DE102005031463A1 - Verfahren zur Verringerung der Verdunstungsgeschwindigkeit von Flüssigkeiten - Google Patents

Verfahren zur Verringerung der Verdunstungsgeschwindigkeit von Flüssigkeiten Download PDF

Info

Publication number
DE102005031463A1
DE102005031463A1 DE200510031463 DE102005031463A DE102005031463A1 DE 102005031463 A1 DE102005031463 A1 DE 102005031463A1 DE 200510031463 DE200510031463 DE 200510031463 DE 102005031463 A DE102005031463 A DE 102005031463A DE 102005031463 A1 DE102005031463 A1 DE 102005031463A1
Authority
DE
Germany
Prior art keywords
liquid
water
hydrophobin
barrier
hydrophobins
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Withdrawn
Application number
DE200510031463
Other languages
English (en)
Inventor
Thorsten Montag
Ulrich Dr. Karl
Ulf Dr. Baus
Claus Dr. Bollschweiler
Thomas Dr. Subkowski
Hans-Georg Dr. Lemaire
Marvin Dr. Karos
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
BASF SE
Original Assignee
BASF SE
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority to DE200510025969 priority Critical patent/DE102005025969A1/de
Application filed by BASF SE filed Critical BASF SE
Priority to DE200510031463 priority patent/DE102005031463A1/de
Priority to AU2006254154A priority patent/AU2006254154B2/en
Priority to PCT/EP2006/062735 priority patent/WO2006128877A1/de
Priority to PE2006000615A priority patent/PE20070059A1/es
Publication of DE102005031463A1 publication Critical patent/DE102005031463A1/de
Priority to ECSP078035 priority patent/ECSP078035A/es
Withdrawn legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C02TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02FTREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F1/00Treatment of water, waste water, or sewage
    • C02F1/68Treatment of water, waste water, or sewage by addition of specified substances, e.g. trace elements, for ameliorating potable water
    • BPERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B01PHYSICAL OR CHEMICAL PROCESSES OR APPARATUS IN GENERAL
    • B01JCHEMICAL OR PHYSICAL PROCESSES, e.g. CATALYSIS OR COLLOID CHEMISTRY; THEIR RELEVANT APPARATUS
    • B01J19/00Chemical, physical or physico-chemical processes in general; Their relevant apparatus
    • B01J19/16Preventing evaporation or oxidation of non-metallic liquids by applying a floating layer, e.g. of microballoons
    • BPERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B65CONVEYING; PACKING; STORING; HANDLING THIN OR FILAMENTARY MATERIAL
    • B65DCONTAINERS FOR STORAGE OR TRANSPORT OF ARTICLES OR MATERIALS, e.g. BAGS, BARRELS, BOTTLES, BOXES, CANS, CARTONS, CRATES, DRUMS, JARS, TANKS, HOPPERS, FORWARDING CONTAINERS; ACCESSORIES, CLOSURES, OR FITTINGS THEREFOR; PACKAGING ELEMENTS; PACKAGES
    • B65D90/00Component parts, details or accessories for large containers
    • B65D90/22Safety features
    • B65D90/38Means for reducing the vapour space or for reducing the formation of vapour within containers
    • B65D90/42Means for reducing the vapour space or for reducing the formation of vapour within containers by use of particular materials for covering surface of liquids
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C02TREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02FTREATMENT OF WATER, WASTE WATER, SEWAGE, OR SLUDGE
    • C02F2103/00Nature of the water, waste water, sewage or sludge to be treated
    • C02F2103/02Non-contaminated water, e.g. for industrial water supply
    • YGENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02WCLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES RELATED TO WASTEWATER TREATMENT OR WASTE MANAGEMENT
    • Y02W90/00Enabling technologies or technologies with a potential or indirect contribution to greenhouse gas [GHG] emissions mitigation
    • Y02W90/10Bio-packaging, e.g. packing containers made from renewable resources or bio-plastics

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Environmental & Geological Engineering (AREA)
  • Water Supply & Treatment (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Hydrology & Water Resources (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Application Of Or Painting With Fluid Materials (AREA)
  • Lubricants (AREA)
  • Fats And Perfumes (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Vaporization, Distillation, Condensation, Sublimation, And Cold Traps (AREA)

Abstract

Verfahren zur Verringerung der Verdunstungsgeschwindigkeit von Flüssigkeiten in offenen Flüssigkeitsreservoiren, bei dem man als Hilfsmittel mindestens ein Hydrophobin verwendet.

Description

  • Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Verringerung der Verdunstungsgeschwindigkeit von Flüssigkeiten in offenen Flüssigkeitsreservoiren bei dem man als Hilfsmittel mindestens ein Hydrophobin verwendet.
  • Industriewasser wird für bestimmte Bergbautechniken, beispielsweise im Diamanten-, Gold- oder Silberbergbau in großen Mengen benötigt, insbesondere zur Aufarbeitung und Trennung der Wertstoffe vom Abraum. Derartige Bergbaugebiete liegen häufig in heißen, ariden oder semiariden Gebieten, in denen Wasser knapp ist und häufig mit hohem Aufwand in die Bergbaugebiete transportiert werden muss. Industriewasser wird daher in der Regel mehrfach verwendet und zwischen einzelnen Anwendungen zwischengelagert. In der Regel erfolgt die Lagerung in offenen Flüssigkeitsreservoiren wie beispielsweise Speicherseen oder Ähnlichem.
  • Um die Verluste an Wasser durch Verdunstung zu verringern, ist es bekannt, auf die Wasseroberfläche Sperrschichten aus hochsiedenden Kohlenwasserstoffen, beispielsweise Dieselöl, aufzubringen, welche die Verdunstung von Wasser verringern soll. Diese Sperrschicht ist aber häufig nicht flächendeckend und homogen. Häufig bilden sich „Fettaugen" anstelle einer homogenen Schicht. Die Flüssigkeitsverluste durch Verdampfen sind daher trotz der Sperrschicht hoch.
  • Hydrophobine sind kleine Proteine von etwa 100 bis 150 Aminosäuren, die charakteristisch für filamentöse Pilze, beispielsweise Schizophyllum commune, sind.
  • Hydrophobine weisen eine ausgeprägte Affinität zu Grenzflächen auf und eignen sich daher zur Beschichtung von Oberflächen. So lässt sich beispielsweise Teflon mittels Hydrophobinen unter Erhalt einer hydrophilen Oberfläche beschichten.
  • Hydrophobine können aus natürlichen Quellen isoliert werden. Unsere ältere Anmeldung DE 102005007480.4 offenbart ein Herstellverfahren für Hydrophobine.
  • Im Stand der Technik ist die Verwendung von Hydrophobinen für verschiedene Anwendungen vorgeschlagen worden.
  • WO 96/41882 schlägt die Verwendung von Hydrophobinen als Emulgatoren, Verdicker, oberflächenaktive Substanzen, zum Hydrophilieren hydrophober Oberflächen, zur Verbesserung der Wasserbeständigkeit hydrophiler Substrate, zur Herstellung von Öl-in-Wasser-Emulsionen oder von Wasser-in-Öl-Emulsionen vor. Weiterhin werden pharmazeutische Anwendungen wie die Herstellung von Salben oder Cremes sowie kos metische Anwendungen wie Hautschutz oder die Herstellung von Haarshampoos oder Haarspülungen vorgeschlagen.
  • EP 1 252 516 offenbart die Beschichtung von Fenstern, Kontaktlinsen, Biosensoren, medizinischen Vorrichtungen, Behältern zur Durchführung von Versuchen oder zur Lagerung, Schiffrümpfen, festen Teilchen oder Rahmen oder Karosserie von Personenkraftwagen mit einer Hydrophobine enthaltenden Lösung bei einer Temperatur von 30 bis 80°C.
  • WO 03/53383 offenbart die Verwendung von Hydrophobin zum Behandeln von Keratin-Materialien in kosmetischen Anwendungen.
  • WO 03/10331 offenbart einen mit Hydrophobin beschichteten Sensor, beispielsweise eine Messelektrode, an den nicht kovalent weitere Substanzen, z.B. elektroaktive Substanzen, Antikörper oder Enzyme gebunden sind.
  • Die Verwendung von Hydrophobinen zur Verringerung der Verdunstungsgeschwindigkeit von Flüssigkeiten in offenen Flüssigkeitsreservoiren ist bislang noch nicht offenbart worden.
  • Aufgabe der Erfindung war es, ein verbessertes Verfahren zur Verringerung der Verdunstungsgeschwindigkeit von Flüssigkeiten in offenen Flüssigkeitsreservoiren bereitzustellen.
  • Dementsprechend wurde ein Verfahren zur Verringerung der Verdunstungsgeschwindigkeit von Flüssigkeiten (F) in offenen Flüssigkeitsreservoiren gefunden, bei dem man die Oberfläche der Flüssigkeit (F) mit einer mit dieser nicht mischbaren Sperrflüssigkeit (S) bedeckt, welche einen höheren Siedepunkt sowie eine geringere Dichte aufweist als die Flüssigkeit, wobei man der Flüssigkeit (F) und/oder der Sperrflüssigkeit (S) als Hilfsmittel mindestens ein Hydrophobin zusetzt. Bevorzugt handelt sich bei der Flüssigkeit (F) um Wasser.
  • In einem zweiten Aspekt der Erfindung wurden offene Flüssigkeitsreservoire gefunden, welche mindestens eine Flüssigkeit (F) sowie eine Sperrflüssigkeit (S), welche einen höheren Siedepunkt sowie eine geringere Dichte aufweist als die Flüssigkeit (F), mit dieser nicht mischbar ist und die Oberfläche der Flüssigkeit (F) bedeckt umfassen, wobei das Flüssigkeitsreservoir weiterhin mindestens ein Hydrophobin umfasst.
  • In einem dritten Aspekt der Erfindung wurde die Verwendung von Hydrophobinen als Hilfsmittel für Flüssigkeitssperrschichten gefunden.
  • Überraschenderweise wurde gefunden, dass sich die Verdunstungsgeschwindigkeit der Flüssigkeit im Flüssigkeitsreservoir durch die Verwendung von Hydrophobinen drastisch vermindern lässt. In einem typischen Ausführungsbeispiel der Erfindung waren in einem offenen Flüssigkeitsreservoir ohne die Verwendung von Hydrophobinen nach 20 Tagen mehr als 60% der ursprünglich vorhandenen Flüssigkeit verdampft. Bei Verwendung von Hydrophobinen als Zusatz verdampften in der gleichen Zeit nur etwa 13 Gew.-% der ursprünglich vorhandenen Flüssigkeit.
  • Zu der Erfindung ist im Einzelnen das Folgende auszuführen:
    Der Begriff „offenes Flüssigkeitsreservoir" in Sinne dieser Erfindung bedeutet ein Flüssigkeitsreservoir, welches nicht vollständig von der Umgebung abgeschlossen ist, sondern noch im Kontakt mit der Umgebung steht, so dass die Flüssigkeit prinzipiell verdampfen und in Umgebung gelangen kann. Es kann sich hierbei beispielsweise um einen Tank handeln, der eine nicht verschlossene Öffnung aufweist. In der Regel handelt es sich aber um ein Reservoir, bei dem die gesamte Oberfläche der Flüssigkeit nicht bedeckt ist. Es kann sich um natürliche oder um künstlich angelegte Flüssigkeitsreservoire handeln. Beispiele derartiger offener Flüssigkeitsreservoire umfassen Speicherseen, Talsperren, Zisternen, offene Lagerbehälter oder sogenannte Lagunen.
  • Bei der Flüssigkeit (F) im Flüssigkeitsreservoir, die vor Verdunstung geschützt werden soll, kann es sich prinzipiell um beliebige wässrige oder organische Flüssigkeiten handeln. Selbstverständlich kann es sich auch um ein Gemisch verschiedener Stoffe handeln. Bevorzugt handelt es sich aber um Wasser, beispielsweise um Trinkwasser, Brauchwasser, Industriewasser oder Seewasser. In der Regel handelt es sich um Abwässer oder wieder zu verwendende Brauchwässer aus industriellen, technischen Prozessen. Der Begriff „Wasser" soll nicht auf chemisch reines Wasser beschränkt sein, sondern das Wasser kann auch noch weitere Bestandteile gelöst, dispergiert oder aufgeschlämmt enthalten. Beispielweise kann das Wasser gelöste Salze oder Schlämme, beispielsweise aus Abraum oder Komponenten von Abraum oder aber auch mit Wasser mischbare, organische Lösemittel enthalten.
  • Erfindungsgemäß wird die Oberfläche der Flüssigkeit (F) im Flüssigkeitsreservoir mit einer mit dieser nicht mischbaren Sperrflüssigkeit (S) bedeckt. Bei der Sperrflüssigkeit kann es sich selbstverständlich auch um ein Gemisch verschiedener Stoffe handeln. Der Begriff „nicht mischbar" bedeutet, dass sich keine wesentlichen Mengen der Sperrflüssigkeit in der Flüssigkeit lösen sollen. Es schließt selbstverständlich nicht aus, dass Spuren oder unwesentliche Mengen gelöst werden könnten. Die Sperrflüssigkeit weist naturgemäß eine geringere Dichte auf, als die Flüssigkeit, deren Verdunstung verzögert werden soll. Die Sperrflüssigkeit weist weiterhin einen höheren Siedepunkt bzw. Siedebereich auf, als die Flüssigkeit, deren Verdunstung verzögert werden soll.
  • Der Fachmann trifft unter den prinzipiell möglichen Sperrflüssigkeiten (S) eine geeignete Auswahl.
  • Für den bevorzugten Fall, dass es sich bei der Flüssigkeit (F) um Wasser oder ein wässriges Flüssigkeitsgemisch handelt, haben sich unpolare oder im Wesentlichen unpolare Flüssigkeiten als Sperrflüssigkeit bewährt. Beispiele umfassen insbesondere Kahlenwasserstoffe bzw. Gemische von Kohlenwasserstoffen. Der Siedepunkt eingesetzter Kohlenwasserstoffe wird vom Fachmann gewählt. Bewährt hat sich ein Siedepunkt von mindestens 150°C. Bei Mischungen bezieht sich diese Angabe auf die Untergrenze des Siedebereiches, wobei mögliche Verunreinigungen mit leichtflüchtigen Verbindungen nicht berücksichtigt werden. Beispielsweise können Kohlenwasserstoffgemische mit einem Siedebereich von 150 bis 250°C, bevorzugt 200 bis 300°C und besonders bevorzugt 220 bis 350°C eingesetzt werden.
  • Beispiele derartiger Gemische umfassen hochsiedende paraffinische, naphthenische und aromatische Mineralöle. Derartige Mineralöle werden durch Vakuumdestillation aus Erdölen gewonnen. Bevorzugt sind hochsiedende im Wesentlichen paraffinische und/oder naphthenische Mineralöle. Derartige Mineralöle werden auch als Weißöle bezeichnet, wobei der Fachmann zwischen technischen Weißölen, die noch einen geringen Aromatengehalt aufweisen können, sowie medizinischen Weißölen, die im Wesentlichen aromatenfrei sind, unterscheidet. Weitere Beispiele umfassen Petroleumbenzin oder Dieselöl.
  • Es können aber auch biologisch gut abbaubare, natürliche, insbesondere pflanzliche Öle eingesetzt werden. Beispiele umfassen Sojaöl, Holzöl, Tallöl, Distelöl, Ricinenöl, Rapsöl oder Leinöl. Weiterhin können auch Derivate derartiger Öle eingesetzt werden. Beispiele umfassen Ester wie Rapsölmethylester oder Tallölfettsäureester.
  • Zur Ausführung des erfindungsgemäßen Verfahrens wird die Flüssigkeitsoberfläche mit der Sperrflüssigkeit (S) bedeckt. Die Menge der Sperrflüssigkeit wird vom Fachmann so bemessen, dass einerseits eine möglichst vollständige Bedeckung der Flüssigkeitsoberfläche gewährleistet ist, dass aber andererseits eine zu große Menge an Sperrflüssigkeit vermieden wird. Im Regelfalle sollte die Dicke der Sperrschicht nicht mehr als 1 mm betragen, ohne dass höhere Dicken damit prinzipiell ausgeschlossen sein sollten. Bewährt haben sich insbesondere Schichtdicken von 0,1 bis 1 mm, bevorzugt 0,2 bis 0,9 mm und besonders bevorzugt 0,3 bis 0,8 mm.
  • Erfindungsgemäß wird der Flüssigkeit (F) und/oder der Sperrschicht als Hilfsmittel mindestens ein Hydrophobin zugesetzt. Selbstverständlich können auch Gemische aus verschiedenen Hydrophobinen eingesetzt werden.
  • Unter dem Begriff „Hydrophobine" im Sinne dieser Erfindung sollen im Folgenden Proteine der allgemeinen Strukturformel (I) Xn-C1-X1-50-C2-X0,5-C3-X1-100C4-X1-100-C5-X1-50-C6-0-5-C7-X1-50-C8-Xm (I)verstanden werden, wobei X für jede der 20 natürlich vorkommenden Aminosäuren (Phe, Leu, Ser, Tyr, Cys, Trp, Pro, His, Gln, Arg, Ile Met, Thr, Asn, Lys, Val, Ala, Asp, Glu, Gly) stehen kann. Dabei können X jeweils gleich oder verschieden sein. Hierbei stellen die bei X stehenden Indizes jeweils die Anzahl der Aminosäuren dar, C steht für Cystein, Alanin, Serin, Glycin, Methionin oder Threonin, wobei mindestens vier der Aminosäuren C für Cystein stehen, und die Indizes n und m stehen unabhängig voneinander für natürliche Zahlen von 0 und 500, bevorzugt von 15 bis 300.
  • Die Polypetide gemäß Formel (I) sind weiterhin durch die Eigenschaft charakterisiert, dass sie bei Raumtemperatur nach Beschichten einer Glasoberfläche eine Vergrößerung des Kontaktwinkels eines Wassertropfens von mindestens 20°, bevorzugt mindestens 25° und besonders bevorzugt 30° bewirken, jeweils verglichen mit dem Kontaktwinkel eines gleich großen Wassertropfens mit der unbeschichteten Glasoberfläche.
  • Die mit C1 bis C8 benannten Aminosäuren sind bevorzugt Cysteine; sie können aber auch durch andere Aminosäuren ähnlicher Raumerfüllung, bevorzugt durch Alanin, Serin, Threonin, Methionin oder Glycin ersetzt werden. Allerdings sollen mindestens vier, bevorzugt mindestens 5, besonders bevorzugt mindestens 6 und insbesondere mindestens 7 der Positionen C1 bis C8 aus Cysteinen bestehen. Cysteine können in den erfindungsgemäß verwendeten Proteinen entweder reduziert vorliegen oder miteinander Disulfidbrücken ausbilden. Besonders bevorzugt ist die intramolekulare Ausbildung von C-C Brücken, insbesondere die mit mindestens einer, bevorzugt 2, besonders bevorzugt 3 und ganz besonders bevorzugt 4 intramolekularen Disulfidbrücken. Bei dem oben beschriebenen Austausch von Cysteinen durch Aminosäuren ähnlicher Raumerfüllung werden vorteilhaft solche C-Positionen paarweise ausgetauscht, die intramolekulare Disulfidbrücken untereinander ausbilden können.
  • Falls in den mit X bezeichneten Positionen auch Cysteine, Serine, Alanine, Glycine, Methionine oder Threonine verwendet werden, kann sich die Nummerierung der einzelnen C-Positionen in den allgemeinen Formeln entsprechend verändern.
  • Bevorzugt werden Hydrophobine der allgemeinen Formel (II) Xn-C1-X3-25-C2-X0,2-C3-X5-50C4-X2-35-C5-X2-15-C6-0-2-C7-X3-35-C8-Xm (II)zur Ausführung der vorliegenden Erfindung eingesetzt, wobei X, C und die bei X und C stehenden Indizes die obige Bedeutung haben, jedoch stehen die Indizes n und m für Zahlen von 0 bis 300, und sich die Proteine weiterhin durch die oben erwähnte Kontaktwinkeländerung auszeichnen.
  • Besonders bevorzugt werden Hydrophobine der allgemeinen Formel (III) Xn-C1-X5-9-C2-C3-X11-39C4-X2-23-C5-X5-9-C6-C7-X6-18-C8-Xm (III)eingesetzt, wobei X, C und die bei X und C stehenden Indizes die obige Bedeutung haben, die Indizes n und m für Zahlen von 0 bis 200 stehen, sich die Proteine weiterhin durch die oben erwähnte Kontaktwinkeländerung auszeichnen, und es sich weiterhin bei mindestens 6 der Aminosäuren C um Cystein handelt. Besonders bevorzugt handelt es sich bei allen Aminosäuren C um Cystein.
  • Bei den Resten Xn und Xm kann es sich um Peptidsequenzen handeln, die natürlicherweise mit einem Hydrophobin verknüpft sind. Es kann sich aber auch bei einem oder beiden Resten um Peptidsequenzen handeln, die natürlicherweise nicht mit einem Hydrophobin verknüpft sind. Darunter sind auch solche Reste Xn und/oder Xm zu verstehen, bei denen eine natürlicherweise in einem Hydrophobin vorkommende Peptidsequenz durch eine nicht natürlicherweise in einem Hydrophobin vorkommende Peptidsequenz verlängert ist.
  • Falls es sich bei Xn und/oder Xm um natürlicherweise nicht mit Hydrophobinen verknüpfte Peptidsequenzen handelt, sind derartige Sequenzen in der Regel mindestens 20, bevorzugt mindestens 35, besonders bevorzugt mindestens 50 und ganz besonders bevorzugt mindestens 100 Aminosäuren lang. Ein derartiger, natürlicherweise nicht mit einem Hydrophobin verknüpfter Rest soll im Folgenden auch als Fusionspartner bezeichnet werden. Damit soll ausgedrückt werden, dass die Proteine aus mindestens einem Hydrophobinteil und einem Fusionspartner bestehen können, die in der Natur nicht zusammen in dieser Form vorkommen.
  • Der Fusionspartner kann aus einer Vielzahl von Proteinen ausgewählt werden. Es können auch mehrere Fusionspartner mit einem Hydrophobinteil verknüpft werden, beispielsweise am Aminoterminus (Xn) und am Carboxyterminus (Xm) des Hydrophobinteils. Es können aber auch beispielsweise zwei Fusionspartnerteile mit einer Position (Xn oder Xm) des erfindungsgemäßen Proteins verknüpft werden.
  • Besonders geeignete Fusionspartnerteile sind Proteine, die natürlicherweise in Mikroorganismen, insbesondere in E. coli oder Bacillus subtilis vorkommen. Beispiele für solche Fusionspartnerteile sind die Sequenzen yaad (SEQ ID NO:15 und 16), yaae(SEQ ID NO:17 und 18), und Thioredoxin. Gut geeignet sind auch Fragmente oder Derivate dieser genannten Sequenzen, die nur einen Teil, bevorzugt 70-99%, besonders bevorzugt 80-98% der genannten Sequenzen umfassen, oder bei denen einzelne Aminosäuren, bzw. Nukleotide gegenüber der genannten Sequenz verändert sind, wobei sich die Prozentangaben jeweils auf die Anzahl der Aminosäuren bezieht.
  • Die erfindungsgemäß vewendeten Proteine können auch noch in ihrer Polypeptidsequenz modifiziert sein, beispielsweise durch Glycosilierung, Acetylierung oder auch durch chemische Quervernetzung beispielsweise mit Glutardialdehyd.
  • Eine Eigenschaft der erfindungsgemäß verwendeten Proteine ist die Änderung von Oberflächeneigenschaften, wenn die Oberflächen mit den Proteinen beschichtet werden. Die Änderung der Oberflächeneigenschaften lässt sich experimentell dadurch bestimmen, dass der Kontaktwinkel eines Wassertropfens vor und nach der Beschichtung der Oberfläche mit dem Protein gemessen wird und die Differenz der beiden Messungen ermittelt wird.
  • Die Durchführung von Kontaktwinkelmessungen ist dem Fachmann prinzipiell bekannt. Die Messungen beziehen sich auf Raumtemperatur sowie Wassertropfen von 5 μl. Die genauen experimentellen Bedingungen für eine beispielhaft geeignete Methode zur Messung des Kontaktwinkels sind im experimentellen Teil dargestellt. Unter den dort genannten Bedingungen besitzen die erfindungsgemäß verwendeten Proteine die Eigenschaft, den Kontaktwinkel um mindestens 20°, bevorzugt mindestens 25°, besonders bevorzugt mindestens 30° zu vergrößern, jeweils verglichen mit dem Kontaktwinkel eines gleich großen Wassertropfens mit der unbeschichteten Glasoberfläche.
  • Im Hydrophobinteil der bisher bekannten Hydrophobine sind die Positionen der polaren und unpolaren Aminosäuren konserviert, was sich in einem charakteristischen Hydrophobizitätsplot äußert. Unterschiede in den biophysikalischen Eigenschaften und in der Hydrophobizität führten zur Einteilung der bisher bekannten Hydrophobine in zwei Klassen, I und II (Wessels et al. 1994, Ann. Rev. Phytopathol., 32, 413-437).
  • Die assemblierten Membranen aus Klasse I Hydrophobinen sind hochgradig unlöslich (selbst gegenüber 1% Na-Dodecylsulfat (SDS) bei erhöhter Temperatur) und können nur durch konzentrierte Trifluoressigsäure (TFA), bzw. Ameisensäure wieder dissoziiert werden. Im Gegensatz dazu sind die assemblierten Formen von Klasse II Hydrophobinen weniger stabil. Sie können bereits durch 60%iges Ethanol, bzw. 1% SDS (bei Raumtemperatur) wieder aufgelöst werden.
  • Ein Vergleich der Aminosäuresequenzen zeigt, dass die Länge des Bereichs zwischen Cystein C3 und C4 bei Klasse II Hydrophobinen deutlich kürzer ist, als bei Hydrophobinen der Klasse I. Klasse II Hydrophobine weisen weiterhin mehr geladene Aminosäuren als Klasse I auf.
  • Besonders bevorzugte Hydrophobine zur Ausführung der vorliegenden Erfindung sind die Hydrophobine des Typs dewA, rodA, hypA, hypB, sc3, basf1, basf2, die im nachfolgenden Sequenzprotokoll strukturell charakterisiert sind. Es kann sich auch nur um Teile oder Derivate davon handeln. Es können auch mehrere Hydrophobinteile, bevor zugt 2 oder 3, gleicher oder unterschiedlicher Struktur miteinander verknüpft und mit einer entsprechenden geeigneten Polypeptidsequenz, die natürlicherweise nicht mit einem Hydrophobin verbunden ist, verknüpft werden.
  • Besonders geeignet zur Durchführung der vorliegenden Erfindung sind weiterhin die Fusionsproteine mit den in SEQ ID NO: 20, 22, 24 dargestellten Polypeptidsequenzen sowie den dafür codierenden Nukleinsäuresequenzen, insbesondere den Sequenzen gemäss SEQ ID NO: 19, 21, 23. Auch Proteine, die sich ausgehend von den in SEQ ID NO. 22, 22 oder 24 dargestellten Polypeptidsequenzen durch Austausch, Insertion oder Deletion von mindestens einer, bis hin zu 10. bevorzugt 5, besonders bevorzugt 5% aller Aminosäuren ergeben, und die die biologische Eigenschaft der Ausgangsproteine noch zu mindestens 50% besitzen, sind besonders bevorzugte Ausführungsformen. Unter biologischer Eigenschaft der Proteine wird hierbei die bereits beschriebene Vergrößerung des Kontaktwinkels um mindestens 20° verstanden.
  • Die erfindungsgemäß verwendeten Proteine lassen sich chemisch durch bekannte Verfahren der Peptidsynthese, beispielsweise durch Festphasensynthese nach Merrifield herstellen.
  • Natürlich vorkommende Hydrophobine lassen sich aus natürlichen Quellen mittels geeigneter Methoden isolieren. Beispielhaft sei auf Wösten et. al., Eur. J Cell Bio. 63, 122-129 (1994) oder WO 96/41882 verwiesen.
  • Die Herstellung von Fusionsproteinen kann bevorzugt durch gentechnische Verfahren erfolgen, bei denen eine für den Fusionspartner und eine für den Hydrophobinteil codierende Nukleinsäuresequenz, insbesondere DNA-Sequenz, so kombiniert werden, dass in einem Wirtsorganismus durch Genexpression der kombinierten Nukleinsäuresequenz das gewünschte Protein erzeugt wird. Ein derartiges Herstellverfahren ist in unserer älteren Anmeldung DE 102005007480.4 offenbart.
  • Geeignete Wirtsorganismen (Produktionsorganismen) für das genannte Herstellverfahren können dabei Prokaryonten (einschließlich der Archaea) oder Eukaryonten sein, besonders Bakterien einschliesslich Halobacterien und Methanococcen, Pilze, Insektenzellen, Pflanzenzellen und Säugerzellen, besonders bevorzugt Escherichia coli, Bacillus subtilis, Bacillus. megaterium, Aspergillus oryzea, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger, Pichia pastoris, Pseudomonas spec., Lactobacillen, Hansenula polymorpha, Trichoderma reesei, SF9 (bzw. verwandte Zellen) u.a.
  • Gegenstand der Erfindung ist außerdem die Verwendung von Expressionskonstrukten, enthaltend unter der genetischen Kontrolle regulativer Nukleinsäuresequenzen, eine für ein erfindungsgemäß verwendetes Polypeptid kodierende Nukleinsäuresequenz, sowie Vektoren, umfassend wenigstens eines dieser Expressionskonstrukte.
  • Vorzugsweise umfassen eingesetzte Konstrukte 5'-stromaufwärts von der jeweiligen kodierenden Sequenz einen Promotor und 3'-stromabwärts eine Terminatorsequenz sowie gegebenenfalls weitere übliche regulative Elemente, und zwar jeweils operativ verknüpft mit der kodierenden Sequenz.
  • Unter einer "operativen Verknüpfung" versteht man die sequentielle Anordnung von Promotor, kodierender Sequenz, Terminator und gegebenenfalls weiterer regulativer Elemente derart, dass jedes der regulativen Elemente seine Funktion bei der Expression der kodierenden Sequenz bestimmungsgemäß erfüllen kann.
  • Beispiele für operativ verknüpfbare Sequenzen sind Targeting-Sequenzen sowie Enhancer, Polyadenylierungssignale und dergleichen. Weitere regulative Elemente umfassen selektierbare Marker, Amplifikationssignale, Replikationsursprünge und dergleichen. Geeignete regulatorische Sequenzen sind z. B. beschrieben in Goeddel, Gene Expression Techno-logy : Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990).
  • Zusätzlich zu diesen Regulationssequenzen kann die natürliche Regulation dieser Sequenzen vor den eigentlichen Strukturgenen noch vorhanden sein und gegebenenfalls genetisch verändert worden sein, so dass die natürliche Regulation ausgeschaltet und die Expression der Gene erhöht wurde.
  • Ein bevorzugtes Nukleinsäurekonstrukt enthält vorteilhaft auch eine oder mehrere der schon erwähnten "Enhancer"-Sequenzen, funktionell verknüpft mit dem Promotor, die eine erhöhte Expression der Nukleinsäuresequenz ermöglichen. Auch am 3'-Ende der DNA-Sequenzen können zusätzliche vorteilhafte Sequenzen inseriert werden, wie weitere regulatorische Elemente oder Terminatoren.
  • Die Nukleinsäuren können in einer oder mehreren Kopien im Konstrukt enthalten sein. Im Konstrukt können noch weitere Marker, wie Antibiotikaresistenzen oder Auxotrophien komplementierende Gene, gegebenenfalls zur Selektion auf das Konstrukt enthalten sein.
  • Vorteilhafte Regulationssequenzen für das Verfahren sind beispielsweise in Promotoren wie cos-, tac-, trp-, tet-, trp-, tet-, lpp-, lac-, lpp-lac-, laclq-T7-, T5-, T3-, gal-, trc-, ara-, rhaP(rhaPBAD) SP6-, lambda-PR- oder imlambda-P-Promotor enthalten, die vorteilhaft in gram-negativen Bakterien Anwendung finden. Weitere vorteilhafte Regulationssequenzen sind beispielsweise in den gram-positiven Promotoren amy und SP02, in den Hefe- oder Pilzpromotoren ADC1, MF alpha, AC, P-60, CYC1, GAPDH, TEF, rp28, ADH enthalten.
  • Es können auch künstliche Promotoren für die Regulation verwendet werden.
  • Das Nukleinsäurekonstrukt wird zur Expression in einem Wirtsorganismus vorteilhafterweise in einen Vektor, wie beispielsweise einem Plasmid oder einem Phagen inseriert, der eine optimale Expression der Gene im Wirt ermöglicht. Unter Vektoren sind außer Plasmiden und Phagen auch alle anderen dem Fachmann bekannten Vektoren, also z. B. Viren, wie SV40, CMV, Baculovirus und Adenovirus, Transposons, IS-Elemente, Phasmide, Cosmide, und lineare oder zirkuläre DNA, sowie das Agrobacterium-System zu verstehen.
  • Diese Vektoren können autonom im Wirtsorganismus repliziert oder chromosomal repliziert werden. Diese Vektoren stellen eine weitere Ausgestaltung der Erfindung dar. Geeignete Plasmide sind beispielsweise in E. coli pLG338, pACYC184, pBR322, pUC18, pUC19, pKC30, pRep4, pHS1, pKK223-3, pDHE19.2, pHS2, pPLc236, pMBL24, pLG200, pUR290, pIN-III"3-B1, tgt11 oder pBdCl, in StreptomycesplJ101, pIJ364, pIJ702 oder pIJ361, in Bacillus pUB110, pC194 oder pBD214, in Corynebacterium pSA77 oder pAJ667, in Pilzen pALS1, pIL2 oder pBB116, in Hefen 2alpha, pAG-1, YEp6, YEp13 oder pEMBLYe23 oder in Pflanzen pLGV23, pGHlac+, pBIN19, pAK2004 oder pDH51. Die genannten Plasmide stellen eine kleine Auswahl der möglichen Plasmide dar. Weitere Plasmide sind dem Fachmann bekannt und können beispielsweise aus dem Buch Cloning Vectors (Eds. Pouwels P. H. et al. Elsevier, Ams-terdam-New York-Oxford, 1985, ISBN 0 444 904018) entnommen werden.
  • Vorteilhaft enthält das Nukleinsäurekonstrukt zur Expression der weiteren enthaltenen Gene zusätzlich noch 3'- und/oder 5'-terminale regulatorische Sequenzen zur Steigerung der Expression, die je nach ausgewähltem Wirtorganismus und Gen oder Gene für eine optimale Expression ausgewählt werden.
  • Diese regulatorischen Sequenzen sollen die gezielte Expression der Gene und der Proteinexpression ermöglichen. Dies kann beispielsweise je nach Wirtsorganismus bedeuten, dass das Gen erst nach Induktion exprimiert oder überexprimiert wird, oder dass es sofort exprimiert und/oder überexprimiert wird.
  • Die regulatorischen Sequenzen bzw. Faktoren können dabei vorzugsweise die Genexpression der eingeführten Gene positiv beeinflussen und dadurch erhöhen. So kann eine Verstärkung der regulatorischen Elemente vorteilhafterweise auf der Transkriptionsebene erfolgen, indem starke Transkriptionssignale wie Promotoren und/oder "Enhancer" verwendet werden. Daneben ist aber auch eine Verstärkung der Translation möglich, indem beispielsweise die Stabilität der mRNA verbessert wird.
  • In einer weiteren Ausgestaltungsform des Vektors kann der das Nukleinsäurekonstrukt oder die Nukleinsäure enthaltende Vektor auch vorteilhaft in Form einer linearen DNA in die Mikroorganismen eingeführt werden und über heterologe oder homologe Rekombination in das Genom des Wirtsorganismus integriert werden. Diese lineare DNA kann aus einem linearisierten Vektor wie einem Plasmid oder nur aus dem Nukleinsäurekonstrukt oder der Nukleinsäure bestehen.
  • Für eine optimale Expression heterologer Gene in Organismen ist es vorteilhaft die Nukleinsäuresequenzen entsprechend des im Organismus verwendeten spezifischen "codon usage" zu verändern. Der "codon usage" lässt sich anhand von Computerauswertungen anderer, bekannter Gene des betreffenden Organismus leicht ermitteln.
  • Die Herstellung einer Expressionskassette erfolgt durch Fusion eines geeigneten Promotors mit einer geeigneten kodierenden Nukleotidsequenz sowie einem Terminator- oder Polyadenylierungssignal. Dazu verwendet man gängige Rekombinations- und Klonierungstechniken, wie sie beispielsweise in T. Maniatis, E. F.Fritsch und J. Sambrook, Molecular Cloning : A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY (1989) sowie in T. J. Silhavy, M. L. Berman und L. W. Enquist, Experiments with Gene Fusions, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY (1984) und in Ausubel, F. M. etal., Current Protocols in Molecular Biology, Greene Publishing Assoc. andWiley Interscience (1987) beschrieben sind.
  • Das rekombinante Nukleinsäurekonstrukt bzw. Genkonstrukt wird zur Expression in einem geeigneten Wirtsorganismus, vorteilhaft in einen wirtsspezifischen Vektor insertiert, der eine optimale Expression der Gene im Wirt ermöglicht. Vektoren sind dem Fachmann wohl bekannt und können beispielsweise aus "Cloning Vectors" (Pouwels P. H. et al., Hrsg, Elsevier, Amsterdam-New York-Oxford, 1985) entnommen wer-den.
  • Mit Hilfe der Vektoren sind rekombinante Mikroorganismen herstellbar, welche beispielsweise mit wenigstens einem Vektor transformiert sind und zur Produktion der erfindungsgemäß verwendeten Proteine eingesetzt werden können. Vorteilhafterweise werden die oben beschriebenen rekombinanten Konstrukte in ein geeignetes Wirtssystem eingebracht und exprimiert. Dabei werden vorzugsweise dem Fachmann bekannte geläufige Klonierungs- und Transfektionsmethoden, wie beispielsweise Co-Präzipitation, Protoplastenfusion, Elektroporation, retrovirale Transfektion und dergleichen, verwendet, um die genannten Nukleinsäuren im jeweiligen Expressionssystem zur Expression zu bringen. Geeignete Systeme werden beispielsweise in Current Protocols in Molecular Biology, F.Ausubel etal., Hrsg., Wiley Interscience, New York 1997, oder Sambrook et al. Molecular Cloning : A Laboratory Manual. 2. Aufl., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989 beschrieben.
  • Es sind auch homolog rekombinierte Mikroorganismen herstellbar. Dazu wird ein Vektor hergestellt, der zumindest einen Abschnitt eines erfindungsgemäß zu verwenden den Gens oder einer kodierenden Sequenz enthält, worin gegebenenfalls wenigstens eine Aminosäure-Deletion, -Addition oder -Substitution eingebracht worden ist, um die Sequenz zu verändern, z. B. funktionell zu disruptieren ("Knockout"- Vektor). Die eingebrachte Sequenz kann z. B. auch ein Homologes aus einem verwandten Mikroorganismus sein oder aus einer Säugetier-, Hefe- oder Insektenquelle abgeleitet sein. Der zur homologen Rekombination verwendete Vektor kann alternativ derart ausgestaltet sein, dass das endogene Gen bei homologer Rekombination mutiert oder anderweitig verändert ist, jedoch noch das funktionelle Protein kodiert (z. B. kann der stromaufwärts gelegene regulatorische Bereich derart verändert sein, dass dadurch die Expression des endogenen Proteins verändert wird). Der veränderte Abschnitt des erfindungsgemäß verwendeten Gens ist im homologen Rekombinationsvektor. Die Konstruktion geeigneter Vektoren zur homologen Rekombination ist z. B. beschrieben in Thomas, K. R. und Capecchi, M. R. (1987) Cell 51 : 503.
  • Als rekombinante Wirtsorganismen für die erfindungsgemäß verwendete Nukleinsäure oder dem Nukleinsäurekonstrukt kommen prinzipiell alle prokaryontischen oder eukaryontischen Organismen in Frage. Vorteilhafterweise werden als Wirtsorganismen Mikroorganismen wie Bakterien, Pilze oder Hefen verwendet. Vorteilhaft werden grampositive oder gram-negative Bakterien, bevorzugt Bakterien der Familien Enterobacteriaceae, Pseudomonadaceae, Rhizobiaceae, Streptomycetaceae oder Nocardiaceae, besonders bevorzugt Bakterien der Gattungen Escherichia, Pseudomonas, Streptomyces, Nocardia, Burkholderia, Salmonella, Agrobacterium oder Rhodococcus verwendet.
  • Die im Herstellverfahren für Fusionsproteine verwendeten Organismen werden je nach Wirtsorganismus in dem Fachmann bekannter Weise angezogen bzw. gezüchtet. Mikroorganismen werden in der Regel in einem flüssigen Medium, das eine Kohlenstoffquelle meist in Form von Zuckern, eine Stickstoffquelle meist in Form von organischen Stickstoffquellen wie Hefeextrakt oder Salzen wie Ammoniumsulfat, Spurenelemente wie Eisen-, Mangan- und Magnesiumsalze sowie gegebenenfalls Vitamine enthält, bei Temperaturen zwischen 0 und 100 °C, bevorzugt zwischen 10 bis 60 °C unter Sauerstoffbegasung angezogen. Dabei kann der pH-Wert der Nährflüssigkeit auf einem festen Wert gehalten werden, das heißt während der Anzucht reguliert werden oder nicht. Die Anzucht kann "batch"-weise, "semi-batch"-weise oder kontinuierlich erfolgen. Nährstoffe können zu Beginn der Fermentation vorgelegt oder semikontinuierlich oder kontinuierlich nachgefüttert werden. Die Enzyme können nach dem in den Beispielen beschriebenen Verfahren aus den Organismen isoliert werden oder als Rohextrakt für die Reaktion verwendet werden.
  • Erfindungsgemäß verwendete Proteine oder funktionelle, biologisch aktive Fragmente davon, können mittels eines rekombinanten Verfahrens hergestellt werden, bei dem man einen Proteine-produzierenden Mikroorganismus kultiviert, gegebenenfalls die Expression der Proteine induziert und diese aus der Kultur isoliert. Die Proteine können so auch in großtechnischem Maßstab produziert werden, falls dies erwünscht ist. Der rekombinante Mikroorganismus kann nach bekannten Verfahren kultiviert und fermentiert werden. Bakterien können beispielsweise in TB- oder LB-Medium und bei einer Temperatur von 20 bis 40°C und einem pH-Wert von 6 bis 9 vermehrt werden. Im Einzelnen werden geeignete Kultivierungsbedingungen beispielsweise in T. Maniatis, E. F. Fritsch and J. Sambrook, Molecular Cloning : A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY (1989) beschrieben.
  • Die Zellen werden dann, falls die erfindunsgemäß verwerdeten Proteine nicht in das Kulturmedium sezerniert werden, aufgeschlossen und das Produkt nach bekannten Proteinisolierungsverfahren aus dem Lysat gewonnen. Die Zellen können wahlweise durch hochfrequenten Ultraschall, durch hohen Druck, wie z. B. in einer French-Druckzelle, durch Osmolyse, durch Einwirkung von Detergenzien, lytischen Enzymen oder organischen Lösungsmitteln, durch Homogenisatoren oder durch Kombination mehrerer der aufgeführten Verfahren aufgeschlossen werden.
  • Eine Aufreinigung der erfindunsgemäß verwendeten Proteine kann mit bekannten, chromatographischen Verfah-ren erzielt werden, wie Molekularsieb-Chromatographie (Gelfiltration), wie Q-Sepharose-Chromatographie, Ionenaustausch-Chromatographie und hydrophobe Chromatographie, sowie mit anderen üblichen Verfahren wie Ultrafiltration, Kristallisati-on, Aussalzen, Dialyse und nativerGelelektrophorese. Geeignete Verfahren werden beispielsweise in Cooper, F. G., Biochemische Arbeitsmethoden, Verlag Water de Gruyter, Berlin, New York oder in Scopes, R., Protein Purification, Springer Verlag, New York, Heidelberg, Berlin beschrieben.
  • Vorteilhaft kann es sein, zur Isolierung des rekombinanten Proteins Vektarsysteme oder Oligonukleotide zu verwenden, die die cDNA um bestimmte Nukleotidsequenzen verlängern und damit für veränderte Proteine oder Fusionsproteine kodieren, die beispielsweise einer einfacheren Reinigung dienen. Derartige geeignete Modifikationen umfassen als Anker fungierende sogenannte "Tags", wie beispielsweise die als Hexa-Histidin-Anker bekannte Modifikation oder Epitope, die als Antigene von Antikörpern erkannt werden können (beschrieben zum Beispiel in Harlow, E. and Lane, D., 1988, Antibodies : A Laboratory Manual. Cold Spring Harbor (N. Y.) Press). Weitere geeignete Tags sind z.B. HA, Calmodulin-BD, GST, MBD; Chitin-BD, Steptavidin-BD-Avi-Tag, Flag-Tag, T7 etc. Diese Anker können zur Anheftung der Proteine an einen festen Träger, wie z. B. einer Polymermatrix, dienen, die beispielsweise in einer Chromatographiesäule eingefüllt sein kann, oder an einer Mikrotiterplatte oder an einem sonstigen Träger verwendet werden kann. Die entsprechenden Reinigungsprotokolle sind von den kommerziellen Affinitäts-Tag-Anbietern erhältlich.
  • Die wie beschrieben hergestellten Proteine können sowohl direkt als Fusionsproteine als auch nach Abspaltung und Abtrennung des Fusionspartners als „reine" Hydrophobine verwendet werden.
  • Wenn eine Abtrennung des Fusionspartners vorgesehen ist, empfiehlt es sich eine potentielle Spaltstelle (spezifische Erkennungsstelle für Proteasen) in das Fusionsprotein zwischen Hydrophobinteil und Fusionspartnerteil einzubauen. Als Spaltstelle geeignet sind insbesondere solche Peptidsequenzen geeignet, die ansonsten weder im Hydrophobinteil noch im Fusionspartnerteil vorkommen, was sich mit bioinformatischen Tools leicht ermitteln lässt. Besonders geeignet sind beispielsweise BrCN-Spaltung an Methionin, oder durch Protease vermittelte Spaltlung mit Faktor Xa-, Enterokinase-, Thrombin, TEV-Spaltung (Tobacca etch virus Protease).
  • Die Auswahl der Hydrophobine zur Ausführung der Erfindung ist nicht beschränkt. Der Fachmann trifft eine geeignte Auswahl. Besonders bewährt haben sich Fusionsproteine, wie beispielsweise yaad-Xa-dewA-his (SEQ ID NO: 19) oder yaad-Xa-rodA-his (SEQ ID NO: 21).
  • Die Hydrophobine können zur Ausführung der Erfindung vorteilhaft als wässrige Formulierungen eingesetzt werden. Hierzu können bevorzugt die bei der Synthese und/oder Isolierung erhaltenen wässrigen Lösungen eingesetzt werden. Den wässrigen Formulierungen können aber selbstverständlich auch noch mit Wasser mischbare, organische Lösemittel zugesetzt werden. Beispiele derartiger Lösemittel umfassen mit Wasser mischbaere Alkohole, wie beispielsweise Ethanol, Propanol oder Ethylenglykol.
  • Selbstverständlich können die Hydrophobine aber auch zunächst als Substanz isoliert werden, beispielsweise durch Gefriertrocknen, und als solche oder aber gelöst in einem nichtwässrigen Lösemittel bzw. entsprechende Formulierungen auf Basis nichtwässriger Lösemittel zum Einsatz kommen.
  • Erfindungsgemäß verwendete Hydrophobin-Formulierungen können selbstverständlich noch weitere Hilfsstoffe und Additive umfassen. Beispiele umfassen Tenside, Puffer, Lösemittel, Konservierungsmittel wie Proteaseinhibitoren, Stabilisatoren wie beispielsweise Proteine, Zucker oder Zuckerderivate, Alkohole oder wasserlösliche Polymere.
  • Die Konzentration der Hydrophobine in der Formulierung wird vom Fachmann gewählt. Bewährt haben sich Konzentrationen von 0,001 ppm bis 10%.
  • Erfindungsgemäß können die Hydrophobine der Flüssigkeit (F) und/oder der Sperrschicht zugegeben werden. Dies kann durch einfaches Mischen des Hydrophobins oder bevorzugt einer geeigneten Hydrophobin-Formulierung mit der Flüssigkeit und/oder der Sperrflüssigkeit erfolgen. Das Versetzen mit Hydrophobin kann vor dem Bedecken der Flüssigkeitsoberfläche mit der Sperrflüssigkeit erfolgen, oder auch erst danach. Bevorzugt kann auch nur die Oberfläche der Flüssigkeit mit dem Hydrophobin behandelt werden. Dies kann beispielsweise dadurch erfolgen, indem man die Oberfläche, insbesondere eine Wasseroberfläche, vor dem Bedecken mit der Sperrflüssigkeit mit einer Hydrophobinlösung besprüht. Es kann auch eine bereits mit der Sperrflüssigkeit bedeckte Oberfläche mit einer Hydrophobin-Formulierung besprüht werden. Vorzugsweise wird das Hyrophobin in der Flüssigkeit gelöst oder suspendiert, bevor die Sperrflüssigkeit aufgetragen wird.
  • Es sind schon geringe Mengen an Hydrophobinen ausreichend, um erfindungsgemäß Verdunstungsverzögerung zu bewirken. Die Menge an Hydrophobinen wird vom Fachmann bestimmt. Bewährt haben sich Mengen von ca. 1 bis 10 g/m2 Oberfläche, bevorzugt 3 bis 8 g/m2.
  • Die Erfindung eignet sich insbesondere zum Schutz von Industriewasser vor Verdunstung, beispielsweise für Bergbauanwendungen.
  • Als natürliche Stoffe, biologisch abbaubare Systeme können Hydrophobine bevorzugt in bioloigisch abbaubaren Systemen engesetzt werden, beispielsweise, indem man als Sperrflüssigkeit eine biologisch gut abbaubare Flüssigkeit, wie beispeilsweise ein natürlich vorkommendes, pflanzliches, tierisches oder bakterielles Öl einsetzt. Beispiele uumfassen Rapsöl oder sogenannten „Bio-Diesel".
  • Die folgenden Beispiele sollen die Erfindung näher erläutern.
  • Teil A: Herstellung und Test der erfindungsgemäß verwendeten Hydrophobine
  • Beispiel 1
  • Vorarbeiten für die Klonierung von yaad-His6/yaaE-His6
  • Mit Hilfe der Oligonukleotide Hal570 und Hal571 (Hal 572/Hal 573) wurde eine Polymerase Kettenreaktion durchgeführt. Als Template DNA wurde genomische DNA des Bakteriums Bacillus subtilis verwendet. Das erhaltene PCR Fragment enthielt die codierende Sequenz des Gens yaaD/yaaE aus Bacillus subtilis, und an den Enden je eine NcoI bzw. BgIII Restriktionsschnittstelle. Das PCR Fragment wurde gereinigt und mit den Restriktionsendonukleasen NcoI und BgIII geschnitten. Dieses DNA Fragment wurde als Insert verwendet, und in den zuvor mit den Restriktionsendonukleasen NcoI und BgIII linearisierten Vektor pQE60 der Firma Qiagen kloniert. Die so enstandenen Vektoren pQE60YAAD#2/pQE60YaaE#5 können zur Expression von Proteinen bestehend aus, YAAD::HIS6 bzw. YAAE::HIS6 verwendet werden.
    • Hal570: gcgcgcccatggctcaaacaggtactga
    • Hal571: gcagatctccagccgcgttcttgcatac
    • Hal572: ggccatgggattaacaataggtgtactagg
    • Hal573: gcagatcttacaagtgccttttgcttatattcc
  • Beispiel 2
  • Klonierung von yaad-Hydrophobin DewA-His6
  • Mit Hilfe der Oligonukleotide KaM 416 und KaM 417 wurde eine Polymerase Kettenreaktion durchgeführt. Als Template DNA wurde genomische DNA des Schimmelpilzes Aspergillus nidulans verwendet. Das erhaltene PCR Fragment enthielt die codierende Sequenz des Hydrophobin Gens dewA und einer N-Terminalen FaktorXa Proteinase Schnittstelle. Das PCR Fragment wurde gereinigt und mit der Restriktionsendonuklease BamHI geschnitten. Dieses DNA Fragment wurde als Insert verwendet, und in den zuvor mit der Restriktionsendonuklease BgIII linearisierten Vektor pQE60YAAD#2 kloniert.
  • Der so enstandene Vektor #508 kann zur Expressions eines Fusionsproteins bestehend aus, YAAD::Xa::dewA::HIS6 verwendet werden.
    • KaM416: GCAGCCCATCAGGGATCCCTCAGCCTTGGTACCAGCGC
    • KaM417: CCCGTAGCTAGTGGATCCATTGAAGGCCGCATGAAGTTCTCCGTCTCCGC
  • Beispiel 3
  • Klonierung von yaad-Hydrophobin RodA-His6
  • Die Klonierung des Plasmids #513 erfolgte analog zu Plasmid #508 unter Verwendung der Oligonukleotide KaM 434 und KaM 435.
    • KaM434: GCTAAGCGGATCCATTGAAGGCCGCATGAAGTTCTCCATTGCTGC
    • KaM435: CCAATGGGGATCCGAGGATGGAGCCAAGGG
  • Beispiel 4
  • Klonierung von yaad-Hydrophobin BASF1-His6
  • Die Klonierung des Plasmids #507 erfolgte analog zu Plasmid #508 unter Verwendung der Oligonukleotide KaM 417 und KaM 418.
  • Als Template DNA wurde ein künstlich synthetisierte DNA Sequenz – Hydrophobin BASF1 -eingesetzt (siehe Anhang).
    • KaM417: CCCGTAGCTAGTGGATCCATTGAAGGCCGCATGAAGTTCTCCGTCTCCGC
    • KaM418: CTGCCATTCAGGGGATCCCATATGGAGGAGGGAGACAG
  • Beispiel 5
  • Klonierung von yaad-Hydrophobin BASF2-His6
  • Die Klonierung des Plasmids #506 erfolgte analog zu Plasmid #508 unter Verwendung der Oligonukleotide KaM 417 und KaM 418.
  • Als Template DNA wurde ein künstlich synthetisierte DNA Sequenz – Hydrophobin BASF2 -eingesetzt (siehe Anhang).
    • KaM417: CCCGTAGCTAGTGGATCCATTGAAGGCCGCATGAAGTTCTCCGTCTCCGC
    • KaM418: CTGCCATTCAGGGGATCCCATATGGAGGAGGGAGACAG
  • Beispiel 6
  • Klonierung von yaad-Hvdrophobin SC3-His6
  • Die Klonierung des Plasmids #526 erfolgte analog zu Plasmid #508 unter Verwendung der Oligonukleotide KaM464 und KaM465.
  • Als Template DNA wurde cDNA von Schyzophyllum commune eingesetzt (siehe Anhang).
    • KaM464: CGTTAAGGATCCGAGGATGTTGATGGGGGTGC
    • KaM465: GCTAACAGATCTATGTTCGCCCGTCTCCCCGTCGT
  • Beispiel 7
  • Fermentation des rekombinanten E.coli Stammes yaad-Hvdrophobin DewA-His6
  • Inokulation von 3ml LB Flüssigmedium mit einem yaad-Hydrophobin DewA-His6 exprimierenden E.coli Stamm in 15ml Greiner Röhrchen. Inkubation für 8h bei 37°C auf einem Schüttler mit 200 UpM. Je 2 1l Erlenmeyer Kolben mit Schikanen und 250ml LB Medium (+ 100μg/ml Ampicillin) werden mit jeweils 1 ml der Vorkultur angeimpft und 9h bei 37°C auf einem Schüttler mit 180 UpM inkubiert.
  • 13.5l LB-Medium (+100μg/ml Ampicillin) in einem 20l Fermenter mit 0,5l Vorkultur (OD600nm 1:10 gegen H2O gemessen) animpfen. Bei einer OD60nm von ~3.5 Zugabe von 140ml 100mM IPTG. Nach 3h Fermenter auf 10°C abkühlen und Fermentationsbrühe abzentrifugieren. Zellpellet zur weiteren Aufreinigung verwenden.
  • Beispiel 8
  • Reinigung des rekombinanten Hydrohobin-Fusionsproteins
  • (Reinigung von Hydrophobin-Fusionsproteinen, die ein C-terminates His6-tag besitzen)
  • 100 g Zellpellet (100-500 mg Hydrophobin) werden mit 50 mM Natriumphosphatpuffer, pH 7,5 auf 200 ml Gesamtvolumen aufgefüllt und resuspendiert. Die Suspension wird mit einem Ultraturrax Typ T25 (Janke und Kunkel; IKA-Labortechnik) für 10 Minuten behandelt und anschliessend für 1 Stunde bei Raumtemperatur mit 500 Einheiten Benzonase (Merck, Darmstadt; Best.-Nr. 1.01697.0001) zum Abbau der Nukleinsäuren inkubiert. Vor dem Zellaufschluss wird mit einer Glaskartusche (P1) filtriert. Zum Zellaufschluß und für das Scheren der restlichen genomischen DNA werden zwei Homogenisatorläufe bei 1.500 bar durchgeführt (Microfluidizer M-110EH; Microfluidics Corp.). Das Homogenisat wird zentrifugiert (Sorvall RC-5B, GSA-Rotor, 250 ml Zentrifugenbecher, 60 Minuten, 4°C, 12.000 Upm, 23.000 g), der Überstand auf Eis gestellt und das Pellet in 100 ml Natriumphosphatpuffer, pH 7,5 resuspendiert. Zentrifugation und Resuspendieren werden dreimal wiederholt, wobei der Natriumphosphatpuffer bei der dritten Wiederholung 1% SDS enthält. Nach der Resuspension wird für eine Stunde gerührt und eine abschliessende Zentrifugation durchgeführt (Sorvall RC-5B, GSA-Rotor, 250 ml Zentrifugenbecher, 60 Minuten, 4°C, 12.000 Upm, 23.000 g). Gemäß SDS-PAGE Analyse ist das Hydrophobin nach der abschliessenden Zentrifugation im Überstand enthalten (1). Die Versuche zeigen, dass das Hydrophobin wahrscheinlich in Form von Einschlusskörpern in den entsprechenden E.coli Zellen enthalten ist. 50 ml des Hydrophobin-enthaltenden Überstandes werden auf eine 50 ml Nickel-Sepharose High Performance 17-5268-02 Säule aufgetragen (Amersham), die mit 50 mM Tris-Cl pH 8,0 Puffer äquilibriert wurde. Die Säule wird mit 50 mM Tris-Cl pH 8,0 Puffer gewaschen und das Hydrophobin anschliessend mit 50 mM Tris-Cl pH 8,0 Puffer, der 200 mM Imidazol enthält, eluiert. Zur Entfernung des Imidazols wird die Lösung gegen 50 mM Tris-Cl pH 8,0 Puffer dialysiert.
  • 1 zeigt die Reinigung des hergestellten Hydrophobins:
    • Spur 1: Auftrag Nickel-Sepharose Säule (1:10 Verdünnung)
    • Spur 2: Durchlauf = Eluat Waschschritt
    • Spuren 3-5: OD 280 Maxima der Elutionsfraktionen
  • Das Hydrophobin der 1 besitzt ein Molekulargewicht von ca. 53 kD. Die kleineren Banden repräsentieren zum Teil Abbauprodukte des Hydrophobins.
  • Beispiel 9
  • Charakterisierung des Hydrophobins durch Kontaktwinkeländerung eines Wassertropfens auf Glas
  • Substrat:
  • Glas (Fensterglas, Süddeutsche Glas, Mannheim):
    • – Konzentration Hydrophobin: 100 μg/mL
    • – Inkubation von Glasplättchen über Nacht (Temperatur 80°C) in 50mM Na-Acetat pH 4 + 0,1% Tween 20
    • – danach Beschichtung waschen in destilliertem Wasser
    • – danach Inkubation 10min/80°C/1% SDS-Lösung in dest. Wasser
    • – Waschen in dest. Wasser
  • Die Proben werden an der Luft getrocknet und der Kontaktwinkel (in Grad) eines Tropfens von 5 μl Wasser bestimmt.
  • Die Kontaktwinkelmessung wurde auf einem Gerät Dataphysics Contact Angle System OCA 15+, Software SCA 20.2.0. (November 2002) bestimmt. Die Messung erfolgte gemäss den Herstellerangaben.
  • Unbehandeltes Glas ergab einen Kontaktwinkel von 30 ± 5°; eine Beschichtung mit dem funktionellen Hydrophobin gemäss Beispiel 8 (yaad-dewA-his6) ergab Kontaktwinkel von 75 ± 5°.
  • Teil B:
  • Verwendung der Hydrophobine zur Reduzierung der Verdunstungsgeschwindigkeit
  • Verwendete Lösung:
  • Für die anwendungstechnischen Versuche wurde eine Lösung des gemäß Beispiel 8 hergestellten Fusionsproteines yaad-Xa-dewA-his (SEQ ID NO: 19) eingesetzt. Konzentration des Hydrophobins in Lösung: 6,1 mg/ml.
  • Nullversuch: Wasser ohne Sperrflüssigkeit
  • Durch Verdünnen mit Wasser wurde eine Lösung einer Konzentration von 1 mg/ml Hydrophobin erhalten. 100 g davon wurden in ein Becherglas von 10 cm Durchmesser eingefüllt. Zu Vergleichszwecken wurden 100 g Wasser ohne Hydrophobin-Zusatz verwendet. Beide Proben wurden bei 22°C und 50-60% relativer Feuchte in einem Klimaschrank gelagert.
  • Es wurde kein signifikanter Unterschied bei der Verdunstung des Wassers bzw. der Hydrophobin-Lösung beobachtet. Bei beiden Proben waren nach 3 Tagen ca. 70 des Wassers verdunstet.
  • Beispiel 10:
  • In einem Becherglas mit einem Durchmesser von 10 cm wurden 6,56 g der oben erwähnten Hydrophobin-Lösung mit Wasser auf insgesamt 200 g verdünnt (Hydrophobin-Konzentration 0,2 mg/ml, Gesamtmenge 40 mg). Die Oberfläche der Flüssigkeit (Fläche: 78,5 cm2) wurde mit 3,5 g Dieselöl (Dichte 0,83 g/ml) als Sperrflüssigkeit bedeckt. Die Wasseroberfläche wurde hiervon vollständig bedeckt. Die Dicke der Sperrschscht betrug ca. 0,54 mm.
  • Vergleichsbeispiel:
  • Zu Vergleichzwecken wurden 200 g Wasser ohne Hydrophobin-Zusatz in der beschriebenen Art und Weise mit der Sperrflüssigkeit überschichtet.
  • Lagerung der Proben:
  • Die Proben wurden bei 22°C und 50-60% relativer Feuchte in einem Klimaschrank gelagert. Die Gewichtsabnahme wurde über insgesamt 20 Tage jeweils durch Auswiegen bestimmt. Es wurden jeweils zwei Versuche und zwei Vergleichsversuche durchgeführt, und die erhaltenen Werte gemittelt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 1 zusammengefasst.
  • Figure 00210001
    Tabelle 1: Gesamte Flüssigkeitsmenge im Becherglas in Abhängigkeit von der Lagerdauer
  • Die Beispiele und Vergleichsbeispiele demonstrieren, dass durch den Zusatz von Hydrophobinen die verdunstungshemmende Wirkung der Sperrschicht signifikant gesteigert wird.
  • Während ohne den Hydrophobin-Zusatz nach 20 Tagen trotz Sperrschicht mehr als 60% des Wassers verdampfen, verdampfen bei Verwendung von Hydrophobinen als Zusatz in der gleichen Zeit nur etwa 13 Gew.-%. Die Qualität der Sperrschicht wird durch den Zusatz von Hydrophobin signifikant verbessert.
  • Beispiel 11:
  • In einem Becherglas mit einem Durchmesser von 10 cm wurden 6,56 g der oben erwähnten Hydrophobin-Lösung mit Wasser auf insgesamt 200 g verdünnt (Hydrophobin-Konzentration 0,2 mg/ml, Gesamtmenge 40 mg). Die Oberfläche der Flüssigkeit (Fläche: 78,5 cm2) wurde mit 6,0 g RME-Biodiesel als Sperrflüssigkeit bedeckt. Die Wasseroberfläche wurde hiervon vollständig bedeckt. Die Dicke der Sperrschicht betrug ca. 1,0 mm.
  • Vergleichsbeispiel:
  • Zu Vergleichzwecken wurden 200 g Wasser ohne Hydrophobin-Zusatz in der beschriebenen Art und Weise mit der Sperrflüssigkeit überschichtet.
  • Lagerung der Proben:
  • Die Proben wurden bei 22°C und 50-60% relativer Feuchte in einem Klimaschrank gelagert. Die Gewichtsabnahme wurde über insgesamt 19 Tage jeweils durch Auswie gen bestimmt. Es wurden jeweils zwei Versuche und zwei Vergleichsversuche durchgeführt, und die erhaltenen Werte gemittelt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 2 zusammengefasst.
  • Figure 00220001
    Tabelle 2: Gesamte Flüssigkeitsmenge im Becherglas in Abhängigkeit von der Lagerdauer
  • Die Beispiele und Vergleichsbeispiele demonstrieren, dass durch den Zusatz von Hydrophobinen die verdunstungshemmende Wirkung der Sperrschicht signifikant gesteigert wird.
  • Während ohne den Hydrophobin-Zusatz nach 19 Tagen trotz Sperrschicht mehr als 95% des Wassers verdampfen, verdampfen bei Verwendung von Hydrophobinen als Zusatz in der gleichen Zeit nur etwa 15 Gew.-%.
  • Beispiel 12:
  • In einem Becherglas mit einem Durchmesser von 10 cm wurden 6,56 g der oben erwähnten Hydrophobin-Lösung mit Wasser auf insgesamt 200 g verdünnt (Hydrophobin-Konzentration 0,2 mg/ml, Gesamtmenge 40 mg). Die Oberfläche der Flüssigkeit (Fläche: 78,5 cm2) wurde mit 6,0 g Rapsöl als Sperrflüssigkeit bedeckt. Die Wasseroberfläche wurde hiervon vollständig bedeckt. Die Dicke der Sperrschicht betrug ca. 1,0 mm.
  • Vergleichsbeispiel:
  • Zu Vergleichzwecken wurden 200 g Wasser ohne Hydrophobin-Zusatz in der beschriebenen Art und Weise mit der Sperrflüssigkeit überschichtet.
  • Lagerung der Proben:
  • Die Proben wurden bei 22°C und 50-60% relativer Feuchte in einem Klimaschrank gelagert. Die Gewichtsabnahme wurde über insgesamt 19 Tage jeweils durch Auswiegen bestimmt. Es wurden jeweils zwei Versuche und zwei Vergleichsversuche durchgeführt, und die erhaltenen Werte gemittelt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 3 zusammengefasst.
  • Figure 00230001
    Tabelle 3: Gesamte Flüssigkeitsmenge im Becherglas in Abhängigkeit von der Lagerdauer
  • Die Beispiele und Vergleichsbeispiele demonstrieren, dass durch den Zusatz von Hydrophobinen die verdunstungshemmende Wirkung der Sperrschicht signifikant gesteigert wird.
  • Während ohne den Hydrophobin-Zusatz nach 19 Tagen trotz Sperrschicht mehr als 90% des Wassers verdampfen, verdampfen bei Verwendung von Hydrophobinen als Zusatz in der gleichen Zeit nur etwa 35 Gew.-%.
  • Zuordnung der Sequenznamen zu DNA- und Polypeptidsequenzen im Sequenzprotokoll
    Figure 00240001
  • Es folgt ein Sequenzprotokoll nach WIPO St. 25. Dieses kann von der amtlichen Veröffentlichungsplattform des DPMA heruntergeladen werden.

Claims (13)

  1. Verfahren zur Verringerung der Verdunstungsgeschwindigkeit von Flüssigkeiten (F) in offenen Flüssigkeitsreservoiren, bei dem man die Oberfläche der Flüssigkeit mit einer mit dieser nicht mischbaren Sperrflüssigkeit (S) bedeckt, welche einen höheren Siedepunkt sowie eine geringere Dichte aufweist als die Flüssigkeit (F), dadurch gekennzeichnet, dass man der Flüssigkeit (F) und/oder der Sperrflüssigkeit (S) als Hilfsmittel mindestens ein Hydrophobin zusetzt.
  2. Verfahren gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei der Flüssigkeit (F) um Wasser handelt.
  3. Verfahren gemäß Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei der Sperrflüssigkeit (S) um ein Kohlenwasserstoffgemisch handelt.
  4. Verfahren gemäß Anspruch 1 oder 2, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei der Sperrflüssigkeit (S) um eine biologisch abbaubare Flüssigkeit handelt.
  5. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch gekennzeichnet, dass die Dicke der Sperrschicht nicht mehr als 1 mm beträgt.
  6. Verfahren gemäß einem der Ansprüche 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei dem Hydrophobin um ein Fusionsprotein handelt.
  7. Offenes Flüssigkeitsreservoir, mindestens umfassend eine Flüssigkeit (F) sowie eine Sperrflüssigkeit (S), welche einen höheren Siedepunkt sowie eine geringere Dichte aufweist als die Flüssigkeit (F), mit dieser nicht mischbar ist und die Oberfläche der Flüssigkeit (F) bedeckt, dadurch gekennzeichnet, dass das Flüssigkeitsreservoir weiterhin mindestens ein Hydrophobin umfasst.
  8. Offenes Flüssigkeitsreservoir gemäß Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei der Flüssigkeit (F) um Wasser handelt.
  9. Offenes Flüssigkeitsreservoir gemäß Anspruch 8 oder 9 dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei der der Sperrflüssigkeit (S) um ein Kohlenwasserstoffgemisch handelt.
  10. Offenes Flüssigkeitsreservoir gemäß Anspruch 8 oder 9, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei der Sperrflüssigkeit (S) um eine biologisch abbaubare Flüssigkeit handelt.
  11. Offenes Flüssigkeitsreservoir gemäß einem der Ansprüche 7 bis 10, dadurch gekennzeichnet, dass die Dicke der Sperrschicht nicht mehr als 1 mm beträgt.
  12. Offenes Flüssigkeitsreservoir gemäß einem der Ansprüche 7 bis 11, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei dem Hydrophobin um ein Fusionsprotein handelt.
  13. Verwendung von Hydrophobinen als Hilfsmittel für Flüssigkeitssperrschichten.
DE200510031463 2005-06-03 2005-07-04 Verfahren zur Verringerung der Verdunstungsgeschwindigkeit von Flüssigkeiten Withdrawn DE102005031463A1 (de)

Priority Applications (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE200510025969 DE102005025969A1 (de) 2005-06-03 2005-06-03 Verfahren zur Verringerung der Verdunstungsgeschwindigkeit von Flüssigkeiten
DE200510031463 DE102005031463A1 (de) 2005-06-03 2005-07-04 Verfahren zur Verringerung der Verdunstungsgeschwindigkeit von Flüssigkeiten
AU2006254154A AU2006254154B2 (en) 2005-06-03 2006-05-30 Method for reducing the evaporation rate of liquids
PCT/EP2006/062735 WO2006128877A1 (de) 2005-06-03 2006-05-30 Verfahren zur verringerung der verdunstungsgeschwindigkeit von flüssigkeiten
PE2006000615A PE20070059A1 (es) 2005-06-03 2006-06-05 Metodo para reducir la velocidad de evaporizacion de los liquidos
ECSP078035 ECSP078035A (es) 2005-06-03 2007-12-19 Método para reducir la velocidad de evaporización de líquidos

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE200510025969 DE102005025969A1 (de) 2005-06-03 2005-06-03 Verfahren zur Verringerung der Verdunstungsgeschwindigkeit von Flüssigkeiten
DE200510031463 DE102005031463A1 (de) 2005-06-03 2005-07-04 Verfahren zur Verringerung der Verdunstungsgeschwindigkeit von Flüssigkeiten

Publications (1)

Publication Number Publication Date
DE102005031463A1 true DE102005031463A1 (de) 2007-01-11

Family

ID=36940382

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE200510025969 Withdrawn DE102005025969A1 (de) 2005-06-03 2005-06-03 Verfahren zur Verringerung der Verdunstungsgeschwindigkeit von Flüssigkeiten
DE200510031463 Withdrawn DE102005031463A1 (de) 2005-06-03 2005-07-04 Verfahren zur Verringerung der Verdunstungsgeschwindigkeit von Flüssigkeiten

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
DE200510025969 Withdrawn DE102005025969A1 (de) 2005-06-03 2005-06-03 Verfahren zur Verringerung der Verdunstungsgeschwindigkeit von Flüssigkeiten

Country Status (5)

Country Link
AU (1) AU2006254154B2 (de)
DE (2) DE102005025969A1 (de)
EC (1) ECSP078035A (de)
PE (1) PE20070059A1 (de)
WO (1) WO2006128877A1 (de)

Families Citing this family (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2008019965A1 (de) 2006-08-15 2008-02-21 Basf Se Verfahren zur herstellung von trockenen freifliessenden hydrophobinzubereitungen
KR101455885B1 (ko) 2007-03-06 2014-11-04 바스프 에스이 하이드로포빈으로 개질된 개방셀 발포체
WO2008142111A1 (de) * 2007-05-24 2008-11-27 Basf Se Verwendung von hydrophobinen als hilfsmittel bei der kristallisation von feststoffen
EP2200651A2 (de) 2007-09-13 2010-06-30 Basf Se Verwendung von hydrophobin-polypeptiden als penetrationsverstärker
EP2042155A1 (de) 2007-09-28 2009-04-01 Basf Se Verfahren zum Entfernen von wasserunlöslichen Substanzen von Substratoberflächen
WO2010072665A1 (de) 2008-12-23 2010-07-01 Basf Se Modifizierung von nano- oder mesofasern oder textilen flächengebilden hergestellt mittels elektrospinnen mit amphiphilen proteinen
CA2752808A1 (en) 2009-03-09 2010-09-16 Basf Se Use of a synergistic mixture of water-soluble polymers and hydrophobins for thickening aqueous phases
WO2011015530A2 (en) 2009-08-03 2011-02-10 Basf Se Process for deposition of thin layers of metal oxides
JP2013523232A (ja) 2010-03-31 2013-06-17 ビーエーエスエフ ソシエタス・ヨーロピア 被覆されたステントおよびタンパク質で被覆する方法

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3431062A (en) * 1964-10-26 1969-03-04 Chevron Res Antievaporant process and composition
US3431064A (en) * 1964-12-23 1969-03-04 Chevron Res Antievaporant process and composition
US3459492A (en) * 1965-07-02 1969-08-05 Eastman Kodak Co Retarding evaporation of water
US3458274A (en) * 1967-04-21 1969-07-29 Exxon Research Engineering Co Retarding water evaporation from storage reservoirs
US3549313A (en) * 1969-06-04 1970-12-22 Texaco Inc Composition and method for retarding evaporation of water
RU2102560C1 (ru) * 1990-04-18 1998-01-20 Владимир Федорович Раковский Способ предотвращения испарения воды с поверхности водоемов и водотоков
ATE315579T1 (de) * 2002-06-21 2006-02-15 Applied Nanosystems Bv Verfahren zur bindung einer verbindung an eine oberfläche

Also Published As

Publication number Publication date
AU2006254154A1 (en) 2006-12-07
ECSP078035A (es) 2008-01-23
WO2006128877A1 (de) 2006-12-07
AU2006254154B2 (en) 2010-11-25
PE20070059A1 (es) 2007-02-08
DE102005025969A1 (de) 2006-12-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
EP1848733B1 (de) Neue hydrophobinfusionsproteine, deren herstellung und verwendung
EP1869138B1 (de) Bohrspülung enthaltend hydrophobin
EP1904534B1 (de) Wässrige monomeremulsionen enthaltend hydrophobin
WO2006103252A2 (de) Verwendung von hydrophobin als phasen-stabilisator
DE102005031463A1 (de) Verfahren zur Verringerung der Verdunstungsgeschwindigkeit von Flüssigkeiten
DE102005027139A1 (de) Neue Cystein-verarmte Hydrophobinfusionsproteine, deren Herstellung und Verwendung
EP1866150B1 (de) Metallische substrate mit polypeptiden als haftvermittler
EP1866401B1 (de) Verwendung von hydrophobinen zur schmutzabweisenden behandlung von harten oberflächen
WO2006103251A1 (de) Verwendung von proteinen als demulgatoren
EP1893675B9 (de) Hydrophobin als beschichtungsmittel für expandierbare oder expandierte, thermoplastische polymerpartikel
DE102005048720A1 (de) Verwendung von Proteinen als Antischaum-Komponente in Kraftstoffen
EP1848734A2 (de) Verfahren zum beschichten von oberflächen mit hydrophobinen
WO2006103230A1 (de) Verwendung von hydrophobinen zur oberflächenbehandlung von gehärteten mineralischen baustoffen, naturstein, kunststein und keramiken
DE102005015043A1 (de) Verwendung von Polypeptiden als Haftvermittler
DE102005007480A1 (de) Neue Hydrophobinfusionsproteine, deren Herstellung und Verwendung
DE102005005737A1 (de) Neue Hydrophobinfusionsproteine, deren Herstellung und Verwendung
DE102005051515A1 (de) Verfahren zum Beschichten von Oberflächen mit Hydrophobinen
DE102005045770A1 (de) Verwendung von Polypeptiden als Haftvermittler
DE102005036341A1 (de) Verwendung von Hydrophobinen zur schmutzabweisenden Behandlung von harten Oberflächen

Legal Events

Date Code Title Description
8139 Disposal/non-payment of the annual fee