DD151173A2 - METHOD OF PREPARATION OF TRUNCATED CARDENOLIDE DERIVATIVES OF HIGH SPECIFIC ACTIVITY - Google Patents

Abstract

Das Ziel der Erfindung besteht darin, ein Verfahren zur Herstellung von tritiierten Cardenolid-Derivaten zu entwickeln, mit dem auch solche Verbindungen markiert erhalten werden koennen, die unter den Markierungsbedingungen nicht hinreichend stabil sind. Tritiierte Cardenolid-Derivate hoher spezifischer Aktivitaet werden dazu in einem organischen Loesungsmittel geloest und anschlieszend entweder bei Raumtemperatur oder unter Erhitzen chemisch umgesetzt. Die entstandenen tritiummarkierten Cardenolid-Derivate werden isoliert und radiochemische Verunreinigungen abgetrennt. Ueberraschenderweise tritt bei dem erfindungsgemaeszen Verfahren nur ein sehr geringer Aktivitaetsverlust ein.The object of the invention is to develop a process for the preparation of tritiated cardenolide derivatives, with which also those compounds can be obtained which are not sufficiently stable under the labeling conditions. Tritiated cardenolide derivatives of high specific activity are dissolved in an organic solvent and then chemically reacted either at room temperature or with heating. The resulting tritium-labeled cardenolide derivatives are isolated and radiochemical impurities separated. Surprisingly, only a very small loss of activity occurs in the process according to the invention.

Description

D. Murawski Dr* R. Megges Prof. Dr. K. Repke Dip1.-Chem. S, PankowskiD. Murawski Dr * R. Megges Prof. dr. K. Repke Dip1.-Chem. S, Pankovsky

Herstellungsverfahren fur tritiierte Cardenolid-Derivate hoher spezifischer Aktivität Preparation method for tritiated cardenolide derivatives of high specific activity

Anwendungsgebiet der ErfindungField of application of the invention

Die Erfindung betrifft ein Herstellungsverfahren für tritiierte Cardenolid-Derivate hoher spezifischer Aktivität nach WP ή$ 5" 3 A Z . The invention relates to a preparation process for tritiated cardenolide derivatives of high specific activity according to WP ή $ 5 "3 AZ.

Tritiierte Verbindungen werden bei biochemischen.Untersuchungen und in der medizinischen Diagnostik benötigt.Tritiated compounds are needed in biochemical investigations and in medical diagnostics.

Charakteristik der bekannten technischen Lösungen Ch arakteristik the known technical solutions

In WP "f£5"<j ή Z wurde bereits ein Verfahren zur Herstellung von tritiierten Cardenoliden hoher spezifischer Aktivität vorgeschlagen» Mit diesem Verfahren können aber hur solche Cardenolid-Derivate tritiiert werden, die gegenüber den Bedin-· gangen der Markierung nach V/P λ 3 sr 3 ι o, stabil sind«A process for the preparation of tritiated cardenolides of high specific activity has already been proposed in WP "f £ 5"<j ή Z. However , with this process, it is possible to tritiate only those cardenolide derivatives which are resistant to the conditions of the V / V label. P λ 3 sr 3 ι o, are stable «

Ziel der ErfindungObject of the invention

Das Ziel der Erfindung besteht darin, ein Verfahren zur Herstellung von tritiierten Cardenolid-Derivaten zu entwickeln,.mit dein auch solche Verbindungen markiert erhalten werden können* die unter den Markierungsbedingungen nicht hinreichend stabilThe object of the invention is to develop a process for the preparation of tritiated cardenolide derivatives, with which it is also possible to obtain those compounds which are not sufficiently stable under the labeling conditions

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!Darlegung des Wesens der Erfindung;Explanation of the essence of the invention;

Erfindungsgemäß werden tritiierte Cardenolid-Derivate hoher spezifischer Aktivität in einem organischen Lösungsmittel gelöst und anschließend entweder bei Raumtemperatur oder unter Erhitzen chemisch, z*B. durch Halogenierung, Acylierung oder Oxydation umgesetzt« Anschließend werden die entstandenen tritiummarkierten Cardenolid-Derivate isoliert und radiochemisehe Verunreinigungen abgetrennt«According to the invention tritiated cardenolide derivatives of high specific activity are dissolved in an organic solvent and then chemically, either at room temperature or under heating, z * B. implemented by halogenation, acylation or oxidation. "Subsequently, the resulting tritium-labeled cardenolide derivatives are isolated and radiochemical impurities are separated off."

Nach diesem Verfahren können tritiierte Cardenolid-Derivate gewonnen werden, die durch direkte Tritiierung nicht zugänglich sind« Überraschenderweise tritt bei demerfindungsge- . mäßen Verfahren nur ein sehr geringer Aktivitätsverlust ein.By this method, tritiated cardenolide derivatives can be obtained which are not accessible by direct tritiation. "Surprisingly, in the invention. In the process only a very small loss of activity.

Anschließend soll die Erfindung an Beispielen näher erläutert werden*,Subsequently, the invention will be explained in more detail with examples *,

Ausführungsbeispieleembodiments

Beispiel 1 ' .Example 1 ' .

Tritiummarkiertes 21-Brom-3,16-diacetyl-gitoxigenin-(21-T(n)) (I) aus 3,i6~Diacetyl-gitoxigenin-(21-T(n)) (II)Tritiated 21-bromo-3,16-diacetyl-gitoxigenin (21-T (n)) (I) from 3, 16 ~ diacetyl-gitoxigenin (21-T (n)) (II)

38,2 mg (0,08 mMol) II mit einer spezifischen Aktivität von 5,7 Ci/mMol (d,h„ 456 mCi) werden in 4 ml Tetrachlorkohlen~ stoff (über CaHp frischdestilliert) 25 Min auf einem Infrarotstrahler unter Rückfluß erhitzt, wobei nach 5 Min dem Reaktionsgemisch 45 mg N-Broinsuccinimid zugesetzt werden. Nach dem Abkühlen werden die ungelösten Partikel abfiltriert und die Mutterlauge mit 5 ml eines gleichteiligen Gemisches aus Lösungen von Kaliumhydrogencarbonat (10%ig) und Natriumthiosulfat (n/10) gewaschen* Nach Trennung beider Phasen wird die organische Phase über Natriumsulfat getrocknet und bei Zimmertemperatur eingeengt. Aus dem Rückstand lassen sich durch Umkristallisieren aus Äther 9 mg I (23,7%) mit einer spezifischen Aktivität von 5 Ci/mMol isolieren. Die radiochemischen Verunreinigungen liegen unter38.2 mg (0.08 mmol) of II having a specific activity of 5.7 Ci / mmol (d, h "456 mCi) are refluxed in 4 ml of carbon tetrachloride (fresh distilled over CaHp) for 25 min on an infrared radiator , wherein after 5 min 45 mg of N-bromosuccinimide are added to the reaction mixture. After cooling, the undissolved particles are filtered off and the mother liquor with 5 ml of a mixture of equal parts of solutions of potassium bicarbonate (10%) and sodium thiosulfate (n / 10) washed * After separation of the two phases, the organic phase is dried over sodium sulfate and concentrated at room temperature , By recrystallization from ether 9 mg of I (23.7%) with a specific activity of 5 Ci / mmol can be isolated from the residue. The radiochemical impurities are under

Wanderungsgeschwindigkeit and Farbreaktionen von I bei der Dünnschichtchromatographie stimmen mit dem Verhalten von authentischem nicht^arkiertem I überein·"Migration rate and color reactions of I in thin-layer chromatography are consistent with the behavior of authentic unaltered I ·

Beispiel 2 . . . _ Example 2 . , , _

Tritiummarkiertes 3,12-bis-(Monobromacetyl)-digoxigenin-'(21-T(n)) (III) aus Digoxige.nin-(21-T(n)) (IV)Tritiated 3,12-bis (monobromoacetyl) -digoxigenin - '(21-T (n)) (III) from digoxigenin (21-T (n)) (IV)

130,2 mg (0,33 mMol) IV mit einer spezifischen Aktivität von 4,6 Ci/mMol werden durch Erwärmen auf 50⁰C in 3 ml Dioxan (frisch getrocknet und destilliert) gelöst und mit 0,08 ml Pyridin (über CaEU destilliert) und 0,087 ml Bromacetylbromid versetzt« Nach 24-stündigem Stehen bei Raumtemperatur unter Lichtausschluß wird 1 ml Methanol zugegeben, der entstandene weiße Medersahlag abfiltriert und mit Chloroform gewaschen. Das durch Einengen der Mutterlauge erhaltene Substanzgemisch wird auf einer präparativen Dünnschichtplatte an Silicagel (2 mm Schichtdicke) mit Chloroform/Essigester/Äthanol 80:18:2. getrennt und die III entsprechende Zone unter Vernachlässigung aller Übarlappungszonen mit anderen radioaktiven Verunreinigungen mit Chloroform/Äthanol 1:1 eluiert« Nach dem Einengen des Eluats erhält man 36 mg (17,1%) III mit einer spezifischen Aktivität von 4,4 Ci/mMol, in der radiodünnschichtchromatographisch keine Verunreinigungen nachzuweisen sind.130.2 mg (0.33 mmol) of IV with a specific activity of 4.6 Ci / mmol (dried and freshly distilled) by heating to 50 ⁰ C in 3 ml of dioxane and treated with 0.08 ml of pyridine (on CAEU distilled) and 0.087 ml bromoacetyl bromide added. After standing for 24 hours at room temperature with exclusion of light, 1 ml of methanol is added, the resulting white Medersahlag filtered off and washed with chloroform. The substance mixture obtained by concentrating the mother liquor is applied to a preparative thin-layer plate of silica gel (2 mm layer thickness) with chloroform / ethyl acetate / ethanol 80: 18: 2. separated and the corresponding III zone eluting with other radioactive contaminants with chloroform / ethanol 1: 1, neglecting all Übarlappungszonen "After concentration of the eluate to obtain 36 mg (17.1%) III with a specific activity of 4.4 Ci / mmol in which no impurities can be detected by means of radio-thin-layer chromatography.

Wanderungsgeschwindigkeit und Farbreaktionen von III bei der Dünnschichtchromatographie stimmen mit dem Verhalten von authentischem nichtmarkiertemIII überein*Migration speed and color reactions of III in thin-layer chromatography are consistent with the behavior of authentic unlabeled III *

Beispiel 3Example 3

Tritiummarkierter Quabain-dialdehyd-(21-T(n)) (ν) aus Quabain-Tritiated quabain dialdehyde (21-T (n)) (ν) from quabain

(21-T(n)) (VI) (21-T (n)) (VI)

62,8 mg (0,11 mMol): VI mit einer spezifischen Aktivität von 1,1 Ci/mMol werden in 1 ml Äthanol gelöst und mit 57 mg Perjodsäure in 0,25 ml Wasser versetzt. Der Ansatz wird 10 Minuten bei Raumtemperatur aufbewahrt und dann mit 0,03 ml Glycol versetzt. Nach weiteren 2 Stunden wird das Gemisch auf eine präparative Silicagel-Dünnschichtplatte aufgetragen und mit Chloroform/Methanol 75:25 getrennt.Die radioaktive Hauptfraktion entspricht dem entstandenen V und wird nach Entfernung der radlochemischen Verunreinigungen mit Methanol eluiert. Die Entfernung der radioaktiven Verunreinigungen erfolgt durch Abkratzen der entsprechenden Zonen der Beschichtung der DC-Platte an Hand des nach dem Scannen erhaltenen Radiogramms. Im Eluat lassen sich UV-spektroskopisch 0,03 mMol Quabaindialdehyd nachweisen (spezifische Aktivität 1 Ci/mMol)·62.8 mg (0.11 mmol): VI having a specific activity of 1.1 Ci / mmol are dissolved in 1 ml of ethanol and treated with 57 mg of periodic acid in 0.25 ml of water. The batch is kept for 10 minutes at room temperature and then admixed with 0.03 ml of glycol. After a further 2 hours, the mixture is applied to a preparative silica gel thin layer plate and separated with chloroform / methanol 75:25. The major radioactive fraction corresponds to the resulting V and is eluted after removal of the radlochemical contaminants with methanol. The radioactive contaminants are removed by scraping off the appropriate areas of the DC plate coating from the post-scan radiograph. In the eluate can be UV-spectroscopy detect 0.03 mmol Quabaindialdehyd (specific activity 1 Ci / mmol) ·

Wanderungsgeschwindigkeit und Farbreaktionen von V bei der Dünnschichtchromatogrphie stimmen mit dem Verhalten von authentischem nichtmarkiertem V überein·Migration speed and color responses of V in thin layer chromatography are consistent with the behavior of authentic unlabelled V ·

Claims (1)

Erfindungsanspruchinvention claim Herstellungsverfahren für tritiierte Cardenolid-Derivate hoher spezifischer Aktivität nach WP A3s~9 4i dadurch gekennzeichnet, daß man Cardenolide hoher spezifischer Aktivität in an sich bekannter Weise chemisch, z*B. durch Halogenierung, Acylierung oder Oxydation umsetzteProduction method for tritiated cardenolide derivatives of high specific activity according to WP A3s ~ 9 4i, characterized in that cardenolides of high specific activity are chemically synthesized in a manner known per se . by halogenation, acylation or oxidation