CZ296577B6 - Polymer a jeho pouzití ke stimulaci imunitní odpovedi - Google Patents
Polymer a jeho pouzití ke stimulaci imunitní odpovedi Download PDFInfo
- Publication number
- CZ296577B6 CZ296577B6 CZ0073796A CZ73796A CZ296577B6 CZ 296577 B6 CZ296577 B6 CZ 296577B6 CZ 0073796 A CZ0073796 A CZ 0073796A CZ 73796 A CZ73796 A CZ 73796A CZ 296577 B6 CZ296577 B6 CZ 296577B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- polymer
- synpol
- hyaluronidase
- present
- ethylenepiperazine
- Prior art date
Links
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 title claims abstract description 21
- 230000027317 positive regulation of immune response Effects 0.000 title 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 27
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 9
- 229920001577 copolymer Polymers 0.000 claims abstract description 8
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 6
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 11
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 claims description 11
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 4
- 125000002057 carboxymethyl group Chemical group [H]OC(=O)C([H])([H])[*] 0.000 claims description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 125000000896 monocarboxylic acid group Chemical group 0.000 claims 3
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 claims 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 abstract description 13
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 abstract description 12
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 abstract description 12
- VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N Ethene Chemical compound C=C VGGSQFUCUMXWEO-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 239000005977 Ethylene Substances 0.000 abstract 1
- GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-O hydron piperazine Chemical compound [H+].C1CNCCN1 GLUUGHFHXGJENI-UHFFFAOYSA-O 0.000 abstract 1
- 239000003022 immunostimulating agent Substances 0.000 abstract 1
- 229920013625 Synpol Polymers 0.000 description 38
- 108010003272 Hyaluronate lyase Proteins 0.000 description 33
- 102000001974 Hyaluronidases Human genes 0.000 description 33
- 229960002773 hyaluronidase Drugs 0.000 description 32
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 20
- 244000000013 helminth Species 0.000 description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 description 15
- 208000006968 Helminthiasis Diseases 0.000 description 9
- 208000014837 parasitic helminthiasis infectious disease Diseases 0.000 description 9
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 8
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 7
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 7
- IMNIMPAHZVJRPE-UHFFFAOYSA-N triethylenediamine Chemical compound C1CN2CCN1CC2 IMNIMPAHZVJRPE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 6
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 6
- 238000005804 alkylation reaction Methods 0.000 description 5
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 5
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 5
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 5
- FRKWNUUBNLNOEF-UHFFFAOYSA-N C=C.ON1CCNCC1 Chemical compound C=C.ON1CCNCC1 FRKWNUUBNLNOEF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 150000001204 N-oxides Chemical class 0.000 description 4
- 230000029936 alkylation Effects 0.000 description 4
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 4
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 4
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 4
- KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N succinimide Chemical compound O=C1CCC(=O)N1 KZNICNPSHKQLFF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- WTFMFQXWKFXYKA-UHFFFAOYSA-N 4-oxido-1-aza-4-azoniabicyclo[2.2.2]octane Chemical compound C1CN2CC[N+]1([O-])CC2 WTFMFQXWKFXYKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 239000013566 allergen Substances 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 3
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 3
- 230000000973 chemotherapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 3
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 3
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 3
- KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 7H-purine Chemical compound N1=CNC2=NC=NC2=C1 KDCGOANMDULRCW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M Bromide Chemical compound [Br-] CPELXLSAUQHCOX-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 206010061201 Helminthic infection Diseases 0.000 description 2
- OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N Hydrazine Chemical compound NN OAKJQQAXSVQMHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 241000242594 Platyhelminthes Species 0.000 description 2
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 2
- SWLVFNYSXGMGBS-UHFFFAOYSA-N ammonium bromide Chemical compound [NH4+].[Br-] SWLVFNYSXGMGBS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000000507 anthelmentic effect Effects 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 2
- WBJINCZRORDGAQ-UHFFFAOYSA-N ethyl formate Chemical compound CCOC=O WBJINCZRORDGAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000000178 monomer Substances 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 238000001374 small-angle light scattering Methods 0.000 description 2
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 229960002317 succinimide Drugs 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 2
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 1
- 208000031295 Animal disease Diseases 0.000 description 1
- 241000243818 Annelida Species 0.000 description 1
- 241000238421 Arthropoda Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 208000004020 Brain Abscess Diseases 0.000 description 1
- 241000282832 Camelidae Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 241000242722 Cestoda Species 0.000 description 1
- 102000009016 Cholera Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010049048 Cholera Toxin Proteins 0.000 description 1
- VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N Chromium Chemical compound [Cr] VYZAMTAEIAYCRO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 1
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 1
- 108010034145 Helminth Proteins Proteins 0.000 description 1
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000003918 Hyaluronan Synthases Human genes 0.000 description 1
- 108090000320 Hyaluronan Synthases Proteins 0.000 description 1
- 108050009363 Hyaluronidases Proteins 0.000 description 1
- 241000257303 Hymenoptera Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 241000712431 Influenza A virus Species 0.000 description 1
- 241000701076 Macacine alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000935974 Paralichthys dentatus Species 0.000 description 1
- 208000030852 Parasitic disease Diseases 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 1
- RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N Titanium Chemical compound [Ti] RTAQQCXQSZGOHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 230000002009 allergenic effect Effects 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 208000030961 allergic reaction Diseases 0.000 description 1
- 230000007815 allergy Effects 0.000 description 1
- VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N alprazolam Chemical compound C12=CC(Cl)=CC=C2N2C(C)=NN=C2CN=C1C1=CC=CC=C1 VREFGVBLTWBCJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229940124339 anthelmintic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000921 anthelmintic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 description 1
- 150000001540 azides Chemical class 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 210000004671 cell-free system Anatomy 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229910052804 chromium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011651 chromium Substances 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 description 1
- 239000006071 cream Substances 0.000 description 1
- 239000000824 cytostatic agent Substances 0.000 description 1
- 230000001085 cytostatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000586 desensitisation Methods 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 150000002148 esters Chemical class 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 description 1
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007236 host immunity Effects 0.000 description 1
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 1
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 1
- 230000002134 immunopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000001506 immunosuppresive effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000002779 inactivation Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 208000037797 influenza A Diseases 0.000 description 1
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000015788 innate immune response Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 description 1
- 208000004396 mastitis Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N muramyl dipeptide Chemical class OC(=O)CC[C@H](C(N)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](C)O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H](O)[C@@H]1NC(C)=O BSOQXXWZTUDTEL-ZUYCGGNHSA-N 0.000 description 1
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036285 pathological change Effects 0.000 description 1
- 231100000915 pathological change Toxicity 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 1
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 1
- 244000144977 poultry Species 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 235000019833 protease Nutrition 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000008844 regulatory mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000004243 retinal function Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 1
- 239000003998 snake venom Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000005944 tissue migration Effects 0.000 description 1
- 229910052719 titanium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010936 titanium Substances 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08F—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED BY REACTIONS ONLY INVOLVING CARBON-TO-CARBON UNSATURATED BONDS
- C08F226/00—Copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by a single or double bond to nitrogen or by a heterocyclic ring containing nitrogen
- C08F226/06—Copolymers of compounds having one or more unsaturated aliphatic radicals, each having only one carbon-to-carbon double bond, and at least one being terminated by a single or double bond to nitrogen or by a heterocyclic ring containing nitrogen by a heterocyclic ring containing nitrogen
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08G—MACROMOLECULAR COMPOUNDS OBTAINED OTHERWISE THAN BY REACTIONS ONLY INVOLVING UNSATURATED CARBON-TO-CARBON BONDS
- C08G73/00—Macromolecular compounds obtained by reactions forming a linkage containing nitrogen with or without oxygen or carbon in the main chain of the macromolecule, not provided for in groups C08G12/00 - C08G71/00
- C08G73/06—Polycondensates having nitrogen-containing heterocyclic rings in the main chain of the macromolecule
- C08G73/0622—Polycondensates containing six-membered rings, not condensed with other rings, with nitrogen atoms as the only ring hetero atoms
- C08G73/0633—Polycondensates containing six-membered rings, not condensed with other rings, with nitrogen atoms as the only ring hetero atoms with only two nitrogen atoms in the ring
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0003—Invertebrate antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/02—Antiprotozoals, e.g. for leishmaniasis, trichomoniasis, toxoplasmosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P33/00—Antiparasitic agents
- A61P33/10—Anthelmintics
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
- C12N11/02—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
- C12N11/08—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer
- C12N11/089—Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier the carrier being a synthetic polymer obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds
- C12N11/091—Phenol resins; Amino resins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
- A61K2039/6093—Synthetic polymers, e.g. polyethyleneglycol [PEG], Polymers or copolymers of (D) glutamate and (D) lysine
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Immunology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Mycology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Polyethers (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
Abstract
Popisuje se polymer, který je kopolymerem ethylenpiperazin-N-oxidu a N-(karboxymethyl)ethylenpiperazinia. Tento polymer muze slouzit jako imunostimulacní cinidlo, adjuvans nebo nosic. Muze se kombinovat nebo konjugovat s antigenem a taková kombinacenebo konjugát se muze pouzít pro vakcínovou smes.
Description
Polymer a jeho použití ke stimulaci imunitní odpovědi
Oblast techniky
Předložený vynález se týká imunostimulačního nosiče pro vakcíny.
Dosavadní stav techniky
Infekce helminty jsou hlavní příčinnou chorobnosti a úmrtnosti, jak domestikovaných zvířat, tak i lidské populace. Obecně řečeno, mezi helminty se řadí parazitické a neparazitické druhy náležející ke kmenu ploštěnců (např. motolice ovčí, tasemnice a jiní ploštěnci) a helmintů (např. kroužkovci a jejich příbuzní). Následuje popis, jak probíhá infekce helminty. Helminti vstupují do těla hostitele ve formě vajíček nebo invazivních larev, například jako výsledek příjmu jídla obsahujícího vajíčka nebo larvy do organismu hostitele. Helminti se pak vyvíjejí, pohybují se zvolna různými tkáněmi, krví nebo lymfou. Nakonec dosahují svého „preferovaného“ orgánu, rostou a dospívají. Případně je orgán, ve kterém pobývají, nepříznivě ovlivněn.
Regulační opatření se vztahují především ke zlepšení hygieny, snížení populace přenašečů a chemoterapii. Regulační opatření zaměřená na hygienu a snížení populace přenašečů se ukazují být problémová zejména v rozvojových zemích, kde takovéto infekce jsou zcela převládající a taková regulační opatření jsou nejobtížněji vykonávatelná. Všechny současné chemoterapeutické léčby mají nevýhody, jako je vysoká toxicita, požadavek opakování postupu a imunosupresivní vedlejší účinky. Navíc používání těchto přípravků často vede k vývoji rezistence parazitů k chemoterapeutické léčbě. Skutečně téměř každá země zaznamenala případy resistence na antihelmintika. Z těchto důvodů a rovněž z nákladnosti opakovaného podávání chemoterapeutických sloučenin, jsou velice žádoucí sloučeniny, které nebudou mít tyto nevýhody.
Protože v infikovaných populacích lze nalézt velkou rozmanitost druhů helmintů, bude žádoucí vyvinout vakcínu se širokým spektrem profylaktické aktivity. V současnosti se stalo nezvyklou vyvolání silné ochranné imunity hostitele následkem infekce helmintem. Dlouhodobé zkušenosti společného vývoje, které tito paraziti mají se svými hostiteli, vedly ke vztahu hostitel - parazit na úrovni přizpůsobení, které vede k chronickým nebo přetrvávajícím stavům na rozdíl od akutních infekcí, které typicky vyvolávají silnou specifickou imunitu. Z těchto důvodů, na rozdíl od případů většiny mikrobiálních chorob zvířat, se pouze několik vakcín stalo dostupnými pro regulaci helmintů a ty, které existují, mají značné nevýhody.
Ze známých metod přípravy helmintických vakcín, inaktivované a živé vakcíny mají nevýhodu v tom, že jsou výrobně náročné a pouze slabě imunogenní a vyvolávají vedlejší účinky, jako je lokalizovaný zánět, alergická odezva a horečka. Navíc oslabená forma použitá ve vakcíně často způsobuje onemocnění obdobné tomu, která způsobuje viruletní (divoká) forma parazita. Dále makromolekulární proteinové nosiče používané v těchto vakcínách způsobují řadu imunopatologických vedlejších účinků ve vakcínovém organismu.
Jiná vhodná skupina vakcín zahrnuje antigeny připravované metodami genetického inženýrství. Až dosud jsou také slabě imunogenní.
Po souhrnu dostupné typy vakcín jsou obecně neúčinné a poskytují úzkou specifítu, neboť jsou zaměřeny vůči jednotlivému parazitu.
Dosavadní stav techniky
Podrobný popis helmintů, v němž mají významnou úlohu jejich životní cykly spojené s migrací ve tkáních, a současně diskuse patologických jevů, které způsobují, je uveden například
-1 CZ 296577 B6 v E. J. Soulsby, Helminth, Arthropods and Protozoa of Domesticad Animals, 7. vydání, Lea and
Fibiger, Filadelfie (1982) a v G. M. Urquhart, „Veterinary Parasitology“, Longman Scientific and
Technical, Spojené království (1987).
Všichni paraziti vyvolávají imunitní odezvy, ale z mnoha příčin jsou schopni být pohyblivým a někdy neviditelným cílem pro hostitelovu imunitní odezvu, a to takovým způsobem, že normální regulační mechanismy selhávají a namísto imunity často dochází k imunologickému poškození. To naopak často vede hostitele k vyřazení jeho neúčinné a často kontraproduktivní imunitní odezvy, což vyústí ve hluboké patologické změny a kpotlačení imunity.
Strukturální a antigenová různorodost parazitických helmintů se odráží v rozmanitosti specifických imunitních odezev, které vyvolávají. Parazitičtí helminti často obcházejí imunitní systém maskováním a šířením svých povrchových antigenů a změnami svých antigenů v průběhu svého pobytu v hostitelských obratlovcích. Tato schopnost maskování, šíření a měnění povrchových antigenů je prvotní příčinou potíží dosud ověřených při přípravě účinných vakcín proti helmintické infekci.
Review moderních vakcín používaných v léčbě parazitických chorob je uvedeno v J. H. L. Playfair. a spol., The Lancet, 335 (1990): 1263-1266, zatímco mnohem obecnější diskusi podstaty imunologické odezvy hostitelů k parazitickým helmintům lze nalézt v článku autorů S. Lloyd a E. a J. L. Soulsby a „Parasitology in Focus: Facts and Trends“, Ed. H. Mehlhom, Springer-Verlag (1988), str. 619-650. Jak uvádí Playfair a spol. v review a jak již bylo zmíněno výše, protože stávající regulační opatření vůči helmintům jsou nákladná a obtížně proveditelná v širokém měřítku, existuje značná potřeba vakcín schopných snížit intenzitu a rozšíření infekce helminty v populacích hostitelů.
Před předloženým vynálezem se považovalo za nepravděpodobné, že jediný samotný antigen může poskytnout postačující ochranu vůči širokému rozmezí helmintických infekcí, neboť se vycházelo z výše uvedených potíží provázejících přípravu účinných antihelmintických vakcín, dokonce proti specifickým druhům. Celkový přehled lékařských a vědeckých problémů spojený s helminty uvádí A.A. F. Mahmoud, Science 246 (1989): 1015-1021. (Dále viz také přípěvky „Parasites, Escape from Immunity“ D. J. Mclaren, a „Parasites, Immunity to“ F.E.G. Cox v Encyclopedia of Immunology, eds. I.M. Roitt a P.J. Delves, Academie Press, 1992.)
Podstata vynálezu
Podle předloženého vynálezu je polymer (dále označovaný jako „synpol“) kopolymerem ethylenpiperazn N-oxidu a N-(karboxymetyl)ethylenpiperazinia. Tento polymer může sloužit jako imunostimulační činidlo, adjuvans nebo nosič. Může se kombinovat nebo konjugovat s antigenem a taková kombinace nebo konjugát se může použít pro vakcínovou směs. Například se může polymer kovalentně vázat na hyaluronidázu pro použití k ochraně obratlovců vůči infekci helminty, jak je podrobněji popsáno v EP-B-0789586.
Přehled obrázků na výkresech
Obr. 1 ukazuje obecný vzorec synpolu.
Obr. 2 ukazuje strukturní vzorec synpolu, který je připraven, jak je uvedeno v příkladu 1.
Obr. 3 ukazuje strukturní vzorec synpolu, který je připraven, jak je uvedeno v příkladu 2.
Výhodné provedení „synpolu“ je kopolymer ethylenpiperazin N-oxidu a N-(karboxymethyl)ethylenpiperazinium bromidu, je ukázáno vzorcem na Obr. 1.
-2CZ 296577 B6
Synpol, na rozdíl od jiných nosičů a adjuvans, je neimunogenní. Předpokládá se, že synpol nemá poznatelné antigenové určení a souhlasně nevyvolává imunitní odezvu a takto se vyhýbá nežádoucím vedlejším účinkům pozorovaných u většiny jiných pomocných látek nebo nosičů používaných při přípravě vakcín.
K rozlišení jednoho druhu synpolu od druhého vhodným způsobem, je termín „synpol“ používán v kombinaci a následován hodnotami pro dříve uvedená písmena „n“, „q“, „z“ a „m“. Například ethylenpiperazin N-oxid a N-acetylethylenpiperazinium bromid s n = 1000, q = 0,35, z = 0,60, m = 0,05 je uváděn jako „synpol 1000-35/60“.
Příklad specifického druhu kopolymeru synpol použitého úspěšně jako imunostimulačního nosiče v provedení vakcíny podle předloženého vynálezu bude vztahovat k tomuto místu jako „synpol 1000-20/50“. Synpol s molekulovou hmotností přinejmenším asi 15 kDa nebo více je výhodnější při uplatňování tohoto vynálezu, přičemž Synpol s molekulovou hmotností vyšší než přinejmenším asi 30 kDa je zvláště výhodný.
Sloučenina, která je předmětem předloženého vynálezu může být připravena jakýmkoliv vhodným způsobem, který chemicky naváže hyaluronidázu na imunostimulační nosič, například kovalentním navázáním hyaluronidázy na imunostimulační nosič. Taková kovalentní vazba může být vytvořena přímo mezi reaktivními skupinami hyaluronidázy a imunostimulačního nosiče nebo může být vytvořena jednou nebo více spojujícími skupinami. Jak bude uvedeno v příkladech zde zařazených dále, výhodný způsob přípravy reakčního produktu hyaluronidázy a výhodného imunostimulačního nosiče, který je předmětem předloženého vynálezu a kterým je synpol, zahrnuje použití azidového způsobu. Tento způsob zahrnuje přeměnu synpolu ve formě kyseliny nebo esteru na hydrazid za použití hydrazinu a tento poté zkombinovat shyaluronidázou za podmínek, která poskytují reakční produkt, v němž je hyaluronidáza kovalentně vázána na synpol. Alternativně, jak je rovněž uvedeno v následujících příkladech, jiný výhodný způsob přípravy reakčního produktu hyaluronidázy a synpolu, zahrnuje tvorbu etheru sukcinimidu se synpolem. Ether sukcinimidu je pak spojen s hyaluronidázou za podmínek, kdy vzniká sloučenina použitelná pro použití dané předmětem předloženého vynálezu.
Je předpokládáno, že sloučenina, která je předmětem předloženého vynálezu, bude nejšířeji používána k ochraně obratlovců proti infekci helminty. Pro tento účel je výhodné, že produkt reakce hyaluronidázy a imunostimulačního nosiče je použitelná ve formě vakcíny. Zde používaný termín „vakcína“ označuje přípravek, který obsahuje sloučeninu, která je předmětem předloženého vynálezu a která je ve formě vhodné k podávání obratlovcům. Typicky vakcína zahrnuje běžné solné nebo pufrované prostředí vodného roztoku, v němž je suspendována nebo rozpuštěna sloučenina, která je předmětem předloženého vynálezu. V této formě může být sloučenina, která je předmětem předloženého vynálezu, používána výhodně k prevenci, zlepšení stavu nebo jinému působení při infekci helminty.
Ve výhodné podobě vakcína, která je předmětem předloženého vynálezu, dodatečně zahrnuje adjuvans, který může být přítomen buď v menším, nebo ve větším poměru vztaženém na sloučeninu, která je předmětem předloženého vynálezu. Termín „adjuvans“, tak, jak je zde používán, se vztahuje k nespecifickému stimulátoru imunitní odezvy, který je-li kombinován s vakcínou, která je předmětem předloženého vynálezu, poskytuje zvýšenou imunitní odezvu. Může být použita řada adjuvantů. Příklady zahrnují úplný nebo neúplný Freundsův adjuvans, hydroxid hlinitý a modifikovaný muramyldipeptid. Ve výhodném provedení, která je předmětem předloženého vynálezu, je synpol používán jako adjuvans ve směsi se sloučeninou, která je předmětem předloženého vynálezu.
Jak již zde dříve bylo uvedeno, sloučeniny, které jsou předmětem předloženého vynálezu jsou určeny k použití k ochraně jednotlivých obratlovců vůči infekci helminty. Příklady obratlovců, kteří mohou být léčeni v souladu s předloženým vynálezem, jsou člověk a různá demostikovaná zvířata zahrnující například hovězí dobytek, ovce, prasata, psy, koně, kočky a kozy, stejně jako
-3 CZ 296577 B6 jiné lichokopytníky, buvoly, velbloudy a drůbež. Zvláště je očekáváno, že sloučeniny, které jsou předmětem předloženého vynálezu, budou účinné v prevenci a léčení infekcí zvířat způsobených parazitickými helminty, která jsou napadena druhy helmintů, které používají hyaluronidázu.
Sloučenina, která je předmětem předloženého vynálezu, může být podávána infůzně vnitrosvalovým, podkožním nebo nitrokožních podávání. Výhodný způsob podávání pro určitý organismus může být nalezen v odkazech k sekci Příklady této přihlášky. Výhodné rozmezí podávané dávky se může měnit podle léčeného zvířete a převládajících druhů helmintů v daném prostředí, ale obecně byla nalezena účinnou dávku vakcíny asi 0,05 mg proteinu/kg váhy zvířete. Další vodítko z hlediska rozmezí dávky může být nalezeno odkazem na sekci Příklady, zde dále uvedmou.
Bylo nalezeno, že mírné podmínky, které mohou být výhodně použity pro kovalentní navázání hyaluronidázy na synpol neovlivňují antigenové epitopy hyaluronidázy významnějším způsobem; souhlasně tomu je získána vysoce imunogenní sloučenina. Imunologické stanovení za použití enzymů navázaných na pevnou fázi („solid-phase enzyme-linked immunoassays (ELISA)“) prokázalo, že antihyaluronidázové protilátky mohou rozpoznat epitopy hyaluronidázy, které byly konjugovány se synpolem, a prokázala, že tyto epitopy byly zachovány.
Bylo rovněž zjištěno, že je zachováno enzymatické aktivní centrum hyaluronidázy po kovalentním navázání na synpol. Zvláště bylo pozorováno, že rychlost odbourání substrátu samotnou hyaluronidázou je v podstatě stejná s rychlostí odbourání substrátu hyaluronidázou, která byla kovalentně navázána na synpol. Navíc, je-li hyaluronidáza navázána na synpol, je podstatně stabilnější než přírodní enzym. Toto bylo prokázáno enzymatickými inaktivačními testy hyaluronidázy včetně pokusů s termostabilitou a odolností vůči heparinem zprostředkované inhibici.
Zvýšená stabilita hyaluronidázy zajištěná její vazbou na synpol poskytuje široké spektrum jiných užitných vlastností sloučenině, která je předmětem tohoto vynálezu. Navíc kjejí schopnosti zabraňovat infekci helminty, je zamýšleno, že sloučenina, která je předmětem předloženého vynálezu, může být užita k vyvolání imunitní odezvy vůči jiným patogenům nebo organismům, například takovým patogenům nebo organismům, které používají hyaluronidázy k trávení tkání, jakými jsou například určité bakterie a jejich toxiny. Dále sloučenina, která je předmětem předloženého vynálezu může být použita k zabránění účinku nebo k lokalizaci rozšíření jedů obsahujících hyaluronidázu (jako jsou včelí a hadí jedy).
Předložený vynález rovněž zahrnuje ve svém rozsahu způsoby použití hyaluronidázy kovalentně vázané na synpol k léčení fíbrózy u obratlovců podáváním přípravků obsahujících hyaluronidázu kovalentně navázanou na synpol.
Dále sloučenina, která je předmětem předloženého vynálezu, může být použita v kosmetice jako aktivní přísada v krémech nebo jiných produktech používaných k vyhlazení a zjemnění kůže. V tomto případě je třeba poznamenat, že materiály obsahující lidské sperma byly používány jako prostředky péče o kůži v Rusku. Ovšem použití takových produktů je značně omezeno vzhledem k nestabilnosti hyaluronidázy. Protože sloučenina, která je předmětem předloženého vynálezu je stabilní, rozpustná a netoxická, má bezprostřední použití v této oblasti a opravdu byly provedeny výzkumy jejího použití v této souvislosti. Předložený vynález rovněž zahrnuje ve svém rozsahu použití hyaluronidázy kovalentně navázané na synpol jako rozšiřujícího faktoru ke zvýšení účinnosti léčebných postupů. Může být rovněž použita ke zlepšení difuse a urychlení absorpce v léčebném použití, například jako přísada antibiotických roztoků pro léčení mastitidy krav ve veterinárním použití. V minulosti v této souvislosti byla používána nestabilizovaná hyaluronidáza (srovnej například, The Měrek Index, 8. vydání) a souhlasně stabilizovaná forma hyaluronidázy poskytovaná předloženým vynálezem má předpoklad poskytnut významné výhody proti přípravkům, které používají přírodní formu hyaluronidázy.
Předložený vynález rovněž zahrnuje ve svém rozsahu použití hyaluronidázy kovalentně navázané na synpol v následujících terapeutických souvislostech, kde již byly ukázány užitečné účinky
-4CZ 296577 B6 volné (nestabilizované) hyaluronidázy: infarkt myokardu (porovnej E.J. Flint a spol., The Lancet, 17. březen (1982) str. 871-874 a také D. Maclean a spol., Science, vol. 194, str. 199-200 (1976)); zlepšení funkce sítnice (srovnej B.S. Winkler a spol., Arch. Opthalmol. 103 (1985) str. 1743-1746); v kombinaci s cytostatiky v léčbě rakovinných nádorů (G. Baumgartner a spol., J. Exp. Clin. Cancer. Res. 4 (1985) str. 3, a W. Scheithauer a spol., Anticancer Res. vol. 8, str. 391-395 (1988)); v léčbě tuberkulosní páteční arachnoitidy (srovnej M. Gourie-Devi a spol., J. Neurol. Sci., vo. 102, str. 105-111 (1991)); pro léčbu opouzdřených mozkových abscesů u vysoce ohrožených pacientů (srovnej A. Pasagolu, Acta Neurochir., vol. 100, str. 79-83 (1989)). Navíc byla hyaluronidáza například použita in vitro pro depolymeraci hyaluronové kyseliny v bezbuněčných systémech nebo pro stimulaci syntetázy hyaluronové kyseliny například v postupech kultivace buněk (L.H. Philipson a spol., Biochemistry 24 (1985) str. 7899-7906). Předložený vynález rovněž zahrnuje ve svém rozsahu použití sloučeniny zahrnující hyaluronidázu kovalentně navázanou na synpol v těchto souvislostech.
Dále vynález zahrnuje ve svém rozsahu synpol-antigen konjugované vakcíny, v nichž antigen zahrnuje proteiny obdobné hyaluronidáze, například vakcíny obsahující jako antigen jiný enzym používaný patogeny k trávení/odbourávání tkání (včetně kolagenáz a proteináz jiných specifit).
Vynález rovněž zahrnuje ve svém rozsahu použití synpolu svázaného s alergenem za účelem odstranění alergické reakce mezi hostitelem a daným alergenem. Rozsáhlý výzkum ukázal, že podávání takových antigen-synpol protilátkového izotypu vůči dotyčnému alergenu. Tyto normální nepatogenní izotypy soutěží s dříve existujícími alergenickými izotypy (srovnej IgE imunoglobuliny) a specificky odstraňují alergii. Tento způsob specifické desenzibilizace byl jasně prokázán a je nyní v prvním stadiu klinických zkoušek.
Vynález rovněž zahrnuje ve svém rozsahu použití synpolu navázaného na následující antigeny ke zvýšení imunogenicity navázaných antigenů a tak posloužit k vyvolání indukce účinné profylaktické imunitní odezvy: beta-podjednotka toxinu cholery, chematoglutinin z obalu virů chřipky typů A a B, p. 90 toxin z B. anthracis, Vi antigen ze salmonely, purinové proteiny z buněčných stěn E. coli a salmonel, syntetické fragmenty gpl60 env-proteinu HIV-I, F(ab)2 fragmenty imunoglobulinů (za účelem vyvolání anti-idiotypické odezvy).
Příklady provedení vynálezu
První dva příklady ilustrují přípravu dvou druhů synpolu identifikovaných v příkladech.
Příklad 1 Příprava Synpolu 1000-20/50
Pro syntézu kopolymerů ethylenpiperazin N-oxidu a N-acetylethylenpiperazinium bromidu byl použit třístupňový postup.
(1) V prvním kroku byl připraven výchozí polymer 1,4-ethylenpiperazin. Za tímto účelem byla provedena polymerace s živým řetězem l,4-diazabicyklo[2.2.2]oktanu podle následujícího postupu.
g předem přesublimovaného monomeru a 0,05 g bromidu amonného bylo zataveno do lOml skleněné ampule. Vývěvou byla ampule evakuována na zbytkový tlak 0,67 Pa. Ampule byla zahřívána 25 h v termostatu na 200 °C. Výtěžek polymeru byl asi 100 %, molekulová hmotnost 120 000 (zjištěno rozptylem laserových paprsků pod nízkým úhlem, „LALLS-low angle laser light scattering).
(2) Příprava N-oxidu poly-l,4-ethylenpiperazinu byla provedena ve druhém stupni.
-5CZ 296577 B6 g poly-l,4-ethylenpiperazinu (mol. hmotnost 120 000) bylo rozpuštěno v 250 ml 1% roztoku kyseliny octové. Poté byly přidány 4 ml 30% H2O2 a oxidace probíhala 36 hodin. Po ultrafiltraci a lyofilizaci byl získán N-oxid poly-l,4-ethylenpiperazinu (mol. hmotnost 110 00, z = 0,5n).
(3) Ve třetím kroku byla provedena alkylace uvedeného poly-N-oxidu.
Poly-l,4-ethylenpiperazin N-oxid připravený ve druhém stupni byl rozpuštěn ve 125 ml methanolu a přidáno 16,5 g kyseliny bromoctové. Alkylace probíhala 10 h při 25 °C. Rozpouštědlo bylo odpařeno ve vakuu a zbytek rozpuštěn ve vodě, dialyzován proti vodě 24 h a vysušen lyofilizací. Závěrem byl získán kopolymer ethylenpiperazin N-oxidu a N-acetylenhylenpiperazinium bromidu následujícího vzorce (viz Obr. 2).
Výtěžek byl 95 %. Oxidační poměr byl určen chromometrickou (nebo titanometrickou titrací) metodou a z poměru integrálních intenzit pásů v PMR-spektrum v oblasti 2,5-4,5 m.d. Chromometrické nebo titanometrické titrační metody se vztahují k metodě kvantitativního stanovení Noxidových skupin redukovaných solemi dvojmocného chrómu nebo trojmocného titanu (Brooks, R.T. a P.D. Stemglanz, Ani. Chem., 1959, v. 31, N4, str. 561-565). Oxidační číslo činilo z=0,5n. Alkylační poměr byl určen z IR-spekter (pás 1735 cm) a PMR-spekter (2,5-4,5 m.d. oblast) a obnášel q = 0,2n.
Příklad 2 Příprava Synpolu 200-35/65
V třístupňovém postupu, obdobném postupu v Příkladu 1, byl připraven kopolymer ethylenpiperazin N-oxidu a N-acetylenhylenpiperazinium bromidu s mol. hmotností 25 000 (n = 200, q = 0,35n, z = 0,65n).
(1) V prvém stupni bylo 10 g předem sublimovaného monomeru a 0,11 g bromidu amonného zataveno do 10 ml skleněné ampule. Ampule byla evakuována vývěvou na vakuum 0,67 Pa a zahřívána 15 h na 200 °C. Výtěžek poly-1,4-ethylenpiperazinu byl asi 100%, molekulová hmotnost 80 000 (stanoveno LALLS).
(2) V druhém stupni byla následujícím postupem provedena N-oxidace poly-1,4-ethylenpiperazinu.
5g poly-1,4-ethylenpiperazinu připraveného v prvém stupni bylo rozpuštěno ve 250 ml 1% roztoku kyseliny octové. Poté bylo přidáno 4,6 ml 30% H2O2 při 2 až 4 °C za mírného míchání. Oxidace trvala 48 h. Po čištění ultrafiltraci a lyofilizaci byl získán N-oxid poly-1,4-ethylenpiprazinu (mol. hmotnost 50 000, z = 0,65n).
(3) Poly-1,4-ethylenpiperazin v množství připraveném v předcházejícím stupni byl rozpuštěn ve 125 ml methanolu a přidáno 16,5 g kyseliny bromoctové. Alkylační reakce byla prováděna 24 h při 30 °C. Rozpouštědlo bylo odpařeno ve vakuu a vzniklý odparek byl rozpuštěn ve vodě, dialyzován 24 h proti vodě a lyofilizován. Byl získán kopolymer ethylenpiperazin N-oxidu a N-acetylethylenpiperazinium bromidu s následujícím vzorcem (viz Obr. 3).
Výtěžek byl 95 %. Oxidační a alkylační poměry, oba stanovené jako v Příkladu 1, byly z = 0,65n a q = 0,3 5n respektivně.
Konjugace synpolu na hyaluronidázu a vlastnosti a použití konjugátů jsou popsány ve WO-A-95/07100.
Claims (13)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Polymer, který je kopolymerem ethylenpiperazin-N-oxidu a N-(karboxymethyl)ethylenpiperazinia.
- 2. Polymer vzorceCOOHKDE q = (0,2 - 0,35)n z = (0,4 - 0,65)n m = (0 - 0,4)n15 n = 200-2000
- 3. Polymer vzorceBr •l· r~\ ~N N—CH? — p__/CH?ICOOH ch20,5 /—\N N — CH2~CH20,3 tOOO-8CZ 296577 B6
- 4. Polymer vzorce0,65COOHBr
- 5. Polymer podle kteréhokoliv z nároků 1 až 4, mající molekulovou hmotnost alespoň 15 kD.
- 6. Polymer podle nároku 5, mající molekulovou hmotnost alespoň 30 kD.
- 7. Polymer podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 pro terapeutické použití jako imunostimulační činidlo.
- 8. Polymer podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 pro terapeutické použití jako imunostimulační adjuvans.
- 9. Polymer podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6 pro terapeutické použití jako imunostimulační nosič.
- 10. Kombinace antigenu a polymeru podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6.
- 11. Konjugát antigenu a polymeru podle kteréhokoliv z nároků 1 až 6.
- 12. Prostředek ve formě vakcíny, vyznačující se tím, že obsahuje kombinaci podle nároku 10 nebo konjugát podle nároku 11.
- 13. Použití polymeru, kombinace, konjugátu nebo vakcíny podle kteréhokoliv z nároků 1 až 12 pro výrobu léčiva pro použití ke stimulaci imunitní odpovědi.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/120,001 US5503830A (en) | 1993-09-10 | 1993-09-10 | Compounds having immunostimulating activity and methods of use thereof |
| US20748694A | 1994-03-07 | 1994-03-07 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ73796A3 CZ73796A3 (en) | 1996-08-14 |
| CZ296577B6 true CZ296577B6 (cs) | 2006-04-12 |
Family
ID=26817942
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ0073796A CZ296577B6 (cs) | 1993-09-10 | 1994-09-12 | Polymer a jeho pouzití ke stimulaci imunitní odpovedi |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5811100A (cs) |
| EP (2) | EP0789586B1 (cs) |
| JP (1) | JP3138476B2 (cs) |
| KR (2) | KR100270980B1 (cs) |
| CN (1) | CN1116076C (cs) |
| AT (2) | ATE202710T1 (cs) |
| AU (1) | AU696748B2 (cs) |
| BR (1) | BR9407533A (cs) |
| CA (1) | CA2171462C (cs) |
| CZ (1) | CZ296577B6 (cs) |
| DE (2) | DE69427653T2 (cs) |
| DK (2) | DK1108738T3 (cs) |
| ES (2) | ES2160129T3 (cs) |
| GR (1) | GR3036780T3 (cs) |
| HU (1) | HU222189B1 (cs) |
| NZ (1) | NZ274343A (cs) |
| PT (2) | PT1108738E (cs) |
| SI (1) | SI1108738T1 (cs) |
| WO (1) | WO1995007100A1 (cs) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2001046127A1 (fr) * | 1999-12-22 | 2001-06-28 | Om Pharma | Pseudodipeptides acyles porteurs d'un bras auxiliaire fonctionnalise |
| KR101162241B1 (ko) * | 2009-12-30 | 2012-07-04 | 박정자 | 양식어류 기생충 구충용 조성물 |
| RU2616528C1 (ru) * | 2015-12-04 | 2017-04-17 | ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ "НПО Петровакс Фарм" | Способ получения конъюгата гиалуронидазы с производными полиэтиленпиперазина и применение полученного конъюгата |
| RU2737271C2 (ru) * | 2018-06-27 | 2020-11-26 | ОБЩЕСТВО С ОГРАНИЧЕННОЙ ОТВЕТСТВЕННОСТЬЮ "НПО Петровакс Фарм" | Сополимеры ди-N-оксидов поли-1,4-этиленпиперазина и способы их получения |
| EP4261243A1 (en) * | 2020-10-14 | 2023-10-18 | Limited Liability Company "NPO Petrovax Pharm" | Method for synthesizing poly-1,4-ethylenepiperazine and a copolymer of n-oxidized 1,4-ethylenepiperazine and (n-carboxymethyl)-1,4-ethylenepiperazinium bromide and their derivatives |
Family Cites Families (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3390148A (en) * | 1965-07-28 | 1968-06-25 | Pfizer & Co C | Novel thiazine and thiazoline anthelmintic agents |
| US3579510A (en) * | 1967-08-30 | 1971-05-18 | Pfizer | 3-(hydroxy-phenyl) substituted amidines and derivatives thereof as anthelmintic agents |
| US3896227A (en) * | 1971-08-04 | 1975-07-22 | Pfizer | 1-(3-hydroxystyryl pyridinium salts and their derivatives as whipworm control agents |
| US5503830A (en) * | 1993-09-10 | 1996-04-02 | Petrovax, L.L.C. | Compounds having immunostimulating activity and methods of use thereof |
-
1994
- 1994-09-12 PT PT00125257T patent/PT1108738E/pt unknown
- 1994-09-12 DE DE69427653T patent/DE69427653T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-12 PT PT94929200T patent/PT789586E/pt unknown
- 1994-09-12 AT AT94929200T patent/ATE202710T1/de active
- 1994-09-12 JP JP07508836A patent/JP3138476B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1994-09-12 NZ NZ27434394A patent/NZ274343A/xx not_active IP Right Cessation
- 1994-09-12 DE DE69432493T patent/DE69432493T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-12 WO PCT/US1994/010346 patent/WO1995007100A1/en active IP Right Grant
- 1994-09-12 EP EP94929200A patent/EP0789586B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-12 HU HU9600591A patent/HU222189B1/hu active IP Right Grant
- 1994-09-12 ES ES94929200T patent/ES2160129T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-12 CZ CZ0073796A patent/CZ296577B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1994-09-12 ES ES00125257T patent/ES2194666T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-12 CN CN94193357A patent/CN1116076C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1994-09-12 EP EP00125257A patent/EP1108738B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-09-12 AT AT00125257T patent/ATE236948T1/de active
- 1994-09-12 DK DK00125257T patent/DK1108738T3/da active
- 1994-09-12 KR KR1019960701239A patent/KR100270980B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1994-09-12 CA CA002171462A patent/CA2171462C/en not_active Expired - Fee Related
- 1994-09-12 DK DK94929200T patent/DK0789586T3/da active
- 1994-09-12 AU AU78347/94A patent/AU696748B2/en not_active Ceased
- 1994-09-12 BR BR9407533A patent/BR9407533A/pt not_active Application Discontinuation
- 1994-09-12 SI SI9430448T patent/SI1108738T1/xx unknown
-
1996
- 1996-05-15 US US08/655,282 patent/US5811100A/en not_active Expired - Lifetime
-
2000
- 2000-06-13 KR KR1020000032523A patent/KR100296970B1/ko not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-10-03 GR GR20010401641T patent/GR3036780T3/el not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5980912A (en) | Chitosan induced immunopotentiation | |
| JPH06500772A (ja) | 改良されたワクチン組成物 | |
| JPH03502691A (ja) | 接合体ワクチンの担体分子としてのｔ細胞のエピトープ | |
| CA2111189A1 (en) | Oral treatment of helicobacter infection | |
| US5912000A (en) | Chitosan induced immunopotentiation | |
| EP0789590B1 (en) | Chitosan induced immunopotentiation | |
| CN104507496A (zh) | 包含与crm197载体蛋白偶联的hiv gp41肽的免疫原性化合物 | |
| CZ296577B6 (cs) | Polymer a jeho pouzití ke stimulaci imunitní odpovedi | |
| US4430260A (en) | Penicillin-polyvinyl alcohol conjugate and process of preparation | |
| US4296097A (en) | Suppression of reaginic antibodies to drugs employing polyvinyl alcohol as carrier therefor | |
| US4415552A (en) | Composition for establishing immunological tolerance | |
| US5208022A (en) | Non-malignant cells coupled to adjuvants and their use in a method to induce anti-tumor immunity | |
| AU731383B2 (en) | Compounds for the prevention and treatment of helminth infections | |
| US5503830A (en) | Compounds having immunostimulating activity and methods of use thereof | |
| AU618946B2 (en) | Partial cationization of protein-containing antigens and method of immunization and desensitization | |
| CA2255867C (en) | Chitosan induced immunopotentiation | |
| RU2021817C1 (ru) | Способ получения вакцины против холеры | |
| EP0646377A1 (en) | Albumin-conjugated tumour cell-free extracts, antigenic compositions comprising the same, related antibodies, and uses thereof | |
| RU2226106C2 (ru) | Способ специфической профилактики радиационных поражений организма и способ получения препарата для профилактики радиационных поражений организма | |
| RU2204412C2 (ru) | Вакцина против инфекций, вызываемых условно-патогенными возбудителями | |
| JPS6089432A (ja) | 所定の病原性因子に特有な抗原部位を有するハプテンまたはそのオリゴマ−を含有する、前記病原性因子に対して免疫的に無垢ではない被検者に接種するワクチン組成物 | |
| AU771525B2 (en) | Chitosan induced immunopotentiation | |
| GB2144129A (en) | Antigens as immunostimulant adjuvants | |
| JP2000504350A (ja) | キトサン誘導性免疫強化 | |
| Weinberg | Effect of cyanogen bromide digested histocompatibility antigens on graft survival in mice |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20080912 |