DE10231543B3 - Confocal 3D scanning absorption - Google Patents
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Abstract
Bei der konfokalen dreidimensionalen Scanning-Absorption werden zum Bestimmen der dreidimensionalen Struktur eines Objekts ein Anregungsstrahl (26) und ein Messstrahl (32) in einen im Wesentlichen gemeinsamen Fokus fokussiert. Das Objekt (10) und der Fokus werden zum Abtasten des Objekts durch den Fokus relativ zueinander bewegt. Die Änderung der Transmission des Messstrahls (32) bei dem Durchtritt durch den Fokus wird in Abhängigkeit von der Änderung der Intensität des Anregungsstrahls (26) bestimmt. Durch Bestrahlung der Probe mit Licht in einem wohldefinierten Fokus verändert sich lokal die Transmission der Probe in diesem Fokus. Dies wird mit Hilfe des Messstrahls erfasst. Dadurch können beispielsweise Zellen in ihrer inneren Struktur mittels Absorptionsmessungen dreidimensional erfasst werden, ohne dass sie vorher mit Farbstoffen angefärbt werden müssen.In confocal three-dimensional scanning absorption, an excitation beam (26) and a measuring beam (32) are focused into an essentially common focus in order to determine the three-dimensional structure of an object. The object (10) and the focus are moved relative to one another by the focus in order to scan the object. The change in the transmission of the measuring beam (32) when passing through the focus is determined as a function of the change in the intensity of the excitation beam (26). By irradiating the sample with light in a well-defined focus, the transmission of the sample in this focus changes locally. This is recorded using the measuring beam. In this way, for example, the inner structure of cells can be recorded three-dimensionally by means of absorption measurements without having to be stained with dyes beforehand.
Description
Die Erfindung betrifft eine Anordnung und ein Verfahren zum Bestimmen der dreidimensionalen Struktur eines Objekts.The invention relates to an arrangement and a method for determining the three-dimensional structure of a Object.
Verfahren zum dreidimensionalen optischen Vermessen
einer Probe, insbesondere von Zellen, sind beispielsweise aus der
Bei konfokalen Mikroskopen wird die Ortsauflösung durch eine räumliche Einschränkung des Fokus vor dem Objektiv verbessert.With confocal microscopes, the spatial resolution through a spatial restriction improved focus in front of the lens.
Dazu wird das von der Probe emittierte Licht auf eine Lochblende (Pinhole) abgebildet, die in einer zu der Fokalebene des Objektivs im Objekt konjugierten Ebene angeordnet ist. Die verbesserte Auflösung kommt dadurch zustande, dass zwei Punktabbildungsfunktionen die Abbildung in dem konfokalen Mikroskop bestimmen: die Abbildungsfunktion des Fokus des Laserstrahls und die Abbildungsfunktion des Detektors, welche die Abbildung des von der Probe emittierten Lichts in das Pinhole und den dahinter angeordneten Detektor beschreibt. Die Abbildungsfunktion des Detektors beschreibt die Wahrscheinlichkeit, mit der ein im Fokus emittiertes Photon zum Detektor gelangt. Da sowohl die Anregung als auch die Detektion stattfinden müssen, ist die Punktabbildungsfunktion eines konfokalen Mikroskops das Produkt aus den beiden Wahrscheinlichkeitsverteilungen, das heißt das Produkt der Punktabbildungsfunktionen für die Anregung und die Detektion. Dies führt zu einem deutlich schmaleren Hauptmaximum der konfokalen Punktabbildungsfunktion im Vergleich zu einem nicht konfokal angeordneten Mikroskop. Dies entspricht einer höheren Auflösung des konfokalen Mikroskops und bewirkt eine Diskriminierung aller Punkte, die sich nicht in der unmittelbaren Umgebung des Fokus befinden. Letzteres ist Voraussetzung für die Erstellung dreidimensionaler Bilder.This is done by emitting the sample Light mapped onto a pinhole, which is in a too the focal plane of the lens in the object conjugate plane is. The improved resolution is coming in that two point mapping functions do the mapping determine in the confocal microscope: the imaging function of the focus of the laser beam and the imaging function of the detector, which the imaging of the light emitted by the sample into the pinhole and describes the detector located behind it. The mapping function of the detector describes the probability with which an im Focus emitted photon reaches the detector. Since both the suggestion and also the detection must take place is the point mapping function of a confocal microscope Product from the two probability distributions, i.e. the product the point mapping functions for excitation and detection. This leads to a significantly narrower main maximum the confocal point mapping function compared to one not confocal microscope. This corresponds to a higher resolution of the confocal microscope and causes discrimination against all points, that are not in the immediate vicinity of the focus. The latter is a requirement for the creation of three-dimensional images.
Weiterhin sind konfokale optische
Anordnungen mit zwei Strahlen, so genannte doppelt konfokale Mikroskope,
bekannt, u. a. aus der
All diesen Laser-Scanning-Mikroskopen ist gemeinsam, dass sie zur Aufklärung der räumlichen Struktur eines Objekts die spontane Emission von lumineszierenden Molekülen nutzen. Da die zu untersuchende Probe i. d. R. selbst nicht fluoresziert – native Fluoreszenz ist recht selten –, muss die zu untersuchende Probe i. d. R. mit geeigneten Farbstoffmolekülen markiert werden. Diese verändern möglicherweise die Struktur oder gar die Funktion des zu untersuchenden Objekts und damit die Messung. Ferner leiden Farbstoffmoleküle häufig an einer geringen Photostabilität, mit der die Produktion von phototoxischen Substanzen in der Probe, z. B. Singulett-Sauerstoff, verbundenen ist. Auch. werden derartige Messungen stets durch Fluoreszenzlicht von Verunreinigungen bzw. frequenzverschobenes Streulicht (so genanntes Raman-Licht) verfälscht, insbesondere bei geringen Farbstoff-Konzentrationen.All of these laser scanning microscopes is common that they help clarify the spatial structure of an object use the spontaneous emission of luminescent molecules. Because the one to be examined Sample i. d. R. itself does not fluoresce - native fluorescence is right Rare -, the sample to be examined must i. d. R. marked with suitable dye molecules become. Change this possibly the structure or even the function of the object to be examined and thus the measurement. Furthermore, dye molecules often suffer low photostability, with which the production of phototoxic substances in the sample, z. B. singlet oxygen, is connected. Also. such measurements are always made using fluorescent light of contaminants or frequency-shifted scattered light (so-called Raman light) falsified, especially at low dye concentrations.
Aufgabe der Erfindung ist es, das Bestimmen der dreidimensionalen Struktur eines Objekts zu ermöglichen, ohne das Objekt vorher mit Farbstoffmolekülen markieren zu müssen.The object of the invention is that Determining the three-dimensional structure of an object to enable without having to mark the object with dye molecules beforehand.
Diese Aufgabe wird durch die Erfindungen mit den Merkmalen der unabhängigen Ansprüche 1 und 4 gelöst. Vorteilhafte Weiterbildungen der Erfindungen sind in den Unteransprüchen gekennzeichnet.This task is shared by the inventions the characteristics of the independent Expectations 1 and 4 solved. Advantageous developments of the inventions are characterized in the subclaims.
Erfindungsgemäß wird eine Anordnung zum Bestimmen der dreidimensionalen Struktur eines Objekts angegeben. Als Objekte sind u. a. biologische Objekte von Interesse, etwa Zellen, deren innere und/oder äußere Struktur aufgeklärt werden soll.According to the invention, an arrangement for determining the three-dimensional structure of an object. As objects are u. a. biological objects of interest, such as cells whose inner and / or outer structure enlightened shall be.
Die Anordnung weist einen Anregungsstrahl und einen Messstrahl mit einem im Wesentlichen gemeinsamen Fokus auf. Die Strahlen sind i. d. R. elektromagnetische Strahlen, insbesondere Lichtstrahlen, die vorzugsweise von einem Laser erzeugt werden. Denkbar sind jedoch auch akustische Strahlen, Neutronenstrahlen oder andere Teilchen-Strahlen. Die Strahlen sollten definiert fokussierbar sein.The arrangement has an excitation beam and a measuring beam with an essentially common focus. The rays are i. d. R. electromagnetic radiation, in particular Light rays that are preferably generated by a laser. However, acoustic rays, neutron rays, are also conceivable or other particle rays. The beams should be focusable his.
Um die dreidimensionale Struktur des Objekts aufklären zu können, ist der Fokus kleiner als das Objekt. Als Fokus wird das i. d. R. dreidimensionale Ellipsoid maximaler Bestrahlungsintensität bezeichnet. Je nach Größe des Objekts kann der Fokus relativ groß gewählt werden. Ist das Objekt klein, etwa eine biologische Zelle, so wird als Strahl i. d. R. ein Laserstrahl verwendet und der Fokus möglichst klein gewählt, insbesondere beugungsbegrenzt.In order to clarify the three-dimensional structure of the object, the focus is smaller than the object. The focus is usually on the three-dimensional ellipsoid of maximum radiation intensity records. Depending on the size of the object, the focus can be chosen to be relatively large. If the object is small, for example a biological cell, a laser beam is generally used as the beam and the focus is chosen to be as small as possible, in particular diffraction-limited.
Das Objekt kann frei im Raum fixiert sein. Das Objekt kann auch in einem Medium eingebettet sein, das im Wesentlichen transparent sowohl für den Anregungs- als auch für den Messstrahl ist.The object can be fixed freely in the room his. The object can also be embedded in a medium that essentially transparent for both the excitation and the measurement beam is.
Die Anordnung weist eine Einrichtung zur Relativbewegung von Objekt und Fokus zum Abtasten des Objekts durch den Fokus auf, damit die Struktur des Objekts ermittelt werden kann.The arrangement has a device for relative movement of object and focus for scanning the object by focusing on so that the structure of the object can be determined can.
Es gibt viele Möglichkeiten, die Transmissionseigenschaften der Probe für den Messstrahl zu verändern. Durch Bestrahlen des im Fokus befindlichen Teils des Objekts mit dem Anregungsstrahl verändert sich lokal die Transmission dieses Teils des Objekts für den Messstrahl, abhängig von der lokalen Beschaffenheit des Objekts. Die Anregung der Probe bzw. einiger selektiv auf den Anregungsstrahl ansprechender Moleküle innerhalb der Probe bewirkt, dass diese Moleküle von einem Grundzustand in einen angeregten Zustand überführt werden. Damit wird einerseits der Grundzustand entleert und andererseits der angeregte Zustand bevölkert. Beides lässt sich nachweisen. Der Anteil der Moleküle, die in einen angeregten Zustand überführt werden müssen, ist sehr gering und liegt typischerweise in der Größenordnung von 0,1% bis 1%.There are many options for the transmission properties the sample for to change the measuring beam. By irradiating the part of the object in focus with changed the excitation beam locally the transmission of this part of the object for the measuring beam, dependent on the local nature of the property. The excitation of the sample or some selectively responsive molecules within the excitation beam the sample causes these molecules to go from a ground state to transferred to an excited state. This empties the basic state on the one hand and on the other hand the excited state populates. Both leaves to prove themselves. The proportion of molecules in an excited Condition to be transferred need is very low and is typically on the order of 0.1% to 1%.
Häufig haben die elektronisch angeregten Moleküle einen gegenüber den Molekülen im Grundzustand veränderten Extinktionskoeffizienten bzw. ein verändertes Absorptionsspektrum. Die Veränderung ist i. d. R. für jede Molekülart spezifisch. Zum Nachweis der Bevölkerung des angeregten Zustands wird ein geeigneter Messstrahl gewählt, beispielsweise ein Laserstrahl mit einer Wellenlänge, die eine Absorptionsbande des angeregten Zustands der Moleküle trifft, die jedoch keine Absorptionsbande des Grundzustands trifft.Frequently the electronically excited molecules have one against the molecules changed in the basic state Extinction coefficients or a changed absorption spectrum. The change is i. d. R. for every kind of molecule specific. To prove the population A suitable measuring beam of the excited state is selected, for example a laser beam with a wavelength that is an absorption band of the excited state of the molecules, but none Absorption band of the ground state.
Die Bevölkerung des angeregten Zustands lässt sich auch durch stimulierte Emission nachweisen. Dazu wird der Messstrahl auf eine Wellenlänge abgestimmt, die einer Emissionsbande des angeregten Zustands entspricht. Kommt es zur stimulierten Emission, so erhöht sich die Transmission des Messstrahls scheinbar. Ferner erhöht sich bei Verwendung der stimulierten Emission die Photostabilität (die Anzahl der im Mittel möglichen Anregungszyklen) von ggf. eingesetzten Farbstoffen, da diese eine kürzere Zeit in elektronisch angeregten Zuständen verweilen, aus denen heraus sie i. d. R. chemische Reaktionen eingehen können, die ihre Fluoreszenzfähigkeit aufheben.The population of the excited state can be can also be demonstrated by stimulated emission. For this, the measuring beam tuned to a wavelength, which corresponds to an emission band of the excited state. comes stimulated emission, the transmission of the Measuring beam apparently. Furthermore, when using the stimulated emission the photostability (the number of on average potential Excitation cycles) of any dyes used, since this is a shorter time in electronically excited states linger from which they i. d. R. enter into chemical reactions can, which their fluorescence ability cancel.
Die Entleerung des Grundzustands kann dadurch nachgewiesen werden, dass der Messstrahl beispielsweise die gleiche oder ähnliche Wellenlänge wie der Anregungsstrahl hat und dann auch beide von einem Laser erzeugt werden. Beide mögen auf eine Absorptionsbande des Grundzustands der Moleküle abgestimmt sein. Wird der Grundzustand teilweise entvölkert bzw. ausgebleicht, so verringert sich die Absorption des Messstrahls abhängig von der Intensität des Anregungsstrahls, d. h. die Transmission erhöht sich. Möglich ist für diesen Fall auch, dass der Messstrahl auf eine andere Absorptionsbande des Grundzustands abgestimmt ist, also eine andere Wellenlänge hat als der Anregungsstrahl.The emptying of the basic state can be demonstrated that the measuring beam, for example the same or similar Wavelength like the excitation beam has and then both generated by a laser become. They both like tuned to an absorption band of the ground state of the molecules his. If the basic state is partially depopulated or faded, then so the absorption of the measuring beam decreases depending on the intensity the excitation beam, d. H. the transmission increases. In this case it is also possible that the measuring beam is matched to another absorption band of the ground state, so a different wavelength has as the excitation beam.
Auf diese Weise wird durch den Anregungsstrahl ein Volumen innerhalb des Objekts erzeugt, dass spezifische Eigenschaften hat, die selektiv nachgewiesen werden können. Dieses Volumen ist z. B. bestimmt durch den Bereich der maximalen Konzentration an Molekülen im angeregten Zustand. Dieser Bereich wird durch den Fokus des Anregungsstrahls erzeugt. Ohne diese gezielte Erzeugung eines präparierten Volumens im Objekt könnte eine Absorptionsmessung lediglich Informationen über die Gesamtheit der Moleküle im Strahlengang des Messstrahls liefern.In this way, through the excitation beam a volume within the object that produces specific properties that can be detected selectively. This volume is e.g. B. determined by the range of the maximum concentration of molecules in the excited Status. This area is defined by the focus of the excitation beam generated. Without this targeted creation of a prepared volume in the object could an absorption measurement only provides information about the totality of the molecules in the beam path of the measuring beam.
Je nach Notwendigkeit haben der Anregungsstrahl und der Messstrahl, sofern es sich um Laserstrahlen handelt, die gleiche Wellenlänge oder unterschiedliche Wellenlängen. Entsprechend werden eine oder mehrere Strahlungsquellen benötigt.Depending on the need have the excitation beam and the measuring beam, if it is a laser beam, the same wavelength or different wavelengths. Accordingly, one or more radiation sources are required.
Es ist nicht nötig, die Probe mit geeigneten Sonden, z. B. Farbstoff-Molekülen, zu markieren. Es genügt, eine Absorptionsbande von Teilen der Probe zu finden und diese durch den Anregungsstrahl reversibel und gezielt auszubleichen. Bei biologischen Proben gibt es oftmals eine Reihe solcher Absorptionsbanden, so beispielsweise bei Cytochromen oder Hämoglobin. Es ist jedoch möglich, durch Markieren des Objekts mit geeigneten Farbstoffen den gewünschten Effekt gezielt herbeizuführen oder zu verstärken. Dazu können auch Farbstoffe eingesetzt werden, die nur schlecht fluoreszieren, etwa klassische Färbemittel, deren Auswirkungen auf Zellen gut erforscht sind.It is not necessary to use suitable probes z. B. dye molecules, to mark. It is sufficient, find an absorption band from parts of the sample and pass them through reversibly and specifically bleach the excitation beam. For biological samples there are often a number of such absorption bands, for example cytochrome or hemoglobin. However, it is possible by marking the object with suitable dyes To bring about a targeted effect or reinforce. You can do this dyes are also used which fluoresce only poorly, such as classic colorants, whose effects on cells are well researched.
Die Anordnung weist schließlich eine Einrichtung auf zum Bestimmen der Änderung der Transmission des Messstrahls bei dem Durchtritt durch den Fokus, abhängig von der Änderung der Intensität des Anregungsstrahls. In der Regel ist die Änderung der Transmission proportional zur Konzentration der Moleküle, die durch den Anregungsstrahl in einen angeregten Zustand überführt wurden. Somit ist die relative Änderung der Transmission i. d. R. proportional zur Intensität des Anregungsstrahls. Typische Werte für die relative Änderung der Transmission des Messstrahls liegen im Bereich von 1% oder weniger. Relative Transmissionsänderungen bis 3*10^-8 sind bei geeigneter Ausrüstung noch nachzuweisen. Mit dieser Technik können einzelne Absorbermoleküle nachgewiesen werden.The arrangement finally has one Set up to determine the change in transmission of the Measuring beam when passing through the focus, depending on of change the intensity of the excitation beam. As a rule, the change in transmission is proportional to the concentration of the molecules, which have been brought into an excited state by the excitation beam. So that's the relative change the transmission i. d. R. proportional to the intensity of the excitation beam. Typical values for the relative change the transmission of the measuring beam is in the range of 1% or less. Relative transmission changes Up to 3 * 10 ^ -8 can still be demonstrated with suitable equipment. With this technique can individual absorber molecules be detected.
Ein großer Vorteil der Erfindung besteht darin, dass auf die Markierung mit Farbstoffen verzichtet werden kann. Dadurch kommt es u. a. zu einer Reduzierung der Produktion phototoxischer Substanzen in der Probe, die stark durch fluoreszierende Farbstoffe katalysiert wird.A great advantage of the invention is that the marking with dyes can be dispensed with. This leads, among other things, to a reduction in the production of phototoxic substances zen in the sample, which is strongly catalyzed by fluorescent dyes.
Ferner kann das gewünschte Messsignal i. d. R. frei von Untergrund nachgewiesen werden. Wird als Messstrahl ein in der Wellenlänge schmalbandiger Laserstrahl verwendet, so wird auch das gewünschte Signal nur in diesem schmalen Wellenlängen-Bereich nachgewiesen. Dazu kann z. B. vor dem Detektor ein gleichfalls schmalbandiger Farbfilter oder Monochromator eingesetzt werden. Umgebungslicht, Hintergrund-Fluoreszenz oder Raman-Licht wird dadurch ausgeblendet. Wird, wie beim derzeitigen Stand der Technik, Fluoreszenzlicht nachgewiesen, so ist das Emissionslicht über einen wesentlich breiteren Wellenlängenbereich zu sammeln, was zu einem entsprechend erhöhten Untergrund führt. Ferner kann durch das Anregungslicht ein selektiver Zustand präpariert werden, der durch den Messstrahl nachgewiesen wird, ein Zustand, der in der Probe evtl. natürlicherweise nicht vorkommt und daher untergrundfrei ist.Furthermore, the desired measurement signal i. d. Can be proven free of underground. Is used as a measuring beam one in the wavelength narrow-band laser beam is used, so is the desired signal detected only in this narrow wavelength range. For this, e.g. B. in front of the detector also a narrow band Color filter or monochromator can be used. Ambient light This eliminates background fluorescence or Raman light. If, as in the current state of the art, fluorescent light is detected, so the emission light is over collect a much wider range of wavelengths what to a correspondingly increased Leads underground. Furthermore, a selective state can be prepared by the excitation light which is detected by the measuring beam, a state possibly natural in the sample does not occur and is therefore underground.
Die Erfindung kann neben vielen Anwendungen u. a. zur Ultra-Spuren-Analyse in einer Probe eingesetzt werden sowie zur Überprüfung der Homogenität der Färbung von Polymeren bzw. zur Überprüfung der inneren Struktur der Farbstoffverteilung in Proben.The invention can have many applications u. a. for ultra trace analysis be used in a sample and to check the homogeneity of the color of Polymers or to check the internal structure of the dye distribution in samples.
Vorteilhafterweise wird der durch
die Probe transmittierte Messstrahl mit Hilfe eines konfokalen Aufbaus
nachgewiesen. Das heißt,
dass der Fokus des Messstrahls in der Probe auf ein Pinhole abgebildet
wird, hinter dem sich ein Detektor befindet. Dadurch wird die Ortsauflösung erhöht. Gegenüber herkömmlichen
Laser-Scanning-Mikroskopen hat dieses konfokale, zweistrahlige Absorptionsmikroskop
eine um den Faktor Wurzel
Um die Ortsauflösung weiter zu erhöhen, wird i. d. R. ein Mikroskop dazu verwendet, den Anregungsstrahl und den Messstrahl in die Probe zu fokussieren. Am besten geeignet zur Durchführung der Erfindung ist ein modifiziertes konfokales Laser-Scanning-Mikroskop.To further increase the spatial resolution, i. d. R. used a microscope to view the excitation beam and the Focus the measuring beam into the sample. Most suitable for carrying out the invention is a modified confocal laser scanning microscope.
Die Erfindung erlaubt es, die spektrale Verteilung der Änderung der Transmission des Messstrahls bei dem Durchtritt durch den Fokus räumlich aufgelöst zu erfassen. Dazu wird zum Erzeugen des Messstrahls eine Lampe eingesetzt, die ein breites, möglichst kontinuierliches Spektrum an Licht aussendet. Alternativ kann auch eine schmalbandige, durchstimmbare Lichtquelle, etwa ein abstimmbarer Laser, eingesetzt werden. Die Transmission des Messstrahls wird dann mit Hilfe eines Spektraldetektors nachgewiesen. Die so ermittelten Transmissions- bzw. Absorptionsspektren können ferner als Funktion der Wellenlänge des Anregungsstrahls ermittelt werden. Damit wird ein neues Feld der mehrdimensionalen Spektroskopie eröffnet, dass enorme Möglichkeiten der differenzierten Darstellung z. B. von Gewebe oder Zellstrukturen schafft.The invention allows the spectral Distribution of the change the transmission of the measuring beam as it passes through the focus to be spatially resolved. For this purpose, a lamp is used to generate the measuring beam a broad, if possible emits a continuous spectrum of light. Alternatively, too a narrow-band, tunable light source, such as a tunable one Lasers. The transmission of the measuring beam is then detected using a spectral detector. The so determined Transmission or absorption spectra can also be a function of wavelength of the excitation beam can be determined. This will create a new field Multi-dimensional spectroscopy opens up enormous opportunities the differentiated representation z. B. of tissue or cell structures creates.
Im Folgenden wird die Erfindung anhand von Ausführungsbeispielen näher erläutert, die in den Figuren schematisch dargestellt sind. Gleiche Bezugsziffern in den einzelnen Figuren bezeichnen dabei gleiche Elemente. Im Einzelnen zeigt:The invention is described below of embodiments explained in more detail the are shown schematically in the figures. Same reference numbers in the individual figures denote the same elements. In detail shows:
Wie in
Das zweite Mikroskopobjektiv
Die Fokusse der beiden Laserstrahlen
fallen zusammen, ebenso wie die Abbildung des Pinholes
Die Wellenlänge des Anregungsstrahls
Häufig
haben die elektronisch angeregten Moleküle einen gegenüber den
Molekülen
im Grundzustand veränderten
Extinktionskoeffizienten für
die Wellenlänge
des Messstrahls
Das Signal der Silizium-Photodiode
Um die Möglichkeiten dieser konfokalen
Absorptionsmikroskopie zu demonstrieren, zeigt
Die Lage der Fokalebene
- 1010
- Probesample
- 1212
- Positioniertischpositioning
- 1414
- Mikroskopobjektivmicroscope objective
- 1616
- Helium-Neon-LaserHelium-neon laser
- 1717
- Linsenpaarpair of lenses
- 1818
- Mikroskopobjektivmicroscope objective
- 1919
- Spektralfilterspectral
- 2020
- Pinholepinhole
- 2222
- Linselens
- 2424
- Silizium-PhotodiodeSilicon photodiode
- 2626
- Anregungsstrahlexcitation beam
- 2828
- Argon-Ionen-LaserIon laser
- 2929
- Linsenpaarpair of lenses
- 3030
- dichroitischer Strahlteilerdichroic beamsplitter
- 3131
- Modulatormodulator
- 3232
- Messstrahlmeasuring beam
- 3434
- Objektträgerslides
- 3636
- Farbstoff-SchichtDye layer
- 3838
- Fokalebenefocal plane
- 4040
- Lock-in-VerstärkerLock-in amplifier
- 4242
- Computercomputer
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