DE102005004643B4 - Antiviral combinations and their use - Google Patents

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Abstract

Antivirale Kombination mit sich gegenseitig verstärkender antiviraler Aktivität gegenüber umhüllten Viren bestehend aus carboxyalkylierten Hyaluronsäuresulfat-Derivaten der allgemeinen Formel

Figure 00000001
R = H, (CH2)nCOOX, SO3X
X = H, Na
n = 1, 2
bei denen R H, (CH2)nCOOX und/oder SO3X und X H und/oder Na sowie n = 1 oder 2 bedeuten, wobei, jeweils bezogen auf die in der Formel angegebene Disaccharid-Wiederholungseinheit der durchschnittliche Substitutionsgrad der (CH2)nCOOX-Gruppierung (DSCA) zwischen 0,1 und 1,0 und der durchschnittliche Substitutionsgrad der SO3X-Gruppierung (DSS) zwischen 0,5 und 3,9 beträgt sowie der nichtsubstituierte Anteil R = H sich jeweils zu 4 – (DSCA + DSS) ergänzt, und einem wässrigen Extrakt aus Melisse.Antiviral combination with mutually enhancing antiviral activity against enveloped viruses consisting of carboxyalkylated hyaluronic acid sulfate derivatives of the general formula
Figure 00000001
R = H, (CH 2 ) n COOX, SO 3 X
X = H, Na
n = 1, 2
in which R is H, (CH 2 ) n COOX and / or SO 3 X and XH and / or Na and n = 1 or 2, where, based in each case on the disaccharide repeat unit indicated in the formula, the average degree of substitution of (CH 2 ) n COOX moiety (DS CA) between 0.1 and 1.0 and the average degree of substitution of the SO 3 X moiety (DS S) is 0.5 to 3.9 and the unsubstituted proportion R = H in each case to 4 - (DS CA + DS S ) and an aqueous extract of melissa.

Description

Die Erfindung betrifft antivirale Kombinationen mit sich gegenseitig verstärkender antiviraler Aktivität gegenüber umhüllten Viren und ihre Verwendung.The The invention relates to antiviral combinations with each other reinforcing antiviral activity against enveloped viruses and their use.

Durch die Entwicklung hoch selektiver Nukleosid- und Nukleotidvirustatika wie z. B. Aciclovir, Penciclovir, Ganciclovir, Brivudin und Cidofovir für Herpesviren sowie z. B. Zidovudine, Diodanosine und Lamivudine für HIV (De Clercq, Nature Rev. Drug Disc., 11, 2002: 13–25) wurde ein bedeutender Fortschritt bei der Bekämpfung lebensbedrohlicher viraler Infektionen erreicht. Unter dem Aspekt der zunehmenden Resistenz von Viren gegenüber diesen Wirkstoffen wird es jedoch als dringend notwendig angesehen, neuartige antiviral wirksame Produkte zu entwickeln und für die Herstellung von kosmetischen Präparaten, von Mikrobiziden bzw. von Arzneimitteln bereitzustellen. Bei Langzeitanwendungen von Nukleosid- und Nukleotidvirustatika wurden beispielsweise häufig Resistenzentwicklungen gegenüber den genannten Wirkstoffen nachgewiesen (Arts et al., J. Virol. 72, 1998: 4858–65; Morfin and Thouvenot, J. Clin. Virol. 26, 2003: 29–37). Auf Grund des gleichen bzw. ähnlichen Wirkprinzips treten zudem Kreuzresistenzen auf. Um solche Kreuzresistenzen zu überwinden, wird nach neuen alternativen Wirkstoffen gesucht, die zur antiviralen Prophylaxe oder Therapie eingesetzt werden können. Ein weiterer Nachteil der genannten Verbindungen besteht darin, daß sie auch in den DNA-Stoffwechsel der infizierten Zellen eingreifen und deshalb die Gefahr in sich bergen, mutagene, teratogene oder onkogene Wirkungen hervorzurufen (Carr, Nature Rev. Drug Disc., 2, 2003: 624–634; Wutzler und Thust, Antivir. Res., 49, 2001: 55–74). Weiterhin hemmt keines der genannten Virustatika die Virusübertragung. Substanzen oder Substanzkombinationen, die bereits in einem sehr frühen Stadium in den viralen Vermehrungszyklus eingreifen und ein Anheften der Viren an die Zellen verhindern, würden beispielsweise die Palette der verfügbaren antiviralen Mittel erweitern. Damit könnten neben der Virusvermehrung auch die Virusausbreitung blockiert und Neuinfektionen wirksam vermieden werden.By the development of highly selective nucleoside and nucleotide viruses such as Acyclovir, penciclovir, ganciclovir, brivudine and cidofovir for herpesviruses as well as Zidovudine, Diodanosine and lamivudine for HIV (De Clercq, Nature Rev. Drug Disc., 11, 2002: 13-25) has become a significant Progress in fighting life-threatening viral infections. Under the aspect the increasing resistance of viruses to these agents However, it regarded as urgently needed, novel antiviral effective To develop products for and the manufacture of cosmetic preparations, of microbicides or of To provide medicines. For long-term use of nucleoside and nucleotide viruses, for example, have often become resistant to development across from the said active substances (Arts et al., J. Virol. 1998: 4858-65; Morfin and Thouvenot, J. Clin. Virol. 26, 2003: 29-37). On Reason of the same or similar In principle, cross-resistance also occurs. To such cross resistance to overcome looking for new alternative agents that are antiviral Prophylaxis or therapy can be used. Another disadvantage The said compounds is that they also in the DNA metabolism The infected cells intervene and therefore the danger in itself cause mutagenic, teratogenic or oncogenic effects (Carr, Nature Rev. Drug Disc., 2, 2003: 624-634; Wutzler and Thust, Antivir. Res., 49, 2001: 55-74). Furthermore, none of the antivirals mentioned inhibits viral transmission. Substances or substance combinations that are already in a very early Stage intervene in the viral propagation cycle and attaching For example, to prevent the viruses from reaching the cells would be the palette the available expand antiviral agents. This could in addition to the virus multiplication also Virus spreading is blocked and new infections effectively avoided become.

Polyanionische Verbindungen wie Polysulfate, -sulfonate oder -carboxylate sind in der Lage, mit viralen Glycoproteinen zu interagieren oder kompetitiv die Virus-Rezeptor-Bindung z. B. von Herpesviren oder HIV zu hemmen (Norkin, Clin. Microbiol. Rev., 8, 1995: 293–315; Stone, Nature Rev. Drug Disc., 1, 2002: 977–85; Coen und Schaffer, Nature. Rev. Drug Disc., 2, 2003: 278–88). Das große Molekulargewicht dieser Moleküle, schlechte Pharmakokinetiken sowie unzureichende Wirkungen in vivo trugen jedoch dazu bei, daß diese Substanzen bisher nicht zu einer Anwendung gelangten.polyanionic Compounds such as polysulfates, sulfonates or carboxylates are able to interact with viral glycoproteins or competitively the virus-receptor binding z. B. of herpesviruses or HIV (Norkin, Clin Microbiol Rev., 8, 1995: 293-315; Stone, Nature Rev. Drug Disc., 1, 2002: 977-85; Coen and Schaffer, Nature. Rev. Drug Disc., 2, 2003: 278-88). The size Molecular weight of these molecules, bad However, pharmacokinetics as well as inadequate effects in vivo contributed to help with this Substances have not yet been used.

Es ist bekannt, daß sich sulfatierte Polysaccharide zur Behandlung von Viruserkrankungen eignen ( DE 39 21 761 , DE 40 21 066 , EP 464759 , EP 0940410 , US 5861383 oder WO 2001013910 ).It is known that sulfated polysaccharides are suitable for the treatment of viral diseases ( DE 39 21 761 . DE 40 21 066 . EP 464759 . EP 0940410 . US 5861383 or WO 2001013910 ).

Die Sulfatierung von Polysacchariden bzw. ihrer substituierten Derivate gehört zum Stand der Technik und kann auf unterschiedliche Weise geschehen (wie bspw. in US 27 15 091 , WO 880 02 11 , JP 719 67 02 , DE 39 21 761 oder DE 698 03 362 offenbart). Ein bevorzugtes Verfahren zur Herstellung von Hyaluronsäuresulfaten ist die Sulfatierung von Hyaluronsäure mit Schwefeltrioxid/Pyridin- bzw. Schwefeltrioxid/DMF-Komplexen in einem aprotischen Lösungsmittel wie DMF (S. Möller, H.-P. Klöcking, P.-J. Müller, J.-H. Ozegowski, DE 198 13 234 , 1998). Das Ausmaß der Umsetzungen an den Hydroxylgruppen der Hyaluronsäure wird üblicherweise durch den durchschnittlichen Substitutionsgrad (DS) beschrieben, der die Anzahl der funktionalisierten Hydroxylgruppen bezogen auf eine Disaccharid-Wiederholungseinheit der Hyaluronsäure angibt. Entsprechend der Anzahl der Hydroxylgruppen pro Disaccharid-Wiederholungseinheit der Hyaluronsäure sind DS-Werte zwischen 0 und 4,0 realisierbar. Der durchschnittliche Substitutionsgrad (DS) an SO3-Gruppen (DSS) liegt für die genannten Sulfatierungsverfahren zwischen 0,5 und 3,9.The sulfation of polysaccharides or their substituted derivatives belongs to the prior art and can be done in different ways (such as in US 27 15 091 . WO 880 02 11 . JP 719 67 02 . DE 39 21 761 or DE 698 03 362 disclosed). A preferred method of preparing hyaluronic acid sulfates is the sulfation of hyaluronic acid with sulfur trioxide / pyridine or sulfur trioxide / DMF complexes in an aprotic solvent such as DMF (See Möller, H.-P. Klöcking, P.-J. Müller, J. Med H. Ozegowski, DE 198 13 234 , 1998). The extent of the reactions on the hydroxyl groups of hyaluronic acid is usually described by the average degree of substitution (DS), which indicates the number of functionalized hydroxyl groups relative to a disaccharide repeat unit of hyaluronic acid. Depending on the number of hydroxyl groups per disaccharide repeat unit of hyaluronic acid, DS values between 0 and 4.0 can be realized. The average degree of substitution (DS) on SO 3 groups (DS S ) is between 0.5 and 3.9 for the abovementioned sulfation processes.

Gleichfalls bekannt ist die Verwendung von medizinischen bzw. pharmazeutischen Kompositionen zur Herpes-Behandlung auf der Basis von pflanzlichen Produkten. In WO 95 110 35 wird eine kosmetische oder pharmazeutische Zubereitung mit antiviraler Wirkung auf der Basis eines Johanniskraut-Extrakts beschrieben, in DE 44 189 76 ein Phytotherapeutikum zur Behandlung von Infektionen des Herpes aus Extrakten aus Salbei, Spitzwegerich, Breitwegerich und Mistel.Also known is the use of medical or pharmaceutical compositions for herpes treatment based on plant products. In WO 95 110 35 describes a cosmetic or pharmaceutical preparation with antiviral activity based on St. John's Wort extract, in DE 44 189 76 a phytotherapeutic for the treatment of infections of herpes from extracts of sage, plantain, widespread and mistletoe.

US 65 090 42 beschreibt eine antivirale Komposition, die ein Extraktionsprodukt der Saubohne enthält. US 65 090 42 describes an antiviral composition containing an extraction product of broad bean.

Auch die antivirale und anti-inflammatorische Wirkung von wässrigen Melissenextrakten ist Gegenstand von Patenten (wie bspw. HU 208 255 , DE 101 00 809 , WO 2002 055 056 und EP 13 495 61 ), wobei ebenfalls die Behandlung von Lippenherpes erwähnt wird.Also, the antiviral and anti-inflammatory effect of aqueous lemon balm extracts is the subject of patents (such as. HU 208 255 . DE 101 00 809 . WO 2002 055 056 and EP 13 495 61 ), which also mentions the treatment of cold sores.

Die Schriften US 64 755 26 , US 2004 086 575 und US 67 303 29 haben Zink enthaltende Verbindungen in Kombination mit phenolischen Antioxidanzien und pflanzlichen Extrakten wie Melissenöl für eine antivirale Nutzung zum Gegenstand.The writings US 64 755 26 . US 2004 086 575 and US 67 303 29 have zinc-containing compounds gen in combination with phenolic antioxidants and herbal extracts such as lemon balm oil for antiviral use.

Eine pharmazeutische Komposition zur Behandlung von Herpes, bestehend aus einer quarternären Ammoniumverbindung (z. B. Benzalkoniumchlorid), einem antiviralen Wirkstoff (z. B. Acyclovir) und einem Pflanzenextrakt (z. B. Aloe vera, Melisse) beschreiben u. a. die Schriften WO 96 243 67 , DE 696 24 340 und EP 80 81 68 .A pharmaceutical composition for the treatment of herpes consisting of a quaternary ammonium compound (for example benzalkonium chloride), an antiviral active substance (for example acyclovir) and a plant extract (for example aloe vera, lemon balm) describes, inter alia, the publications WO 96 243 67 . DE 696 24 340 and EP 80 81 68 ,

EP 0 940 410 A1 offenbart die Sulfatierung von Hyaluronsäure in aprotischen Lösungsmitteln mit dem SO3/Pyridin-Komplex, ausgehend von einem Ammoniumsalz bzw. einem Ethyl- bzw. Benzylester (Veresterungsgrad 25–100%) von Hyaluronsäure. EP 0 940 410 A1 discloses the sulfation of hyaluronic acid in aprotic solvents with the SO 3 / pyridine complex, starting from an ammonium salt or an ethyl or benzyl ester (degree of esterification 25-100%) of hyaluronic acid.

Diese Produkte zeigen Wirkung auf die Thrombinzeit und die gesamte Blutgerinnungszeit sowie auch auf die Angiogenese. Die sulfatierten Hyaluronsäureester sind filmbildend und somit als Beschichtungsmaterial geeignet.These Products have an effect on the thrombin time and the total blood clotting time as well as on angiogenesis. The sulfated hyaluronic acid esters are film-forming and thus suitable as a coating material.

Aus der Publikation Mohrig, A.: „Melissenextrakt bei Herpes simplex – die Alternative zu Nucleosid-Analoga”. In: Deutsche Apotheker Zeitung, 1996, Vol. 136, S. 109–114 offenbart die Verwendung eines wässrigen Melisse-Extrakts zur Behandlung von Herpes simplex-Infektionen, wobei die virustatische Wirkung den glykosidisch gebundenen Phenolcarbonsäuren zugeschrieben wird.Out of the publication Mohrig, A .: "Melissa extract in herpes simplex - the Alternative to nucleoside analogues ". In: German pharmacist newspaper, 1996, Vol. 136, pp. 109-114 discloses the use of an aqueous Melissa extract for the treatment of herpes simplex infections, the virustatic effect attributed to the glycosidically linked phenolic carboxylic acids becomes.

EP 0 270 317 A2 offenbart eine pharmazeutische Zusammensetzung zur Behandlung von Virus-Erkrankungen (wie Herpesvirus-Infektionen), die einen antiviralen Wirkstoff und Hyaluronsäuresulfat enthält. EP 0 270 317 A2 discloses a pharmaceutical composition for the treatment of viral diseases (such as herpesvirus infections) containing an antiviral agent and hyaluronic acid sulfate.

Aus WO 00 44 367 A2 ist eine pharmazeutische Zusammensetzung zur Behandlung von HIV-Infektionen bekannt, die Hyaluronsäuresulfat mit einem Sulfatisierungsgrad von 2,5; 3,0 oder 3,5 bezogen auf die Disaccharid-Wiederholungseinheit der Hyaluronsäure und ein ätherisches Öl enthält.Out WO 00 44 367 A2 For example, there is known a pharmaceutical composition for the treatment of HIV infection which contains hyaluronic acid sulphate with a degree of sulphation of 2.5; Containing 3.0 or 3.5 based on the disaccharide repeat unit of hyaluronic acid and an essential oil.

Aus May, G. und Willuhn, G.: Antivirale Wirkung wässriger Pflanzenextrakte in Gewebekulturen. In: Arzneim.-Forschung, 1978, Vol. 28, S. 1–7 ist bekannt, dass ein Extrakt aus Melisseblättern eine sehr starke virustatische Wirkung auf Herpes-, Influenza- und Vaccinia-Viren hat.Out May, G. and Willuhn, G .: Antiviral effects of aqueous plant extracts in Tissue cultures. In: Arzneim.-Forschung, 1978, Vol. 28, pp 1-7 is known that an extract of melissa leaves a very strong virostatic effect on herpes, influenza and Vaccinia virus has.

EP 1 175 907 A1 offenbart eine kosmetische Zusammensetzung, die ein synthetisches sulfatiertes Polysaccharid zusammen mit einem weiteren Wirkstoff enthält, der synergistisch mit dem sulfatierten Polysaccharid wirkt. EP 1 175 907 A1 discloses a cosmetic composition containing a synthetic sulfated polysaccharide together with another active ingredient acting synergistically with the sulfated polysaccharide.

Synergistische Effekte unterschiedlicher antiviral wirkender Verbindungen sind wenig beschrieben worden. Die DD 241 192 beschreibt ein Verfahren zur Erhöhung der lokalen biologischen Wirkung bekannter Antiherpetika durch Zusatz von Phosphocholinen zu den ein herkömmliches Virostatika enthaltenden pharmazeutischen Zubereitungen, wobei aufgrund erhöhter viraler Wirksamkeit die Dosierung des Virustatikums reduziert werden konnte. Die zugesetzten Phosphocholine sind dabei selbst nicht oder nur sehr schwach antiviral wirksam und es sind auch keine Kombinationen von Phosphocholinen mit polyionischen Verbindungen bekannt. EP 049 73 41 hat eine synergistische Komposition mit antiviraler Wirkung, bestehend aus einem Fibroblastenwachstumsfaktor und sulfatierten Polysacchariden wie Heparin, Dextransulfat, Pentosanpolysulfat oder Dermatansulfat zum Gegenstand. Ein wesentlicher Nachteil dieser Kombinationen ist darin zu sehen, daß zur Bereitstellung der Fibroblastenwachstumsfaktoren aufwendige und kostenintensive Verfahren erforderlich sind, die einen Einsatz der beschriebenen Kombinationen aus ökonomischen Gründen stark einschränken.Synergistic effects of different antiviral compounds have been poorly described. The DD 241 192 describes a method for increasing the local biological effect of known antiherpetics by adding phosphocholines to the pharmaceutical preparations containing a conventional antiviral agent, wherein due to increased viral efficacy, the dosage of the antiviral agent could be reduced. The added phosphocholines are themselves not or only very weakly antivirally effective and there are no known combinations of phosphocholines with polyionic compounds. EP 049 73 41 has a synergistic composition with antiviral activity, consisting of a fibroblast growth factor and sulfated polysaccharides such as heparin, dextran sulfate, pentosan polysulfate or dermatan sulfate to the object. A major disadvantage of these combinations is the fact that the provision of the fibroblast growth factors consuming and costly procedures are required, which severely limit the use of the combinations described for economic reasons.

Obwohl, wie oben beschrieben, eine Vielzahl von Substanzen oder Substanzkombinationen mit antiviralen Eigenschaften bekannt ist, besteht auf Grund der teilweise ungenügenden in vivo-Wirksamkeit dieser Verbindungen, ihrer zum Teil nicht unbedenklichen toxischen Nebenwirkungen sowie vermehrt auftretender Resistenzen von Viren gegenüber bekannten Wirkstoffen ein großer Bedarf an neuen antiviral wirkenden Verbindungen.Even though, As described above, a variety of substances or substance combinations with antiviral properties is known, due to the partially unsatisfactory In vivo efficacy of these compounds, their sometimes not safe toxic side effects and increased resistance of viruses known active ingredients a great Need for new antiviral compounds.

Aufgabe der vorliegenden Erfindung ist es deshalb, neuartige Zusammensetzungen bereit zu stellen, die auch in kleinsten Konzentrationen bereits als Virustatika zur wirksamen Prophylaxe und Therapie von Virusinfektionen geeignet sind und die keine toxischen Nebenwirkungen bei ihrer Anwendung zeigen.task Therefore, it is the object of the present invention to provide novel compositions ready to provide, even in the smallest concentrations already as antivirals for effective prophylaxis and therapy of viral infections are suitable and have no toxic side effects in their use demonstrate.

Der vorliegenden Erfindung liegt der überraschende Befund zugrunde, daß eine beliebige Kombination von antiviral wirksamen Hyaluronsäuresulfaten und/oder deren carboxyalkylierten Derivaten mit antiviral und zusätzlich antiinflammatorisch wirkenden Melisseextrakten zu einer enormen Wirkungsverstärkung führt. Überraschenderweise hemmen sogar Konzentrationen, die bei Einzelanwendung der Wirkstoffe keine antivirale Wirkung zeigen, bei kombinierter Anwendung sehr gut den HSV-1 induzierten zytopathischen Effekt. Die vorliegende Erfindung betrifft demzufolge eine Kombination von carboxyalkylierten Hyaluronsäuresulfaten der allgemeinen Formel,

Figure 00060001
R = H, (CH2)nCOOX, SO3X
X = H, Na
n = 1, 2
in der X identisch oder unabhängig voneinander H und/oder Na darstellen sowie R H, (CH2)nCOOX und/oder SO3X sowie n = 1 oder 2 bedeuten, wobei, jeweils bezogen auf die in Formel 1 angegebene Disaccharid-Wiederholungseinheit der durchschnittliche Substitutionsgrad der (CH2)nCOOX-Gruppierung (DSCA) zwischen 0,1 und 1,0 und der durchschnittliche Substitutionsgrad der SO3X-Gruppierung (DSS) zwischen 0,5 und 3,9 beträgt sowie der nichtsubstituierte Anteil R = H sich jeweils zu 4-(DSCA + DSS) ergänzt mit einem wässrigen Extrakt aus Melisse.The present invention is based on the surprising finding that any combination of antivirally active hyaluronic acid sulfates and / or their carboxyalkylated derivatives with antiviral and in addition anti-inflammatory Melisseextrakten leads to a tremendous increase in impact. Surprisingly, even concentrations which show no antiviral activity when used alone, inhibit the HSV-1-induced cytopathic effect very well when combined. The present invention accordingly relates to a combination of carboxyalkylated hyaluronic acid sulfates of the general formula
Figure 00060001
R = H, (CH 2 ) n COOX, SO 3 X
X = H, Na
n = 1, 2
in which X is identical or independent of each other, represent H and / or Na and also denote RH, (CH 2 ) n COOX and / or SO 3 X and n = 1 or 2, where, in each case based on the disaccharide repeating unit indicated in formula 1 average degree of substitution of the (CH 2 ) n COOX grouping (DS CA ) between 0.1 and 1.0 and the average degree of substitution of the SO 3 X grouping (DS S ) is between 0.5 and 3.9 and the unsubstituted portion R = H in each case to 4- (DS CA + DS S ) supplemented with an aqueous extract of balm.

Die Herstellung der als Komponente der erfindungsgemäßen antiviralen Kombination bereitzustellenden carboxyalkylierten Hyaluronsäuresulfate erfolgt durch Sulfatierung von carboxyalkylierten Hyaluronsäuren, die entsprechend einem Verfahren aus dem Stand der Technik, z. B. nach DE 39 21 761 , synthetisiert werden können. Bevorzugt erfolgt die anschließende Sulfatierung der carboxyalkylierten Hyaluronsäuren mit dem SO3/DMF-Komplex, da in diesem Fall der durchschnittliche Substitutionsgrad an Sulfatgruppen pro Disaccharid-Wiederholungseinheit der Hyaluronsäure (DSS) des carboxyalkylierten Hyaluronsäuresulfats über eine geeignete Wahl der Reaktionsbedingungen genau eingestellt werden kann. Ein wesentlicher Vorteil des genannten Herstellungsverfahrens liegt weiterhin in der Durchführbarkeit der Sulfatierungsreaktion und der Produktaufarbeitung in homogener Phase, wodurch eine gleichmäßige Sulfatierung mit einstellbarem DSS-Wert ermöglicht wird.The production of the carboxyalkylated hyaluronic acid sulfates to be provided as a component of the antiviral combination according to the invention is carried out by sulfation of carboxyalkylated hyaluronic acids, which are prepared according to a process from the prior art, eg. B. after DE 39 21 761 , can be synthesized. The subsequent sulfation of the carboxyalkylated hyaluronic acids with the SO 3 / DMF complex preferably takes place, since in this case the average degree of substitution of sulfate groups per disaccharide repeat unit of hyaluronic acid (DS S ) of the carboxyalkylated hyaluronic acid sulfate can be precisely adjusted via a suitable choice of the reaction conditions. A significant advantage of said production process is further the feasibility of the sulfation reaction and the product workup in a homogeneous phase, whereby a uniform sulfation with adjustable DS S value is made possible.

Die erfindungsgemäßen Substanzkombinationen zeigen eine hohe antivirale Wirksamkeit. Sie hemmen in starker Maße die Vermehrung von umhüllten Viren, wie z. B. Herpesviren.The Substance combinations according to the invention show a high antiviral activity. They greatly inhibit the reproduction of shrouded Viruses, such as B. herpesviruses.

Die erfindungsgemäßen Substanzkombinationen sind demzufolge für die Herstellung von kosmetischen Darreichungsformen, Mikrobiziden oder von Arzneimitteln zur Prophylaxe und Behandlung von Viruserkrankungen geeignet. Sie können z. B. in Form eines antiviral wirksamen Lippenpflegestiftes bzw. Hydrogels oder auch als mikrobiozide Vaginalgele Verwendung finden und aufgrund ihrer Zusammensetzung zur Prophylaxe und Heilung von Virusinfektionen dienen. Als Wirkstoffe werden die Hyaluronsäurederivate in fester bzw. flüssiger Form und/oder als Hydrogel in Kombination mit einem wässrigen Extrakt aus Melisse in die oben erwähnten Darreichungsformen eingebracht.The Substance combinations according to the invention are therefore for the production of cosmetic dosage forms, microbicides or of medicaments for the prophylaxis and treatment of viral diseases suitable. You can z. B. in the form of an antiviral lip balm or Hydrogels or as microbiocidal vaginal gels find use and because of their composition for the prophylaxis and cure of Serve viral infections. The active substances are the hyaluronic acid derivatives in solid or liquid Form and / or hydrogel in combination with an aqueous Extract of melissa introduced into the above-mentioned dosage forms.

Die erfindungsgemäßen Kombinationen eignen sich somit zur Entwicklung von Virustatika, die im Vergleich zu den im Stand der Technik genannten Verbindungen einen völlig anderen Wirkmechanismus bei gleich guter bzw. höherer antiviraler Wirkung besitzen, und können aufgrund dieser antiviralen Eigenschaften zur Herstellung von kosmetischen Zubereitungen, mikrobioziden Vaginalgelen und Arzneimitteln zur Bekämpfung viraler Infektionen dienen. Spezielle Verwendungen ergeben sich beispielsweise zur Prophylaxe und Therapie von Herpesinfektionen. Sie können sowohl allein als auch in Kombination mit bekannten Virustatika sowie mit physiologisch verträglichen Hilfs- und Trägerstoffen angewandt werden. Des weiteren können sie bei topischer Anwendung als Prophylaktika eingesetzt werden und die Virusübertragung verhindern.The combinations according to the invention are thus suitable for the development of antivirals, in comparison to the compounds mentioned in the prior art a completely different Possess mechanism of action with equally good or higher antiviral activity, and can due to these antiviral properties for the production of cosmetic Preparations, microbiocidal vaginal gels and medicines for Combat viral Serve infections. Special uses arise, for example for the prophylaxis and therapy of herpes infections. You can both alone as well as in combination with known antivirals as well as physiologically acceptable Auxiliaries and carriers be applied. Furthermore, you can they are used in topical use as prophylactics and virus transmission prevent.

Die folgenden Ausführungsbeispiele sollen die Erfindung näher erläutern, jedoch in keiner Weise einschränken.The following embodiments should the invention in more detail explain, but in no way limit.

Ausführungsbeispieleembodiments

1. Synthese von carboxymethylierter Hyaluronsäure1. Synthesis of carboxymethylated hyaluronic acid

Beispiel 1 (CH-1)Example 1 (CH-1)

2 g (4,98 mmol Hyaluronsäure, Na-Salz, Molmasse ca. 1 Mio) werden bei Raumtemperatur unter Schutzgasatmosphäre in Wasser gelöst. Es werden 3,5 ml (49,8 mmol) 40%-ige wässrige Natronlauge (14,3 mol) und nach 15 min 2,36 g (24,9 mmol) Chloressigsäure zugegeben. Die Lösung wird auf 60°C erwärmt und 2 h gerührt. Anschließend wird die Reaktionslösung auf Raumtemperatur abgekühlt, neutralisiert, dialysiert und gefriergetrocknet.

  • Ausbeute: 80%.
  • Durchschnittlicher Substitutionsgrad an Carboxymethylgruppen (DSCM, bestimmt durch Säure-Base-Titration): siehe Tabelle 1.
2 g (4.98 mmol hyaluronic acid, Na salt, molecular weight about 1 million) are dissolved at room temperature in a protective gas atmosphere in water. 3.5 ml (49.8 mmol) of 40% strength aqueous sodium hydroxide solution (14.3 mol) and, after 15 min, 2.36 g (24.9 mmol) of chloroacetic acid are added. The solution is warmed to 60 ° C and stirred for 2 h. Subsequently, the reaction solution is cooled to room temperature, neutralized, dialyzed and freeze-dried.
  • Yield: 80%.
  • Average degree of substitution of carboxymethyl groups (DS CM , determined by acid-base titration): see Table 1.

2. Synthese von carboxymethyliertem Hyaluronsäuresulfat2. Synthesis of carboxymethylated hyaluronic acid sulphate

Beispiel 2 (CS-1, 2)Example 2 (CS-1, 2)

1,15 mmol carboxymethylierte Hyaluronsäure (DSCM ~0,4) werden unter Schutzgas bei Raumtemperatur in 50 ml DMF gebracht und nach Zugabe von 1,84 mmol p-Toluol-sulfonsäure etwa 30 min suspendiert. Die Suspension wird auf 4°C gekühlt. Nach Zugabe von Molsieb A3 und den entsprechenden Mengen SO3/DMF-Komplex (CS-1: OH/SO3 = 1:3, CS-2: OH/SO3 = 1:5) wird die Reaktionsmischung 1 h gerührt. Anschließend wird das Molsieb abfiltriert, das Polymer in 400 ml Aceton ausgefällt und mit Natronlauge neutralisiert. Der Niederschlag wird abzentrifugiert, gewaschen, gegen Wasser dialysiert, 24 h gefriergetrocknet und bei 40°C im Vakuum getrocknet.

  • Ausbeute: 80–90%.
  • Schwefelgehalt (elementaranalytisch bestimmt) und DSS-Wert: siehe Tabelle 1.
1.15 mmol carboxymethylated hyaluronic acid (DS CM ~ 0.4) are placed under protective gas at room temperature in 50 ml of DMF and suspended after addition of 1.84 mmol of p-toluene-sulfonic acid for about 30 min. The suspension is cooled to 4 ° C. After addition of molecular sieve A3 and the corresponding amounts of SO 3 / DMF complex (CS-1: OH / SO 3 = 1: 3, CS-2: OH / SO 3 = 1: 5), the reaction mixture is stirred for 1 h. Subsequently, the molecular sieve is filtered off, the polymer is precipitated in 400 ml of acetone and neutralized with sodium hydroxide solution. The precipitate is centrifuged off, washed, dialyzed against water, freeze-dried for 24 h and dried in vacuo at 40.degree.
  • Yield: 80-90%.
  • Sulfur content (determined by elemental analysis) and DS S value: see Table 1.

Beispiel 3 (HS-1, CHS-3-6)Example 3 (HS-1, CHS-3-6)

1 g Hyaluronsäure bzw. ihres carboxymethylierten Derivats (Na-Salz) und 80 ml Wasser (bidest.) werden in einem geschlossenen Reaktionsgefäß bei Raumtemperatur bis zur vollständigen Lösung des Polymers gerührt. Die klare Lösung wird auf 0°C gekühlt, mit 5 g Ionenaustauscher (Dowex WX 8, H-Form) versetzt und 30 min gerührt. Die vom Ionenaustauscher abzentrifugierte Polymerlösung wird durch Zugabe von 10%-iger ethanolischer Tributylaminlösung auf pH-Wert 9 eingestellt. Anschließend wird die Lösung dreimal mit Diethylether extrahiert, die Lösung gefriergetrocknet und bei 40°C im Ölpumpenvakuum getrocknet.1 g hyaluronic acid or their carboxymethylated derivative (Na salt) and 80 ml of water (bidest.) Are placed in a closed reaction vessel at room temperature until the complete solution the polymer is stirred. The clear solution gets to 0 ° C cooled, with 5 g of ion exchanger (Dowex WX 8, H-form) and 30 min touched. The centrifuged from the ion exchanger polymer solution is by adding 10% ethanolic tributylamine solution pH 9 is set. Subsequently becomes the solution extracted three times with diethyl ether, the solution is freeze-dried and at 40 ° C in oil pump vacuum dried.

500 mg des so erhaltenen Ammoniumsalzes der Hyaluronsäure bzw. ihres carboxymethylierten Derivats werden in 50 ml absolutem DMF unter Argon bei Raumtemperatur gelöst, auf 0°C gekühlt und mit entsprechenden Mengen an SO3/DMF-Komplex (HS-1: OH/SO3 = 1:20, CHS-3, CHS-4: OH/SO3 = 1:20, CHS-5: OH/SO3 = 1:5, CHS-6: OH/SO3 = 1:3) versetzt. Es wird 1 h bei 0°C gerührt. Die klare Reaktionslösung wird in ca. 500 ml Aceton ausgefällt und mit ethanolischer NaOH neutralisiert. Der Niederschlag wird mehrmals mit Aceton gewaschen, in Wasser (bidest.) gelöst, in Wasser dialysiert und anschließend gefriergetrocknet. Das erhaltene Produkt wird bei 50°C im Vakuum bis zur Gewichtskonstanz getrocknet.

  • Ausbeute: 80–90%.
  • Schwefelgehalt (elementaranalytisch bestimmt) und DSS-Wert: siehe Tabelle 1.
500 mg of the resulting ammonium salt of hyaluronic acid or its carboxymethylated derivative are dissolved in 50 ml of absolute DMF under argon at room temperature, cooled to 0 ° C. and treated with appropriate amounts of SO 3 / DMF complex (HS-1: OH / SO 3 = 1:20, CHS-3, CHS-4: OH / SO 3 = 1:20, CHS-5: OH / SO 3 = 1: 5, CHS-6: OH / SO 3 = 1: 3). It is stirred for 1 h at 0 ° C. The clear reaction solution is precipitated in about 500 ml of acetone and neutralized with ethanolic NaOH. The precipitate is washed several times with acetone, dissolved in water (bidist.), Dialyzed in water and then freeze-dried. The product obtained is dried at 50 ° C in vacuo to constant weight.
  • Yield: 80-90%.
  • Sulfur content (determined by elemental analysis) and DS S value: see Table 1.

3. Verwendungsbeispiele3. Examples of use

3.1. Zytotoxizität und antivirale Wirkung von carboxymethylierten Hyaluronsäuresulfaten3.1. Cytotoxicity and antiviral effects of carboxymethylated hyaluronic acid sulfates

Anhand der in Tabelle 1 aufgeführten Substanzen soll beispielhaft die zytotoxische und antivirale Wirkung von carboxylierten Hyaluronsäuresulfaten aufgezeigt werden. Tabelle 1: Beispiele synthetisierter Hyaluronsäurederivate und Kontrollsubstanzen. Name Verbindung DSCM DSS Variante Sulfatierung PFA Phosphonoameisensäure 0 0 - Hya Hyaluronsäure 0 0 - CH-1 carboxymethylierte Hyaluronsäure 0,82 0 - HS-1 Hyaluronsäuresulfat 0 3,39 2 CHS-1 carboxymethylierte Hyaluronsäuresulfate 0,35 0,64 1 CHS-2 0,35 1,86 1 CHS-3 0,23 3,77 2 CHS-4 0,44 2,90 2 CHS-5 0,47 0,57 2 CHS-6 0,66 0,17 2 By means of the substances listed in Table 1, the cytotoxic and antiviral effect of carboxylated hyaluronic acid sulfates is to be demonstrated by way of example. Table 1: Examples of synthesized hyaluronic acid derivatives and control substances. Surname connection DS CM DS S Variant sulfation PFA phosphonoformic 0 0 - Hya hyaluronic acid 0 0 - CH-1 carboxymethylated hyaluronic acid 0.82 0 - HS-1 hyaluronic acid sulphate 0 3.39 2 CHS-1 carboxymethylated hyaluronic acid sulfates 0.35 0.64 1 CHS-2 0.35 1.86 1 CHS-3 0.23 3.77 2 CHS-4 0.44 2.90 2 CHS-5 0.47 0.57 2 CHS-6 0.66 0.17 2

3.2. Zytotoxizität3.2. cytotoxicity

Testbeschreibungtest Description

Die Zytotoxizität der Testverbindungen wird auf zwei Tage-alten GMK-Zell-Monolayern bestimmt (Schmidtke et al., J. Virol. Meth. 95, 2001: 133–143). Dazu werden 9 Verdünnungen der Substanz in 100 μl Testmedium zugegeben. Zellen ohne Substanz dienen als Kontrolle. Nach einer Inkubationszeit von 72 h bei 37°C mit 5% CO2, erfolgt die weitere Bearbeitung. Nach Entfernen des Zellkulturüberstandes werden die Zell-Monolayer 3 × mit 300 μl physiologischer Kochsalzlösung gewaschen, um tote Zellen zu entfernen. Die Fixierung und Färbung der Zellen erfolgt mit 50 μl einer 0,3%igen Kristallviolett-Lösung für 10 min. Nach 6-maligem Waschen mit 300 μl Wasser werden die gefärbten Monolayer 20 min mit 100 μl Lyse-Puffer (0,8979 g Natriumcitrat, 1,25 ml 1 N HCl in 98,05 ml 47,5% Ethanol) behandelt und das Kristallviolett herausgelöst. Die optische Dichte der einzelnen Vertiefungen wird bei 550/630 nm bestimmt. Die optische Dichte der 6 Kontrollen ohne Substanz wird 100% gesetzt. Anhand der mittleren Dosis-Wirkungs-Kurve von 3 unabhängigen Testen werden die 50% zytotoxische Konzentration (CC50) und maximal tolerierte Dosis (MTD = CC10) errechnet.The cytotoxicity of the test compounds is determined on two day old GMK cell monolayers (Schmidtke et al., J. Virol., Meth., 95: 2001, 133-143). For this purpose, 9 dilutions of the substance are added in 100 ul of test medium. Cells without substance serve as controls. After an incubation period of 72 h at 37 ° C with 5% CO 2 , further processing takes place. After removing the cell culture supernatant, the cell monolayers are washed 3 times with 300 μl of physiological saline to remove dead cells. The fixation and staining of the cells is carried out with 50 .mu.l of a 0.3% crystal violet solution for 10 min. After washing 6 times with 300 μl of water, the dyed monolayers are treated for 20 minutes with 100 μl lysis buffer (0.8979 g sodium citrate, 1.25 ml 1N HCl in 98.05 ml 47.5% ethanol) and the crystal violet removed. The optical density of the individual wells is determined at 550/630 nm. The optical density of the 6 controls without substance is set 100%. Based on the mean dose-response curve of 3 independent tests, the 50% cytotoxic concentration (CC 50 ) and the maximum tolerated dose (MTD = CC 10 ) are calculated.

Testergebnistest result

Die untersuchten, in Tabelle 1 aufgeführten, Substanzen und Melisse erwiesen sich im getesteten Konzentrationsbereich als sehr gut verträglich für GMK-Zellen. Sowohl die CC50 als auch die MTD lagen bei > 200 μg/ml.The investigated substances and melissa listed in Table 1 proved to be very well tolerated for GMK cells in the concentration range tested. Both CC 50 and MTD were> 200 μg / ml.

3.3. Antivirale Wirkung im zytopathischen Effekt(zpE)-Hemmtest3.3. Antiviral effect in the cytopathic Effect (cpE) -Hemmtest

Der zpE-Hemmtest wird auf 2 Tage alten GMK-Zellrasen in Mikrotiterplatten mit 96 Vertiefungen durchgeführt (Schmidtke et al., J. Virol. Meth. 95, 2001: 133–143). Nach dem Absaugen des Zellwachstum-Mediums werden 50 μl der Testsubstanz, gelöst im Testmedium, und eine bestimmte Viruskonzentration (HSV-1) in 50 μl des Testmediums zugegeben. 6 Vertiefungen mit Zellen ohne Virus und 6 Vertiefungen mit Virus, aber ohne Testsubstanz, dienen als Zell- bzw. Viruskontrolle auf jeder Platte. In jedem Test wird von Phosphonoameisensäure (PFA), die zuvor im Plaque-Reduktions-Test bestimmte 50%ige und 100%ige Hemmkonzentration (IC50 = 12,5 μg/ml und IC100 = 125 μg/ml) als Kontrolle mit geführt. Die Platten werden bei 37°C und 5% CO2 inkubiert. Die Entwicklung des zytopathischen Effektes (zpE) wird mikroskopisch verfolgt. Zirka 48 h nach Infektion, wenn die Viruskontrollen den maximalen zytopathischen Effekt zeigen und die Referenzverbindung (PFA) eine etwa 50 bzw. 100%-ige Hemmung, werden die Zellen fixiert und mit 0,3% Kristallviolett in Ethanol/Formalin-Lösung gefärbt. Nach dreimaligem Waschen und anschließendem Herauslösen des Farbstoffes mit einem Lysepuffer wird die optische Dichte bei 550/630 nm bestimmt und die antivirale Aktivität berechnet. Anhand der mittleren Dosis-Wirkungskurven von 3 unabhängigen Testen wird die 50%ige Hemmkonzentration ermittelt. Tabelle 2: 50%ige Hemmkonzentration (IC50) der Beispielsubstanzen Substanz Sulfatierungsgrad (DSS) IC50 (μg/ml) PFA nicht relevant 12,5 Hya 0 unwirksam CH-1 0 unwirksam HS-1 3,39 0,5 CHS-1 0,64 > 100 CHS-2 1,86 2,7 CHS-3 3,77 0,7 CHS-4 2,90 0,7 CHS-5 0,57 132,4 CHS-6 0,17 175,7 Melisse - 192,4 The zpE inhibition assay is performed on 2-day-old GMK cell lawns in 96-well microtiter plates (Schmidtke et al., J. Virol., Meth. 95, 2001: 133-143). After aspirating the cell growth medium, 50 μl of the test substance dissolved in the test medium and a specific virus concentration (HSV-1) in 50 μl of the test medium are added. 6 wells with no virus and 6 wells with virus but no test substance serve as cell or virus control on each plate. In each test, phosphonoformic acid (PFA), which had previously been determined in the plaque reduction assay as 50% and 100% inhibitory (IC 50 = 12.5 μg / ml and IC 100 = 125 μg / ml) control, was included , The plates are incubated at 37 ° C and 5% CO 2 . The development of the cytopathic effect (zpE) is followed microscopically. About 48 hours after infection, when the virus controls show the maximum cytopathic effect and the reference compound (PFA) has about 50 and 100% inhibition respectively, the cells are fixed and stained with 0.3% crystal violet in ethanol / formalin solution. After washing three times and then dissolving out the dye with a lysis buffer, the optical density at 550/630 nm is determined and the antiviral activity is calculated. Based on the mean dose-response curves of 3 independent tests, the 50% inhibitory concentration is determined. Table 2: 50% inhibitory concentration (IC 50 ) of the example substances substance Sulfation degree (DS S ) IC 50 (μg / ml) PFA Not relevant 12.5 Hya 0 ineffective CH-1 0 ineffective HS-1 3.39 0.5 CHS-1 0.64 > 100 CHS-2 1.86 2.7 CHS-3 3.77 0.7 CHS-4 2.90 0.7 CHS-5 0.57 132.4 CHS-6 0.17 175.7 balm - 192.4

Testergebnistest result

Die antivirale Wirkung der caboxymethylierten Hyaluronsäuresulfate steht in einem engen Zusammenhang mit ihrem Sulfatierungsgrad (Tabelle 2). Je stärker die Sulfatierung, desto stärker war die nachgewiesene Hemmung des HSV-1-induzierten zpE in GMK-Zellen und desto niedriger war die 50%ige Hemmkonzentration. Für die Verbindungen mit einem Schwefelgehalt von > 11% (CHS-3 und CHS-4) wurden IC50-Werte von 0,7 μg/ml ermittelt. Diese Werte entsprachen in etwa der 50%igen Hemmkonzentration des Hyaluronsäuresulfats (HS-1) und liegen um ein Vielfaches niedriger als die der Kontrollsubstanz PFA. Nichtsulfatierte Hyaluronsäure bzw. deren carboxymethyliertes Derivat (CH-1) sind im verwendeten Konzentrationsbereich bis 100 μg/ml nicht antiviral wirksam.The antiviral activity of caboxymethylated hyaluronic acid sulfates is closely related to their degree of sulfation (Table 2). The higher the sulfation, the stronger the demonstrated inhibition of HSV-1-induced zpE in GMK cells and the lower the 50% inhibitory concentration. For the compounds with a sulfur content of> 11% (CHS-3 and CHS-4), IC 50 values of 0.7 μg / ml were determined. These values corresponded approximately to the 50% inhibitory concentration of hyaluronic acid sulfate (HS-1) and are many times lower than that of the control substance PFA. Unsulfated hyaluronic acid or its carboxymethylated derivative (CH-1) are not antivirally active in the concentration range used up to 100 μg / ml.

3.4. Antivirale Wirkung von HS-1 und CHS-4 in Kombination mit Melisse3.4. Antiviral effects of HS-1 and CHS-4 in combination with lemon balm

Für die vergleichenden Untersuchungen zur antiviralen Wirkung von HS-1 und CHS-4 in Kombination mit Melisse wurden die unter Punkt 2 bereits beschriebenen zpE-Hemmteste eingesetzt. Die dabei einzeln sowie in Kombination eingesetzten Konzentrationen betrugen für Melisse 12,5, 25, 50, 100 und 200 μg/ml, für MS-1 und CHS-4 0,1, 0,2, 0,4, 0,8 und 1,6 μg/ml. Die mit HS-1 und Melisse bzw. CHS-4 und Melisse erzielten antiviralen Wirkungen sind in den Tabellen 3 bzw. 4 zusammenfassend dargestellt. Tabelle 3: Hemmung des HSV-1-induzierten zpE durch kombinierte Behandlung mit HS-1 und Melisse (Mittelwert aus 3 unabhängigen Versuchen) Hemmung des HSV-1-induzierten zpE (%) nach Behandlung mit HS-1 (μg/ml) Melisse (μg/ml) 0 6,25 12,5 25 50 100 200 0 0 0 0 0 0 0 41,9 0,1 0,9 0 0 0 0 21,7 67,1 0,2 0,7 26,2 34,8 29,9 42,7 60,8 84,5 0,4 8,8 71,1 64,1 67,8 56,5 77,5 79,7 0,8 64,8 79,1 81,8 81,6 72,6 84,2 78,3 1,6 87,5 75,9 88,4 83,5 77,3 79,5 77,1 Tabelle 4: Hemmung des HSV-1-induzierten zpE durch kombinierte Behandlung mit CHS-4 und Melisse (Mittelwert aus 3 unabhängigen Versuchen) Hemmung des HSV-1-induzierten zpE (%) nach Behandlung mit CHS-4 (μg/ml) Melisse (μg/ml) 0 6,25 12,5 25 50 100 200 0 0 0 0 0 0 2,9 37,9 0,1 0 0 0 0 6,8 53,3 74,1 0,2 3,6 8,6 37,6 30,3 58,5 68,1 85,8 0,4 3,2 59,7 74,2 72,8 56,5 87,0 81,9 0,8 62,6 68,5 72,6 80,6 77,8 79,9 81,4 1,6 84,1 84,7 82,4 82,9 79,6 79,3 77,1 For the comparative studies on the antiviral effect of HS-1 and CHS-4 in combination with lemon balm, the zpE inhibition tests already described under point 2 were used. The concentrations used individually and in combination were 12.5, 25, 50, 100 and 200 μg / ml for melissa, 0.1, 0.2, 0.4, 0.8 and 0.1 for MS-1 and CHS-4 1.6 μg / ml. The antiviral effects achieved with HS-1 and melissa or CHS-4 and melissa are summarized in Tables 3 and 4, respectively. Table 3: Inhibition of HSV-1-induced PPE by combined treatment with HS-1 and melissa (mean of 3 independent experiments) Inhibition of HSV-1-induced PPE (%) after treatment with HS-1 (μg / ml) Melissa (μg / ml) 0 6.25 12.5 25 50 100 200 0 0 0 0 0 0 0 41.9 0.1 0.9 0 0 0 0 21.7 67.1 0.2 0.7 26.2 34.8 29.9 42.7 60.8 84.5 0.4 8.8 71.1 64.1 67.8 56.5 77.5 79.7 0.8 64.8 79.1 81.8 81.6 72.6 84.2 78.3 1.6 87.5 75.9 88.4 83.5 77.3 79.5 77.1 Table 4: Inhibition of HSV-1 induced zpE by combined treatment with CHS-4 and melissa (mean of 3 independent experiments) Inhibition of HSV-1-induced PPE (%) after treatment with CHS-4 (μg / ml) Melissa (μg / ml) 0 6.25 12.5 25 50 100 200 0 0 0 0 0 0 2.9 37.9 0.1 0 0 0 0 6.8 53.3 74.1 0.2 3.6 8.6 37.6 30.3 58.5 68.1 85.8 0.4 3.2 59.7 74.2 72.8 56.5 87.0 81.9 0.8 62.6 68.5 72.6 80.6 77.8 79.9 81.4 1.6 84.1 84.7 82.4 82.9 79.6 79.3 77.1

Aus den Daten wird ersichtlich, dass sowohl die Kombination von Hyaluronsäuresulfat mit Melisse (Tabelle 3) als auch von caboxymethyliertem Hyaluronsäuresulfat (Tabelle 4) mit Melisse zu einer starken Steigerung der antiviralen Wirkung führte. Überraschenderweise hemmten sogar Konzentrationen, die bei Einzelanwendung der Wirkstoffe keine antivirale Wirkung zeigten, bei kombinierter Anwendung sehr gut den HSV-1 induzierten zytopathischen Effekt (fett gedruckt).Out The data will show that both the combination of hyaluronic acid sulfate with melissa (Table 3) as well as caboxymethylated hyaluronic acid sulfate (Table 4) with lemon balm to a strong increase in antiviral Effect led. Surprisingly even inhibited levels of single drug use did not show any antiviral effect, with combined use very good HSV-1-induced cytopathic effect (in bold).

Alle in der Beschreibung, den Tabellen und den nachfolgenden Ansprüchen dargestellten Merkmale können sowohl einzeln als auch in beliebiger Kombination miteinander erfindungswesentlich sein.All in the specification, tables and following claims Features can both individually and in any combination with each other invention essential be.

Claims (12)

Antivirale Kombination mit sich gegenseitig verstärkender antiviraler Aktivität gegenüber umhüllten Viren bestehend aus carboxyalkylierten Hyaluronsäuresulfat-Derivaten der allgemeinen Formel
Figure 00150001
R = H, (CH2)nCOOX, SO3X X = H, Na n = 1, 2 bei denen R H, (CH2)nCOOX und/oder SO3X und X H und/oder Na sowie n = 1 oder 2 bedeuten, wobei, jeweils bezogen auf die in der Formel angegebene Disaccharid-Wiederholungseinheit der durchschnittliche Substitutionsgrad der (CH2)nCOOX-Gruppierung (DSCA) zwischen 0,1 und 1,0 und der durchschnittliche Substitutionsgrad der SO3X-Gruppierung (DSS) zwischen 0,5 und 3,9 beträgt sowie der nichtsubstituierte Anteil R = H sich jeweils zu 4 – (DSCA + DSS) ergänzt, und einem wässrigen Extrakt aus Melisse.Antiviral combination with mutually enhancing antiviral activity against enveloped viruses consisting of carboxyalkylated hyaluronic acid sulfate derivatives of the general formula
Figure 00150001
R = H, (CH 2) n COOX, SO 3 XX = H, Na n = 1, 2 where R is H, (CH 2) n COOX and / or SO 3 X and X is H and / or Na, and n = 1 or 2, wherein, based in each case on the disaccharide repeat unit indicated in the formula, the average degree of substitution of the (CH 2 ) n COOX group (DS CA ) is between 0.1 and 1.0 and the average degree of substitution of the SO 3 X grouping (DS S ) is between 0.5 and 3.9, and the unsubstituted portion R = H is in each case added to 4 - (DS CA + DS S ), and an aqueous extract of melissa. Antivirale Kombination gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die carboxyalkylierten Hyalurosäuresulfate durchschnittliche Substitutionsgrade an Carboxyalkylgruppen im Bereich von 0,1 bis 1,0 sowie durchschnittliche Substitutionsgrade an Sulfatgruppen im Bereich von 0,5 bis 3,9, jeweils bezogen auf eine Disaccharid-Wiederholungseinheit der Hyaluronsäure aufweisen.Antiviral combination according to claim 1, characterized in that that the carboxyalkylated hyaluronic acid sulfates average Degrees of substitution of carboxyalkyl groups in the range of 0.1 to 1.0 and average substitution levels of sulfate groups in the range of 0.5 to 3.9, each based on a disaccharide repeat unit hyaluronic acid exhibit. Antivirale Kombination gemäß Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass die carboxyalkylierten Derivate der Hyaluronsäuresulfate sowie der wässrige Extrakt aus Melisse in einem beliebigen Mischungsverhältnis vorliegen.Antiviral combination according to claim 1, characterized in that that the carboxyalkylated derivatives of Hyaluronsäuresulfate as well as the watery Extract of melissa in any mixing ratio. Antivirale Kombination gemäß Anspruch 1 oder 3, dadurch gekennzeichnet, dass zusätzlich weitere antiviral, antibakteriell und/oder antiinflammatorisch wirkende Verbindungen enthalten sind.Antiviral combination according to claim 1 or 3, characterized marked that in addition further antiviral, antibacterial and / or antiinflammatory acting Compounds are included. Antivirale Kombination gemäß den Ansprüchen 1 bis 4, dadurch gekennzeichnet, dass zusätzlich organische oder anorganische Hilfsstoffe enthalten sind.Antiviral combination according to claims 1 to 4, characterized in that in addition orga niche or inorganic auxiliaries are included. Antivirale Kombination gemäß den Ansprüchen 1 bis 5, dadurch gekennzeichnet, dass die antiviralen Kombinationen flüssige, viskose, gelförmige, pastöse oder partikulare Gestalt aufweisen.Antiviral combination according to claims 1 to 5, characterized in that that the antiviral combinations liquid, viscous, gelatinous, pasty or have particulate shape. Verwendung der antiviralen Kombinationen gemäß einem oder mehrerer der Ansprüche 1 bis 6 zur Prophylaxe und Therapie von Viruserkrankungen.Use of the antiviral combinations according to one or more of the claims 1 to 6 for the prophylaxis and therapy of viral diseases. Verwendung der antiviralen Kombination gemäß einem oder mehrerer der Ansprüche 1 bis 6 zur Prophylaxe und Therapie von Viruserkrankungen, die speziell durch eine Infektion mit dem Herpes Simplex Virus hervorgerufen werden.Use of the antiviral combination according to one or more of the claims 1 to 6 for the prophylaxis and treatment of viral diseases specifically caused by an infection with the herpes simplex virus become. Verwendung der antiviralen Kombination gemäß einem oder mehrerer der Ansprüche 1 bis 6 als pharmazeutische Formulierungen zur Prophylaxe und Therapie von Viruserkrankungen.Use of the antiviral combination according to one or more of the claims 1 to 6 as pharmaceutical formulations for prophylaxis and therapy of viral diseases. Verwendung der antiviralen Kombination gemäß einem oder mehrerer der Ansprüche 1 bis 6 als kosmetische Zubereitungen oder kosmetische Artikel mit antiviralen Eigenschaften.Use of the antiviral combination according to one or more of the claims 1 to 6 as cosmetic preparations or cosmetic articles with antiviral properties. Verwendung der antiviralen Kombination gemäß Anspruch 10, dadurch gekennzeichnet, dass in den kosmetischen Zubereitungen oder kosmetischen Artikeln zusätzliche Träger- und Hilfsstoffe verwendet werden.Use of the antiviral combination according to claim 10, characterized in that in the cosmetic preparations or cosmetic articles additional Carrier- and adjuvants are used. Verwendung der antiviralen Kombination gemäß den Ansprüchen 10 oder 11, dadurch gekennzeichnet, dass es sich bei den kosmetischen Zubereitungen oder kosmetischen Artikeln um Lippenpflegestifte, Hydrogele, Vaginalgele oder Pflegecremes handelt.Use of the antiviral combination according to claims 10 or 11, characterized in that it is the cosmetic Preparations or cosmetic articles for lip balms, Hydrogels, vaginal gels or skin care creams.
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