DD289543A5 - NEW PHARMACOLOGIC ACTIVE CYCLOPEPTIDES AND METHOD FOR THE PRODUCTION THEREOF - Google Patents

Abstract

Die Erfindung bezieht sich auf die Entwicklung eines Verfahrens zur Herstellung neuer pharmakologisch-aktiver Cyclopeptide, vorzugsweise vom Casomorphin-Typ, in denen der Ringschlusz bei unveraendertem N-Terminus der Peptidkette ueber die entsprechenden Seitenkettenfunktion der Aminosaeure in Position 2 mit der C-terminalen Aminosaeure ueber eine Peptid- oder Esterbindung erfolgt. Die erfindungsgemaesz erhaltenen Cyclopeptidwirkstoffe zeichnen sich vor allem durch eine hohe analgetische Aktivitaet und Stabilitaet gegenueber enzymatischem Abbau aus und sind fuer die pharmazeutische Industrie, klinische Pharmakologie und Medizin von Bedeutung. Sie eignen sich als neuartige Wirkkomponenten in Human- und Tierarzneimitteln.{Cyclopeptide; Herstellung; Casomorphintyp; Peptidbindung; Esterbindung; Analgesie; Stabilitaet; Pharmakologie; Medizin; Arzneimittel}The invention relates to the development of a process for the preparation of novel pharmacologically active cyclopeptides, preferably of the casomorphine type, in which the ring closure at unchanged N-terminus of the peptide chain via the corresponding side chain function of the amino acids in position 2 with the C-terminal amino acid over a peptide or ester bond occurs. The cyclopeptide agents obtained according to the invention are distinguished, above all, by a high analgesic activity and stability against enzymatic degradation and are of importance for the pharmaceutical industry, clinical pharmacology and medicine. They are suitable as novel active components in human and veterinary medicinal products. {Cyclopeptides; manufacture; Casomorphintyp; Peptide bond; Esterbindung; Analgesia; Stability; Pharmacology; Medicine; Drug}

Description

X-B-C-D-E-S (II)X-B-C-D-E-S (II)

X-A-B-C-D-E-S (lll)₍ XABCDES (III) ₍

wobei A, B, C, D, E wie oben definiert sind, X eine a-Aminoschutzgruppe, bevorzugt tert.Butyloxycarbonyl und S = OH, aktivierte Ester, vorzugsweise 4-Nitrophenylester, Pentafluorphenylester, oder Hydrazid bedeuten, durch Verknüpfung der w-Amino- bzw. der Hydroxygruppe der Aminosäure B und der a-Carboxylgruppe der Aminosäure E erfolgt, wobei für den Fall B = Lysin, Ornithin, 2,4-Diaminobuttersäure in der L- oder D-Konfiguration die Cyclisierung mit Hilfe von !^,N'-Dicvclohexylcarbodiimid/Additiva (bevorzugt 1-Hydroxybenzotriazol), wasserlöslichen Carbodiimiden/Additive (bevorzugt 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyDcarbodiimid · HCI/1-Hydroxybenzotriazol), Esteraminolyse, dem Azid-Verfahren und vorzugsweise mit2-(1H-Benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluroniumsalzen oder Diphenylphosphorylazid als Aktivierungsreagenzien und für den Fall B = Hydroxyprolin, Hydroxypipecolinsäure in der L- oder D-Konfiguration die Cyclisierung zu den entsprechenden Lactonen mit Hilfe von ^N'-Dicyclohexylcarbodiimid, 2-(1H-Benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-Tetramethyluroniumsalzen jeweils in Gegenwart von 4-Dimethylaminopyridin als katalysator oder nach verschiedenen Varianten der Säurechloridmethode durchgeführt wird, die für X eingesetzte a-Aminoschutzgruppe mit den in der Peptidchemie üblichen Deblockierungsverfahren, für die bevorzugte tert.Butyloxycarbonyl-Schutzgruppe durch Acidolyse, entfernt wird und danach das aus Formel Il resultierende cyclische Tetrapeptid H-cyclo [B-C-D-E-] mit A nach den in der Peptidchemie üblichen Kupplungsmethoden, bevorzugt nach dem Mischanhydrid-Verfahren verlängert wird, wobei A, B, C, D und E wie oben ausgewiesen, definiert sind.where A, B, C, D, E are as defined above, X is an a-amino protecting group, preferably tert-butyloxycarbonyl and S = OH, activated esters, preferably 4-nitrophenyl ester, pentafluorophenyl ester, or hydrazide, by linking the w-amino - or the hydroxy group of the amino acid B and the a-carboxyl group of the amino acid E, wherein for the case B = lysine, ornithine, 2,4-diaminobutyric acid in the L or D configuration, the cyclization with the aid of! ^, N '- dicyclohexylcarbodiimide / additives (preferably 1-hydroxybenzotriazole), water-soluble carbodiimides / additives (preferably 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyldcarbodiimide.HCl / 1-hydroxybenzotriazole), ester aminolysis, the azide method, and preferably 2- (1H-benzotriazole 1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium salts or diphenylphosphoryl azide as activating reagents and for the case B = hydroxyproline, hydroxypipecolic acid in the L- or D-configuration the cyclization to the corresponding lactones with the aid of ^ N'-dicycloh Exylcarbodiimid, 2- (1H-benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-Tetramethyluroniumsalzen each in the presence of 4-dimethylaminopyridine is carried out as a catalyst or by various variants of the acid chloride method, the used for X a-amino protecting group with the Deblocking process which is customary in peptide chemistry and for which the preferred tert-butyloxycarbonyl protective group is removed by acidolysis, followed by removal of the cyclic tetrapeptide H-cyclo [BCDE-] resulting from formula II with A according to the coupling methods customary in peptide chemistry, preferably after the mixed anhydride reaction. Procedure is extended, wherein A, B, C, D and E are as defined above defined.

2. Verfahren zur Herstellung neuer pharmakologisch-aktiver Cyclopeptide nach Anspruch 1, gekennzeichnet dadurch, daßdie Verbindungen derallgemeinen Formel I und/oder deren Derivate und/oder deren pharmazeutisch annehmbare Salze und/oder deren Metallkomplexe als solche oder wahlweise bzw. zweckgebunden mit bekannten Pharmaka, vorzugsweise Analgetika und/oder Kardiotonika, kombiniert werden und ihr Wirkprofil in Abhängigkeit der Dosierung und durch gezielte Strukturmodifikation moduliert wird.2. A process for the preparation of novel pharmacologically active cyclopeptides according to claim 1, characterized in that the compounds of the general formula I and / or their derivatives and / or their pharmaceutically acceptable salts and / or their metal complexes as such or optionally with known pharmaceuticals, preferably analgesics and / or cardiotonics, are combined and their profile of action is modulated depending on the dosage and by targeted structural modification.

Anwendungsgebiet der ErfindungField of application of the invention

Die Erfindung betrifft die Entwicklung neuer pharmakologisch-aktiver Cyclopeptide. Die erfindungsgemäß dargestellten Cyclopeptide, vorzugsweise cyclisch-verzweigte Peptide vom Casomorphin-Typ, zeichnen sich im Vergleich zu den entsprechenden linearen Peptiden durch eine signifikante Potenzierung und Prolongierung ihrer Opiataktivität aus und besitzen eine hohe Resistenz gegenüber enzymatischem Abbau. Darüber hinaus kann das Wirkungsspektrum der erfindungsgemäß dargestellten Cyclopeptidwirkstoffe durch gezielte Strukturmodifikation moduliert werden. Die Erfindung ist zur Anwendung in der pharmazeutischen Industrie, der Medizin und klinischen Pharmakologie von Bedeutung.The invention relates to the development of new pharmacologically active cyclopeptides. The cyclopeptides according to the invention, preferably cyclic-branched casomorphine-type peptides, have a significant potentiation and proliferation of their opiate activity compared to the corresponding linear peptides and have a high resistance to enzymatic degradation. In addition, the spectrum of action of the cyclopeptide agents represented according to the invention can be modulated by targeted structural modification. The invention is of importance for use in the pharmaceutical, medical and clinical pharmacology.

-2- 289 543 Charakteristik des bekannten Standes der Technik-2- 289 543 characteristic of the known prior art

Bekannt ist, daß durch Cyclisierung linearer Peptidwirkstoffe bzw. entsprechender Analoga u.a. Bradykinin, Gonadoliberin, Somatostatin Cyclopeptidwirkstoffe mit hoher Stabilität gegenüber enzymatischem Abbau, teilweise mit höherer Wirkung, erhalten werden können (vgl. D. H. Coy et al., Central Nervous System Effect of Hypothalamic Hormones and other Peptides (Eds. R. Colley et al.), Raven Press, New York, 1979,317; D. F. Veber et al., Nature 292 (19811,55; K. Neubert et al., DDR-Patent C07 C103/52 No. 150199,1980; Y. Ovchinnikov et al.. Peptides 1982, Proc. 17th Europ. Peptide Symp. Prag, 1982 (Eds. K. Blaha, P. Malon], Walter de Gruyter & Co, Berlin, 1983,1).It is known that u.a. by cyclization of linear peptide active ingredients or corresponding analogues u.a. Bradykinin, gonadoliberin, somatostatin, cyclopeptide drugs with high stability to enzymatic degradation, sometimes with higher potency, can be obtained (see DH Coy et al., Central Nervous System Effect of Hypothalamic Hormones and other Peptides (Eds. R. Colley et al.). Raven Press, New York, 1979,317, DF Veber et al., Nature 292 (19811, 55; K. Neubert et al., GDR Patent C07 C103 / 52 No. 150199, 1980; Y. Ovchinnikov et al. Peptides 1982, Proc. 17th Europ. Peptide Symp. Prague, 1982 (Eds. K. Blaha, P. Malon], Walter de Gruyter & Co, Berlin, 1983,1).

Diese Untersuchungen wurden in den letzten Jahren auch auf Opiatpeptide des Enkephalin-Typs ausgedehnt. Dabei ist man von zwei Strategien ausgegangen. Die erste Gruppe umfaßt Cyciopeptide, boi denen der Ringschluß über die Seitenkette der Aminosäure in Position 2 mit dem C-Terminus des Peptides unter Knüpfung von Peptid- als auch Esterbindungen erfolgt (vgl. J.DiMaio et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA77 [1980], 7162; C.Zechel, K.Kessler und R.Geiger, Peptides: Structure and Function [Eds. CM. Deber, V.J. Hruby, K. D. Kopple], Pierce Chem. Corp., Rockford, III. 1985,507). Dazu gehören auch cyclische Enkephalinanaloga mit modifizierten Peptidbindungen bzw. retro-inverso Peptidbindungen, die sich durch eine Wirkungspotenzierung bei bevorzugter μ-Opiatrezeptorselektivität und erhöhter Stabilität gegenüber enzymatischem Abbau auszeichnen (vgl. J. V. Edwards et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 136 [1986], 730; J. M. Berman et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 115 [1983], 864).These studies have also been extended in recent years to opiate peptides of the enkephalin type. There are two strategies. The first group comprises cyciopeptides which undergo ring closure via the side chain of the amino acid in position 2 with the C-terminus of the peptide to form peptide bonds as well as ester bonds (see J. DiMaio et al., Proc. Natl. Acad. See U.S.A.77 [1980], 7162; C.Zechel, K.Kessler and R.Geiger, Peptides: Structure and Function [Eds CM Deber, VJ Hruby, KD Kopple], Pierce Chem. Corp., Rockford, III. 1985.507). These include cyclic enkephalin analogues with modified peptide bonds or retro-inverso peptide bonds, which are distinguished by an activity potentiation with preferred μ-opiate receptor selectivity and increased stability to enzymatic degradation (compare JV Edwards et al., Biochem. Biophys [1986], 730; JM Berman et al., Biochem., Biophys. Res., Commun., 115 [1983], 864).

Die zweite Gruppe umfaßt Cyciopeptide, bei denen die Ringschlußreaktion über Isopeptidbindungen zwischen w-Amino- und Carboxylgruppen basischer und saurer Aminosäuren in den Positionen 2 und 4 bzw. 5 des Enkephalin-Moleküls erfolgt. Diese cyclischen Enkephalin-Analoga zeichnen sich durch eine hohe μ-Opiatrezeptorselektivität aus (vgl. P.W. Schüler et al., J. Med. Chem. 30 [1987], 2094). Zu dieser Gruppe gehören auch Cyciopeptide mit Cystein bzw. Penicillamin (ß,ß-Dimethylcystein) in Position 2 und 5 des Enkephalin-Moleküls und Ringschluß über eine Disulfidbrücke (vgl. P.W. Schüler et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 101 [1981], 337; H.I.Mosberg et al., Proc. Natl. Acad. Sei. USA 80 [1983], 5871; J.Sarantakis, US-Patent No.4148786,1979). Diese Verbindungen besitzen eine ausgeprägte δ-Opiatrezeptorselektivität.The second group comprises cyciopeptides in which the ring closure reaction occurs via isopeptide bonds between w-amino and carboxyl groups of basic and acidic amino acids in positions 2 and 4 and 5, respectively, of the enkephalin molecule. These cyclic enkephalin analogues are distinguished by high μ-opiate receptor selectivity (compare P.W. Schüler et al., J. Med. Chem. 30 [1987], 2094). This group also includes cyciopeptides with cysteine or penicillamine (β, β-dimethylcysteine) in position 2 and 5 of the enkephalin molecule and ring closure via a disulfide bridge (compare PW Schüler et al., Biochem. Biophys. Res [1981], 337; HIMosberg et al., Proc. Natl. Acad., USA 80 [1983], 5871; J. Sarantakis, US Patent No. 4148786, 1979). These compounds have pronounced δ-opiate receptor selectivity.

Die Darstellung der Cyciopeptide erfolgte sowohl durch konventionelle Synthese als auch mittels der Festphasentechnik und anschließender Cyclisierung der linearen Vorstufen mit den dafür in der Peptidchemie bekannten Techniken (vgl. E. Wünsch, Houben-Weyl, Methoden der organischen Chemie, Band 15/11 [Ed. E.Müller], Georg-Thieme-Verlag, Stuttgart, 1974).The preparation of the cyciopeptides was carried out both by conventional synthesis and by means of the solid phase technique and subsequent cyclization of the linear precursors with the techniques known for this in peptide chemistry (see E. Wünsch, Houben-Weyl, Methods of Organic Chemistry, Volume 15/11 [Ed E. Müller], Georg Thieme Verlag, Stuttgart, 1974).

Ziel der ErfindungObject of the invention

Das Ziel der Erfindung ist ein Verfahren zur Herstellung neuer, p'<armakologisch wirksamer Cyclopeptidwirkstoffe, vorzugsweise cyclisch-verzweigter Peptide des Casomorphin-Typs, mit im Ve gleich zu den entsprechenden linearen Peptiden signifikant verbesserten Eigenschaften, insbesondere einer bemerkensweiten Potenzierung und Prolongierung ihrer analgetischen Wirkpotenz, einer Erhöhung ihrer Stabilität gegenüber proteoly ischem Abbau, einer Verbesserung ihrer Penetrationsfähigkeit und Bioverfügbarkeit am Wirkort und einer Modulierung ihres Wirkprofils u. a. in Abhängigkeit der Dosierung und durch gezielte Strukturmodifikation zu entwickeln, wobei diese so hergestellten Cyciopeptide als solche oder wahlweise bzw. zweckgebunden mit anderen Pharmaka als Kombinationspräparate in der Medizin von Bedeutung sind.The object of the invention is a process for the preparation of novel p '<armacologically active cyclopeptide active ingredients, preferably cyclic-branched casomorphine-type peptides having significantly improved properties in comparison to the corresponding linear peptides, in particular a remarkable potentiation and prolongation of their analgesic potency , an increase in their stability to proteolytic degradation, an improvement in their penetration ability and bioavailability at the site of action and a modulation of their action profile u. a. depending on the dosage and to develop by targeted structural modification, these cyciopeptides produced as such or optionally or earmarked with other drugs as combination preparations in medicine are of importance.

Darlegung des Wesens der ErfindungExplanation of the essence of the invention

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, neue pharmakologisch-aktive Cyciopeptide, vorzugsweise cyclisch-verzweigte Peptide der Casomorphin-Reihe, zur Verfügung zu stellen, in denen der Ringschluß bei unverändertem N-Terminus der Peptidkette über die Seitenkettenfunktion der Aminosäure in Position 2 mit der C-terminalen Aminosäure über eine Peptid- oder Esterbindung erfolgt und bei denen zur Erhöhung der Stabilität gegenüber enzymatischem Abbau und zur Verstärkung und Prolongierung ihrer Opiataktivität in einor oder mehreren Positionen der Peptidkette D-Aminosäuren eingebaut werden. Die erfindungsgemäß erhaltenen Cyclopeptidwirkstoffe weisen u.a. folgende Vorteile auf:The invention has for its object to provide novel pharmacologically active Cyciopeptide, preferably cyclic-branched peptides of the casomorphine series, available, in which the ring closure with unchanged N-terminus of the peptide chain via the side chain function of the amino acid in position 2 with the C terminal amino acid is via a peptide or ester bond and in which D-amino acids are incorporated to enhance stability to enzymatic degradation and to enhance and prolong its opiate activity in one or more positions of the peptide chain. The cyclopeptide agents obtained according to the invention have i.a. following advantages:

1. Einfache Struktur1. Simple structure

2. Hohe Resistenz gegenüber enzymatischem Abbau2. High resistance to enzymatic degradation

3. Wirkungspotenzierung und -Prolongierung u.a. durch gezielte Strukturmodifikation3. Effect potentiation and -rolongierung u.a. through targeted structural modification

4. Modulierung der Wirkungsparameter in Abhängigkeit der Dosierung und mittels Strukturmodifikation4. Modulation of the effect parameters as a function of the dosage and by means of structural modification

5. Günstige physikalisch-chemische Parameter im Sinne einer hohen Penetrierfähigkeit5. Favorable physico-chemical parameters in the sense of a high penetrability

6. Hohe Bioverfügbarkeit am Wirkort6. High bioavailability at the site of action

Die Aufgabe wurde dadurch gelöst, daß cyclisch-verzweigte Peptide, vorzugsweise vom Casomorphin-Typ der allgemeinen Formel IThe object was achieved in that cyclic-branched peptides, preferably of the casomorphine type of the general formula I.

A-cyclot-B-C-D-E] (I)A-cyclot-B-C-D-E] (I)

synthetisiert werden, wobei die Ringschlußreaktion über eins Peptid- oder Esterbindung erfolgt und A, B, C, D und E wie folgt definiert sind:The ring closure reaction is via a peptide or ester bond and A, B, C, D and E are defined as follows:

A = Tyrosin, N-Alkyl- (bevorzugt N-Methyl-)Tyrosin, Phenylalanin in der L- Konfiguration, B = Hydroxyprolin, Hydroxypipecolinsäure, Lysin, Ornithin, 2,4-Diaminobuttersäure in der L- oder D-Konfiguration, C = Phenylalanin, N-Alkyl- (bevorzugt N-Methyl-)Phenylalanin, Homophenylalanin, Tyrosin, N-Alkyl- (bevorzugt N-A = tyrosine, N-alkyl (preferably N-methyl) tyrosine, phenylalanine in the L configuration, B = hydroxyproline, hydroxypipecolic acid, lysine, ornithine, 2,4-diaminobutyric acid in the L or D configuration, C = Phenylalanine, N-alkyl- (preferably N-methyl-) phenylalanine, homophenylalanine, tyrosine, N-alkyl- (preferably N-

Methyl-JTyrosin, O-Benzyl-Tyrosin in der L-Konfiguration, D = Prolin, Pipecolinsäure in der L-oder D-Konfiguration E = alle proteinogenen Aminosäure , in der L-Konfiguration, vorzugsweise Glycin.Methyl-J-tyrosine, O-benzyl-tyrosine in the L-configuration, D = proline, pipecolic acid in the L- or D-configuration E = all proteinogenic amino acid, in the L-configuration, preferably glycine.

Einige bevorzugte Verbindungen sind die nachfolgend angeführten cyclisch-verzweigten Peptide der Struktur:Some preferred compounds are the following cyclic branched peptides of the structure:

Tyr-cyclot-D-Lys-Phe-P.o-Gly-]Tyr-cyclot-D-Lys-Phe-Gly-p.o.]

Tyr-cycloi-D-Lys-Phe-D-Pro-Gly-]Tyr-cycloi-D-Lys-Phe-D-Pro-Gly]

Tyr-cycloi-D-Orn-Phe-Pro-Gly-]Tyr-cycloi-D-Orn-Phe-Pro-Gly]

Tyr-cycloi-D-Orn-Phe-D-Pro-uly-)Tyr-cycloi-D-Orn-Phe-D-Pro-uly-)

Tyr-cycloi-D-Dab-Phe-Pro-Gly-]Tyr-cycloi-D-Dab-Phe-Pro-Gly]

Tyr-cycloi-D-Dab-Phe-D-Pro-Gly-]Tyr-cycloi-D-Dab-Phe-D-Pro-Gly]

Die Darstellung der erfindungsgemäßen Cyclopeptidwirkstoffe erfolgte auf zweierlei Wegen: Die erste strategische Variante zur Herstellung der Cyclopetide der allgemeinen Formel I erfolgt ausgehend von H-E-T durch schrittweise Verlängerung mit X-D-Z, X-C-Z und X-B(Y)-Z, worin B, C, D und E wie zuvor definiert sind und T, X und Y für in der Peptidchemie gebräuchliche Carboxy-, α-Amino-, w-Amino- bzw. Hydroxyschutzgruppen stehen, T bevorzugt für 4-Nitrobenzyl- oder Methylester, X bevorzugt für tert. Butyloxycarbonyl, Y bevorzugt für Benzyloxycarbonyl für den Fall B = Lysin, Ornithin, 2,4-Diaminobuttersäure oder Benzyl für den Fall B = Hydroxyprolin, Hyd.oxypipecolinsäurejeweils in derL- oder D-Konfiguration und Z OH oder Aktivester, bevorzugt Pentafluorphenylester, bedeuten, nach den in der Peptidchemie üblichen Kupplungsmethoden N.N'-Dicyclohexylcarbodiimid/Additiva (bevorzugt 1-Hydroxybenzotriazole, aktivierte Ester, Mischanhydrid (vgl. E. Wünsch s.o.) oder 2-(1 H-BenzotriazoM-yl)-1,1,3,3-tetramethyluroniumsalze (vgl. R.Knorr et al., Abstracts 20th Europ. Peptide Symp., Tübingen, 1988) zu den vollgeschützten Peptiden der allgemeinen Formel IlThe preparation of the cyclopeptide active compounds according to the invention was carried out in two ways: The first strategic variant for the preparation of the cyclopetides of the general formula I is carried out starting from HET by stepwise extension with XDZ, XCZ and XB (Y) -Z, where B, C, D and E as previously defined and T, X and Y are common in peptide chemistry carboxy, α-amino, w-amino or hydroxy protecting groups, T preferably 4-nitrobenzyl or methyl esters, X preferably tert. Butyloxycarbonyl, Y is preferably benzyloxycarbonyl for the case B = lysine, ornithine, 2,4-diaminobutyric acid or benzyl for the case B = hydroxyproline, hydroxypipecolic acid in each of the L or D configuration and Z is OH or active ester, preferably pentafluorophenyl ester, according to the usual coupling techniques in the coupling methods N.N'-dicyclohexylcarbodiimide / additives (preferably 1-hydroxybenzotriazoles, activated esters, mixed anhydride (see E. Wünsch so) or 2- (1 H-BenzotriazoM-yl) -1,1,3 , 3-tetramethyluronium salts (see R.Knorr et al., Abstracts 20th Europ. Peptide Symp., Tubingen, 1988) to the fully protected peptides of the general formula II

X-B(Y)-C-D-E-T (II)X-B (Y) -C-D-E-T (II)

mit B, C, D, E, X, Y, T in der obigen Definition. Vorzugsweise erfolgt der schrittweise Aufbau der Peptide der Formel Il über die Mischanhydridtechnik.with B, C, D, E, X, Y, T in the above definition. The stepwise construction of the peptides of the formula II is preferably carried out by the mixed anhydride technique.

Nach gleichzeitiger oder nacheinander geschalteter Abspaltung der für Y und T eingesetzten Schutzgruppen mit den in der Peptidchemie üblichen Deblockierungsverfahren (vgl. E. Wünsch s. o.), für die oben genannten bevorzugten Schutzgruppenkombinationen P inzyloxycarbonyl/4-Nitrobenzylester, Benzyl/4-Nitrobenzylester durch Hydrogenolvse bzw. Benzyloxycarbonyl/Methylester, Benzyl/Methylester durch Hydrogenolyse und anschließende Verseifung, führt die anschließende Ringschlußreaktion zwischen w-Amino- bzw. der Hydroxygruppe der Aminosäure B und der a-Carboxylgruppe der Aminosäure E zu Cyclopeptiden der allgemeinen Formel IIIAfter simultaneous or successive cleavage of the protective groups used for Y and T with the usual Deblockierungsverfahren in peptide chemistry (see E. Wünsch supra), for the above-mentioned preferred protecting group combinations P inzyloxycarbonyl / 4-nitrobenzyl ester, benzyl / 4-nitrobenzyl ester by Hydrogenolvse or Benzyloxycarbonyl / methyl ester, benzyl / methyl ester by hydrogenolysis and subsequent saponification, the subsequent ring closure reaction between w-amino or the hydroxy group of the amino acid B and the a-carboxyl group of the amino acid E leads to cyclopeptides of the general formula III

X-cycloI-B-C-D-E-l (III)X-cycloI-B-C-D-E-1 (III)

mit B, C, D, E und X in der obigen Definition. Für den Fall B = Lysin, Ornithin, 2,4-Diaminobuttersäure in der L- oder D-Konfiguration kann die Cyclisierung (Amidbindung) mit Hilfe von N.N'-Dicyclohexylcarbodiimid/Additiva (bevorzugt 1-Hydroxybenzotriazol), wasserlöslichen Carbodiimiden/Additiva (bevorzugt 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl)-carbodiimid HCI/1-Hydroxybenzotriazol), mit 2-(1 H-Benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluroniumsalzen oder Diphenylphosphorylazid als Aktivierungsreagenzien (vgl. E. Wünsch s. o.; R. Knorr et al. s. o.; S. F. Brady et al., J. Org. Chem. (1979), 3101) bzw. nach Überführung der linearen Vorstufen der allgemeinen Formel X-B(Y)-C-D-E-OH mit B, C, D, E, X und Y in der obigen Definition in die entsprechenden geschützten Tetrapeptidhydrazide bzw. Tetrapeptidaktivester, bevorzugt Nitrophenyl-, Pentafluorphenylester, anschließender Abspaltung der für Y eingesetzten Schutzgruppen mit den in der Peptidchemie üblichen Verfahren, mittels der klassischen Azidmethode bzw. Esteraminolyse erfolgen. Bevorzugte Cyclisierungsvarianten sind die Verfahren mit Diphenylphosphorylazid und 2-(1 H-Benzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluroniumsalzen. Für den Fall B = Hydroxyprolin, Hydroxypipecolinsäure in der L- oder D-Konfiguration kann die Cyclisierung zu den entsprechenden Lactonen u.a. mit Hilfe von N.N'-Dicyclohexylcarbodiimid, 2-(1 H-Hydroxybenzotriazol-1-yl)-1,1,3,3-tetramethyluroniumsalzen jeweils in Gegenwart von 4-Dimethylaminopyridin als Katalysator oder nach verschiedenen Varianten der Säurechloridmethode (vgl. E.Wünsch s.o.; R.Knorr et al. s.o.) vorgenommen werden. Nach Abspaltung der für X eingesetzten Schutzgruppen mit den in der Peptidchemie üblichen Deblockierungsverfahren (vgl. E. Wünsch s.o.), für die oben bevorzugte Schutzgruppe tert. Butyloxycarbonyl durch Acidolyse (u.a. mittels HCL/Essigsäure; KCL/Essigester; HCL/Dioxan; Trifluoressigsäure), werden die erhaltenen Cyclopeptide der allgemeinen Formel H-cyclo[-B-C-D-E-] mit X-A(W)-Z, worin A, B, C, D, E, X und Z wie oben definiert sind und W für H, Benzyloxycaibonyl, tert. Butyloxycarbonyl, Benzyl oder bevorzugt tert. Butyl steht, nach den in der Peptidchemie oben aufgeführten üblichen Kupplungsmethoden, bevorzugt nach dem Mischanhydrid-Verfahren zu den Cyclopeptiden der allgemeinen Formel IVwith B, C, D, E and X in the above definition. For the case B = lysine, ornithine, 2,4-diaminobutyric acid in the L or D configuration, the cyclization (amide bond) with the aid of N.N'-dicyclohexylcarbodiimide / additives (preferably 1-hydroxybenzotriazole), water-soluble carbodiimides / additives (preferably 1-ethyl-3- (3-dimethylaminopropyl) carbodiimide HCl / 1-hydroxybenzotriazole), with 2- (1H-benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium salts or diphenylphosphoryl azide as activating reagents ( See, for example, E. Wünsch, R. Knorr et al., SF Brady et al., J. Org. Chem., (1979), 3101) or after conversion of the linear precursors of the general formula XB (Y) -CDE- OH with B, C, D, E, X and Y in the above definition in the corresponding protected Tetrapeptidhydrazide or Tetrapeptidaktivester, preferably nitrophenyl, pentafluorophenyl, subsequent cleavage of the protective groups used for Y with the usual methods in peptide chemistry, by means of the classical Azide method or Esteraminolyse done. Preferred cyclization variants are the processes with diphenylphosphoryl azide and 2- (1H-benzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium salts. For the case B = hydroxyproline, hydroxypipecolic acid in the L or D configuration, the cyclization to the corresponding lactones may be added i.a. with the aid of N.N'-dicyclohexylcarbodiimide, 2- (1H-hydroxybenzotriazol-1-yl) -1,1,3,3-tetramethyluronium salts in each case in the presence of 4-dimethylaminopyridine as catalyst or according to various variants of the acid chloride method (cf. E.Wünsch so; R.Knorr et al., See above) be made. After cleavage of the protective groups used for X with the customary in peptide chemistry deblocking (see E. Wünsch s.o.), For the above preferred protecting group tert. Butyloxycarbonyl by acidolysis (including by means of HCL / acetic acid, KCL / ethyl acetate, HCL / dioxane, trifluoroacetic acid), the resulting cyclopeptides of the general formula H-cyclo [-BCDE-] with XA (W) -Z, wherein A, B, C , D, E, X and Z are as defined above and W is H, benzyloxycaibonyl, tert. Butyloxycarbonyl, benzyl or preferably tert. Butyl, according to the customary coupling methods listed above in the peptide chemistry, preferably by the mixed anhydride method to the cyclopeptides of the general formula IV

X-A(W)-CyCIoI-B-C-D-E-] (IV)X-A (W) -Cycol-B-C-D-E-] (IV)

mit A, B, C, D, E, X und W in der genannten Definition verlängert. Die so erhaltenen geschützten cyclisch-verzweigten Peptide der Formel IV werden an einer Kieselgelsäule durch Chloroform/Methanol-Elution bzw. an Sephadex LH-20 (Elutionsmittel Methanol) gereinigt und nach Abspaltung der für X und W eingesetzten Schutzgruppen mit den in der Peptidchemie üblichen Deblockierungsverfahren (vgl. E. Wünsch s.o.), für die oben angeführte bevorzugte Schutzgruppenkombination tert. Butyloxycarbonyl/tert. Butyl durr.h Acidolyse, bevorzugt mit Trifluoressigsäure in Gegenwart von Kationenfängern, anschließender Umkristallisation aus Ethanol/Ether oder Gelfiltration an Sephadex G-10 mit 0,1 M Essigsäure als Elutionsmittel in Cyclopeptide der Formel I überführt.extended with A, B, C, D, E, X and W in the abovementioned definition. The protected cyclic-branched peptides of the formula IV thus obtained are purified on a silica gel column by chloroform / methanol elution or on Sephadex LH-20 (eluent methanol) and after cleavage of the protective groups used for X and W with the usual Deblockierungsverfahren in peptide chemistry (See E. Wünsch so), for the above-mentioned preferred protecting group combination tert. Butyloxycarbonyl / tert. Butyl durr.h acidolysis, preferably with trifluoroacetic acid in the presence of cation scavengers, subsequent recrystallization from ethanol / ether or gel filtration on Sephadex G-10 with 0.1 M acetic acid as the eluent in cyclopeptides of the formula I transferred.

Die zweite strategische Variante zur Herstellung der Cyclopeptide der allgemeinen Formel I erfolgt ebenfalls ausgehend von H-E-T durch step-by-step-Kondensation mit X-D-Z, X-C-Z, X-B(Y)-Z und X-A(W)-Z, worin A, B, C, D, E, T, W, X, Y, Z auch hinsichtlich bevorzugter Schutzgruppenkombinationon die oben genannte Definition besitzen, nach den in der ersten Synthesevariante aufgeführten Kupplungsmethoden zu den vollgeschützten Peptiden der allgemeinen Formel VThe second strategic variant for the preparation of the cyclopeptides of the general formula I is likewise carried out starting from HET by step-by-step condensation with XDZ, XCZ, XB (Y) -Z and XA (W) -Z, where A, B, C , D, E, T, W, X, Y, Z also have the abovementioned definition with regard to the preferred protective group combination, according to the coupling methods listed in the first synthesis variant to the fully protected peptides of the general formula V

X-A(W)-B(Y)-C-D-E-T iV)X-A (W) -B (Y) -C-D-E-T iV)

mit A, B, C, D, E, T, W, X, Y in der obigen Definition. Nach Abspaltung der für Y und T eingesetzten Schutzgruppen, wie in der ersten Synthesevariante beschrieben, führt die Cyclisierung nach den oben aufgezeigten Techniken zu geschützten cyclischverzweigten Peptiden gemäß Formel IV, die nach Reinigung uno Abspaltung der für X und W eingesetzten Schutzgruppen unter den in der ersten Synthesevariante beschriebenen Bedingungen in Cyclopeptide der allgemeinen Fo'me11 überführt werden. Die erfindungsgemäß erhaltenen Cyclopeptidwirkstoffe und/oder deren Derivate und/oder deren pharmazeutisch annehmbare Salze und/oder deren Metallkomplexe können als solche oder wahlweise bzw. zweckgebunden kombiniert mit bekannten Pharmaka in Human- und Tierarzneimitteln enthalten sein. Diese können insbesondere als Analgetika, Kardiotonika, Modulatoren des Immunsystems und zur Förderung der Wundheilung Verwendung finden. Die Erfindung soll anhand von Ausführungsbeispielen näher erläutert werden, ohne sie einzuschränken.with A, B, C, D, E, T, W, X, Y in the above definition. After cleavage of the protective groups used for Y and T, as described in the first synthesis variant, the cyclization leads according to the techniques shown above to protected cyclischverzweigten peptides according to formula IV, which after purification and splitting off the protective groups used for X and W below the in the first Synthesis variant described in cyclopeptides of the general Fo'me11 be transferred. The cyclopeptide active compounds obtained according to the invention and / or their derivatives and / or their pharmaceutically acceptable salts and / or their metal complexes may be present as such or as an option or combined with known pharmaceuticals in human and veterinary medicinal products. These can be used in particular as analgesics, cardiotonics, modulators of the immune system and for promoting wound healing. The invention will be explained in more detail by means of embodiments, without limiting it.

AusführungsbelspleleAusführungsbelsplele

Es werden folgende Abkürzungen verwendet:The following abbreviations are used:

Abkürzungen für Aminosäure- und Peptidderivate entsprechend der IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature, Biochem. J. 219,345(1984)Abbreviations for amino acid and peptide derivatives according to the IUPAC-IUB Joint Commission on Biochemical Nomenclature, Biochem. J. 219,345 (1984)

AcOHAcOH Eisessigglacial acetic acid BocBoc tert. Butyloxycarbonyltert. butyloxycarbonyl BzIBzl Benzylbenzyl CAIBECAIBE ChlorameisensäurelsobutylesterChlorameisensäurelsobutylester DCDC dünnschichtchromatographischthin layer chromatography DMFDMF N, N'-Dimethy !formamidN, N'-Dimethy! Formamide DPPADPPA Diphenylphosphorylaziddiphenylphosphorylazide EEEE Essigsäureethylesterethyl acetate Fpfp Schmelzpunktmelting point hH Stundenhours i.Vak.vacuo. im Vakuumin a vacuum MeOHMeOH Methanolmethanol minmin Minutenminutes NEMNEM N-EthylmorpholinN-ethylmorpholine ONbON b 4-Nitrobenzylester4-nitrobenzyl OPfpOPfp Pentafluorphenylesterpentafluorophenyl PEPE Petroletherpetroleum ether RTRT Raumtemperaturroom temperature tBuBu tert. Butyltert. butyl TEATEA Triethylamintriethylamine TFATFA Trifluoressigsäuretrifluoroacetic THf-THF Tetrahydrofurantetrahydrofuran ZZ Benzyloxycarbonylbenzyloxycarbonyl

Unttir „üblicher* Aufarbeitung versteht man: Nach beendeter Kupplungsreaktion wird das jeweilige Rohprodukt in EE aufgenommen und die Lösung nacheinander zweimal mit Wasser (NaCI-gesättigt), dreimal mit 5%iger KHSO₄-Lösung, einmal mit Wasser und jeweils dreimal mit NaHCOj-Lösung und Wasser gewaschen. Die organische Phase wird über Na₂SO₄ getrocknet und das Rohprodukt durch Abdampfen des Lösungsmittels i.Vak. isoliert.Unttir "usual * workup is understood: After completion of the coupling reaction, the respective crude product is taken up in EA and the solution successively twice with water (NaCI-saturated), three times with 5% KHSO ₄ solution, once with water and three times with NaHCOj- Solution and water washed. The organic phase is dried over Na ₂ SO ₄ and the crude product by evaporation of the solvent i.Vak. isolated.

Folgende Laufmittelsysteme (in Volumenanteilen) zur Dünnschichtchromatographie auf Silufol-Fertigplatten (Kavalier, £SSR) wurden verwendet:The following solvent systems (by volume) for thin layer chromatography on Silufol precast plates (Kavalier, £ SSR) were used:

A Chloroform: Methanol 9:1A chloroform: methanol 9: 1

B Benzol:Aceton:Eisessig 25:10:0,5B benzene: acetone: glacial acetic acid 25: 10: 0.5

C Essigester:Pyridin:Eisessig:Wasser 90:15:4,5:8,3C ethyl acetate: pyridine: glacial acetic acid: water 90: 15: 4.5: 8.3

D Butan-1-ol:Eisessig:Wasser:Essigester 1:1:1:1D Butan-1-ol: glacial acetic acid: water: ethyl acetate 1: 1: 1: 1

E Butan-2-ol:Ameisensäure:Wasser 75:15:20E butane-2-ol: formic acid: water 75:15:20

F Butan-1-ol:Pyridin:Eisessig:Wasser 30:20:6:24F butane-1-ol: pyridine: glacial acetic acid: water 30: 20: 6: 24

Die HPLC-Reinheitskontrolle erfolgte an Geräten der Firmen Merck-Hitachi (isokratisch) und Hewlett-Packard (Gradient):The HPLC purity control was carried out on devices from Merck-Hitachi (isocratic) and Hewlett-Packard (Gradient):

System A-isokratisch:System A-isocratic:

Säule 250mm χ 4mm, LiChrospher 100RP-8 ΠΟμπι) mobile Phase 0,01 M KH₂PO₄ pH 3,3/Acetonitril (65:35) System B-Gradient:Column 250mm χ 4mm, LiChrospher 100RP-8 ΠΟμπι) mobile phase 0.01 M KH ₂ PO ₄ pH 3.3 / acetonitrile (65:35) System B gradient:

Säule 250mm x 4,6mm, LiChrosorb RP-18 (10pm)Column 250mm x 4.6mm, LiChrosorb RP-18 (10pm)

mobile Phase A: 0,025M NaH₂PO₄ pH 3,0 B: Methanolmobile phase A: 0.025M NaH ₂ PO ₄ pH 3.0 B: methanol

10% B 0min bis 31 % B in 7,3min10% B 0min to 31% B in 7.3min

31 % B 7,3min bis 40% B in 4min31% B 7,3min to 40% B in 4min

Zur Bestimmung der analgetischen Aktivität diente die elektrische Schwanzwurzelreizung an männlichen Wistar-Ratten (vgl. H. Matthies et al., Peptides 5 [1984J, 463). Bestimmt wurde die effektive Dosis für die Verdopplung der Schmerzschwelle ED₂₀₀ 10min nach intracerebroventrikulärer (icv) Applikation der Cyclopeptide. Es ist die relative Aktivität (Morphin = 1) angegeben. Die Ergebnisse sind statistisch abgesichert.To determine the analgesic activity, tail tail electrical irritation was used on male Wistar rats (see H. Matthies et al., Peptides 5 [1984J, 463]). The effective dose for the doubling of the pain threshold ED _{200 was} determined 10 minutes after intracerebroventricular (icv) administration of the cyclopeptides. The relative activity (morphine = 1) is indicated. The results are statistically verified.

Beispiel I: H-Tyr-cyclof-D-Orn-Phe-D-Pro-Gly·]Example I: H-Tyr-cyclof-D-Orn-Phe-D-Pro-Gly ·]

1.1. H.Phe-D-Pro-Gly-ONb · HCI1.1. H.Phe-D-Pro-Gly-ONb.HCl

Der Aufbau des Tripeptids erfolgte ausgehend von 4,93g H-GIy-ONb HCI durch schrittweise Anknüpfung der entsprechenden tert. Butyloxycarbonylaminosäuren nach der Methode der gemischten Anhydride mit Chlorameisensäureisobutylester als Aktivierungsreagenz (vgl. R.A.Boissonnas, HeIv. chim. Acta 3411951], 874). Die Deblockierung der N°-Aminoschutzgruppen erfolgte jeweils mittels 1,1 η HCI/AcOH innerhalb von 30min bei RT.The structure of the tripeptide was carried out starting from 4.93 g of H-Gly-ONb HCl by stepwise attachment of the corresponding tert. Butyloxycarbonylaminosäuren by the method of mixed anhydrides with isobutyl chloroformate as activating reagent (see R. A. Boissonnas, HeIv chim Acta 3411951], 874). The deblocking of the N ° amino protecting groups was carried out in each case by means of 1.1 η HCl / AcOH within 30 min at RT.

Ausbeute: 4,92g(5ü%d.Th.bezogenauf H-GIy-ONb- HCI)Yield: 4.92 g (5% of theory based on H-Gly-ONb-HCl)

Fp: 179-183⁰CMp: 179-183 ⁰ C

[a]l°: +115,3⁰Ic = 1,AcOH) [a] l °: +115.3 ⁰ lc = 1, AcOH)

DC: einheitlich in D, E, FDC: uniform in D, E, F

1.2. Bor-D-Orn(Z)-Phe-D-Pro-Gly-ONb1.2. Boron-D-Orn (Z) -Phe-D-Pro-Gly-ONb

1,1g Boc-D-Orn(Z)-OH, 0,38 ml NEM und 0,39ml CAIBE wurden bei -15°C in 20ml THF gelöst und nach 9min mit 1,47g H-Pha-D-Pro-Gly-ONb · HCI und 0,38ml NEM versetzt. Der Ansatz wurde 1,5h bei -15⁰C und 10h bei RT gerührt und dann wie üblich aufgearbeitet. Das Produkt wurde in EE gelöst und mit PE ausgefällt.1.1 g Boc-D-Orn (Z) -OH, 0.38 ml NEM and 0.39 ml CAIBE were dissolved at -15 ° C in 20 ml THF and after 9 min with 1.47 g H-Pha-D-Pro-Gly -ONb.HCl and 0.38 ml NEM added. The mixture was stirred for 1.5 h at -15 ⁰ C and 10 h at RT and then worked up as usual. The product was dissolved in EE and precipitated with PE.

/usbeute: 2,25g (94%d.Th.)/ usbeute: 2,25g (94% d.Th.)

Fp: 64-70⁰CMp: 64-70 ⁰ C

[a)g°: +62,8° (c- 1,CHCI₃)[a) g °: + 62.8 ° (c-1, CHCl ₃ )

DC: einheitlich in A, B, CDC: uniform in A, B, C

1.3. Boc-D-Orn-Phe-D-Pro-Gly-OH1.3. Boc-D-Orn-Phe-D-Pro-Gly-OH

1,5g Boc-D-Orn(Z)-Phe-D-Pro-GIy-ONb wurden in 30ml Me0H/H₂O (9:1) gelöst, mit 0,3g Pd/Schwarz versetzt und 6h bei RT hydriert. Anschließend wurde der Katalysator abfiltriert, die Lösung i. Vak. eingeengt und das Produkt mit Ether ausgefällt.1.5 g of Boc-D-Orn (Z) -Phe-D-Pro-Gly-ONb were dissolved in 30 ml of MeOH / H ₂ O (9: 1), mixed with 0.3 g of Pd / black and hydrogenated at RT for 6 h. Subsequently, the catalyst was filtered off, the solution i. Vak. concentrated and the product precipitated with ether.

Ausbeute: 0,955g (95%d.Th.)Yield: 0.955 g (95% of theory)

Fp: 157-162⁰CMp: 157-162 ⁰ C

[al§°: +82,0"(C = 0,5,AcOH)[a§ °: + 82.0 "(C = 0.5, AcOH)

DC: einheitlich in D, E, FDC: uniform in D, E, F

1.4. Boc-cycloI-D-Orn-Phe-D-Pro-Gly-]1.4. Boc cycloI-D-Orn-Phe-D-Pro-Gly]

0,53g Boc-D-Om-Phe-D-Pro-Gly-OH, gelöst in 50ml DMF, wurden innerhalb von 8h unter Rühren in eine auf -5⁰C gekühlte Lösung von 0,3ml TEA und 0,55ml DPPA in 450ml DMF gegeben. Der Ansatz wurde 27 h bei -5°C gerührt, anschließend das Lösungsmittel i. Vak. entfernt und das Rohprodukt aus EE/PE umgefällt. Danach wurde das Cyclopeptid durch Säulenchromatographie an Kieselgel 60 (Merck), Elutionsmittel CHCI₃/MeOH (9:1), gereinigt und aus CHCI₃/Ether umkristallisiert.0.53 g Boc-D-Om-Phe-D-Pro-Gly-OH, dissolved in 50 ml of DMF was added within 8 hours with stirring in a cooled to -5 ⁰ C solution of 0.3 ml of TEA and DPPA in 0,55ml 450ml DMF given. The mixture was stirred for 27 h at -5 ° C, then the solvent i. Vak. removed and the crude product from EE / PE reprecipitated. Thereafter, the cyclopeptide was purified by column chromatography on silica gel 60 (Merck), eluant CHCl ₃ / MeOH (9: 1), and recrystallized from CHCl ₃ / ether.

Ausbeute: 0,253g(49%d.Th.)Yield: 0.253 g (49% of theory)

Fp: 152-155⁰CMp: 152-155 ⁰ C

Ia]I⁰: +50,3°(c = 0,5,AcOH) Ia] I ⁰ : + 50.3 ° (c = 0.5, AcOH)

DC: einheitlich in A, C, DDC: uniform in A, C, D

1.5. Z-TyriBzO-cyclot-D-Om-Phe-D-Pro-Gly·]1.5. Z-TyriBzO cyclot-D-Om-Phe-D-Pro-Gly ·]

0,19g Z-Tyr(Bzl)-OPfp wurden in 10ml THF/DMF (9:1) gelöst und bei O⁰C mit 0,15g H-cyclol-D-Orn-Phe-D-Pro-Gly-) · HCI (erhalten durch Entacylierung von Boc-cyclol-D-Orn-Phe-D-Pro-Gly-l mittels 1,1 η HCI/AcOH, [a]g° = +69,7° [c = 0,5,AcOH], Fp = 180-183⁰C) und 50 μΙ TEA versetzt. Der Ansatz wurde * h bei O⁰C und 12 h bai RT gerührt. Danach wurde die Lösung i. Vak. eingeengt, das Rohprodukt mit EE ausgefällt, auf der Fritte nacheinander mit 5%iger KHSO₄-Lösung, Wasser, gesättigter NaHCO₃-Lösung und Wasser gewaschen und über P₂O₆ sorgfältig getrocknet.0.19 g of Z-Tyr (Bzl) -OPfp were dissolved in 10 ml of THF / DMF (9: 1) and dissolved at ⁰ ° C. with 0.15 g of H-cyclol-D-Orn-Phe-D-Pro-Gly-). HCI (obtained by deacylation of Boc-cyclol-D-Orn-Phe-D-Pro-Gly-l by means of 1.1 η HCl / AcOH, [α] g ° = + 69.7 ° [c = 0.5, AcOH], mp 180-183 ⁰ C) and 50 μΙ TEA. The batch was stirred at ⁰ ° C. for 12 h and at RT for 12 h. Thereafter, the solution i. Vak. concentrated, the crude product precipitated with EA, washed successively on the frit with 5% KHSO ₄ solution, water, saturated NaHCO ₃ solution and water and dried over P ₂ O ₆ carefully.

Ausbeute: 0,2 g (76% d. Th.)Yield: 0.2 g (76% of theory)

Fp: 233-236⁰CMp: 233-236 ⁰ C

[αΐέ⁰: +47,3° (c = 0,5, AcOH)[αΐέ ⁰ : + 47.3 ° (c = 0.5, AcOH)

DC: einheitlich in A, C, DDC: uniform in A, C, D

1.6. H-Tyr-cyclot-D-Orn-Phe-D-Pro-Gly-] · AcOH1.6. H-Tyr-cyclot-D-Orn-Phe-D-Pro-Gly-] · AcOH

0,2g Z-TyrlBzD-cyclol-D-Orn-Phe-D-Pro-Gly-], gelöst in 10ml AcOH/MeOH/H₂O (5:5:1), wurden nach Zugabe von 0,1 g Pd/ Schwarz 2,5h bei RT hydriert. Anschließend wurde der Katalysator abfiltriert, die Lösung i. Vak. eingeengt und das Peptid mit Ether ausgefällt.0.2 g of Z-TyrlBzD-cyclol-D-Orn-Phe-D-Pro-Gly-] dissolved in 10 ml of AcOH / MeOH / H ₂ O (5: 5: 1) were added after addition of 0.1 g of Pd / Black hydrogenated for 2.5 h at RT. Subsequently, the catalyst was filtered off, the solution i. Vak. concentrated and the peptide precipitated with ether.

Ausbeute: 0,14g (89%d.Th.)Yield: 0.14 g (89% of theory)

Fp: 170-173⁰CMp: 170-173 ⁰ C

[a]g°: +50,4⁰C (c = 0,5, MeOH)[a] g °: ⁰ +50.4 C (c = 0.5, MeOH)

DC: einheitlich in D, E, FDC: uniform in D, E, F

Molpeak: berechnet 579 (M⁺), gefunden 579 (M⁺)Molepeak: calculated 579 (M ⁺ ), found 579 (M ⁺ )

HPLC-Retentionszeit: System A8,14min System B 7,59minHPLC retention time: System A8, 14min System B, 7.59min

Relative analgetische Aktivität (Morphin = 1):Relative analgesic activity (morphine = 1):

Beispiel II: H-Tyi-cyclo[-D-Lys-Phe.Pro-Gly-] · TFAExample II: H-Tyi-cyclo [-D-Lys-Phe.Pro-Gly-] TFA

11.1. H-Phe-Pro-Gly-ONb · HCI11.1. H-Phe-Pro-Gly-ONb.HCl

Der Aufbau des Tripeptids erfolgte ausgehend von 4,93g H-GIy-ONb · HCI durch schrittweise Anknüpfung der entsprechenden tert. Butyloxycarbonylaminosäuren nach der Methode der gemischten Anhydride mit Chlorameisensäureisobutylester als Aktivierungsreagenz (vgl. R. A. Boissonnas s. o.J. Die Deblockierung der N°-Aminoschutzgruppen erfolgte jeweils mittels 1,1 η HCI/AcOH innerhalb von 30min bei RT.The structure of the tripeptide was carried out starting from 4.93 g of H-Gly-ONb · HCl by stepwise attachment of the corresponding tert. Butyloxycarbonylamino acids by the method of mixed anhydrides with isobutyl chloroformate as activating reagent (see R. A. Boissonnas, supra) The deblocking of the N ° amino-protecting groups was carried out in each case by means of 1.1 η HCl / AcOH within 30 min at RT.

Ausbeute: 6,08g (62%d.Th. bezogen auf H-GIy-ONb · HCI)Yield: 6.08 g (62% of theory, based on H-Gly-ONb · HCl)

Fp: 192-194⁰CMp: 192-194 ⁰ C

[a)h°: -24,5°(c= 1,AcOH) [a) h °: -24.5 ° (c = 1, AcOH)

.DC: einheitlich in D, E, F.DC: uniform in D, E, F

11.2. Boc-D-Lys(Z)-Phe-Pro-Gly-ONb11.2. Boc-D-Lys (Z) -Phe-Pro-Gly-ONb

0,38g Boc-D-Lys(Z)-OH, 127μΙ NEM und 13OpICAIBE wurden bei -15⁰C in 12 ml THFgelöst und nach 10min mit 0,49g H-Phe-Pro-GIy-ONb · HCI und 127μΙ NEM versetzt. Der Ansatz wurde 1 h bei -15⁰C und 3h bei RTgerührt und danach wie üblich aufgearbeitet. Durch Digerieren des Peptids mit η-Hexan wurde ein amorphes Produkt erhalten.0.38 g of Boc-D-Lys (Z) -OH, 127μΙ NEM and 13OpICAIBE were added at -15 ⁰ C in 12 ml THFgelöst and after 10 min with 0.49 g H-Phe-Pro-Gly-ONb · HCI and 127μΙ NEM , The reaction was for 1 h at -15 ⁰ C for 3 h and stirred at RT and then worked up as usual. Digestion of the peptide with η-hexane gave an amorphous product.

Ausbeute: 0,69g (84 %d. Th.)Yield: 0.69 g (84% of theory)

Ia)I⁰: -11,9⁰(c= 1,AcOH) Ia) I ⁰ : -11.9 ⁰ (c = 1, AcOH)

DC: einheitlich in A, B, CDC: uniform in A, B, C

11.3. Boc-Tyr(tBu)-D-Lys(Z)-Phe-Pro-Gly-ONb11.3. Boc-Tyr (tBu) -D-Lys (Z) -Phe-Pro-Gly-ONb

0,26g Boc-Tyr(tBu)-OH, 99μΙ NEM und 108μΙ CAIBE wurden bei -15⁰C in 8ml THF gelöst und nach 10min mit 0,59g H-D-Lys(Z)-Phe-Pro-Gly-ONb · HCI (erhalten durch Entacylierung von Boc-D-Lys(Z)-Phe-Pro-Gly-ONb mittels 1,1 η HCI/AcOH, [a)g° = -28,3° [c = 1, AcOH), Fp = 94-98°C) und 93μΙ NEM versetzt. Der Reaktionsansatz wurde 1,5 h bei -15⁰C und 3 h bei RT gerührt und dann wie üblich aufgearbeitet. Das erhaltene Produkt wurde aus EE/PE umkristallisiert.0.26 g Boc-Tyr (tBu) -OH, 99μΙ NEM and 108μΙ CAIBE were dissolved at -15 ⁰ C in 8ml THF, and after 10 min with 0.59 g HD-Lys (Z) -Phe-Pro-Gly-ONb · HCI (obtained by deacylation of Boc-D-Lys (Z) -Phe-Pro-Gly-ONb using 1.1 η HCl / AcOH, [a) g ° = -28.3 ° [c = 1, AcOH), m.p. = 94-98 ° C) and 93 μM NEM. The reaction mixture was stirred for 1.5 h at -15 ⁰ C and 3 h at RT and then worked up as usual. The product obtained was recrystallized from EE / PE.

Ausbeute: 0,65g (81 %d.Th.)Yield: 0.65 g (81% of theory)

Fp: 107-110⁰CMp 107-110 ⁰ C

(ojg⁰: -16,8° (c = 0,5,AcOH)(ojg ⁰ : -16.8 ° (c = 0.5, AcOH)

DC: einheitlich in A, B, CDC: uniform in A, B, C

IU. Boc-Tyr(tBu)-D-Lys-Phe-Pro-Gly-OHIU. Boc-Tyr (tBu) -D-Lys-Phe-Pro-Gly-OH

0,64g Boc-TyrltBul-D-LysfZl-Phe-Pro-Gly-ONb, gelöst in 10ml MeOH/H₂O (9:1), wurden nach Zugabe von 0,2g Pd/Schwarz 8h hydriert. Anschließend wurde der Katalysator abfiltriert, die Lösung i. Vak. eingeengt und das Produkt mit Ether ausgefällt.0.64 g of Boc-TyrltBul-D-LysfZl-Phe-Pro-Gly-ONb dissolved in 10 ml MeOH / H ₂ O (9: 1) were hydrogenated for 8 h after addition of 0.2 g Pd / black. Subsequently, the catalyst was filtered off, the solution i. Vak. concentrated and the product precipitated with ether.

Ausbeute: 0,44g (90%d.Th.)Yield: 0.44 g (90% of theory)

Fp: 158-162°CMp: 158-162 ° C

[a)g°: -14,8° (C = 0,5,AcOH)[a) g °: -14.8 ° (C = 0.5, AcOH)

DC: einheitlich in D, E, FDC: uniform in D, E, F

11.5. Boc-TyrftBuJ-cyclot-D-Lys-Phe-Pro-Gly-J11.5. Boc TyrftBuJ-cyclot-D-Lys-Phe-Pro-Gly-J

0,31 g Boc-Tyr(tBu)-D-Lys-Phe-Pro-Gly-OH, gelöst in 50ml DMF, wurden unter Rühren innerhalb von 8h in eine auf -5⁰C gekühlte Lösung von 113 μΙ TEA und 217 μΙ DPPA in 450ml DMF gegeben und 48 h bei -5⁰C gerührt. Danach wurden 50 μΙ TEA sowie 70 μΙ DPPA und nach weiteren 72 h 50μΙ DPPA zugegeben. Der Ansatz wurde noch 48 h bei 4⁰C belassen, danach das Lösungsmittel i. Vak. entfernt und der Rückstand mit Ether ausgefällt. Das Rohprodukt wurde an Kieselgel 60 (Merck) mit CHCI₃/MeOH (9:1) als Elutionsmittel chromatographi6rt. Dann wurde aus EE umkristallisiert.0.31 g Boc-Tyr (tBu) -D-Lys-Phe-Pro-Gly-OH, dissolved in 50 ml of DMF was added with stirring over 8 h in a cooled to -5 ⁰ C solution of 113 μΙ TEA and 217 μΙ DPPA in 450 ml DMF and 48 h at -5 ⁰ C stirred. Thereafter, 50 μΙ TEA and 70 μΙ DPPA were added and after a further 72 h 50 μΙ DPPA. The mixture was left for 48 h at 4 ⁰ C, then the solvent i. Vak. removed and the residue precipitated with ether. The crude product was chromatographed on silica gel 60 (Merck) with CHCl ₃ / MeOH (9: 1) as eluent. Then, it was recrystallized from EE.

Ausbeute: 0,173 g (57 %d. Th.)Yield: 0.173 g (57% of theory)

Fp: 242-244TMp: 242-244T

[a]g°: +23,0°(c = 0,5,MeOH)[a] g °: + 23.0 ° (c = 0.5, MeOH)

DC: einheitlich in A, C, DDC: uniform in A, C, D

11.6. H-Tyr-cyclof-D-Lys-Phe-Pro-Gly-] · TFA11.6. H-Tyr-cyclof-D-Lys-Phe-Pro-Gly-] TFA

0,173g Boc-TyrdBuJ-cyclof-D-Lys-Phe-Pro-Gly-] wurden bei 0°C für 1h mit 10ml Trifluoressigsäure und 1 ml Anisol versetzt. Das Lösungsmittel wurde dann i. Vak. entfernt und das Produkt mit Ether ausgefällt.0.173 g of Boc-TyrdBuJ-cyclof-D-Lys-Phe-Pro-Gly-] were added at 0 ° C for 1 h with 10 ml of trifluoroacetic acid and 1 ml of anisole. The solvent was then i. Vak. removed and the product precipitated with ether.

Ausbeute: 0,14g (86%d.Th.)Yield: 0.14 g (86% of theory)

Fp: 177-181XMp: 177-181X

Ml⁰: +21,1°(c = 0,5,MeOH) Ml ⁰ : + 21.1 ° (c = 0.5, MeOH)

DC: einheitlich in D, E, FDC: uniform in D, E, F

Molpeak: berechnet 593 (M⁺), gefunden 593 (M⁺)Molepeak: calculated 593 (M ⁺ ), found 593 (M ⁺ )

HPLC-Retentionszeit: System A 8,77 min System B 10,17 minHPLC retention time: System A 8.77 min System B 10.17 min

Relative analgetische Aktivität (Morphin = 1):Relative analgesic activity (morphine = 1):

Claims (1)

1. Verfahren zur Herstellung neuer pharmakologisch-aktiver Cyclopeptide, gekennzeichnet dadurch, daß cyclisch-verzweigte Peptide, vorzugsweise vom Casomorphin-Typ der allgemeinen Formel I1. A process for the preparation of novel pharmacologically active cyclopeptides, characterized in that cyclic-branched peptides, preferably of the casomorphine type of the general formula I. A-cyclo [-B-C-D-E-] (I),A-cyclo [-B-C-D-E-] (I), synthetisiert werden, wobei der Ringschluß über eine Peptid- oder Esterbindung erfolgt und A, B, C, D und E wie folgt definiert sind:The ring closure is via a peptide or ester bond and A, B, C, D and E are defined as follows: A = Tyrosin, N-Alkyl- (bevorzugt N-Methyl-)Tyrosin, Phenylalanin in der L-Konfiguration, B = Hydroxyprolin, Hydroxypipecolinsäure, Lysin, Ornithin, 2,4-Diaminobuttersäure in derA = tyrosine, N-alkyl (preferably N-methyl) tyrosine, phenylalanine in the L configuration, B = hydroxyproline, hydroxypipecolic acid, lysine, ornithine, 2,4-diaminobutyric acid in the L- oder D-Konfiguration,
C = Phenylalanin, N-Alkyl- (bevorzugt N-Methyl-)Phenylalanin, Homophenylalanin, Tyrosin,L or D configuration,
C = phenylalanine, N-alkyl (preferably N-methyl) phenylalanine, homophenylalanine, tyrosine, N-Alkyl- (bevorzugt N-Methyl-)Tyrosin, O-Benzyl-Tyrosin in der L-Konfiguration, D = Prolin, Pipecolinsäure in der L-oder D-KonfigurationN-alkyl (preferably N-methyl) tyrosine, O-benzyl tyrosine in the L configuration, D = proline, pipecolic acid in the L or D configuration E = alle proteinogenen Aminosäuren in der L-Konfiguration, vorzugsweise Glycin und ihre Darstellung aus den durch step-by-step-Kondensation aufgebauten linearen Peptiden der allgemeinen Formeln Il und IIIE = all proteinogenic amino acids in the L-configuration, preferably glycine and their representation from the linear peptides of the general formulas II and III which are prepared by step-by-step condensation