CZ301703B6

CZ301703B6 - Extrakty Tanacetum parthenium

Info

Publication number: CZ301703B6
Application number: CZ20014304A
Authority: CZ
Inventors: Bombardelli@Ezio; Morazzoni@Paolo
Original assignee: Indena S. P. A.
Priority date: 1999-06-03
Filing date: 2000-05-31
Publication date: 2010-06-02
Also published as: JP4712258B2; WO2000074695A3; US6479080B2; DE60005174D1; ATE249232T1; HK1046245B; CN1353612A; AU5527200A; NO20015867L; HU228799B1; US20010021400A1; ITMI991244A0; HUP0201258A3; PL352107A1; NO328245B1; KR100727121B1; US6224875B1; CA2375910A1; ITMI991244A1; AU769365B2

Abstract

Extrakty Tanacetum parthenium, obsahující nejvýš 0,2 % hmotnostní .alfa.-nenasycených .gama.-laktonu, zvlášte parthenolidu, získatelné zpusobem, pri nemž se a) extrahují vzdušné cásti rostliny acetonem, alkoholy nebo smesí techto rozpouštedel s vodou, b) materiál ze stupne (a) se extrahuje uhlovodíkovými rozpouštedly, c) neuhlovodíková fáze se extrahuje apolárním rozpouštedlem, d) na extrakt v apolárním rozpouštedle, odparený a znovu rozpuštený ve smesi vody a alkoholu, se pusobí silne bazickou pryskyricí, e) pryskyrice se podrobí eluci alkoholy a výsledný eluát se odloží, f) pryskyrice se zpracovává alkoholovým roztokem kyseliny nebo roztokem kyseliny ve smesi vody a alkoholu, roztok se odparí a výsledný odparek se extrahuje apolárním rozpouštedlem, g) apolární rozpouštedlo ze stupne (f) se odparí na odparek, který se pridá k odparku po odparení uhlovodíkového extraktu ze stupne (b) a k acetonové nebo alkoholové fázi, získané po extrakci apolárním rozpouštedlem ze stupne (c), h) smes se odparí a usuší. Soucást rešení tvorí také farmaceutický prostredek s analgetickými a antiflogickými vlastnostmi s obsahem uvedených extraktu.

Description

Oblast techniky

Vynález se týká extraktů Tanacetum parthenium, v podstatě prostých a-nenasycených γ-laktonů. Vynález se dále týká způsobu výroby těchto extraktů a farmaceutických a kosmetických prostředků, které tyto extrakty obsahují, zvláště takových, které obsahují extrakty, v podstatě prosté parthenolidu.

Dosavadní stav techniky

Extrakty Tanacetum parthenium, rostliny, náležející do Čeledi Asteraceae/Composite a rovněž známé pod názvem Altamisa, Crisanthemum, Leucanthemum nebo Prythrum parthenium již byly užívány při léčení migrény, závrati, kloubních zánětů, menstruačních poruch, hořečnatých stavů, bolesti zubů, bolesti žaludku a při bodnutí hmyzem. Extrakty uvedené rostliny obsahují těkavé oleje různé povahy, zejména mono- a seskviterpenové složky, dále flavonoidy, taninové látky, pyrethrin a také terpenoidy ze skupiny seskviterpenových laktonů, známých pod názvem germa20 cronolidy, guaianolidy a eudesmanolidy. Uvedené látky jsou charakteristické svojí a-nenasycenou γ-laktonovou strukturou, běží zejména o sloučeniny, známé pod názvem parthenolid, 3-βhydroxyparthenoid, costunolid, 3-fi-hydroxycostunolid, artemorin, 8-a-hydroxyestafiatin a chrysanthemonin.

Přítomnost uvedených seskviterpenových laktonů se považuje za základní podmínku pro farmakologickou účinnost uvedených extraktů podle publikace J. Pharm. Pharmacol. 1992, 44, 391395.

Pozornost byla zaměřena zejména na parthenolid, který se považuje za základní účinnou složku extraktu, současně však také za složku, zodpovědnou za alergické reakce, k nimž může někdy docházet při léčení extrakty Tanacetum parthenium, jak bylo uvedeno v publikacích Arch. Dermatol. Forsch, 1975, 251(3), 235-44, tamtéž 1976,255(2), 111-21, Contact Dermatitis, 1988, 38(4), 207-8, Am. J. Contact Dermatol. 1998-9 (1): 49-50, Br. J. Dermatol. 1995, 132(4): 5437.

Extrakty Tanacetum parthenium, obsahující parthenolid, byly popsány v publikacích WO 94/06 800, EP 553 658, WO 92/11 857, GB 2 166 952, EP 98 041 a WO 98/39 018.

Podstata vynálezu

Nyní bylo zjištěno, že extrakty Tanacetum perthenium, v podstatě prosté α-nenasycených γlaktonú, zvláště prosté parthenolidu, mají zajímavé farmakologické vlastnosti a současně podstatně snížené riziko vzniku alergických reakcí.

Extrakty podle vynálezu je tedy možno běžně použít jako účinné složky pro výrobu farmaceutikých nebo kosmetických prostředků.

Pod pojmem „v podstatě prostý a-nenasycených γ-laktonů“ nebo „v podstatě prostý partheno50 lidu“ se v průběhu přihlášky rozumí extrakt, jehož obsah parthenolidu je nižší než 0,2 % hmotnostní, s výhodou nižší než 0,1 %, zvláště nižší než 0,09 % a zvláště výhodný nižší než 0,07 % hmotnostních.

CZ 3V17W3 B6

Podstata vynálezu tvoří extrakty Tanacetum parthenium obsahující nejvýš 0,2 % hmotnostní anenasycených γ-laktonů, získatelné způsobem, při němž se

a) extrahují vzdušné části rostliny scetonem, alkoholy nebo směsí těchto rozpouštědel s vodou,

b) materiál ze stupně (a) se extrahuje uhlovodíkovými rozpouštědly,

c) neuhlovodíková fáze se extrahuje apolámím rozpouštědlem,

d) na extrakt v apolámím rozpouštědle, odpařený a znovu rozpuštěný ve směsi vody a alkoholu, se působí silně bazickou pryskyřicí,

e) pryskyřice se podrobí eluci alkoholy a výsledný eluát se odloží,

0 pryskyřice se zpracovává alkoholovým roztokem kyseliny nebo roztokem kyseliny v směsi vody a alkoholu, roztok se odpaří a výsledný odparek se extrahuje apolámím rozpouštědlem,

g) apolámí rozpouštědlo ze stupně (f) se odpaří na odparek, který se přidá k odparku po odpaření uhlovodíkového extraktu ze stupně (b) a k acetonové nebo alkoholové fázi, získané po extrakci apolámím rozpouštědlem ze stupně (c),

h) směs se odpaří a usuší.

Parthenolid a jiné příbuzné seskviterpenové laktony je možno tímto způsobem odstranit vzhledem k tomu, že bazická pryskyřice zcela neočekávaně nevyvolává otevření laktonového kruhu, který je jinak citlivý na hydrolýzu v bazickém prostředí. Flavonové složky s kyselými hydroxy20 skupinami jsou pryskyřicí na rozdíl od parthenolidu a příbuzných sloučenin zadrženy, takže jsou možno parthenolid a příbuzné látky odstranit.

Výhodnými rozpouštědly pro různé extrakční stupně jsou následující látky:

stupně a): aceton, methanol, ethanol nebo směsi těchto rozpouštědel s vodou, stupeň b): hexan, n-pentan, petrolether, ligroin, stupeň c): methylenchlorid, chloroform, ethylacetát,, s výhodou methylenchlorid, stupeň 0; ethylacetát.

Pod pojmem „alkoholová rozpouštědla nebo rozpouštědla ze směsi vody a alkoholu“ se rozumí methanol nebo methanol s obsahem 10 až 80 % objemových vody.

Bazické pryskyřice, které je podle vynálezu možno použít, jsou běžně dodávané pryskyřice, například pod obchodním názvem Relite 2A, Relite 3A2, Dowex 2.

Extrakt podle vynálezu je možno získat také tak, že se vychází z běžných obchodně dodávaných extraktů, na tyto extrakty se působí silně bazickou pryskyřicí, popřípadě po předchozí extrakci rozpouštědly typu uhlovodíky, kterými je možno odstranit lipofilní složky, které by se mohly dostat do nežádoucí interference s použitou pryskyřicí.

Obsah a-nenasycených γ-laktonů nebo parthenolidu ve výsledném extraktu se stanoví pomocí HPLC.

Vynález bude popsán také v souvislosti s přiloženým výkresem.

Na obr. 1 je znázorněn typický profil extraktu získaného způsobem podle vynálezu při provádění HPLC. Je zřejmé malé množství parthenolidu.

Extrakty podle vynálezu mají výhodné farmakologické vlastnosti a současně podstatně snížené so riziko vzniku alergických reakcí. Zachování farmako logických vlastností, charakteristických pro běžně dodávané extrakty Tanacetum parthenium přes téměř úplné odstranění seskviterpenových

-2VZ. *JU1 z w ov laktonů je velmi překvapující vzhledem ke zprávám, které i v poslední době dokládají vztah mezi biologickou účinností a složení známých extraktů, zvláště v publikaci J. Pharm. Pharmacol. 1992,

44:391-395.

Extrakty podle vynálezu, v podstatě prosté parthenolidu mají zvláště vysokou účinnost proti shlukování krevních destiček, protizánětlivou účinnost, účinnost proti migréně a analgetickou účinnost.

Součást podstaty vynálezu tvoří také farmaceutické prostředky, které jako svou účinnou složku io obsahují účinné množství extraktu Tanacetum parthenium podle vynálezu ve směsi s vhodnými nosiči.

Farmaceutické prostředky podle vynálezu budou obsahovat obvykle 10 až 500 mg extraktu a budou podávány 3 až 4krát denně podle doporučení lékaře. Výhodné podávání je perorální podání, je však možno extrakty podávat i jiným způsobem, například parenterálně.

Prostředky podle vynálezu jsou zvláště vhodné pro léčení a prevenci záchvatů migrény.

Praktické provedení vynálezu bude osvětleno následujícími příklady, které však nemají sloužit k omezení rozsahu vynálezu.

Příklady provedení vynálezu

Příklad 1

Příprava extraktu

2 kg Tanacetum parthenium se extrahují při teplotě 50 až 60 ^ŮC celkem 20 litry 70% vodného methanolu. Extrakt se zahustí ve vakuu na přibližně 1 litr a zředí stejným objemem methanolu. Výsledný roztok se extrahuje 3krát 2 litry n-hexanu. Hexanové extrakty se odpaří do sucha ve vakuu, čímž se získá přibližně 30 g odparku, který se označí jako extrakt H. Roztok ve směsi vody a methanolu se pak extrahuje 2krát 0,5 litry methylenchloridu. Organická fáze se odpaří do sucha ve vakuu, Čímž se získá 70 g odparku, který se označí jako extrakt DCM. Fáze ve směsi methanolu a vody (extrakt MH) se odloží. Extrakt DCM se rozpustí v 0,6 litrech 90% methanolu a za míchání se k němu přidá na 3 až 4 hodiny celkem 0,6 litru silně bazické pryskyřice Relice 2A. Pak se suspenze zfiltruje za sníženého tlaku a pryskyřice se promyje přibližně 2 litry 90% methanolu. Methanolový roztok, který obsahuje parthenolid a příbuzné látky se odloží. Bazická pryskyřice se pak zpracovává za míchání 1 hodinu působením 0,6 litry methanolu s obsahem 65 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové. Pak se pryskyřice odfiltruje ve vakuu a promyje se 2,5 litry methanolu. Filtrát a promývací materiál se spojí, zahustí se ve vakuu na objem přibližně 200 ml a extrahuje 3krát 200 ml ethylacetátu. Výsledný extrakt E.A., který obsahuje flavonové složky tanetin a příbuzné látky, se odpaří do sucha ve vakuu, čímž se získají přibližně 4 g odpar45 ku. Odparky extraktů H a E.A. se spojí s extraktem HM. Výsledný roztok se odpaří do sucha ve vakuu a pevný odparek se suší za sníženého tlaku při teplotě 50 °C do stálé hmotnosti. Tímto způsobem se získá 490 g extraktu T. pathenium, zbaveného parthenolidu, který se analyzuje pomocí HPLC, při požití sloupce Zorbax SB Cl8, jako eluční činidlo se užije A:H₂0+0,01 % TFA, B:MeCN+0,01 % TFA, gradient A:B = 90 % az 10%: 10 až 90%, rychlost průtoku

1 ml/min, tímto způsobem je možno prokázat obsah parthenolidu nižší než 0,07 %,

-3CL JU1/UJ BO

Příklad 2

Farmakologická účinnost

Byl použit experimentální model s indukcí stimulace neuronů nitroglycerinem u krys, popsaný v publikaci Brain Research 1995, 682: 167-181, tamtéž 1995, 37-44, a také v publikaci Neuropharmacol. 1997,36(10), 1417-1424.

io Nitroglycerin, vasodilatační látka, běžně užívaná klečení některých kardiovaskulárních poruch může být použita také jako diagnostický prostředek při sledování migrény vzhledem k tomu, že po podání této látky dojde k stimulované migrénovému záchvatu. Záchvat, vyvolaný nitroglycerinem není okamžitý, dochází k němu po několika hodinách a v typických případech je doprovázen běžnými přídavnými příznaky, jako je nausea a světloplachost. Vasodilatační účinnost organic15 kých dusičnanů včetně nitroglycerinu je způsobena metabolismem oxidu dusičitého, který patrně také hraje svoji úlohu jako nervový přenášeč v SNC. Stimulace nervových buněk rychle aktivuje transkripci několika látek typu protoonkogenázy, které jsou vzhledem k rychlé a přechodné indukci nazývány okamžitými častými geny. Z těchto látek je zatím nejsledovanější c-fos a bílkovina, pro kterou je tento gen kódem, Fos, která se dostává do jádra, v němž přetrvává několik hodin a její přítomnost je možno prokázat immunohistochemicky.

Provedení pokusu krysích samců kmene Sprague-Dawley bylo rozděleno do pěti pokusných skupin. Dvěma skupinám, kontrolní skupině a jedné z pokusných skupin byl podán pouze 0,5% roztok karboxymethylcelulózy jako nosné prostředí v množství 10 ml/kg, ostatním třem skupinám byl tři dny perorálně podáván extrakt Tanacetum parthenium, v podstatě prostý parthenolidu, (TPPDE) v dávkách 100 a 200 mg/kg nebo běžný extrakt Tanacetum parthenium (TPRE) ve stejné dávce.

1 hodinu po posledním podání byl všem zvířatům s výjimkou kontrolní skupiny podkožně podán nitroglycerin v dávce 10 ml/kg.

hodiny po podání nitroglycerinu byly krysy anestetizovány sodnou solí pentobarbitalu a vzestupnou aortou byl protlačen fixační roztok. Pak byl mozek rychle vyjmut a fixován ve stejném fixačním roztoku přes noc. Celým roztokem byly provedeny řezy s tloušťkou 50 pm na zmrazovacím mikrotomu. Tyto řezy byly sériově uloženy do 6 vyhloubení s obsahem chladného roztoku chloridu sodného s fosfátovým pufrem, (PBS) a pak zpracovány pro imunohistochemické vyšetření.

Výsledky jsou shrnuty v následující tabulce. Tabulka uvádí počet imunoreaktivních neuronů (průměr ± směrodatná odchylka) v paraventrikufámím jádru hypothalamu (PVH), v locus ceuruleus (LC) a v parabrachiálním jádru (PBN) 4 hodiny po podání nitroglycerinu.

-4Tabulka

Ošetřeni	PVH	LC	PBN
kontrola	95 ± 43,1	47,0 ± 21,2	27,3 ± 15,2
Nitroglycerin	574,2 + 298,5	334,3 ± 61,4	231,3 ± 89,4
TPPDE(1QQ)+ nitroglycerin	378,5±182,9*	200,5 ± 43,4*	140,7 ± 64,6*
TPPDE{200)+ nitroglycerin	123,4+74,5**	87,5 + 24,5**	71,6 ± 28,6**
TPRE{200)+ nitroglycerin	569,7 ± 288,3	321,2 + 49,1	228,3 i 87,5

*p<0,03 pro TPPDE(IOO) + nitroglycerin proti kontrolní skupině s nitroglycerinem **p<0,001 pro TPPDE(200) + nitroglycerin proti kontrolní skupině s nitroglycerinem

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY io

1. Extrakty Tanacetum parthenium, obsahující nejvýš 0,2 % hmotnostní α-nenasycených γlaktonů, získatelné způsobem, při němž se

15 a) extrahují vzdušné části rostliny acetonem, alkoholy nebo směsí těchto rozpouštědel s vodou,

b) materiál ze stupně (a) se extrahuje uhlovodíkovými rozpouštědly,

c) neuhlovodíková fáze se extrahuje apolámím rozpouštědlem,

d) na extrakt v apolámím rozpouštědle, odpařený a znovu rozpuštěný ve směsi vody a alkoholu, se působí silně bazickou pryskyřicí,

20 e) pryskyřice se podrobí eluci alkoholy a výsledný eluát se odloží,

í) pryskyřice se zpracovává alkoholovým roztokem kyseliny nebo roztokem kyseliny v směsi vody a alkoholu, roztok se odpaří a výsledný odparek se extrahuje apolámím rozpouštědlem,

g) apolámí rozpouštědlo ze stupně (f) se odpaří na odparek, který se přidá k odparku po odpaření uhlovodíkového extraktu ze stupně (b) a k acetonové nebo alkoholové fázi, získané po extrakci

25 apolámím rozpouštědlem ze stupně (c),

h) směs se odpaří a usuší.
2. Extrakt podle nároku 1, vyznačující se tím, že jako α-nenasycený y-lakton obsahuje parthenolid.
3. Extrakt podle nároku 1, vyznačující se tím, že obsahuje méně než 0,1 % hmotnostní a-nenasycených γ-laktonů.
4. Farmaceutický prostředek, vyznačující se tím, že jako svou účinnou složku 35 obsahuje extrakt podle některého z nároků 1 až 3 spolu s farmaceuticky přijatelným nosičem.
5. Kosmetický prostředek pro perorální podání, vyznačující se tím, že jako svou účinnou složku obsahuje extrakt podle některého z nároků 1 až 3 spolu s přijatelným nosičem.