DE122080T1 - Verfahren zur herstellung eines proteins. - Google Patents
Verfahren zur herstellung eines proteins.Info
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Claims (8)
1. Verfahren zur Herstellung eines löslichen nativen
Proteins, bei welchem eine unlösliche Form des Proteins durch einen Wirtsorganismus, der mit einem
Vektor mit einer Genkodierung für das Protein umgewandelt worden ist, erzeugt wird, wobei die unlösliehe
Form des Proteins in reversibler Weise in einer alkalischen wäßrigen Lösung bei einem pH denaturiert
wird, der dahingehend ausgewählt wird, daß die Dissoziation einer Gruppe oder von Gruppen des
Proteins, die mit der Aufrechterhaltung des Aufbaues des Proteins befaßt sind, begünstigt wird, und das
Protein anschließend in der Weise renaturieren gelassen wird, daß der pH der Lösung unterhalb eines pH '
abgesenkt wird, der dahingehend v/irksam ist, das ^
Protein zu denaturieren, um die lösliche native Form des Proteins zu erzeugen.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,
daß die alkalische wäßrige Lösung einen pH von 9 bis 11,5 besitzt.
i
3. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß die unlösliche Form des Proteins
in Verbindung mit Trümmern vorliegt, die auf den Wirtsorganismus zurückgehen, der in der alkalischen
wäßrigen Lösung unlöslich ist, wobei eine oder mehrere Extraktionen des denaturierten Proteins
durchgeführt werden.
4. Verfahren nach Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, daß die unlösliche Form des Proteins
zuerst in einer wäßrigen Lösung denaturiert wird
und anschließend die erhaltene Lösung zu einer '
alkalischen wäßrigen Lösung bei einem pH verdünnt • wird, der dahingehend ausgewählt wird, daß die
Dissoziation einer Gruppe oder von Gruppen des Proteins, die mit der Aufrechterhaltung des Aufbaues
des Proteins befaßt sind, begünstigt wird, und das Protein in der Weise renaturiert wird, daß der pH
der Lösung unterhalb eines pH abgesenkt wird, welcher dahingehend wirkt, das Protein zu renaturieren, um
die lösliche native Form des Proteins zu erzeugen.
5. Verfahren nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet,
daß der pH der alkalischen wäßrigen Lösung 9 bis 11 ,5 beträgt.
6. Verfahren nach Anspruch 4 oder 5, dadurch gekennzeichnet, daß die Verdünnung 10- bis 5 0-fach ist.
7. Verfahren nach einem der Ansprüche 4 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß das unlösliche Protein
in einer wäßrigen Lösung von Harnstoff bei einer Konzentration von wengistens 7 M denaturiert wird.
8. Verfahren nach einem der Ansprüche 4 bis 6, dadurch
gekennzeichnet, daß das unlösliche Protein in einer wäßrigen Lösung aus Guanidinhydrochlorid mit einer
Konzentration von wenigstens 6 M denaturiert wird.
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