CZ291233B6

CZ291233B6 - Léčivo proti nervovému inzultu

Info

Publication number: CZ291233B6
Application number: CZ19972336A
Authority: CZ
Inventors: Marcus Keep; Eskil Elmér; Hiroyuki Uchino; Merab Kokaia
Original assignee: Maas Biolab, Llc.
Priority date: 1995-01-20
Filing date: 1996-01-18
Publication date: 2003-01-15
Also published as: ES2176432T3; ATE218360T1; EP0813420A1; WO1996022104A1; AP734A; CA2210241C; CZ233697A3; RU2194527C2; JP3643380B2; SE9500209L; EP0813420B1; JPH11504617A; MX9706362A; SE9500209D0; CN1178469A; US5972924A; CA2210241A1; CN1123359C; AU712974B2; NZ300699A

Abstract

Pou it cyklosporin pro v²robu l iva ur en ho pro o et°en nervov ho inzultu u pacienta, jeho hematoencefalick bari ra byla otev°ena nebo u kter ho jsou cyklosporiny schopn p°ekonat hematoencefalickou bari ru.\

Description

Oblast techniky vynález se týká léčiva určeného pro ošetření nerovového inzultu.

Dosavadní stav techniky

Centrální nervová tkáň a v menší míře i periferní nervová tkáň se velmi špatně obnovuje. Poškození této nervové tkáně tedy způsobuje rozsáhlou trvalou invaliditu a mnohdy je i příčinou smrti. Poškození uvedené nen ové tkáně se projevuje různými způsoby, například jako ischemie při cerebrovaskulámích příhodách, cerebrálních oběhových poruchách a při absolutní a relativní hypoxii v důsledku různých forem poranění. V oblastech fokální ischemie nebo poškození je jádro výraznějšího poškození obklopeno perifokální oblastí méně závažného poškození. Neurony v této méně poškozené perifokální oblasti mohou po určitou dobu udržovat homeostázi a pravděpodobnost jejich záchrany pomocí farmakologických činidel je vyšší.

Současné léčení nervových poškození je prováděno ve značně omezeném rozsahu. Klinicky jsou v období po nervovém inzultu. například po mrtvici nebo po úrazu používána různá podpůrná opatření. Je pravda, že některá léčiva byla použita s různými dílčími úspěchy, avšak žádné z nich nepředstavuje dokonale účinné léčivo pro ochranu nervové funkce, která je v případě nervového inzultu žádoucí. Pro klinické ošetření angiospasmu po subrachnoidální hemorragii se používá Nimodipin, což je blokátor vápníkových kanálků, při stlačení míchy se používají vysoké dávky steroidu Methylprednisolonu. Klinickým testům, prověřujícím schopnost redukovat poškození způsobené mrtvicí, se podrobit také Tirilazad, který je 21 -aminosteroidem, vázaným na činidlo vázající volné radikály. V publikaci Spinnewyn B. a kol., „Beneficial role of Ginkolides Paf-Acether Antagonists and Ciclosporin on Cerebral Ischemia“, Soc. Neurosci. Abstr. 13(3), 1987 je okrajově zmíněno použití cyklosporinů pro ošetření nervového ischemického inzultu. Údaje týkající se cyklosporinů jsou neprůkazné. Cyklosporinový protokol je nepřijatelně zestručněn, není zde žádný histologický důkaz o změnách přežití neuronů a enzymatický test poskytuje malé nebo vůbec žádné rozdíly ve výsledcích získaných pro kontrolní subjekty a subjekty ošetřené cyklosporiny. Rovněž enzymatická data ukazují pouze nepatrný rozdíl mezi žádným ošetřením a ošetřením cyklosporiny. Není zde žádná korelace mezi enzymovými změnami a protekcí neuronů, neboť zde v případě cyklosporinů nebylo provedeno žádné mikroskopické zkoumání neuronální smrti nebo přežití. Z obsahu uvedené publikace je zřejmé, že samotné cyklosporiny nepředstavují látky, které jsou schopné účinné protekce neuronů při ošetření nervového inzultu.

Nyní bylo nově zjištěno, že neuroprotekční účinnost cyklosporinů lze zvýšit na požadovanou míru v případě, že se cyklosporiny aplikují v kombinací s otevřením hematoencefalické bariéry. Vzhledem ktomu, že cyklosporiny nevstupují do mozku, pokud není hematoencefalická bariéra otevřena, umožňuje uvedená kombinace aplikace cyklosporinů s otevřením hematoencefalické bariéry uplatnit jejich dříve neznámý přímý protekční účinek na mozek a nervy.

Podstata vynálezu

Předmětem vynálezu je použití cyklosporinů pro výrobu léčiva určeného pro ošetření nervového inzultu u pacienta, jehož hematoencefalická bariéra byla otevřena nebo u kterého jsou cyklosporiny schopné překonat hematoencefalickou bariéru.

Předmětem vynálezu je rovněž použití cyklosporinu A pro výrobu léčiva určeného pro ošetření nervového inzultu u pacienta, jehož hematoencefalická bariéra byla otevřena nebo u kterého jsou cyklosporiny schopné překonat hematoencefalickou bariéru.

Obecně známým zástupcem cyklosporinů je cyklosporin A, který má následující vzorec:

- MeBmt=a-Abu-Sar-MeLeu-Val-MeLeu-Ala- (D) Ala-MeLeu-MeLeu-MeVal-

23 45678 9 10 11

Rovněž je známo, že cyklosporin A je imunosupresivní účinnou látkou. Výše zmíněné léčivo je rovněž popsáno v patentu US 4 117 118 a nespočtu dalších patentů, které se týkají jeho výroby, formulace a imunosupresivních vlastností.

Cyklosporin A je produktem houby Tolypocladium Inflatum Gams. jedná se o cyklickou polyaminokyselinovou molekulu, obsahující 11 aminokyselin. Jedna z aminokyselin je pro cyklosporin A unikátní. Touto kyselinou je β-hydroxyaminokyselina, označovaná jako butenylmethyl-threonin (MeBmt), mající molekulovou hmotnost 1202,6 a chemický vzorec CjóHiiiNnOu.

Tato molekula je vysoce lipofilní a prakticky nerozpustná ve vodě. Biologická dostupnost po orálním podání se pohybuje mezi 8 až 60 % částečně v závislosti na proudění žluči. Účinná složka je absorbována zejména v tenkém střevě. Přibližně až 58 % účinné složky se transportuje v krvi uvnitř červených krvinek a zbývajících přibližně 10 až 20% v leukocytech, a 33% navázaných na plasmové proteiny. V plasmě se cyklosporin A váže na vy soce hustotní lipoproteiny a nízkohustotní lipoproteiny a velmi nízkohustotní lipoproteiny a malý podíl na albumin. Velmi malý podíl se vyskytuje v plasmě volně.

t

Účinná složka podléhá extenzivnímu metabolismu, zejména v játrech, pomocí cvtochromového systému P450. Pomocí chemických modifikací, například hydroxylace, demethylace, oxidace a tvorby epoxidů, lze získat přinejmenším alespoň 30 známých metabolitů cyklosporinu A. Existuje celá řada variant cyklosporinu A, lišících se například jedinou aminokyselinou, které mají podobné farmakologické vlastnosti.

V tělech pacientů dochází k enterohepatické cirkulaci, to znamená, že střevní bakterie může metabolizovat účinnou látku spolu s absorpcí dalších metabolitů. 95 % jedné dávky' poskytnuté orálně lze nalézt ve stolici během 95 hodin. Zbývající frakce se vyloučí přes ledviny. Za normálních podmínek neprochází cyklosporin A ani jeho metabolity hematoencefalickou bariérou.

Celá rodina cyklosporinů, všechny deriváty, varianty, varianty aminokyselin, metabolity včetně variant monohydroxylátů a trihydroxylátů, N-demethylátů, aldehydů, karboxylátů, konjugátů, sulfátů, glukuronidů, intromolekulámích cyklizací a variant než cyklické struktury, stejně jako krátkých peptidů a aminokyselin a jejich derivátů a solí, budou dále označovány jako cyklosporiny. Farmakologicky přijatelné formy cyklosporinů budou dále označovány jako léčivo nebo léčiva.

Vynález se týká léčiv z rodiny cyklosporinů a všech známých solí, variant aminokyselin, derivátů, metabolitů a jejich solí a derivátů, určených pro ošetření níže uvedených stavů. Tato léčiva zahrnují cyklosporin A, cyklosporin C, cyklosporin D a cyklosporin G. Tato léčiva zahrnují všechny produkty houby Tolypocladium Inflatum Gams. Mezi známé metabolity cyklosporinu A lze například zahrnout následující metabolity: (podle Cay Hawkovy nomenklatury) AM1, AM9, AMlc, AM4N, AM19, AMlc9, AMlc4N9, AM1A, AM1A4N, AMIAc, AM1AL,

-2CZ 291233 B6

AMlld, AM69, AM4N9, AM14N, AM14N9, AM4N69, AM99N, Dihydro-CsA M17. AMlcGLC, sulfátový konjugát cyklosporinu, unfdl, BHlla, BH15a, B, G, E (a podle Maurerovy nomenklatury) Ml, M2, M3, M4, M5, M6, M7, M8, M9, M10, Mil, M12, M13, M14, M15, M16, M17, M18, M19, M20, M21, M22, M23, M24, M25, M26, MUNDF1 a MeBMT. Některé metabolity cyklosporinu G zahrnují GM1, GM9, GM4N, GMlc, GMlc9 a GM19.

Nerovový systém zahrnuje mnoho struktur, které se skládají z následujících komponent. Těmito komponentami jsou neurony, neutrální podpůrné buňky, podpůrná nervová tkáň, Schwannovy buňky, vaskulatura obsažená uvnitř a nesoucí tyto struktury, centrální nervová soustava, mozek, mozkový kmen, mícha, spojení centrální nervové soustavy s periferní nenovou soustavou, periferní nervová soustava a všechny příbuzné struktury, které jsou zde definovány jako nenová tkáň. ¹

Funkce nervového systému a jeho částí se projevuje ve snímání okolního prostředí, uvědomování si tohoto prostředí, homeostázy na něj a interakce s ním. Funkce nervové soustavy se projevuje například schopností vykonávat běžné aktivity denního života, pracovat, myslet a mluvit. Tyto funkce nervové tkáně jsou zde definovány jako nervová funkce.

Porucha nervové tkáně se může projevovat mnoha způsoby a přichází z mnoha zdrojů s mnoha různými následky. Tyto následky zahrnují například poruchu nervové tkáně a odumření nervové tkáně, poškození mozku a destrukci mozku celého nebo jeho části a výslednou smrt, invaliditu, přičemž neurologický deficit a smrt jsou zde definovány jako nervový inzult.

Nervový inzult může mít celou řadu různých příčin, například ischemii, hypoxii, cerebrovaskulámí příhodu, metabolickou, toxickou nebo neurotoxickou příčinu, úraz, chirurgický zákrok, iatrogenní příčinu, tlak, působení hmoty, krvácení, teplotu, chemickou příčinu, radiaci, vasospasmus, neurodegenerační chorobu, neurodegenerační proces, infekci, epilepsii a jejich sekundární účinky.

Nervová ochrana je zde definována jako účinek, který redukuje, staví nebo zlepšuje nervový inzult a chrání, resuscituje nebo oživuje nervovou tkáň, která trpěla nervovým inzultem.

Neuroprotekční činidlo je zde definováno jako účinná složka nebo léčivo nebo farmakologická kompozice obsahující účinnou dávku léčba pro ošetření nervového inzultu, která bude účinně redukovat, stavět nebo zlepšovat nervový inzult a která bude poskytovat ochranu, resuscitovat nebo obnovovat nervovou tkáň, která trpí nervovým inzultem.

Vynálezem je skutečnost, že cyklosporiny jsou neuroprotekčními činidly.

Vynález se dále týká farmaceutických kompozic obsahujících dávku cyklosporinů léčících nervový inzult, které představují neuroprotekční činidla.

Vynález se rovněž týká farmaceutických kompozic, jak jsou definovány níže, které obsahují dávku účinné látky a která jsou neuroprotekčními činidly.

Cyklosporiny zajišťují nervovou ochranu pomocí mechanizmu ochrany intracelulámí biochemie, formy, periody, kdy dochází ke ztrátě celulámí homeostázy. Cesta od poškození buňky ) k odumření buňky je blokována tímto neuroprotekčním činidlem, takže potom, co buňka projde fyziologickou trhlinou, je tato buňka schopna opět vytvořit rovnovážný stav a namísto odumření opravit poškození. Žádné léčivo neblokuje odumření buňky nervové tkáně tak, jako cyklosporiny. Cyklosporiny blokují bud’ konec cesty vedoucí k odumření buňky, nebo několik rozhodujících sekvenčních kroků nebo paralelní biochemické a organelové cesty, vedoucí k odumření buňky. Tak silný cerebrálněneuroprotekční účinek nebyl doposud zjištěn u žádné z terapeuticky účinných látek, známých z dosavadního stavu techniky.

-3CZ 291233 B6

Vynález je tedy nový a představuje zcela novou aplikaci cyklosporinů. cyklosporiny, jako cyklické peptidy, jsou zcela novou třídou látek, a nepatří do skupiny látek používaných jako neuroprotekční činidla v minulosti. Cyklosporiny jsou neuroprotekčními činidly pro ošetřování cerebrálních poruch a nedostatečností různých původů. Cyklosporiny jsou neuroprotekčními 5 činidly při přijatelných fyziologických a farmakologických dávkách. Cyklosporiny jsou zvláště vhodné pro ošetřování nervových inzultů, způsobených cerebrálně vasulámími poruchami a nedostatečnostmi, hypoxiemi a úrazovými poškozeními mozku, vynález se tyká obecného neuroprotekčního účinku cyklosporinů, za všech podmínek, ohrožujících životnost buněk nervové tkáně.

Předmětem vynálezu je rovněž použití cyklosporinů pro přípravu léčiva a farmaceutické * kompozice, určených pro terapeutické neuroprotekční použití v případech, ve kterých dochází k nervovému inzultu. Tyto případy zahrnují například úrazy (tržné rány, vnitřní poranění hlavy, poškození nitrolebeční hmoty a zvýšení nitrolebečního tlaku, chirurgické a iatrogenní poškození), 15 fyziologické abnormality (například elektrolytické, glukózové, vitamínové, metabolické, homeostatické), jedy (například metabolické, toxiny, neurotoxiny), radiace (včetně akutních a opožděných efektů) a vasospasmy, a sekundární a opožděné účinky. Specifické systémy, na které se neuroprotekčními činidly působí, zahrnují vizuální a optický, sluchový, vestibulámí a čichový systém. Specifický zájem zasluhují kromě mozku rovněž oblasti nenových tkání 20 mozkového kmenu, míchy (například myelitis a myelopatoe) a periferní nervová soustava. Mezi neurodegenerační choroby a procesy lze zařadit Alzheimerovu, Parkinsonovu a Huntingtonovu chorobu), epilepsii (včetně status epilepticus), infekce (například oparová infekce, neurologické následky AIDS, myelopatie AIDS atd.) a stárnutí.

Cyklosporiny jsou vhodné pro neuroprotekční léčení nervového inzultu na zárodečné a zhoubné nervové tkáni, používané ke kultivaci buněk, produkci a klinickým transplantačním terapiím u lidských organismů.

Cyklosporiny jsou vhodné pro neuroprotekční ošetření neurálních buněčných kultur, glielových 30 buněčných kultur, neurálních a glielových buněčných kultur, nádorových buněčných kultur jak neurálního, tak glielového původu, transfektovaných, geneticky vytvořených buněčných struktur včetně těch periferního původu, například sympatické nervové uzliny, dorzální kořenové nervové uzliny, feochromocytomů a Schwannových buněk.

Vynález se rovněž týká použití cyklosporinů pro výrobu léčiva a farmaceutické kompozice, které jsou určeny pro terapeutické neuroprotekční použití při léčení následujících stavů, situací a chorob, při kterých dochází k nervovému inzultu, ke kterému došlo v důsledku cerebrovaskulámích příhod, mrtvice a ischemické poruchy. Příčiny a zdroje cerebrovaskulámí příhody zahrnují nitrolebeční příčiny, tlak související s ischemií, vně lebeční příčiny, embolické příčiny, 40 vaskulopatie a coagulopatie. příčiny a zdroje hypoxie zahrnují ohrožení dýchání a hypoxii celého těla, anemii, malfunkce a hypotense červených krvinek a hemoglobinu.

Tato patentová přihláška se rovněž týká podání cyklosporinů, a to jak před, nebo v průběhu a po proběhnutí nervového inzultu s cílem chránit nervovou tkáň a nervovou funkci. Vynález se tedy ^r 45 týká nového léčení nervového inzultu.

Neuroprotekční vlastnosti cyklosporinů nebyly dosud známy, protože cyklosporiny zpravidla neprocházejí hematoencefalickou bariérou. Vynález uvádí, že cyklosporiny jsou neuroprotekční za podmínek, situací a u způsobů, při kterých byla hematoencefalická bariéra otevřena, porušena, 50 obejita, transgredována, zrušena nebo překročena tak, že se cyklosporiny mohou dostat do kontaktu s nervovou tkání.

Hematoencefalická bariéra se nachází v endotelových buňkách, spojujících kapiláry v mozku. Mezi těmito specifickými endotelovými buňkami jsou těsně svázaná spojení označována jako 55 zonulové okludenty, které brání difúzi větších molekul z vaskulámího prostoru do mozku. Na

-4CZ 291233 B6 vaskulámím povrchu kapilár je elektrostatický náboj, který odpuzuje nábojem opatřené molekuly a brání jim ve vstupu. Existuje zde mechanizmus aktivního transportu určitých molekul do mozku a dalších ven z mozku. Účinné látky vysoce rozpustné v tucích zpravidla procházejí hematoencefalickou bariérou snadno. Způsoby porušení této bariéry jsou v daném oboru dobře známy a zahrnují podání nabitých chemikálií, mechanické porušení bariéry, úraz, balení léčiva do mikrosomů, čímž se léčivo stane lipofilnějším, nebo jeho konjugaci s další látkou, která proniká snadno.

Stejné principy se aplikují na další způsoby dopravy. V případě intraarteriálního vstřikování, při katétrovém vstřikování nebo infúzi do cerebrální arterie vedoucí do mozku, mohou být činidlo, otevírající hematoencefalickou bariéru, a léčiva podány postupně nebo společně. Cyklosporiny by mohly být podány venózní cestou, účinná látka pro otevření hematoencefalické bariéry může být podána arteriální cestou.

Experimentální zvířata byla podrobena hypotenzi, odkrvení a ischemii předního mozku, kterých se dosáhlo zaškrcením bilaterálních krčních tepen na dobu 10 minut. Neurony CA1 oblasti hippocampu jsou velmi náchylné k ischemickému inzultu a výslednému odumírání buněk. U zvířat, kterým bylo aplikováno pouze vehikulum při otevření hematoencefalické bariéry nebo bez otevření této bariéry, se zaznamenalo 80 % odumření buněk. U zvířat, která přijala cyklosporin A v případě, kdy nedošlo k otevření hematoencefalické bariéry, bylo procento odumřelých buněk vy šší než 80 %. U zvířat, která přijala cyklosporin A při otevření hematoencefalické bariéry, došlo pouze k 11 % odumření buněk. Tento dramatický vzrůst nervové ochrany je mnohem větší, než v případě jakéhokoliv dalšího známého neuroprotekčního činidla. Tato nervová ochrana před inzultem, spojeným s hypoxií a ischemickým inzultem, spočívající v kombinaci cyklosporinu a otevření hemoencefalické bariéry je novým objevem.

Cyklosporiny nejsou schopny procházet hematoencefalickou bariérou. I když se jedná o lipofilní látky, jsou považovány za látky, které jsou blokovány těsnými endotelovými buněčnými spoji. Je zajímavé, že po porušení hematoencefalické bariéry, například v kultuře, jsou cyklosporiny zachyceny a shromážděny v neuronech, přičemž dosahují po 25 minutách poměru neuron : roztok, odpovídajícímu 20. Z toho se dá usuzovat, že pokud bude hematoencefalická bariéra otevřena, i když jen po krátkou dobu, může dojít k aktivnímu zachycení podstatného množství v mozkových neuronech. Po opětovném uzavření hematoencefalické bariéry by cyklosporiny zůstaly zachyceny v mozku. Endotelové buňky mozkových kapilár mají na svém luminálním povrchu rovněž ATP dependentní aktivní odtokový mechanizmus pro cyklosporiny, označovaný jako „transportér množiny účinných látek“, (multidrug transportér) P-glykoprotein. Pokud by byly cyklosporiny schopny vstupovat do endotelových buněk, potom by jim jejich lipofilní povaha pravděpodobně umožnila přístup k připojené glii a neuronům. Krátce blokování nebo „otrava“ tohoto P-glykoproteinu léčivy nebo protilátkami by mohla představovat elegantní a jednoduchý způsob převedení cyklosporinů přes hematoencefalickou bariéru v kritické době, během hodin bezprostředně následujících po ischemii.

Cyklosporiny mohou překonat hematoencefalickou bariéru různými způsoby.

Po cerebrovaskulámí příhodě prochází ischemie samotná během 6 hodin hematoencefalickou bariéru a molekuly, například cyklosporinu, jsou schopny vstoupit do mozku. Osmotická činidla, například hypertonická radiokontrastní činidla, mannitol, močovina, roztoky arabinózy a sacharózy, jsou rovněž schopna dočasně prorazit hematoencefalickou bariéru, která umožní terapeutické účinné složce dopravu do mozku. Tato činidla jsou zpravidla poskytována ve formě hypertonického roztoku, který je podáván formou 30 sekundové infúze skrze hlavní mozkovou arterii. Zvýšená prostupnost se může objevit okamžitě a může trvat 20 minut až 2 hodiny, přičemž potom dojde ke blokaci velkých molekul před malými molekulami. Tento způsob otevření hematoencefalické bariéry, který umožní dopravu jinak exkludovaných chemoterapeutických účinných látek, se používá úspěšně při léčení mozkových nádorů u lidí.

-5CZ 291233 B6

Hematoencefalická bariéra by mohla být otevřena méně invazivní a běžnější intravenózní cestou (standardním intravenózním spojením a předloketní žíle) za použití roztoku mannitolu. Chemikálie, například pozitivně nabitý protamin, naruší negativně repulzující náboj na vaskulámím endotelu mozku a tak dočasně otevře hematoencefalickou bariéru, tyto chemikálie jsou zpravidla podávány pomocí intrakarotidové injektáže. Složení cyklosporinů lze chemicky upravit například (de)glykosylací, kationizací, záchytem liposomu nebo konjugací s látkou nebo nosičem, kteří usnadní přepravu přes hematoencefalickou bariéru tak, aby byly schopny lépe pronikat skrze tuto hematoencefalickou bariéru, tj. aby byly lépe rozpustné v tucích.

Podání farmaceuticky účinné složky lze realizovat libovolnou vhodnou cestou včetně orální, sublingvální, nazální, inhalováním a parentelální cestou (včetně intraperitoneální, intraorgánové, podkožní, intradermální, intramuskulámí, intraartikulámí, venózní (centrální, hepatickou nebo periferální), lymfatickou, kardiální, arteriální včetně selektivního nebo superselektivního cerebrálně arteriálního přístupu, retrogradační perfusí skrze cerebrálně venózní systém, přes katétr do mozkového parenchymu nebo do mozkových komor), přímou expozicí nebo pod tlakem do nebo skrze mozek nebo míšní tkáň, nebo libovolné komory mozkomíšního mozku vstřikováním do subarachnoidálního, mozkocistemového, subdurálniho nebo epidorálního prostoru, prostřednictvím punkce mozkové cisterny nebo prostřednictvím lumbámí punkce, intra a periokulámí instalaci včetně obstřiku oka, injektáže do oční bulvy, do struktur a vrstev oka, do ucha (včetně Eustachovy trubice, mastoidních vzduchových buněk, vnějších a vnitřních sluchových kanálků, tympatické membrány, středního ucha, vnitřního ucha včetně kochleospinálního ganglionu a vnitřního ušního labyrintu, stejně jako prostřednictvím enterální, střevní, rektální, vaginální, uretání nebo měchýřocistemovou cestou. Rovněž při in uíero a perinatální indikaci se účinná látka injektuje do svaloviny matky nebo do orgánů matky, včetně dělohy, čípku a vagíny, do embrya, plodu, novorozence a souvisejících tkání a prostor, například anionického vaku, pupeční šňůry a pupeční arterie nebo do žil a placenty, přičemž výhodnou cestou je parentelální cesta. Výhodná cesta bude vždy záviset na stavu ošetřovaného pacienta.

Součástí vynálezu je podání účinné látky pomocí libovolného prostředku účelně porušujícího mozkový nebo míšní parenchym nebo porušení hematoencefalické bariéry mechanickým, tepelným, kryogenním, chemickým nebo toxickým způsobem, nebo způsobem využívajícím receptorový inhibitor nebo zesilovač, osmotický tlak, změnu náboje, radiaci, fotony a elektrickou nebo jinou energii.

Vynález zahrnuje všechny způsoby podání farmakologicky účinné látky spolu se všemi metodami otevření, přemostění nebo porušení hematoencefalické bariéry, přičemž tyto účinné látky mohou být podávány v kombinaci, současně nebo postupně, s cílem dostat farmaceuticky účinnou složku do kontaktu s nervovou tkání.

Vynález zahrnuje možnost zahrnout načasování posloupnosti dopravy farmaceuticky účinných látek do preventivního ošetření. Aby se umožnilo farmaceuticky účinným látkám dosáhnout co možná nej lepší ochrany nerovové tkáně poškozené v důsledku nervového inzultu je zapotřebí, aby se tyto látky dostaly co možná nejdříve do zasažených buněk, proto je možné aplikovat tyto účinné látky před vypuknutím nervového ischemického inzultu, v situacích zvýšené pravděpodobnosti ischemie nebo mrtvice. Mezi známé nebo předvídatelné situace lze zahrnout například chirurgické zákroky (karotidovou endarterektomii, operace kardiální, vaskulámí, aortické a ortopedické zákroky), endovaskulámí procedury, například libovolných typů arteriálních kateterizací (karotidových, vertebralních, aortických, kardiálních, renálních, spinálních, Adamkiewiczovy a dalších typů), prováděných z diagnostických nebo terapeutických účelů včetně vyhodnocení a ošetření vaskulámí stenózy, aneurismu nebo arteriovanózní malformace a/nebo injektáže embolických činidel, cívek nebo balónků při hemostázi, přerušení vaskularity nebo ošetření mozkových lézí, predisponování lékařských podmínek, včetně srpko\ý dočasný ischemických ataků, předvídatelných embolií nebo následných mrtvic, pokud jde o následná ošetření, v případě mrtvice nebo ischemie, které proběhnou před podáním cyklosporinů, je důležité podat účinnou látku, která má působit na buňky co možná nejrychleji, to znamená buď

-6CZ 291233 B6 ještě v průběhu probíhající mrtvice nebo ischemie, nebo co možná nejrychleji po nich. Dona mezi mrtvicí, diagnózou a ošetřením by se měla zkrátit na minimum, aby se zabránilo poškození a odumírání buněk. V ideálním případě by se mělo otevření hematoencefalické bariéry a současné poskytnutí cyklosporinů pro vstup do mozku a ischemické tkáně realizovat co možná nejdříve po mrtvici.

I když je možné podat farmaceuticky účinnou látku samotnou, je výhodněji podat jako součást farmaceutické kompozice. Farmaceutická kompozice obsahuje alespoň jednu farmaceuticky účinnou látku, jak byla definována výše, společně s jedním nebo několika vhodnými nosiči a případně dalšími farmaceuticky účinnými léčivy. Nosiče musí být vhodné v tom smyslu, že musí být schopny koexistovat s dalšími činidly farmaceutické kompozice a nesmí být škodlivé pro příjemce, tato farmaceuticky účinná činidla zkombinovaná způsobem popsaným v tomto odstavci sdalšími vhodnými, vdaném oboru známými činidly, jsou zde definována jako farmaceutická kompozice.

Farmaceutická kompozice zahrnuje farmaceutické kompozice, které lze vhodně aplikovat cestami zahrnujícími orální, sublinvální, nazální, inhalovací, parentelální (včetně intraperitoneální, intraorgánové, podkožní intradermální, intramuskulámí, intraartikulámí, venózní (centrální, hepatickou nebo periferní), lymfatickou, kardiální, arteríální cestu včetně selektivního nebo superselektivního cerebrálně arteriálního přístupu, retrograční perfuse skrze cerebrálně venózní systém, přes katétr do mozkového parenchymu nebo do mozkových komor), přímou expozicí nebo pod tlakem do mozku, míšní tkáně nebo libovolné komory mozkomíšního moku, nebo skrze mozek nebo míšní tkáň, nebo libovolné komory mozkomíšního moku, vstřikování do subarachnoidálního, mozkocistemového, subdurálního nebo epidorálního prostoru prostřednictvím punkce mozkové cisterny nebí prostřednictvím lumbární punkce, intra a periokulámí instalací včetně obstřiku oka, injektáže do oční bulvy, do struktury a vrstev oka, do ucha, (včetně Eustachovy trubice), mastoidních vzduchových buněk, vnějších a vnitřních sluchových kanálků, tympanické membrány, středního ucha, vnitřního ucha včetně kochleospinálního ganglionu a vnitřního ušního labyrintu, stejně jako prostřednictvím enterální, střevní, rektální, vaginální, uretální nebo měchýřocisternové cesty. Rovněž při in utero a perimatální indikaci se účinná látka injektuje do svaloviny matky nebo do orgánů matky, včetně dělohy, čípku a vaginy, do embrya, plodu, novorozence a souvisejících tkání a prostor, například anionického vaku, pupeční šňůry a pupeční arterie nebo žil a placenty, přičemž výhodnou cestou je parentelální cesta.

Farmaceutickou kompozici lze distribuovat a vyrábět v běžně dostupných dávkových formách, například ve formě kapslí a ampulí, obsahujících farmaceuticky účinnou látku podle vynálezu a rovněž je lze vyrábět a distribuovat libovolným, v daném oboru známým, způsobem, kromě farmaceuticky účinné látky může farmaceutická kompozice obsahovat další činidla, v daném oboru obvyklá, pro daný typ farmaceutické kompozice. Farmaceutická kompozice může mít například formu suspenzí, roztoků a emulzí farmaceuticky účinné látky v lipidu, bezvodých nebo vodných ředidlech, rozpouštědlech, rozpouštějících činidlech, emulgátorech, sirupech, granulátech nebo prášcích, rozpouštědel, nebo v jejich směsích. Farmaceutická kompozice může rovněž obsahovat barviví činidla konzervační látky, parfémy, aromatizující přísady a sladidla. Kromě farmaceuticky účinné látky může farmaceutická kompozice rovněž obsahovat další farmaceuticky účinné látky. Výroba a distribuce farmaceutické kompozice se provádí za použití technologií, odborníkům v daném oboru známých, například dokonalým promísením farmaceuticky účinné látky s kapalinami nebo s jemně rozptýlenými jemnými pevnými částicemi a popřípadě následným zpracováním farmaceutické kompozice do požadované jednotkové dávkové formy. Jednotková dávka, část a nové vehikulum tvořící farmaceutickou kompozici budou zpravidla uzpůsobeny svým tvarem nebo obalem lékařskému podání, pro který jsou určeny.

Farmaceutická kompozice, určená pro orání podání, může být vyráběna a distribuována ve formě jednotlivých dávkových jednotek, například kapslí, pilulí, tablet, dražé, rozpustných prášků nebo oplatek, které obsahují známou dávku farmaceuticky účinné látky; ve formě prášků a granulátů;

-7CZ 291233 B6 ve formě roztoků nebo suspenzí v sirupech, elixírech, ve formě lipidu, vodné tekutiny nebo bezvodé tekutiny; nebo ve formě emulze „olej ve vodě“ nebo „voda v oleji“.

Tablety mohou být vyrobeny lisováním nebo tvářením farmaceuticky účinné látky, případně 5 s jednou nebo několika dalšími farmaceuticky účinnými sloučeninami. Lisované tablety mohou být vyráběny lisováním známého množství farmaceuticky účinné látky v dispergovatelném stavu, například ve formě prášků nebo granulí případně smíšených s dalšími činidly zahrnujícími pojivá, maziva, inertní ředidla, konzervační látky a dispergační činidla v lisovacích strojích, v tomto oboru běžně používaných. Tablety, vyráběné ve formě, lze vyrábět tvářením známého 10 množství směsi farmaceuticky účinné látky, dalších farmaceuticky účinných sloučenin a dalších aditiv zvlhčených kapalným ředidlem ve strojích typicky pro tuto výrobní oblast. Tyto tablety i mohou být případně obaleny látkami zahrnujícími ochranné matrice, které mohou obsahovat zneprůhledňující látky nebo sladidla a mohou být formulovány tak, aby umožnily pomalé nebo kontrolované uvolňování farmaceuticky účinné látky, nebo uvolnění této látky v určité části 15 trávicí soustavy. Kapsle lze vyrábět umístěním známého množství farmaceuticky účinné látky, dalších farmaceuticky účinných sloučenin a aditiv dvoudílné nebo uzavřené želatinové kapsle nebo kapsle z další vodou rozpustné látky. Farmaceuticky účinná látka může být rovněž vyrobena jako farmaceutická kompozice v mikrozapouzdřené, mikrozomální, micelámí a mikroemulzní formě.

Farmaceutickou kompozici, obsahující farmaceuticky účinnou látku, určenou pro orální podání lze vyrobit jako pastilky nebo tabletky, obsahující farmaceuticky účinnou látku podle vynálezu, další farmaceuticky účinné sloučeniny a aditiva v ochucené bázi, například v klovatině a tragantu; jako pastilky, obsahující farmaceuticky účinnou látku podle vynálezu, spolu s dalšími 25 farmaceuticky účinnými sloučeninami a aditivy v inertní bázi, například v želatině nebo sacharóze; ústní výplachy, obsahující farmaceuticky účinnou látku podle vynálezu, spolu s dalšími farmaceuticky účinnými sloučeninami a aditivy v přijatelné tekutině.

Farmaceutická kompozice, obsahující farmaceuticky účinnou látku, aplikovatelná lokálně 30 prostřednictvím kůže, může být vyrobena a distribuována ve formě mastí, olejů, krémů, lotionů, gelů, past a transdermálních náplastí, obsahujících farmaceuticky účinnou látku podle vynálezu, další farmaceuticky účinné sloučeniny, aditiva a přijatelné nosné médium.

Farmaceutická kompozice, obsahující farmaceuticky účinnou látku, určená pro nazální podání 35 může být vyrobena a distribuována spolu s dalšími farmaceuticky účinnými kompozicemi a aditivy ve formě prášku pro inhalaci, nebo ve formě olejové, vodné nebo bezvodé kapalin} pro nosní sprej nebo kapky.

Farmaceutická kompozice, obsahující farmakologicky účinnou látku, určená pro rektální podání 40 může být vyrobena a distribuována ve formě čípků, krémů, pěn, výplachů a krystýrů spolu s dalšími farmaceuticky účinnými sloučeninami, vhodnými bázemi (zpravidla ředidly rozpustnými vodou), tuky a aditivy, známými odborníkům v daném oboru.

Farmaceutická kompozice, obsahující farmaceuticky účinnou látku, pro vaginální podání může 45 být vyrobena a distribuována ve formě pesarů, čípků, krémů, gelů, pěn, výplachů nebo sprejů s dalšími farmaceuticky přijatelnými sloučeninami, vhodnými bázemi a aditivy, známými odborníkům v daném oboru.

Farmaceutická kompozice, obsahující farmaceuticky účinnou látku, pro parentelální podání může 50 být vyrobena a distribuována z vodných a bezvodých sterilních injektážních roztoků, spolu s dalšími farmaceuticky účinnými sloučeninami, aditivy zahrnujícími antioxidanty, bakteriostatiky a soluty a cukry (například mannitol), které umožňují farmaceuticky účinné látce vytvořit společně s krví příjemce isotonickou, hypotonickou nebo hypertonickou suspenzi; a rovněž vodné a bezvodé sterilní suspenze, které mohou zahrnovat suspendační činidla a zahušťovadla. 55 farmaceutické kompozice mohou být vyrobeny a distribuovány v zásobnících obsahujících jednu

-8CZ 291233 B6 nebo několik dávek, například v uzavřených skleněných nebo plastických ampulích, lékovkách, lahvičkách a vacích ve formě tekutiny, nebo v suchém stavu, přičemž v tomto případě kompozice vyžaduje pouze bezprostředně před podáním přidání sterilní tekutiny, například vody, solného roztoku nebo roztoků dextrózy. Roztoky a suspenze, připravené pro injektování do těla bezprostředně před aplikací, lze připravit z prášků a tablet výše popsaných druhů.

Farmaceutická kompozice, obsahující farmaceuticky účinnou látku, určená pro aplikování do mozku a s ním spojených struktur, míchy a s ní spojených struktur, vertikální soustavy a prostor mozkomíšního moku, může být vyrobena a distribuována z vodných a bezvodých sterilních injektážních roztoků, spolu s dalšími farmaceuticky účinnými sloučeninami, aditivy zahrnujícími antioxidanty, bakteriostatiky a soluty a cukry (například mannitol), které umožňují farmaceuticky účinné látce vytvořit společně s krví příjemce isotonickou, hypotonickou nebo hypertonickou suspenzi; a rovněž vodné a bezvodé sterilní suspenze, které mohou zahrnovat suspendační činidla a zahušťovadla. Farmaceutické kompozice mohou být vyrobeny a distribuovány v zásobnících obsahujících jednu nebo několik dávek, například v uzavřených skleněných nebo plastikových ampulích, lékovkách, lahvičkách a vacích ve formě tekutiny, nebo v suchém stavu, přičemž v tomto případě kompozice vyžaduje pouze bezprostředně před podáním přidání sterilní tekutiny, například vody, solného roztoku nebo roztoků dextrózy. Roztoky a suspenze, připravené pro injektování do těla bezprostředně před aplikací, lze připravit z prášků a tablet výše popsaných druhů.

Požadovanou jednotkovou dávkou farmaceutické kompozice jsou kompozice, které obsahují danou dávku farmakologicky účinné látky nebo nervový inzult ošetřující dávku nebo její vhodný podíl. Jednotková dávka podle vynálezu může rovněž zahrnovat komplexnější systémy, například dvounádobkové injekční stříkačky, injekční stříkačky spo sobě jdoucími odděleními, žních jedno může obsahovat farmaceuticky účinnou látku podle vynálezu a druhé libovolné nezbytné ředidlo nebo vehikulum, nebo činidla potřebná pro otevření hematoencefalické bariéry. Činidla, obsažená v injekční stříkačce se mohou uvolňovat postupně nebo mohou tvořit směs, případně kombinaci dvou složek potom, co se uvede do pohybu píst injekční stříkačky. Tyto systémy jsou v daném oboru známy.

Farmaceutická kompozice zpravidla obsahuje 0,1 až 90 % farmaceuticky účinné látky, vztaženo k celkové hmotnosti kompozice. Pro dosažení účinné nervové ochrany může být při parentelální podání aplikováno 0,0001 mg až 50 mg/kg hmotnosti pacienta na den a výhodně 0,001 až 25 mg/kg. Při enterálním podání činní toto množství 0,001 až 100 mg/kg, výhodně 0,01 až 60 mg/kg. Nicméně v určitých případech může být nezbytné tuto dávku změnit v závislosti na stavu, hmotnosti a individuální reakci subjektu na ošetření, typu farmaceutické kompozice, ve které je farmaceuticky účinná látka podávána, způsobu podání a stadiu chorobného procesu, popřípadě na intervalu podání. Zvýše uvedeného vyplývá, že aby se dosáhlo účinného terapeutického výsledku, musí se v některých případech subjektu podat menší množství účinné látky, než je výše definované minimální množství a naopak, v některých případech musí být překročena horní mez tohoto množství.

Příklady provedení vynálezu

Následující příklady 1 až 10 ilustrují výše popsaný vynález. Je však třeba uvést, že mají pouze ilustrativní charakter a nikterak neomezují rozsah vynálezu, který je jednoznačně vymezen přiloženými patentovými nároky.

Příklady 1 až 6 ilustrují podmínky a situace, za kterých může být farmaceuticky účinná látka podle vynálezu uvedena do kontaktu s nervovou tkání, tj. při porušení nebo otevření hematoencefalické bariéry.

-9CZ 291233 B6

Příklad 1

Pod lokální anestézií se katétr zavedl podkožně do stehenní arterií. 270 ml hypertonického roztoku 20 % mannitolu se infuduje rychlostí 9 ml/s po dobu 30 sekund do vnitřní karotidové arterie, čímž se dosáhne porušení a otevření hematoencefalické bariéry. Rozsah otevření hematoencefalické bariéry lze sledovat pomocí MRI nebo kontrastního CAT snímání.

Příklad 2

Pod lokální anestézií a sedativy se provedl chirurgický řez skalpem a odkryla se lebeční kost. Do lebky se vyvrtal otvor a otevřela se tvrdá plena. Skrze mozkový parenchym se zavedl katétr, přičemž se porušila a otevřela hematoencefalická bariéra. Konec katétru spočinul uvnitř ventrikulámího systému.

Příklad 3

Pacient měl cerebrovaskulámí příhodu, doprovázenou porušením a otevřením hematoencefalické bariéry.

Příklad 4

Pacient utrpěl úraz hlavy, doprovázený porušením mozkové tkáně a porušením a otevřením hematoencefalické bariéry.

Příklad 5

Pacient utrpěl úraz míchy, doprovázený porušením tkáně míchy a porušením a otevřením hematoencefalické bariéry v míše.

Příklad 6

Pacient podstoupil chirurgický zákrok na mozku, doprovázený porušením a otevřením hematoencefalické bariéry.

Po porušení nebo otevření hematoencefalické bariéry se realizovalo podání farmaceutických kompozic podle vynálezu popsaných v příkladech 7 až 10.

Příklad 7

Sterilně injektovatelný koncentrát farmaceutické kompozice

Obsahující na ml:

Cyklosporin A 50mg

Spiritus fortis 280mg

Polyoxyethylátovaný ricinový olej 650mg

Farmaceutická kompozice se sterilizovala teplem nebo radiací a následně umístila do uzavřené nádoby, například skleněné, při dávkách 1 nebo 5 ml.

-10CZ 291233 B6 ml sterilovaného injektovatelného koncentrátu farmaceutické kompozice se naředil v 20 ml solného roztoku tak, aby mohl být podán ve formě infůze nebo injektáže do arterie, žíly, mozku, míchy nebo prostor mozkomíšního moku.

Příklad 8

Farmaceutická kompozice ve formě kapsle

Cyklosporin A	100 mg
Oxid železa El72	1 mg
Oxid titaničitý	3 mg
Ethanol	100 mg
Kukuřičný olej	415 mg
Želatina	280 mg
Labrafil	300 mg
Andrisorb	105 mg
Glycerol 85%	J mg

Jednodílná nebo dvoudílná kapsle se připravila umístěním farmaceuticky účinné látky do jednodílné nebo dvoudílné želatinové kapsle.

Příklad 9

Farmaceutická kompozice ve formě kapsle se zvýšenou absorpční schopností

Cyclosporin A Oxid železa El72 Oxid titaničitý Propylenglykol Tokoferol Ethanol Kukuřičný olej Želatina Glycerol 85% Polyoxy 40 hydrogenovaný ricinový olej

100 mg 1 mg 2 mg 150 mg 1 mg 100 mg 345 mg 300 mg 40 mg 405 mg

Jednodílná nebo dvoudílná kapsle se připravila umístěním farmaceuticky účinná látky do jednodílné nebo dvoudílné želatinové kapsle.

Příklad 10

Kapalná orálně aplikovatelná farmaceutická kompozice, obsahující na 1 ml:

Cyklosporin A Ethanol Kukuřičný olej Labrofil

100 mg 100 mg 430 mg 300 mg

-11 CZ 291233 B6

Příklad 11

Biologická účinnost kombinace aplikace cyklosporinu A/otevření hematoencefalické bariéry

Pokusné krysy druhu Wistar s tělesnou hmotností 300 až 350 g byly podrobeny hypotenzi krvácením a ischemii předního mozku zasvorkováním bilaterálních karotid po dobu 10 minut. Neurony oblasti CA1 hipokampu jsou vysoce citlivé na ischemický inzult mající za následek jejich buněčnou smrt. Všem pokusným zvířatům byla každý den po dobu celého experimentu ίο intraperitoneálně injikována farmaceutická kompozice obsahující cyklosporin A s koncentrací mg/ml zředěnou 1 + 4 sterilním fyziologickým roztokem v dávce 10 mg/kg nebo stejný objem i (přibližně 0,3) pouze vehikula (směs zředěná 1 + 4 ve sterilním fyziologickém roztoku alkoholu, cremophoru EL (polyoxyethylovaný ricínový olej) a destilované vody). U některých zvířat již nebylo provedeno žádné dodatečné ošetření, zatímco zbývající pokusná zvířata byla podrobena intracerebrální lézi (otevření hematoencefalické bariéry ), která byla realizována zavedením jehly injekční stříkačky do dorzálního hipokampu. Za použití jehly 10 mikrolitrové Hamiltonovy injekční stříkačky o vnějším průměru 450 mikrometrů byl stereotakticky zaveden 1 mikrolitr fyziologického roztoku (bez cyklosporinu A) do pravého hipokampu v rámci dvou specifických kanylových penetrací. Tato operace způsobí intracerebrální lézi, která mechanismem tlaku a mechanické distorze a řezu otevře hematoencefalickou bariéru, což umožňuje systemické podání cyklosporinu A, který se takto dostane do přímého kontaktu s centrální nervovou soustavou. Pokusná zvířata, kterým bylo podáno vehikulum s otevřením hematoencefalické bariéry (počet zvířat =10) nebo bez otevření hematoencefalické bariéry (počet zvířat =8) vykazovaly více než 80% buněčnou smrt (průměrná 88% resp. 83% buněčná smrt). Zvířata, 25 kterým byl podán cyklosporin A avšak bez otevření hematoencefalické bariéry (počet zvířat = 5) vykazovala více než 80% buněčnou smrt (průměrná 82% buněčná smrt. Zvířata, kterým byl podán cyklosporin A při otevření hematoencefalické bariéry (počet zvířat = 7) vykazovala pouze průměrnou 11% buněčnou smrt.

Claims

1. Použití cyklosporinů pro výrobu léčiva určeného pro ošetření nervového inzultu u pacienta, jehož hematoencefalická bariéra byla otevřena nebo u kterého jsou cyklosporiny schopné překonat hematoencefalickou bariéru.

40 2. Použití cyklosporinu A pro výrobu léčiva určeného pro ošetření nervového inzultu u pacienta, jehož hematoencefalická bariéra byla otevřena nebo u kterého je cyklosporin A schopen překonat hematoencefalickou bariéru.

Konec dokumentu