CZ289380B6 - Bílkoviny, extrahovatelné ze savčích jater - Google Patents
Bílkoviny, extrahovatelné ze savčích jater Download PDFInfo
- Publication number
- CZ289380B6 CZ289380B6 CZ199769A CZ6997A CZ289380B6 CZ 289380 B6 CZ289380 B6 CZ 289380B6 CZ 199769 A CZ199769 A CZ 199769A CZ 6997 A CZ6997 A CZ 6997A CZ 289380 B6 CZ289380 B6 CZ 289380B6
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- proteins
- cytotoxic activity
- liver
- extractable
- activity according
- Prior art date
Links
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 title claims abstract description 45
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims abstract description 45
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 title claims abstract description 19
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 title abstract 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 claims abstract description 9
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 claims description 12
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 6
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 claims description 5
- 241000700159 Rattus Species 0.000 claims description 5
- 244000309466 calf Species 0.000 claims description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 3
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims 1
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims 1
- VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N perchloric acid Chemical compound OCl(=O)(=O)=O VLTRZXGMWDSKGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 8
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 7
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 5
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 5
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 108010068081 UK 101 Proteins 0.000 description 4
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 229940040511 liver extract Drugs 0.000 description 4
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 3
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 2
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 2
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 2
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 2-diethylaminoethanol Chemical compound CCN(CC)CCO BFSVOASYOCHEOV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100027324 2-hydroxyacyl-CoA lyase 1 Human genes 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000283705 Capra hircus Species 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000009007 Diagnostic Kit Methods 0.000 description 1
- 241000255890 Galleria Species 0.000 description 1
- CGOHAEBMDSEKFB-FXQIFTODSA-N Glu-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O CGOHAEBMDSEKFB-FXQIFTODSA-N 0.000 description 1
- SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N Gly-Ser-Gly Chemical compound NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(O)=O SOEGEPHNZOISMT-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 1
- 102000002812 Heat-Shock Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010004889 Heat-Shock Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101001009252 Homo sapiens 2-hydroxyacyl-CoA lyase 1 Proteins 0.000 description 1
- PHIXPNQDGGILMP-YVNDNENWSA-N Ile-Glu-Glu Chemical compound CC[C@H](C)[C@@H](C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)N[C@@H](CCC(=O)O)C(=O)O)N PHIXPNQDGGILMP-YVNDNENWSA-N 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- AEDWWMMHUGYIFD-HJGDQZAQSA-N Leu-Thr-Asn Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(O)=O AEDWWMMHUGYIFD-HJGDQZAQSA-N 0.000 description 1
- FDBTVENULFNTAL-XQQFMLRXSA-N Leu-Val-Pro Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N FDBTVENULFNTAL-XQQFMLRXSA-N 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- FZIJIFCXUCZHOL-CIUDSAMLSA-N Lys-Ala-Ala Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](N)CCCCN FZIJIFCXUCZHOL-CIUDSAMLSA-N 0.000 description 1
- GJJQCBVRWDGLMQ-GUBZILKMSA-N Lys-Glu-Ala Chemical compound [H]N[C@@H](CCCCN)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O GJJQCBVRWDGLMQ-GUBZILKMSA-N 0.000 description 1
- DNDVVILEHVMWIS-LPEHRKFASA-N Met-Asp-Pro Chemical compound CSCC[C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)O)C(=O)N1CCC[C@@H]1C(=O)O)N DNDVVILEHVMWIS-LPEHRKFASA-N 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- PZVGOVRNGKEFCB-KKHAAJSZSA-N Thr-Asn-Val Chemical compound C[C@H]([C@@H](C(=O)N[C@@H](CC(=O)N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)O)N)O PZVGOVRNGKEFCB-KKHAAJSZSA-N 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- RWOGENDAOGMHLX-DCAQKATOSA-N Val-Lys-Ala Chemical compound C[C@@H](C(=O)O)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](C(C)C)N RWOGENDAOGMHLX-DCAQKATOSA-N 0.000 description 1
- 210000004100 adrenal gland Anatomy 0.000 description 1
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 231100000504 carcinogenesis Toxicity 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 201000010897 colon adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 230000024203 complement activation Effects 0.000 description 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000287 crude extract Substances 0.000 description 1
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- -1 e.g. Proteins 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005868 electrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010828 elution Methods 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 1
- 239000000076 hypertonic saline solution Substances 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 108010025153 lysyl-alanyl-alanine Proteins 0.000 description 1
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 1
- 238000001840 matrix-assisted laser desorption--ionisation time-of-flight mass spectrometry Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 238000000034 method Methods 0.000 description 1
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 1
- 230000001613 neoplastic effect Effects 0.000 description 1
- 230000010309 neoplastic transformation Effects 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000008447 perception Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 108010029020 prolylglycine Proteins 0.000 description 1
- 230000012846 protein folding Effects 0.000 description 1
- 210000000664 rectum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 239000012266 salt solution Substances 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 210000004872 soft tissue Anatomy 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N tris Chemical compound OCC(N)(CO)CO LENZDBCJOHFCAS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000004291 uterus Anatomy 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000003442 weekly effect Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- F—MECHANICAL ENGINEERING; LIGHTING; HEATING; WEAPONS; BLASTING
- F01—MACHINES OR ENGINES IN GENERAL; ENGINE PLANTS IN GENERAL; STEAM ENGINES
- F01D—NON-POSITIVE DISPLACEMENT MACHINES OR ENGINES, e.g. STEAM TURBINES
- F01D25/00—Component parts, details, or accessories, not provided for in, or of interest apart from, other groups
- F01D25/28—Supporting or mounting arrangements, e.g. for turbine casing
- F01D25/285—Temporary support structures, e.g. for testing, assembling, installing, repairing; Assembly methods using such structures
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/46—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
- C07K14/47—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
- C07K14/4701—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals not used
- C07K14/4702—Regulators; Modulating activity
- C07K14/4703—Inhibitors; Suppressors
-
- F—MECHANICAL ENGINEERING; LIGHTING; HEATING; WEAPONS; BLASTING
- F23—COMBUSTION APPARATUS; COMBUSTION PROCESSES
- F23R—GENERATING COMBUSTION PRODUCTS OF HIGH PRESSURE OR HIGH VELOCITY, e.g. GAS-TURBINE COMBUSTION CHAMBERS
- F23R3/00—Continuous combustion chambers using liquid or gaseous fuel
- F23R3/42—Continuous combustion chambers using liquid or gaseous fuel characterised by the arrangement or form of the flame tubes or combustion chambers
- F23R3/60—Support structures; Attaching or mounting means
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
- B23—MACHINE TOOLS; METAL-WORKING NOT OTHERWISE PROVIDED FOR
- B23P—METAL-WORKING NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; COMBINED OPERATIONS; UNIVERSAL MACHINE TOOLS
- B23P2700/00—Indexing scheme relating to the articles being treated, e.g. manufactured, repaired, assembled, connected or other operations covered in the subgroups
- B23P2700/13—Parts of turbine combustion chambers
Landscapes
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Mechanical Engineering (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Combustion & Propulsion (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
B lkoviny extrahovateln kyselinou chloristou ze sav ch jater, zejm na pak z koz ch jater, a jejich pou it v onkologii.\
Description
Oblast techniky
Předkládaný vynález se týká bílkovin z živočišných tkání, zejména ze savčích jater, a jejich použití v onkologii.
Dosavadní stav techniky
WO 92/10197 popisuje extrakty ze savčích orgánů, zejména z kozích jater, skládající se nejméně ze tří různých bílkovin a charakterizované neobvyklými farmakologickými a imunologickými vlastnostmi.
Dimemí bílkovina o velikosti 23 000, extrahovatelná 5 % kyselinou chloristou z jater a ledvin potkanů albínů, byla uvedena v Eur. J. Biochem. 272, 665, 1993. Odpovídající sekvence cDNA byla uložena v EMBL databance pod přírůstkovým číslem X70825.
Tato bílkovina, u níž byla zaznamenána společná extrakce s bílkovinami ze skupiny o vysoké pohyblivosti (HMG bílkovinami, high—mibility group proteins), pravděpodobně hraje úlohu v poskládání (zprohýbání) bílkovin a může být proto považována za člena třídy tak zvaných „průchodců“ nebo „společník“ (chaperons).
WO 93/18146 předkládá bílkovinu izolovanou z králičích jater, majících molekulovou hmotnost 59 000, která je schopna komplexace s „průvodci“ a bílkovinou teplotního šoku o velikosti 90 000.
Podstata vynálezu
Nyní bylo zjištěno, že nová bílkovina, vyčištěná z extraktu uváděného ve WO 92/10197, obsahuje dílčí aminokyselinovou sekvencí, uvedenou zde jako sekvence o identifikačním čísle 1.
Uváděná bílkovina je prospěšná v onkologii vzhledem k následujícím vlastnostem.
- sérum zvířat, imunizovaných bílkovin, vykazuje cytotoxickou aktivitu vůči kulturám lidských nádorových buněk;
- bílkovina má výraznou antineoplastickou aktivitu (vůči novotvarům) v dávce 0,015 mg/kg umyší kmene Balb/c s myším adenokarcinomem tlustého střeva (c26) a u potkanů albínů s intrapleurálním Yoshidovým ascitickým tumorem;
- při podávání živočichů včetně lidí vzrůstá počet protilátek, schopných rozpoznat lidské rakovinné buňky.
Uvedené vlastnosti vysvětlují aktivitu, pozorovanou v klinických testech, prováděných podáváním extraktu podle WO 92/10197 pacientů, postiženým pokročilou rakovinou plic, prs, žaludku, tlustého střeva a jater.
Bílkovina podle vynálezu vykazuje vysoký stupeň homologie sjatemím extraktem potkanů albínů, předloženým v Eur. J. Biochem. 272, 665, 1993.
Bílkoviny o vysokém stupni homologie s bílkovinou o sekvenci identif. čísla 1 byly nalezeny rovněž v játrech různých živočišných druhů, zejména v hovězích a koňských játrech.Vynález se
- 1 CZ 289380 B6 týká rovněž uvedených homologních sekvencí, s výjimkou známé sekvence z jater potkanů albínů.
Byla tedy nalezena nová skupina bílkovin. Členy této dříve neznámé skupiny charakterizuje 5 vysoký stupeň konzervativnosti a homologie mezi živočišnými druhy a molekulová hmotnost, pohybující se mezi 10 000 a 14 000.
Výraz „vysoký stupeň homologie“ znamená 80 % či více procentní homologii aminokyselinových sekvencí, s výhodou pak 90 a více procentní homologii.
Vynález se dále vztahuje k použití výše uvedených bílkovin, extrahovatelných ze savčích jater kyselinou chloristou, jako léčebného a/nebo diagnostického prostředku v onkologii.
Vynález tedy poskytuje farmaceutické prostředky s obsahem bílkoviny, mající dílčí 15 aminokyselinovou sekvenci č. 1 nebo bílkovin, vykazujících nejméně 80 % homologii, s výhodou pak nejméně 90 % homologii, se sekvencí o identif. čísle 1.
Farmaceutické prostředky podle vynálezu budou podávány parenterálně, s výhodou pak subkutálně či intramuskulámě (podkožně nebo do svalu) a budou typicky obsahovat 0,1 až 50 mg 20 celkové bílkoviny na jednotku dávky. Bílkovinný aktivní základ, vyčištěný běžnými metodami, může být lyofilizován na vhodném netoxickém nosiči a distribuován v ampulích nebo lahvičkách.
K vhodným roztokům patří sterilní voda nebo roztoky solí.
Podle dalšího ztělesnění vynálezu mohou být bílkoviny podle vynálezu nebo jejich fragmenty, vytvářené například chemickou syntézou, použity k výrobě polyklonálních nebo monoklonálních protilátek. Zvláště zajímavé protilátky rozpoznávají tumorové antigeny a jsou tedy použitelné k diagnostickým, léčebným či výzkumným účelům. Dvě ze zmíněných protilátek byly uloženy 30 27.7.1993 v Evropské sbírce živočišných buněčných kultur (EGACC, European collection of Animal Cell Cultures) v Porton Down, Salisbury, Spojené království, pod přírůstkovými čísly 930806103 a 930806104.
Tyto protilátky byly použity v imunocytochemických testech, prováděných na několika 35 bioptických vzorcích lidské rakoviny, umožňujících jejich rozpoznání.
Bílkoviny podle vynálezu při podávání pacientům, postiženým neoplastickým onemocněním, kromě prospěšných účinků jako je inhibování nebo regrese hmoty tumoru, snížení bolesti a zlepšení vnímání stavu vědomí, zvyšují množství protilátek, vykazujících značný cytotoxický 40 účinek na kulturu tumorových buněk. Pro zmíněný cytotoxický účinek je vyžadováno celé sérum, obsahující i kaskádu komplementu.
Při používání k léčebným účelům nebo v podobě vakcíny k indukování imunity vůči neoplastické transformaci mohou být bílkoviny podle vynálezu podávány v dávkách mezi 0,1 a 30 mg na den 45 a pacienta, a to subkutáně, intramuskulámě nebo intravenózně (do žíly). Léčba bude opakována i po dlouhá časová údobí, dokud koncentrace zvýšených protilátek nedosáhne vyhovující úrovně.
Koncentrace zvýšených protilátek může být stanovena běžnými metodami, za použití například imunoenzymatických postupů. K tomuto účelu vynález poskytuje diagnostické sady (kity), 50 obsahující vhodně značené reakční látky, např. bílkovinu podle vynálezu nebo její fragmenty jako antigen, volitelně imobilizovaný na vhodném nosiči, anti-Ig protilátky a vhodné reagencie schopné detekovat, např. pomocí kolorimetrické reakce, komplex antigen-protilátka.
Bílkoviny podle vynálezu mohou být výhodně podávány společně s vhodnými nosiči, působícími 55 jako adjuvantní látky. Vhodné adjuvantní látky mohou být zvoleny např. z netoxických bílkovin,
-2CZ 289380 B6 s výhodou ze xenogenních bílkovin, např. bílkovin ze stejných druhů, z nichž byla extrahována imunogenní bílkovina.
Bílkoviny podle vynálezu jsou připravovány podrobením surového extraktu, získaného extrakcí orgánů nejprve kyselinou chloristou, poté hypertonickými solnými roztoky (např. 3MKCI) a následnou dialýzou, krokům čištění za pomoci HPLC a hydrofobní výměnné chromatografie (FPLC), jakje dále upřesněno v příkladech.
Bílkovina, získaná z kozích jater, je blokována na N-konci a byla proto částečně sekventována po štěpení působením CNBr, které poskytlo 2 hlavní fragmenty o molekulové hmotnosti (určené metodou MALDI-TOF) 10263 a 4063, zatímco molekulová hmotnost před rozštěpením činidla podle hodnoty stanovené elektrolézou SDS-PAGE (v polyakrylamidovém gelu za přítomnosti dodecylsulfátu sodného) 14290.
Následující příklady dále dokreslují vynález.
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Extrakt kozích jater, připravený jako ve WO 92/10197 a zde dále označovaný jako UK 101, byl zahuštěn pomocí membrány Amicon PM 10 a následně byl dialyzován vůči 0,01 M roztoku NaH2PO4/Na2HPO4 o pH 6,5. Produkt byl čištěn pomocí HPLC na materiálu TSK DEAE 5 PW, ekvilibrovaném v uvedeném pufru; výchozí pufr byl shromážděn a bílkovina absorbovaná na pryskyřici byla vymyta 1M roztokem NaCl. Maximum (pík), eluované výchozím pufrem, bylo následně čištěno pomocí HPCL na koloně TSK SW 3000.
Touto chromatografií byla získána dvě maxima (píky): první z nich byl pominut, neboť byl tvořen zejména glykogenem; druhý, zvláště bohatý na nízkomolekulámí bílkoviny, byl následně čištěn pomocí FPLC na koloně Protein-Pac HIC Phenyl 5PW.
Čištění na této hydrofobní výměnné koloně se provádí za následujících podmínek: nejprve je eluován startovací (výchozí) pufr, 20 mM Tris-HCI o pH 7,0, obsahující 1M (NH^SO*, poté následuje eluce lineárním gradientem, končícím 20 mM Tris-HCI bez síranu amonného. Výchozí pufr je pomíjen, zatímco zóna, eluovaná gradientem při molaritě (NEL^SCh mezi 0,6 M a 0,8 M, je zachycována a dialyzována proti vodě.
Získán byl vzorek o stupni čistoty asi 90 %, který je zde dále označován jako UK 114, a vykazuje při SDS-PAGE proužek odpovídající velikosti asi 14 000.
Příklad 2
V imunocytochemických testech byly použity polyklonální protilátky, získané z králíků, imunizovaných extraktem kozích jater (WO 92/10197), podávaným podkožně v PBS (pufrovaném solném roztoku, polybuffred šalině) s komplexním Freudovým adjuvans každý po dobu 2 měsíců.
Monoklonální protilátky byly získány z myší kmene Balb/c jeden měsíc po injikaci 100 pg UK 101 spolu s nekompletním Freaudovým adjuvans, aplikované jednou týdně. Fůze (spojení) s myelomatickými buňkami lymfocytů, získaných ze zvířat imunizovaných vůči UK 101, byla prováděna běžnými metodami. Dva ze získaných hydridomů byly uloženy 27.7. 1993
-3CZ 289380 B6 v Evropské sbírce živočišných buněčných kultur (ECACC) v Porton Down, Salisbury, Spojené Království, pod přírůstkovými čísly 930806103 a 930806104.
Protilátky, vylučované uvedeným hydridomem, rozeznávají bílkoviny podle vynálezu.
Mono- a polyklonální protilátky byly zkoušeny v imunocytochemických testech na 30 bioptických vzorcích maligních tumorů, izolovaných z různých orgánů, jako z prsu, plic, močového měchýře, žaludku, tlustého střeva-konečníku, dělohy, měkkých tkání a prostaty. Tkáně byly fixovány v 10% pufrovaném formaldehydu a preparáty v parafínu byly barveny 10 pomocí Mistostain Kit SP firmy Zymed Lab. Inc.
Řezy byly inkubovány spolu s protilátkami (0,5 pg/ml Ig s 1 % BSA v PBS) přes noc při teplotě °C. Po promytí byly tenké řezy 60 minut inkubovány s protikráličím vepřovým biotinylovanými imunoglobulinem a poté dalších 60 minut s peroxidovaným komplexem 15 streptavidin-biotin, naředěným 1:100. Peroxidázová vazba byla stanovena za použití reakce
3,3-diamidobenzidin/H2O2. Pouze tkáně, vykazující specifickou reakci vůči protilátkám v cytoplazmě, byly považovány za pozitivní. Imunoreaktivita pro normální tkáně byla uvažována jako negativní, slabě pozitivní, pozitivní(++) a vysoce pozitivní (+++). Výsledky jsou uvedeny v následující tabulce. Imunocytochemická reaktivita s různými polyklonálními protilátkami vůči 20 extraktu z kozích, telecích a koňských jater je detekovatelná u většiny maligních tumorů (82,7 % u protilátek vůči extraktu z koňských jater a 100% u extraktu z telecích jater). Molekulární protilátky, vylučované hybridomem č. 930806103, poskytly pozitivní výsledky u 93,7 % testovaných tumorů.
Tabulka
Imunocytochemická reaktivita maligních tumorů (1/-)
| Anti UK 101 | ||||
| místo (orgán) | kozí | telecí | koňský | Mabč. 930806103 |
| prs (mléčná žláza) | 4/0 | 1/0 | 1/0 | 1/0 |
| žaludek | 4/3 | 3/0 | 3/0 | 3/0 |
| tl. střevo/konečník | 7/0 | 5/0 | 5/0 | 5/0 |
| plíce | 1/1 | nestanov. | nestanov. | 1/0 |
| moč. měchýř | 2/0 | 1/0 | 1/0 | 1/0 |
| prostata | 3/0 | 1/0 | 1/0 | 1/0 |
| děloha | 1/0 | 1/0 | 1/0 | 1/0 |
| adrenální žláza | 1/0 | 1/0 | 1/0 | 1/0 |
| NOS | 2/1 | 1/0 | 0/1 | 1/0 |
| CELKEM | 25/5 | 14/0 | 13/1 | 15/1 |
PŘEHLED SEKVENCÍ (1) VŠEOBECNÉ INFORMACE:
(i) přihlašovatel (A) JMÉNO: Zetesis (B) ULICE: Galleria del Corso 2 (C) MĚSTO: Miláno (E) : ZEMĚ: Itálie (F) POŠT. KÓD: 20122
-4CZ 289380 B6 (ii) NÁZEV VYNÁLEZU: Bílkoviny, extrahovatelné ze savčích jater (iiii)POČET SEKVENCÍ: 1 (iv) POČITADLOVĚ ČINITELNÁ FORMA:
(A) TYP MÉDIA: Floppy disk (B) POČÍTAČ: PC IBM kompatibilní (C) OPERAČNÍ SYSTÉM: PC-DOS/MS-DOS (D) SOFTWARE: Patentin Release #1.0, verse #1.25 (EPO) (2) INFORMACE O SEKVENCI IDENTIF: Č. 1 (i) CHARAKTERISTIKY SEKVENCE:
(A) DÉLKA: 53 aminokyselin (B) TYP: aminokyselinový (C) TYPOLOGIE: lineární (ii) TYP MOLEKULY: bílkovina (v) TYP FRAGMENTU: N-koncový (vi) PŮVODNÍ ZDROJ:
(A) ORGANISMUS: Capra hircus (F) TYP TKÁNĚ: jatemí (ix) POPIS SEKVENCE: Sekvence identifikačního čísla 1:
Met Asp Pro Ala Ser Gly Gin Leu Val Pro Gly Gly Val Val
510
Glu Glu Ala Lys Gin Ala Leu Thr Asn Ile Gly Glu Ile Leu
2025
Lys Ala Ala Gly Xaa Asp Phe Thr Asn Val Val Lys Ala Thr
3540
Val Leu Leu Ala Asp Ile Asn Asp Phe Xaa Ala
Claims (9)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Bílkoviny mající cytotoxickou aktivitu, extrahovatelné ze savčích jater, ne však zjater potkanů albínů, o dílčí sekvenci aminokyselin odpovídající sekvenci identifikačního čísla 1, nebo sekvencím, vykazujícím s uvedenou sekvencí identifikačního čísla 1 stupeň homologie alespoň ve výši 80 %.
- 2. Bílkoviny mající cytotoxickou aktivitu podle nároku 1, které vykazují s uvedenou sekvencí identifikačního čísla 1 stupeň homologie alespoň ve výši 90 %.
- 3. Bílkoviny mající cytotoxickou aktivitu podle nároku 1 nebo 2, které jsou extrahovatelné z kozích, koňských nebo telecích jater.-5CZ 289380 B6
- 4. Bílkoviny mající cytotoxickou aktivitu podle nároku 3, které jsou extrahovatelné z kozích jater.
- 5. Bílkoviny mající cytotoxickou aktivitu podle kteréhokoli z předcházejících nároků, o molekulové hmotnosti mezi 10 000 a 14 000.
- 6. Bílkoviny mající cytotoxickou aktivitu podle nároku 5, o molekulové hmotnosti 14 000.
- 7. Bílkoviny mající cytotoxickou aktivitu podle kteréhokoli z předcházejících nároků, které jsou rozpoznávány protilátkami, vylučovanými z hybridomů, uložených v ECACC pod čísly 930806103 a 930806104.
- 8. Bílkoviny mající cytotoxickou aktivitu, extrahovatelné ze savčích jater, které mají dílčí sekvenci aminokyselin odpovídající sekvenci identifikačního čísla 1, nebo sekvencím, vykazujícím stupeň homologie s uvedenou sekvencí identifikačního čísla 1 alespoň ve výši 80 %, pro použití v protinádorové léčbě.
- 9. Farmaceutické prostředky, vyznačující se tím, že obsahují jako aktivní složku bílkoviny, mající cytotoxickou aktivitu podle nároku 1 nebo 8 ve směsi s vhodným nosičem.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ITMI941469A IT1270618B (it) | 1994-07-14 | 1994-07-14 | Proteine ad attivita' antitumorale |
| PCT/EP1995/002723 WO1996002567A1 (en) | 1994-07-14 | 1995-07-12 | Proteins from mammalian liver and their use in oncology |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ6997A3 CZ6997A3 (en) | 1997-08-13 |
| CZ289380B6 true CZ289380B6 (cs) | 2002-01-16 |
Family
ID=11369276
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ199769A CZ289380B6 (cs) | 1994-07-14 | 1995-07-12 | Bílkoviny, extrahovatelné ze savčích jater |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5792744A (cs) |
| EP (1) | EP0770093A1 (cs) |
| JP (1) | JPH10502814A (cs) |
| KR (1) | KR100425627B1 (cs) |
| CN (1) | CN1146576C (cs) |
| AU (1) | AU702294B2 (cs) |
| BR (1) | BR9508382A (cs) |
| CA (1) | CA2194861A1 (cs) |
| CZ (1) | CZ289380B6 (cs) |
| FI (1) | FI970097A (cs) |
| HU (1) | HU218285B (cs) |
| IL (1) | IL114561A (cs) |
| IT (1) | IT1270618B (cs) |
| MX (1) | MX9602557A (cs) |
| NO (1) | NO970114L (cs) |
| RU (1) | RU2163243C2 (cs) |
| TR (1) | TR199500854A2 (cs) |
| TW (1) | TW434257B (cs) |
| WO (1) | WO1996002567A1 (cs) |
| ZA (1) | ZA955837B (cs) |
Families Citing this family (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1276707B1 (it) * | 1995-06-13 | 1997-11-03 | Zetesis Spa | Composizioni farmaceutiche ad attivita' analgesica |
| IT1282608B1 (it) * | 1996-02-13 | 1998-03-31 | Zetesis Spa | Sequenza oligonocleotidica da fegato di capra |
| IT1284524B1 (it) * | 1996-09-13 | 1998-05-21 | Zetesis Spa | Uso di proteine come agenti anti-retrovirali |
| ES2192669T3 (es) | 1996-09-18 | 2003-10-16 | Zetesis Spa | Uso de proteinas como agentes frente a enfermedades autoinmunes. |
| IT1290828B1 (it) * | 1997-03-25 | 1998-12-11 | Zetesis Spa | Uso di proteine estraibili da organi animali per la preparazione di medicamenti per il trattamento di condizioni patologiche |
| IT1298442B1 (it) * | 1998-02-24 | 2000-01-10 | Zetesis Spa | Composizioni orali a basso dosaggio di proteine citotossiche |
| US20010014471A1 (en) * | 1999-04-15 | 2001-08-16 | Vytautas Naktinis | Recombinant protein and its use in therapy and diagnostics |
| WO2001017535A2 (en) * | 1999-09-03 | 2001-03-15 | Vigen Laboratories, Inc. | Enriched fraction from a porcine liver extract for treating human diseases |
| ITMI20010762A1 (it) * | 2001-04-10 | 2002-10-10 | Zetesis Spa | Uso della proteina uk114 o di suoi frammenti per il trattamento e la prevenzione dello shock endotossico |
| ITMI20022307A1 (it) * | 2002-10-30 | 2004-04-30 | Zetesis Spa | Associazioni anti-tumorali comprendenti proteine e chemioterapici. |
| CN104610762A (zh) * | 2015-01-16 | 2015-05-13 | 青岛新诺科铸造材料科技有限公司 | 一种填充型精密铸造低温调制蜡及其制备方法 |
| IT201600127428A1 (it) * | 2016-12-16 | 2018-06-16 | Cusani Alberto Bartorelli | Nuova proteina ricombinante uk 114 in forma stabile polimerica per uso nella terapia, nella diagnostica e nella prevenzione di neoplasie maligne |
| IT201900022203A1 (it) | 2019-11-26 | 2021-05-26 | Cusani Alberto Bartorelli | Proteine uk 114 da salmone per uso nella terapia, nella diagnostica e nella prevenzione di neoplasie maligne |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| IT1244879B (it) * | 1990-12-11 | 1994-09-12 | Alberto Bartorelli | Estratti da tessuti animali, utili in terapia e in diagnostica. |
-
1994
- 1994-07-14 IT ITMI941469A patent/IT1270618B/it active IP Right Grant
-
1995
- 1995-07-12 AU AU30779/95A patent/AU702294B2/en not_active Ceased
- 1995-07-12 KR KR1019970700272A patent/KR100425627B1/ko not_active IP Right Cessation
- 1995-07-12 CN CNB951941186A patent/CN1146576C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1995-07-12 IL IL11456195A patent/IL114561A/xx not_active IP Right Cessation
- 1995-07-12 EP EP95943524A patent/EP0770093A1/en not_active Ceased
- 1995-07-12 CZ CZ199769A patent/CZ289380B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1995-07-12 BR BR9508382A patent/BR9508382A/pt not_active IP Right Cessation
- 1995-07-12 MX MX9602557A patent/MX9602557A/es not_active IP Right Cessation
- 1995-07-12 RU RU97101876/04A patent/RU2163243C2/ru not_active IP Right Cessation
- 1995-07-12 WO PCT/EP1995/002723 patent/WO1996002567A1/en not_active Application Discontinuation
- 1995-07-12 CA CA002194861A patent/CA2194861A1/en not_active Abandoned
- 1995-07-12 JP JP8504683A patent/JPH10502814A/ja not_active Ceased
- 1995-07-12 HU HU9700057A patent/HU218285B/hu not_active IP Right Cessation
- 1995-07-12 US US08/765,957 patent/US5792744A/en not_active Expired - Fee Related
- 1995-07-13 ZA ZA955837A patent/ZA955837B/xx unknown
- 1995-07-14 TR TR95/00854A patent/TR199500854A2/xx unknown
- 1995-07-17 TW TW084107362A patent/TW434257B/zh not_active IP Right Cessation
-
1997
- 1997-01-10 FI FI970097A patent/FI970097A/fi not_active IP Right Cessation
- 1997-01-10 NO NO970114A patent/NO970114L/no not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH10502814A (ja) | 1998-03-17 |
| IL114561A (en) | 2000-11-21 |
| ITMI941469A1 (it) | 1996-01-14 |
| FI970097A0 (fi) | 1997-01-10 |
| HU9700057D0 (en) | 1997-02-28 |
| CN1146576C (zh) | 2004-04-21 |
| FI970097A (fi) | 1997-03-06 |
| EP0770093A1 (en) | 1997-05-02 |
| MX9602557A (es) | 1997-05-31 |
| TR199500854A2 (tr) | 1996-06-21 |
| RU2163243C2 (ru) | 2001-02-20 |
| CZ6997A3 (en) | 1997-08-13 |
| TW434257B (en) | 2001-05-16 |
| IL114561A0 (en) | 1995-11-27 |
| HUT76328A (en) | 1997-08-28 |
| BR9508382A (pt) | 1997-12-23 |
| HU218285B (en) | 2000-07-28 |
| ITMI941469A0 (it) | 1994-07-14 |
| CN1152924A (zh) | 1997-06-25 |
| IT1270618B (it) | 1997-05-07 |
| CA2194861A1 (en) | 1996-02-01 |
| NO970114L (no) | 1997-03-05 |
| AU702294B2 (en) | 1999-02-18 |
| US5792744A (en) | 1998-08-11 |
| NO970114D0 (no) | 1997-01-10 |
| ZA955837B (en) | 1996-02-21 |
| AU3077995A (en) | 1996-02-16 |
| WO1996002567A1 (en) | 1996-02-01 |
| KR100425627B1 (ko) | 2004-06-18 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Meuth et al. | Suppression of T lymphocyte functions by human C3 fragments. I. Inhibition of human T cell proliferative responses by a kallikrein cleavage fragment of human iC3b. | |
| Fuks et al. | Carcinoembryonic antigen (CEA): Molecular biology and clinical significance | |
| Banjo et al. | Immunologically active heterosaccharides of carcinoembryonic antigen of human digestive system | |
| Weber et al. | Antibodies Specific for α‐N‐Acetyl‐β‐Endorphins: Radioimmunoassays and Detection of Acetylated β‐Endorphins in Pituitary Extracts | |
| CZ289380B6 (cs) | Bílkoviny, extrahovatelné ze savčích jater | |
| Schechter | Antigenic competition between polypeptidyl determinants in normal and tolerant rabbits | |
| WO1993010749A1 (en) | Hair modifier and hair care product, both containing antikeratinous antibody, and production of antikeratinous antibody | |
| IBRAHIM et al. | Reproductive tract secretions and bull spermatozoa contain different clusterin isoforms that cluster cells and inhibit complement‐induced cytolysis | |
| Holland et al. | Haemagglutinating, precipitating and lymphocyte-stimulating factors of phytohaemagglutinin | |
| Hahn et al. | H‐2‐linked genetic control of antibody response to soluble calf skin collagen in mice | |
| HUT52787A (en) | Process for production of biologically active peptides | |
| Assmann et al. | Comparison of antigenic targets involved in antibody-mediated membranous glomerulonephritis in the mouse and rat. | |
| JP2002519303A (ja) | 脂質動員性を有する糖タンパク質およびその治療的適用 | |
| Seki et al. | Direct identification of phosphotyrosine-containing proteins in some retrovirus-transformed cells by use of anti-phosphotyrosine antibody | |
| US5580561A (en) | Methods and pharmaceutical compositions for blocking suppression of immune defense mechanisms using an antibody, a factor, or an antisense peptide | |
| Nakamura et al. | Oligomeric IgA: the major component of the in vitro primary response of mouse spleen fragments | |
| Barnard et al. | Immunological studies with human aortic elastin | |
| IE920055A1 (en) | Improvements in and relating to hormones | |
| JP2690956B2 (ja) | 生体由来のタンパク質 | |
| Medgyesi et al. | Structural Localization of Isotypic Markers on Mouse Myeloma γG Globulins | |
| WO1993023081A1 (en) | Methods and agents for modulating immune response, and uses thereof | |
| Gorevic et al. | Some effects of the administration of endotoxin in mice: Specific cleavage of serum albumin by an acid protease and the generation of amyloid serum component | |
| CN100396698C (zh) | 一种新的乳腺癌相关蛋白及其特异性多克隆抗体 | |
| Reese et al. | Comparison of the antibody produced by DNCB fed, sensitized and conventionally immunized strain 13 guinea pigs | |
| FUNG | FURTHER STUDIES OF |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PD00 | Pending as of 2000-06-30 in czech republic | ||
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20050712 |