DD230938A1 - PROCESS FOR DETERMINING KAPPA CHAINS - Google Patents

Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Bestimmung von kappa-Ketten. Es ist die Aufgabe gestellt, durch den Einsatz eines neuen Immunreagenzes die spezifische Bestimmung von normalen und neoplastischen humanen B-Lymphozyten, die membranstaendiges oder zytoplasmatisches Immunglobulin vom kappa-Typ besitzen, sowie die Bestimmung von kappa-Ketten in Koerperfluessigkeiten unter Verwendung an sich bekannter Analysemethoden wesentlich zu verbessern. Die Aufgabe wird geloest durch den Einsatz des monoklonalen Antikoerpers BL-Ig-k/1, der durch das Hybridom H-BL-Ig-k/1 produziert wird.The invention relates to a method for the determination of kappa chains. It is the object, by the use of a new immunoreagent, the specific determination of normal and neoplastic human B-lymphocytes, kappa-type membrane-bound or cytoplasmic immunoglobulin possess, as well as the determination of kappa chains in body fluids using per se known analysis methods significantly improve. The task is solved by the use of the monoclonal antibody BL-Ig-k / 1, which is produced by the hybridoma H-BL-Ig-k / 1.

Description

Titel der Erfindung T itel of the invention

Verfahren zur Bestimmung von kappa-KettenMethod for the determination of kappa chains

Anwendungsgebiet der ErfindungField of application of the invention

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Bestimmung humaner kappa-Ketten sowohl in freier als auch in H-kettengebundener Form.The invention relates to a method for the determination of human kappa chains both in free and in H-linked form.

Charakteristik der bekannten technischen LösungenCharacteristic of the known technical solutions

Ea ist bereits bekannt, humane kappa-Ketten mit konventionell hergestellten Antiseren nachzuweisen und zu quantifizieren. Die Antiserenherstellung ist jedoch problematisch. Es ist üblich, Versuchstiere mit individuellen kappa-Ketten oder mit Gemischen von diesen, die aus dem Harn von Patienten mit Leichtkettenkrankheit (Bence-Jones-Plasmozytom) isoliert werden, zu immunisieren. Die so gewonnenen Antiseren enthalten außer den Antikörpern, die mit der kappa-Determinante reagieren, noch eine Vielzahl von Antikörpern, die mit weiteren Determinanten des Immunogens reagieren. Diese Determinanten sind im Regelfall auch auf dem zweiten humanen L-Kettentyp, den larabda-Ketten, ausgeprägt, so daß die konventionell hergestellten Antiseren mit beiden L-Kettentypen reagieren. Um dias zu · vermeiden, müssen die gegen diese Determinanten gerichteten Antikörper durch Adsorption an lambda-Ketten entfernt werden. -Als recht zuverlässige Methode bietet sich dazu die Immunadsorption an trägerfixierte lambda-Ketten, die ihrerseits aus dem Harn von Bence-Jones-Plasmozytom-Ea is already known to detect and quantify human kappa chains with conventionally prepared antisera. Antisera production is problematic, however. It is common to immunize experimental animals with individual kappa chains or with mixtures of these isolated from the urine of patients with light chain disease (Bence-Jones plasmocytoma). The antisera thus obtained contains, in addition to the antibodies that react with the kappa determinant, a variety of antibodies that react with other determinants of the immunogen. These determinants are usually also pronounced on the second human L-chain type, the larabda chains, so that the conventionally prepared antisera react with both L-chain types. To avoid this, the antibodies directed against these determinants must be removed by adsorption to lambda chains. A quite reliable method is the immunoadsorption to carrier-fixed lambda chains, which in turn are obtained from the urine of Bence-Jones plasmocytoma.

patienten isoliert worden sind, an. Diese Prozedur ist insgesamt material- und zeitaufwendig. Sie führt zwar im Endeffekt zu Äntiseren, die spezifisch mit kappa-Ketten reagieren, jedoch haben sie einen niedrigen Titer und sind - bedingt durch das Herstellungsverfahren - teuer. Hinzu kommt, daß die Änti-kappa-Seren oftmals in Spezies hergestellt werden, deren Antikörper durch die Fc-Rezeptoren humaner Lymphozyten und Leukozyten gebunden werden. Der Nachteil solcher Antiseren besteht darin, daß diese Bindung der Antikörper an Fc-Rezeptoren nicht von der antigenspezifischen Bindung unterschieden werden kann. Die mit solchen Äntiseren ausgeführten Verfahren zur Bestimmung von humanen kappa-Ketten sind auf die Bestimmung im Serum oder im Harn beschränkt. Die diagnostisch wichtige Bestimmung des L-Kettentyps von zytoplasmatischen und/oder zellmembrangebundenem Immunglobulin der B-Lymphozyten, besonders der neoplastischen, ist mit solchen Reagenzien nicht möglich. Die Herstellung von Fab₂-Fragmenten wäre ein möglicher Ausweg, verbietet ,sich jedoch aus wirtschaftlichen Gründen.have been isolated. This procedure is generally material and time consuming. Although it does eventually lead to alterations that react specifically with kappa chains, they have a low titer and are expensive due to the manufacturing process. In addition, the Änti kappa sera are often produced in species whose antibodies are bound by the Fc receptors of human lymphocytes and leukocytes. The disadvantage of such antisera is that this binding of antibodies to Fc receptors can not be distinguished from the antigen-specific binding. The methods for determining human kappa chains carried out with such modifiers are limited to determination in serum or urine. The diagnostically important determination of the L-chain type of cytoplasmic and / or cell membrane-bound immunoglobulin of B-lymphocytes, especially the neoplastic, is not possible with such reagents. The production of Fab ₂ fragments would be a possible way out, but prohibits, for economic reasons.

Es ist weiterhin ein Nachteil der bisher bekannten, auf herkömmliche Weise hergestellten Anti-kappa-Seren, daß es unmöglich ist, sie in allen wichtigen Parametern, wie z.B. der qualitativen Zusammensetzung der Anti-kappa-Antikörper bezüglich ihrer Affinität, identisch zu reproduzieren. Das ist durch die Heterogenität der humoralen Immunantwort der zur Äntiserengewinnung herangezogenen Tiere bedingt. Deshalb ist eine Standardisierung der diagnostischen Methoden zur kappa-Kettenbestimmung mit den bisher hergestellten Immunreagenzien nicht möglich.It is also a disadvantage of the hitherto known conventionally prepared anti-kappa sera that it is impossible to use them in all important parameters, e.g. the qualitative composition of the anti-kappa antibodies with respect to their affinity to reproduce identically. This is due to the heterogeneity of the humoral immune response of animals used for Änntiserengewinnung. Therefore, a standardization of the diagnostic methods for kappa chain determination with the previously produced immune reagents is not possible.

Ziel der Erfindung;Aim of the invention;

Das Ziel der Erfindung besteht darin, ein Verfahren zur Bestimmung humaner kappa-Ketten zu entwickeln, das leicht vjDllziehbar, reproduzierbar und standardisierbar ist. E3 soll darüber hinaus kostengünstiger als bisher bekannte Verfahren sein.The object of the invention is to develop a method for the determination of human kappa chains, which is easily rotatable, reproducible and standardizable. E3 should also be cheaper than previously known methods.

Darlegung des Wesens der ErfindungExplanation of the essence of the invention

Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, durch den Einsatz eines neuen Immunreagenzes die spezifische Bestimmung von normalen und neoplastischen humanen B-Lymphosyten, die membranständiges oder zytoplasmatisches Imtnunglobulin vom kappa-Typ besitzen, sowie die Bestimmung von kappa-Ketten in Körperflüssigkeiten unter Verwendung an sich bekannter Analysenmethoden wesentlich zu verbessern.The invention is based on the object, by the use of a new immunoreagent, the specific determination of normal and neoplastic human B-lymphosomes which have kappa-type membrane-bound or cytoplasmic immunoglobulin, as well as the determination of kappa chains in body fluids using known per se Significantly improve analytical methods.

Erfindungsgemäß wird die Aufgabe dadurch gelöst, daß die Bestimmung von normalen und neoplastischen humanen B-Lymphozyten, die membranständiges o.der zytoplasmatisches Immunglobulin vom kappa-Typ besitzen, sowohl in einer Lymphozytensuspension als auch im histologischen Schnittpräparat sowie die Bestimmung von kappa-Ketten in freier oder H-kettengebundener Form in Körperflüssigkeiten unter Verwendung des monoklonalen Antikörpers BL-Ig-/C/1 erfolgt. Der monoklonale Antikörper BL-Ig-/C/1 wird an der Sektion Biowissenschaften der Karl-Marx-Universität Leipzig unter Verwendung des Hybridoma H-BL-Ig-/C/1 kommerziell hergestellt. Der monoklonale Antikörper reagiert auf Grund seiner besonderen Bindungseigenschaften hochspezifisch mit humanen kappa-Ketten, unabhängig davon, ob diese L-Ketten isoliert vorliegen oder in der H-kettengebundenen Form des humoralen, zytoplasmatischen oder lymphozytenmembrangebundenen Immunglobulins vorhanden sind.According to the invention, this object is achieved in that the determination of normal and neoplastic human B lymphocytes possessing kappa-type membrane-bound o.der cytoplasmic immunoglobulin, both in a lymphocyte suspension and in the histological section preparation and the determination of kappa chains in the free or H-linked form in body fluids using the monoclonal antibody BL-Ig / C / 1. Monoclonal antibody BL-Ig- / C / 1 is commercially produced at the Life Sciences Section of Karl Marx University Leipzig using Hybridoma H-BL-Ig / C / 1. The monoclonal antibody, due to its unique binding properties, reacts highly specifically with human kappa chains, whether these L chains are isolated or present in the H-linked form of the humoral, cytoplasmic or lymphocyte membrane-bound immunoglobulin.

Die spezifische Anlagerung de3 monoklonalen Antikörpers BL-Ig-ζΟΊ an das zellmembrangebundene und/oder zytoplasmatische Immunglobulin humaner B-Lymphozyten kann durch an sich bekannte Techniken sichtbar oder anderweitig auswertbar gemacht werden. Dazu kann der monoklonale Antikörper BL-Ig-K/1 direkt mit einem Marker gekoppelt werden. Als Marker kommen Fluoreszenzfarbstoffe (z.B. FITC oder !ERITC), Radioisotope (z.B. ¹²⁵J), Enzyme (z.B. Peroxidase, alkalische Phosphatase, Galaktosidase, Urease), kolloi- . dales Gold oder Partikel anderer Art (z.B. heterologe Erythrozyten, Latexpartikel oder andere synthetische Par-The specific attachment of the monoclonal antibody BL-Ig-ζΟΊ to the cell membrane-bound and / or cytoplasmic immunoglobulin of human B lymphocytes can be made visible or otherwise evaluable by techniques known per se. For this purpose, the monoclonal antibody BL-Ig-K / 1 can be directly coupled to a marker. As markers are fluorescent dyes (eg FITC or! ERITC), radioisotopes (eg ¹²⁵ J), enzymes (eg peroxidase, alkaline phosphatase, galactosidase, urease), colloid. dales gold or other types of particles (eg heterologous erythrocytes, latex particles or other synthetic

tikel) in Betracht. Die Ankopplung der Marker an den Antikörper BL-Ig-^I erfolgt in Abhängigkeit von dem verw.endeten Marker kovalent oder adsorptiv. Die Kombination beider Verfahren ist z.B. derart möglich, daß: ein Antikörper (z.B. Anti-Peroxidase-Antikörper) kovalent mit dem BL-Ig-/t7i gekoppelt wird und dieser Komplex immunspezifisch den Marker (in diesem Beispiel Peroxidase) bindet.article). The coupling of the markers to the antibody BL-Ig- ^ I is carried out covalently or adsorptively depending on the verwoendeten marker. The combination of both methods is e.g. such that: an antibody (e.g., anti-peroxidase antibody) is covalently coupled to the BL-Ig / t7i and this complex immunospecifically binds the marker (peroxidase in this example).

Die erfolgte spezifische Reaktion des monoklonalen Antikörpers BL-Ig-/^/1 mit den kappa-Ketten humaner B-Lymphozyten kann aber auch durch eine indirekte Reaktion sichtbar oder anderweitig auswertbar gemacht werden. Hierbei wird der monoklonale Mausantikörper BL-Ig-AVT. durch Anti-Mausimmunglobulin-Antikörper, die allerdings keine Kreuzreaktionen mit humanem Immunglobulin zeigen dürfen und ihrerseits mit einem der beim direkten Nachweis genannten Marker gekoppelt sind, sichtbar oder anderweitig auswertbar gemacht. Es ist aber auch möglich, durch solche Anti-Mäusimmunglobulin-Antikörper an den monoklonalen Antikörper BL-Ig-/</1 immunspezifisch einen weiteren Mausantikörper ßz.B. Antiperoxidase-Antikörper) zu binden, der seinerseits einen effektiven Marker ((z.B. Peroxidase) immunspezifisch bindet.The specific reaction of the monoclonal antibody BL-Ig - / ^ / 1 with the kappa chains of human B lymphocytes can also be made visible or otherwise evaluable by an indirect reaction. Here, the mouse monoclonal antibody becomes BL-Ig-AVT. by anti-mouse immunoglobulin antibodies, which, however, must not show any cross-reactions with human immunoglobulin and in turn are coupled to one of the direct detection detectors, made visible or otherwise evaluated. However, it is also possible, by such anti-mouse immunoglobulin antibodies to the monoclonal antibody BL-Ig - / </ 1 immunospecific another mouse antibody ßz.B. Antiperoxidase antibody) which, in turn, immunospecifically binds an effective marker (e.g., peroxidase).

Die zu testenden humanen Lymphozyten können zur Durchführung des erfindungsgemäßen B.estimmungsverfahrens sowohl als isolierte Zellen, wie z.B. in einer Einzelzellsuspension oder nach Anheften der Lymphozyten an die Oberfläche eines speziell präparierten trägers (z,B^:, eines Mikroskopobjektträgers), als auch als Gewebeschnittpräparate ((z.B. Kryostatschnitte). vorliegen, wenn sie in die Reaktion mit dem monoklonalen Antikörper BE-Ig -/<7'1 eintreten. ._; The human lymphocytes to be tested can be used for carrying out the B. determination method according to the invention both as isolated cells, for example in a single cell suspension or after attachment of the lymphocytes to the surface of a specially prepared carrier (z, B ^: a microscope slide), as well as tissue slices ( (eg cryostat sections) are present, when they in the reaction with the monoclonal antibody BE-Ig - / enter _<7'1.;..

Die Reaktion ist an nativen Zellen oder an nach einem schonenden Verfahren fixierten Zellen möglich. Zum Nachweis von zytoplasmstischen Immunglobulin vom kappa-Typ ist die Behandlung der, Zellen mit Methanol oder Azeton notwendig, um ein Eindringen der Nachweisreagenzien zuThe reaction is possible on native cells or on cells fixed according to a gentle procedure. For detection of kappa-type cytoplasmic immunoglobulin, treatment of the cells with methanol or acetone is necessary to prevent penetration of the detection reagents

ermöglichen. Die Auswertung erfolgt je nach dem verwendeten Marker entweder lichtoptisch mittels Durchlicht- oder Fluoreszenzmikroskopie durch Auszählen oder fotografisches Dokumentieren der kappa-kettenpositiven Lymphozyten oder durch Registrierung der Strahlung der radiomarkierten Kachweisreagenzien in an sich bekannter Weise.enable. Depending on the marker used, the evaluation is carried out either light-optically by means of transmitted light or fluorescence microscopy by counting or photographing the kappa-chain-positive lymphocytes or by recording the radiation of the radiolabeled Kachweis reagents in a manner known per se.

Wird das erfindungsgemäße Bestimmungsverfahren zur Bestimmung von kappa-Ketten, die in freier Form oder als Immunglobulin in Koäcperflüssigkeiten vorliegen Cz.B. in Serum oder Urin), angewendet, so ist es zweckmäßig, die nachzuweisenden und zu quantifizierenden kappa-Ketten durch eine spezifische Reaktion mit dem BL-Ig-f-C/. 1, der dazu an einen festen Träger adsorptiv oder kovalent gekoppelt ist, von den begleitenden Komponenten spezifisch abzutrennen. Die nunmehr in der vorstehend beschriebenen Art gebundenen kapps-Ketten bzw. kappa-kettentragenden Immunglobuline werden dann durch einen zweiten Antikörper, z.B. einen Anti-L-Kettchen-Antikörper, der gegen eine andere Determinants der L-Kette gerichtet ist und dessen Bindung an die kappa-Ketten durch die erfolgte Reaktion mit dem BL-Ig-/</1 nicht behindert wird, nachgewiesen und/oder quantifiziert. Der zweite Antikörper wird dazu mit einem Marker, wie Radioisotope (z.B. J), Enzyme (z.B. Peroxidase) oder Anti-Enzym-Antikörpern (z.B. Anti-Peroxidase-Antikörper)gekoppelt. Das Verfahren ist derart variierbar, daß ein zweiter Antikörper (z.B. Anti-L-Ketten-Äntikörper) an einen festen Träger ge-, koppelt wird und zur Isolierung der L-Ketten benutzt wird. Hierbei erfolgt die Quantifizierung der kappa-Ketten durch den monoklonalen Antikörper BL-Ig-^I, der zu diesem Zweck mit einem Marker vorsehen wird oder indirekt nach einer der oben aufgeführten Methoden bestimmt wird. Die Auswertung erfolgt dabei über die Messung der Strahlung des Radioisotops oder der enzymatischen Aktivität des jeweiligen Markers.If the method of determination according to the invention is for the determination of kappa chains which are present in free form or as immunoglobulin in coagulation liquids Cz.B. in serum or urine), it is useful to detect and quantify the kappa chains by a specific reaction with the BL-Ig -fC /. 1, which is adsorptively or covalently coupled to a solid support, to separate from the accompanying components specifically. The kapps chains or kappa-chain-carrying immunoglobulins now bound in the manner described above are then replaced by a second antibody, for example an anti-L chain antibody, which is directed against another determinant of the L chain and its binding to the kappa chains are not hindered, detected and / or quantified by the reaction with the BL-Ig - / </ 1. The second antibody is coupled to a marker such as radioisotopes (eg J), enzymes (eg peroxidase) or anti-enzyme antibodies (eg anti-peroxidase antibodies). The method is variable so that a second antibody (eg anti-L chain antibody) is coupled to a solid support and used to isolate the L chains. Here, the quantification of the kappa chains by the monoclonal antibody BL-Ig- ^ I, which will provide for this purpose with a marker or indirectly determined by one of the methods listed above. The evaluation is carried out by measuring the radiation of the radioisotope or the enzymatic activity of the respective marker.

Die auf der Verwendung des monoklonalen Antikörpers BL-Xg-/^/1 mit seinen günstigen Bindungseigenschaften be-The use of the monoclonal antibody BL-Xg - / ^ / 1 with its favorable binding properties

ruhende Verfahren zur Bestimmung von humanen kappa-Ketten zeichnen sich durch ihre Spezifität aus. Dieses Reagens vermeidet zuverlässig unspezifische Bindungen an Fc-Rezeptoren von humanen Lymphozyten und Leukozyten. Wesentliche Vorteile liegen weiterhin in der praktisch unbegrenzten Reproduzierbarkeit dieses von dem Hybridom-H-BL"-Ig-/t/i sezernierten monoklonalen Antikörpers. Die auch auf lange Sicht hin unbegrenzte Möglichkeit der Produktion dieses monoklonalen Antikörpers gestattet es, das auf seiner Verwendung beruhende Verfahren zur Bestimmung von kappa-Ketten zu standardisieren. Es ist jetzt leicht und unaufwendig möglich festzustellen, ob normale oder neoplastische B-Lymphozyten zytoplasmatisches oder zellmembrangebundenes Immunglobulin mit. L-Ketten vom kappa-Typ besitzen. Es können schnell und zuverlässig Aussagen darüber getroffen werden, ob die kappa-kettentragenden Lymphozyten in normaler Häufigkeit vorkommen oder extrem von den Mittelwerten für Uormalpersonen abweichen. Festgestellte Extremwerte sind z.B^:. eine wichtige Entscheidungshilfe, ob es sich beim verstärkten Auftreten von Lymphozyten im Blut um eine monoklonale B-Zellneoplasie handelt, oder ob die Veränderungen andere Ursachen haben.dormant methods for the determination of human kappa chains are characterized by their specificity. This reagent reliably avoids non-specific binding to Fc receptors of human lymphocytes and leukocytes. Substantial advantages continue to lie in the virtually unlimited reproducibility of this monoclonal antibody secreted by the hybridoma H-BL "Ig / t / I. The long-term unlimited possibility of production of this monoclonal antibody allows the monoclonal antibody based on its use to be used It is now easily and inexpensively possible to determine whether normal or neoplastic B lymphocytes have cytoplasmic or cell membrane-bound kappa-type immunoglobulin immunoglobulin, which can be quickly and reliably predicted whether the kappa chain bearing lymphocytes occur in normal frequency or extremely different from the mean values for Uormalpersonen Identified extreme values ^are:.. an important decision-making aid, whether in the blood is the increased incidence of lymphocytes by a monoclonal B-Zellneoplasie or whether the changes dere causes.

Weiterhin sind mit monoklonalen Antikörpern BL-Ig-/<71 arbeitende Verfahren besonders geeignet, den Harn von Fatienten auf die Anwesenheit von Bence-Jones-Proteinen vom kappa-Iyp zu testen und bei Patienten-mit kappa-Ketten-Plasmozytom durch Quantifizierung des kappa-Kettengehaltes des Harns den Zustand des Patienten bzw. die Wirksamkeit eingeleiteter therapeutischer Maßnahmen zu kontrollieren. Die Anwendung des monoklonalen Antikörpers BL-Ig-Vi/1 zur Bestimmung von kappa-Ketten soll anschließend an einigen Beispielen er 1 ".'.atert werden.Furthermore, methods employing monoclonal antibodies BL-Ig / <71 are particularly useful for testing the urine of fat patients for the presence of kappa-type Bence-Jones proteins and for kappa-chain plasmocytoma patients by quantification of kappa Chain content of the urine to control the condition of the patient or the efficacy of initiated therapeutic measures. The application of the monoclonal antibody BL-Ig-Vi / 1 for the determination of kappa chains will be followed by some examples of it.

Anwendungsbeispiele Beispiel 1Application Examples Example 1

Erfassung von normalen oder neoplastischen B>Lymphozyten, die Zelloberflächenimmunglobulin mit kappa-Ketten tragen, mittels BL-Ig-/Vi and indirekter ImmunfluoreszenzDetection of normal or neoplastic B lymphocytes carrying kappa cell surface immunoglobulin by BL-Ig / Vi and indirect immunofluorescence

1, Mikroskopobjektträger werden durch Beschichtung mit einer geeigneten Substanz (z.B. polykationische BSeagentien wie Poly-L-Lysin oder Poly-dimethyl-diallylammoniumchlorid) so vorbereitet, daß Lymphozyten quantitativ adhärieren.1, microscope slides are prepared by coating with a suitable substance (e.g., polycationic BSA agents such as poly-L-lysine or poly-dimethyl-diallylammonium chloride) so as to quantitatively adhere lymphocytes.

'2?· Angereicherte Lymphozytenpräparationen werden durch Dichtegradientenzentrifuga.tion aus peripherem Blut oder lymphoiden Gewebe des Probanden hergestellt.Enriched lymphocyte preparations are prepared by density gradient centrifugation from peripheral blood or lymphoid tissue of the subject.

3. Auf die beschichteten Objektträger werden 20/Ul der zu untersuchenden Zellsuspension (ca. 5 σ TO Zellen/ ml) aufgetropft. Die nach 10 min noch nicht adhärenten Zellen werden durch kurzes Eintauchen in gepufferte Natriumchloridlösung (CPBS 0,15 M NaGl, Ο,θΐ Phosphat pH 7,4) abgespült. Alle nachfolgenden Inkubationen der Zellen erfolgen in einer feuchten Kammer bei +4⁰C3. 20 / μl of the cell suspension to be examined (approximately 5 σ TO cells / ml) are added dropwise to the coated slides. The cells which have not yet adhered after 10 minutes are rinsed off by briefly immersing them in buffered sodium chloride solution (CPBS 0.15 M NaGl, Ο, ΐΐ phosphate pH 7.4). All subsequent incubations of the cells are carried out in a humid chamber at +4 ⁰ C.

C.C.

4. Inkubation der adhärenten Zellen mit 20/Ul BL-Igin Gebrauchskonzentration für 20 min.4. Incubate the adherent cells with 20 / Ul BL-Igin use concentration for 20 min.

5. Spülen der Präparate durch Einstellen in PBS/O,1 % NaH-, für jeweils 5 min bei +4⁰C Die Waschlösung wird 3-mal gewechselt.5. Rinse the preparations by adjusting in PBS / O, 1 % NaH-, for 5 min at +4 ⁰ C The wash solution is changed 3 times.

6. Inkubation der Zellen mit 20 ,ul Fluorochrom- (z.B. 5!ITC)-markiertem Anti-Mausimmunglobulin-Serum in Gebrauchskonzentration für 20 min.6. Incubation of the cells with 20, ul fluorochrome (eg 5! ITC) -labeled anti-mouse immunoglobulin serum concentration in use for 20 min.

7. Dreimaliges Spülen der Präparate iür jeweils 5 min in PBS/O, 1 % NaN₃ bei +4⁰C7. rinsing three times the preparations lor 5 min each in PBS / O, 1% NaN ₃ at +4 ⁰ C

8. Auszählen des Anteils der fluoreszenzimmunologisch markierten Lymphozyten mit einem Fluoreszenzmikroskop.8. Count the proportion of fluorescence immunologically labeled lymphocytes with a fluorescence microscope.

Beispiel 2. Example 2 .

Erfassung von normalen oder neoplastischen Bi-Ly mp ho zy ten, die Zelloberflächenimmunglobulin mit kappa-Ketten tragen, mittels des monoklonalen Antikörpers BL-Ig-ZC/1 und goldmarkierten Anti-Mausimmunglobulin-Antikö'rpernDetection of normal or neoplastic bi-lymphocytes carrying kappa cell surface immunoglobulin by the monoclonal antibody BL-Ig-ZC / 1 and gold-labeled anti-mouse immunoglobulin antibodies

1. - 5. Gleiches Vorgehen wie in Punkt 1. bis 5. im Beispiel 1.1. - 5. Same procedure as in 1. to 5. in example 1.

6. Inkubation der Zellen mit 20/ul goldmarkierten Anti-Mausimmunglobulin-Antikörpern in Gebrauchskonzentration für 20 min.6. Incubate the cells with 20 μl of gold-labeled anti-mouse immunoglobulin antibodies at use concentration for 20 min.

7. Dreimaliges Spülen der Präparate in PBS/0,1 HaH, für jeweils 5'min bei + 4 C.7. Rinse the preparations three times in PBS / 0.1 HaH, for 5 min at + 4 ° C.

8. Lichtmikroskopische Auszählung des Anteils der goldmarkierten Lymphozyten an der Gesamtmenge der Lymphozyten. -^: 8. Light microscopic counting of the proportion of gold-labeled lymphocytes in the total amount of lymphocytes. - ^:

Beispiel 3Example 3

Bestimmung' normaler und neoplastischer B-Lymphozyten, die •Zelloberflächenimmunglobulin mit L-Ketten vom kappa-Typ tragen, mittels BL-Ig-/C/1 und enzymimmunologischer ReaktionenDetermination of normal and neoplastic B lymphocytes carrying • cell surface immunoglobulin with kappa-type L chains by BL-Ig / C / 1 and enzyme immunological reactions

1.-5· Gleiches Vorgehen wie in den Punkten 1. bis 5. im Beispiel 1.1.-5 · Same procedure as in points 1. to 5. in example 1.

6. Inkubation der Zellen mit 2G/Ul Ziege-anti-Mausimmun-• globulin-Serum in Gebrauchskonzentration für 20 min.6. Incubate the cells with 2G / Ul goat anti-mouse immunoglobulin serum at use concentration for 20 min.

7. Dreimaliges Spülen der Präparate in PBS für jeweils 5 min bei +4⁰C7. rinsing three times of the preparations in PBS for 5 min at +4 ⁰ C

8. Inkubation der Zellen mit 20/Ul 'Maus-anti-Meerrettichperoxidase-Ancikörpern (z.B. BL-POD/11); in Gebrauchakonzentration für 20 min.8. Incubate the cells with 20 μl of mouse anti-horseradish peroxidase antibodies (e.g., BL-POD / 11); in use concentration for 20 min.

9. Dreimaliges Spülen der Präparate in PBS für jeweils 5 min bei + 4⁰C.9. Rinse the preparations three times in PBS for 5 min at + 4 ^° C.

10. Inkubation der Zellen mit 20/Ul Meerrettichperoxidase in Gebrauchskonzentration für 20 min.10. Incubate the cells with 20 / μl horseradish peroxidase in use concentration for 20 min.

11. Dreimaliges Spülen der Präparate in PBS für jeweils 5 min bei + 4⁰C.11. Rinse the preparations three times in PBS for 5 min at + 4 ^° C.

12. Zugabe einer Substratlösung, bestehend aus Diaminobenzidintetrahydrochlorid in Tris/HCL-Puffer (pH 7,6) und HpOp? für 5 bis 10 min bei Raumtemperatur.12. Addition of a substrate solution consisting of diaminobenzidine tetrahydrochloride in Tris / HCL buffer (pH 7.6) and HpOp? for 5 to 10 minutes at room temperature.

13. Abstoppen der Reaktion durch Einstellen in kalte13. Stop the reaction by setting in cold

14. Lichtmikroskopische Auszählung der Lymphozyten mit deutlicher Membranmarkierung.14. Light microscopic counting of the lymphocytes with marked membrane marking.

Beispiel 4Example 4

Bestimmung normaler und neoplastischer B-Lymphozyten, die Zelloberflächenimmunglobulin mit L-Eetten vom kappa-Typ tragen, nach Fixierung mit Glutardialdehyd mittels enzymimmunologischer Reaktionen:Determination of normal and neoplastic B lymphocytes bearing cell surface immunoglobulin with kappa-type L-Eets after fixation with glutaric dialdehyde by enzyme immunological reactions:

1 ♦ - 3. Gleiches Vorgehen wie in den Punkten 1. bis 3. im Beispiel 1.1 ♦ - 3. Same procedure as in points 1. to 3. in example 1.

4. Inkubation der Zellen mit 20/Ul 0,05 % Glutardialdehyd für 15 min.4. Incubate the cells with 20 μl / 0.05 % glutaraldehyde for 15 min.

5. Dreimaliges Spülen der Zellen in PBS für jeweils 5 min bei + 4⁰C.5. Rinse the cells 3 times in PBS for 5 min at + 4 ^° C.

6. Abblocken freier Aldehydgruppen durch Inkubation der Zellen in Glyzinpuffer für 1Q min bei + 4⁰C.6. Blocking of free aldehyde groups by incubating the cells in a glycine buffer for 1Q minutes at + 4 ⁰ C.

7. Dreimaliges Spülen der Zellen in PBS für jeweils 5 min bei + 4⁰C.7. Rinse the cells 3 times in PBS for 5 min at + 4 ^° C.

8. Inkubation der Zellen mit 20 ,al BL-Ig-<ΌΛ in Gebrauchskonzentration für 20- min.8. Incubate the cells with 20 , al BL-Ig - <ΌΛ in use concentration for 20- min.

9. Dreimaliges Spülen der Zellen in PBS für jeweils 5 min bei + 4°C.9. Rinse cells three times in PBS for 5 min each at + 4 ° C.

10. Die weitere Behandlung erfolgt wie in den Punkten 6. bis '14. des Beispiels 3 beschrieben.10. The further treatment takes place as in points 6 to '14. of Example 3 described.

Beispiel example 55

Bestimmung normaler oder neoplastischer B-Iymphozyten, die zytoplasmatisches Immunglobulin mit L-Ketten vom kappa-Typ besitzen, mittels BL-Ig-/</1 u.nd indirekter Nachweisreaktionen.Determination of normal or neoplastic B lymphocytes possessing kappa-type L-chain cytoplasmic immunoglobulin by means of BL-Ig - / / and indirect detection reactions.

1. Gleiches Verfahren wie in den Punkten 1. bis 3* des Beispiels 1.1. Same procedure as in items 1 to 3 * of Example 1.

2. Fixierung der Zellen durch Behandlung mit kaltem Azeton für 3-10 min.2. Fix the cells by treatment with cold acetone for 3-10 min.

3. Dreimaliges Spülen der Zellen in PBS.3. Rinse cells three times in PBS.

4. Die weitere Behandlung erfolgt entweder wie in den Punkten 4. bis 7. des Beispiels 1 oder wie in den4. The further treatment is carried out either as in items 4 to 7 of Example 1 or as in

Punkten 4. bis 13« des Beispiels 3.Points 4 to 13 «of example 3.

5. Die Auswertung erfolgt durch Auszählung des Anteils der Lymphozyten, die eine Markierung ihres zytoplasmatischen Immunglobulins aufweisen. Die Auswertung erfolgt entweder fluoreszenzmikroskopisch oder mittels Durchlichtmikroskopie.5. The evaluation is carried out by counting the proportion of lymphocytes having a label of their cytoplasmic immunoglobulin. The evaluation is carried out either by fluorescence microscopy or by transmitted light microscopy.

Beispiel 6Example 6

Bestimmung normaler oder neoplastischer B-Lymphozyten, die membrangebundenes und/oder zytoplasmatisches Immunglobulin mit L-Ketten vom kappa-Typ besitzen, in histologischen Schnittpräparaten mittels dem monoklonalen Antikörper BL-Ig-K/1 und indirekter ImmunfluoreszenzDetermination of normal or neoplastic B lymphocytes having membrane-bound and / or cytoplasmic immunoglobulin with kappa-type L chains in histological sections using the monoclonal antibody BL-Ig-K / 1 and indirect immunofluorescence

1. 4-6 ,um starke Kryostatschnitte des zu untersuchenden Gewebes werden für 5 min in Azeton oder Ethanol fixiert und anschließend gründlich mit PBS gespült.1. 4-6, to strong cryostat sections of the tissue to be examined are fixed for 5 min in acetone or ethanol and then rinsed thoroughly with PBS.

2. Inkubation der Präparate mit 50/Ul BL-Ig-</1 in Gebrauchskonzentration bei + 4⁰C für 60 min.2. Incubation of the preparations with 50 / Ul BL-Ig - </ 1 in use concentration at + 4 ⁰ C for 60 min.

3. Gründliches Spülen der Präparate mit PBS.3. Thorough rinsing of the preparations with PBS.

4. Inkubation der Präparate mit einem Fluorochrom (z.B. FITC)-markiertem Anti-Mausimmunglobulin-Serum in Gebrauchskonzentration für 30 min bei + 4⁰C.4. Incubation of the preparation with a fluorochrome (such as FITC) -labeled anti-mouse immunoglobulin serum concentration in use for 30 min at + 4 ⁰ C.

5. Gründliches Spülen der Schnittpräparate, Eindecken und fluoreszenzmikroskopische «Auswertung.5. Thorough rinsing of the sections, coverslips and fluorescence microscopy evaluation.

Beispiel 7Example 7

Bestimmung von normalen und neoplastischen B-Lymphozyten, die metnbrangebundenes und/oder zytoplasmatisch.es Imrnunglobulin mit L-Ketten vom kappa-Typ besitzen, mittels BL-Ig-K/I und enzymimmunologischer Reaktionen an Gewebeschnitten.Determination of normal and neoplastic B lymphocytes, which possess metabrancated and / or cytoplasmic immunoglobulin with kappa-type L chains, by means of BL-Ig-K / I and enzyme immunological reactions on tissue sections.

1 . 4-6/lim starke Kryostatschnitte werden auf Mikroskop-Objektträger aufgezogen und 5 min mit Azeton oder Ethanol fixiert, anschließend gründlich mit PBS gespült.1 . 4-6 / lim strong cryostat sections are mounted on microscope slides and fixed for 5 min with acetone or ethanol, then rinsed thoroughly with PBS.

2. Inkubation der Präparate mit 50/Ul BL-Ig-K/1 in Gebrauchskonzentration für 60 min.2. Incubation of the preparations with 50 / Ul BL-Ig-K / 1 in use concentration for 60 min.

3. Gründliches Spülen der Präparate mit PBS.3. Thorough rinsing of the preparations with PBS.

4. Blockierung der endogenen Peroxidase, z.B. durch eine Behandlung mit 0,5 % HpO₂-Methanollösung für 10-30 min.4. blocking the endogenous peroxidase, for example by treatment with 0.5% HpO ₂ -Methanollösung for 10-30 min.

5. Inkubation der Schnitte für 30 min mit einem Anti-Mausimmunglobulin-Serum in Gebrauchsverdünnung.5. Incubate the sections for 30 min with an anti-mouse immunoglobulin serum at working dilution.

6. Spülen der Schnitte mit PBS.6. Rinse the sections with PBS.

7. Inkubation der Schnitte für 30 min mit einem Mausanti-Meerrettichperoxidase-Antikörper (z.B. BL-POD/11) in Gebrauchskonzentration.7. Incubate the sections for 30 min with a mouse anti-horseradish peroxidase antibody (e.g., BL-POD / 11) at use concentration.

8. Spülen der Schnitte mit PBS.8. Rinse the sections with PBS.

9. Inkubation der Schnitte mit Meerrettichperoxidaselösung in Gebrauchskonzentration für 30 min.9. Incubation of the sections with horseradish peroxidase solution in use concentration for 30 min.

10. Spülen der Schnitte mit PBS.10. Rinse the sections with PBS.

11. Einstellen der Schnitte in eine Substratgemischlösung, bestehend aus H₂O₂ und Diarninobenzidinhydrochlorid in Tris/HCI-Püffer (pH 7,6) für 10-15 min.11. Adjust the sections in a mixed substrate solution consisting of H ₂ O ₂ and diarninobenzidine hydrochloride in Tris / HCl buffer (pH 7.6) for 10-15 min.

12. Gründliches Spülen der Schnitte mit PBS/0,1 % und Entwässern der Schnitte. Nach Einbettung er-12. Thoroughly rinse the sections with PBS / 0.1 % and drain the sections. After embedding

folgt die lichtmikroskop.ische Auswertung.follows the lichtmikroskop.ische evaluation.

Beispiel 8Example 8

Bestimmung normaler oder neoplastischer B-Lymphozyten, die Membranimmunglobulin mit L-Ketten vom kappa-Typ tragen, mit FITC-markiertem BL-Ig-K/1 Determination of normal or neoplastic B lymphocytes carrying kappa-type L-chain membrane immunoglobulin with FITC-labeled BL-Ig-K / 1

1. Gleiches Vorgehen wie in den Punkten 1. bis 3. des Beispiels 1.1. Same procedure as in items 1 to 3 of Example 1.

2. Inkubation der adhärenten Zellen mit 20/Ul FITC-markiertem BI-Ig-Zi/1 in Gebrauchskonzentration für 20 min.2. Incubation of the adherent cells with 20 / Ul FITC-labeled BI-Ig-Zi / 1 in use concentration for 20 min.

3. Dreimaliges Spülen der Präparate für jeweils 5 min in PBS/0,1 % NaN₃.3. Rinse the preparations three times for 5 min in PBS / 0.1 % NaN ₃ .

4. Fluoreszenzmikroskopische Auszählung der markierten lymphozyten·4. Fluorescence microscopic counting of the labeled lymphocytes

Beispiel 9Example 9

Bestimmung normaler und neoplastischer B-Lymphozyten, die Membranimmunglobulin mit L-Ketten vom kappa-Typ tragen, mit goldmarkiertem BL-Ig-/£/1Determination of normal and neoplastic B lymphocytes bearing membrane immunoglobulin with kappa-type L chains with gold-labeled BL-Ig- / £ / 1

1.2x10 Zellen werden mit 50 ,ul goldmarkiertem BL-Ig-/C/1 in Gebrauchskonzentration vermischt und für 20 min bei + 4⁰C unter mehrmaligem Aufschütteln inkubiert.1.2x10 cells are incubated with 50, ul gold-labeled BL-Ig / C / 1 in use concentration mixed incubated with repeated shaking and for 20 minutes at + 4 ⁰ C.

2. Dreimaliges Waschen der Zellen mit PBS der 1 % Kälberserum und 0,1 % NaSu zugesetzt sind.2. Wash the cells three times with PBS containing 1 % calf serum and 0.1 % NaSu.

3. Eindecken eines Tropfens der resuspendierten Zellen und Auszählen der markierten'Zellen.3. Cover a drop of the resuspended cells and count the labeled cells.

Beispiel 10Example 10

Bestimmung der Konzentration von kappa-Ketten in Körperflüssigkeiten mittels BL-Ig-K^I im FestphasenradiobindungstestDetermination of the concentration of kappa chains in body fluids by means of BL-Ig-K ^ I in the solid-phase radiolabeling test

1. Mikrotiterplatten aus Plaste · (Polystyren oder Polyvinylchlorid) werden mit BL-Ig-/£/1 beschichtet. Dazu wird der Antikörper in PBS gelöst in Konzentrationen von 1 bis 50/Ug/ml eingesetzt. Die Beladung wird bei + 4⁰C für 12 h ausgeführt.1. Plastic microtiter plates · (polystyrene or polyvinylchloride) are coated with BL-Ig / £ / 1. For this purpose, the antibody is dissolved in PBS used in concentrations of 1 to 50 / ug / ml. The loading is carried out at + 4 ⁰ C for 12 h.

2. Dreimaliges Waschen mit 0,05 % Tween 20/PBS.2. Wash three times with 0.05 % Tween 20 / PBS.

3. Blockieren unspezifischer Bindungsstellen durch In-Kubation mit 2 % neonatalem Kälberserum für 15 min.3. Block non-specific binding sites by in-cubing with 2 % neonatal calf serum for 15 min.

4. Dreimaliges Waschen mit 0,05 % Tween 20/PBS.4. Wash three times with 0.05 % Tween 20 / PBS.

5. Herstellung einer Verdünnungsreihe eines Serums oder einer reinen Präparation von kappa-Ketten mit bekannter Konzentration an kappa-Ketten (kappa-Kettenstandard). Ebenso wird von der Testflüssigkeit eine Verdünnungsreihe hergestellt. Die Verdünnungen erfolgen zweckmäßigerweise in 1 % neonatalem Kälberserum. Jeweils 100/ül der einzelnen Konzentrationen von Standard und Testprobe werden in die beschichtete Mikrotiterplatte eingefüllt und für 12-24 h bei + 4⁰C inkubiert.5. Preparation of a dilution series of a serum or a pure preparation of kappa chains with known concentration of kappa chains (kappa chain standard). Likewise, a dilution series of the test liquid is prepared. The dilutions are conveniently carried out in 1% neonatal calf serum. Each 100 / ül of the individual concentrations of standard and test sample are filled into the coated microtiter plate and incubated for 12-24 h at + 4 ⁰ C.

6. Dreimaliges Waschen mit 0,05 % Tween 20/PBS.6. Wash three times with 0.05 % Tween 20 / PBS.

12S 1 2S

7. Jeweils 100/Ul ^J-markierter Anti-Human L-Ketten-7. Each 100 / Ul ^ J-labeled anti-human L chain

Äntikörper (z.B. BL-Ig-L/1) werden zugesetzt. Inkubation für 4-12 h bei + 4°C.Antibodies (e.g., BL-Ig-L / 1) are added. Incubate for 4-12 h at + 4 ° C.

8. Dreimaliges Waschen mit 0,05 % Tween 20/P3S.8. Wash three times with 0.05 % Tween 20 / P3S.

9. Messung der in den einzelnen Vertiefungen gebundenen Radioaktivität in einer Gammastrahlungsmeßkette.9. Measurement of the radioactivity bound in the individual wells in a gamma-ray measuring chain.

1o. Aufstellung einer Eichkurve an Hand der Zählraten der Verdünnungsreihe des kappa-Kettenstandards1o. Establishment of a calibration curve on the basis of the counting rates of the dilution series of the kappa chain standard

Bestimmung der Konzentration der kappa-Ketten in der Meßprobe mittels der Eichkurve. Determination of the concentration of kappa chains in the test sample by means of the calibration curve.

Beispiel 11Example 11

Bestimmung der Konzentration von kappa-Ketten in Körperflüssigkeiten durch den Antikörper BL-Ig-.</1 mittels Enzymimmuntest.Determination of the concentration of kappa chains in body fluids by the antibody BL-Ig - </ 1 by means of enzyme immunoassay.

1. Mikrotiterplatten aus Plaste (Polystyren oder Polyvinylchlorid) werden mit Anti-Human-L-Ketten-Antikö'rpern (z.B. BL-Ig-L/1) beladen. Der Antikörper ist in PBS gelöst (1 - 50/Ug/ml). Die Beschichtung erfolgt durch Inkubation bei + 4⁰C für 12 h.1. Plastic microtiter plates (polystyrene or polyvinylchloride) are loaded with anti-human L-chain antibodies (eg BL-Ig-L / 1). The antibody is dissolved in PBS (1-50 / ug / ml). The coating is carried out by incubation at + 4 ⁰ C for 12 h.

2. Dreimaliges Waschen mit 0,05 % Tween 20 PBS. 2. Wash three times with 0.05 % Tween 20 PBS.

3. Blockieren unspezifischer Bindungsstellen durch Inkubation mit 2 % neonatalem Kälberserum für 15 min.3. Block nonspecific binding sites by incubation with 2 % neonatal calf serum for 15 min.

4. Dreimaliges Waschen mit 0,05 % Tween 20/PBS.4. Wash three times with 0.05 % Tween 20 / PBS.

5. Gleiches Verfahren wie in Punkt 5 des Beispiels 10.5. Same procedure as in item 5 of Example 10.

6. Dreimaliges Waschen mit 0,05 % Tween 20/PBS.6. Wash three times with 0.05% Tween 20 / PBS.

7. Zum Nachweis der gebundenen kappa-Ketten wird BL-Ig-tf/1, an den kovalent Anti-Meerrettichperoxidase-Antikörpßr (z.B. BL-POD/11) angekoppelt sind, verwendet. Dazu7. For detection of bound kappa chains, BL-Ig-tf / 1 to which covalently anti-horseradish peroxidase antibody (e.g., BL-POD / 11) is coupled is used. To

werden jeweils 100/ul dieses Antikörperkonjugates pro Vertiefung eingesetzt. Inkubation bei + 4⁰C für 4 bis 12 h.100 μl of this antibody conjugate are used per well. Incubation at + 4 ⁰ C for 4 to 12 h.

8. Dreimaliges Waschen mit 0,05 % Tween 20/PBS.8. Wash three times with 0.05 % Tween 20 / PBS.

9. Inkubation mit jeweils 100/Ul Meerrettichperoxidase- -lösung für 1 h bei + 4⁰C.9. Incubation with 100 / μl horseradish peroxidase solution for 1 h at + 4 ^° C.

10. Dreimaliges Waschen mit 0,05 % Tween 20/PBS.10. Wash three times with 0.05 % Tween 20 / PBS.

Tt. Zugabe von jeweils 100/Ul Substratgemisch, bestehend aus H₂O₂ und ortho-Phenylendiamin. Entwicklung 5-60 min.Tt. Add in each case 100 / UI substrate mixture consisting of H ₂ O ₂ and ortho-phenylenediamine. Development 5-60 min.

12. Abstoppen der Reaktion durch Zugabe von 100/Ul 4U H und anschließende photometrische Auswertung.12. stopping the reaction by adding 100 / Ul 4U H and subsequent photometric evaluation.

13. Aufstellung einer Eichkurve an Hand der Extinktionswerte der Verdünnungsstufen des kappa-Kettenstandards. Bestimmung der Konzentration öer kappa-Ketten in der Me3probe mittels dieser Eichkurve.13. Establishment of a calibration curve on the basis of the extinction values of the dilution stages of the kappa chain standard. Determination of the concentration of kappa chains in the Me3 sample by means of this calibration curve.

Claims (8)

Erfindungsansprücheinvention claims 1. Verfahren zur Bestimmung von kappa-Ketten, dadurch gekennzeichnet, daß als Indikatorreagenz der monoklonale Antikörper BL-Ig-/</1 eingesetzt wird, wobei direkte und indirekte liachweisreaktionen zur Anwendung kommen.1. A method for the determination of kappa chains, characterized in that is used as an indicator reagent of the monoclonal antibody BL-Ig - / </ 1, with direct and indirect liachweisreaktionen are used. 2. Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß der monoklonale Antikörper mit einem Marker gekoppelt ist.2. Method according to item 1, characterized in that the monoclonal antibody is coupled to a marker. 3. Verfahren nach Punkt 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß nach der Methode der direkten Immunfluoreszenz gearbeitet wird.3. The method according to item 1 and 2, characterized in that the method of direct immunofluorescence is used. 4. Verfahren nach Punkt 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß nach der Methode der indirekten Immunfluoreszenz gearbeitet wird.4. The method according to item 1 and 2, characterized in that the method of indirect immunofluorescence is used. 5. Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß enzymimtnunologisch gearbeitet wird.5. The method according to item 1, characterized in that enzymimptnunologisch is worked. 6. Verfahren nach Punkt 1 und 2, dadurch gekennzeichnet, daß der Antikörper BL-lg-K/1 mit kolloidalem Gold markiert wird.6. The method according to item 1 and 2, characterized in that the antibody BL Ig-K / 1 is labeled with colloidal gold. 7. Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß der monoklonale Antikörper BL-Ig-κΓ/1 mit einem goldmarkierten Anti-Mausimmunglobulin-Reagenz sichtbar gemacht wird.7. The method according to item 1, characterized in that the monoclonal antibody BL-Ig-κΓ / 1 is made visible with a gold-labeled anti-mouse immunoglobulin reagent. 8. Verfahren nach Punkt 1, dadurch gekennzeichnet, daß . der Antikörper BL-Ig-/</1 in einem Festphasenimmunassay eingesetzt wird.8. The method according to item 1, characterized in that. the antibody BL-Ig - / </ 1 is used in a solid phase immunoassay.