DE10223534A1

DE10223534A1 - Use of viruses containing oncogenes for treating tumors, can replicate only in cells having YB-1 transcription factor in the nucleus, also new viral oncogene proteins

Info

Publication number: DE10223534A1
Application number: DE2002123534
Authority: DE
Inventors: Per Sonne Holm
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2002-05-27
Filing date: 2002-05-27
Publication date: 2003-12-24
Also published as: ZA200409367B

Abstract

Method for preparing a virus (A), preferably an adenovirus, that: (a) is replication deficient in cells that lack transcription factor YB-1 in the nucleus; and (b) contains an oncogene, or its product, particularly a protein, able to transactivate at least one of the viral gene E1B55kDa, E4orf6, E4orf3 or E3ADP. Independent claims are also included for: (1) use of (A) for replication in cells that contain YB-1 in the nucleus; (2) similar uses of a virus (A1), preferably an adenovirus, constructed so that replication is controlled (predominantly) through YB-1, via activation of the E2 late promoter; (3) viral oncogene protein (II), especially isolated, that: (a) transactivates at least one (I); and (b) does not induce YB-1 in the cell nucleus; (4) use of a viral replication system, especially adenoviral, containing nucleic acid encoding (A) and including the nucleic acid of a helper virus that contains the sequence for YB-1; (5) use of nucleic acid encoding (A), or a vector containing it, for preparing a pharmaceutical or for replication in cells; (6) use of an agent (X) that interacts with YB-1 for characterization of (tumor) cells or patients to determine suitability for treatment with (A); and (7) use of (II), or nucleic acid encoding it, for preparation of (A). ACTIVITY : Cytostatic; Nude mice were inoculated subcutaneously with 5 million cells each of: (i) HeLa cells (negative for nuclear YB-1); and (ii) 257RDB cells (positive for YB-1). When tumors had reached 200-520 mm 3>, they were injected with 5 X 10 8> plaque-forming units of the adenovirus dl520 (in 3 doses on consecutive days). dl520 lacks the CR3 region of the E1A gene so is unable to transport YB-1 into the nucleus. Mean tumor volumes after 30 days were about 2000 mm 3> for HeLa (compare 1500 mm 3> for mock-treated controls) but about 500 mm 3> (essentially no increase over 30 days) for 257RDB (compare about 1500 mm 3> for mock-treated controls). MECHANISM OF ACTION : Virus-induced lysis of tumor cells; gene therapy.

Description

Die Erfindung betrifft die Verwendung von Adenoviren sowie dafür codierender Nukleinsäuren und rekombinantes virales Onkoprotein. The invention relates to the use of adenoviruses and coding for them Nucleic acids and recombinant viral oncoprotein.

Bei der Behandlung von Tumoren werden derzeit eine Vielzahl von Therapiekonzepten verfolgt. Neben der Verwendung chirurgischer Techniken stehen dabei die Chemotherapie und die Strahlentherapie im Vordergrund. All diese Techniken sind jedoch für den Patienten mit nicht unerheblichen Nebenwirkungen verbunden. Mit der Verwendung von replikationsselektiven onkolytischen Viren wurde eine neue Plattform für die Behandlung von Tumoren geschaffen. Dabei wird eine selektive intratumorale Replikation eines viralen Agens herbeigeführt, die in der Folge zur Virusreplikation, Lyse der infizierten Tumorzelle und Verbreitung des Virus auf benachbarte Tumorzellen führt. Infolge der Beschränkung der Replikationsfähigkeit des Virus auf Tumorzellen bleibt normales Gewebe von der Replikation und damit der Lyse durch das Virus verschont. A variety of therapy concepts are currently used in the treatment of tumors tracked. In addition to the use of surgical techniques, chemotherapy and radiotherapy in the foreground. However, all of these techniques are common to the patient not inconsiderable side effects. With the use of Replication-selective oncolytic viruses became a new platform for the treatment of tumors created. This involves selective intratumoral replication of a viral agent brought about, which subsequently led to virus replication, lysis of the infected tumor cell and spread of the virus leads to neighboring tumor cells. Due to the limitation of Replication ability of the virus on tumor cells remains normal tissue from replication and thus the Lysis spared by the virus.

Derzeit finden verschiedene virale Systeme in klinischen Studien mit dem Ziel der Tumorlyse Anwendung. Ein Beispiel für einen derartigen Adenovirus ist dl1520 (Onyx-015), der bereits erfolgreich in den klinischen Phasen I und II eingesetzt wurde (Khuri, F. et al. Nature Medicine 6, 879-885, 2000). Onyx-015 ist ein Adenovirus, bei dem das E1B-55kDA-Gen deletiert ist. Diese Modifikation des Adenovirus beruht dabei auf der Beobachtung, dass bei Deletion des E1B55kDa-Proteins im adenoviralen Vektor die Replikation und somit die Lyse von Zellen mit defektem p53 möglich ist (Kirn, D. et al., Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 17, 391a, 1998), wobei normale Zellen nicht geschädigt werden. Genauer ist das E1B-55kDa- Genprodukt beteiligt an der Inhibierung von p53, dem Transport viraler mRNA und dem Abschalten der Proteinsynthese der Wirtszelle. Die Inhibierung von p53 erfolgt dabei durch Ausbilden eines Komplexes aus p53 und dem adenoviral codierten E1B-55kDa Protein. Von p53, codiert von TP53, geht ein komplexer regulatorischer Mechanismus aus (Zambetti, G. P. et al., FASEB J. 7, 855-865, 1993), der u. a. auch dazu führt, dass eine effiziente Replikation von Viren wie Adenoviren in der Zelle unterdrückt wird. Das Gen TP 53 ist in etwa 50% aller menschlichen Tumoren deletiert oder mutiert mit der Folge, dass es zu keiner - erwünschten - Apoptose infolge einer Chemotherapie oder einer Bestrahlungstherapie kommt und damit der Erfolg dieser Tumorbehandlungen im Normalfall unterbleibt. Various viral systems are currently used in clinical studies aimed at tumor lysis. An example of such an adenovirus is dl1520 (Onyx-015), which has already been used successfully in clinical phases I and II (Khuri, F. et al. Nature Medicine 6 , 879-885 , 2000 ). Onyx-015 is an adenovirus with the E1B-55kDA gene deleted. This modification of the adenovirus is based on the observation that when the E1B55kDa protein is deleted in the adenoviral vector, the replication and thus the lysis of cells with defective p53 is possible (Kirn, D. et al., Proc. Am. Soc. Clin. Oncol. 17, 391a, 1998), whereby normal cells are not damaged. More specifically, the E1B-55kDa gene product is involved in the inhibition of p53, the transport of viral mRNA and the shutdown of protein synthesis in the host cell. P53 is inhibited by forming a complex of p53 and the adenovirally encoded E1B-55kDa protein. P53, encoded by TP53, is based on a complex regulatory mechanism (Zambetti, GP et al., FASEB J. 7, 855-865, 1993), which among other things also leads to the efficient replication of viruses such as adenoviruses in the cell is suppressed. The TP 53 gene has been deleted or mutated in approximately 50% of all human tumors, with the result that there is no - desired - apoptosis as a result of chemotherapy or radiation therapy, and the success of these tumor treatments is therefore usually not successful.

Ein weiteres Konzept tumorlytischer Viren beruht auf der Beobachtung, dass wenn das E1A- Protein in einer bestimmten Weise deletiert vorliegt bzw. eine oder mehrere Mutationen aufweist, welche die Bindung von Rb/E2F und/oder p107/E2F nicht beeinflussen, solche Adenoviren den Eintritt der infizierten Zellen in die S-Phase nicht induzieren und zur Replikation in Tumorzellen befähigt sind, die kein funktionelles Rb-Protein aufweisen. Zudem kann das E1A-Protein am N-Terminus deletiert vorliegen bzw. eine oder mehrere Mutationen im Bereich der Aminosäurepositionen 1 bis 76 des E1A-Proteins umfassen, um die Bindung von E1A an p300 zu unterbinden, um somit eine selektivere Replikation in Tumorzellen zu bewerkstelligen. Diese Vorgehensweisen sind beispielhaft beschrieben in dem europäischen Patent EP 0 931 830. Beispiele derartiger Adenoviren sind AdΔ24, dl922-947, E1Ad/01/07 und CB016 (Howe, J. A. et al., Molecular Therapy 2, 485-495, 2000; Fueyo, J. et al., Oncogene 19, 2-12, 2000; Heise, C. et al., Nature Medicine 6, 11341139, 2001; Balague, C. et al., J. Virol. 75, 7602-7611, 2001). Diese im Stand der Technik bekannten adenoviralen Systeme zur Onkolyse weisen somit bestimmte Deletionen im E1A Protein auf, wobei diese Deletion vorgenommen worden war unter der Annahme, dass intakte Rb-Proteine einer effiziente Replikation in vivo entgegenwirken würden und um eine adenovirale Replikation in vivo nur in Rb-negativen/mutierten Zellen sicher zu stellen. Diese adenoviralen Systeme nach dem Stand der Technik gehen auf E1A zurück, um mittels des frühen E2-Promotors (engl. E2 early Promotor) und E2F die in vivo Replikation zu steuern. Another concept of tumor lytic viruses is based on the observation that if the E1A protein is deleted in a certain way or has one or more mutations which do not affect the binding of Rb / E2F and / or p107 / E2F, such adenoviruses enter of the infected cells do not induce into the S phase and are capable of replication in tumor cells which have no functional Rb protein. In addition, the E1A protein can be deleted at the N-terminus or comprise one or more mutations in the region of amino acid positions 1 to 76 of the E1A protein in order to prevent the binding of E1A to p300, in order to thereby achieve a more selective replication in tumor cells , These procedures are described by way of example in European patent EP 0 931 830. Examples of such adenoviruses are AdΔ24, dl922-947, E1Ad / 01/07 and CB016 (Howe, JA et al., Molecular Therapy 2 , 485-495 , 2000 ; Fueyo , J. et al., Oncogene 19 , 2-12 , 2000 ; Heise, C. et al., Nature Medicine 6 , 11341139, 2001; Balague, C. et al., J. Virol. 75, 7602-7611, 2001). These adenoviral systems for oncolysis, which are known in the prior art, thus have certain deletions in the E1A protein, this deletion having been carried out on the assumption that intact Rb proteins would counteract efficient replication in vivo and to prevent adenoviral replication in vivo only in Ensure Rb negative / mutant cells. These adenoviral systems according to the prior art are based on E1A in order to control the in vivo replication by means of the E2 early promoter and E2F.

Eine weitere Form von tumorlytischen adenoviralen Systemen beruht auf dem Einsatz selektiver Promotoren, um das virale Onkogen E1A spezifisch zu exprimieren, was eine selektive Replikation in Tumorzellen erlaubt (Rodriguez, R. et al., Cancer Res. 57, 2559-2563, 1997). Another form of tumor-lytic adenoviral systems is based on use selective promoters to specifically express the viral oncogene E1A, which is a selective Replication in tumor cells allowed (Rodriguez, R. et al., Cancer Res. 57, 2559-2563, 1997).

Wie vorstehend beschrieben kommt es bei den verschiedenen Konzepten adenoviraler tumorlytischer Viren auf die Auswahl eines für das dem jeweiligen Konzept zugrundeliegenden Wirkmechanismus geeigneten zellulären Hintergrundes an. Mit anderen Worten, die verschiedenen derzeit bekannten adenoviralen Systeme zur Tumorlyse können nur bei Vorliegen bestimmter molekularbiologischer Voraussetzungen angewandt werden. Dies beschränkt die Anwendung derartiger Systeme auf bestimmte Patientenkollektive. As described above, the various concepts are more adenoviral tumor lytic viruses on the selection of one for the underlying the respective concept Mechanism of action of a suitable cellular background. In other words, the Various currently known adenoviral systems for tumor lysis can only be present certain molecular biological requirements are applied. This limits the Application of such systems to certain patient groups.

Ein besonderes Problem bei der Behandlung von Tumorerkrankungen stellt sich dann ein, wenn die Patienten eine Vielfachresistenz (engl. multidrug resistence (MDR)) entwickeln, die eine besonders gut untersuchte Resistenzform von Tumoren gegenüber Zytostatika darstellt (Gottesman und Pastan, Annu. Rev. Biochem. 62, 385-427, 1993). Sie beruht auf der Überexpression des membranständigen Transportproteins P-Glykoprotein. Bargou, R. C. et al., (Bargou, R. C. et al., Nature Medicine 3, 447-450, 1997 und Oda, Y. et al., Clin. Cancer Res. 4, 2273-2277, 1998 konnten zeigen, dass die Kernlokalisation des humanen Transkriptionsfaktors YB-1 unmittelbar an der Aktivierung der Expression des P-Glykoproteins beteiligt ist. Weitere Untersuchungen belegen, dass YB-1 durch verschiedene Streßbedingungen in den Zellkern gelangt, wie z. B. UV-Bestrahlung, Zytostatika-Applikation (Koike, K. et al., FEBS Lett 17, 390-394, 1997) und Hyperthermie (Stein, U. et al., JBC 276, 28562-69, 2001). A particular problem in the treatment of tumor diseases arises when the patients develop multidrug resistance (MDR), which is a particularly well-studied form of resistance of tumors to cytostatics (Gottesman and Pastan, Annu. Rev. Biochem 62, 385-427, 1993). It is based on the overexpression of the membrane-bound transport protein P-glycoprotein. Bargou, RC et al., (Bargou, RC et al., Nature Medicine 3 , 447-450 , 1997 and Oda, Y. et al., Clin. Cancer Res. 4, 2273-2277, 1998 could show that the Nuclear localization of the human transcription factor YB-1 is directly involved in the activation of the expression of the P-glycoprotein Further studies prove that YB-1 gets into the cell nucleus through various stress conditions, such as UV radiation, cytostatics application (Koike , K. et al., FEBS Lett 17 , 390-394 , 1997 ) and hyperthermia (Stein, U. et al., JBC 276 , 28562-69, 2001).

Der vorliegenden Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, eine technische Lehre und insbesondere ein Mittel bereitzustellen, welches erlaubt, einen Organismus, speziell einen menschlichen Organismus bzw. ein Patientenkollektiv spezifisch mit tumorlytisch wirkenden Agenzien zu behandeln. Weiterhin ist es eine der vorliegenden Erfindung zugrundeliegenden Aufgabe, ein Mittel bereitzustellen, welches geeignet ist, bei Patienten mit Tumorerkrankungen eine Tumorlyse herbeizuführen, die gegenüber Zytostatika resistent sind, insbesondere solche, die eine Vielfachresistenz zeigen. The present invention has for its object a technical teaching and in particular to provide a means that allows an organism, especially one human organism or a patient collective specifically with tumor-lytic effects To treat agents. Furthermore, it is one of the basis of the present invention Task to provide an agent that is suitable in patients with tumor diseases induce tumor lysis that is resistant to cytostatics, especially those that show multiple resistance.

Erfindungsgemäß wird die Aufgabe in einem ersten Aspekt gelöst durch die Verwendung eines Adenovirus zur Herstellung eines Medikamentes, wobei der Adenovirus replikationsdefizient ist in Zellen, die YB-1 nicht im Kern aufweisen, und der Adenovirus für ein Onkogen oder Onkogenprodukt codiert, das zumindest ein virales Gen, bevorzugterweise ein adenovirales Gen, transaktiviert, wobei das Gen ausgewählt ist aus der Gruppe, die E1B55kDa, E4orf6, E4orf3 und E3ADP umfasst. According to the invention, the object is achieved in a first aspect by the use an adenovirus for the manufacture of a medicament, the adenovirus replication deficient in cells that do not have YB-1 in the nucleus and the adenovirus for an oncogene or encodes an oncogene product containing at least one viral gene, preferably a adenoviral gene, transactivated, the gene being selected from the group consisting of E1B55kDa, E4orf6, E4orf3 and E3ADP includes.

In einem zweiten Aspekt wird die Aufgabe gelöst durch die Verwendung eines Adenovirus zur Replikation in Zellen, die YB-1 im Kern aufweisen, wobei der Adenovirus replikationsdefizient ist in Zellen, die YB-1 nicht im Kern aufweisen, und der Adenovirus für ein Onkogen oder Onkogenprodukt codiert, das zumindest ein virales Gen, bevorzugterweise ein adenovirales Gen, transaktiviert, wobei das Gen ausgewählt ist aus der Gruppe, die E1B55kDa, E4orf6, E4orf3 und E3ADP umfasst. In a second aspect, the task is solved by using an adenovirus for replication in cells which have YB-1 in the nucleus, the adenovirus replication deficient in cells that do not have YB-1 in the nucleus and the adenovirus for an oncogene or encodes an oncogene product containing at least one viral gene, preferably a adenoviral gene, transactivated, the gene being selected from the group consisting of E1B55kDa, E4orf6, E4orf3 and E3ADP includes.

In einer Ausführungsform der beiden erfindungsgemäßen Verwendungen ist vorgesehen, dass der Adenovirus in Zellen repliziert, die YB-1 im Kern aufweisen. In one embodiment of the two uses according to the invention it is provided that the adenovirus replicated in cells that have YB-1 in the nucleus.

In einer weiteren Ausführungsform der beiden erfindungsgemäßen Verwendungen ist vorgesehen, dass das virale Onkogenprotein E1A ist und/oder das Onkogen das für E1A codierende Gen und/oder das Onkogenprotein E1A ist. In a further embodiment of the two uses according to the invention provided that the viral oncogene protein is E1A and / or the oncogene is the coding for E1A Gene and / or the oncogene protein E1A.

In einer bevorzugten Ausführungsform ist vorgesehen, dass das virale Onkogenprotein E1A zur Bindung eines funktionellen Rb-Tumorsuppressor-Genprodukts fähig ist. In a preferred embodiment it is provided that the viral oncogene protein E1A is capable of binding a functional Rb tumor suppressor gene product.

In einer alternativen Ausführungsform ist vorgesehen, dass das virale Onkogenprotein E1A zur Bindung eines funktionellen Rb-Tumorsuppressor-Genprodukts nicht fähig ist. In an alternative embodiment it is provided that the viral oncogene protein E1A is unable to bind a functional Rb tumor suppressor gene product.

In einer weiteren Ausführungsform der beiden erfindungsgemäßen Verwendungen ist vorgesehen, dass das virale Onkoprotein E1A nicht die nukläre Lokalisation von YB-1 induziert. In a further embodiment of the two uses according to the invention provided that the viral oncoprotein E1A did not induce the nuclear localization of YB-1.

In einer noch weiteren Ausführungsform der beiden erfindungsgemäßen Verwendungen ist vorgesehen, dass das Medikament für Patienten bestimmt ist, deren Zellen Rb-positiv oder Rb-negativ sind. In yet another embodiment of the two uses according to the invention provided that the drug is intended for patients whose cells are Rb-positive or Rb are negative.

In einer bevorzugten Ausführungsform ist dabei vorgesehen, dass die Zellen diejenigen Zellen sind, die an der Ausbildung des Zustandes beteiligt sind, der mit dem Medikament beeinflusst werden soll. In a preferred embodiment it is provided that the cells are those cells are involved in the formation of the condition that affects with the drug shall be.

In einer weiteren Ausführungsform der beiden erfindungsgemäßen Verwendungen ist vorgesehen, dass die Zellen Rb-negativ und im Zellkern YB-1 positiv, insbesondere unabhängig vom Zellzyklus im Zellkern YB-1 positiv sind. In a further embodiment of the two uses according to the invention provided that the cells are Rb-negative and in the cell nucleus YB-1 positive, in particular independently of the cell cycle in the nucleus YB-1 are positive.

In einer noch weiteren Ausführungsform der beiden erfindungsgemäßen Verwendungen ist vorgesehen, dass das Medikament für die Behandlung von Tumoren ist. In yet another embodiment of the two uses according to the invention provided that the drug is for the treatment of tumors.

In einer noch weiteren Ausführungsform der beiden erfindungsgemäßen Verwendungen ist vorgesehen, dass die Zellen, insbesondere die den Tumor oder Teile davon ausbildenden Zellen eine Mehrfachresistenz gegen pharmakologische Wirkstoffe, bevorzugter Weise Antitumormittel und bevorzugtererweise Zytostatika, aufweisen. In yet another embodiment of the two uses according to the invention provided that the cells, in particular those forming the tumor or parts thereof Cells have multiple resistance to pharmacological agents, preferably Antitumor agents, and preferably cytostatics.

In einer bevorzugten Ausführungsform der beiden erfindungsgemäßen Verwendungen ist vorgesehen, dass die Zellen eine Expression, bevorzugterweise eine Überexpression des membranständigen Transportproteins P-Glykoprotein zeigen. In a preferred embodiment of the two uses according to the invention provided that the cells express, preferably overexpress the Show membrane-bound transport protein P-glycoprotein.

In einer weiteren Ausführungsform der beiden erfindungsgemäßen Verwendungen ist vorgesehen, dass die Zellen p53-positiv oder p53-negativ sind. In a further embodiment of the two uses according to the invention provided that the cells are p53 positive or p53 negative.

In einer Ausführungsform der beiden erfindungsgemäßen Verwendungen ist vorgesehen, dass das Onkogenprotein gegenüber dem Wildtyp-Onkogenprotein E1A eine oder mehrere Mutationen oder Deletionen aufweist, wobei die Deletion bevorzugt eine solche ist, die ausgewählt ist aus der Gruppe, die Deletionen des Bereichs CR3 und Deletionen des N-Terminus und Deletionen des C-Terminus umfasst. Dabei ist vorgesehen, dass das E1A-Onkogenprotein an Rb binden kann. In one embodiment of the two uses according to the invention it is provided that the oncogene protein versus the wild-type oncogene protein E1A one or more Has mutations or deletions, wherein the deletion is preferably one that is selected is from the group consisting of the deletions of the region CR3 and deletions of the N-terminus and C-terminus deletions included. It is envisaged that the E1A oncogene protein Rb can bind.

In einer weiteren Ausführungsform der beiden erfindungsgemäßen Verwendungen ist vorgesehen, dass das Onkogenprotein gegenüber dem Wildtyp-Onkogenprotein eine oder mehrere Mutationen oder Deletionen aufweist, wobei die Deletion bevorzugt eine solche in der CR1- Region und/oder der CR2-Region ist. Dabei ist vorgesehen, dass das Onkogenprotein E1A nicht an Rb zu binden in der Lage ist. In a further embodiment of the two uses according to the invention provided that the oncogene protein versus the wild-type oncogene protein one or more Has mutations or deletions, the deletion preferably being one in the CR1- Region and / or the CR2 region. It is envisaged that the oncogene protein E1A unable to bind to Rb.

In einer Ausführungsform der beiden erfindungsgemäßen Verwendungen ist vorgesehen, dass das virale Onkogenprotein, insbesondere E1A, unter der Kontrolle eines Gewebes- und/oder Tumor-spezifischen Promotors steht. In one embodiment of the two uses according to the invention it is provided that the viral oncogene protein, in particular E1A, under the control of a tissue and / or Tumor-specific promoter stands.

In einer weiteren Ausführungsform der beiden erfindungsgemäßen Verwendungen ist vorgesehen, dass der Adenovirus für YB-1 codiert. In a further embodiment of the two uses according to the invention provided that the adenovirus encodes YB-1.

In einer noch weiteren Ausführungsform der beiden erfindungsgemäßen Verwendungen ist vorgesehen, dass YB-1 unter der Kontrolle eines Gewebe- und/oder Tumor-spezifischen Promotors steht. In yet another embodiment of the two uses according to the invention provided that YB-1 be under the control of a tissue and / or tumor specific Promoter stands.

In einer bevorzugten Ausführungsform der beiden erfindungsgemäßen Verwendungen ist vorgesehen, dass der Adenovirus für mindestens ein Protein codiert, das ausgewählt ist aus der Gruppe, die E4orf6, E4orf3, E1B55k und adenovirales E3ADP-Protein umfasst. In a preferred embodiment of the two uses according to the invention provided that the adenovirus encodes at least one protein selected from the group comprising E4orf6, E4orf3, E1B55k and adenoviral E3ADP protein.

In einer alternativen Ausführungsform der beiden erfindungsgemäßen Verwendungen ist vorgesehen, dass die Zellen YB-1 im Kern aufweisen, insbesondere die den Tumor oder einen Teil davon ausbildenden Zellen YB-1 im Kern aufweisen. In an alternative embodiment of the two uses according to the invention provided that the cells have YB-1 in the nucleus, in particular the tumor or one Have part of it forming cells YB-1 in the nucleus.

In einer weiteren Ausführungsform der beiden erfindungsgemäßen Verwendungen ist vorgesehen, dass der Tumor YB-1 im Kern nach Induktion des Tranports von YB-1 in den Kern enthält. In a further embodiment of the two uses according to the invention provided that the tumor YB-1 in the nucleus after induction of the transport of YB-1 in the nucleus contains.

In einer bevorzugten Ausführungsform der beiden erfindungsgemäßen Verwendungen ist vorgesehen, dass der Transport von YB-1 in den Kern ausgelöst wird durch zumindest eine Maßnahme, die ausgewählt ist aus der Gruppe, die Bestrahlung, Gabe von Zytostatika und Hyperthermie umfasst. In a preferred embodiment of the two uses according to the invention provided that the transport of YB-1 into the core is triggered by at least one Measure that is selected from the group consisting of radiation, cytostatics and Includes hyperthermia.

In einer besonders bevorzugten Ausführungsform der beiden erfindungsgemäßen Verwendungen ist vorgesehen, dass die Maßnahme an einer Zelle, einem Organ oder einem Organismus angewandt wird. In a particularly preferred embodiment of the two according to the invention It is intended that the measure be taken on a cell, an organ or a Organism is applied.

In einer bevorzugten Ausführungsform der beiden erfindungsgemäßen Verwendungen ist vorgesehen, dass der Adenovirus ausgewählt ist aus der Gruppe, die AdΔ24, dl922-947, E1Ad/01/07, dl1119/1131, CB 016, dl520, und Viren, denen ein exprimiertes virales Onkogen fehlt, das zur Bindung eines funktionellen Rb-Tumorsuppressor-Genprodukts fähig ist, umfasst. In a preferred embodiment of the two uses according to the invention provided that the adenovirus is selected from the group consisting of AdΔ24, dl922-947, E1Ad / 01/07, dl1119 / 1131, CB 016, dl520, and viruses that have an expressed viral oncogene lacking that is capable of binding a functional Rb tumor suppressor gene product, includes.

In einem dritten Aspekt wird die Aufgabe gelöst durch die Verwendung eines Adenovirus zur Herstellung eines Medikaments, wobei der Adenovirus so ausgebildet ist, dass die Replikation durch YB-1 über die Aktivierung des E2-Late-Promotors gesteuert wird, bevorzugterweise überwiegend über die Aktivierung des E2-Late-Promotors gesteuert wird. In a third aspect, the task is solved by using an adenovirus Manufacture of a medicament, the adenovirus being designed so that the Replication is controlled by YB-1 via the activation of the E2 late promoter, preferably is mainly controlled via the activation of the E2 late promoter.

In einem vierten Aspekt wird die Aufgabe gelöst durch die Verwendung eines Adenovirus zur Replikation in Zellen, die YB-1 im Kern aufweisen, wobei der Adenovirus so ausgebildet ist, dass die Replikation durch YB-1 über die Aktivierung des E2-Late-Promotors gesteuert wird, bevorzugterweise überwiegend über die Aktivierung des E2-Late-Promotors gesteuert wird. In a fourth aspect, the task is solved by using an adenovirus Replication in cells that have YB-1 in the nucleus, the adenovirus being designed to that the replication by YB-1 is controlled by the activation of the E2 late promoter, is preferably controlled predominantly via the activation of the E2 late promoter.

In einer bevorzugten Ausführungsform des dritten und/oder vierten Aspekts der vorliegenden Erfindung ist der Adenovirus so ausgebildet wie hierin offenbart, insbesondere so, wie er ausgestaltet ist, um erfindungsgemäß verwendet zu werden. In a preferred embodiment of the third and / or fourth aspect of the present Invention, the adenovirus is designed as disclosed herein, particularly as it is is designed to be used according to the invention.

In einem fünften Aspekt wird die Aufgabe gelöst durch ein virales Onkogenprotein, insbesondere ein isoliertes virales Onkogenprotein, wobei dieses die folgenden Eigenschaften aufweist:

a) Transaktivierung mindestens eines viralen Gens, das ausgewählt ist aus der Gruppe, die E1B-55k, E3ADP und E4orf6 und E4orf3 umfasst; und
b) keine Induktion von YB-1 in einem Zellkern, insbesondere in dem Zellkern der Zelle, in der das virale Onkoprotein vorhanden ist.

In a fifth aspect, the object is achieved by a viral oncogene protein, in particular an isolated viral oncogene protein, which has the following properties:

a) transactivation of at least one viral gene which is selected from the group comprising E1B-55k, E3ADP and E4orf6 and E4orf3; and
b) no induction of YB-1 in a cell nucleus, in particular in the cell nucleus of the cell in which the viral oncoprotein is present.

In einer Ausführungsform ist vorgesehen, dass das virale Onkoprotein E1A ist. In one embodiment it is provided that the viral oncoprotein is E1A.

In einer weiteren Ausführungsform ist vorgesehen, dass das virale Onkogenprotein gegenüber dem Wildtyp-Onkogenprotein eine oder mehrere Deletionen aufweist, wobei die Deletion bevorzugt eine solche ist, die ausgewählt ist aus der Gruppe, die Deletion des Bereichs CR3, Deletion des N-Terminus und Deletion des C-Terminus umfasst. In a further embodiment it is provided that the viral oncogene protein is compared the wild-type oncogene protein has one or more deletions, the deletion is preferably one which is selected from the group, the deletion of the region CR3, Deletion of the N-terminus and deletion of the C-terminus includes.

Dabei ist vorgesehen, dass das virale Onkogenprodukt an Rb zu binden in der Lage ist. It is envisaged that the viral oncogene product will be able to bind to Rb.

In einer alternativen Ausführungsform ist vorgesehen, dass das virale Onkogenprotein eine oder mehrer Mutationen oder Deletionen aufweist, wobei die Deletion bevorzugt eine solche in der CR1-Region und/oder der CR2-Region des E1A-Onkogenproteins ist. Dabei ist vorgesehen, dass das virale Onkogenprotein nicht in der Lage ist an Rb zu binden. In an alternative embodiment it is provided that the viral oncogene protein is a or more mutations or deletions, the deletion preferably one in the CR1 region and / or the CR2 region of the E1A oncogene protein. It is provided that the viral oncogene protein is unable to bind to Rb.

In einem sechsten Aspekt betrifft die Erfindung die Verwendung eines adenoviralen Replikationssystems umfassend eine Nukleinsäure, die für einen Adenovirus, wie er erfindungsgemäß verwendet wird, codiert, und umfassend eine Nukleinsäure eines Helfervirus, wobei die Nukleinsäure des Helfervirus eine Nukleinsäuresequenz umfasst, die für YB-1 codiert. In a sixth aspect, the invention relates to the use of an adenoviral Replication system comprising a nucleic acid necessary for an adenovirus as he invention is used, encoded, and comprising a nucleic acid of a helper virus, wherein the Helper virus nucleic acid comprises a nucleic acid sequence encoding YB-1.

In einer Ausführungsform ist vorgesehen, dass die adenovirale Nukleinsäure und/oder die Nukleinsäure des Helfervirus als replizierbarer Vektor vorliegt. In one embodiment it is provided that the adenoviral nucleic acid and / or the Nucleic acid of the helper virus is present as a replicable vector.

In einem siebten Aspekt betrifft die Erfindung die Verwendung einer Nukleinsäure codierend für einen Adenovirus, wie er erfindungsgemäß verwendet wird, zur Herstellung eines Medikamentes, insbesondere zur Herstellung eines Medikamentes für die Behandlung von Tumoren. In a seventh aspect, the invention relates to the use of a nucleic acid coding for an adenovirus, as used according to the invention, for the production of a Medicament, in particular for the manufacture of a medicament for the treatment of Tumors.

In einer Ausführungsform ist vorgesehen, dass die Zellen, insbesondere die den Tumor oder Teile davon ausbildenden Zellen, eine Mehrfachresistenz gegen pharmakologische Wirkstoffe, bevorzugterweise Antitumormittel, und bevorzugtererweise Zytostatika, aufweisen. In one embodiment it is provided that the cells, in particular the tumor or Parts of which form cells, a multiple resistance to pharmacological Active substances, preferably antitumor agents, and preferably cytostatics.

In einem achten Aspekt betrifft die Erfindung die Verwendung einer Nukleinsäure, die für einen Adenvirus, wie er erfindungsgemäß verwendet wird, codiert, zur Replikation in Zellen, die YB-1 im Kern aufweisen, wobei der Adenovirus replikationsdefizient ist in Zellen, die YB-1 nicht im Kern aufweisen, und der Adenovirus für ein Onkogen oder Onkogenprodukt codiert, das zumindest ein virales Gen, bevorzugterweise ein adenovirales Gen transaktiviert, wobei das Gen ausgewählt ist aus der Gruppe, die E1B55kDa, E4orf6, E4orf3 und E3ADP umfasst. In an eighth aspect, the invention relates to the use of a nucleic acid which is suitable for encodes an adenovirus as used according to the invention for replication in cells, which have YB-1 in the nucleus, the adenovirus being replication deficient in cells which YB-1 does not have in the core, and the adenovirus for an oncogene or oncogene product encodes that transactivates at least one viral gene, preferably an adenoviral gene, the gene being selected from the group consisting of E1B55kDa, E4orf6, E4orf3 and E3ADP includes.

In einem neunten Aspekt wird die Aufgabe gelöst durch die Verwendung einer Nukleinsäure, die für einen Adenovirus, wie er erfindungsgemäß verwendet wird, codiert zur Herstellung eines Medikamentes, wobei der Adenovirus so ausgebildet ist, dass die Replikation durch YB-1 über die Aktivierung des E2-Late-Promotors gesteuert wird, bevorzugterweise überwiegend über die Aktivierung des E2-Late-Promotors. In a ninth aspect, the object is achieved by using a nucleic acid, which codes for an adenovirus as used according to the invention for the production of a drug, wherein the adenovirus is designed so that the replication by YB-1 is controlled via the activation of the E2 late promoter, preferably predominantly via the activation of the E2 late promoter.

In einem zehnten Aspekt wird die Aufgabe gelöst durch die Verwendung einer Nukleinsäure, die für einen Adenovirus, wie er erfindungsgemäß verwendet wird, codiert, zur Replikation in Zellen, wobei der Adenovirus so ausgebildet ist, dass die Replikation durch YB-1 über die Aktivierung des E2-Late-Promotors gesteuert wird, bevorzugterweise überwiegend über die Aktivierung des E2-Late-Promotors gesteuert wird. In a tenth aspect, the object is achieved by using a nucleic acid, which codes for an adenovirus, as used according to the invention, for replication in Cells, the adenovirus being designed so that the replication by YB-1 over the Activation of the E2 late promoter is controlled, preferably predominantly via the Activation of the E2 late promoter is controlled.

In einem elften Aspekt wird die Aufgabe gelöst durch die Verwendung eines Vektors umfassend eine der vorstehend beschriebenen Nukleinsäure, zur Verwendung gemäß dem ersten oder zweiten Aspekt der vorliegenden Erfindung. In an eleventh aspect, the object is achieved by using a vector comprising one of the nucleic acids described above, for use according to the first or second aspect of the present invention.

In einem zwölften Aspekt betrifft die Erfindung die Verwendung eines mit YB-1 wechselwirkenden Mittels zur Charakterisierung von Zellen, Zellen eines Tumorgewebes oder Patienten, um zu bestimmen, ob diese(r) mit einem Adenovirus, wie er erfindungsgemäß verwendet wird, kontaktiert werden sollen. In a twelfth aspect, the invention relates to the use of a YB-1 interacting agent for the characterization of cells, cells of a tumor tissue or patient, to determine if this is with an adenovirus as used in the present invention will be contacted.

In einer Ausführungsform ist dabei vorgesehen, dass das Mittel ausgewählt ist aus der Gruppe, die Antikörper, Antikaline, Aptamere, Aptazyme und Spiegelmere umfasst. In one embodiment it is provided that the agent is selected from the Group that includes antibodies, anticalins, aptamers, aptazymes and Spiegelmers.

In einem dreizehnten Aspekt wird die Aufgabe gelöst durch die Verwendung des erfindungsgemäßen viralen Onkogenproteins oder einer dafür codierenden Nukleinsäure zur Herstellung eines Adenovirus, wie er im Rahmen der Verwendungen gemäß dem ersten und zweiten Aspekt der vorliegenden Erfindung verwendet wird. In a thirteenth aspect, the object is achieved by using the Viral oncogene protein according to the invention or a nucleic acid coding therefor for the production an adenovirus as used in the first and second Aspect of the present invention is used.

Der vorliegenden Erfindung liegt die überraschende Erkenntnis zugrunde, dass die DNA- Replikation von E1A-modifizierten Adenoviren in YB-1 Kern-positiven Tumorzellen auf die Aktivierung des E2-late Promotors zurück zu führen ist. Unter modifizierten Adenoviren sind dabei solche Adenoviren zu verstehen, die (a) keine Replikation in YB-1-Kern-negativen Zellen zeigen, (b) transaktivierend auf mindestens ein virales Gen wirken, wobei das Gen ausgewählt ist aus der Gruppe, die E1B-55kDa, E4orf6, E4orf3 und E3ADP umfasst, und (c) zelluläres YB-1 durch den Adenovirus nicht in den Kern transloziert. Optional weisen die erfindungsgemäß verwendeten Adenoviren die weitere Eigenschaft auf, dass nämlich die Bindung des von dem Adenovirus kodierten E1A-Proteins die Bindung von E2F an RB stört bzw. den entsprechenden Komplex aus E2F und Rb aufzulösen in der Lage ist. The present invention is based on the surprising finding that the DNA Replication of E1A-modified adenoviruses in YB-1 nuclear positive tumor cells to the Activation of the E2-late promoter is to be attributed. Among modified adenoviruses are thereby understand such adenoviruses that (a) have no replication in YB-1 core negative Cells show (b) have a transactivating effect on at least one viral gene, the gene is selected from the group consisting of E1B-55kDa, E4orf6, E4orf3 and E3ADP, and (c) cellular YB-1 is not translocated into the nucleus by the adenovirus. Optionally, the Adenoviruses used according to the invention have the further property that namely binding of the E1A protein encoded by the adenovirus interferes with the binding of E2F to RB is able to resolve the corresponding complex of E2F and Rb.

Unter zellulärem YB-1 soll hierin ein jedes YB-1 verstanden werden, welches von einer Zelle codiert und bevorzugterweise auch exprimiert wird, wobei dieses YB-1 in der Zelle insbesondere vor der Infektion der betreffenden Zelle mit einem Adenovirus, bevorzugterweise einem Adenovirus, und/oder einem Helfervirus, wie hierin beschrieben, vorhanden ist. Cellular YB-1 is to be understood here to mean any YB-1 which is derived from a cell is encoded and preferably also expressed, this YB-1 in the cell especially before infection of the cell in question with an adenovirus, preferably one Adenovirus, and / or a helper virus, as described herein.

Ohne im folgenden darauf festgelegt sein zu wollen, geht der vorliegende Erfinder davon aus, dass der E2-early Promotor, d. h. der frühe E2-Promotor, dabei nicht über den humanen zellulären E2F-Transkriptionsfaktor eingeschaltet wird. Das Einschalten der Replikation ist dabei unabhängig vom Rb-Status der Zellen, d. h. dass die Tumorzellen sowohl funktionelle wie auch inaktive Rb-Proteine besitzen können. Zudem benötigt die adenovirale Replikation in diesem System kein funktionelles p53 Protein, werden jedoch auch durch dessen Vorhandensein nicht nachteilig beeinflusst. Insoweit wendet sich die technische Lehre von dem mit der Anwendung der onkolytischen oder tumorlytischen Adenoviren vom Typ AdΔ24, dl922-947, E1Ad/01/07, CB016 oder jener Adenoviren, wie sie beispielsweise im europäischen Patent EP 0 931 830 beschrieben sind, verfolgten Prinzip ab, bei denen eine und/oder mehrere Deletion(en) im E1A-Protein vorgenommen worden war(en) unter der Annahme, dass intakte funktionelle Rb-Proteine einer effizienten Replikation in vivo entgegenwirken und somit eine adenovirale Replikation in vivo nur in Rb-negativen bzw. Rb-mutierten Zellen sicher zu stellen. Diese adenoviralen Systeme nach dem Stand der Technik gehen auf E1A zurück, um mittels des frühen E2-Promotors (E2-early Promotor) und E2F die in vivo Replikation von Adenoviren zu steuern. Gleichwohl können diese im Stand der Technik bekannten Viren erfindungsgemäß verwendet werden, d. h. zur Replikation in Zellen, die YB-1 unabhängig vom Zellzyklus im Kern enthalten. Without wishing to be bound to it below, the present inventor assumes that the E2 early promoter, i.e. H. the early E2 promoter, but not the human one cellular E2F transcription factor is turned on. Switching on replication is included regardless of the Rb status of the cells, i. H. that the tumor cells are both functional and can also have inactive Rb proteins. In addition, adenoviral replication requires in this system is not a functional p53 protein, but is also caused by it Presence not adversely affected. In this respect, the technical teaching turns from that with the Use of the oncolytic or tumorlytic adenoviruses of the type AdΔ24, dl922-947, E1Ad / 01/07, CB016 or those adenoviruses such as those found in European patent EP 0 931 830 are pursued principle, in which one and / or more Deletion (s) in the E1A protein had been made assuming that they were intact functional Rb proteins counteract an efficient replication in vivo and thus a To ensure adenoviral replication in vivo only in Rb-negative or Rb-mutated cells. These adenoviral systems according to the prior art go back to E1A in order to of the early E2 promoter (E2 early promoter) and E2F the in vivo replication of To control adenoviruses. Nevertheless, these viruses known in the prior art can are used according to the invention, d. H. for replication in cells that are independent of the YB-1 Cell cycle contained in the nucleus.

Die in dem besagten europäischen Patent EP 0 931 830 beschriebenen Viren und insbesondere Adenoviren können dabei erfindungsgemäß verwendet werden. Konkret handelt es sich bei den in besagtem Patent beschriebenen Viren um solche, die eine Replikaktionsdefizienz aufweisen und denen ein exprimiertes virales Onkoprotein fehlt, das zur Bindung eines funktionellen Rb-Tumorsuppressor-Genprodukts fähig ist. Der Adenovirus kann dabei insbesondere ein solcher sein, dem exprimiertes virales E1A-Onkoprotein fehlt, das zur Bindung eines funktionellen Tumorsuppressor-Genprodukt, insbesondere Rb, fähig ist. Das virale E1A- Onkoprotein kann dabei eine inaktivierende Mutation aufweisen, beispielsweise in der CR1- Domäne an den Aminosäuren 30 bis 85 in Ad 5, den Nukleotidpositionen 697-790, und/oder der CR2-Domäne an den Aminosäuren 120 bis 139 in Ad 5, den Nukleotidpositionen 920 bis 967, welche an der Bindung von p105 Rb Protein und p107 Protein beteiligt sind. Dabei kann auch vorgesehen sein, dass der Adenovirus vom Typ 2 dl312 oder Adenovirus vom Typ 5 NT dl1010 ist. The viruses described in said European patent EP 0 931 830 and in particular adenoviruses can be used according to the invention. Specifically, the viruses described in said patent are those which have replication deficiency and which lack an expressed viral oncoprotein capable of binding a functional Rb tumor suppressor gene product. The adenovirus can in particular be one which lacks expressed viral E1A oncoprotein which is capable of binding a functional tumor suppressor gene product, in particular Rb. The viral E1A oncoprotein can have an inactivating mutation, for example in the CR1 domain at amino acids 30 to 85 in Ad 5 , nucleotide positions 697-790 , and / or the CR2 domain at amino acids 120 to 139 in Ad 5 , nucleotide positions 920 to 967 , which are involved in the binding of p105 Rb protein and p107 protein. It can also be provided that the adenovirus is type 2 dl312 or adenovirus type 5 NT dl1010.

Bei der erfindungsgemäßen Verwendung von Adenoviren zur Herstellung eines Medikamentes, insbesondere zur Herstellung eines Medikamentes für die Behandlung von Tumorerkrankungen, und bei der erfindungsgemäßen Verwendung von Adenoviren zur Replikation in Zellen, die YB-1 im Kern aufweisen, erfolgt die Replikation letzten Endes in solchen Zellen, die YB-1 im Kern, bevorzugterweise unabhängig vom Zellzyklus, aufweisen, mithin YB-1-Kern- positiv sind. Dabei ist besonders beachtlich, dass die Adenoviren als solche in Zellen, die YB- 1 nicht im Kern, sondern im Wesentlichen nur im Zytoplasma enthalten, nicht replizieren. Insoweit ist es erforderlich, dass für eine erfolgreiche Replikation dieser Viren YB-1 im Kern vorhanden ist. Dies kann beispielsweise, wie auch im Folgenden noch ausgeführt werden wird, durch Anlegen solcher Bedingungen an die Zellen realisiert werden, dass es zur Expression oder dem Vorhandensein von YB-1 im Kern kommt. Eine entsprechende Maßnahmen kann z. B. die Codierung bzw. Exprimierung von YB-1 durch die erfindungsgemäß verwendeten Adenoviren sein, die in Ergänzung zu den adenoviralen Genen auch eine genetische Information in sich tragen, die für YB-1 und insbesondere dessen Expression codiert. Andere Maßnahmen, die zum Transport, zur Induktion oder Expression von YB-1 im Kern der Zelle führen, sind das Anlegen von Stressbedingungen wie beispielsweise die Applikation von Zytostatika, Bestrahlung, Hyperthermie und dergleichen. When using adenoviruses according to the invention for the production of a medicament, in particular for producing a medicament for the treatment of tumor diseases, and when using adenoviruses according to the invention for replication in cells which have YB-1 in the nucleus, the replication ultimately takes place in such cells which have YB-1 in the nucleus, preferably independently of the cell cycle, and are therefore YB-1 nucleus positive. It is particularly noteworthy that the adenoviruses as such do not replicate in cells that do not contain YB- 1 in the nucleus but essentially only in the cytoplasm. In this respect it is necessary that YB-1 is present in the core for a successful replication of these viruses. This can be achieved, for example, as will also be explained below, by applying conditions to the cells such that there is expression or the presence of YB-1 in the nucleus. Appropriate measures can e.g. B. the coding or expression of YB-1 by the adenoviruses used according to the invention, which in addition to the adenoviral genes also carry genetic information which codes for YB-1 and in particular its expression. Other measures that lead to the transport, induction or expression of YB-1 in the nucleus of the cell are the application of stress conditions such as the application of cytostatics, radiation, hyperthermia and the like.

Die im Rahmen der vorliegenden Erfindung, insbesondere zur Tumorlyse verwendeten Adenoviren zeichnen sich weiterhin dadurch aus, dass sie in solchen Zellen, die YB-1 im Kern nicht aufweisen, mithin YB-1-Kern-negativ sind, nicht replizieren. Those used in the context of the present invention, in particular for tumor lysis Adenoviruses are further characterized by the fact that they contain the YB-1 in the nucleus in such cells do not have, hence YB-1 core negative, do not replicate.

Ein weiteres Merkmal der erfindungsgemäß zu verwendenden Adenoviren besteht darin, dass sie für ein virales Onkoprotein, das hierin auch also Onkogenprotein bezeichnet wird, codieren, wobei es sich bei dem Onkogenprotein bevorzugter Weise um E1A handelt, welches in der Lage ist, zumindest ein virales Gen zu aktivieren, welches einen Einfluss auf die Replikation des Virus und/oder die Zellyse der von dem Virus infizierten Zelle haben kann. Dabei ist bevorzugt, dass der Einfluss auf die Replikation dergestalt ist, dass die Replikationseffizienz des Virus erhöht wird. Dieser Vorgang wird hierin auch als E1A-transaktivierend bezeichnet. Die Bezeichnung "transaktivieren" oder "Transaktivierung" beschreibt dabei den Vorgang, dass das in Frage stehende virale Onkoprotein auf die Expression und/oder auf die Transkription eines anderen oder mehrerer anderer Gene als das für das virale Onkoprotein selbst codierende Gen Einfluss nimmt, d. h. bevorzugterweise dessen Expression und/oder Translation steuert, und diese(s) insbesondere aktiviert. Derartige virale Gene sind bevorzugter Weise E1B55kDa, E4orf6, E4orf3 und E3ADP sowie beliebige Kombinationen der vorstehend genannten Gene bzw. Genprodukte. Another feature of the adenoviruses to be used according to the invention is that they for a viral oncoprotein, which is also referred to herein as oncogene protein, encode, wherein the oncogene protein is preferably E1A, which in is able to activate at least one viral gene which has an influence on the Replication of the virus and / or cell lysis of the cell infected by the virus may have. It is preferred that the influence on replication is such that the replication efficiency of the virus is increased. This process is also referred to herein as E1A transactivating. The term "transactivate" or "transactivation" describes the process that the viral oncoprotein in question is related to expression and / or to the Transcription of one or more genes other than that for the viral oncoprotein itself coding gene influences, d. H. preferably its expression and / or translation controls, and this (s) activated in particular. Such viral genes are preferred E1B55kDa, E4orf6, E4orf3 and E3ADP and any combination of the above mentioned genes or gene products.

Ein weiteres, wenngleich bevorzugterweise optionales, Merkmal der erfindungsgemäß zu verwendenden Adenoviren ist deren Bindungsverhalten zu bzw. mit dem Tumor-Suppressor Rb. Es ist grundsätzlich im Rahmen der vorliegenden Erfindung, dass die erfindungsgemäß verwendeten Adenoviren an Rb binden oder nicht binden können. Die Verwendung der beiden alternativen Ausgestaltungsformen der Adenoviren ist dabei unabhängig vom Rb-Status der behandelnden Zelle möglich. Another, albeit preferably optional, feature of the invention adenoviruses is their binding behavior to or with the tumor suppressor Rb. It is fundamentally within the scope of the present invention that the invention can bind or not bind used adenoviruses to Rb. The use of the Both alternative forms of adenoviruses are independent of the Rb status the treating cell possible.

Um Rb die Fähigkeit zu verleihen, nicht an Rb binden zu können, sind beispielsweise folgende Deletionen am E1A-Onkoprotein möglich: Deletion in der CR1-Region (Aminosäurepositionen 30-85 in Ad5) und Deletion der CR2-Region (Aminosäurepositionen 120-139 in Ad5). Dabei bleibt die CR3-Region erhalten und kann ihre transaktivierende Funktion auf die anderen frühen viralen Gene ausüben. To give Rb the ability to not bind to Rb, the following deletions on the E1A oncoprotein are possible: deletion in the CR1 region (amino acid positions 30-85 in Ad5) and deletion of the CR2 region (amino acid positions 120-139 in Ad5). The CR3 region is preserved and can exert its transactivating function on the other early viral genes.

Um Rb die Fähigkeit zu verleihen, an Rb binden zu können, sind dagegen folgende Deletionen am E1A-Onkoprotein grundsätzlich möglich: Deletion der CR3-Region (Aminosäurepositionen 140-185); Deletion des N-Terminus (Aminosäurepositionen 1-29); Deletion der Aminosäurepositionen 85-119; und Deletion des C-Terminus (Aminosäurepositionen 186-289). Die hier aufgeführten Bereiche interferieren nicht mit der Bindung von E2F an Rb. Die transaktivierende Funktion bleibt erhalten, ist jedoch gegenüber vom Wildtyp-Ad5 verringert. In order to give Rb the ability to bind to Rb, however, the following deletions on the E1A oncoprotein are possible in principle: Deletion of the CR3 region (amino acid positions 140-185 ); Deletion of the N-terminus (amino acid positions 1-29 ); Deletion of amino acid positions 85-119 ; and deletion of the C-terminus (amino acid positions 186-289 ). The areas listed here do not interfere with the binding of E2F to Rb. The transactivating function is retained, but is reduced compared to the wild-type Ad5.

Derartige im Stand der Technik grundsätzlich bereits bekannte Viren gelten allgemein als replikationsdefizient. Es ist jedoch das Verdienst des vorliegenden Erfindes, erkannt zu haben, dass sie dennoch zur Replikation in einem geeigneten Hintergrund, insbesondere einem zellulären Hintergrund geeignet sind. Ein derartiger geeigneter zellulärer Hintergrund wird durch das Vorhandensein von YB-1 im Kern, bevorzugterweise eine Zellzyklus unabhängige Anwesenheit von YB-1 im Kern, bedingt oder bereitgestellt. Der Begriff der Zellen oder zellulären Systeme, wie hierin verwendet, umfasst dabei Fragmente oder Fraktionen von Zellaufschlüssen ebenso wie Zellen, die in vitro, in vivo oder in situ vorliegen. Insoweit umfasst der Begriff zelluläre Systeme oder Zellen auch solche Zellen, die in einer Zellkultur, Gewebekultur, Organkultur oder in einem Gewebe oder Organ in vivo bzw. in situ, isoliert, in Gruppen oder als Teil von Geweben, Organen oder Organismen oder aber auch als solches in einem bevorzugterweise lebenden Organismus vorliegen. Bei dem Organismus handelt es sich bevorzugter Weise um einen Wirbeltier-Organismus und bevorzugterer Weise um ein Säugetier. Besonders bevorzugterweise ist der Organismus dabei ein menschlicher Organismus. Such viruses, which are basically known in the prior art, are generally considered to be replication deficient. However, it is to the merit of the present invention to be recognized have replication in a suitable background, especially one cellular background are suitable. Such a suitable cellular background will by the presence of YB-1 in the nucleus, preferably a cell cycle independent Presence of YB-1 in the core, conditional or provided. The concept of cells or cellular systems as used herein include fragments or fractions of Cell disruption as well as cells that are in vitro, in vivo or in situ. To that extent the term cellular systems or cells also those cells that are in a cell culture, Tissue culture, organ culture or in a tissue or organ in vivo or in situ, isolated, in Groups or as part of tissues, organs or organisms or as such in in a preferably living organism. The organism is concerned is preferably a vertebrate organism and more preferably a Mammal. The organism is particularly preferably a human Organism.

Darüber hinaus ist es im Rahmen der vorliegenden Erfindung, dass auf der Grundlage der hierin gegebenen technischen Lehre neue Viren erzeugt werden, die das Replikationsverhalten der hierin beschriebenen und im Stand der Technik bekannten Adenoviren in solchen Zellen zeigen, die YB-1-Kern-positiv sind. Mit anderen Worten, insbesondere bevorzugterweise ausgehend von den bereits bekannten Adenoviren können weitere Viren konzipiert werden, die die hierin definierten, für die erfindungsgemäße Verwendung erforderlichen Merkmale aufweisen. Furthermore, it is within the scope of the present invention that on the basis of the technical teaching given herein, new viruses are generated that affect the replication behavior the adenoviruses in such cells described herein and known in the art show the YB-1 core positive. In other words, particularly preferably further viruses can be designed based on the already known adenoviruses, the features defined herein required for use in the invention exhibit.

Im Zusammenhang mit der vorliegenden Erfindung ist das modifizierte E1A-Onkoprotein der verschiedenen, erfindungsgemäß zu verwendenden Adenoviren in der Lage transaktivierend auf die frühen virale Gene (wie beispielsweise E1B55k, E4orf3, E4orf6, E3ADP) zu wirken. Dabei liegt sonst keine Veränderung im viralen Genom vor und entspricht somit dem Wildtyp-Adenovirus. In the context of the present invention, the modified E1A oncoprotein is the capable of transactivating various adenoviruses to be used according to the invention to act on the early viral genes (such as E1B55k, E4orf3, E4orf6, E3ADP). Otherwise there is no change in the viral genome and thus corresponds to that Wild-type adenovirus.

Bei weiteren, neu zu konstruierenden rekombinanten Adenoviren, die erfindungsgemäß verwendet werden können, liegt typischerweise eine E1-Deletion, eine E1/E3-Deletion und/oder eine E4-Deletion vor, d. h. die ensprechenden Adenoviren sind nicht in der Lage, funktional aktive E1- und/oder E3- und/oder E4-Expressionsprodukte bzw. entsprechende Produkte zu erzeugen. Es ist im Rahmen der vorliegenden Erfindung, dass das modifizierte E1A- Onkoprotein, E1B-55k, E4orf6 und/oder E3ADP (adenoviral death protein (ADP)) (Tollefson, A. et al., J. Virology, 70, 2296-2306, 1996.) in einem solchen Vektor einzeln oder in beliebiger Kombination zur Expression gebracht wird/werden. Dabei können die einzelnen genannten Gene unabhängig von einander entweder in der E1 und/oder E3 und/oder E4-Region mit Hilfe eines geeigneten Promoters zur Expression gebracht werden. Geeignete Promotoren sind u. a. jene, wie sie hierin im Zusammenhang mit der Steuerung bzw. Expression von E1A, insbesondere des modifizierten E1A, offenbart sind. In the case of further recombinant adenoviruses to be constructed which are according to the invention can typically be used is an E1 deletion, an E1 / E3 deletion and / or an E4 deletion, d. H. the corresponding adenoviruses are unable to function active E1 and / or E3 and / or E4 expression products or corresponding products produce. It is within the scope of the present invention that the modified E1A- Oncoprotein, E1B-55k, E4orf6 and / or E3ADP (adenoviral death protein (ADP)) (Tollefson, A. et al., J. Virology, 70, 2296-2306, 1996.) in such a vector individually or in any combination is brought to expression. The individual mentioned genes independently of one another either in the E1 and / or E3 and / or E4 region be expressed using a suitable promoter. Suitable promoters are u. a. those as used herein in connection with the control or expression of E1A, in particular the modified E1A.

Schließlich ist in einer Ausführungsform vorgesehen, dass die Adenoviren hinsichtlich E1B defizient, insbesondere hinsichtlich E1B 19kDa-defizient sind. Dabei wird hierin allgemein unter dem Begriff defizient ein Zustand verstanden, bei dem die E1B im Wildtyp inhärente Gesamtheit der Eigenschaften nicht aufweist und mindestens eine dieser Eigenschaften fehlen. Finally, in one embodiment it is provided that the adenoviruses with respect to E1B are deficient, especially with regard to E1B 19kDa. It will be general here the term deficient is understood to mean a state in which the E1B is inherent in the wild type Does not have all of the properties and at least one of these properties absence.

Die Adenoviren, wie sie gemäß der hierin offenbarten Erfindung verwendet werden, sind grundsätzlich im Stand der Technik zumindest in einigen Ausführungsformen bekannt. Bei den erfindungsgemäß verwendeten Adenoviren handelt es sich bevorzugter Weise um rekombinante Adenoviren, insbesondere auch dann, wenn eine Veränderung gegenüber dem Wildtyp vorgenommen wurde im Sinne der hierin gegebenen technischen Lehre. Es ist im Rahmen der Kenntnisse der Fachleute auf diesem Gebiet, für die Erfindung unwesentlichen adenoviralen Nukleinsäuresequenzen zu deletieren bzw. zu mutieren. Derartige Deletionen können z. B. die für einen Teil der E3 und E4 codierende Nukleinsäure betreffen. Bei einer Deletion von E4 ist dabei besonders bevorzugt, wenn sich diese nicht auf das Protein E4orf6 erstreckt, mithin der erfindungsgemäß zu verwendende Adenovirus E4orf6 codiert. In bevorzugten Ausführungsformen können diese adenoviralen Nukleinsäuren noch in das virale Kapsid verpackt werden und damit infektiöse Partikel ausbilden. Gleiches gilt für die erfindungsgemäße Verwendung der Nukleinsäuren. Generell gilt es auch noch festzuhalten, dass die adenoviralen Systeme hinsichtlich einzelner oder mehrerer Expressionsprodukte defizient sein können. Dabei ist zu berücksichtigen, dass dies zum einen darauf beruhen kann, dass die für das Expressionsprodukt codierende Nukleinsäure vollständig oder in dem Maße mutiert oder deletiert ist, dass im wesentlichen kein Expressionsprodukt mehr gebildet wird, oder darauf, dass regulative bzw. die Expression steuernde Elemente wie Promotoren oder Transkriptionsfaktoren fehlen, sei es auf der Ebene der Nukleinsäure (Fehlen eines Promotors; cis-wirkende Element) oder auf der Ebene des Translations- bzw. Transkriptionssystems (trans-wirkende Elemente). Gerade der letztere Aspekt kann dabei vom jeweiligen zellulären Hintergrund abhängen. The adenoviruses as used in accordance with the invention disclosed herein are basically known in the prior art at least in some embodiments. at The adenoviruses used according to the invention are preferably recombinant adenoviruses, especially when there is a change in the Wild type was carried out in the sense of the technical teaching given here. It is in the frame the knowledge of the experts in this field, insignificant for the invention to delete or mutate adenoviral nucleic acid sequences. Such deletions can e.g. B. which relate to nucleic acid coding for part of E3 and E4. With a deletion of E4 is particularly preferred if this does not extend to the E4orf6 protein, therefore encodes the adenovirus E4orf6 to be used according to the invention. In preferred Embodiments can still pack these adenoviral nucleic acids into the viral capsid and thus form infectious particles. The same applies to the invention Use of the nucleic acids. In general, it should also be noted that the adenoviral Systems can be deficient in terms of single or multiple expression products. It must be taken into account that this can be based on the one hand on the fact that for the Nucleic acid encoding expression product completely or mutated to the extent or is deleted that essentially no expression product is formed, or that regulative or expression-controlling elements such as promoters or Transcription factors are missing, be it at the nucleic acid level (lack of a promoter; cis-acting Element) or at the level of the translation or transcription system (trans-acting Elements). The latter aspect in particular can depend on the respective cellular background depend.

Die für YB-1 codierende Nukleinsäure, die in einer Ausführungsform der erfindungsgemäß zu verwendenden Adenoviren Bestandteil der Adenoviren sein kann, kann dabei eine einen Kerntransport von YB-1 vermittelnde Nukleinsäuresequenz umfassen. Als Adenoviren bzw. adenovirale Systeme und damit die entsprechenden Nukleinsäuren können im Zusammenhang damit und in Kombination mit diesen erfindungsgemäßen Nukleinsäuren die erfindungsgemäßen Nukleinsäuren, Adenoviren und adenoviralen Systeme sowie die im Stand der Technik bekannten Adenoviren wie beispielsweise Onyx-015, AdΔ24, dl922-947, E1Ad/01/07, CB016 und die im Patent EP 0931 830 beschriebenen Adenoviren verwendet werden. Geeignete, den Kerntransport vermittelnde Nukleinsäuresequenzen sind den Fachleuten auf dem Gebiet bekannt und beispielsweise beschrieben in (Whittaker, G. R. et al., Virology, 246, 1-23, 1998; Friedberg, E. C., TIBS 17, 347, 1992; Jans, D. A. et al., Bioessays 2000 Jun; 22(6): 532-44; Yoneda, Y., J. Biocehm. (Tokyo) 1997 May; 121(5): 811-7; Boulikas, T., Crit. Rev. Eukaryot. Gene Expr. 1993; 3(3): 193-227; Lyons RH, Mol. Cell Biol., 7, 2451-2456, 1987). Bei den Kerntransport vermittelnden Nukleinsäuresequenzen können verschiedene Prinzipien verwendet werden. Ein derartiges Prinzip besteht darin, dass, dass YB-1 als Fusionsprotein mit einem Signalpeptid ausgebildet wird und infolge des Signalpeptids YB-1 in den Zellkern geschleust wird und damit die erfindungsgemäße Replikation der Adenoviren erfolgt. The nucleic acid coding for YB-1, which in one embodiment of the adenoviruses to be used according to the invention can be part of the adenoviruses, can comprise a nucleic acid sequence mediating a core transport of YB-1. As adenoviruses or adenoviral systems and thus the corresponding nucleic acids, the nucleic acids, adenoviruses and adenoviral systems according to the invention and the adenoviruses known in the prior art such as, for example, Onyx-015, AdΔ24, dl922-947, E1Ad / 01/07, CB016 and the adenoviruses described in patent EP 0931 830 can be used. Suitable nucleic acid sequences mediating nuclear transport are known to those skilled in the art and are described, for example, in (Whittaker, GR et al., Virology, 246, 1-23, 1998; Friedberg, EC, TIBS 17 , 347 , 1992 ; Jans, DA et al., Bioessays 2000 Jun; 22 ( 6 ): 532-44; Yoneda, Y., J. Biocehm. (Tokyo) 1997 May; 121 ( 5 ): 811-7; Boulikas, T., Crit. Rev. Eukaryot Gene Expr. 1993; 3 ( 3 ): 193-227; Lyons RH, Mol. Cell Biol., 7, 2451-2456, 1987). Various principles can be used in nucleic acid sequences that mediate nuclear transport. One such principle is that YB-1 is formed as a fusion protein with a signal peptide and, as a result of the signal peptide YB-1, is introduced into the cell nucleus and the adenoviruses are replicated according to the invention.

Ein weiteres Prinzip, welches bei der Ausgestaltung der erfindungsgemäß verwendeten Adenoviren zur Anwendung gelangen kann, besteht darin, dass YB-1 mit einer Transportsequenz versehen wird, die dazu führt, dass YB-1, bevorzugter Weise ausgehend von einer Synthese im Cytoplasma, in den Zellkern geschleust oder transloziert wird und dort die virale Replikation befördert. Ein Beispiel für eine besonders wirksame, den Kerntransport vermittelnde Nukleinsäuresequenz stellt die TAT-Sequenz von HIV dar, die neben weiteren geeigneten derartigen Nukleinsäuresequenzen beispielsweise beschrieben ist in Efthymiadis, A., Briggs, LJ, Jans, DA., JBC 273, 1623-1628, 1998. Dabei ist es Rahmen der vorliegenden Erfindung, dass die erfindungsgemäß verwendeten Adenoviren die Nukleinsäuresequenzen umfassen, die für die den Kerntransport codierenden Peptide codieren. Another principle which can be used in the design of the adenoviruses used according to the invention is that YB-1 is provided with a transport sequence which leads to YB-1, preferably starting from a synthesis in the cytoplasm, in the Cell nucleus is smuggled or translocated and promotes viral replication there. An example of a particularly effective nucleic acid sequence mediating the nuclear transport is the TAT sequence of HIV, which is described, for example, in addition to other suitable nucleic acid sequences of this kind in Efthymiadis, A., Briggs, LJ, Jans, DA., JBC 273 , 1623-1628 , 1998 . It is within the scope of the present invention that the adenoviruses used according to the invention comprise the nucleic acid sequences which code for the peptides coding for the core transport.

Hinsichtlich der vorstehend genannten verschiedenen weiteren, von den Adenoviren codierten bzw. exprimierten Genen und Genprodukten ist es auch möglich, dass diese in beliebiger Kombination codiert bzw. exprimiert werden. With regard to the above various other, encoded by the adenoviruses or expressed genes and gene products, it is also possible that these in any Combination can be coded or expressed.

Im Rahmen der vorliegenden Erfindung sollen hierin die Begriffe Adenovirus und adenovirale Systeme als im wesentlichen die gleiche Bedeutung aufweisend verstanden werden. Unter Adenovirus soll dabei insbesondere das vollständige Viruspartikel verstanden werden umfassend das Kapsid und die Nukleinsäure. Der Begriff adenovirales System stellt insbesondere darauf ab, dass die Nukleinsäure gegenüber dem Wildtyp verändert ist. Bevorzugt umfassen derartige Änderungen solche im Aufbau des Genoms des Adenovirus wie sie durch Deletieren und/oder Hinzufügen und/oder Mutieren von Promotoren, regulativen Sequenzen und codierende Sequenzen (wie Leserahmen) entstehen. Der Begriff adenovirale Systeme wird darüber hinaus bevorzugt in dem Zusammenhang verwendet, dass es sich dabei um einen Vektor handelt, der beispielsweise in der Gentherapie verwendet werden kann. Within the scope of the present invention, the terms adenovirus and adenoviral systems are understood to have essentially the same meaning. Under Adenovirus is to be understood in particular as the complete virus particle comprising the capsid and the nucleic acid. The term adenoviral system represents in particular depends on the fact that the nucleic acid is changed compared to the wild type. Preferably include such changes are those in the construction of the genome of the adenovirus as deleted and / or adding and / or mutating promoters, regulatory sequences and coding sequences (such as reading frames) arise. The term adenoviral systems is about it also preferably used in the context that it is a vector acts, which can be used for example in gene therapy.

Die vorstehend gemachten Ausführungen, einschließlich jeglicher Verwendungen sowie die Ausbildungen der Adenoviren bzw. adenoviralen Systeme gelten im gleichen Maße für die dafür codierenden Nukleinsäuren und umgekehrt. The statements made above, including any uses, as well as the Training of the adenoviruses or adenoviral systems apply to the same extent nucleic acids coding therefor and vice versa.

Im Zusammenhang mit der vorliegenden Erfindung ist es möglich, dass die erfindungsgemäß verwendeten Adenoviren bzw. die für sie codierenden Nukleinsäuren eine jede entsprechende adenovirale Nukleinsäure ist, die zu einem Replikationsereignis für sich oder in Verbindung mit weiteren Nukleinsäuresequenzen führt. Dabei ist es möglich, wie hierin ausgeführt, dass mittels Helferviren die für die Replikation erforderlichen Sequenzen und/oder Genprodukte bereitgestellt werden. Sofern hierin auf codierende Nukleinsäuresequenzen Bezug genommen wird und es sich dabei um solche Nukleinsäuresequenzen handelt, die bekannt sind, ist es im Rahmen der Erfindung, dass nicht nur die identische Sequenz verwendet wird, sondern auch hiervon abgeleitete Sequenzen. Unter abgeleiteten Sequenzen sollen hierin insbesondere solche Sequenzen verstanden sein, die noch zu einem Genprodukt, sei es eine Nukleinsäure oder ein Polypeptid, führen, das eine Funktion aufweist, die einer oder der Funktion der nicht abgeleiteten Sequenz entspricht. Dies kann durch einfache Routmetests festgestellt werden. Ein Beispiel für derartige abgeleitete Nukleinsäuresequenzen sind jene Nukleinsäuresequenzen, die für das gleiche Genprodukt, insbesondere für die gleiche Aminosäuresequenz kodieren, jedoch infolge der Degeneriertheit des genetischen Codes eine andere Basenabfolge aufweisen. In connection with the present invention, it is possible that the invention used adenoviruses or the nucleic acids coding for them each corresponding is adenoviral nucleic acid that is related to or related to a replication event leads with further nucleic acid sequences. It is possible, as stated herein, that the sequences and / or gene products required for replication by means of helper viruses to be provided. If reference is made to coding nucleic acid sequences herein is and it is those nucleic acid sequences that are known, it is in Framework of the invention that not only the identical sequence is used, but also sequences derived therefrom. Inferred sequences are intended in particular here such sequences can be understood that still lead to a gene product, be it a nucleic acid or lead a polypeptide that has a function that one or the function of not derived sequence corresponds. This can be determined by simple routine tests. An example of such derived nucleic acid sequences are those Nucleic acid sequences that are for the same gene product, in particular for the same Encode amino acid sequence, but one due to the degeneracy of the genetic code have a different base sequence.

Hinsichtlich des erfindungsgemäßen adenoviralen Replikationssystems ist dabei in einer Ausführungsform vorgesehen, dass die adenovirale Nukleinsäure defizient oder modifiziert, wie hierin definiert, für die Expression des E1A-Proteins ist und das adenovirale Replikationssystem weiter eine Nukleinsäure eines Helfervirus umfasst, wobei die Nukleinsäure des Helfervirus eine Nukleinsäuresequenz umfasst, die für das Onkogenprotein, insbesondere das E1A-Protein codiert, welches die folgenden Eigenschaften aufweist bzw. dem Adenovirus die folgenden Eigenschaften verleiht, nämlich dass dieser nicht replizierend in YB-Kern- negativen Zellen aber sehr wohl in vom Zellzyklus unabhängig YB-1-Kern-positiven Zellen replizierend ist, transaktivierend auf mindestens ein virales Gen, insbesondere E1B55kDa, E4orf6, E4orf3 und E3ADP, wirkt, und zelluläres YB-1 nicht in den Kern transloziert. With regard to the adenoviral replication system according to the invention is in one Embodiment provided that the adenoviral nucleic acid deficient or modified, such as defined herein for expression of the E1A protein and the adenoviral Replication system further comprises a nucleic acid of a helper virus, the nucleic acid of the Helper virus comprises a nucleic acid sequence which is responsible for the oncogene protein, in particular that E1A protein encoded, which has the following properties or the adenovirus gives the following properties, namely that it is not replicating in YB core negative cells but very well in cell-positive YB-1 nucleus-positive cells is replicating, transactivating for at least one viral gene, in particular E1B55kDa, E4orf6, E4orf3 and E3ADP, works, and cellular YB-1 does not translocate into the nucleus.

Weiterhin ist bei einem derartigen erfindungsgemäßen adenoviralen Replikationssystem in einer Ausführungsform vorgesehen, dass die adenovirale Nukleinsäure und/oder die Nukleinsäure des Helfervirus als replizierbarer Vektor vorliegt. Furthermore, in such an adenoviral replication system according to the invention In one embodiment, the adenoviral nucleic acid and / or the Nucleic acid of the helper virus is present as a replicable vector.

Dabei ist es weiter im Rahmen der vorliegenden Erfindung, dass die für die Adenoviren, wie sie erfindungsgemäß verwendet werden, codierende Nukleinsäure(n) in einem Vektor, bevorzugter Weise in einem Expressionsvektor vorliegt/vorliegen und dieser Expressionsvektor erfindungsgemäß verwendet wird. It is further within the scope of the present invention that the for the adenoviruses, such as they are used according to the invention, coding nucleic acid (s) in a vector, is / are preferably present in an expression vector and this expression vector is used according to the invention.

In einem weiteren Aspekt betrifft die vorliegende Erfindung auch eine Vektorgruppe umfassend mindestens zwei Vektoren, wobei die Vektorgruppe insgesamt ein adenovirales Replikationssystem umfasst, wie hierin beschrieben und die Vektorgruppe erfindungsgemäß verwendet wird. Dabei kann vorgesehen sein, dass eine jede Komponente des adenoviralen Replikationssystems auf einem eigenen Vektor, bevorzugter Weise einem Expressionsvektor angeordnet ist. In a further aspect, the present invention also relates to a vector group comprising at least two vectors, the total vector group being an adenoviral Replication system includes, as described herein, and the vector group according to the invention is used. It can be provided that each component of the adenoviral Replication system on its own vector, preferably an expression vector is arranged.

Schließlich betrifft die vorliegende Erfindung in einem weiteren Aspekt auch die Verwendung einer Zelle, die eine oder mehrere der Nukleinsäuren, wie sie für die erfindungsgemäße Verwendung der hierin beschriebenen Adenoviren, die erfindungsgemäß verwendet werden sollen, codiert, und/oder ein entsprechendes adenovirales Replikationssystem und/oder einen entsprechenden Vektor und/oder eine erfindungsgemäße Vektorgruppe umfasst, zu denselben Zwecken, wie hierin für die Adenoviren beschrieben Finally, in another aspect, the present invention also relates to Use of a cell containing one or more of the nucleic acids as described for the invention Use of the adenoviruses described herein that are used in the present invention should, coded, and / or a corresponding adenoviral replication system and / or a corresponding vector and / or a vector group according to the invention comprises, to the same Purposes as described for the adenoviruses herein

Die vorstehend beschriebenen Konstrukte von Adenoviren und insbesondere deren Nukleinsäuren bzw. die dafür codierenden Nukleinsäuren können auch in eine Zelle, insbesondere eine Tumorzelle, in Teilen eingebracht werden, wobei dann infolge der Anwesenheit der verschiedenen Einzelkomponenten diese so zusammenwirken, als stammten die Einzelkomponenten von einer einzelnen Nukleinsäure. The adenovirus constructs described above, and particularly their Nucleic acids or the nucleic acids coding therefor can also be introduced into a cell, in particular a tumor cell, are introduced in parts, which is then due to the presence of the different individual components work together as if they came from Individual components of a single nucleic acid.

Die erfindungsgemäß verwendeten, für Adenoviren, adenovirale Systeme oder Teile davon codierenden Nukleinsäuren können als Vektoren vorliegen. Bevorzugter Weise handelt es sich um virale Vektoren. Im Falle der adenovirale Nukleinsäuren umfassenden Nukleinsäuren ist das Viruspartikel dabei bevorzugterweise der Vektor. Es ist jedoch auch im Rahmen der vorliegenden Erfindung, dass die besagten Nukleinsäuren in einem Plasmidvektor vorliegen. In einem jeden Fall weist der Vektor Elemente auf, die für die Vermehrung der inserierten Nukleinsäure (Replikation) und ggf. Expression der inserierten Nukleinsäure sorgen bzw. diese steuern. Geeignete Vektoren, insbesondere auch Expressionsvektoren, und Elemente sind den Fachleuten auf dem Gebiet bekannt und beispielsweise beschrieben in Grunhaus, A., Horwitz, M. S., 1994, Adenoviruses as cloning vectors. In Rice, C., Hrsg., Seminars in Virology, London: Saunders Scientific Publications. Those used according to the invention for adenoviruses, adenoviral systems or parts thereof coding nucleic acids can be present as vectors. It is preferred to act are viral vectors. In the case of nucleic acids comprising adenoviral nucleic acids the virus particle is preferably the vector. However, it is also part of the present invention that said nucleic acids are present in a plasmid vector. In any case, the vector has elements necessary for the propagation of the advertised Nucleic acid (replication) and possibly expression of the inserted nucleic acid or control them. Suitable vectors, in particular also expression vectors, and elements are known to those skilled in the art and are described, for example, in Grunhaus, A., Horwitz, M.S., 1994, Adenoviruses as cloning vectors. In Rice, C., ed., Seminars in Virology, London: Saunders Scientific Publications.

Der oben beschriebenen Ausführungsform, dass die verschiedenen Elemente der besagten Nukleinsäure nicht notwendigerweise auf nur einem Vektor enthalten sein müssen, trägt der Aspekt der Erfindung Rechnung, der die Vektorgruppe betrifft. Eine Vektorgruppe umfasst entsprechend mindestens zwei Vektoren. Ansonsten gilt betreffend die Vektoren bzw. die Vektorengruppe das hierin allgemein zu Vektoren Ausgeführte. The embodiment described above that the various elements of said The nucleic acid does not necessarily have to be contained on only one vector Aspect of the Invention Calculation Concerning the Vector Group. A vector group includes correspondingly at least two vectors. Otherwise applies to the vectors or Vectors group that is generally referred to herein as vectors.

Die erfindungsgemäß verwendeten Adenoviren sind durch die verschiedenen hierin offenbarten Nukleinsäuren bzw. Genprodukte charakterisiert und umfassen ansonsten all jene den Fachleuten auf dem Gebiet bekannten Elemente, wie dies auch bei Adenoviren vom Wildtyp der Fall ist (Shenk, T.: Adenoviridae: The virus and their replication. Fields Virology, 3. Auflage, Hrsg. Fields, B. N., Knipe, D. M., Howley, P. M. et al., Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, 1996, Kapitel 67). The adenoviruses used in the invention are characterized by the various herein characterized nucleic acids or gene products characterized and otherwise include all those Elements known to those skilled in the art, such as wild type adenoviruses the case is (Shenk, T .: Adenoviridae: The virus and their replication. Fields Virology, 3. Edition, ed. Fields, B.N., Knipe, D.M., Howley, P.M. et al., Lippincott-Raven Publishers, Philadelphia, 1996, chapter 67).

Die Replikation von Adenoviren ist ein ausgesprochen komplexer Vorgang und greift im Regelfalle auf den humanen Transkriptionsfaktor E2F zurück. Während einer viralen Infektion werden zunächst die "frühen Gene" E1, E2, E3 und E4 exprimiert. Die Gruppe der "späten Gene" ist für die Synthese der viralen Strukturproteine verantwortlich. Für die Aktivierung sowohl der frühen wie auch der späten Gene spielt die E1-Region bestehend aus zwei Transkriptionseinheiten E1A und E1B, welche für verschiedene E1A- und E1B-Proteine codieren, eine entscheidende Rolle, da sie die Transkription der E2, E3, E4-Gene induzieren (Nevins, J. R., Cell 26, 213-220, 1981). Zudem können die E1A-Proteine in ruhenden Zellen die DNA-Synthese induzieren und so deren Eintritt in die S-Phase einleiten (siehe Boulanger and Blair, 1991). Darüber hinaus interagieren sie mit den Tumorsuppressoren der Rb-Klasse (Whyte, P. et al., Nature 334, 124-127, 1988). Dabei wird der zelluläre Transkriptionsfaktor E2F freigesetzt. Die E2F-Faktoren können dann an die entsprechenden Promotorbereiche sowohl zellulärer wie auch viraler Gene binden (insbesonder an den adenoviralen E2 early Promotor) und die Transkription und somit die Replikation einleiten (Nevins, J. R., Science 258, 424-429, 1992). The replication of adenoviruses is an extremely complex process and usually uses the human transcription factor E2F. During a viral infection, the "early genes" E1, E2, E3 and E4 are first expressed. The "late genes" group is responsible for the synthesis of the viral structural proteins. The E1 region, consisting of two transcription units E1A and E1B, which code for different E1A and E1B proteins, plays a crucial role for the activation of both the early and the late genes, since they transcribe the E2, E3, E4- Induce genes (Nevins, JR, Cell 26 , 213-220 , 1981 ). In addition, the E1A proteins can induce DNA synthesis in resting cells and thus initiate their entry into the S phase (see Boulanger and Blair, 1991). In addition, they interact with the tumor suppressors of the Rb class (Whyte, P. et al., Nature 334 , 124-127 , 1988 ). The cellular transcription factor E2F is released. The E2F factors can then bind to the corresponding promoter regions of both cellular and viral genes (in particular to the adenoviral E2 early promoter) and initiate transcription and thus replication (Nevins, JR, Science 258, 424-429, 1992).

Für das Einleiten bzw. die Durchführung der Replikation werden insbesondere die Produkte der E2-Gene benötigt, da sie für drei essentielle Proteine kodieren. Die Transkription der E2- Proteine wird durch zwei Promotoren gesteuert, den "E2-Early E2F-abhängigen", hierin auch als E2-early Promotor oder früher E2-Promotor bezeichnet, und den "E2-late" Promoter (Swaminathan und Thimmapaya, The Molecular Repertoire of Adenoviruses III: Current Topics in Microbiology and Immunology, Vol 199, 177-194, Springer Verlag 1995). Zudem spielen die Produkte der E4-Region, die zusammen mit dem E1A- und E1B-55kDa-Protein, eine wichtige Rolle für die Aktivität von E2F bzw. die Stabilität von p53. Zum Beispiel wird durch eine direkte Interaktion des von der E4-Region codierten E4orf6/7-Proteins mit dem Heterodimer bestehend aus E2F und DP1 der E2-Promoter transaktiviert (Swaminathan und Thimmapaya, JBC 258, 736-746, 1996). Weiterhin wird p53 durch den Komplex bestehend aus E1B-55kDa und E4orf6 inaktiviert (Steegenga, W. T. et al., Oncogene 16, 349-357, 1998), um einen erfolgreichen lytischen Infektionszyklus durchlaufen zu können. Ferner besitzt das E1B-55kDa Protein eine weitere wichtige Funktion insoweit, als dass es in Wechselwirkung mit dem E4orf6 Protein den Export der viralen RNA aus dem Zellkern fördert, wohingegen die zelleigenen RNAs im Kern zurückgehalten werden (Bridge und Ketner, Virology 174, 345-353, 1990). Eine weitere wichtige Beobachtung ist die, dass der Proteinkomplex bestehend aus E1B-55kDa/E4orf6 in den sogenannten "viral inclusion bodies" lokalisiert ist. Es wird angenommen, dass diese Strukturen Orte der Replikation und Transkription darstellen (Ornelles und Shenk, J. Virology 65, 424-429, 1991). The products of the E2 genes are particularly required for initiating or carrying out the replication, since they code for three essential proteins. The transcription of the E2 proteins is controlled by two promoters, the "E2-Early E2F-dependent", also referred to herein as the E2-early promoter or earlier E2 promoter, and the "E2-late" promoter (Swaminathan and Thimmapaya, The Molecular Repertoire of Adenoviruses III: Current Topics in Microbiology and Immunology, Vol 199 , 177-194 , Springer Verlag 1995 ). In addition, the products of the E4 region, which together with the E1A and E1B-55kDa protein, play an important role for the activity of E2F and the stability of p53. For example, the E2 promoter is transactivated by a direct interaction of the E4orf6 / 7 protein encoded by the E4 region with the heterodimer consisting of E2F and DP1 (Swaminathan and Thimmapaya, JBC 258 , 736-746 , 1996 ). Furthermore, p53 is inactivated by the complex consisting of E1B-55kDa and E4orf6 (Steegenga, WT et al., Oncogene 16 , 349-357 , 1998 ) in order to be able to go through a successful lytic infection cycle . Furthermore, the E1B-55kDa protein has another important function in that it interacts with the E4orf6 protein to promote the export of viral RNA from the cell nucleus, whereas the cell's own RNAs are retained in the nucleus (Bridge and Ketner, Virology 174 , 345- 353 , 1990 ). Another important observation is that the protein complex consisting of E1B-55kDa / E4orf6 is localized in the so-called "viral inclusion bodies". These structures are believed to represent sites of replication and transcription (Ornelles and Shenk, J. Virology 65 , 424-429 , 1991 ).

Weiterhin war zum Anmeldezeitpunkt der vorliegenden Erfindung bekannt, dass E1A- deletierte Viren bei höheren MOI's sehr effizient replizieren können (Nevins J. R., Cell 26, 213-220, 1981), die jedoch in der klinischen Anwendung nicht zu realisieren sind. Dieses Phänomen wird in der Literatur als "E1A-like activity" bezeichnet. Ferner war bekannt, dass zwei Proteine, das 12S- und das 13S-Protein, die von E1A kodiert werden, die Expression der anderen adenoviralen Gene steuern bzw. induzieren (Nevins, J. R., Cell 26, 213-220, 1981; Boulanger, P. und Blair, E.; Biochem. J. 275, 281-299, 1991). Dabei hat sich gezeigt, dass hauptsächlich die CR3-Region des 13S-Proteins die transaktivierende Funktion ausübt (Wong HK und Ziff EB., J Virol., 68, 4910-20, 1994). Adenoviren, die bestimmte Deletionen in der CR1- und/oder CR2-Region und/oder CR3-Region des 13S-Proteins aufweisen, sind weitestgehend replikationsdefekt, wirken aber noch bei einzelnen Zelllinien transaktivierend auf die viralen Gene bzw. Promotoren, insbesondere auf die E2 Region (Wong HK, Ziff EB., J Virol. 68, 4910-20, 1994; Mymryk, J. S. und Bayley, S. T., Virus Research 33, 89-97, 1994). Furthermore, at the time of registration of the present invention it was known that E1A-deleted viruses can replicate very efficiently at higher MOIs (Nevins JR, Cell 26 , 213-220 , 1981 ), but these cannot be implemented in clinical use. This phenomenon is referred to in the literature as "E1A-like activity". It was also known that two proteins, the 12S and the 13S protein, which are encoded by E1A, control or induce the expression of the other adenoviral genes (Nevins, JR, Cell 26 , 213-220 , 1981 ; Boulanger, P and Blair, E .; Biochem. J. 275, 281-299, 1991). It was shown that mainly the CR3 region of the 13S protein exerts the transactivating function (Wong HK and Ziff EB., J Virol., 68, 4910-20, 1994). Adenoviruses that have certain deletions in the CR1 and / or CR2 region and / or CR3 region of the 13S protein are largely replication-defective, but still have a transactivating effect on the viral genes or promoters, in particular on the E2, in individual cell lines Region (Wong HK, paragraph EB., J Virol. 68, 4910-20, 1994; Mymryk, JS and Bayley, ST, Virus Research 33 , 89-97 , 1994 ).

Nach Infektion einer Zelle, typischerweise einer Tumorzelle, mit einem Wildtyp-Adenovirus wird YB-1 vermittelt durch E1A, E1B-55k und E4orf6 in den Kern induziert und colokalisiert mit E1B-55k im Kern in den viral inclusion bodies, was eine effektive Replikation des Virus im Zellkern sowohl in vitro als auch in vivo erlaubt. Dabei war bereits früher festgestellt worden, dass auch E4orf6 an E1B-55K bindet (Weigel, S. und Dobbelstein, M. J. Virology, 74, 764-772, 2000; Keith N. Leppard, Seminars in Virology, 8, 301-307, 1998.) und somit den Transport bzw. die Verteilung von E1B-55K in den Kern vermittelt, was eine optimale Virusproduktion bzw adenovirale Replikation gewährleistet. Durch das Zusammenwirken von E1A, E1B-55K und YB-1 bzw. durch den Komplex aus E1B-55K/E4orf6 mit YB-1 und der Kolokalisation von YB-1 und E1B-SSk im Kern in den sogenannten viral inclusion bodies ist eine erfindungsgemäße effiziente Replikation des Virus, und damit die Verwendung der hierin beschriebenen Viren zur Replikation in Zellen, die YB-1-Kern-positiv sind, bzw. zur Herstellung eines Medikamentes zur Behandlung von Erkrankungen, bei denen YB-1- Kern-positive Zellen beteiligt sind, möglich. Die dadurch vor diesem zellulären Hintergrund mögliche Replikation führt zu einer Lyse der Zelle, Freisetzung des Virus und Infektion und Lyse benachbarter Zellen, so dass im Falle der Infektion einer Tumorzelle bzw. eines Tumors letztlich eine Lyse des Tumors, d. h. eine Onkolyse, eintritt. After infection of a cell, typically a tumor cell, with a wild-type adenovirus YB-1 is mediated by E1A, E1B-55k and E4orf6 in the nucleus and colocalized with E1B-55k in the core in the viral inclusion bodies, which is an effective replication of the virus in the cell nucleus allowed both in vitro and in vivo. Was there before found that E4orf6 also binds to E1B-55K (Weigel, S. and Dobbelstein, M. J. Virology, 74, 764-772, 2000; Keith N. Leppard, Seminars in Virology, 8, 301-307, 1998.) and thus the transport or distribution of E1B-55K into the core mediates what a optimal virus production or adenoviral replication guaranteed. By the Interaction of E1A, E1B-55K and YB-1 or through the complex of E1B-55K / E4orf6 with YB-1 and the colocalization of YB-1 and E1B-SSk in the core in the so-called viral inclusion bodies is an efficient replication of the virus according to the invention, and thus the use the viruses described herein for replication in cells which are YB-1 nucleus positive, or for the manufacture of a medicament for the treatment of diseases in which YB-1- Nuclear positive cells are involved, possible. The result against this cellular background possible replication leads to cell lysis, virus release and infection and Lysis of neighboring cells, so that in the event of infection of a tumor cell or tumor ultimately tumor lysis, i.e. H. oncolysis occurs.

YB-1 gehört zu einer Gruppe hoch konservierter Faktoren, die an der invertierten CAAT- Sequenz, der sogenannten Y-Box, binden. Sie können sowohl auf der Ebene der Transkription als auch der Translation regulatorisch wirken (Wolffe, A. P. Trends in Cell Biology 8, 318-323, 1998). Es werden immer mehr Y-Box-abhängige Regulationswege bei der Aktivierung aber auch bei der Hemmung Wachstums- und Apoptose-assoziierter Gene aufgefunden (Swamynathan, S. K. et al., FASEB J. 12, 515-522, 1998). So interagiert YB-1 direkt mit p53 (Okamoto, T. et al., Oncogene 19, 6194-6202, 2000), spielt eine wichtige Rolle bei der Fas- Genexpression (Lasham, A. et al., Gene 252, 1-13, 2000) und bei der Aktivierung von Topoisomerasen und Metalloproteinasen (Mertens. P. R. et al., JBC 272, 22905-22912, 1997; Shibao, K. et al., Int. J. Cancer 83, 732-737, 1999). Zudem ist YB-1 an der Regulation der mRNA-Stabilität (Chen, C-Y. et al., Genes & Development 14, 1236-1248, 2000) und an Reparaturvorgängen beteiligt (Ohga, T. et al., Cancer Res. 56, 4224-4228, 1996; ). YB-1 belongs to a group of highly conserved factors that bind to the inverted CAAT sequence, the so-called Y box. They can have a regulatory effect both at the level of transcription and translation (Wolffe, AP Trends in Cell Biology 8, 318-323, 1998). More and more Y-box-dependent regulatory pathways are found in the activation but also in the inhibition of growth and apoptosis-associated genes (Swamynathan, SK et al., FASEB J. 12, 515-522, 1998). Thus YB-1 interacts directly with p53 (Okamoto, T. et al., Oncogene 19 , 6194-6202 , 2000 ), plays an important role in Fas gene expression (Lasham, A. et al., Gene 252 , 1- 13 , 2000 ) and in the activation of topoisomerases and metalloproteinases (Mertens. PR et al., JBC 272 , 22905-22912, 1997; Shibao, K. et al., Int. J. Cancer 83 , 732-737 , 1999 ) , YB-1 is also involved in the regulation of mRNA stability (Chen, CY. Et al., Genes & Development 14 , 1236-1248 , 2000 ) and in repair processes (Ohga, T. et al., Cancer Res. 56, 4224-4228, 1996;).

Die nukläre Lokalisation von YB-1 in Tumorzellen führt zu einer E1A-unabhängigen viralen Replikation (Holm, P. S. et al. JBC 277, 10427-10434, 2002). Zudem ist bekannt, dass die adenoviralen Proteine wie z. B. E4orf6 und E1B-55k einen positiven Effekt auf die virale Replikation ausüben (Goodrum, F. D. und Ornelles, D. A, J. Virology 73, 7474-7488, 1999). Weiterhin ist bekannt, dass ein funktionelles E1A Protein für das Einschalten der anderen viralen Genprodukte (z. B. E4orf6 E3ADP und E1B-55k) verantwortlich ist (Nevins J. R., Cell 26, 213-220, 1981). Eine Kombination von YB-1, welches entweder bereits im Zellkern der Tumorzelle enthalten ist, oder durch äußere Faktoren (z. B. Applikation von Zytostatika, Bestrahlung oder Hyperthermie) in den Zellkern induziert, d. h. veranlasst wird, im Zellkern vorhanden zu sein, insbesondere unabhängig vom Zellzyklus vorhanden zu sein, oder als Transgen durch einen Vektor eingeführt wird, mit einem System, bevorzugterweise mit einem adenoviralen System, welches die adenoviralen Gene einschaltet, aber nicht zur viralen Replikation fähig ist, stellt ein System dar, welches eine sehr effektive virale Replikation bzw. Partikelbildung durch YB-1 vermittelt und damit eine Onkolyse erlaubt. The nuclear localization of YB-1 in tumor cells leads to an E1A-independent viral replication (Holm, PS et al. JBC 277 , 10427-10434, 2002). It is also known that the adenoviral proteins such. B. E4orf6 and E1B-55k have a positive effect on viral replication (Goodrum, FD and Ornelles, D.A, J. Virology 73 , 7474-7488 , 1999 ). It is also known that a functional E1A protein is responsible for switching on the other viral gene products (eg E4orf6 E3ADP and E1B-55k) (Nevins JR, Cell 26 , 213-220 , 1981 ). A combination of YB-1, which is either already contained in the cell nucleus of the tumor cell, or is induced in the cell nucleus by external factors (e.g. application of cytostatics, radiation or hyperthermia), ie is caused to be present in the cell nucleus, in particular to be independent of the cell cycle, or to be introduced as a transgene by a vector, with a system, preferably with an adenoviral system that turns on the adenoviral genes but is not capable of viral replication, is a system that is a very effective viral Replication or particle formation mediated by YB-1 and thus allows oncolysis.

Bei dem Medikament, im Rahmen dessen die Adenoviren erfindungsgemäß verwendet werden, ist dabei vorgesehen, dass dieses in der Regel systemisch appliziert wird, gleichwohl es auch im Rahmen der vorliegenden Erfindung ist, wenn dieses lokal appliziert oder abgegeben wird. Die Applikation erfolgt mit der Absicht, dass insbesondere jene Zellen mit dem Adenovirus infiziert werden und insbesondere darin eine Replikation der Adenoviren erfolgt, bei denen eine Beteiligung, bevorzugter Weise kausal, an der Ausbildung eines Zustandes, typischerweise einer Erkrankung, vorliegt, zu deren Diagnose und/oder Prävention und/oder Behandlung das erfindungsgemäße Medikament verwendet wird. In the drug in the context of which the adenovirus used according to the invention there is provision for this to be applied systemically as a rule, however it is is also within the scope of the present invention if this is applied or dispensed locally becomes. The application takes place with the intention that in particular those cells with the Adenovirus are infected and in particular replication of the adenovirus occurs in it whose participation, preferably causally, in the development of a state, typically a disease, for its diagnosis and / or prevention and / or Treatment the medicament according to the invention is used.

Ein derartiges Medikament ist bevorzugter Weise für die Behandlung von Tumorerkrankungen vorgesehen. Dabei sind jene Tumorerkrankungen besonders bevorzugt, bei denen entweder YB-1 bereits im Zellkern infolge des der Tumorerkrankung zugrundeliegenden Mechanismus, insbesondere des zugrundeliegenden pathologischen Mechanismus, vorliegt, oder aber durch äußere Maßnahmen die Anwesenheit von YB-1 im Zellkern bedingt wird, wobei die Maßnahmen geeignet sind, YB-1 in den Zellkern zu transferieren, dort zu induzieren oder dort zu exprimieren. Der Begriff Tumor oder Tumorerkrankung soll hierbei sowohl maligne wie benigne Tumoren und entsprechende Erkrankungen bezeichnen. Dabei kann vorgesehen sein, dass das Medikament mindestens eine weitere pharmazeutisch wirksame Verbindung enthält. Die Art und der Umfang dieser weiteren pharmazeutisch aktiven Verbindungen wird dabei von der Art der Indikation abhängen, für die das Medikament eingesetzt wird. Im Falle der Verwendung des Medikamentes für die Behandlung und/oder die Prophylaxe von Tumorerkrankungen werden typischerweise Zytostatika, wie beispielsweise cis-Platin und Taxol, Daunoblastin, Adriamycin und/oder Mitoxantron verwendet. Such a drug is preferred for the treatment of Tumor diseases provided. Those tumor diseases are particularly preferred in which either YB-1 already in the cell nucleus as a result of the underlying tumor disease Mechanism, in particular the underlying pathological mechanism, is present, or but the presence of YB-1 in the cell nucleus is determined by external measures, whereby the measures are suitable for transferring YB-1 into the cell nucleus, inducing it there or express there. The term tumor or tumor disease is meant to be both malignant how to denote benign tumors and corresponding diseases. It can be provided be that the drug has at least one other pharmaceutically active compound contains. The nature and scope of these other pharmaceutically active compounds will depend on the type of indication for which the drug is used. In the event of the use of the medicament for the treatment and / or prophylaxis of Tumor diseases are typically cytostatics, such as cis-platinum and taxol, Daunoblastin, Adriamycin and / or Mitoxantron used.

Das erfindungsgemäße Medikament kann dabei in verschiedenen Formulierungen vorliegen, bevorzugter Weise in einer flüssigen Form. Weiterhin wird das Medikament Hilfsstoffe wie Stabilisatoren, Puffer, Konservierungsstoffe und dergleichen enthalten, die dem Fachmann auf dem Gebiet der Galenik bekannt sind. The medicament according to the invention can be present in various formulations, preferably in a liquid form. Furthermore, the drug is used as auxiliary agents Stabilizers, buffers, preservatives and the like contain the expert are known in the field of galenics.

Der vorliegende Erfinder hat überraschenderweise festgestellt, dass die erfindungsgemäße Verwendung der hierin beschriebenen Viren mit besonders großer Erfolgsrate bei solchen Tumoren verwendet werden kann, bei denen YB-1 unabhängig vom Zellzyklus im Zellkern vorkommt. Normalerweise ist YB-1 im Cytoplasma, insbesondere auch im perinukleären Plasma, vorhanden. In der S-Phase des Zellzyklus findet sich YB-1 im Zellkern von sowohl normalen wie auch Tumorzellen. Dies ist jedoch nicht ausreichend, um eine virale Onkolyse unter Verwendung derartiger attenuierten oder modifizierten Adenoviren zu bewerkstelligen. Die im Stand der Technik beschriebene vergleichsweise geringe Wirksamkeit von derartigen attenuierten Adenoviren beruht letztlich auf deren fehlerhaften Anwendung. Mit anderen Worten, es können derartige adenovirale Systeme, insbesondere auch mit einer größeren Wirksamkeit dort eingesetzt werden, wo die molekularbiologischen Voraussetzungen für eine virale Onkolyse unter Verwendung dieser, hierin beschriebenen attenuierten oder modifizierten Adenoviren gegeben sind. Im Falle der hierin erfindungsgemäß zu verwendenden Adenoviren, wie beispielsweise AdΔ24, dl922-947, E1Ad/01/07, CB016 und die im europäischen Patent EP 0931 830 beschriebenen rekombinanten Adenoviren, liegen diese Voraussetzungen bei solchen Tumorerkrankungen vor, deren Zellen eine vom Zellzyklus unabhängige Kernlokalisation von YB-1 aufweisen. Diese Form der Kernlokalisation kann dabei durch die Art des Tumors selbst bedingt sein, oder aber durch die hierin beschriebenen erfindungsgemäßen Agenzien oder Maßnahmen bewirkt werden. Die vorliegende Erfindung definiert somit eine neue Gruppe von Tumoren bzw. Tumorerkrankungen und damit auch von Patienten, die mit den erfindungsgemäßen Agenzien, besonders aber auch mit den im Stand der Technik bereits beschriebenen attenuierten oder modifizierten Adenoviren, nämlich solchen, die ein E1A Protein aufweisen, welches durch Deletionen bzw. Mutationen nicht in der Lage ist, die Kernlokalisation von YB-1 zu induzieren aber noch transaktivierend auf die virale Gene wirkt, noch wirksam behandelt werden können. The present inventor has surprisingly found that the invention Use of the viruses described herein with a particularly high success rate in such Tumors can be used in which YB-1 is independent of the cell cycle in the cell nucleus occurs. YB-1 is normally found in the cytoplasm, especially in the perinuclear one Plasma, present. In the S phase of the cell cycle, YB-1 is found in the nucleus of both normal as well as tumor cells. However, this is not sufficient for viral oncolysis using such attenuated or modified adenoviruses. The comparatively low effectiveness of such described in the prior art Attenuated adenoviruses ultimately depend on their incorrect use. With others Words, such adenoviral systems, in particular also with a larger one Efficacy can be used where the molecular biological requirements for a viral oncolysis using this attenuated or described herein modified adenoviruses are given. In the case of those to be used according to the invention herein Adenoviruses such as AdΔ24, dl922-947, E1Ad / 01/07, CB016 and those in European The recombinant adenoviruses described in patent EP 0931 830 meet these requirements in those tumor diseases whose cells are independent of the cell cycle Have core localization of YB-1. This form of core localization can be determined by Art of the tumor itself, or by the invention described herein Agents or measures can be effected. The present invention thus defines one new group of tumors or tumor diseases and thus also of patients with the agents according to the invention, but especially also those already in the prior art described attenuated or modified adenoviruses, namely those that have an E1A Have protein, which is not able due to deletions or mutations Inducing nuclear localization of YB-1 but still has a transactivating effect on the viral genes can be treated effectively.

Eine weitere Gruppe von Patienten, die erfindungsgemäß unter Verwendung der hierin als erfindungsgemäß zu verwenden beschriebenen, im Stand der Technik als solches wenigstens zum Teil bekannten Adenoviren, behandelt werden können, insbesondere unter Verwendung solcher Adenoviren, die Mutationen bzw. Deletionen im E1A-Protein aufweisen, welche die Bindungen von Rb/E2f nicht stören oder aber in YB-1-Kern-negativen Zellen nicht replizieren und/oder ein deletiertes Onkoprotein, insbesondere E1A aufweisen, wie beispielsweise im Falle der Viren AdΔ24, dl922-947, E1Ad/01/07, CB106 und der im europäischen Patent EP 0931 830 beschriebenen Adenoviren, sind jene Patienten, bei denen durch Anlegen oder Realisieren bestimmter Bedingungen gewährleistet wird, dass YB-1 in den Kern wandert oder dort induziert oder dorthin transportiert wird. Die Verwendung derartiger Adenoviren bei dieser Patientengruppe beruht insoweit auf der Erkenntnis, dass die Induktion der viralen Replikation auf der Kernlokalisation von YB-1 mit anschließender Bindung an den E2-late- Promotor beruht. Infolge der hierin offenbarten Erkenntnisse sind Adenoviren wie beispielsweise AdΔ24, dl922-947, E1Ad/01/07, CB106 und/oder die im europäischen Patent EP 0931 830 beschriebenen Adenovirus, nicht in der Lage, den Kerntransport des zellulären YB-1 zu vermitteln. Dies begründet den Erfolg von AdΔ24, dl922-947, E1Ad/01/07, CB016 und der im Patent EP 0931 830 beschriebenen Adenoviren bei der erfindungsgemäßen Behandlung solcher Tumoren, die YB-1 inhärent im Kern aufweisen. Dies ist jedoch nur bei einer sehr geringen Patientengruppe gegeben. Die Kernlokalisation von YB-1 kann durch Stress von außen bzw. lokal appliziertem Stress induziert werden. Diese Induzierung kann beispielsweise durch Bestrahlung, insbesondere UV-Bestrahlung, Anwendung von Zytostatika, wie sie unter anderem hierin ebenfalls offenbart sind, und Hyperthermie erfolgen. Im Zusammenhang mit Hyperthermie ist beachtlich, dass diese zwischenzeitlich sehr spezifisch realisiert werden kann und somit ebenfalls spezifisch einen Kerntransport von YB-1 in den Zellkern bedingen kann und infolgedessen die Voraussetzungen für eine Replikation des Adenovirus und damit einer Zell- und Tumorlyse, die bevorzugt lokal beschränkt erfolgt, gegeben sind (Stein U, Jurchott K, Walther W, Bergmann S. Schlag PM, Royer HD. J Biol Chem. 2001, 276(30): 28562-9; Hu Z, Jin S. Scotto KW. J Biol Chem. 2000 Jan 28; 275(4): 2979-85; Ohga T, Uchiumi T, Makino Y, Koike K, Wada M, Kuwano M, Kohno K. J Biol Chem. 1998, 273(11): 5997-6000). Another group of patients who can be treated according to the invention using the adenoviruses which are at least partially known in the prior art as described according to the invention, in particular using such adenoviruses which have mutations or deletions in the E1A protein which do not interfere with the binding of Rb / E2f or do not replicate in YB-1 nucleus-negative cells and / or have a deleted oncoprotein, in particular E1A, such as, for example, in the case of the viruses AdΔ24, dl922-947, E1Ad / 01 / 07, CB106 and the adenoviruses described in European patent EP 0931 830, are those patients in whom the application or implementation of certain conditions ensures that YB-1 migrates into the nucleus or is induced there or transported there. The use of such adenoviruses in this group of patients is based on the knowledge that the induction of viral replication is based on the core localization of YB-1 with subsequent binding to the E2 late promoter. As a result of the findings disclosed herein, adenoviruses such as AdΔ24, dl922-947, E1Ad / 01/07, CB106 and / or the adenovirus described in European patent EP 0931 830 are unable to mediate the nuclear transport of the cellular YB-1. This justifies the success of AdΔ24, dl922-947, E1Ad / 01/07, CB016 and the adenoviruses described in patent EP 0931 830 in the treatment according to the invention of tumors which have YB-1 inherently in the nucleus. However, this only applies to a very small group of patients. The core localization of YB-1 can be induced by external or locally applied stress. This induction can take place, for example, by irradiation, in particular UV irradiation, use of cytostatics, as are also disclosed, inter alia, and hyperthermia. In connection with hyperthermia, it is noteworthy that it can now be implemented very specifically and therefore also specifically require a nuclear transport of YB-1 into the cell nucleus and, consequently, the prerequisites for replication of the adenovirus and thus cell and tumor lysis, which is preferably local limited, are given (Stein U, Jurchott K, Walther W, Bergmann S. Schlag PM, Royer HD. J Biol Chem. 2001, 276 ( 30 ): 28562-9; Hu Z, Jin S. Scotto KW. J Biol Chem. 2000 Jan 28; 275 ( 4 ): 2979-85; Ohga T, Uchiumi T, Makino Y, Koike K, Wada M, Kuwano M, Kohno K. J Biol Chem. 1998, 273 ( 11 ): 5997-6000 ).

Das erfindungsgemäße Medikament würde somit auch an solche Patienten und Patientengruppen verabreicht werden bzw. wäre für solche bestimmt, bei denen durch geeignete Vorbehandlungen oder gleichzeitige Behandlung ein Transport von YB-1, insbesondere in die entsprechenden Tumorzellen, bedingt werden würde. The medication according to the invention would thus also be given to such patients and Patient groups are administered or would be intended for those in which by appropriate Pretreatment or simultaneous treatment a transport of YB-1, especially in the corresponding tumor cells.

Auf der Grundlage dieser technischen Lehre ist es für den Fachmann im Rahmen seiner Fähigkeiten, geeignete Modifikationen insbesondere von E1A vorzunehmen, die beispielsweise Deletionen oder Punktmutationen umfassen können, um so verschiedene Ausführungsformen der im Rahmen der erfindungsgemäßen Verwendung einsetzbaren Adenoviren zu erzeugen. On the basis of this technical teaching, it is for the specialist within the scope of his Abilities to make appropriate modifications, in particular of E1A, for example Deletions or point mutations can include different embodiments to produce the adenoviruses which can be used in the context of the use according to the invention.

Wie bereits vorstehend ausgeführt, sind die erfindungsgemäß verwendeten Adenoviren in der Lage, in solchen Zellen bzw. zellulären Systemen zu replizieren, die YB-1 im Kern aufweisen. Für die Frage, inwieweit die erfindungsgemäß verwendeten Adenoviren zur Replikation und damit zur Tumorlyse in der Lage sind, ist der Status der Zellen hinsichtlich des Vorhandenseins oder Nichtvorhandenseins von Rb, d. h. des Retinoblastom-Tumorsupressor- Produktes, unabhängig. Weiterhin ist es im Rahmen der erfindungsgemäßen Verwendung der besagten Adenoviren nicht erforderlich, auf den p53-Status der infizierten, zu infizierenden oder zu behandelnden Zellen abzustellen, da bei Verwendung der hierin offenbarten adenoviralen Systeme im Zusammenhang mit YB-1-Kern-positiven Zellen, d. h. Zellen, die unabhängig vom Zellzyklus YB-1 im Kern aufweisen, dieser ebenso wie der Rb-Status auf das Replikationsgeschehen des Adenovirus praktisch keinen Einfluss hat. As already stated above, the adenoviruses used according to the invention are in the Able to replicate in such cells or cellular systems, the YB-1 in the nucleus exhibit. For the question of the extent to which the adenoviruses used according to the invention for replication and thus able to lysing the tumor is the status of the cells with regard to the The presence or absence of Rb, i.e. H. of the retinoblastoma tumor suppressor Product, regardless. Furthermore, it is within the scope of the use of the Said adenoviruses are not required to determine the p53 status of the infected, to be infected or cells to be treated because using those disclosed herein adenoviral systems related to YB-1 nucleus positive cells, i. H. Cells that independent of the cell cycle YB-1 in the nucleus, this as well as the Rb status on the Replication events of the adenovirus have practically no influence.

Das Onkogen bzw. Onkogenprotein, insbesondere E1A, kann dabei entweder unter der Kontrolle der eigenen natürlichen adenoviralen Promotoren stehen und/oder aber über einen Tumor- oder Gewebe-spezifischen Promotor gesteuert werden. Geeignete nicht-adenovirale Promotoren können ausgewählt sein aus der Gruppe, die Cytomegalovirus-Promotor, RSV- (Rous sarcoma Virus)-Promotor, Adenovirus-basierender Promotor Va I und den nichtviralen YB-1-Promotor umfasst. Weitere Promotoren, die im Zusammenhang mit einem jeden Aspekt der hierin offenbarten Erfindung verwendet werden können, stellen der Telomerase- Promotor, der Alpha-Fetoprotein (AFP)-Promotor, der Caecinoembryonic Antigen Promotor (CEA) (Cao, G., Kuriyama, S., Gao, J., Mitoro, A., Cui, L., Nakatani, T., Zhang, X., Kikukawa, M., Pan, X., Fukui, H., Qi, Z. Int. J. Cancer, 78, 242-247, 1998), der L-Plastin-Promotor (Chung, L, Schwartz, PE., Crystal, RC., Pizzorno, G, Leavitt, J., Deisseroth, AB. Cancer Gene Therapy, 6, 99-106, 1999), Argenin-Vasopressin-Promotor (Coulson, JM, Staley, J., Woll, PJ. British J. Cancer, 80, 1935-1944, 1999) und der PSA-Promotor (Hallenbeck PL, Chang, YN, Hay, C, Golightly, D., Stewart, D., Lin, J., Phipps, S., Chiang, YL. Human Gene Therapy, 10, 1721-1733, 1999) dar. Ferner stellt der in der deutschen Patentanmeldung DE 101 50 984.7 beschriebene YB-1 abhängige Promoter einen Promotor dar, wie er im Rahmen der vorliegenden Erfindung verwendet werden kann. The oncogene or oncogene protein, in particular E1A, can be either under the Control of your own natural adenoviral promoters and / or over one Tumor- or tissue-specific promoter can be controlled. Appropriate non-adenoviral Promoters can be selected from the group consisting of the cytomegalovirus promoter, RSV (Rous sarcoma Virus) promoter, adenovirus-based promoter Va I and the non-viral YB-1 promoter. Other promoters related to each Aspect of the invention disclosed herein, the telomerase Promoter, the alpha-fetoprotein (AFP) promoter, the caecinoembryonic antigen promoter (CEA) (Cao, G., Kuriyama, S., Gao, J., Mitoro, A., Cui, L., Nakatani, T., Zhang, X., Kikukawa, M., Pan, X., Fukui, H., Qi, Z. Int. J. Cancer, 78, 242-247, 1998), the L-plastin promoter (Chung, L, Schwartz, PE., Crystal, RC., Pizzorno, G, Leavitt, J., Deisseroth, AB. Cancer Gene Therapy, 6, 99-106, 1999), argenin vasopressin promoter (Coulson, JM, Staley, J., Woll, PJ. British J. Cancer, 80, 1935-1944, 1999) and the PSA promoter (Hallenbeck PL, Chang, YN, Hay, C, Golightly, D., Stewart, D., Lin, J., Phipps, S., Chiang, YL. Human genes Therapy, 10, 1721-1733, 1999). Furthermore, in the German patent application DE 101 50 984.7 described YB-1 dependent promoter is a promoter as used in the context of the present invention can be used.

Hinsichtlich des Telomerase-Promotors ist bekannt, dass dieser in humanen Zellen von einer zentralen Bedeutung ist. So wird die Telomeraseaktivität durch die transkriptionelle Kontrolle des Telomerase reverse Transkriptase-Gens (hTERT), welches die katalytische Untereinheit des Enzyms darstellt, reguliert. Die Expression der Telomerase ist in 85% der humanen Tumorzellen aktiv. Im Unterschied dazu ist sie in den meisten normalen Zellen inaktiv. Ausgenommen davon sind Keimzellen und embryonales Gewebe (Braunstein, I. et al., Cancer Research, 61, 5529-5536, 2001; Majumdar, A. S. et al., Gene Therapy 8, 568-578, 2001). Genaue Untersuchungen am hTERT-Promotor haben gezeigt, dass Fragmente des Promotors von 283 bp bzw. 82 bp vom Initiationscodon entfernt für eine spezifische Expression in Tumorzellen ausreichend sind (Braunstein I. et al.; Majumdar AS et al., aaO). Daher eignet sich dieser Promotor bzw. die spezifischen Fragmente, um eine spezifische Expression eines Gens und insbesondere eines Transgens nur in Tumorzellen zu erzielen. Der Promotor soll die Expression des modifizierten Onkogens, bevorzugt des E1A-Onkoproteins nur in Tumorzellen ermöglichen. Die Expression des Transgens in einem adenoviralen Vektor führt dann zur viralen Replikation des adenoviralen Vektors und in der Folge zu einer Onkolyse. Es ist auch ralen Replikation des adenoviralen Vektors und in der Folge zu einer Onkolyse. Es ist auch im Rahmen der vorliegenden Erfindung, dass der Leserahmen des transaktivierenden E1A- Proteins im Leserahmen (engl. "in frame") mit einem oder mehreren der Genprodukte des adenoviralen Systems ist. Der Leserahmen des transaktivierenden E1A-Proteins kann jedoch auch unabhängig davon sein. The telomerase promoter is known to be of central importance in human cells. Thus, the telomerase activity is regulated by the transcriptional control of the telomerase reverse transcriptase gene (hTERT), which is the catalytic subunit of the enzyme. Telomerase expression is active in 85% of human tumor cells. In contrast, it is inactive in most normal cells. Germ cells and embryonic tissue are excluded (Braunstein, I. et al., Cancer Research, 61, 5529-5536, 2001; Majumdar, AS et al., Gene Therapy 8 , 568-578 , 2001 ). Exact investigations on the hTERT promoter have shown that fragments of the promoter of 283 bp or 82 bp from the initiation codon are sufficient for specific expression in tumor cells (Braunstein I. et al .; Majumdar AS et al., Loc. Cit.). This promoter or the specific fragments are therefore suitable for achieving specific expression of a gene and in particular a transgene only in tumor cells. The promoter is said to enable expression of the modified oncogene, preferably the E1A oncoprotein, only in tumor cells. The expression of the transgene in an adenoviral vector then leads to the viral replication of the adenoviral vector and subsequently to oncolysis. It is also ral replication of the adenoviral vector and consequent oncolysis. It is also within the scope of the present invention that the reading frame of the transactivating E1A protein is in the reading frame with one or more of the gene products of the adenoviral system. However, the reading frame of the transactivating E1A protein can also be independent of this.

Hinsichtlich der Eigenschaft der Zellen, zu deren Lyse die hierin beschriebenen Adenoviren erfindungsgemäß verwendet werden, ist vorgesehen, dass diese in einer Ausführungsform eine Mehrfach- oder Vielfach-Resistenz zeigen. Diese Mehrfach-Resistenz geht bevorzugterweise mit der Expression, bevorzugter Weise einer Überexpression, des membranständigen Transportproteins P-Glycoprotein einher, welches als Marker für die Bestimmung entsprechender Zellen und damit auch von diesen aufweisenden Tumoren bzw. entsprechende Patientengruppen herangezogen werden kann. Ein weiterer Marker, der mit der Expression von YB-1 korreliert, ist die Topoisomerase II alpha. Insoweit kann in einem Screenen-Verfahren, um zu bestimmen, ob ein Patient mit den Adenoviren erfindungsgemäß mit Aussicht auf Erfolg behandelt werden kann, an Stelle von der bzw. in Ergänzung zur Bestimmung von YB-1 im Kern die Expression von Topoisomerase II alpha herangezogen werden. Ein weiterer Marker, zumindest in dem Umfang, als dass colorectrale Karzinomzellen oder Patienten mit einem Colorectalcarcinom betroffen sind, ist PCNA (engl. proliferating cell nuclear antigen (Hasan S. et al., Nature, 15, 387-391, 2001.), wie beispielsweise beschrieben von Shibao K. et al. (Shibao K et al., Int. Cancer, 83, 732-737, 1999). Schließlich ist, zumindest für den Bereich der Brust- und Osteosarcoma-Zellen die Expression von MDR (engl. multiple drug resistance) ein Marker im vorstehend beschriebenen Sinne (Oda Y et al., Clin. Cancer Res., 4, 2273-2277, 1998). Regarding the property of the cells for the lysis of which the adenoviruses described herein are used according to the invention, it is provided that in one embodiment show multiple or multiple resistance. This multiple resistance works preferably with the expression, preferably with overexpression, of the membrane Transport protein P-glycoprotein, which acts as a marker for the determination corresponding cells and thus also of these tumors or corresponding ones Patient groups can be used. Another marker associated with the expression of Correlated to YB-1, topoisomerase II is alpha. To that extent, in a screening process, to determine if a patient with the adenovirus is prospective according to the invention Success can be treated in place of, or in addition to, the determination of YB-1 the expression of topoisomerase II alpha can be used in the core. Another Markers, at least to the extent that colorectral carcinoma cells or patients have a colorectal carcinoma, PCNA (proliferating cell nuclear antigen) (Hasan S. et al., Nature, 15, 387-391, 2001.), as described, for example, by Shibao K. et al. (Shibao K et al., Int. Cancer, 83, 732-737, 1999). After all, at least for that Area of the breast and osteosarcoma cells the expression of MDR (English multiple drug resistance) a marker in the sense described above (Oda Y et al., Clin. Cancer Res., 4, 2273-2277, 1998).

Es ist somit ein besonderer Vorteil der vorliegenden Erfindung, dass auch jene Patienten unter Anwendung der erfindungsgemäßen Verwendung der Adenoviren, wie hierin beschrieben, therapiert werden können, die ansonsten im medizinisch-klinischen Sinne als "austherapiert" gelten und somit eine weitgehende Behandlung der Tumorerkrankung nach den Methoden des Standes der Technik mit Aussicht auf Erfolg nicht mehr möglich ist, insbesondere die Verwendung von Zytostatika sinnvoller Weise nicht mehr möglich ist bzw. nicht mehr erfolgreich durchgeführt werden kann im Sinne einer Beeinflussung bzw. Verringerung des Tumors. Der Begriff des Tumors bezeichnet hierin allgemein auch eine jegliche Tumor- oder Krebserkrankung, die entweder inhärent YB-1 im Zellkern enthält oder aber durch Realisieren exogener Maßnahmen, wie hierin offenbart, YB-1 im Zellkern, bevorzugterweise unabhängig vom Zellzyklus, aufweist. It is therefore a particular advantage of the present invention that even those patients are under Application of the use of the adenoviruses according to the invention as described herein can be treated, which are otherwise "medically treated" in the medical-clinical sense apply and thus extensive treatment of the tumor disease according to the methods of State of the art with the prospect of success is no longer possible, especially the The use of cytostatics is sensibly no longer possible or no longer can be successfully carried out in the sense of influencing or reducing the Tumor. The term tumor generally also refers to any tumor or Cancer that either contains YB-1 inherently in the cell nucleus or through realization exogenous measures as disclosed herein, YB-1 in the nucleus, preferably independently from the cell cycle.

Die Erfindung betrifft in einem weiteren Aspekt auch ein Verfahren zum Screenen von Patienten, die mit einem modifizierten Adenovirus, d. h. einem Adenovirus, wie er erfindungsgemäß verwendet wird, wie beispielsweise AdΔ24, dl922-947, E1Ad/01/07, CB016 oder die im europäischen Patent EP 0931 830 beschriebenen Viren, behandelbar sind, wobei das Verfahren die folgenden Schritte umfasst:

- Untersuchen einer Probe des Tumorgewebes und
- Festellen, ob YB-1 im Kern Zellzyklus unabhängig lokalisiert ist.

In a further aspect, the invention also relates to a method for screening patients with a modified adenovirus, ie an adenovirus as used according to the invention, such as AdΔ24, dl922-947, E1Ad / 01/07, CB016 or in European Viruses described in patent EP 0931 830 can be treated, the method comprising the following steps:

- Examine a sample of the tumor tissue and
- Determine whether YB-1 is independently located in the nucleus cell cycle.

In dem Falle, dass das Tumorgewebe oder ein Teil davon YB-1 im Zellkern, insbesondere Zellzyklus unabhängig, lokalisiert aufweist, können die hierin offenbarten modifizierten Adenoviren erfindungsgemäß verwendet werden. In the event that the tumor tissue or part of it is YB-1 in the cell nucleus, in particular Cell cycle independently, localized, the modified ones disclosed herein Adenoviruses can be used according to the invention.

In einer Ausführungsform des erfindungsgemäßen Verfahrens ist vorgesehen, dass die Untersuchung des Tumorgewebes unter Verwendung eines Mittels erfolgt, das ausgewählt ist aus der Gruppe, die Antikörper gegen YB-1, Aptamere gegen YB-1, Spiegelmere gegen YB-1 sowie Anticaline gegen YB-1 umfasst. Die Herstellung von Antikörpern, insbesondere monoklonalen Antikörpern, ist den Fachleuten auf dem Gebiet bekannt. Ein weiteres Mittel zum spezifischen Nachweis von YB-1 stellen Peptide dar, die mit hoher Affinität an ihre Zielstrukturen, im vorliegenden Falle YB-1, binden. Im Stand der Technik sind Verfahren bekannt, wie beispielsweise phage-display, um derartige Peptide zu erzeugen. Dabei wird typischerweise von einer Peptid-Bibliothek ausgegangen, wobei die einzelnen Peptide eine Länge von etwa 8 bis 20 Aminosäuren aufweisen und die Größe der Bibliothek etwa 10² bis 10¹⁸, bevorzugterweise 10⁸ bis 10¹⁵ verschiedene Peptide beträgt. Eine spezielle Form von an Zielmolekülen bindenden Polypeptiden stellen die sogenannten Anticaline dar, wie sie beispielsweise in der deutschen Patentanmeldung DE 197 42 706 beschrieben sind. In one embodiment of the method according to the invention, the tumor tissue is examined using an agent selected from the group consisting of antibodies against YB-1, aptamers against YB-1, Spiegelmers against YB-1 and anticalins against YB- 1 includes. The production of antibodies, particularly monoclonal antibodies, is known to those skilled in the art. Another means for the specific detection of YB-1 are peptides that bind with high affinity to their target structures, in the present case YB-1. Methods are known in the prior art, such as phage display, for producing such peptides. A peptide library is typically assumed here, the individual peptides having a length of approximately 8 to 20 amino acids and the size of the library being approximately 10 ² to 10 ¹⁸ , preferably 10 ⁸ to 10 ¹⁵ different peptides. A special form of polypeptides that bind to target molecules are the so-called anticalins, as described, for example, in German patent application DE 197 42 706.

Ein weiteres Mittel zum spezifischen Binden an YB-1 und damit zum Nachweis einer Zellzyklus-unabhängigen Lokalisation von YB-1 im Zellkern sind die sogenannten Aptamere, d. h. D-Nukleinsäure, die auf RNA- oder DNA-Basis entweder als Einzelstrang oder als Doppelstrang vorliegen und spezifisch an ein Zielmolekül binden. Die Herstellung von Aptameren ist beispielsweise beschrieben im europäischen Patent EP 0 533 838. Eine Sonderform der Aptamere stellen die sogenannten Aptazyme dar, die beispielsweise beschrieben sind von Piganeau, N. et al. (2000), Angew. Chem. Int. Ed., 39, Nr. 29, Seiten 4369-4373. Dabei handelt es sich um eine spezielle Ausführungsform von Aptameren insoweit, als dass sie neben dem Aptameranteil noch einen Ribozymanteil aufweisen und nach Bindung oder Freisetzung des an den Aptamerteil bindenden Zielmoleküls der Ribozymanteil katalytisch aktiv wird und ein Nukleinsäuresubstrat spaltet, was mit der Erzeugung eines Signals einhergeht. Another means for specific binding to YB-1 and thus for the detection of a cell cycle-independent localization of YB-1 in the cell nucleus are the so-called aptamers, ie D-nucleic acid, which are present on a RNA or DNA basis either as a single strand or as a double strand and specifically bind to a target molecule. The production of aptamers is described, for example, in European patent EP 0 533 838. A special form of aptamers are the so-called aptazymes, which are described, for example, by Piganeau, N. et al. ( 2000 ), Angew. Chem. Int. Ed., 39, No. 29, pages 4369-4373. This is a special embodiment of aptamers in that, in addition to the aptamer portion, they also have a ribozyme portion and after binding or release of the target molecule binding to the aptamer portion, the ribozyme portion becomes catalytically active and cleaves a nucleic acid substrate, which is accompanied by the generation of a signal ,

Eine weitere Form der Aptamere stellen sogenannte Spiegelmere dar, d. h. zielmolekülbindende Nukleinsäuren, die aus L-Nukleinsäuren hergestellt sind. Das Verfahren zur Herstellung dieser Spiegelmere ist beispielsweise beschrieben in WO 98/08856. Another form of aptamers are so-called Spiegelmers, i.e. H. target-binding nucleic acids that are made from L-nucleic acids. The procedure for Production of these Spiegelmers is described, for example, in WO 98/08856.

Die Probe des Tumorgewebes kann dabei durch Punktion oder durch einen chirurgischen Eingriff erhalten werden. Die Feststellung, ob im Kern YB-1 Zellzyklus unabhängig lokalisiert ist, wird dabei häufig unter Verwendung mikroskopischer Techniken und/oder mittels Immunhistoanalyse, typischerweise unter Verwendung von Antikörpern oder einem der weiteren vorstehenden Mitteln erfolgen. Weitere Verfahren zum Nachweis, dass YB-1 im Kern und insbesondere dort Zellzyklus unabhängig lokalisiert ist, sind dem Fachmann bekannt. Beispielsweise kann bei dem Durchmustern von gegen YB-1 gefärbten Gewebeschnitten die Lokalisation von YB-1 leicht erkannt werden. Dabei ergibt sich bereits infolge der Häufigkeit des Auftretens von YB-1 im Kern, dass es sich um eine Zellzyklus unabhängige Lokalisation im Kern handelt. Eine weitere Möglichkeit zum Zellzyklus-unabhängigen Nachweis von YB- 1 im Kern besteht in der Durchführung einer Färbung gegen YB-1 und Feststellen, ob YB-1 im Kern lokalisiert ist, und Durchführung der Bestimmung des Zellstadiums der Zellen. Dies bzw. die Detektion von YB-1 kann aber auch unter Verwendung der vorstehend genannten, gegen YB-1 gerichteten Mittel erfolgen. Der Nachweis der Mittel erfolgt dabei durch Verfahrensweisen, die den Fachleuten auf dem Gebiet bekannt sind. Dadurch, dass die besagten Mittel spezifisch gegen YB-1 gerichtet sind und insoweit nicht an andere Strukturen innerhalb der zu untersuchenden Probe, insbesondere der Zellen, binden, kann durch eine geeignete Markierung der Mittel deren Lokalisierung und infolge der spezifischen Bindung an YB-1 auch die Lokalisierung von YB-1 entsprechend nachgewiesen und festgestellt werden. Verfahren zum Markieren der Mittel sind den Fachleuten auf dem Gebiet bekannt. The sample of the tumor tissue can be obtained by puncture or by surgery. The determination as to whether the nucleus YB-1 cell cycle is located independently is often carried out using microscopic techniques and / or by means of immunohistoanalysis, typically using antibodies or one of the other means mentioned above. Other methods for detecting that YB-1 is independently located in the nucleus and in particular in the cell cycle are known to the person skilled in the art. For example, when screening tissue sections stained against YB-1, the location of YB-1 can be easily recognized. The frequency of the occurrence of YB-1 in the nucleus already shows that it is a cell cycle-independent localization in the nucleus. Another possibility for the cell cycle-independent detection of YB- 1 in the nucleus is to carry out a staining against YB-1 and to determine whether YB-1 is located in the nucleus and to determine the cell stage of the cells. However, this or the detection of YB-1 can also be carried out using the abovementioned means directed against YB-1. Proof of funds is provided through procedures that are known to those skilled in the art. The fact that the said agents are specifically directed against YB-1 and so far do not bind to other structures within the sample to be examined, in particular the cells, means that the agents can also be localized by a suitable labeling of the agents and because of the specific binding to YB-1 the localization of YB-1 can be demonstrated accordingly. Methods for labeling the agents are known to those skilled in the art.

Die vorliegende Erfindung soll im folgenden anhand der Figuren und Beispiele weiter veranschaulicht werden, wobei sich daraus neue Merkmale, Ausführungsformen und Vorteile der Erfindung ergeben. Dabei zeigt The present invention is to be further described below with reference to the figures and examples are illustrated, resulting in new features, embodiments and advantages of Invention result. It shows

Fig. 1 den strukturellen Aufbau der adenoviralen Vektoren AdE1/E3-minus Adenovirus, Wildtyp-Adenovirus und Adenovirus dl520; FIG. 1 shows the structural design of adenoviral vectors ade1 / E3 minus adenovirus, wild-type adenovirus and adenovirus dl520;

Fig. 2 die Bindungsdomänen des E1A-Proteins hinsichtlich der Bindung von p300, p107 und p105; FIG. 2 shows the binding domains of E1A protein for binding of p300, p107 and p105;

Fig. 3 U2OS-Zellen, welche nicht YB-1 im Kern aufweisen, nach Infektion mit E1-Adenoviren und dl520; Fig. 3 U2OS cells which do not YB-1 in the nucleus, after infection with E1 adenoviruses and dl520;

Fig. 4 257RDB-Zellen, welche YB-1 im Kern aufweisen, nach Infektion mit E1/E3-minus Adenoviren und Adenovirus dl520; FIG. 4,257RDB cells which have YB-1 in the nucleus after infection with E1 / E3-minus adenoviruses and adenovirus dl520;

Fig. 5 257RDB-Zellen und U2OS-Zellen, nach Infektion mit dem Adenovirus dl1119/1131; Fig. 5 257RDB cells and U2OS cells after infection with the adenovirus dl1119 / 1131;

Fig. 6 das Ergebnis einer EMSA-Analyse, womit belegt wird, dass YB-1 in den vielfachresistenten Zellen bzw. Zelllinien 257RDB, 181 RDB, MCF-7Ad- im Zellkern vorhanden ist, wohingegen YB-1 in U2OS und HeLa-Zellen nicht im Kern vorhanden ist; und Fig the result of an EMSA analysis is thus occupied. 6, YB-1 is present in the multi-resistant cells or cell lines 257 RPV 181 RPV, MCF-7Ad- in the nucleus, whereas YB-1 in U2OS and HeLa cells does not exist in the core; and

Fig. 7 den strukturellen Aufbau des E1A-Proteins vom Wildtyp-Adenovirus, von Adenovirus dl520 und Adenovirus dl1119/1131 Fig. 7 shows the structural arrangement of the E1A protein from wild-type adenovirus, dl520 adenovirus and adenovirus dl1119 / 1131

Beispiel 1example 1 Strukturen von E1A-Modifikationen, wie sie von den erfindungsgemäß verwendeten Adenoviren aufgewiesen werden könnenStructures of E1A modifications, such as those of the invention adenovirus used can be demonstrated

Fig. 1 zeigt den strukturellen Aufbau der adenoviralen Vektoren AdE1/E3-minus, Wildtyp- Adenovirus und Adenovirus dl520. Fig. 1 shows the structural design of adenoviral vectors ade1 / E3 minus, wild-type adenovirus and adenovirus dl520.

Das Adenovirus AdE1/E3-minus weist keine für E1A und keine für E1B und keine für E3 codierenden Bereiche auf und dient im Rahmen der durchgeführten Experimente als Toxizitätskontrolle The adenovirus AdE1 / E3-minus has none for E1A and none for E1B and none for E3 coding areas and serves as a part of the experiments toxicity control

Dem gegenüber weist das Adenovirus dl520 einen Bereich auf, der für ein modifiziertes E1A- Protein kodiert. Genauer kodiert E1A für zwei unterschiedliche Proteine, nämlich ein 289 Aminosäuren großes Protein und ein 243 Aminosäuren großes Protein. Beide entstehen durch unterschiedliches splicing der RNA von E1A, wobei unter anderem zwei verschiedene mRNAs, die 12S- und 13S-E1A mRNA, entstehen. Der erfindungsgemäß verwendbare Adenovirus dl520 ist somit ein unter Fachleuten als 12S-E1A bezeichneter Virus. Der im Stand der Technik bekannte Adenovirus dl347 (Wong und Ziff, J. Virol., 68, 4910-4920, 1994) ist ebenfalls ein 12S-E1A Virus, der erfindungsgemäß verwendet wird kann. In contrast, the adenovirus dl520 has an area that is suitable for a modified E1A Encodes protein. More specifically, E1A codes for two different proteins, namely a 289 Amino acid protein and a 243 amino acid protein. Both arise through Different splicing of the RNA of E1A, including two different ones mRNAs, the 12S and 13S-E1A mRNA, arise. The usable according to the invention Adenovirus dl520 is thus a virus known by experts as 12S-E1A. The one in the booth adenovirus dl347 known in the art (Wong and Ziff, J. Virol., 68, 4910-4920, 1994) also a 12S-E1A virus that can be used according to the invention.

Innerhalb des 289 Aminosäuren großen Proteins, welches von 13S-E1A mRNA kodiert wird, gibt es wiederum 3 Bereiche, die bei den unterschiedlichen adenoviralen Subtypen konserviert vorliegen. Diese werden als CR1, CR2 und CR3 bezeichnet. Während CR1 und CR2 bei beiden E1A-Proteinen (E1A 12S und E1A 13S) vorkommt, d. h. sowohl bei dem 289 Aminosäure langen wie auch bei dem 243 Aminosäure langen Protein, ist der CR3-Bereich nur bei dem größeren der beiden vorstehend genannten Proteine zu finden. Within the 289 amino acid protein encoded by 13S-E1A mRNA, there are again 3 areas in the different adenoviral subtypes are conserved. These are called CR1, CR2 and CR3. During CR1 and CR2 at both E1A proteins (E1A 12S and E1A 13S) occur, i.e. H. both in the 289 Amino acid long as with the 243 amino acid long protein, the CR3 range is only at the larger of the two proteins mentioned above.

Der CR3-Bereich wird für die Aktivierung der viralen Gene, insbesondere von E1B, E2, E3 und E4 benötigt. Viren, die nur das kleinere Protein aufweisen (243 Aminosäure lang), transaktivieren nur sehr schwach die viralen Gene und führen keine adenovirale Replikation in solchen Zellen durch, die YB-1 nicht im Kern aufweisen. Da YB-1 nur in Tumorzellen im Kern vorliegt bzw. nachweisbar ist, eignet sich dieser Vektor, um eine tumorspezifische Replikation zu induzieren. The CR3 area is used for the activation of the viral genes, in particular of E1B, E2, E3 and E4 needed. Viruses that have only the smaller protein (243 amino acids long) transactivate the viral genes only very weakly and do not induce adenoviral replication cells that do not have YB-1 in the nucleus. Since YB-1 is only found in tumor cells in the Nucleus is present or is detectable, this vector is suitable for a tumor-specific To induce replication.

Durch die Deletion von CR3 in dl520 ist dieser Adenovirus nicht in der Lage, zelluläres YB-1 in den Zellkern zu translokalisieren (hierin auch als Translozieren bezeichnte), und somit auch nicht in der Lage, in YB-1-Kern-negativen Zellen zu replizieren und stellt damit einen der erfindungsgemäß zu verwendenden Viren dar, wobei dieser Virus die erfindungsgemäß erforderliche Transaktivierung aufweist. Due to the deletion of CR3 in dl520, this adenovirus is unable to produce cellular YB-1 translocate into the cell nucleus (also referred to herein as translocate), and thus also unable to replicate in YB-1 nucleus negative cells and thus represents one of the viruses to be used according to the invention, this virus being the invention required transactivation.

Beispiel 2Example 2 Wirkmechanismus von Adenoviren in Abhängigkeit des Rb-Status von ZellenMechanism of action of adenoviruses depending on the Rb status of cell

In Fig. 2 sind die Bindungsdomänen des E1A-Proteins hinsichtlich der Bindung von p300, p107 und p105 dargestellt. P300 ist dabei ebenso wie p107 ein zelluläres Bindungsprotein. Die Bindung des Retinoblastoma-Proteins (pRb), ein Tumorsuppressor-Protein, erfolgt über CR1 und CR2. Studien haben gezeigt, dass pRb und p107/p300 in Verbindung mit dem zellulären Transkriptionsfaktor E2F eine transkriptionelle Regulation ausüben. Das Wildtyp E1A- Protein unterbricht die Bindung von E2F an Rb. Das solchermaßen freigesetzte E2F bindet an den E2 early Promotor und induziert dadurch die adenovirale Replikation. In FIG. 2, the binding domain of the E1A protein in binding of p300, p107 and p105 are shown. Like p107, P300 is a cellular binding protein. Retinoblastoma protein (pRb), a tumor suppressor protein, is bound via CR1 and CR2. Studies have shown that pRb and p107 / p300 in conjunction with the cellular transcription factor E2F exert a transcriptional regulation. The wild-type E1A protein interrupts the binding of E2F to Rb. The E2F released in this way binds to the E2 early promoter and thereby induces adenoviral replication.

Es ist im Stand der Technik bekannt, dass bestimmte Deletionen im E1A-Onkoprotein dazu führen, dass rekombinante adenovirale Vektoren wie die nachstehend genannten vornehmlich in Rb-negativen Zellen zur Replikation befähigt ist und erfindungsgemäß verwendet werden können. Zum Beispiel weist der adenovirale Vektor dl922-947 eine Deletion in der CR2- Region auf (Aminoäurepositionen 122-129) und der Vektor CB016 Deletionen in den Bereichen CR1 (Aminoäurepositionen 27-80) und CR2 (Aminoäurepositionen 122-129). Der Vektor E1Adl01/07 weist eine Deletion in der CR2-Bereich auf (Aminoäurepositionen 111-123). Durch eine zusätzliche Deletion am N-Terminus (Aminoäurepositionen 4-25), erfolgt zudem keine Bindung an das Protein p300. Der adenovirale Vektor AdA24 weist eine Deletion in der CR2-Region auf (Aminoäurepositionen 120-127). Der im Patent EP 0 931 830 beschriebene adenovirale Vektor weist Deletionen in der CR1 und CR2-Bereich auf. It is known in the prior art that certain deletions in the E1A oncoprotein lead to the fact that recombinant adenoviral vectors such as those mentioned below are primarily capable of replication in Rb-negative cells and can be used according to the invention. For example, the adenoviral vector dl922-947 has a deletion in the CR2 region (amino acid positions 122-129 ) and the vector CB016 deletions in the regions CR1 (amino acid positions 27-80 ) and CR2 (amino acid positions 122-129 ). The vector E1Adl01 / 07 has a deletion in the CR2 region (amino acid positions 111-123 ). An additional deletion at the N-terminus (amino acid positions 4-25 ) also prevents binding to the protein p300. The adenoviral vector AdA24 has a deletion in the CR2 region (amino acid positions 120-127 ). The adenoviral vector described in patent EP 0 931 830 has deletions in the CR1 and CR2 region.

Der Bindungsmechanismus von E2F/RB und die durch E1A vermittelte Freisetzung von E2F ist grundlegend verschieden von dem der vorliegenden Erfindung zugrunde liegenden Mechanismus. Nicht die Freisetzung von E2F vom Rb-Protein ist, wie im Stand der Technik angenommen, ein wichtiger, um nicht zu sagen der entscheidende Vorgang der adenoviralen Replikation, sondern die Kernlokalisation des humanen Transkriptionsfaktors YB-1. Dieser Transkriptionsfaktor kommt in normalen Zellen über den größten Teil des Zellzyklus lediglich im Zytoplasma vor. Nach Infektion mit einem Adenovirus wird dieser unter bestimmten Bedingungen in den Kern induziert oder liegt bei bestimmten zellulären Systemen wie bestimmten Tumorerkrankungen, wie z. B. aber nicht darauf beschränkt, Brustkrebs, Ovarialkarzinom, Prostatakarzinom, Osteosarkom, Glioblastom, Melanom, kleinzelliges Lungenkarzinom und Kolorektalkarzinom, bereits im Kern vor. The binding mechanism of E2F / RB and the release of E2F mediated by E1A is fundamentally different from that on which the present invention is based Mechanism. The release of E2F from the Rb protein is not as in the prior art assumed an important, if not to say the crucial, process of adenoviral Replication, but the core localization of the human transcription factor YB-1. This Transcription factor occurs in normal cells through most of the cell cycle only in the cytoplasm. After infection with an adenovirus, this is determined under Conditions induced in the nucleus or located in certain cellular systems such as certain tumor diseases, such as B. but not limited to breast cancer, Ovarian cancer, prostate cancer, osteosarcoma, glioblastoma, melanoma, small cell Lung cancer and colorectal cancer, already in the core.

Beispiel 3Example 3 Infektion von U2OS-ZellenInfection of U2OS cells

Pro Schale wurden 100.000 Zellen ausplattiert. Am nächsten Tag wurden die Zellen wie im Bild angezeigt mit den verschiedene Adenoviren infiziert. Die Infektion erfolgte in 500 µL serumfreie DMEM-Medium für 1 h bei 37°C. Anschließend wurde das Infektionsmedium entfernt und durch 2 ml Vollmedium (10% FKS/DMEM) ersetzt. Nach 3 Tagen erfolgte die Auswertung mit Hilfe einer Kristallviolettfärbung. 100,000 cells were plated out per dish. The next day, the cells were infected with the various adenoviruses as shown in the picture. The infection took place in 500 µL serum-free DMEM medium for 1 h at 37 ° C. The infection medium was then removed and replaced by 2 ml of complete medium (10% FKS / DMEM). After 3 days, the evaluation was carried out using crystal violet staining.

Wie aus Fig. 3 ersichtlich zeigen die U2OS Zellen, welche YB-1 nicht im Kern aufweisen, nach Infektion mit zwei verschiedenen Adenoviren, nämlich E1/E3-minus Adenovirus und Adenovirus dl520, der erfindungsgemäß verwendet werden kann, keine Lyse, wie durch Kristallviolettfärbung der Zellen dargestellt. As seen from Fig. 3, the U2OS show cells which YB-1 is not in the nucleus, after infection with two different adenoviruses, namely E1 / E3-minus adenovirus and adenovirus dl520, which can be used according to the invention, no lysis, as determined by crystal violet staining of the cells.

Dies bestätigt die der vorliegenden Erfindung zugrundeliegende Erkenntnis, dass das Vorhandensein von YB-1 erforderlich ist, um die erfindungsgemäß zu verwendenden Viren zu einer Lyse von infizierten Zellen zu veranlassen. This confirms the knowledge on which the present invention is based that the The presence of YB-1 is required in order to convert the viruses to be used according to the invention To cause lysis of infected cells.

Beispiel 4Example 4 Infektion von 257RDB-ZellenInfection of 257RDB cells

Pro Schale wurden 100.000 Zellen ausplattiert. Am nächsten Tag wurden die Zellen wie im Bild angezeigt mit den verschiedene Adenoviren infiziert. Die Infektion erfolgte in 500 µL serumfreiem DMEM-Medium für 1 h bei 37°C. Anschließend wurde das Infektionsmedium entfernt und durch 2 ml Vollmedium (10% FKS/DMEM) ersetzt. Nach 3 Tagen erfolgte die Auswertung mit Hilfe einer Kristallviolettfärbung (0.5% Kristallviolett in 20% Methanol). 100,000 cells were plated out per dish. The next day, the cells were infected with the various adenoviruses as shown in the picture. The infection occurred in 500 µL serum-free DMEM medium for 1 h at 37 ° C. The infection medium was then removed and replaced by 2 ml of complete medium (10% FKS / DMEM). After 3 days, the evaluation was carried out using crystal violet staining (0.5% crystal violet in 20% methanol).

Das Ergebnis dieses Versuchs ist in Fig. 4 dargestellt. Das Adenovirus E1/E3-minus Ad5 zeigt keine Lyse bei Infektion von 257RDB-Zellen, die YB-1 im Kern aufweisen. Im Gegensatz dazu zeigt dl520, welcher wie in Beispiel 3 belegt, in YB-1-kernnegativen Zellen nicht repliziert und gleichzeitig mit E1A für ein im Sinne der vorliegenden transaktivierendes Onkogenprotein codiert, eine praktisch vollständige Lyse bei einer MOI (engl. multiplicity of infection) von 40 pfu pro Zelle und eine noch überwiegende Lyse bei einer MOI von 10 pfu pro Zelle. The result of this experiment is shown in Fig. 4. The adenovirus E1 / E3-minus Ad5 shows no lysis when 257RDB cells are infected which have YB-1 in the nucleus. In contrast, dl520, which, as demonstrated in Example 3, does not replicate in YB-1 nuclear-negative cells and at the same time codes with E1A for a transactivating oncogene protein in the sense of the present, shows a practically complete lysis in a MOI (multiplicity of infection) of 40 pfu per cell and a still predominant lysis with an MOI of 10 pfu per cell.

Wie in Fig. 7 dargestellt zeichnet sich das E1A-Protein von dl520 dadurch aus, dass der Bereich CR3 davon deletiert ist, was zu der für die erfindungsgemäße Verwendung des Adenovirus erforderlichen Transaktivierung und Replikation in YB-1-kernpositiven Zellen führt. As shown in FIG. 7, the E1A protein of dl520 is distinguished in that the region CR3 is deleted therefrom, which leads to the transactivation and replication in YB-1 nucleus-positive cells required for the use of the adenovirus according to the invention.

Beispiel 5Example 5 Infektion von 257RDB und U2OS-Zellen mit dl1119/1131Infection of 257RDB and U2OS cells with dl1119 / 1131

Wie in Fig. 5 dargestellt kommt es bei Infektion von YB-1-kernnegativen Zellen U2OS mit dem Adenovirus dl1119/1131(Deletion der E1A-Aminosäuren 4-138 und Stop-Codon nach Aminosäure 218, wodurch das exprimierte verkürzte E1A-Protein die CR3-Region des vollständigen E1A-Proteins enthält) bei einer MOI von 20 pfu pro Zelle zu keiner Lyse. Als Negativkontrolle wurde ein nicht-infizierter Zellrasen herangezogen. As shown in Fig. 5, when YB-1 nuclear negative cells U2OS are infected with adenovirus dl1119 / 1131 (deletion of E1A amino acids 4-138 and stop codon after amino acid 218) , the expressed truncated E1A protein causes CR3 Region of the complete E1A protein contains) at an MOI of 20 pfu per cell for no lysis. A non-infected cell lawn was used as a negative control.

Im Gegensatz dazu zeigt sich unter dem Einfluss von Adenovirus dl1119/1131 in einem zellulären System wie 257RDB, welches YB-1 im Kern aufweist, d. h. YB-1-kernpositiv ist, bereits bei einer MOI von 20 pfu pro Zelle eine praktisch vollständige Lyse des Zellrasens. Insoweit findet sich auch mit diesem Beispiel ein Beleg für die Aussage, dass ein modifiziertes E1A-Onkogenprotein, welches, wie in Fig. 7 dargestellt, beispielsweise lediglich den CR3- Bereich umfasst und dem der Bereich CR1 sowie CR2 fehlt, die für die erfindungsgemäße Verwendung von Adenoviren erforderliche Transaktivierung zeigt. Der Adenovirus dl1119/1131 stellt somit einen weiteren, erfindungsgemäß verwendbaren Adenovirus dar. In contrast, under the influence of adenovirus dl1119 / 1131 in a cellular system such as 257RDB, which has YB-1 in the nucleus, ie YB-1 nucleus-positive, a practically complete lysis of the is already shown at an MOI of 20 pfu per cell cell sheet. In this respect, there is also evidence in this example for the statement that a modified E1A oncogene protein which, as shown in FIG. 7, for example only comprises the CR3 area and which lacks the area CR1 and CR2, is required for the use according to the invention shows transactivation required by adenoviruses. The adenovirus dl1119 / 1131 thus represents another adenovirus that can be used according to the invention.

Beispiel 6Example 6

Nachweis von nuklärem YB-1 bei vielfachresistenten ZellenDetection of nuclear YB-1 in multi-resistant cells

Dem Experiment liegt die Überlegung zugrunde, das nukläres YB-1 als Transkriptionsfaktor an die Y-Box (CAAT-Sequenz) innerhalb des mdr1-Promoters (engl. multiple drug resistance promoter) binden sollte. Um dies nachzuweisen, wurde eine sogenannte EMSA-Analyse (electrophoretic mobility shift assay) durchgeführt. Dabei wird Kernprotein isoliert und anschließend werden 1-10 µg Protein mit einem kurzen DNA-Fragment (Oligo) zusammen bei 37 C inkubiert. Um nukläres YB-1 zu bestimmen, wurde folgendes Oligonukleotid benutzt: mdr1 promoter im Unterschied zu U205 (Position-86 bis -67): TGAGGCTGATTGGCTGGGCA (die Y-box ist unterstrichen). Dieses DNA-Fragment wird zuvor mit einer Kinase am 5'-Ende mit ³²P radiaktiv markiert. Anschließend erfolgt die Auftrennung in einem nativen Polyacrylamidgel. Falls das Protein YB-1 an einer Sequenz am Oligonucleotid bindet, ist dies zu erkennen, da ungebundenes Oligo im Gel schneller wandert als das gebundene Oligonucleotid (Holm, P. S. et al., JBC 277, 10427-10434, 2002; Bargou, R. C. et al., Nature Medicine 3, 447-450, 1997). The experiment is based on the idea that nuclear YB-1 as a transcription factor should bind to the Y box (CAAT sequence) within the mdr1 promoter (multiple drug resistance promoter). To prove this, a so-called EMSA analysis (electrophoretic mobility shift assay) was carried out. Core protein is isolated and then 1-10 µg protein with a short DNA fragment (oligo) are incubated together at 37 ° C. The following oligonucleotide was used to determine nuclear YB-1: mdr1 promoter in contrast to U205 (position-86 to -67): TGAGGCTGATTGGCTGGGCA (the Y-box is underlined). This DNA fragment is previously radioactively labeled with ³² P using a 5 'end kinase. The separation is then carried out in a native polyacrylamide gel. If the protein YB-1 binds to a sequence on the oligonucleotide, this can be seen since unbound oligo migrates faster in the gel than the bound oligonucleotide (Holm, PS et al., JBC 277 , 10427-10434, 2002; Bargou, RC et al., Nature Medicine 3 , 447-450 , 1997 ).

Wie in Fig. 6 dargestellt, konnte im Rahmen einer EMSA-Analyse gezeigt werden, dass YB-1 in den vielfachresistenten Zellen 257RDB, 181RDB und MCF-7Ad-Zellen im Kern im Gegensatz zu den Zelllinien U2OS und HeLa-Zellen vorhanden ist. As shown in FIG. 6, it could be shown in an EMSA analysis that YB-1 is present in the multi-resistant cells 257 RDB, 181RDB and MCF-7Ad cells in the nucleus in contrast to the cell lines U2OS and HeLa cells.

Die in Beispiel 4 und 5 gezeigten Ergebnisse belegen, dass die Adenoviren dl520 und dl1119/1131 in YB-1-kernpositiven Zellen wie z. B. 257RDB im Unterschied zu U205 replizieren und eine Zellyse induzieren. Dies belegt somit die Aussage der erfindungsgemäßen Verwendung der Adenoviren. Weiterhin belegen die Ergebnisse, dass bereits eine sehr schwache Transaktivierung der viralen Gene durch die modifizierten deletierten E1A-Genprodukte bei Anwesenheit von YB-1 im Zellkern erfolgreich mit einer Replikation und Lyse von vielfachresistenten Zellen einhergeht und somit die hierin beschriebenen Adenoviren bei der Lyse derartiger Tumoren verwendet werden können. The results shown in Examples 4 and 5 demonstrate that the adenoviruses dl520 and dl1119 / 1131 in YB-1 nuclear positive cells such as B. 257RDB in contrast to U205 replicate and induce cell lysis. This thus confirms the statement of the invention Use of the adenoviruses. Furthermore, the results prove that a very weak transactivation of the viral genes by the modified deleted E1A gene products in the presence of YB-1 in the cell nucleus successfully with replication and lysis of multiple resistant cells and thus the adenoviruses described here during lysis such tumors can be used.

Die in der vorstehenden Beschreibung, den Ansprüchen sowie den Zeichnungen offenbarten Merkmale der Erfindung können sowohl einzeln als auch in beliebigen Kombinationen für die Verwirklichung der Erfindung in ihren verschiedenen Ausführungsformen wesentlich sein. Those disclosed in the above description, the claims and the drawings Features of the invention can be used both individually and in any combination for the Realization of the invention in its various embodiments may be essential.

Claims

1. Verwendung eines Adenovirus zur Herstellung eines Medikamentes, dadurch gekennzeichnet, dass der Adenovirus replikationsdefizient ist in Zellen, die YB-1 nicht im Kern aufweisen, und der Adenovirus für ein Onkogen oder Onkogenprodukt codiert, das zumindest ein virales Gen, bevorzugterweise ein adenovirales Gen, transaktiviert, wobei das Gen ausgewählt ist aus der Gruppe, die E1B55kDa, E4orf6, E4orf3 und E3ADP umfasst. 1. Use of an adenovirus for the manufacture of a medicament, characterized in that the adenovirus is replication-deficient in cells which do not have YB-1 in the nucleus, and the adenovirus codes for an oncogene or oncogene product which has at least one viral gene, preferably an adenoviral gene , transactivated, the gene being selected from the group comprising E1B55kDa, E4orf6, E4orf3 and E3ADP.

2. Verwendung eines Adenovirus zur Replikation in Zellen, die YB-1 im Kern aufweisen, dadurch gekennzeichnet, dass der Adenovirus replikationsdefizient ist in Zellen, die YB-1 nicht im Kern aufweisen, und der Adenovirus für ein Onkogen oder Onkogenprodukt codiert, das zumindest ein virales Gen, bevorzugterweise ein adenovirales Gen, transaktiviert, wobei das Gen ausgewählt ist aus der Gruppe, die E1B55kDa, E4orf6, E4orf3 und E3ADP umfasst. 2. Using an adenovirus for replication in cells that have YB-1 in the nucleus have, characterized in that the adenovirus is replication deficient in Cells that do not have YB-1 in the nucleus and the adenovirus for an oncogene or Oncogene product encoding the at least one viral gene, preferably a adenoviral gene, transactivated, the gene being selected from the group consisting of E1B55kDa, E4orf6, E4orf3 and E3ADP.

3. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 2, dadurch gekennzeichnet, dass der Adenovirus in Zellen repliziert, die YB-1 im Kern aufweisen. 3. Use according to one of claims 1 to 2, characterized in that the Adenovirus replicated in cells that have YB-1 in the nucleus.

4. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass das virale Onkoprotein E1A ist und/oder das Onkogen das für E1A codierende Gen und/oder das Onkogenprotein E1A ist. 4. Use according to one of claims 1 to 3, characterized in that the viral oncoprotein E1A and / or the oncogene is the gene coding for E1A and / or the oncogene protein is E1A.

5. Verwendung nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass das virale Onkoprotein E1A zur Bindung eines funktionellen Rb-Tumorsuppressor-Genprodukts fähig ist. 5. Use according to claim 4, characterized in that the viral oncoprotein E1A is capable of binding a functional Rb tumor suppressor gene product.

6. Verwendung nach Anspruch 4, dadurch gekennzeichnet, dass das virale Onkoprotein E1A zur Bindung eines funktionellen Rb-Tumorsuppressor-Genprodukts nicht fähig ist. 6. Use according to claim 4, characterized in that the viral oncoprotein E1A unable to bind a functional Rb tumor suppressor gene product is.

7. Verwendung nach einem der Ansprüche 4 bis 6, dadurch gekennzeichnet, dass das virale Onkoprotein E1A nicht die nukläre Lokalisation von YB-1 induziert. 7. Use according to one of claims 4 to 6, characterized in that the viral oncoprotein E1A did not induce the nuclear localization of YB-1.

8. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 oder 3 bis 7 dadurch gekennzeichnet, dass das Medikament für Patienten ist, deren Zellen Rb-positiv oder Rb-negativ sind. 8. Use according to one of claims 1 or 3 to 7, characterized in that the drug is for patients whose cells are Rb positive or Rb negative.

9. Verwendung nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, dass die Zellen diejenigen Zellen sind, die an der Ausbildung des Zustandes beteiligt sind, der mit dem Medikament beeinflusst werden soll. 9. Use according to claim 8, characterized in that the cells are those Are cells that are involved in the formation of the state associated with the Drug should be influenced.

10. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 9, dadurch gekennzeichnet, dass die Zellen Rb-negativ und im Zellkern YB-1 positiv, insbesondere unabhängig vom Zellzyklus im Zellkern YB-1 positiv sind. 10. Use according to one of claims 1 to 9, characterized in that the Rb negative cells and YB-1 nucleus positive, especially independent of Cell cycle in the nucleus YB-1 are positive.

11. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 oder 3 bis 10, dadurch gekennzeichnet, dass das Medikament für die Behandlung von Tumoren ist. 11. Use according to one of claims 1 or 3 to 10, characterized in that the drug is for the treatment of tumors.

12. Verwendung nach Anspruch 11, dadurch gekennzeichnet, dass die Zellen, insbesondere die den Tumor oder Teile davon ausbildenden Zellen eine Mehrfachresistenz gegen pharmakologische Wirkstoffe, bevorzugter Weise Antitumormittel und bevorzugtererweise Zytostatika, aufweisen. 12. Use according to claim 11, characterized in that the cells especially the cells forming the tumor or parts thereof Multiple resistance to pharmacological agents, preferably Antitumor agents, and preferably cytostatics.

13. Verwendung nach Anspruch 12, dadurch gekennzeichnet, dass die Zellen eine Expression, bevorzugterweise eine Überexpression des membranständigen Transportproteins P-Glykoprotein zeigen. 13. Use according to claim 12, characterized in that the cells a Expression, preferably overexpression of the membrane Show transport protein P-glycoprotein.

14. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 13, dadurch gekennzeichnet, dass die Zellen p53-positiv oder p53-negativ sind. 14. Use according to one of claims 1 to 13, characterized in that the Cells are p53 positive or p53 negative.

15. Verwendung nach einem der Ansprüche 5 oder 7 bis 14, dadurch gekennzeichnet, dass das Onkogenprotein gegenüber dem Wildtyp-Onkogenprotein E1A eine oder mehrere Mutationen oder Deletionen aufweist, wobei die Deletion bevorzugt eine solche ist, die ausgewählt ist aus der Gruppe, die Deletionen des Bereichs CR3 und Deletionen des N-Terminus und Deletionen des C-Terminus umfasst. 15. Use according to one of claims 5 or 7 to 14, characterized in that the oncogene protein versus the wild-type oncogene protein E1A one or more Has mutations or deletions, the deletion preferably being one, which is selected from the group consisting of the deletions of the region CR3 and deletions of the N-terminus and deletions of the C-terminus.

16. Verwendung nach Anspruch 15, dadurch gekennzeichnet, dass das E1A- Onkogenprotein an Rb binden kann. 16. Use according to claim 15, characterized in that the E1A- Can bind oncogene protein to Rb.

17. Verwendung nach einem der Ansprüche 6 bis 14, dadurch gekennzeichnet, dass das Onkogenprotein gegenüber dem Wildtyp-Onkogenprotein eine oder mehrere Mutationen oder Deletionen aufweist, wobei die Deletion bevorzugt eine solche in der CR1-Region und/oder der CR2-Region ist. 17. Use according to one of claims 6 to 14, characterized in that the Oncogene protein versus the wild type oncogene protein one or more Has mutations or deletions, the deletion preferably being one in the CR1 region and / or the CR2 region.

18. Verwendung nach Anspruch 17, dadurch gekennzeichnet, dass das Onkogenprotein E1A nicht an Rb zu binden in der Lage ist. 18. Use according to claim 17, characterized in that the oncogene protein E1A is unable to bind to Rb.

19. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 18, dadurch gekennzeichnet, dass das virale Onkogenprotein, insbesondere E1A, unter der Kontrolle eines Gewebes- und/oder Tumor-spezifischen Promotors steht. 19. Use according to one of claims 1 to 18, characterized in that the viral oncogene protein, especially E1A, under the control of a tissue and / or tumor-specific promoter.

20. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 19, dadurch gekennzeichnet, dass der Adenovirus für YB-1 codiert. 20. Use according to one of claims 1 to 19, characterized in that the Adenovirus encoded for YB-1.

21. Verwendung nach Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet, dass YB-1 unter der Kontrolle eines Gewebe- und/oder Tumor-spezifischen Promotors steht. 21. Use according to claim 20, characterized in that YB-1 under the Control of a tissue and / or tumor-specific promoter is available.

22. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 21, dadurch gekennzeichnet, dass der Adenovirus für mindestens ein Protein codiert, das ausgewählt ist aus der Gruppe, die E4orf6, E4orf3, E1B55k und adenovirales E3ADP-Protein umfasst. 22. Use according to one of claims 1 to 21, characterized in that the Adenovirus encodes at least one protein selected from the group consisting of E4orf6, E4orf3, E1B55k and adenoviral E3ADP protein.

23. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 22 dadurch gekennzeichnet, dass die Zellen YB-1 im Kern aufweisen, insbesondere die den Tumor oder einen Teil davon ausbildenden Zellen YB-1 im Kern aufweisen. 23. Use according to one of claims 1 to 22, characterized in that the Have cells YB-1 in the nucleus, in particular those or part of the tumor forming cells YB-1 in the core.

24. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 23, dadurch gekennzeichnet, dass der Tumor YB-1 im Kern nach Induktion des Tranports von YB-1 in den Kern enthält. 24. Use according to one of claims 1 to 23, characterized in that the Contains tumor YB-1 in the nucleus after induction of the transport of YB-1 in the nucleus.

25. Verwendung nach Anspruch 20, dadurch gekennzeichnet, dass der Transport von YB- 1 in den Kern ausgelöst wird durch zumindest eine Maßnahme, die ausgewählt ist aus der Gruppe, die Bestrahlung, Gabe von Zytostatika und Hyperthermie umfasst. 25. Use according to claim 20, characterized in that the transport of YB- 1 into the core is triggered by at least one measure which is selected from the group comprising radiation, administration of cytostatics and hyperthermia.

26. Verwendung nach Anspruch 25, dadurch gekennzeichnet, dass die Maßnahme an einer Zelle, einem Organ oder einem Organismus angewandt wird. 26. Use according to claim 25, characterized in that the measure on a Cell, an organ or an organism is applied.

27. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 26, dadurch gekennzeichnet, dass der Adenovirus ausgewählt ist aus der Gruppe, die AdΔ24, dl922-947, E1Ad/01/07, dl1119/1131, CB 016, dl520, und Viren, denen ein exprimiertes virales Onkogen fehlt, das zur Bindung eines funktionellen Rb-Tumorsuppressor-Genprodukts fähig ist, umfasst. 27. Use according to one of claims 1 to 26, characterized in that the Adenovirus is selected from the group consisting of AdΔ24, dl922-947, E1Ad / 01/07, dl1119 / 1131, CB 016, dl520, and viruses lacking an expressed viral oncogene, capable of binding a functional Rb tumor suppressor gene product, includes.

28. Verwendung eines Adenovirus zur Herstellung eines Medikaments, wobei der Adenovirus so ausgebildet ist, dass die Replikation durch YB-1 über die Aktivierung des E2-Late-Promotors gesteuert wird, bevorzugterweise überwiegend über die Aktivierung des E2-Late-Promotors gesteuert wird. 28. Use of an adenovirus for the manufacture of a medicament, the Adenovirus is designed to replicate through YB-1 via activation of the E2 late promoter is controlled, preferably predominantly via the Activation of the E2 late promoter is controlled.

29. Verwendung eines Adenovirus zur Replikation in Zellen, die YB-1 im Kern aufweisen, dadurch gekennzeichnet, dass der Adenovirus so ausgebildet ist, dass die Replikation durch YB-1 über die Aktivierung des E2-Late-Promotors gesteuert wird, bevorzugterweise überwiegend über die Aktivierung des E2-Late-Promotors gesteuert wird. 29. Use of an adenovirus for replication in cells that have YB-1 in the nucleus have, characterized in that the adenovirus is designed so that the Replication is controlled by YB-1 via activation of the E2 late promoter, preferably controlled predominantly via the activation of the E2 late promoter becomes.

30. Virales Onkogenprotein, insbesondere isoliertes virales Onkogenprotein dadurch gekennzeichnet, dass dieses die folgenden Eigenschaften aufweist:

a) Transaktivierung mindestens eines viralen Gens, das ausgewählt ist aus der Gruppe, die E1B-55k, E3ADP und E4orf6 und E4orf3 umfasst; und

b) keine Induktion von YB-1 in einem Zellkern, insbesondere in dem Zellkern der Zelle, in der das virale Onkoprotein vorhanden ist.

30. Viral oncogene protein, in particular isolated viral oncogene protein, characterized in that it has the following properties:

a) transactivation of at least one viral gene which is selected from the group comprising E1B-55k, E3ADP and E4orf6 and E4orf3; and

b) no induction of YB-1 in a cell nucleus, in particular in the cell nucleus of the cell in which the viral oncoprotein is present.

31. Virales Onkogenprotein nach Anspruch 30, dadurch gekennzeichnet, dass das virale Onkoprotein E1A ist. 31. Viral oncogene protein according to claim 30, characterized in that the viral Oncoprotein E1A is.

32. Virales Onkogenprotein nach Anspruch 30 oder 31, dadurch gekennzeichnet, dass das virale Onkogenprotein gegenüber dem Wildtyp-Onkogenprotein eine oder mehrere Deletionen aufweist, wobei die Deletion bevorzugt eine solche ist, die ausgewählt ist aus der Gruppe, die Deletion des Bereichs CR3, Deletion des N-Terminus und Deletion des C-Terminus umfasst. 32. Viral oncogene protein according to claim 30 or 31, characterized in that the viral oncogene protein versus the wild type oncogene protein one or more Has deletions, wherein the deletion is preferably one that is selected from the group, the deletion of the region CR3, deletion of the N-terminus and Deletion of the C-terminus includes.

33. Virales Onkogenprotein nach Anspruch 32, dadurch gekennzeichnet, dass es an Rb zu binden in der Lage ist. 33. Viral oncogene protein according to claim 32, characterized in that it is attached to Rb is able to bind.

34. Virales Onkogenprotein nach Anspruch 30 oder 31, dadurch gekennzeichnet, dass das virale Onkogenprotein eine oder mehrer Mutationen oder Deletionen aufweist, wobei die Deletion bevorzugt eine solche in der CR1-Region und/oder der CR2-Region des E1A-Onkogenproteins ist. 34. Viral oncogene protein according to claim 30 or 31, characterized in that the viral oncogene protein has one or more mutations or deletions, wherein the deletion prefers one in the CR1 region and / or the CR2 region of the E1A oncogene protein.

35. Verwendung nach Anspruch 30, dadurch gekennzeichnet, dass das virale Onkogenprotein nicht in der Lage ist an Rb zu binden. 35. Use according to claim 30, characterized in that the viral Oncogene protein is unable to bind to Rb.

36. Verwendung eines adenoviralen Replikationssystems umfassend eine Nukleinsäure, die für ein Adenovirus gemäß einem der Ansprüche 1 bis 29 codiert, und umfassend eine Nukleinsäure eines Helfervirus, wobei die Nukleinsäure des Helfervirus eine Nukleinsäuresequenz umfasst, die für YB-1 codiert. 36. Use of an adenoviral replication system comprising a nucleic acid, encoding an adenovirus according to any one of claims 1 to 29, and comprising a nucleic acid of a helper virus, wherein the nucleic acid of the helper virus is a Nucleic acid sequence encoding encoding YB-1.

37. Verwendung eines adenoviralen Replikationssystems nach Anspruch 36, dadurch gekennzeichnet, dass die adenovirale Nukleinsäure und/oder die Nukleinsäure des Helfervirus als replizierbarer Vektor vorliegt. 37. Use of an adenoviral replication system according to claim 36, characterized characterized in that the adenoviral nucleic acid and / or the nucleic acid of the Helper virus is present as a replicable vector.

38. Verwendung einer Nukleinsäure codierend für einen Adenovirus gemäß einem der Ansprüche 1 bis 29 zur Herstellung eines Medikamentes, insbesondere zur Herstellung eines Medikamentes für die Behandlung von Tumoren. 38. Use of a nucleic acid coding for an adenovirus according to one of the Claims 1 to 29 for the manufacture of a medicament, in particular for the manufacture a drug for the treatment of tumors.

39. Verwendung nach Anspruch 38, dadurch gekennzeichnet, dass die Zellen, insbesondere die den Tumor oder Teile davon ausbildenden Zellen, eine Mehrfachresistenz gegen pharmakologische Wirkstoffe, bevorzugterweise Antitumormittel, und bevorzugtererweise Zytostatika, aufweisen. 39. Use according to claim 38, characterized in that the cells in particular the cells forming the tumor or parts thereof, a Multiple resistance to pharmacological agents, preferably Antitumor agents, and preferably cytostatics.

40. Verwendung einer Nukleinsäure, die für einen Adenvirus gemäß einem der Ansprüche 1 bis 29 codiert, zur Replikation in Zellen, die YB-1 im Kern aufweisen, dadurch gekennzeichnet, dass der Adenovirus replikationsdefizient ist in Zellen, die YB-1 nicht im Kern aufweisen, und der Adenovirus für ein Onkogen oder Onkogenprodukt codiert, das zumindest ein virales Gen, bevorzugterweise ein adenovirales Gen transaktiviert, wobei das Gen ausgewählt ist aus der Gruppe, die E1B55kDa, E4orf6, E4orf3 und E3ADP umfasst. 40. Use of a nucleic acid for an adenovirus according to one of the claims 1 to 29 encoded, thereby for replication in cells which have YB-1 in the nucleus characterized that the adenovirus is replication deficient in cells that do not have YB-1 have in the core, and the adenovirus for an oncogene or oncogene product encodes the at least one viral gene, preferably an adenoviral gene transactivated, the gene being selected from the group consisting of E1B55kDa, E4orf6, Includes E4orf3 and E3ADP.

41. Verwendung einer Nukleinsäure, die für einen Adenovirus gemäß einem der Ansprüche 1 bis 29 codiert zur Herstellung eines Medikamentes, wobei der Adenovirus so ausgebildet ist, dass die Replikation durch YB-1 über die Aktivierung des E2-Late-Promotors gesteuert wird, bevorzugterweise überwiegend über die Aktivierung des E2-Late-Promotors. 41. Use of a nucleic acid which is suitable for an adenovirus according to one of the Claims 1 to 29 encoded for the manufacture of a medicament, wherein the Adenovirus is designed to replicate through YB-1 via activation of the E2 late promoter is controlled, preferably predominantly via the Activation of the E2 late promoter.

42. Verwendung einer Nukleinsäure, die für einen Adenovirus gemäß einem der Ansprüche 1 bis 29 codiert, zur Replikation in Zellen, wobei der Adenovirus so ausgebildet ist, dass die Replikation durch YB-1 über die Aktivierung des E2-Late- Promotors gesteuert wird, bevorzugterweise überwiegend über die Aktivierung des E2-Late-Promotors gesteuert wird. 42. Use of a nucleic acid which is suitable for an adenovirus according to one of the Claims 1 to 29 encoded for replication in cells, the adenovirus being so is designed that the replication by YB-1 via the activation of the E2 late Promoter is controlled, preferably predominantly via the activation of the E2 late promoter is controlled.

43. Verwendung eines Vektors umfassend eine Nukleinsäure gemäß einem der Ansprüche 36 bis 42 zur Verwendung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 29. 43. Use of a vector comprising a nucleic acid according to one of the claims 36 to 42 for use according to any one of claims 1 to 29.

44. Verwendung eines mit YB-1 wechselwirkenden Mittels zur Charakterisierung von Zellen, Zellen eines Tumorgewebes oder Patienten, um zu bestimmen, ob diese(r) mit einem Adenovirus gemäß einem der Ansprüche 1 bis 29 kontaktiert werden sollen. 44. Use of an agent interacting with YB-1 to characterize Cells, cells of a tumor tissue or patient to determine whether they are associated with an adenovirus to be contacted according to any one of claims 1 to 29.

45. Verwendung nach Anspruch 44, dadurch gekennzeichnet, dass das Mittel ausgewählt ist aus der Gruppe, die Antikörper, Antikaline, Aptamere, Aptazyme und Spiegelmere umfasst. 45. Use according to claim 44, characterized in that the agent is selected is from the group consisting of antibodies, anticalins, aptamers, aptazymes and Spiegelmers includes.

46. Verwendung des viralen Onkogenproteins nach einem der Ansprüche 30 bis 35 oder einer dafür codierenden Nukleinsäure zur Herstellung eines Adenovirus, wie er im Rahmen der Verwendungen nach einem der Ansprüche 1 bis 29 verwendet wird. 46. Use of the viral oncogene protein according to any one of claims 30 to 35 or a nucleic acid coding therefor for producing an adenovirus as described in Framework of uses according to one of claims 1 to 29 is used.