerhalb vonlO Minuten nicht abgespalten werden, ebenso nicht bei der Behandlung mit Natrium in flüssigem Ammoniak und beim Schütteln mit Pd-Kohle und Wasserstoff in Methanol bei Raumtemperatur undFor the practical usability of the 2,4-dimethoxybenzyl amides In synthetic peptide chemistry it is important that it is made from trifluoroacetic acid at 0 ° C are not split off within 10 minutes, nor when treated with sodium in liquid ammonia and when shaking with Pd-charcoal and hydrogen in methanol at room temperature and

ao Normaldruck. ''"..'■ao normal pressure. '' ".. '■

Nach der Abspaltung der Acylschutzgruppen, die unter diesen Bedingungen entfernbar sind (wie der tert. - Butyloxycarbonylrest, der ρ - Methoxy - benzyloxycarbonyl-rest und der Benzyloxycarbonyl-rest), werden die durch 2,4-Dimethoxybenzyl-Reste substituierten Aminosäure-amide in üblicher Weise zu Peptidsynthesen eingesetzt. Die durch 2,4-Dimethoxybenzyl-Gruppen substituierten Amide sind im Gegensatz zu den nicht substituierten in aprotischen Lösungsmitteln gut löslich.After the cleavage of the acyl protective groups, which can be removed under these conditions (such as the tert. - Butyloxycarbonyl radical, the ρ - methoxy - benzyloxycarbonyl radical and the benzyloxycarbonyl radical), those substituted by 2,4-dimethoxybenzyl radicals Amino acid amides used in the usual way for peptide syntheses. The through 2,4-dimethoxybenzyl groups Substituted amides are in contrast to the unsubstituted in aprotic solvents easily soluble.

Das erfindungsgemäße Verfahren verläuft, beispielsweise für die Synthese von Benzyloxycarbonyl-L - prolyl - L - leucyl - glycin - 2,4- dimethoxybenzylamid nach folgendem Reaktionsschema 1The process according to the invention runs, for example, for the synthesis of benzyloxycarbonyl-L - prolyl - L - leucyl - glycine - 2,4- dimethoxybenzylamide according to the following reaction scheme 1

35 Schema 1 35 Scheme 1

Z-GIy-OH + DMB-amin
. I DCCD oder InaminZ-Gly-OH + DMB-amine
. I DCCD or Inamin

40 Z-GIy-NH-DMB 40 Z-GIy-NH-DMB

Na/flüssiges NH₃ oder Pd/H₂ Na / liquid NH ₃ or Pd / H ₂

45 Z-L-Lep-OH + GIy-NH-DMB 45 ZL-Lep-OH + GIy-NH-DMB

. /·".■;■■■' '■'■..";■ I DCCD oder Inamin
Z-L-Leu -f GIy-NH-DMB . /·".■;■■■ '' ■ '■ .. "; ■ I DCCD or Inamin
ZL-Leu -f GIy-NH-DMB

Na/flüssiges NH₃ oder Pd/H₂ Na / liquid NH ₃ or Pd / H ₂

Z-L-Pro-OH-f- L-Leu-Gly-NH-DMB \ ₍-ZL-Pro-OH-f- L-Leu-Gly-NH-DMB \ ₍ -

5°, i^:_f;7.r:. ''■:■%-Vv; :i 11- Ί ;DCCD oder Inamin5 °, i ^: _f ; 7.r :. '' ■: ■% -Vv; : i 11- Ί; DCCD or ynamine

:>: \-J\ Z-L-Pro-iiLeu-Gly-NH-DMB :>: \ -J \ ZL-Pro-iiLeu-Gly-NH-DMB

auch durch Behandlung mit Natrium in flüssigem Ammoniak, abspaltet. .*'■' '"''.'■'■' . ': .' Durch das erfindungsgemäße Verfahren werden die oben geschilderten Schwierigkeiten dadurch vermieden, daß zum Schutz der Säureamidfunktion der 2,4-_e Dimethoxybenzylrest, nachstehend in /den Formeln als »DMB« abgekürzt, verwendet wird. Er dient sowohl zur reversiblen Blockierung von primären Säureamiden —CO—NH₂ als auch von sekundären Säureamiden—CO—NH-, wie sie in Peptidbindungen Vorliegen.also by treatment with sodium in liquid ammonia. . * '■''"''.' ■ '■' . ':.' The process according to the invention avoids the difficulties outlined above by using the 2,4- _e dimethoxybenzyl radical, hereinafter abbreviated as “DMB” in the formulas, to protect the acid amide function —NH ₂ as well as secondary acid amides — CO — NH-, as they are present in peptide bonds.

In einem primären Säureamid sind von den beiden Η-Atomen eines oder beide durch 2,4-Dimethoxybenzyl-Reste ersetzbar. Man stellt solche Verbindungen her, indem man N-Acylaminosäuren mit 2,4-Dimeth-(Z = Benzyloxycarbonyl-; DCCD = Dicylohexylcarbodiimid;,; Inamin = Methyl-äthinyl-diäthylamin).In a primary acid amide, one or both of the two Η atoms are through 2,4-dimethoxybenzyl radicals replaceable. Such compounds are made by combining N-acylamino acids with 2,4-dimeth- (Z = Benzyloxycarbonyl-; DCCD = dicylohexylcarbodiimide; Ynamine = methyl-ethinyl-diethylamine).

Die Bis - 2,4 - dimethoxybenzyl - amid - Derivate des Glutamins und Asparagins zeigen eine hervorragende Löslichkeit in aprotischen Lösungsmitteln; außerdem wird Imidbildung und Dehydratisierung verhindert. Hierin liegt ein besonderer Vorteil gegenüber den bisherigen Methoden zur Synthese von glutamin- bzw. asparaginhaltigen Peptiden. Das erfindungsgemäße Verfahren beispielsweise für die Synthese von ρ - Methoxy - benzyloxycarbonyl - l - glutamyl - (γ - bis-DMB-amid)-L-valinmethylester, kann wie folgt durchgeführt werden:The bis-2,4-dimethoxybenzyl-amide derivatives of glutamine and asparagine show excellent solubility in aprotic solvents; it also prevents imide formation and dehydration. This is a particular advantage over the previous methods for the synthesis of glutamine- or asparagine-containing peptides. The process according to the invention, for example for the synthesis of ρ - methoxy - benzyloxycarbonyl - l - glutamyl - (γ - bis-DMB-amide) -L-valine methyl ester, can be carried out as follows:

ρ - Methoxy - benzyloxycarbonyl - L - glutaminsäurea-benzylester wird mit Bis-2,4-dimethoxybenzyl-aminρ - methoxy - benzyloxycarbonyl - L - glutamic acid a-benzyl ester is with bis-2,4-dimethoxybenzyl-amine

3 43 4

und Dicyclohexylcarbodiimid oder Methyl-äthinyl- daß die in der Peptidbindung durch den 2,4-Dimeth-and dicyclohexylcarbodiimide or methyl-äthinyl- that the in the peptide bond through the 2,4-dimeth-

diäthylamin zum ρ,-Methoxy - benzyloxy - carbonyl- oxybenzyl-Rest substituierten Derivate eine viel größereDiethylamine to the ρ, -Methoxy - benzyloxy - carbonyl oxybenzyl radical substituted derivatives a much larger

L- glutaminsäure - α - benzylester - γ - bis - 2,4 - dimeth- Löslichkeit in aprotischen Lösungsmitteln besitzen alsL-glutamic acid - α - benzyl ester - γ - bis - 2,4 - dimeth- have solubility in aprotic solvents as

oxybenzylamid umgesetzt. Nach Verseifung des Ben_: die nicht substituierten. Da durch die Blockierung dieoxybenzylamide implemented. After saponification of the ben _: the unsubstituted. Since by blocking the

zylesters wird mit L-Valin-;methylester mittels Dicyclo- 5 Ausbildung von Wasserstoffbrücken unmöglich wird,zylesters becomes impossible with L-valine; methyl ester by means of dicyclo- 5 formation of hydrogen bonds,

hexylcarbodiimid oder Methyl-äthinyl-diäthylamin der . sind Aggregationen herabgesetzt, was für den Aufbauhexylcarbodiimide or methyl-äthinyl-diethylamine der. aggregations are degraded, what builds up

p-Methoxy - benzyloxy - carbonyl - l - glutamyl- von Sequenzpolymeren und die Gewinnung vonp-methoxy - benzyloxy - carbonyl - l - glutamyl - of sequence polymers and the production of

(γ - bis -DMB r amid) -. L -valin - methylester her- cyclischen Peptiden (Ausbleiben von Verdopplungs- (γ - to -DMB r amide) -. L-valine - methyl ester hercyclic peptides (absence of doubling

gestellt. ■■;■ > ' . " < reaktionen) günstig ist. Hierbei ist es nicht notwendig,placed. ■■; ■> '. "<reactions) is favorable. It is not necessary to

In derartigen Derivaten des Glutamins oder Aspara- io alle Peptidbindungen durch DMB-Reste zu blockieren. ;To block all peptide bonds in such derivatives of glutamine or asparagus by means of DMB residues. ;

gins, mit geschützter Amidgruppe istes möglich, die Peptide, deren Peptidbindungen durch den N-2,4-Di-gins, with a protected amide group, it is possible to remove the peptides whose peptide bonds are

Estergruppe zu .verseifen . und die Peptidkette. am methoxybenzyl-Rest substituiert sind, werden aus denTo. Saponify ester group. and the peptide chain . are substituted on the methoxybenzyl radical, are from the

Carboxylende zu verlängern oder die Aminoschutz- entsprechenden. N-2,4-dimethoxybenzyl-substituiertenTo lengthen the carboxyl end or the amino protective equivalent. N-2,4-dimethoxybenzyl-substituted

gruppe zu entfernen und die Peptidkette am Amino- , Aminosäuren nach üblichen Kondensationsmethoden 'group to remove and the peptide chain on the amino, amino acids by common condensation methods'

ende zu verlängern. Bei der Abspaltung von p-Meth- 15 erhalten.DieN-2,4-Dimethoxybenzylaminosäurenwer-;to extend the end. Obtained in the cleavage of p-meth- 15. The N-2,4-dimethoxybenzylaminosäurewer-;

oxybenzyloxycarbonyl- oder tert. - Butyloxycarbonyl- den aus 2,4-Dimethoxybenzaldehyd und Aminosäurenoxybenzyloxycarbonyl or tert. - Butyloxycarbonylden from 2,4-dimethoxybenzaldehyde and amino acids

Resten mit Trifluoressigsäure unter Zusatz von Anisol durch Reduktion mit Natriumborhydrid oder kataly-Residues with trifluoroacetic acid with the addition of anisole by reduction with sodium borohydride or catalytic

wird gleichzeitig auch ein DMB-Rest entfernt, was tische Reduktion erhalten. Die N-(2,4-Dimethoxy-a DMB residue is also removed at the same time, which results in a reduction in temperature. The N- (2,4-dimethoxy-

aber für die weiteren'Peptidsynthesen belanglos ist. benzyl)-amihosäuren können wie α-Aminosäuren mitbut is irrelevant for the other 'peptide syntheses. benzyl) amino acids can, like α-amino acids, with

Der 2,4-Dimethoxybenzyl-Rest dient auch zur re- 20 alkoholischer Salzsäure verestert werden, wobei derThe 2,4-dimethoxybenzyl radical is also used to esterify alcoholic hydrochloric acid, the

versiblen Blockierung von sekundären Säureamid- 2,4-Dimethoxybenzyl-Rest nicht abgespalten wird,Versible blocking of secondary acid amide 2,4-dimethoxybenzyl radical is not split off,

funktionen — CO — NH-, wie sie in Peptidbindun- Das Verfahren verläuft beispielsweise für die Syn-functions - CO - NH-, as they are in peptide bonds- The process runs, for example, for the syn-

gen vorliegen. Hierdurch werden Nebenreaktionen these von ρ - Methoxy - benzyloxycarbonyl - glycyl-conditions exist. As a result, side reactions theses of ρ - methoxy - benzyloxycarbonyl - glycyl-

bei Peptidsynthesen, wie die Acylierung der Peptid- [(DMB) - glycyl]₃ - (2,4 - dimethoxybenzyl) - glycin-in peptide syntheses, such as the acylation of the peptide [(DMB) - glycyl] ₃ - (2,4 - dimethoxybenzyl) - glycine

bindung, vermieden. Von besonderer Bedeutung ist, 25 methylester gemäß nachfolgendem Reaktionsschema 2:commitment, avoided. Of particular importance is, 25 methyl ester according to the following reaction scheme 2:

■ , Schema 2■, scheme 2

pMZ-Gly-OH + N-(DMB)^GIy-OCH₃ ^T pMZ-Gly-OH + N- (DMB) ^ GIy-OCH ₃ ^T

' 1 DCCD oder Inamin .'1 DCCD or Inamin.

PMz-GIy-N-(DMB)-GIy-OCH₃ PMz-GIy-N- (DMB) -GIy-OCH ₃

I NaOH; Citronensäure ·I NaOH; Citric acid

pMZ-Gly-N-(DMB)-GIy-OH + N-(DMB)-GIy-OCH₃ pMZ-Gly-N- (DMB) -GIy-OH + N- (DMB) -GIy-OCH ₃

■ ■ .. .j DCCD oder Inamin ■ ' / ■.-:;-:- . ,'. , .■ ■ .. .j DCCD or Inamin ■ '/ ■ .-:; -: -. , '. ,.

pMz-Gly-N-(DMB)-Gly-N-(DMB)-Gly-OCH₃ : '''VpMz-Gly-N- (DMB) -Gly-N- (DMB) -Gly-OCH ₃ : "" V

. ... .. I NaOH; Citronensäure .. ... .. I NaOH; Citric acid.

^V. PMz-GIy-N-(DMB)-GIy-N-(DMB)-GIy-OH^-N-(DMB)-GIy-OCH₃ ^V. PMz-GIy-N- (DMB) -GIy-N- (DMB) -GIy-OH ^ -N- (DMB) -GIy-OCH ₃

^;'.-■-: ''-.-';,.. M- ·;'■'■' ■ j ; DCCD oder Inamin · ' - ' ^; '.- ■ -:''-.-';, .. M- ·; '■' ■ '■ j; DCCD or Inamin · '-'

■';■:,'"I-^; _;. " CpMZ-GIy-[N-(DMB)-GIy]₂-N-(DMB)-GIy-OCH₃ , . . ■ '; ■ :,' _^"I-;;." CpMZ-glycolic [N- (DMB) -GIy] ₂ -N- (DMB) _-GIy-OCH3. .

·.■■''--■'■ ■'■.■:■■· :i--<-\.':f. ■■■':'> ~'':·:-:?~<'.^:ϊ ^i:i ' 'NaOH; Citronensäure ._:■ ■■:;;.·■'■■'^;- ■.'·. ■■ '' - ■ '■ ■' ■. ■: ■■ · : i - <- \. ': F. ■■■ ':'> ~ '': ·: - :? ~ <'. ^: ϊ ^i: i "NaOH; Citric acid. _: ■ ■■: ;;. · ■ '■■'^; - ■. '

.'■'■ ■ ' ' VV; ^;:; Ψ PMz-GIy-[N-(DMB)-GIy]₂-N-(DMB)-GIy-OH + N-(DMB)-GIy-OCH₃ ' ^;Λι ' j DCCD oder Inamin ^; . '■' ■ ■ ''VV;^;:; Ψ PMz-GIy- [N- (DMB) -GIy] ₂ -N- (DMB) -GIy-OH + N- (DMB) -GIy-OCH ₃ '^{; Λι} ' j DCCD or ynamine ^;

PMz-GIy-[N-(DMB)-GIy]₃-(DMB)-GIy-OCH₃ PMz-GIy- [N- (DMB) -GIy] ₃ - (DMB) -GIy-OCH ₃

\ (pMz = p-Methoxy-benzyloxycarbonyl-;DCCD = Dicyclohexylcarbodiimid; Inamin = Methyl-äthinyl-diäthylamin). - . .\ (pMz = p-methoxy-benzyloxycarbonyl-; DCCD = dicyclohexylcarbodiimide; Ynamine = methyl-ethinyl-diethylamine). -. .

Die 2,4-Dimethoxybenzyl-Reste werden von der se- sich aus Benzyloxycarbonyl-glycyl-N-(2,4-dimethoxy-, kundären Säureamidgruppierung (Peptidbindung) bei- benzyl)-glycin chromatographiseh einheitliches Benzylspielsweise durch mehrstündige Einwirkung yon Tn-'':.' oxycarbonyl - glycyl - glycin, ρ - Methoxy - benzyloxyfluoressigsäure bei 20⁰C unter Zusatz von Anisol, um . carbonylglycyl - N - (2,4 - dimethoxybenzyl) - glycin die Dimethoxybenzylkationen abzufangen, abgespal- 55 liefert mit Ameisensäure'l5 Minuten lang zum Sieden ten. Man kann auch kürzere Zeit bei erhöhten Tempe- erhitzt in der Hauptsache Glycyl-glycin neben wenig raturen arbeiten. So liefert Benzyloxycarbonyl-glycyl- ■ Glycyl-(2,4-dimethoxybenzyl)-gtycin. -ί; ^^:S -' N-(DMB)-glycih bei 20stündiger Einwirkung von Tri- 'Die Abspaltung der 2,4-Dimethoxybenzyl-Gruppe fiuoressigsäure bei 20⁰C sowie bei lstündigemKocheh ν von der Peptidbindung kann auch mit Natrium in Glycylglycin. ρ - Methoxy-benzyloxy - carbonyl - gly- 60 flüssigem Ammoniak ausgeführt werden. Benzyloxycyl-N-(DMB)-glycin ergibt bei der Einwirkung von i carbonyl - glycyl - N - (2,4 - dimethoxybenzyl) - glycin Trifluoressigsäure bei O⁰C während 10 Minuten nur ■ ergibt z. B. bei der Reduktion bei der Siedetemperatur Glycyl-N-(DMB)-glycin, aber bei der 12stündigen Ein- des flüssigen Ammoniak mit Natrium Glycyl-glycin wirkung von Trifluoressigsäure bei 20° C oder bei in 91°/_oiger Ausbeute. 30minutigem Kochen entsteht Glycyl-glycin. 65 Von der primären Säureamidgruppe wird derThe 2,4-dimethoxybenzyl radicals are composed of benzyloxycarbonyl-glycyl-N- (2,4-dimethoxy, secondary acid amide grouping (peptide bond) bis-benzyl) -glycine . ':.' oxycarbonyl - glycyl - glycine, ρ - methoxy - benzyloxyfluoressigsäure at 20 ⁰ C with the addition of anisole to. carbonylglycyl - N - (2,4 - dimethoxybenzyl) - glycine to intercept the dimethoxybenzyl cations splits off with formic acid for 15 minutes. You can also heat mainly glycylglycine besides little temperatures for a shorter time at higher temperatures work. Benzyloxycarbonyl-glycyl- ■ Glycyl- (2,4-dimethoxybenzyl) -gtycin supplies. -ί; ^ ^: S - 'N- (DMB) -glycih with 20 hours of exposure to tri-' The cleavage of the 2,4-dimethoxybenzyl group fluoroacetic acid at 20 ⁰ C and with 1 hour boiling ν from the peptide bond can also with sodium in glycylglycine. ρ - methoxy-benzyloxy - carbonyl - gly- 60 liquid ammonia. Benzyloxycyl-N- (DMB) -glycine results in the action of i carbonyl - glycyl - N - (2,4 - dimethoxybenzyl) - glycine trifluoroacetic acid at ⁰ ° C. for 10 minutes only ■ gives z. B. in the reduction at the boiling point glycyl-N- (DMB) -glycine, but at the 12 hour inlet of the liquid ammonia with sodium glycyl-glycine action of trifluoroacetic acid at 20 ° C or in 91 ° / _o yield. Cooking for 30 minutes produces glycyl-glycine. 65 Of the primary acid amide group, the

Der DMB-Rest kann auch mit Hilfe von Ameisen- 2,4-Dimethoxybenzyl-Rest bei der Reduktion mit säure durch Erhitzen abgespalten werden. Beim 20 Mi- Natrium und flüssigem Ammoniak nicht entfernt. Bennuten langen Kochen (unter Zusatz von Anisol) bildet zyloxycarbonyl - glycin - (2,4 - dimethoxybenzyl) - amidThe DMB residue can also be used in the reduction with the aid of an ant 2,4-dimethoxybenzyl residue acid can be split off by heating. Not removed with 20 Mi- sodium and liquid ammonia. Bennuten Long boiling (with the addition of anisole) forms zyloxycarbonyl - glycine - (2,4 - dimethoxybenzyl) - amide

1010

liefert Glycin - (2,4 - dimethoxybenzyl) - amid. Trifluoressigsäure spaltet dagegen bei mehrstündiger Einwirkung bei 20° C oder in der Siedehitze den 2,4-Dimethoxybenzyl-rest ab. .Dasselbe wird mit siedender Ameisensäure erreicht. So liefert Benzyloxy-carbonylglycin-amid mit Trifluoressigsäure (24 Stunden) bei 20°C oder mit siedender Ameisensäure (10 Minuten) Benzyloxycarbonyl-glycin; beim Erhitzen mit Trifluor-, essigsaure (45 Minuten) entsteht Glycin-amid. Das Benzyloxycarbonyl -L - asparaginsäure - β r (bis-2,4 dimethoxybenzyl)-amid liefert beim Erhitzen mit Trifluoressigsäure(45 Minuten) optisch reines L-Asparagin.supplies glycine (2,4 - dimethoxybenzyl) amide. Trifluoroacetic acid, on the other hand, splits off the 2,4-dimethoxybenzyl residue after exposure for several hours at 20 ° C or at the boiling point. The same is achieved with boiling formic acid. Benzyloxycarbonylglycine amide with trifluoroacetic acid (24 hours) at 20 ° C. or with boiling formic acid (10 minutes) gives benzyloxycarbonyl-glycine; when heated with trifluoroacetic acid (45 minutes) glycine amide is formed. Benzyloxycarbonyl-L-aspartic acid -β r (bis-2,4 dimethoxybenzyl) -amide provides optically pure L-asparagine when heated with trifluoroacetic acid (45 minutes).

Bei der Abspaltung von 2,4-Dimethoxybenzyl-Resten bestehen starke Differenzierungen gegenüber den verschiedenen . Amino- und Carböxylschutzgruppen, so daß durch 2,4-Dimethoxybenzyl-Reste substituierte Peptide sowohl am Amino-. wie .am Carboxylende verlängert werden können.When 2,4-dimethoxybenzyl residues are split off, there are strong differentiations the different. Amino and carboxyl protecting groups, so that by 2,4-dimethoxybenzyl radicals substituted peptides both on the amino. like on Carboxyl end can be extended.

Da die Abspaltung des DMB-Restes vqn der Säureamidfunktion durch Säuren auf der Resonanzstabilisierung des intermediär gebildeten Dimethoxy-benzylkations beruht, können auch andere, durch mehrere elektronenliefernde Reste substituierte Benzylreste, z. B. der 2,4,6-Trimethoxybenzylrest, an Stelle des Dimethoxy-benzylrestes verwendet werden.Since the cleavage of the DMB residue from the acid amide function by acids on the resonance stabilization of the intermediately formed dimethoxy-benzyl cation is based, others, by several electron-donating radicals substituted benzyl radicals, e.g. B. the 2,4,6-trimethoxybenzyl radical, instead of the dimethoxy-benzyl radical be used.

Die Verfahrensprodukte haben nach Abspaltung der Schutzgruppen entweder selbst biologische Wirkung, oder sie können für weitere Synthesen als Zwischenprodukte verwendet werden.After the protective groups have been split off, the products of the process either have a biological effect themselves, or they can be used as intermediates for further syntheses.

BeispiellFor example

Benzyloxycarbonyl-L-asparaginsäure-a-benzylester-/?-(bis-2,4-dimethoxy-benzyl)-amid Benzyloxycarbonyl-L-aspartic acid a-benzyl ester - /? - (bis-2,4-dimethoxy-benzyl) -amide

2,48 g Benzyloxycarbonyl - l - asparaginsäurea-benzylester und 2,0 g Bis-(2,vuimethoxy-benzyl)-amin werden in 20 ml absolutem Tetrahydrofuran gelöst. Unter Rühren läßt man die Lösung von 0,78 g Methyl-äthinyl-diäthylamin in 10 ml absolutem Tetrahydrofuran binnen 30 Minuten eintropfen. ; 2.48 g of benzyloxycarbonyl-1-aspartic acid a-benzyl ester and 2.0 g of bis (2, vuimethoxy-benzyl) amine are dissolved in 20 ml of absolute tetrahydrofuran. The 0.78 g solution is left with stirring Add methyl-ethinyl-diethylamine in 10 ml of absolute tetrahydrofuran within 30 minutes. ;

Sodann wird das Lösungsmittel im Vakuum abgedampft, der Rückstand in Essigester gelöst, die Essigesterlösung je zweimal mit 5%iger Citronensäurelösung, ges. Natriumhydrogencarbonatlösung und Wasser gewaschen, mit Natriumsulfat getrocknet und eingedampft. Der Rückstand wird mit Petroläther digeriert. Ausbeute 3,92 g (94%)..Der Ester wird anschließend verseift (Beispiel 2). .The solvent is then evaporated off in vacuo, the residue dissolved in ethyl acetate, the ethyl acetate solution twice with 5% citric acid solution, total Washed sodium hydrogen carbonate solution and water, dried with sodium sulfate and evaporated. The residue is digested with petroleum ether. Yield 3.92 g (94%) .. The ester is then saponified (example 2). .

-.⁰^-ViV. ■'.'/ -:^j :.' .;.'■ ■: ■ ^: B e i s ρ i e 1 2 , ■ ' ■". · .-. ⁰ ^ -ViV. ■ '.' / -: ^j :. '.;.'■ ■: ■ ^: B bis ρ ie 1 2, ■' ■ ". ·.

ir;; Benzyl oxycarbonyl-L-asparaginsäure-/S-(bis-• ν : 2,4-dimethoxy-benzyl)-amidir ;; Benzyl oxycarbonyl-L-aspartic acid / S- (bis- • ν: 2,4-dimethoxy-benzyl amide

3,92 g des nach Beispiel 1 gewonnenen Benzylesters werden mit 10Ö ml Dioxan/ln-NaOH (1:1 Volumen) 2 Stunden bei 20° C gerührt. Sodann wird das Dioxan weitgehend im Vakuum abdestilliert, die wäßrige Lösung mit Äther ausgeschüttelt, durch Evakuieren von Resten Äther befreit und mit Citronensäure angesäuert. , Ausbeute 3,0 g (84%), Schmp. 70 bis 73° C, [<x]_s% = +10,4° (c = 2 in Methanol). ' .... dampft, der Rückstand in Wasser gelöst und filtriert. Das Filtrat wird mit Äther und Chloroform ausgeschüttelt, worauf die wäßrige Lösung mit einem schwach basischen Ionenaustauscher neutralisiert wird, z. B. mit Amberlite IR 45. Beim Eindampfen im Vakuum kristallisiert das L-Asparagin aus. Es wird aus Wasser/Äthanol umkristallixiert. Ausbeute ' 86 %, Schmp. und Mischschmelzpunkt 220 bis 222°C. ^; 3.92 g of the benzyl ester obtained according to Example 1 are stirred with 100 ml of dioxane / In NaOH (1: 1 volume) at 20 ° C. for 2 hours. Most of the dioxane is then distilled off in vacuo, the aqueous solution is shaken out with ether, freed from residues of ether by evacuation and acidified with citric acid. , Yield 3.0 g (84%), melting point 70 to 73 ° C, [<x] _s % = + 10.4 ° (c = 2 in methanol). '.... evaporates, the residue dissolved in water and filtered. The filtrate is extracted with ether and chloroform, whereupon the aqueous solution is neutralized with a weakly basic ion exchanger, e.g. B. with Amberlite IR 45. When evaporating in vacuo, the L-asparagine crystallizes out. It is recrystallized from water / ethanol. Yield 86%, melting point and mixed melting point 220 to 222 ° C. ^;

Beispiel 3
L-AsparaginExample 3
L-asparagine

0,5 g der nach Beispiel 2 erhaltenen Verbindung werden 45 Minuten in 10 ml Trifluoressigsäure unter Rückfluß erhitzt. Sodann wird im Vakuum einge-Bei spi el 40.5 g of the compound obtained according to Example 2 are added to 10 ml of trifluoroacetic acid for 45 minutes Heated to reflux. Then, in a vacuum, game 4

p-Methoxy-benzyloxycarbonyl-L-asparaginsäurea-benzylester-/S-(bis-2,4-dimethoxy-benzyl)-amid p-Methoxy-benzyloxycarbonyl-L-aspartic acid a-benzyl ester / S- (bis-2,4-dimethoxy-benzyl) -amide

6,25 g ρ - Methoxy - benzyloxycarbonyl -L- asparaginsäure-a-benzylester und 4,90 g Bis-2,4-dimethoxybenzylamin werden in 50 ml Tetrahydrofuran mit 1,89 g Methyl-äthinyl-diäthylamin in 50 ml Tetrahydrofuran - analog Beispiel 1 umgesetzt. Die Aufarbeitung erfolgt analog Beispiel 1. Ausbeute 9,1 g (85 %), nicht kristallisiert. Der Ester wird anschließend verseift (Beispiel 5). ■■'■■■ 6.25 g of ρ-methoxy-benzyloxycarbonyl-L-aspartic acid a-benzyl ester and 4.90 g of bis-2,4-dimethoxybenzylamine in 50 ml of tetrahydrofuran with 1.89 g of methyl-ethinyl-diethylamine in 50 ml of tetrahydrofuran - analogously Example 1 implemented. Working up is carried out as in Example 1. Yield 9.1 g (85%), not crystallized. The ester is then saponified (Example 5). ■■ '■■■

B e i s ρ i e 1 5B e i s ρ i e 1 5

p-Methoxy-benzyloxycarbonyl-L-asparaginsäurejS-(bis-2,4-dimethoxy-benzyl)-amid 'p-Methoxy-benzyloxycarbonyl-L-aspartic acid / S- (bis-2,4-dimethoxy-benzyl) -amide '

0,85 g des nach Beispiel 4 hergestellten Benzylesters werden in 40 ml Dioxan/ln-NaOH (1:1 Volumen) 5 Stunden bei 20°C gerührt. Die Aufarbeitung wird analog Beispiel 2 vorgenommen. Ausbeute. 0,71 g (97%), Schmp. 62 bis 65°C(unscharf). [«]$ = + 31,3° (c = 5 in Benzol).0.85 g of the benzyl ester prepared according to Example 4 are dissolved in 40 ml of dioxane / ln NaOH (1: 1 volume) Stirred at 20 ° C. for 5 hours. Working up is carried out as in Example 2. Yield. 0.71 g (97%), m.p. 62 to 65 ° C (unsharp). [«] $ = + 31.3 ° (c = 5 in benzene).

Beispiel6Example6

Benzyloxycarbonyl-L-aspartyl-^-(bis-2,4-dimethoxy-. benzylJ-amid-L-leucin-methylesterBenzyloxycarbonyl-L-aspartyl - ^ - (bis-2,4-dimethoxy-. benzylI-amide-L-leucine methyl ester

0,60 g Benzyloxycarbonyl. - l - asparaginsäure-/?-(2,4-dimethoxybenzyl)-amid (von Beispiel 2), 0,195 g L-Leucin-methylesterhydrochlorid und 0,120 g Triäthylamin werden in 5ml Methylenchlorid gelöst.. ■Innerhalb 45 Minuten fügt man 0,13 g Methyläthinyl-diäthylamin in 2 ml Methylenchlorid zu/Nach weiteren 2 Stunden wird im Vakuum eingedampft, der Rückstand in Essigester aufgenommen, die •Essigesterlösung mit verdünnter Salzsäure, gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung und Wasser gewaschen, mit Natriumsulfat getrocknet und eingedampft. Der Rückstand wird mit Petroläther digeriert. Er wird der Verseifung unterworfen (Beispiel 7).0.60 g benzyloxycarbonyl. - l - aspartic acid - /? - (2,4-dimethoxybenzyl) -amide (from Example 2), 0.195 g of L-leucine methyl ester hydrochloride and 0.120 g of triethylamine are dissolved in 5 ml of methylene chloride .. ■ 0.13 g of methylethinyl diethylamine is added within 45 minutes in 2 ml of methylene chloride to / after a further 2 hours is evaporated in vacuo, the The residue taken up in ethyl acetate, the • ethyl acetate solution with dilute hydrochloric acid, saturated sodium hydrogen carbonate solution and water, dried with sodium sulfate and evaporated. The residue is digested with petroleum ether. It is subjected to saponification (Example 7).

B ei spiel 7Example 7

Benzyloxycarbonyl-L-aspartyl-/?-(bis-2,4-dimethoxy-benzyl)-amid-L-leucin Benzyloxycarbonyl-L-aspartyl - /? - (bis-2,4-dimethoxy-benzyl) -amide-L-leucine

0,25 g des nach Beispiel 6 gewonnenen Benzylesters werden mit Natriumhydroxyd in wäßrigem Dioxari analog Beispiel 2 verseift und aufgearbeitet. Ausbeute 0,21 g (87 .%),[«]& = +1,5° (c = 2 in Methanol). V0.25 g of the benzyl ester obtained according to Example 6 are treated with sodium hydroxide in aqueous dioxane saponified and worked up analogously to Example 2. Yield 0.21 g (87%), [«] & = + 1.5 ° (c = 2 in methanol). V

■;' ■ ■'· ■ ^;-'"v B eis.ρie 18 '.'■'';;■ ''yi~Y^'^:f' ■; ' ■ ■ '· ■ ^; - '"v B eis.ρie 18'. '■'';; ■ ''yi ~ Y ^' ^: f '

p-Methoxy-benzyloxycarbonyl-L-glutaminsäureix-benzylester-y-bis-(2,4-dimethoxy-benzyl)-amid p-Methoxy-benzyloxycarbonyl-L-glutamic acid x-benzyl ester-γ-bis (2,4-dimethoxy-benzyl) -amide

1,40 g p-Methoxy - benzyloxycarbonyl - L - glutaminsäure-a-benzylester und 1,11 g Bis-2,4-dimethoxy-benzylamin werden in 10 ml absolutem Tetrahydrofuran gelöst und im Verlaufe von 30 Minuten1.40 g of p-methoxy-benzyloxycarbonyl-L-glutamic acid a-benzyl ester and 1.11 g of bis-2,4-dimethoxy-benzylamine are dissolved in 10 ml of absolute tetrahydrofuran dissolved and over the course of 30 minutes

mit der Lösung von 0,43 g Methyl-äthinyl-diäthylamin . Beispiel 12with the solution of 0.43 g of methyl-äthinyl-diethylamine. Example 12

in 10 ml absolutem Tetrahydrofuran tropfenweise ver- _ . " , . , \ , . ~ . ,. , in 10 ml of absolute tetrahydrofuran added dropwise. ",. , \,. ~.,.,

setzt. Die Aufarbeitung erfolgt analog Beispiel 1. Nach Benzyloxycarbonyl-L-leucyl-glycin-l^.dimethoxy-puts. The work-up is carried out as in Example 1. According to benzyloxycarbonyl-L-leucyl-glycine-l ^ .dimethoxy-

Umkristallisieren aus Essigester/Petroläther 1,75g '' τ ^ benzylamid .Recrystallize from ethyl acetate / petroleum ether 1.75g `` τ ^ benzylamide.

(72%), Schmp. 98 bis 99°, [<x]& = —13,8°C (c = 5 in 5 = 2,65 g Benzyloxycarbonyl-L-leucin und 2,24 g GIy-Benzol). cin-2,4-dimethoxy-benzylamid werden in 50 ml Tetra-(72%), m.p. 98 to 99 °, [<x] & = -13.8 ° C (c = 5 in 5 = 2.65 g of benzyloxycarbonyl-L-leucine and 2.24 g of gly-benzene). cin-2,4-dimethoxy-benzylamide are in 50 ml of tetra-

_n . . . hydrofuran gelöst und bei 20°G langsam mit der _n . . . hydrofuran dissolved and at 20 ° G slowly with the

Beispiel y Lösung von 1,22 g Methyl-äthinyl-diäthylamin inExample y solution of 1.22 g of methyl-äthinyl-diethylamine in

p-Methoxy-benzyloxycarbonyl-L-glutaminsäure- " " 30 ml Tetrahydrofuran versetzt. 30 Minuten nach be- «-bis-(2,4-dimethoxy-benzyl)-amid ¹⁰ «ⁿ.^d^^ter Zugabe ™^{rd im} Vakuum eingedampft, derp-Methoxy-benzyloxycarbonyl-L-glutamic acid- "" 30 ml of tetrahydrofuran were added. 30 minutes after be «-bis- (2,4-dimethoxy-benzyl) -amid ¹⁰ « ⁿ . ^d ^ ^ter addition ™ ^rd evaporated in vacuo, the

Ruckstand in Essigester aufgenommen, die Essigester-Residue taken up in ethyl acetate, the ethyl acetate

0,50 g des nach Beispiel 8 hergestellten Benzylesters -lösung mit 0,5n-HCl, gesättigter Natriumhydrogenwerden in 40 ml Dioxan/ln-NaOH (1:1 Volumen) ge- ; carbonatlösung und Wasser gewaschen, mit Natriumlöst und 8 Stunden bei 20 C gerührt. Die Aufarbeitung sulfat getrocknet und eingedampft. Die Verbindung erfolgt analog Beispiel 2. Ausbeute 0,41g (94%), 15 kristallisiert aus Essigester/Petroläther. Ausbeute 4,1 g Schmp. 66 bis 68⁰C,[a]/« = —8,2° (c = 5 in Meth- ; (87%), Schmp. 120 bis 126°C, nach nochmaligem anol). ."■- -y.'l·.""'. Umkristallisieren'aus Essigester/Petroläther Schmp.0.50 g of the benzyl ester solution prepared according to Example 8 with 0.5N HCl, saturated sodium hydrogen is added in 40 ml of dioxane / In NaOH (1: 1 volume); washed carbonate solution and water, dissolved with sodium and stirred at 20 ° C. for 8 hours. The work-up dried sulfate and evaporated. The connection takes place as in Example 2. Yield 0.41 g (94%), 15 crystallizes from ethyl acetate / petroleum ether. Yield 4.1 g, mp 66 to 68 ⁰ C, [a] / "= -8.2 ° (c = 5 in meth-; (87%), mp 120 to 126 ° C, after re anol.).. . "■ - -y.'l ·.""'.Recrystallizing' from ethyl acetate / petroleum ether, m.p.

^; Beispiel 10 ^; '■■'■ ,130 bis 131°C, [«]& = +9,8° (c = 1 in Methanol). ^; Example 10 ^; '■■' ■, 130 to 131 ° C, [«] & = + 9.8 ° (c = 1 in methanol).

τ,τ, ι u ι ι · ι λ j· λ ι. ι . , ω B e i S ρ Ι β 1 13ι u ι ι · ι λ j · λ ι. ι. , ω B if S ρ Ι β 1 13

Benzyloxycarbonyl-glycin^^-dimethoxy-benzyl-amidBenzyloxycarbonyl-glycine ^^ - dimethoxy-benzyl-amide

„ _, „ , , , >, . j-- ,,_η. L-Leucyl-glycin^^dimethoxy-benzylamid"_,",,,>,. j-- ,, _η . L-Leucyl-glycine ^^ dimethoxy-benzylamide

, 8,76 g Benzyloxycarbonyl-glycm und 7,5 g 2,4-Di-, 8.76 g benzyloxycarbonyl-glycm and 7.5 g 2,4-di-

methoxybenzylamin werden in 150 ml Tetrahydro- 6,53 g der nach Beispiel 12 erhaltenen Verbindungmethoxybenzylamine are 6.53 g of the compound obtained according to Example 12 in 150 ml of tetrahydro

furan und 25 ml Dimethylforamid gelöst, wobei das werden analog Beispiel 11, b) mit Natrium in flüssigemfuran and 25 ml of dimethylforamide, which are analogous to Example 11, b) with sodium in liquid

Salz ausfällt. Nun werden unter starkem Rühren as Ammoniak reduziert. Man erhält zunächst 4,9 gSalt precipitates. The ammonia is now reduced with vigorous stirring. 4.9 g are initially obtained

innerhalb !Stunde 5,5g Methyl-äthinyl-diäthylamin öliges Rohprodukt, das mit 0,5ml methanolischer in 50 ml Tetrahydrofuran zugetropft. Dabei entsteht^λ Salzsäure durch Zusatz von Äther in das kristallisiertewithin! hour 5.5 g of methyl-ethinyl-diethylamine oily crude product, which is added dropwise with 0.5 ml of methanolic in 50 ml of tetrahydrofuran. This creates ^λ hydrochloric acid by adding ether to the crystallized

eine klare Lösung. Nun wird im Vakuum eingedampft Hydrochlorid überführt wird. Ausbeute 4,62 g (89 %),a clear solution. It is now evaporated in vacuo and the hydrochloride is transferred. Yield 4.62 g (89%),

und mit Wasser und wenig Essigsäure versetzt. Dabei Schmp. 155 bis 162° C (Zersetzung),and mixed with water and a little acetic acid. Mp. 155 to 162 ° C (decomposition),

kristallisiert die Verbindung aus. Sie wird mit viel 30the compound crystallizes out. She turns 30 with a lot

Wasser und Petroläther gewaschen. Ausbeute 8,72g Beispiel 14 . '-.-.■.■Washed water and petroleum ether. Yield 8.72g of Example 14. '-.-. ■. ■

(58%), Schmp 112 bis 114° C, nach Umkristallisieren Benzyloxycarbonyl-L-prolyl-i-leucyl-glycin-(58%), mp 112 to 114 ° C, after recrystallization benzyloxycarbonyl-L-prolyl-i-leucyl-glycine-

aus Essigester/Petroläther Schmp. 115°C. 2,4-dimeihoxy-benzylamidfrom ethyl acetate / petroleum ether, melting point 115 ° C. 2,4-dimeihoxy-benzylamide

. ...Beispiel 11 35 2,8 g des nach Beispiel 13 erhaltenen Hydrochloride. ... Example 11 35 2.8 g of the hydrochloride obtained according to Example 13

Glycin-2,4-dimethoxy-benzyl-amid ™?^en _t ™ φ ml Tetrahydrofuran suspendiert und mitGlycine-2,4-dimethoxy-benzyl-amide ™? ^en _t ™ φ ml of tetrahydrofuran suspended and with

a) Durch katalytisch Hydrierung r- , ;r ^⁰⁵ ml Tnathylarmn 15 Mmutenbei 20⁰C gerührt.a) By catalytic hydrogenation r- ,; r ^ ⁰⁵ ml of Tnathylarmn 15 minutes at 20 ⁰ C stirred.

■ :-.;.■:. Dann fugt man 1,85 g Benzyloxycarbonyl-L-prolin■: -.;. ■ :. Then 1.85 g of benzyloxycarbonyl-L-proline are added

0,5 g der nach Beispiel lO erhaltenen Verbindung carbodiimid hinzu. Nach Rühren über Nacht wird der werden in 30 ml absolutem Methanol und 1 ml 40 ausgefallene Dicyclohexylharnstoff abgesaugt, worauf 0,5normaler methanolischer Salzsäure in Gegenwart .analog Beispiel 12 aufgearbeitet wird. Nach Kristallivon 20 mg Pd-Kohle Katalysator hydriert, bis kein ' sation aus Toluol/Petroläther 2,74 g (63%), Schmp. Kohleridioxyd mehr entwickelt wird. Der Katalysator 80 bis 86° C. Der Schmelzpunkt steigt beim Umkristalliwird abnitriert, das Filtrat eingedampft, der Rück- sieren aus Essigester/Petroläther auf 95 bis 96° C, stand zwischen Essigester und Natriumhydrogen- 45 [«]/« = —48,7° (c = 1 in Methanol). ■ ' , carbonatlösung verteilt, die Essigesterlösung mit0.5 g of the compound obtained according to Example 10 carbodiimide was added. After stirring overnight, the are sucked off in 30 ml of absolute methanol and 1 ml of 40 precipitated dicyclohexylurea, whereupon 0.5 normal methanolic hydrochloric acid in the presence of .analog Example 12 is worked up. According to Kristallivon 20 mg Pd-charcoal catalyst hydrogenated until no 'sation from toluene / petroleum ether 2.74 g (63%), mp. Carbon dioxide is more developed. The catalyst 80 to 86 ° C. The melting point increases with recrystallization nitrated off, the filtrate evaporated, the back-sizing from ethyl acetate / petroleum ether to 95 to 96 ° C, stood between ethyl acetate and sodium hydrogen- 45 [«] /« = -48.7 ° (c = 1 in methanol). ■ ', carbonate solution distributed, the ethyl acetate solution with

Natriumsulfat getrocknet und eingedampft. Ausbeute Beispiel 15Dried sodium sulfate and evaporated. Yield example 15

an öligem Glycin^^-dimethoxy-benzylämid 90%, _{w iL} , ^λ , ■ ■ , , . " , _XT ,- · ,.of oily glycine ^^ - dimethoxy-benzylämid 90%, _{w iL} , ^λ , ■ ■,,. ", _XT , - ·,.

Schmp? des HydrochloridsSIS?" bis 188°C,dümi: - P^ethoxy-benzyloxycarbonyl-glycy-N-(2,4-di- - schichtehromatiraphisch teinheitlich ί (Kieselgel G, 50 methoxy-benzyO-glycin-methylester , ._r Schmp? des HydrochloridsSIS? "up to 188 ° C, dümi: - P ^ ethoxy-benzyloxycarbonyl-glycy-N- (2,4-di- - schichtehromatiraphisch (silica gel G, 50 methoxy-benzyO-glycine methyl ester,. _r

n-Butaiiol—Essigsäure—Wasser [4:1: i Volumen], R_f 2,39 g p-Methoxy-benzyloxycarbonyl-glycin undn-Butaiiol — acetic acid — water [4: 1: i volume], R _f 2.39 g of p-methoxy-benzyloxycarbonyl-glycine and

0,45). , '2,39 g N-(2,4-Dimethoxy-benzyl)-glycin-methyl-0.45). , '2.39 g of N- (2,4-dimethoxy-benzyl) -glycine-methyl-

b) Durch Reduktion mit Natrium in flüssigem «£ ^?ⁿ j^{n 3}P.^¹ Tetrahydrofuran gelöst. Inner-b) By reduction with sodium in liquid «£ ^? ⁿ j ^{n 3} P. ^ ¹ dissolved tetrahydrofuran. Inner

Ammoniak Minuten laßt man die Losung von 1,3 g Me-Ammonia minutes let the solution of 1.3 g of Me-

55 thyl-äthinyl-diäthylamin in 20 ml Tetrahydrofuran55 ethyl-äthinyl-diethylamine in 20 ml of tetrahydrofuran

4 g der nach Beispiel 10 erhaltenen Verbindung zutropfen. Die übliche Aufarbeitung ,(Eindampfen, werden in etwa 100 ml flüssigem Ammoniak gelöst, ΐ Lösen in Essigester, Waschen der Essigesterlösung mit Nun wird unter Kühlung mit _: Trockeneis/Aceton :. '^: 5%iger Citronensäure, gesättigter Natriumhydrogen-Natriüm in kleinen Stücken unter Schütteln zugegeben, carbonatlösung und Wasser, Trocknen mit Natrium- > bis eine bleibende Blaufärbung auftritt.' 5 Minuten 60 sulfat und Eindampfen) liefert die Verbindung als öl. danach wird der Natriumüberschuß durch Zugabe von Es wird der Verseifung unterworfen (Beispiel 16). ^ Methanol beseitigt, worauf das Ammoniak abgedampft " " . '.'.'■'-"' ■4 g of the compound obtained according to Example 10 are added dropwise. The usual work-up, (evaporation, are dissolved in about 100 ml of liquid ammonia, ΐ dissolving in ethyl acetate, washing the ethyl acetate solution with Now while cooling with _: dry ice / acetone:. ' ^: 5% citric acid, saturated sodium hydrogen sodium in small pieces while shaking, carbonate solution and water are added, drying with sodium-> until a permanent blue coloration occurs. 5 minutes 60 sulfate and evaporation) gives the compound as an oil. then the excess sodium is subjected to saponification by adding Es (Example 16). ^ Methanol removed, whereupon the ammonia evaporated "". '.'. '■' - "' ■

wird. Der Rückstand wird zwischen Essigester und 'Beispiel 16will. The residue is between ethyl acetate and 'Example 16

wenig Wasser verteilt. Die Essigesterlösung wird mit p-Mcthoxy-bcnzyloxycarbonyl-glycyl-N-(2,4-di- .little water distributed. The ethyl acetate solution is with p-methoxy-bcnzyloxycarbonyl-glycyl-N- (2,4-di-.

Natriumsulfat getrocknet und eingedampft. Es hinter- 65 mcthoxv-benzvh-elvcinDried sodium sulfate and evaporated. It behind- 65 mcthoxv-benzvh-elvcin

bleiben 2,29 g (91%) an öligem Glycin-^-dimethoxy- mclftoxy benzyl) glycin2.29 g (91%) of oily glycine (^ - dimethoxy-mclftoxy benzyl) glycine remain

benzylamid, identisch mit der nach a) hergestellten Das nach dem voranstehenden Beispiel erhaltenebenzylamide, identical to that prepared according to a) The obtained according to the preceding example

Verbindung. Produkt wird in 20 ml Aceton gelöst, worauf 11 mlConnection. Product is dissolved in 20 ml of acetone, whereupon 11 ml

9 109 10

In-NaOH zugegeben werden. Man rührt zunächst r · · ι iqIn-NaOH can be added. First of all, stirring is carried out

2 Stunden bei 2O⁰C und dann 1 Stunde bei 40⁰C. Hier- , Beispiel i*.2 hours at 2O ⁰ C and then for 1 hour at 40 ⁰ C. here-, Example i *.

bei fällt das Natriumsalz aus. Es wird abgesaugt, in p-Methoxy-benzyloxycarbonyl-glycyl-[N-(2,4-di-in the case of the sodium salt precipitates. It is suctioned off, in p-methoxy-benzyloxycarbonyl-glycyl- [N- (2,4-di-

Wasser suspendiert und mit einem Überschuß an methoxy - benzyl) - glycyl]₂ - N - (2,4 - dimethoxy-Citronensäure gerührt. Mit Essigester wird das Di- 5 benzvD-glvcinSuspended water and stirred with an excess of methoxy-benzyl) -glycyl] ₂ -N - (2,4-dimethoxy-citric acid. The di-benzvD-glycine is obtained with ethyl acetate

peptid-derivat ausgeschüttelt. Ausbeute 3,5g (79%), . - .peptide derivative shaken out. Yield 3.5g (79%),. -.

Schmelzpunkt nach zweimaligem Umkristallisieren aus 0,653 g der nach Beispiel 18 erhaltenen VerbindungMelting point after recrystallization twice from 0.653 g of the compound obtained according to Example 18

Essigester/Petroläther 102 bis 103⁰C. ..·. " , und 0,263 g N-(2,4-Dimethoxy-benzyl)-glycin-methyl-.Ethyl acetate / petroleum ether 102 to 103 ⁰ C. .. ·. ", and 0.263 g of N- (2,4-dimethoxy-benzyl) -glycine-methyl-.

; ■ ·:.;■■.- .'■. , ^: : ' .'·'. - ester werden in 50 ml Tetrahydrofuran/Dimethylform-; ■ ·:.; ■■ .-. '■. , ^:: '.' · '. - esters are in 50 ml tetrahydrofuran / dimethylform-

' :ir - _v ■ ,^Beis,P^{ieI 17}' .· ίο amid (4:1 Volumen) mit 0,12 g Methyl-äthinyl-di-': ir - _v ■, ^Beis , P ^{ieI 17} '. ίο amide (4: 1 volume) with 0.12 g of methyl-ethinyl-di-

··._■ ^:·:.'^ : '^ Glycyl-glycin \ äthylamin in 10 ml Tetrahydrofuran tropfenweise ver-·· ._ ■ ^: ·:. '^:' ^ Glycyl-glycine \ ethylamine in 10 ml of tetrahydrofuran add dropwise

' Vn ι ' u ,vtt/j· Vu -setzt- Nach 1 Stunde wird analog Beispiel 15 auf-'Vn ι' u, vtt / j · Vu -setzt- After 1 hour, as in Example 15-

a) aus Benzyloxycarbonyl-N-(2,4-dimethoxy- gearbeitet. Der ölig erhaltene Ester wird^ur Versei-a) from benzyloxycarbonyl-N- (2,4-dimethoxy- worked. The oily ester obtained is ^ ur Versei-

. benzylj-glycin : ' fung in 20 ml Dioxan/Aceton (1:1 Volumen) gelöst. benzyl-glycine: 'fung dissolved in 20 ml dioxane / acetone (1: 1 volume)

Diese Verbindung, die analog der p-Methoxy-ben- 15 und mit 5 ml In-NaOH versetzt. Die übliche Auf-This compound, which is analogous to p-methoxy-ben- 15 and mixed with 5 ml of In-NaOH. The usual up

zyloxycarbonyl-Verbindung (Beispiel 15 und 16) dar- arbeitung liefert 0,75 g (86%), Schmp. 110 bis 114°CZyloxycarbonyl compound (examples 15 and 16) preparation gives 0.75 g (86%), melting point 110 to 114.degree

gestellt wird, liefert beim 20stündigen Stehen in Tri-' (aus Essigester). * 'is provided, delivers when standing for 20 hours in tri- '(from ethyl acetate). * '

fluoressigsäure unter Zusatz von Anisol Glycyl-glycin. r · 1 onfluoroacetic acid with the addition of anisole glycyl-glycine. r · 1 on

Die Lösung wird im Vakuum eingedampft, der Rück- Beispiel 20 \The solution is evaporated in vacuo, the back example 20 \

stand wird zwischen Wasser und Äther verteilt, die «, p._Methoxy-benzyloxycarbonyl-gIycyl-[N-2,4-diwaßnge Phase wird mit einem schwach basischen methoxy-benzyl)-glycyl]₃-N-(2,4-dimethoxy-stand is distributed between water and ether, which «, p. _M ethoxy-benzyloxycarbonyl-glycyl- [N-2,4-diwaßnge phase is with a weakly basic methoxy-benzyl) -glycyl] ₃ -N- (2,4-dimethoxy-

Ionenaustauscher neutralisiert und eingedampft. Das benzvlVelvcin ^x Ion exchanger neutralized and evaporated. The benzvlVelvcin ^x

erhaltene Glycyl-glycin ist dünnschichtchromatogra-Glycyl-glycine obtained is thin-layer chromatography

phisch mit einer authentischen Probe von Glycyl- 0,43 g der nach Beispiel 19 gewonnenen Verbindungphisch with an authentic sample of glycyl 0.43 g of the compound obtained according to Example 19

glycin identisch. 35 und 0,144 g N-(2,4-Dimethoxy-benzyl)-glycin-methyl-glycine identical. 35 and 0.144 g of N- (2,4-dimethoxy-benzyl) -glycine-methyl-

Dasselbe Ergebnis wird erreicht, wenn die Ausgangs- ester werden in 20 ml Tetrahydrofuran und 1 ml Diverbindung mit Trifluoressigsäure unter Zusatz von methylformamid gelöst und mit 0,066 g Methyl-Anisol 1 Stunde unter Rückfluß erhitzt wird. äthinyl-diäthylamin in 8 ml Tetrahydrofuran tropfen-The same result is achieved when the starting esters are dissolved in 20 ml of tetrahydrofuran and 1 ml of divergent with trifluoroacetic acid with the addition of methylformamide and with 0.066 g of methyl anisole Is heated under reflux for 1 hour. äthinyl-diethylamine in 8 ml of tetrahydrofuran drop-

Wird Benzyloxycarbonyl-N-(2,4-dimethoxy-benzyl)- weise versetzt. Nach 1 Stunde wird wie bei Beispiel 15Benzyloxycarbonyl-N- (2,4-dimethoxy-benzyl) - is added. After 1 hour, as in Example 15

glycin in 99%iger Ameisensäure 20 Minuten unter 30 aufgearbeitet. Die Verseifung des^: Esters erfolgt inglycine worked up in 99% formic acid for 20 minutes under 30. The saponification of the ^: ester takes place in

Rückfluß erhitzt, so resultiert nach der üblichen Auf- 10 ml Aceton und 5 ml Dioxan mit 4 ml In-NaOHHeated to reflux, this results in the usual uptake of 10 ml of acetone and 5 ml of dioxane with 4 ml of 1N NaOH

arbeitung in 79%iger Ausbeute Benzyloxycarbonyl-· (6 Stunden bei 20⁰C). Die nach der üblichen Auf-processing in 79% yield Benzyloxycarbonyl- · (6 hours at 20 ⁰ C). The after the usual

glycyl-glycin, identisch mit einer authentischen Probe, arbeitung erhaltene Verbindung enthält noch wenigglycyl-glycine, identical to an authentic sample, the compound obtained from the work still contains little

,. ,, ', , , , , _VT ,_ . .. unveränderten Ester, der durch Filtration über Alu-,. ,, ' _{,,,,, VT} , _. .. unchanged ester, obtained by filtration through aluminum

b)au_Sp-Methoxy-benzyIoxycarbonyl-N-(2₎4Kh- ^„^ο^ (Aktivität III, neutral),' Lösungsmittelb) au _S p-methoxy-benzyIoxycarbonyl-N- (2 ₎ 4Kh- ^ "^ ο ^ (activity III, neutral), 'solvent

methoxy-benzyO-glycm Essigester/Petroläther (1:1, Volumen) abgetrennt wird.methoxy-benzyO-glycm ethyl acetate / petroleum ether (1: 1, volume) is separated.

Die Verbindung (Beispiel 16) liefert bei der 12stün- . Die gesuchte Verbindung wird mit Methanol eluiert.The compound (Example 16) provides at the 12stün-. The compound sought is eluted with methanol.

digen Behandlung mit Trifluoressigsäure unter Zusatz Ausbeute 0,20 g (77%), Schmp. 114 bis 118⁰C. von Anisol in guter Ausbeute Glycyl-glycin. Es sind-ended treatment with trifluoroacetic acid with the addition yield 0.20 g (77%), mp. 114 to 118 ⁰ C. of anisole in good yield glycyl-glycine. There are

noch Spuren Glycyl-N-(2,4-dimethbxy-benzyl)-glycin 40 : ; Beispiel 21traces of glycyl-N- (2,4-dimethbxy-benzyl) -glycine 40:; Example 21

dünnschichtchromatographisch nachweisbar. 30 Mi- , .-.·_ , ,. , . :, ';,- .'',.-' .. 'detectable by thin layer chromatography. 30 Mi-, .-. · _,. ,. :, ';, -.'',.-' .. '

nuten langes Kochen mit Trifluoressigsäure liefert , Benzyloxycarbonyl-g ycyl-N-(2,4-dimethoxy-utes long boiling with trifluoroacetic acid gives benzyloxycarbonyl-g ycyl-N- (2,4-dimethoxy-

reines Glycyl-glycin in sehr guter Ausbeute. Die Ab- -^ ^: -pure glycyl glycine in very good yield. The ab- - ^ ^: -

spaltung beider Schutzgruppen erfolgt auch durch 0,69 g Benzyloxycarbonyl-glycin, 1,0 g N-(2,4-Di-The two protective groups are also cleaved by 0.69 g of benzyloxycarbonyl-glycine, 1.0 g of N- (2,4-di-

20 Minuten langes Kochen mit 99%iger Ameisensäure 45 methoxy - benzyl) ? l.- leucin - methylester - hydrochlounter Rückfluß. , ~ rid und 0,3 g Triethylamin werden in 10 ml Methylen-,20 minutes of boiling with 99% formic acid 45 methoxy - benzyl)? l - leucine - methyl ester - hydrochlounter Reflux. , ~ rid and 0.3 g of triethylamine are dissolved in 10 ml of methylene,

_ _R . "■' i- V₁O chlorid nach Zusatz von 0,65 g Dicyclohexylcarbo-_ _R. "■ 'i- V ₁ O chloride after adding 0.65 g of dicyclohexylcarbo-

- ^eisP^ie diimid über Nacht gerührt. Die Aufarbeitung analog- ^ice P ^ie diimide stirred overnight. The work-up is analogous

p-Methoxy-ben_Zyloxycarbonyl-glycyl-N-(2,4-di- , Beispiel 15' liefert 1,30 g (89 %), Benzyloxycarbonyl-p-Methoxy-ben _z yloxycarbonyl-glycyl-N- (2,4-di-, Example 15 'gives 1.30 g (89%), benzyloxycarbonyl-

methoxy - benzyl) - glycyl - N - (2,4 - dimethoxy - ben- ⁵° ^yI - N - (2,4 - dimethoxy - benzyl) -1 - leucin - me-, 2vD elvcin - ' ^; thylester. Zur Verseifung wird er in 20 ml Dioxan/methoxy - benzyl) - glycyl - N - (2,4 - dimethoxy - ben- ⁵ ° ^ yI - N - (2,4 - dimethoxy - benzyl) -1 - leucine - me-, 2vD elvcin - '^; thyl ester It is saponified in 20 ml of dioxane /

^v ; ' :^v: > : yj&y ln-NaOH(l:l Volumen) 12 Stunden bei 20⁰C stehen- ^v ; ': ^v: >: yj & y ln-NaOH (l: l volume) stand for ^{12 hours at 20 0 C-}

2,45 g ρ - Methoxy - benzyloxycarbonyl - glycyl- gelassen. Die übliche Aufarbeitung liefert 0,7 g (41 %). N-(2,4-dimethoxy-benzyI)-glycin und 1,3 g N-(2,4-Di- ■ -, _Λ ,■ 2.45 g ρ - methoxy - benzyloxycarbonyl - glycyl - left. The usual work-up gives 0.7 g (41%). N- (2,4-dimethoxy-benzyI) -glycine and 1.3 g of N- (2,4-di- ■ -, _Λ , ■

methoxy-benzylj-glycin-methylester werden in 30ml 55 ' " Beispiel 22..■'._■. methoxy-benzylj-glycine methyl ester are in 30ml 55 '"Example 22 .. ■' ._ ■.

Tetrahydrofuran gelöst und mit 1,2g Dicyclohexyl- Glycyl-L-leucin ^ ■Tetrahydrofuran dissolved and 1.2g dicyclohexyl-glycyl-L-leucine ^ ■

carbodiimid in 20 ml Tetrahydrofuran tropfenweise ν , i -. · ,1 -carbodiimide in 20 ml of tetrahydrofuran dropwise ν, i -. · ,1 -

binnen 30 Minuten versetzt. Am nächsten Tag wird Die nach Beispiel 21 erhaltene Verbindung wird in 'offset within 30 minutes. The next day the compound obtained according to Example 21 is in '

der Dicyclohexylhamstoff abgesaugt, das Tetrahydro- 5 ml Trifluoressigsäure 45 Minuten lang zum Siedenthe dicyclohexylurea sucked off, the tetrahydro- 5 ml trifluoroacetic acid for 45 minutes to the boil

furan verdampft und der Rückstand analog Beispiel 15 60 erhitzt. Nach dem Abdampfen der Trifluoressigsäure aufgearbeitet. Sodann wird die Estergruppe verseift, wird mit Wasser digeriert und mit Äther ausgeschüttelt., indem man den erhaltenen Rückstand in 40 ml Die wäßrige Phase wird mit einem schwach basischen Aceton/Dioxan (1:1 Volumen) löst und mit 10 ml Ionenaustauscher neutralisiert und eingedampft. Man In-NaOH über Nacht rührt. Die übliche Aufarbeitung erhält Glycyl-L-leucin in 83%iger Ausbeute, [<x]g„ furan evaporated and the residue heated analogously to Example 15 60. After the trifluoroacetic acid has evaporated, it is worked up. The ester group is then saponified, digested with water and extracted with ether. By the residue obtained in 40 ml. The aqueous phase is dissolved with a weakly basic acetone / dioxane (1: 1 volume) and neutralized with 10 ml of ion exchanger and evaporated . Stir in NaOH overnight. The usual work-up gives glycyl-L-leucine in 83% yield, [<x] g "

liefert 2,53 g (77%), Schmp. 130 bis 131°C. Schmelz- 6₅ = —37,2° (c = 2 in H₂O) in Übereinstimmung mit der punktdesDicyclohexylammoniumsalzesl37bisl38°C. Literatur.provides 2.53 g (77%), m.p. 130 to 131 ° C. Melting 6 ₅ = -37.2 ° (c = 2 in H ₂ O) in accordance with the punktdesDicyclohexylammoniumsalzesl37bisl38 ° C. Literature.

Claims (1)

Patentanspruch:Claim: Verfahren zur Herstellung von Peptiden durch Kondensation von N-Acyl-aminosäuren oder N-Acylpeptiden mit einer freien oder aktivierten Carboxylgruppe und Aminosäuren oder Peptiden mit einer substituierten Aminogruppe, dadurch gekennzeichnet, daß in den eingesetzten Aminosäure- und/oder Peptid-derivaten -Process for the preparation of peptides by condensation of N-acyl-amino acids or N-acyl peptides with a free or activated carboxyl group and amino acids or peptides with a substituted amino group, thereby characterized that in the amino acid and / or peptide derivatives used - , — CO -4 NH- und/oder — CONH₂-Gruppen, - CO -4 NH and / or - CONH ₂ groups vollständig oder teilweise durch 2,4-Dimethoxybenzylreste substituiert sind und man gegebenenfalls anschließend die 2,4-Dimethoxy-benzylreste durch Behandlung mit anorganischen oder organischen starken Säuren, im Falle der Verwendung als — CO — NH -—Substituenten auch durch Behandlung mit Natrium in" flüssigem Ammoniak abspaltet.are completely or partially substituted by 2,4-dimethoxybenzyl radicals and then optionally the 2,4-dimethoxybenzyl radicals by treatment with inorganic or organic strong acids, in case of use as - CO - NH - substituents also by treatment with sodium in "liquid ammonia splits off.