CZ277998A3 - Inhibitory serinproteázy a farmaceutický prostředek - Google Patents

Inhibitory serinproteázy a farmaceutický prostředek Download PDF

Info

Publication number
CZ277998A3
CZ277998A3 CZ982779A CZ277998A CZ277998A3 CZ 277998 A3 CZ277998 A3 CZ 277998A3 CZ 982779 A CZ982779 A CZ 982779A CZ 277998 A CZ277998 A CZ 277998A CZ 277998 A3 CZ277998 A3 CZ 277998A3
Authority
CZ
Czechia
Prior art keywords
carbon atoms
ppa
cha
boc
alkyl
Prior art date
Application number
CZ982779A
Other languages
English (en)
Inventor
Anton Egbert Peter Adang
Jacobus Albertus Maria Peters
Original Assignee
Akzo Nobel N. V.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Akzo Nobel N. V. filed Critical Akzo Nobel N. V.
Publication of CZ277998A3 publication Critical patent/CZ277998A3/cs

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D401/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom
    • C07D401/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings
    • C07D401/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, at least one ring being a six-membered ring with only one nitrogen atom containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D417/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00
    • C07D417/14—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, at least one ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D415/00 containing three or more hetero rings
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/0202—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -NH-X-X-C(=0)-, X being an optionally substituted carbon atom or a heteroatom, e.g. beta-amino acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/022—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -X-C(=O)-(C)n-N-C-C(=O)-Y-; X and Y being heteroatoms; n being 1 or 2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/02—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link
    • C07K5/022—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -X-C(=O)-(C)n-N-C-C(=O)-Y-; X and Y being heteroatoms; n being 1 or 2
    • C07K5/0222—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing at least one abnormal peptide link containing the structure -X-C(=O)-(C)n-N-C-C(=O)-Y-; X and Y being heteroatoms; n being 1 or 2 with the first amino acid being heterocyclic, e.g. Pro, Trp
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06078—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aromatic or cycloaliphatic
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06104—Dipeptides with the first amino acid being acidic
    • C07K5/06113—Asp- or Asn-amino acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06139—Dipeptides with the first amino acid being heterocyclic
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Description

Oblast techniky
Vynález se týká inhibitorů serinproteázy s piperidinovým vedlejším řetězcem a farmaceutického prostředku, který tyto inhibitory obsahuje a je určen pro léčení a prevenci thrombotických onemocnění.
Dosavadní stav techniky
Serinproteázy jsou enzymy, které mimo jiné hrají důležitou úlohu při srážení krve. Do této skupiny proteáz je možno zařadit thrombin, trypsin, faktory Vila, IXa, Xa, Xla, Xlla a bílkovinu C.
Thrombin je serinproteáza, která řídí poslední stupeň koagulační kaskády. Primární funkcí thrombinu je štěpení fibrinogenu za vzniku monomerů fibrinu, které vytvoří zesítěním nerozpustný gel. Mimoto thrombin řídí svou vlastní produkci aktivací faktorů V a VIII v předchozích stupních kaskády. Má rovněž důležitý vliv na buněčné úrovni, kde působí na specifické receptory a vyvolává shlukování destiček, aktivaci endotheliálních buněk a proliferaci fibroblastů. Z toho je zřejmá ústřední úloha thrombinu při řízení zástavy krvádení a při tvorbě krevních sraženin. Inhibitory thrombinu mohou mít široké použití k léčebným účelům, z těchto důvodů byla uvedená látka podrobena extensivnímu výzkumu.
Při vývoji syntetických inhibitorů serinproteáz a zvláště thrombinu se zvýšil zájem o malé syntetické peptidy, které jsou rozpoznávány proteolytickými enzymy podobně jako přírodní látky. Byly proto připraveny nové inhibitory, podobné peptidům, například inhibitory pro přechodné stavy thrombinu.
- la V poslední době se vyhledávání účinnějších a selektivnějších inhibitorů thrombinu soustředilo na látky, které je možno podávat v nižších dávkách a na látky s menším počtem méně závažných vedlejších účinků. Důraz se klade také na biologickou dostupnost při perorálním podání. Inhibitory pro nitrožilní podání je možno použít při akutních stavech, avšak při prevenci takových chorob, jako je infarkt srdečního svalu, thromboza a mozková mrtvice při nutnosti dlouhodobého léčení je nejvýhodnější perorální podání účinné látky.
Většina známých inhibitorů thrombinu peptidové povahy obsahuje ve vedlejším řetězci arginin. Inhibitory s obsahem argininu však mají nízkou biologickou dostupnost při perorálním podání. Byly již popsány inhibitory, obsahující místo argininu lysin. Vzhledem k tomu, že lysin je méně bazický než arginin, byla v těchto případech očekávána vyšší biologická dostupnost při perorálním podání. Jako příklad inhibitorů s obsahem lysinu je možno uvést N-Me-D-Cha-Pro-Lys-COOH a jeho deriváty podle publikace Jones a další, J. Enzyme Inhibition, 9, 1995, 43 až 60 a inhibitory N-Me-D-Phe-Pro-Lys-X, kde X je zbytek karboxamidu nebo karboxylové kyseliny podle Lewis a další, Thrombosis and Haemostasis, 74(4), 1995, 1107 až 1112. Očekávané zlepšení však nebylo pozorováno a biologická dostupnost těchto inhibitorů je obdobná jako dostupnost inhibitorů s obsahem argininu podle Lewis a další, Thrombosis and Haemostasis, 74(4), 1995, 1107 až 1112. V patentové přihlášce WO 94/25 051 jsou popsány další inhibitory thrombinu, v nichž je postranní řetězec nahrazen aminocyklohexylovou skupinou, kterou lze považovat za isoster aminokyseliny lysinu.
Vynález si klade za úkol navrhnout novou skupinu inhibitorů bez uvedených nežádoucích účinků.
- 2 Podstata vynálezu
Inhibitory serinproteázy obecného vzorce I
/ )r
A-B-X-NH-CH-C(O)-Y (I) kde
A znamená atom vodíku, popřípadě substituovaný D,L-alfa-hydroxyacetyl, R^, R^-O-C(O)-, R^-C(O)-, R^-SO2~,
R2OOC-(CHR2) -SO,-, R2OOC-(CHR2) -, H,NCO-(CHR2) m £-. in £_ m nebo ochrannou skupinu na atomu dusíku, přičemž R znamená alkyl o 1 až 12 atomech uhlíku, alkenyl nebo alkinyl vždy o 2 až 12 atomech uhlíku nebo cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku, přičemž tyto skupiny mohou být substituovány substituentem ze skupiny cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku, alkoxyskupina o 1 až 6 atomech uhlíku, oxoskupina, OH, COOH, CFq nebo atom ha1 logenu, nebo může R znamenat aryl o 6 až 14 atomech uhlíku, aralkyl o 7 až 15 atomech uhlíku nebo aralke» . nyl o 8 až 16 atomech uhlíku a arylové skupiny jsou popřípadě substituovány substituentem ze skupiny alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku, alkoxyskupina o 1 až 6 atomech uhlí2 ku, OH, COOH, CFq nebo atom halogenu, R znamena neJ 1 závisle atom vodíku nebo má stejný význam jako R a m znamená celé číslo 1, 2 nebo 3,
B znamená jednoduchou chemickou vazbu, zbytek aminokyseliny vzorce -NH-CH/(CH2)pC(O)OH/-C(O)- nebo esterový derivát této skupiny, kde p znamená 0, 1, 2 nebo 3,
-N(alkyl)-CH2-CO- s alkyiovou částí o 1 až 12 atomech uhlíku, N-(alkenyl)-CH2~CO- nebo -N(alkinyl)-CH2-COs alkenylovou nebo alkinylovou částí o 2 až 12 atomech uhlíku, -N(benzyl)-CH2-CO-, D-l-Tiq, D-3-Tiq,
D-Atc, Aic, D-l-Piq, D-3-Piq nebo znamená B zbytek L- nebo D-aminokyseliny s hydrofobním postranním řetězcem, kterým je alkyl o 1 až 12 atomech uhlíku, popřípadě substituovaný nejméně jednou cykloalkylovou skupinou o 3 až 8 atomech uhlíku nebo arylovou skupinou o 6 až 14 atomech uhlíku, popřípadě obsahující heteroatom, například atom dusíku a může tedy jít o cyklohexyl, cyklooktyl, fenyl, pyridinyl, naftyl, tetrahydronaftyl a podobně, přičemž hydrofobní postranní řetězec je popřípadě substituován substituenty ze skupiny atom halogenu, trifluormethyl, nižší alkyl, jako methyl nebo ethyl, nižší alkoxyskupina, jako methoxyskupina, fenyloxyskupina, benzyloxyskupina a podobně, nebo B znamená zbytek L- nebo D-aminokyseliny s dózickým postranním řetězcem, například argininu nebo lysinu nebo znamená B zbytek L- nebo D-aminokyseliny s neutrálním postranním řetězcem, jako je methioninsulfon a podobně, přičemž hydrofobní, neutrální nebo bazický zbytek aminokyseliny je na atomu dusíku popřípadě substituován alkylovým zbytkem o 1 až 6 atomech uhlíku, nebo
A a B společně tvoří zbytek R3R4-N-CHR5-C(O)-, v němž R3 a
111
R nezávisle znamenají R . R -0-C(0)-, R -C(0)-,
R1-SO -, R2OOC-(CHR2) -SO -, R2OOC-(CHR2) -, H_NCO-(CHR2) ni í m ií m nebo ochrannou skupinu na atomu dusíku, nebo je některá 3 4 5 ze skupin R a R spojena s R za vzniku 5- nebo 6členného kruhu spolu se skupinou N-C, na niž jsou tyto substituenty vázány a uvedený kruh může být kondenzován
- 4 ·· · • · s alifatickým nebo aromatickým 6-členným kruhem a R5 znamená hydrofobní, bazický nebo neutrální postranní řetězec, znamená L-aminokyseliny s hydrofobním postranním řetězcem, zbytek šeřinu, threoninu, cyklické aminokyseliny, popřípadě obsahující další heteroatom ze skupiny N, 0 nebo S a popřípadě substituované alkylovým zbytkem nebo alkoxyskupinou vždy o 1 až 6 atomech uhlí ku, benzyloxyskupinou nebo oxoskupinou, nebo znamená X skupinu -NR -CH2~C(O)- nebo fragment vzorce z(CH2)\
-NH-CH N-CHrC(O)0 nebo
kde n znamená 2, nebo 4 a W znamená CH nebo
N, znamená H, -CHF2> -CF^, -CO-NH-alkylen-C^H^ o 1 až 6 atomech uhlíku v alkylenové části, -COOR , kde R° znamená atom vodíku nebo alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, -CONR R , kde R a R nezávisle znamenají H nebo alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku nebo společně tvoří alkylenový zbytek o 3 až 6 atomech uhlíku, nebo Y znamená heterocyklický zbytek ze skupiny 2-thiazol, 2-thiazolin, 2-benzothiazol, 2-oxazol, 2-oxazolin a 2-benzoxazol, přičemž tyto heterocyklické zbytky jsou popřípadě substituovány substituentem ze skupiny alkyl nebo alkoxyskupina vždy o 1 až 6 atomech uhlíku, fenyl, benzyloxy skupina nebo oxoskupina a r znamená celé číslo 0, 1, nebo 3,
- 5 jakož i prekurzory těchto sloučenin a jejich farmaceuticky přijatelné soli. Jde o účinné a selektivní inhibitory, mimoto mají některé sloučeniny podle vynálezu dobrou biologickou dostupnost při perorálním podání.
Sloučeniny podle vynálezu je možno použít k léčení a prevenci chorob, zprostředkovaných thrombinem nebo spojených s koncentrací thrombinu. Jde o celou řadu thrombotických a prothrombotických stavů, při nichž dochází k aktivaci koagulační kaskády, jde tedy například o hlubokou žilní thrombosu, plicní embolii, thromboflebitidu, uzávěr tepny na základě throinbozy nebo embolie, opětný uzávět tepny v průběhu angioplastiky nebo po ní nebo po rozpuštění thrombu, opětné zúžení po poranění tepny nebo po chirurgickém zákroku na srdci, pooperační žilní thromboza nebo embolie, akutní nebo chronická atherosklerosa, mozková mrtvice, infarkt myokardu, zhoubné nádory a jejich metastázy a neurodegenerativní onemocnění. Sloučeniny podle vynálezu mohou být použity také jako antikoagulační látky v mimotělním krevním oběhu, například při dialýze a některých chirurgických zákrocích. Dalším možným použitím je použití in vitro.
Výhodnými sloučeninami jsou ty sloučeniny obecného vzor ce I, v němž X znamená zbytek L-aminokyseliny s hydrofobním postranním řetězcem, šeřin, threonin nebo -NR -CH2-C(0)-.
Dalšími výhodnými sloučeninami obecného vzorce I jsou ty látky, v nichž A má svrchu uvedený význam, B znamená jednoduchou chemickou vazbu, zbytek aminokyseliny obecného vzorce -NH-CH/(CH2)pC(O)OH/-C(O)- nebo esterový derivát tohoto zbytku a p znamená 0, 1, 2 nebo 3, -N(alkyl)-CH2-CO- o 1 až 6 atomech uhlíku v alkylové části, -N(alkenyl)-CH2-C0- o 2 až 6 atomech uhlíku v alkenylové části, N-(benzyl)-CH2-CO-, D-l-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-l-Piq, D-3-Piq nebo zbytek
- 6 D-aminokyseliny s hydrofobním postranním řetezcem, popřípadě substituované na atomu dusíku alkylovým zbytkem o 1 až atomech uhlíku, nebo A a B společně tvoří zbytek 3 4 5
R R N-CHR —C(0)— a X znamená zbytek cyklické aminokyseliny, popřípadě obsahující další heteroatom ze skupiny N, 0 nebo
S a popřípadě substituované pinou vždy o 1 až 6 atomech oxoskupinou, nebo znamená X který z fragmentů
-NH-CH^^N-CH2-C(O)0 alkylovým zbytkem nebo alkoxyskuuhlíku, benzyloxyskupinou nebo skupinu -NR -CH2-C(O)- nebo ne-
Velmi výhodné jsou ty sloučeniny vzorce I, v nichž
A znamená atom vodíku, 2-hydroxy-3-cyklohexylpropionyl,
9-hydroxyfluoren-9-karboxyl, R^, R^-SO2-, R2OOC-(CHR2)m-S02~,
R2OOC-(CHR2) -, H„NCO-(CHR2) - nebo ochrannou skupinu na atomu dusíku, kde Rx znamená alkyl o 1 až 12 atomech uhlíku, alkenyl o 2 až 12 atomech uhlíku, aryl o 6 až 14 atomech uhlíku, aralkyl o 7 až 15 atomech uhlíku nebo aralkenyl o až 16 atomech uhlíku, R nezávisle znamenají vodík nebo mají týž význam jako Rx, B znamená jednoduchou chemickou vazbu, D-l-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-l-Piq, D-3-Piq nebo zbytek D-aminokyseliny s hydrofobním postranním řetězcem, popřípadě substituované na atomu dusíku alkylovým zbytkem o 1 až 6 atomech uhlíku, nebo A a B spolu tvoří zbytek
R3R4N-CHR5-C(0)-, Y znamená -CO-NH-alkylen-CcHc o 1 až 6 6 6 5 7 8 atomech uhlíku v alkylenové části, -COOR nebo -CONR R nebo znamená Y heterocyklický zbytek ze skupiny 2-thiazol,
2-thiazolin, 2-benzothiazol, 2-oxazol, 2-oxazolin a
2-benzoxazol.
• ·
Zvláště výhodné jsou ty látky, v nichž A znamená atom vodíku, R^-SOg- nebo R3OOC-(CHR3)m> B znamená jednoduchou chemickou vazbu, D-l-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-l-Piq,
D-3-Piq, nebo zbytek D-aminokyseliny s hydrofobním postran3 4 5 ním řetězcem a A a B společně tvoří zbytek R R N-CHR -C(0)-, .34 v němž alespoň jeden ze symbolu R a R znamena skupinu p p 1
R OOC-(CHR )m~ nebo R -S02~ a druhý z těchto zbytků nezávisle znamená alkyl o 1 až 12 atomech uhlíku, alkenyl nebo alkinyl vždy o 2 až 12 atomech uhlíku, cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku, aralkyl o 7 až 15 atomech uhlíku, R1-S02~ nebo 2 2 5
R OOC-(CHR ) - a R znamená hydrofobní postranní řetězec,
Y znamená -CO-NH-alkylen-CgH^ o 1 až 6 atomech uhlíku v alkylenové části nebo -COOR3, kde R6 je atom vodíku nebo alkyl o 1 až 3 atomech uhlíku, dále -C0NR7R3, kde R7 a R3 nezávisle znamenají vodík nebo alkyl o 1 až 3 atomech uhlíku nebo společně tvoří alkylenový zbytek o 3 až 5 atomech uhlíku nebo znamená Y heterocyklický zbytek ze skupiny 2-thiazol, 2-benzothiazol, 2-oxazol nebo 2-benzoxazol.
2
V případě, že A znamená skupinu R OOC-(CHR ) -, znamená B s výhodou zbytek D-aminokyseliny s hydrofobním postranním řetězcem nebo A a B společně tvoří zbytek
R3R4N-CHR5-C(0)-, v němž nejméně jeden ze zbytků R3 a R4 2 2 znamená skupinu R OOC-(CHR ) - a druhý nezávisle znamená alkyl o 1 až 12 atomech uhlíku, alkenyl o 2 až 6 atomech uhlíku, cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku, benzyl, R1-SO_2 2 nebo R OOC-(CHR ) - a X znamená zbytek 2-azitidinkarboxylové kyseliny, prolinu, kyseliny pipekolové nebo 4-thiazolidinkarboxylové, 3,4-dehydroprolinu, kyseliny 2-oktahydroindolkarboxylové nebo -/N-cykloalkyl/-CH2-C(0)- s cykloalkylovou částí o 3 až 8 atomech uhlíku. Zvláště výhodné jsou zejména ty látky, v nichž A znamená HOOC-CH2-, D-Phe, D-Cha, D-Coa, D-Dpa, p-Cl-D-Phe, p-Omethyl-D-Phe, p-Oethyl-D-Phe, D-Nle,
m-Cl-D-Phe, 3,4-di-OMe-D-Phe, D-Chg, nebo A a B společně 3 4 5 tvoří zbytek R R N-CHR -C(0)-, v němž nejméně jeden ze zbyto Λ ků R a R znamená HOOC-CH2- a druhý z těchto zbytků nezávisle znamená alkyl, alkyl-SO-- s alkylovou částí vždy o 1 až 4 atomech uhlíku nebo HOOC-CH2~ a R znamená cykloalkyl, cykloalkylalkyl s cykloalkylovou částí o 3 až 8 a alkylovou částí o 1 až 4 atomech uhlíku, fenyl, benzyl, popřípadě substituovaný atomem chloru nebo alkoxyskupinou o 1 až 4 atomech uhlíku. Nejvýhodnější jsou ty látky, v nichž A znamená HOOC-CH2-, B znamená D-Cha, X znamená zbytek prolinu nebo -/N(cyklopentyl)/-CH2-C(O)-.
V případě, že A znamená skupinu R^-SO2-, znamená B s výhodou jednoduchou chemickou vazbu, D-l-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc,
Aic, D-l-Piq, D-3-Piq nebo zbytek D-aminokyseliny s hydrofobním postranním řetězcem nebo A a B spolu tvoří zbytek
O λ c O A
R R N-CHR -C(0)-, v němž nejméně jeden ze zbytků R a R znamená skupinu r1-S09- a druhý nezávisle znamená alkyl o 1 až 12 atomech uhlíku nebo skupinu R -S02~, X znamena zbytek kyseliny 2-azetidinkarboxylové, prolinu, kyseliny pipekolové, 4-thiazolidinkarboxylové, 3,4-dehydroprolinu, kyseliny 2-oktahydroindolkarboxylové, -/N-cykloalkyl/-CH2~C(0)- o 3 až 8 atomech uhlíku v cykloalkylové části nebo fragment
-NH-CH
N-CHrC(O)nebo
Zvláště výhodné jsou také ty látky, v nichž A znamená ethyl-SO2~ nebo benzyl-SO2-, B znamená jednoduchou chemickou vazbu, D-Phe, D-Cha, D-Coa, D-Dpa, p-Cl-D-Phe, o-Omethyl-D-Phe, p-Oethyl-D-Phe, D-Nle, m-Cl-D-Phe, 3,4-di-OMe-D-Phe, D-Chg
- 9 • · • ·« • · · · • ·
4 5 nebo A a B společně tvoří zbytek R R N-CHR -C(0)-, v němž 3 4 nejméně jeden ze zbytku R a R znamená ethyl-SO2~ nebo benzyl-SO9- a druhý nezávisle znamená alkyl o 1 až 12 atoz 1 5 x mech uhlíku nebo R -S02- a R znamena cykloalkyl o 3 az 8 atomech uhlíku, cykloalkylalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku v cykloalkylové části o 1 až 4 atomech uhlíku v alkylové části, fenyl, benzyl, difenylmethinyl, přičemž tyto skupiny jsou popřípadě substituovány atomem chloru nebo alkoxyskupinou o 1 až 4 atomech uhlíku. Nejvýhodnější jsou ty látky, v nichž A znamená ethyl-SC^-, B znamená D-Cha a X znamená zbytek prolinu nebo -/N-cyklopentyl/-CH2-C(0)-.
Nejvýhodnějším významem pro r ve sloučeninách vzorce I je celé číslo 1.
Ochrannou skupinou na atomu dusíku ve významu symbolu A může být jakákoliv ochranná skupina, běžně užívaná v případě peptidů. Vhodné ochranné skupiny je možno nalézt v publikaci T. W. Green a P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2. vydání (Wiley, N.Y., 1991) a také v publikaci The peptides, Analysis, Synthesis, Biology, sv.
3, E. Gross a J. Meienhofer, Eds., Academie Press, New York, 1981.
Pod pojmem případně substituovaný D,L-alfa-hydroxyacetyl se rozumí skupina HO-CR^^-CÍO)-, kde Ra a Rb nezávisle znamenají atom vodíku nebo hydrofobní postranní řetězec nebo společně tvoří 5- nebo 6-členný kruh, popřípadě kondenzovaný s jedním nebo dvěma alifatickými nebo aromatickými 6-člennými kruhy, přičemž tento 5- nebo 6-členný kruh je tvořen atomy uhlíku a popřípadě jedním heteroatomem ze skupiny N, 0 a S. Výhodnými D,L-alfa-hydroxyacetylovými skupinami jsou 2-hydroxy-3-cyklohexylpropionyl a 9-hydroxyfluoren-9-karboxyl
Alkylovým zbytkem o 1 až 12 atomech uhlíku může být alkylový zbytek s přímým nebo rozvětveným řetězcem, například
- 10 methyl, ethyl, terc.butyl, Isopentyl, heptyl, dodecyl a podobně. Výhodnými alkylovými skupinami jsou skupiny o 1 až 6 atomech uhlíku. Ve významu R , R a R jsou nejvýhodnějšími skupinami alkylové skupiny o 1 až 3 atomech uhlíku, jako methyl, ethyl a isopropyl. Alkenylová skupina o 2 až 12 atomech uhlíku je nenasycená uhlovodíková skupina s přímým nebo rozvětveným řetězcem, výhodné jsou skupiny o 2 až 6 atomech uhlíku. Jako příklady těchto skupin je možno uvést ethenyl, propenyl, allyl a podobně.
Alkylenový zbytek o 1 až 6 atomech uhlíku může rovněž mít přímý nebo rozvětvený řetězec, jde o zbytek -(CH2)m-, v němž m je celé číslo 1 až 6, -CH(CHg)-, -CH(CHg)-(CH2)a pod. Výhodnými alkylenovými skupinami ve významu Y jsou ethylenová amethylenová skupina.
Álkinylová skupina o 2 až 12 atomech uhlíku je skupina, obsahující trojnou vazbu, která může mít přímý nebo rozvětvený řetězec. Výhodné jsou skupiny o 2 až 6 atomech uhlíku, například ethinyl a propinyl.
Arylové skupiny o 6 až 14 atomech uhlíku jsou aromatické skupiny, které mohou mimoto obsahovat nejméně jeden heteroatom ze skupiny N, S nebo 0. Jako příklady těchto skupin je možno uvést fenyl, naftyl, (iso)chinolyl, indanyl a podobně. Nejvýhodnější je řenylový zbytek.
Aralkylové skupiny o 7 až 15 atomech uhlíku a aralkenylové skupiny o 8 až 16 atomech uhlíku jsou alkylové a alkenylové skupiny, substituované jednou nebo větším počtem arylových skupin, skupiny mají svrchu uvedený celkový počet uhlíkových atomů.
Alkoxyskupina o 1 až 6 atomech uhlíku má alkylovou část ve svrchu uvedeném významu.
- 11 Cykloalkylovým zbytkem o 3 až 8 atomech uhlíku může být například cyklopropyl, cyklobutyl, cyklopentyl, cyklohexyl, cykloheptyl nebo cyklooktyl. Výhodnými zbytky jsou cyklopentyl a cyklohexyl.
Atomem halogenu se rozumí atom fluoru, chloru, bromu nebo jodu.
Pod pojmem esterový derivát se rozumí příslušný ester, jako alkylestery o 1 až 4 atomech uhlíku v alkylové části, například methyl-, ethyl- nebo terč.butylester.
Výraz 1- a 3-Tiq znamená 1,2,3,4-tetrahydroisochinolin-1- nebo -3-karboxylovou kyselinu, 1- a 3-Piq znamená 1- a 3-karboxyperhydroisochinolin, Atc znamená 2-aminotetralin-2-karboxylovou kyselinu, Aic znamená aminoindankarboxylovou kyselinu, Phe znamená fenylalanin, Cha znamená cyklohexylalanin, Dpa znamená difenylalanin, Coa znamená cyklooktylalanin, Chg znamená cyklohexylglycin, Nle znamená norleucin a Asp znamená kyselinu asparagovou.
Pojem hydrofobní postranní řetězec znamená alkyl o 1 až 12 atomech uhlíku, popřípadě substituovaný jedním nebo větším počtem cykloalkylových skupin o 3 až 8 atomech uhlíku nebo arylových skupin o 6 až 14 atomech uhlíku, popřípadě obsahujících heteroatom, například atom dusíku, může jít o cyklohexyl, cyklooktyl, fenyl, pyridinyl, naftyl, tetrahydronaftyl a podobně. Tento hydrofobní postranní řetězec může být popřípadě substituován substituenty ze skupiny atom halogenu, trifluormethyl, nižší alkyl, jako methyl nebo ethyl, nižší alkoxyskupina, například methoxyskupina, fenyloxyskupina, benzyloxyskupina a podobně.
- 12 V případě, že je některý ze zbytků substituován, může být vždy substituován jedním nebo větším počtem skupin.
Aminokyselinami s bazickým postranním řetězcem jsou například arginin a lysin, s výhodou arginin. Aminokyselinou s neutrálním postranním řetězcem je například methioninsulfon a podobně.
Cyklickými aminokyselinami jsou například 2-azetidinkarboxylová kyselina, prolin, kyselina pipekolová, 1-amino-1-karboxycykloalkan o 3 až 8 atomech uhlíku v alkylové části, s výhodou obsahující 4, 5 nebo 6 atomů uhlíku, kyselina 4-piperidinkarboxylová nebo 4-thiazolidinkarboxylová, 3,4-dehydroprolin, azaprolin, kyselina 2-oktahydroindolkarboxylová a. podobně. Výhodné jsou zejména 2-azetidinkarboxylová kyselina, prolin, kyselina pipakolová, 4-thiazolidinkarboxylová, 3,4-dehydroprolin a kyselina 2-oktahydroindolkarboxylová. Pod pojmem prekursor se rozumí sloučenina, v níž je dusíkový atom piperidinové skupiny ve sloučenině obecného vzorce I chráněn, například hydroxyskupinou, aikoxyskupinou o 1 až 6 atomech uhlíku nebo alkoxykarbonylovou skupinou o 1 až 6 atomech uhlíku v alkoxylové části.
Součást podstaty vynálezu tvoří také způsob výroby sloučenin obecného vzorce I, který spočívá ve vazbě vhodně chráněných aminokyselin nebo analogů aminokyselin s následným odstraněním ochranných skupin.
Sloučeniny obecného vzorce I je možno připravit běžnými postupy. Modifikované aminokyseliny s piperidinovým postranním řetězcem je možno navázat způsobem, který je obdobný vazbě jiných aminokyselin.
Postupuje se tak, že se vhodné, Nalfa-chráněné aminokyseliny (chráněné rovněž na postranním řetězci, v případě
- 13 jeho reaktivity), deriváty aminokyselin nebo peptidů aktivují a pak se uskuteční jejich vazba na vhodné deriváty aminokyselin nebo peptidů s chráněnou karboxylovou skupinou, v roztoku nebo na pevném nosiči. Aminoskupina v poloze alfa se obvykle chrání urethanovou funkcí, například pomocí terč.butyloxykarbonylové skupiny (Boc), labilní v kyselém prostředí, benzyloxykarbonylové skupiny (Z) a substituovaných analogů 9-fluorenylmethoxykarbonylove skupiny (Fmoc), labilní v alkalickém prostředí. Skupinu Z je také možno odstranit katalytickou hydrogenací. Z jiných ochranných skupin pro aminoskupinu je možno uvést Nps.Bmv, Bpoc, Msc, a podobně. Přehled ochranných skupin pro aminoskupinu je možno nalézt v publikaci The Peptides, Analysis, Synthe sis, Biology, sv. 3, E. Gross a J. Meienhofer, Eds., Acade mic Press, New York, 1981. Karboxylovou skupinu je možno chránit tvorbou esteru, například labilního v alkalickém prostředí, jako methyl- nebo ethylesteru nebo labilního v kyselém prostředí, jako terč.butylesteru nebo hydrogenolyticky labilního esteru, jako benzylesteru. Piperidinový postranní řetězec je rovněž možno chránit při použití svrchu uvedených skupin. Aktivace karboxylové skupiny chráněné aminokyseliny nebo peptidů je možno dosáhnout působením azidu, směsného anhydridu, aktivního esteru nebo karbodiimidu, zejména přidáním katalytických látek, potlačujících racemizaci, jako jsou 1-hydroxybenzotriazol, N-hydroxysukcinimid, 3-hydroxy-4-oxo-3,4-dihydro-l,2,3-benzotriazin, N-hydroxy-5-norbornen-2,3-dikarboximid a podobně, podrobnosti je možno nalézt v publikacích The Peptides, Analysis Synthesis, Biology (svrchu) a také Pure and Applied Chem., 59(3), 331 až 344, 1987.
Sloučeniny podle vynálezu, které mohou mít formu volných látek, je možno izolovat z reakční směsi ve formě jejich farmaceuticky přijatelných solí. Farmaceuticky při• · · · ·
- 14 jatelné soli je možno připravit také tak, že se na volnou látku obecného vzorce I působí organickou nebo anorganickou kyselinou, například kyselinou chlorovodíkovou, bromovodíkovou, jodovodíkovou, sírovou, fosforečnou, octovou, propionovou, glykolovou, maleinovou, malonovou, methansulfonovou, fumarovou, jantarovou, vinnou, citrónovou, benzoovou nebo askorbovou.
Sloučeniny podle vynálezu obsahují nejméně jeden chirální atom uhlíku a z tohoto důvodu je možno je připravit ve formě čistého enanclomeru nebo ve formě směsi enanciomerů nebo ve formě směsi, obsahující diastereomery. Způsoby získávání čistých enanciomerů jsou v oboru známé, jde například o krystalizací solí, které byly připraveny při použití opticky aktivních kyselin a racemických směsí nebo o chromatografii s použitím chirálních sloupců. V případě diastereomerů je možno použít chromatografické sloupce, popřípadě v reverzní fázi.
Sloučeniny podle vynálezu je možno podávat enterálně nebo parenterálně. Celková denní dávka pro člověka se bude s výhodou pohybovat v rozmezí 0,001 až 100 mg/kg tělesné hmotnosti a zvláště v rozmezí 0,01 až 10 mg/kg tělesné hmotnosti. Účinné látky podle vynálezu je možno mísit s běžnými farmaceutickými pomocnými látkami, tak jak je popsáno například v souhrnné publikaci Gennaro a další, Remington*s Pharmaceutical Sciences, 18. vydání, Mack Publishing Company, 1990, zvláště v části 8: Pharmaceutical Preparations and Their Manufacture a pak je možno směs s obsahem účinných látek například lisováním zpracovávat na pevné lékové formy jako pilulky nebo tablety nebo je možno směs plnit do kapslí nebo užít pro výrobu čípků. Při použití farmaceuticky přijatelných kapalin je možno sloučeniny podle vynálezu zpracovat
··* · · · · · • · · · · · • · · · · · · · • · · · · ······· ·· · ·
- 15 pro podání ve formě roztoku, suspenze nebo emulze, například pro injekční podání, nebo ve formě spreje, například pro podání do nosu.
Při výrobě tlakových forem, například tablet, je možno užít běžné přísady, jako plniva, barvíva, polymerni pojivá a podobně. Obecně je možno užít jakoukoliv farmaceutickou pomocnou látku, která neruší účinek sloučenin podle vynálezu. Z vhodných nosičů je možno uvést mléčný cukr, škrob, deriváty celulosy a podobně a jejich směsi.
Praktické provedení vynálezu bude osvětleno následujícími příklady, které však nemají sloužit k omezení rozsahu vynálezu. V těchto příkladech se pod pojmy -Ppa ψ/ΟΟΟΟΖ-ΟΗ, -Ppa-OMe a -Ppa-(2-thiazolyl) rozumí
-NH-CH-C(O)-Y kde Y znamená COOH, OCH^ nebo 2-thiazolyl.
Dále byly použity ještě následující zkratky:
Azt = kyselina 2-azetidinkarboxylová,
Boc = terč.butyloxykarbonyl,
Cbz = benzyloxykarbonyl,
TsOH= kyselina p-toluensulfonová.
- 16 Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
H00C-CH2-D-Cha-Pro-Ppa-Y [COCO] -OH
Část a: H-D-Cha-OMe · HC1
Do 195 ml bezvodého metanolu o teplotě -20eC se po kapkách přidá 28 ml thionylchloridu. Do reakčního roztoku se přidá 40 g H-D-Cha-OH-HCl a reakční směs se zahřívá pod refluxem 5 hodin. Reakční směs se zahustí ve vakuu a třikrát se odpařuje z metanolu. Zbytek se nechá krystalizovat ze směsi metanolu a dietyleteru za vzniku 40,9 g H-D-Cha-OMe · HCl jako bílého krystalického prášku.
TLC: Rf = 0,66, silikagel, eluční činidlo: směs n-butanolu, kyseliny octové a vody v poměru 10:1:3.
Část b: N-(t-butyloxykarbonylmetyl)-D-Cha-OMe
Do míchaného roztoku 40,9 g H-D-Cha-OMe-HCl ve 400 ml acetnitrilu se přidá 36 g t-butyl-bromacetátu. Reakční směs se přidáním N,N-diisopropyletylaminu přivede na pH 8,5 a reakční směs se 16 hodin míchá při teplotě místností, a následně se odpařuje ve vakuu. Zbytek se rozpustí v dichlormetanu a roztok se promyje vodou, suší se nad síranem sodným a odpařuje se ve vakuu. Vytvořený zbytek se po absorbci na kolonu silikagelu čistí chromatografií při eluci směsí heptanu a • · · · · 4 · • · · 4 · ·· · • 4 9 9 9 9 • · · 99 4 · 4 • · 4 4 · · · ··· · 4·· 4··· ·· 99 etylacetátu v poměru 9:1 za vzniku 64 g N-(t-butyloxykarbonylmetyl)-D-Cha-OMe.
TLC: Rf = 0,25, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu a heptanu v poměru 1:1.
Část c: N-(t-butyloxykarbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-OMe
Do reakčního roztoku 64 g N-(t-butyloxykarbonylmetyl) -D-Cha-OMe a 40,3 g di-t-butyl-dikarbonátu se k pH 8,5 přidá N,N-diisopropyletylaminu. Reakčni směs se 16 hodin míchá při teplotě místnosti, rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a do zbytku se přidá dichlormetan a vody. Organický podíl se oddělí, promyje se studeným IN roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, suší se nad síranem sodným a odpařuje se za vzniku 59,6 g N-(t-butyloxykarbonylmetyl) -N-Boc-D-Cha-OMe jako amfoterní pevné látky.
TLC: Rf = 0,50, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu a heptanu v poměru 1:1.
Část d: N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-OH
Na roztok 59,6 g N-(t-butyloxykarbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-OMe v 900 ml směsi dioxanu a vody v poměru 9:1 se při teplotě místnosti působí 6N roztokem hydroxidu sodného k udržení pH 12 roztoku. Reakčni směs se vlije do vody a extrahuje se dichlormetanem. Organický podíl se promyje vodou a suší se nad síranem sodným. Filtrát se odpaří za vzniku 54 g N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)- 18 4 « · 4· ·· ·· • · · · 4 4 · · 4 · «
4* · 4 4 4 4· ······ 4 4 4 444· 4
4 4 4 4 · 4
444 A 4*4 4444 44 44
-N-Boc-D-Cha-OH.
TLC (etylacetát:hexan = 1:1): Rf = 0,60, silikagel, eluční činidlo: směs dichlormetanu a metanolu v poměru
9:1.
Část e: N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-OBzl
Do studeného roztoku 13,5 g N-(t-butyloxy-karbonyl-metyl)-N-Boc-D-Cha-OH ve 150 ml N,N-dimetylformamidu se postupně přidává 7,09 g 1-hydroxy-benztriazolu (HOBT), 7,61 g dicyklohexyl-karbodiimidu (DCCI), 9,31 g H-Pro-OBzl -HC1 a 6 ml trietylaminu. Reakčni směs se 1 hodinu míchá při teplotě 0eC, a pak se teplota přes noc udržuje na teplotě místnosti. Reakčni směs se zchladí na teplotu -20°C a dicyklohexylmočovina se odstraní filtrací. Po odpaření filtrátu dosucha se vytvořený zbytek rozpustí v etylacetátu a důkladně se promyje 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou, 3% roztokem kyseliny citrónové a nasyceným roztokem chloridu sodného. Po sušení nad síranem sodným a zahuštění ve vakuu vznikne zbytek, který se po absorbci na kolonu silikagelu čistí chromatografií při eluci směsí heptanu a etylacetátu v poměru 3:1. Podíly obsahující N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-OBzl se sloučí a odpaří za vzniku 15 g produktu.
TLC: Rf = 0,70, silikagel, eluční činidlo: směs heptanu a etylacetátu v poměru 1:1.
- 19 • · · • · ··
Část f: N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH
Do roztoku 15 g N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-OBzl v 150 ml metanolu se přidá 750 mg 10% roztoku paladia na aktivním uhlí. Reakční směs se 1 hodinu hydrogenuje při tlaku 0,lMPa a při teplotě místnosti. Katalyzátor se odstraní filtrací, rozpouštědlo se odstraní odpařováním za sníženého tlaku. Vznikne 11,2 g N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH.
TLC: Rf = 0,65, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 213:20:6:11.
Část g: dietyl-2-acetamido-2-[(pyridin-4-yl)metyl]malonát
Do 3,5 1 etanolu se přidá 46 g kovového sodíku a směs se zahřívá. Do vytvořeného roztoku etoxidu sodného se přidá 217 g dietyl-acetamido-malonátu a 164 g 4-pikolyl-chlorid-hydrochloridu. Reakční směs se 4 hodiny zahřívá na teplotu 100eC, zchladí se, filtruje se a zahustí ve vakuu. Vytvořený zbytek se rozpustí v dichlormetanu, roztok se filtruje přes diacel a silikagel a zahustí se ve vakuu. Na vytvořený zbytek se působí 1 1 dietyleteru, roztok se filtruje a promyje se dietyleterem za vzniku 142 g dietyl-2-acetamido-2-[(pyridin-4-yl)metyl]malonátu.
TLC: Rf = 0,5, silikagel, směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:5:1,5:2,75.
Část h: etyl-2-acetamido-2-[(pyridin-4-yl)metyl]malonát
Šestnáct hodin se míchá roztok 142 g dietyl-2-acetamido-2-[(pyridin-4-yl)metyl]malonátu, 46 g hydroxidu draselného ve 2 1 etanolu a 800 ml vody. Reakční směs se okyselí a zahustí ve vakuu. Současným odpařováním s metanolem a toluenem vznikne 187 g etyl-2-acetamido-2-[(pyridin-4-yl)metyl]malonátu obsahujícího chlorid draselný.
TLC: Rf = 0,95, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63 : 5.: 1,5 : 2,5 .
Část i: etyl-2-N-acetylamido-3-(pyridin-4-yl)propanoát
Po refluxem se 1,5 hodiny zahřívá roztok 394 g etyl-2-acetamido-2-[(pyridin-4-yl)metyl]malonátu v 1,5 1 N,N-dimetylformamidu a roztok se zahustí ve vakuu. Vytvořený zbytek se rozpustí ve vodě. Po přivedení směsi na pH 11,5 se směs extrahuje etylacetátem, suší se nad síranem sodným a zahustí se ve vakuu za vzniku 158,8 g etyl-2-N-acetylamido-3-(pyridin-4-yl)propanoátu.
TLC: Rf = 0,35, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:5:1,5:2,75.
Část j: Ac-Ppa-OEt
Za přítomnosti 4 g 10% roztoku paladia na aktivním uhlí jako katalyzátoru se v atmosféře vodíku redukuje roztok 39,5 g etyl-2-N-acetylamido-3-(pyridin-4-yl)propanoátu vil etanolu. Po 18 hodinách se katalyzátor odstraní filtrací a filtrát se zahustí dosucha za vzniku 40 g Ac-Ppa-OEt.
Část k: H-Ppa-OH
Roztok 81,5 g Ac-Ppa-OEt v 6 N roztoku kyseliny chlorovodíkové se 4 hodiny refluxuje. Reakční směs se zahustí ve vakuu za vzniku 90 g H-Ppa-OH-HCI.
TLC: Rf = 0,97, silikagel, eluční činidlo: směs
1-butanolu,pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 8:3:1:4.
Část 1: Cbz-Ppa(Boc)-OH
Přidáním 2N roztoku hydroxidu sodného se pH roztoku 90 g H-Ppa-OH, 51,23 g pentahydrátu sulfátu měďnatého a 166 g di-t-butyl-dikarbonátu v 1730 ml vody a 1250 ml dioxanu přivede na pH 9. Reakční směs se 16 hodin míchá při teplotě místnosti, sraženina se sebere a dokonale se promyje vodou. Filtrační koláč se rozpustí v dioxanu a přidáním 4N roztoku hydroxidu sodného se pH přivede na 12,5. Po přidání 200 g benzyloxy-karbonyloxy-sukcinimidu se směs 16 hodin míchá. Sraženina se sebere a promyje se dioxanem. Filtrát se zahustí na malý objem a
- 22 pH se přivede na 2,5. Zbytek se zředí etylacetátem. Organický podíl se promyje vodou, suší se nad síranem sodným a odpařuje se dosucha za vzniku 160 g Cbz-Ppa(Boc)-OH.
TLC: Rf = 0,77, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:20:6:11.
Část m: Cbz-Ppa(Boc)-OMe
Do roztoku 160 g Cbz-Ppa(Boc)-OH ve 3 1 směsi dichlormetanu a metanolu v poměru 9:1 se přidá 120 g 2-(lH-benztriazol-l-yl)-1,1,3,3-tetrametyl-uronium-tetrafluorborátu (TBTU). Přidáním trietylaminu se pH reakční směsi přivede na 8,5. Reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti. Organický podíl se promyje 2N roztok kyseliny chlorovodíkové, vodou, 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného a vodou, suší se nad síranem sodným a zahustí se ve vakuu. Vytvořený zbytek se po absorbci na kolonu silikagelu čistí chromatografií při eluci směsí dichlormetanu a etylacetátu v poměru 9:1. Podíly obsahující metylester se oddělí, rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se nechá krystalizovat ze směsi diisopropyleteru a dietyleteru za vzniku 75 g části výtěžku požadované sloučeniny. Matečná sloučenina se čistí chromatografií při eluci směsí toluenu a etylacetátu v poměru 8:2 za vzniku 34 g
Cbz-Ppa(Boc)-OMe. TLC: Rf = 0,77, silikagel, směs dichlormetanu a metanolu v poměru 95:5.
- 23 Část n: 2-acetoxy-3-(benzyloxy-karbonylamino)-4-(1-t-butyloxy-karbonyl(piperidin-4-yl)butanitril
Do míchaného roztoku 109 g Cbz-Ppa(Boc)-OMe ve 3 1 dichlormetanu se při teplotě -78 °C přidá 908 ml předem zchlazeného l,0M roztoku diisobutyl-amonium-hydridu v hexanu tak, aby se teplota nezvýšila nad -70°C. Roztok se 1 hodinu míchá při teplotě -70°C a přidá se 1 1 nasyceného roztoku kyseliny citrónové. Reakční směs se vlije do 2 1 kyseliny citrónové a extrahuje se dichlormetanem. Sloučené extrakty se promyjí vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanů sodného a vodou, suší se nad síranem sodným a filtrují se. Filtrát se zchladí na 0°C a postupně se přidá 15 g benzyltrietyl-amoniumchloridu, 58 ml anhydridu kyseliny octové a roztok 118 g kyanidu sodného v 1,5 1 vody. Reakční směs se 30 minut energicky míchá. Organický podíl se oddělí, dvakrát se promyje vodou, suší se nad síranem sodným a zahustí se ve vakuu. Vytvořený zbytek se po absorbci na kolonu silikagelu čistí chromatografií při eluci směsí hexanu a etylacetátu v poměru 6:4 za vzniku 98 g 2-acetoxy-3-(benzyloxy-karbonylamino)-4-(1-t-butyloxy-karbonyl(piperidin-4-yl)butanitrilu jako pevné látky.
TLC: Rf = 0,65, sílikagel, eluční činidlo: směs dichlormetanu a metanolu v poměru 95:5.
Část o: Cbz-PpaT [CHOCHO] -OMe
Na míchanou suspenzi 98 g 2-acetoxy-3-(benzyloxy-karbonylamino)-4-(1-t-butyloxy-karbonyl(piperidin-4-yl)butanitrilu ve 3 1 směsi dietyleteru a metanolu v poměru 9:1 se při teplotě -20°C působí 260 g plynného chlorovodíku. Reakční směs se 24 hodin míchá při teplotě 0-5°C, zchladí se na -20°C a přidá se 408 ml vody. Reakční směs se 4 hodiny míchá při teplotě 20°C a organický podíl se oddělí. Přidáním 25% roztoku amoniaku se přivede pH vodného podílu na pH 8, a podíl se pak extrahuje 1-butanolem. Sloučené extrakty se promyjí nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a odpařuje se dosucha za vzniku 57 g Cbz-Ppa^F [CHOCHO] -OMe.
TLC: Rf = 0,5, oxid křemičitý, eluční činidlo: směs etylacetátu,pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:20:6:11.
Část p: Cbz-Ppa(Boc)Ψ [CHOCHO]-OMe
Přidáváním trietylaminu se upraví pH roztoku 57,9 g Cbz-PpaT [CHOCHO]-OMe a 40 g di-t-butyl-dikarbonátu v 500 ml N,N-dimetylformamidu na pH 8,5. Reakční směs se 45 minut míchá při teplotě místnosti, rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se rozpustí v etylacetátu. Roztok se promyje 0,lN roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou. Organický podíl se suší nad síranem sodným a odpařuje se dosucha. Vytvořený zbytek se po absorbci na kolonu silikagelu čistí chromatografií při eluci směsí heptanu a etylacetátu v poměru 6:4 za vzniku 31 g Cbz-Ppa (Boc)Ψ [CHOCHO] -OMe jako oleje.
Část q: N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa (Boc) Ψ [CHOCHO] -OMe
Za přítomnosti 12 mg 10% roztoku paladia na aktivním uhlí se při tlaku 0,lMPa hydrogenuje roztok 120 mg Cbz-Ppa (Boc) Ψ [CHOCHO]-OMe a 0,27 ml IN roztoku kyseliny chlorovodíkové ve 4 ml N,N-dimetalformamidu. Po ukončení reakce se katalyzátor odstraní a přidáním trietylaminu se pH přivede na 8,5. Tento roztok se přidá do míchaného roztoku 137 g N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH, 40 mg 1-hydroxy-benztriazolu a 61 mg 1,3-dicyklohexyl-karbodiimidu v 10 ml N, N-dimetylformamidu. Reakční směs se 16 hodin míchá při teplotě místnosti, rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a do vytvořeného zbytku se přidá dichlormetan. Sraženina se filtruje a filtrát se promyje IN roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou. Organický podíl se suší nad síranem sodným a odpaří se ve vakuu za vzniku 220 mg N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa (Boc) Ψ [CHOCHO] -OMe .
TLC: Rf = 0,6, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:5:1,5:2,75.
• ·
- 26 Část r: N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa (Boc) Ψ [CHOCHO] -OH
Do roztoku 220 mg N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa (Boc) Ψ [CHOCHO] -OMe v 15 ml směsi dioxanu a vody v poměru 9:1 se k pH 12 přidává IN roztok hydroxidu sodného. Reakční směs se 1,5 hodiny míchá, přidá se IN roztoku kyseliny chlorovodíkové k pH 2,5 a reakční směs se vlije do vody a extrahuje se etylacetátem. Organický podíl se promyje vodou, suší se nad síranem sodným a odpařuje se dosucha za vzniku 210 mg N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa (Boc) Ψ [CHOCHO] -OH. TLC: Rf = 0,21, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:5:1,5:2,75.
Část s: N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa (Boc) Ψ [COCO] -OH
Do 210 mg roztoku N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa (Boc) Ψ [CHOCHO] -OH ve 20 ml díchlormetanu se přidá 177 mg 1,1,1-triacetoxy-l,1-dihydro-l,2-benzjodoxol-3-(1H)-onu (činidlo Dess-Martinovo). Reakční směs se 4 hodiny míchá při teplotě místnosti, vlije se do 5% vodného roztoku thiosulfátu sodného a extrahuje se dichlormetanem. Organický podíl se promyje vodou, suší se nad síranem sodným a zahustí se ve vakuu za vzniku 340 mg výsledného produktu. TLC: Rf = 0,4, silikagel, směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:20:6:11.
• · • ·
- 27 • · · · • · fe · · ·
Část t: HOOC-CH.-D-Cha-Pro-Ppa-^P [COCO]-OH
Při teplotě místnosti se 4 hodiny míchá roztok 340 mg N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa(Boc)-Ψ [COCO]-OH ve 20 ml 90% roztoku kyseliny trifluoroctové. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a vytvořený zbytek se čistí preparativní HPLC na koloně supelcosil LC-18-BD při eluci gradientem elučních činidel od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 55%, C 25 % během 45 minut při rychlosti průtoku 20ml/min. (A = 0,5M fosfátový pufr pH = 2,1; B = voda; C = směs acetnitrilu a vody v pomě.ru 3:2). Vznikne 53,7 mg směsi diastereoisomerů výsledného produktu.
Rt (kapalinová chromatografie) = 22,65 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 2
HOOC-CH2-D-Cha-N-cyklopentyl-Gly-Ppa-T [COCO] -OH
Část a: N-cyklopentyl-Gly-OMe-HCI
Ve 400 ml metanolu se rozpustí 46,4 g H-Gly-OMe-HCI, přidá se 34 g cyklopentanonu a 14 g kyanborhydridu sodného a reakce probíhá 16 hodin při teplotě místnosti. Reakce se ukončí přidáním 6M roztoku kyseliny chlorovodíkové do pH 2 a 30 minut se míchá při teplotě místnosti. Rozpouštědlo se odstraní odpařováním za sníženého tlaku, zbytek se rozpustí ve vodě a promyje se di• · · · · · • · · · ·
- 28 etyleterem. Po přidání 6 M roztoku hydroxidu sodného k hodnotě pH vyšší než 10 se produkt extrahuje dichlormetanem, promyje se nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným, filtruje se a zahustí za sníženého tlaku. Sloučenina se nechá krystalizovat z etylacetátu za vzniku 43,5 g hydrochloridu N-cyklopentyl-Gly-OMe.
TLC: Rf = 0,71, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 88:31:18:7.
Část. b: N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-N-cyklopentyl-Gly-OH
Výsledná sloučenina se připraví podle postupu příkladu 1 pro dipeptidovou skupinu za použití TBTU jako aktivátoru.
Část c: HOOC-CHj-D-Cha-N-cyklopentyl-Gly-Ppa-T [COCO] -OH
Vazebná reakce N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-N-cyklopentyl-Gly-OH a H-Ppa (Boc) Ψ [CHOCHO]-OMe-HCl v přítomnosti DCCI/HOBt, saponifikace, Dess-Martinova oxidace, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny jako směsi diastereoisomerů.
Rt (kapalinová chromatografie) = 29,72 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
- 29 Příklad 3
HOOC-CH2-D-Phe-Pro-Ppa-T [COCO] -OH
N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Phe-Pro-OH se připraví podle příkladu 1 za použití H-D-Phe-OH -HCI jako výchozí sloučeniny.
Vazebná reakce N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Phe-Pro-OH a H-Ppa (Boc) Ψ [CHOHCO]-OMe-HCI za přítomnos ti DCCI/HOBt, saponifikace, Dess-Martinova oxidace, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny jako směsi diastereoisomerů.
Rt (kapalinová chromatografie) = 17,77 a 18,19 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 4
HOOC-CH2-m-Cl-D, L-Phe-Pro-Ppa-Ψ [COCO] -OH
Podle příkladu 53 se připraví H-m-Cl-D,L-Phe-OH-HCI za požití 3-chlorbenzylbromidu. Směs diastereoisomerů zce· la chráněného tripeptidu se připraví podle příkladu 1. Rt (kapalinová chromatografie) = 22,24 / 23,07 min; od A 20%,B 80%,C 0% do A 20%,B 20%,C 60% během 40 minut.
0 · 000· 0 0 0 0 0 0
00·0000 00 ··
Příklad 5
H00C-CH2-p-Cl-D-Phe-Pro-Ppa-T [COCO] -OH
Část a: N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-p-Cl-D-Phe-OH
Podle postupu příkladu 1 se 10 g H-p-Cl-D-Phe-OH -HCl přemění na 16,7 g N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-p-Cl-D-Phe-OH.
TLC: Rf - 0,27, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu a metanolu v poměru 9:1.
Část b: N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-p-Cl-D-Phe-OSu (Su = sukcinimid)
Na roztok 14,67 g N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-p-Cl-D-Phe-OH ve 250 ml acetnitrilu se přes noc při teplotě místnosti působí 4,11 g N-hydroxysukcinimidu a 6,86 g 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochloridu. Reakční směs se odpařuje dosucha a zbytek se rozpustí v etylacetátu. Organický podíl se promyje vodou, suší se nad síranem sodným a zahustí se za vzniku 19,11 g aktivního esteru, který bez čištěni použije v následující syntéze.
Část c: N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-p-Cl-D-Phe-Pro-OH
Ve 100 ml N,N-dimetylformamidu a 100 ml vody se rozpustí 10,79 g H-Pro-OH-HCl. Po přidáni IN roztoku hydroxidu sodného k pH 8 se po kapkách přidá roztok 19,11 g N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-p-Cl-D-Phe-OSu ve 120 ml N,N-dimetylformamidu. Reakční směs se přes noc míchá při teplotě místnosti při udržování pH okolo 8. Reakční směs se zchladí a přidáním IN roztoku kyseliny chlorovodíkové se okyselí na pH 2. Vodný podíl se extrahuje dichlormetanem, organický podíl se promyje vodou, suší se nad síranem sodným a odpařuje se ve vakuu. Vytvořený zbytek se po absorbci na kolonu silikagelu čistí chromatografií při eluci gradientem koncentrací směsi etylacetátu a metanolu v poměru od 9:1 do 1:1 za vzniku 7,04 g požadovaného dipeptidu.
TLC: Rf = 0,24, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu a metanolu v poměru 8:2.
Část d: HOOC-CH2-p-Cl-D-Phe-Pro-Ppa-T [COCO]-OH
Vazebná reakce (za přítomnosti DCCI/HOBt) N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-p-Cl-D-Phe-N-cyklopentyl-Gly-OH a H-Ppa (Boc)Ψ [CHOCHO]-OMe-HCl, saponifikace, Dess-Martinova oxidace, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny jako směsi diastereoisomerů.
Rt (kapalinová chromatografie) = 23,67 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 6
HOOC-CH2-D-p-MeO-Phe-Pro-Ppa-T [COCO] -OH
Výsledný tripeptid se připraví podle postupu příkladu 1 za použití H-p-MeO-D-Phe-OH jako výchozí sloučeniny za vzniku výsledné sloučeniny jako směsi diastereoisomerů. Rt (kapalinová chromatografie) = 19,18 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Přiklad 7
HOOC-CH,-D, L-Coa-Pro-Ppa-Ψ [COCO] -OH
Část a: Cyklo-oktylmetyl-bromid
V 70 ml 47% roztoku bromovodiku se rozpustí 8,16 g cyklo-oktylmetanolu a reakční směs se 1 hodinu refluxuje při teplotě 130eC. Reakční směs se vlije do 500 ml vody a přidá se 500 ml nasyceného roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Vodný roztok se extrahuje dichlormetanem. Sloučené organické extrakty se promyjí vodou, nasyceným roztokem chloridu sodného a suší se nad síranem sodným. Zbytek se filtruje, zahustí ve vakuu a vytvořený zbytek se po absorbci na kolonu silikagelu čistí chromatografií při eluci toluenem. Podíly se obsahující cyklo-oktylmetylbromid se sloučí a odpaří za vzniku 9,85 g výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,95, silikagel, eluční činidlo: toluen.
·· ·
Část b: (R,S)-etyl-2-acetylamino-2-kyano-3-cyklooktyl-propionát
Ve 100 ml dimetylsulfoxidu se při teplotě místnosti rozpustí 6,85 g t-butylátu draselného a 8,1 g etylacetamidokyanát-acetátu. Ve 25 ml dimetylsulfoxidu se rozpustí cyklooktylmetyl-bromid a tento roztok se po kapkách přidá do reakční směsi. Reakční směs se 44 hodin míchá při teplotě místnosti. Po vlití směsi do 500 ml vody se sraženina oddělí filtrací a suší se za vzniku 2,95 g (R,S)-etyl-2-acetylamino-2-kyano-3-cyklo-oktyl~ propionátu.
TLC: Rf = 0,50, silikagel, eluční činidlo: směs heptanu a etylacetátu v poměru 3:7.
Část c: H-D,L-Coa-OH-HCI
Ve 100 ml 20% roztoku kyseliny chlorovodíkové se uvede do suspenze 2,95 g (R,S)-etyl-2-acetylamino-2-kyano-3-cyklooktyl-propionátu a reakční směs se zahřívá pod refluxem 22 hodin. Reakční směs se zchladí na 5°C a sraženina se oddělí filtrací, promyje se dietyleterem a suší se za vzniku 2,69 g H-D,L-Coa-OH-HCI .
TLC: Rf = 0,27, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:20:6:11.
Výsledná sloučenina, HOOC-CH2-D, L-Coa-Pro-Ppa-Ψ [COCO] -OH, jako směs diastereoisomerů se připraví podle postupu uvedeného v příkladě 1.
- 34 Rt (kapalinová chromatografie) = 15,19 min; od A 20%, B 60%, C 20% do A 20%, B 0%, C 80 % během 30 minut.
Rt (kapalinová chromatografie) = 25,71 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 8
HOOC-CH2-D-Nle-Pro-Ppa-T [COCO] -OH
Výsledný tripeptid jako směs diastereoisomerů se připraví podle postupu příkladu 1 za použití H-D-Nle-OH jako výchozí sloučeniny.
Rt (kapalinová chromatografie) = 19,50 a 20,24 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 50%, C 30 % během 40 minut.
Příklad 9
HOOC-CH2-D-Dpa-Pro-Ppa-T [COCO] -OH
Výsledný tripeptid jako směs diastereoisomerů se připraví podle postupu příkladu 1 za použití H-D-Dpa-OH jako výchozí sloučeniny.
Rt (kapalinová chromatografie) = 29,18 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
- 35 Příklad 10
D-Hpl-Pro-Ppa-(2-thiazolyl) (Hpl=2-hydroxy-3-fenylmléčná kyselina)
Část a: THP-D-Hpl-Pro-OH
Příprava THP-D-HPl-Pro-OH za použití H-D-Cha-OH jako výchozí sloučeniny je popsána v příkladě 20.
Část b: D-Hpl-Pro-Ppa-(2-thiazolyl)
Vazebná reakce THP-D-Hpl-Pro-OH a H-Ppa(Cbz)-(2-thiazo lyl)-TFA, a následné odštěpení ochranných skupin a čištění se provede metodou popsanou v příkladě 45 za vzniku D-Hpl-Pro-Ppa-(2-thiazolyl) jako směsi diastereoisomerů .
Příklad 11
HOOC-CH2-p-Me-D-Phe-Pro-Ppa-T [COCO] -OH
Část a: Fmoc-p-Me-D-Phe-OMe
V 50 ml směsi dichlormetanu a metanolu v poměru 9:1 se rozpustí 5 g Fmoc-p-Me-D-Phe-OH. Po přidání 4,4 g 2-(lH-benzotriazol-l-yl)-1,1,3,3-tetrametyluronium-tetrafluorborátu se přidává trietylamin k pH 8. Reakční směs se 16 hodin míchá při teplotě místnosti, důkladně se promyje studeným IN roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu ·· • · ···· · ·· · • ·
··· · ·· sodného a vodou a reakční směs se suší nad síranem sod ným. Filtrát se odpařuje za vzniku 5, 6 g Fmoc-p-Me-D-Phe-OMe jako oleje.
TLC: Rf = 0,55, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu a heptanu v poměru 6:4.
Část b: H-p-Me-D-Phe-OMe
Ve 35 ml směsi N,N-dimetylformamidu a piperidinu v poměru 4:1 se rozpustí 5,6 g Fmoc-p-Me-D-Phe-OMe a reakční směs se 30 minut míchá při teplotě místnosti. Po odpaření směsi se vytvořený zbytek zpracuje etylace tátem a promyje se O,1M roztokem kyseliny chlorovodíkové. Sloučené vodné podíly se přivedou na pH 9 přidáním 1M roztoku hydroxidu sodného. Po extrakci dichlormetanem se vytvořený olej čistí chromatografií na silikagelu při eluci směsí etylacetátu a metanolu v poměru 95:5. Podíly obsahující H-p-Me-D-Phe-OMe se sloučí a odpaří za vzniku 2,33 g výsledného produktu. TLC: Rf = 0,10, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu a heptanu v poměru 2:3.
Výsledný plně chráněný tripeptid se připraví podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny jako směsi diastereoisomerů.
Rt (kapalinová chromátografie) = 22,55 ; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 12
BenzylS02-norLeu (cyklo) -Gly-S-Ppa-Ψ [COCO] -OH norLeu(cyklo)-Gly označuje strukturální fragment vzorce:
z<ch2)4\
-NH-CH^^N-CH2-C(O)o
Část a: 3-(piperidin-4-yl)propanová kyselina
V atmosféře vodíku se 64 hodin protřepává směs 12,5 g kyseliny 3-(4-pyridyl)akrylové a 1,25 g 10% roztoku paladia na aktivním uhlí vil etanolu a 83 ml IN roztoku kyseliny chlorovodíkové. Katalyzátor se odstraní filtrací a filtrát se odpaří dosucha za vzniku 13 g požadovaného produktu.
TLC: Rf = 0,7, silikagel, eluční činidlo: směs butanolu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 4:1:1:2.
Část b: 3-[1-(t-butyloxykarbonyl)piperidin-4-yl]propanová kyselina
Na suspenzi 3-(piperidin-4-yl)propanové kyseliny v 500 ml N,N-dimetylformamidu se působí 30,9 g di-t-butyl-dikarbonátu. Reakčni směs se přivede na pH 8,5 přidáním trietylaminu a reakčni směs se 4 hodiny míchá při teplotě místnosti. Směs se vlije do 65 ml chlazeného 2N roztoku hydroxidu sodného a promyje se etylacetátem. Vodný podíl se okyselí přidáním 2N roztoku kyseliny chlorovodíkové na pH 2 a extrahuje se etylacetátem. Sloučené organické podíly se promyjí nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a odpaří se ve vakuu za vzniku 37 g požadovaného produktu.
TLC: Rf = 0,7, silikagel, eluční činidlo: směs dichlormetanu a metanolu v poměru 9:1.
Část c: (4S)-3-[3-[l-(t-butyloxykarbonyl)piperidin-4-yl]-1-oxopropyl]-4-(fenylmetyl)-2-oxazolidinon
Působením 13,7 ml pivaloylchloridu a 15,6 ml trietylaminu při teplotě -72eC na roztok 27 g 3-[1-(t-butyloxykarbonyl) piperidin-4-yl] propanové kyseliny ve 325 ml bezvodého tetrahydrofuranu vznikne reakčni směs, která se 1 hodinu míchá při teplotě 0°C. Do roztoku 18,5 g S-4-benzyl-2-oxyzolidinonu ve 325 ml bezvodého tetrahydrofuranu se v atmosféře dusíku po kapkách při teplotě -72°C přidá 75 ml 1,4M roztoku n-butyllithia v hexanu. Reakčni roztok se 20 minut míchá při teplotě -70°C, a pak se do něj přidá shora připravená suspenze • · • · » φ
- 39 směsného anhydridu a vytvořená reakční směs se 20 minut míchá při teplotě -70°C. Reakce se ukončí vlitím do vody a extrakcí s eterem. Sloučené organické extrakty se promyjí studeným IN roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanů sodného a vodou. Roztok se suší nad síranem sodným a odpařuje se ve vakuu za vzniku 47,5 g oleje, který se po ahsorbci na kolonu silikagelu čistí rychlou chromatografií při eluci směsí heptanu a etylacetátu v poměru 1:1 za vzniku 28,2 g výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,7, oxid křemičitý, eluční činidlo: směs heptanu a etylacetátu v poměru 1:1.
Část d: (3(2S),4S)-3-[2-azido-3[1-(t-butyloxykarbonyl)piperidin-4-yl]-1-oxopropyl]-4-(fenylmetyl)-2-oxazolidin
Do 110 ml bezvodého tetrahydrofuranu se za stálého míchání při teplotě -78’C v atmosféře dusíku přidá roztok 136 ml hexametyldisilazidu draselného v 0,5M roztoku toluenu. Do vytvořeného roztoku se kanylou přidá předem zchlazený roztok 25 g (4S)-3-[3-[1-(t-butyloxykarbonyl) piperidin-4-yl] -1-oxopropyl]-4-(fenylmetyl)-2-oxazolidinonu v 350 ml bezvodého tetrahydrofuranu o teplotě -78°C. Reakční směs se v atmosféře dusíku 30 minut míchá při teplotě -75°C. Do roztoku enolátu draselného se přidá roztok 24 g trisilylazidu (JCS Perkin Trans (1991), 1629) ve 215 ml bezvodého tetrahydrofuranu. Po 5 minutách se reakce ukončí přidáním 17 ml kyseliny
• · ·
- 40 octové. Reakční směs se 20 minut míchá při teplotě -75°C a 16 hodin při teplotě místnosti. Vytvořený zbytek se po absorbci na kolonu silikagělu čistí rychlou chromatografií při eluci směsí heptanu a etylacetátu v poměru 7:3. Po působení heptanem vznikne 19 g pevné látky výsledné sloučeniny.
TLC: Rf .= 0,6, oxid křemičitý, eluční činidlo: směs dichlormetanu a etylacetátu v poměru 9:1.
Část e: (2S)-2-azido-3-[(1-(t-butyloxykarbonyl)-piperidin-4-yl]-propanová kyselina
Do roztoku 19 g (3(2S),4S)-3-[2-azido-3[1-(t-butyloxykarbonyl)piperidin-4-yl]-1-oxopropyl]-4-(fenylmetyl)-2-oxazolidinu v 600 ml tetrahydrofuranu, 18 ml 30% roztoku peroxidu vodíku a 170 ml vody se při teplotě 0°C v atmosféře dusíku přidá 3,7 g pevného hydroxidu lithného. Reakční směs se pod dusíkem 30 minut míchá při teplotě 0°C, a pak se přidá roztok 25,3 g siřičitanu sodného ve 133 ml vody a 530 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Po zvýšení teploty na teplotu místnosti se reakční směs míchá 30 minut, rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a vytvořený zbytek se rozpustí ve vodě a promyje se etylacetátem. Vodný podíl se okyselí na pH 2 přidáním 6N roztoku kyseliny chlorovodíkové a extrahuje se etylacetátem. Extrakty se promyjí nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a odpařují se ve vakuu. Krystalizací vytvořeného zbytku ze směsi eteru a heptanu vznikne 11,9 g
- 41 • · • · • · · · • · krystalické pevné látky výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,8, oxid křemičitý, eluční činidlo: směs dichlormetanu a metanolu v poměru 95:5.
Část f: (2S)-N-metyl-N-metoxy-2-azido-3-[(1-(t-butyloxykarbonyl)piperidin-4-yl]propanamid
Do roztoku 5,7 g (2S)-2-azido-3-[(l-(t-butyloxykarbonyl)piperidin-4-yl]-propanové kyseliny ve 150 ml dichlormetanu se přidá 2,1 g N,O-dimetylhydroxylamin-hydrochloridu a 6,4 g TBTU. Přidáním trietylaminu se pH přivede na 8,5 a reakční směs se 30 minut míchá při teplotě místnosti, promyje se IN roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanů sodného a vodou. Organický podíl se suší nad síranem sodným, filtruje se a zahustí se odpařováním ve vakuu za vzniku 7,4 g oleje výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,6, oxid křemičitý, eluční činidlo: směs dichlormetanu a metanolu v poměru 95:5.
Část g: metyl-(2S)-2-azido-3-[(1-(t-butyloxykarbonyl)piperidin-4-yl]propanová kyselina
Do reakční směsi (2S)-2-azido-3-[(1-(t-butyloxykarbonyl)piperidin-4-yl]-propanové kyseliny (příklad 12e) a 6,94 g TBTU ve 100 ml směsi dichlormetanu a metanolu v poměru 9:1 se přidá trietylamin k pH směsi 8,5. Reakční směs se 30 minut míchá při teplotě místnosti, promyje se IN roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanů sodného a vodou. Organický • · » · · <
» · · ·
- 42 podíl se suší nad síranem sodným, filtruje se a zahustí se odpařováním ve vakuu za vzniku 7,4 g oleje výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,85, oxid křemičitý, eluční činidlo: směs dichlormetanu a metanolu v poměru 95:5.
Část h: H-S-Ppa(Boc)-OMe
Při tlaku 0,lMPa se hydrogenuje roztok 7,4 g metyl-(2S)-2-azido-3-[(1-(t-butyloxykarbonyl)piperidin-4-yl]propanové kyseliny, 0,5 g 10% roztoku paladia na aktivním uhlí a 21,9 ml IN roztoku kyseliny chlorovodíkové ve 300 ml tetrahydrofuranu. Katalyzátor se oddělí filtrací a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a po působení eterem vznikne 6,8 g krystalické pevné látky výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,85, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 252:20:6:11.
Část i: Cbz-S-Ppa(Boc)-OMe
Přidáním trietylaminu se přivede pH reakčního roztoku 6,5 g H-S-Ppa(Boc)-OMe a 5,6 g benzyloxykarbonyl-oxysukcinimimidu v 70 ml N,N-dimetylformamidu na pH 8,5. Reakční směs se 6 hodin míchá při teplotě místnosti, vlije se do vody a extrahuje se etylacetátem. Sloučený organický podíl se promyje IN roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, suší se nad síranem sodným a odpařuje • · · · ·
- 43 se ve vakuu za vzniku 7,9 g oleje výsledné sloučeniny. TLC: Rf = 0,85, oxid křemičitý, eluční činidlo: směs heptanu a etylacetátu v poměru 1:1.
Část j: Cbz-S-Ppa(Boc)-H
Do roztoku 7,5 g Cbz-S-Ppa(Boc)-OMe ve 225 ml bezvodého dichlormetanu se v atmosféře dusíku při teplotě -75°C po kapkách přidá 68,1 ml IM roztoku diisobutylaluminiumhydridu v hexanu, tak aby se teplota nezvýšila nad -70°C. Po 1 hodině míchání reakční směsi v atmosféře dusíku při teplotě -75°C se reakční směs vlije do roztoku kyseliny citrónové a extrahuje se etylacetátem. Sloučené extrakty se promyjí vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou a zahustí se ve vakuu za vzniku 7,5 g výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,45, oxid křemičitý, eluční činidlo: směs dichlormetanu a metanolu v poměru 95:5.
Část k: (3S)-2-acetoxy-3-(benzyloxykarbonyl-amino)-4-[1-t-butyloxykarbonyl(piperidin-4-yl)]butanitril
Podle postupu uvedeného v příkladě 1 části n se z 7,5 g Cbz-S-Ppa(Boc)-H ( příklad 12, část j) připraví (3S)—2— -acetoxy-3-(benzyloxykarbonyl-amino)-4-[1-t-butyloxykarbonyl (piperidin-4-yl)]butanitril.
TLC: Rf = 0,75, oxid křemičitý, eluční činidlo: směs dichlormetanu a metanolu v poměru 95:5.
- 44 • ·
Část 1: Cbz-S-Ppa (Boc)Ψ [CHOCHO]-OMe
Podle postupu uvedeného v příkladě 1 části o se z (3S)— -2-acetoxy-3-(benzyloxykarbonyl-amino)-4-[1-t-butyloxykarbonyl(piperidin-4-yl)]butanitrilu připraví výsledná sloučenina.
TLC: Rf = 0,5, oxid křemičitý, eluční činidlo: směs dichlormetanu a metanolu v poměru 95:5.
Část m: H-S-Ppa(Boc)Ψ [CHOCHO]-OMe-HCI
Výsledná sloučenina se připraví hydrogenací popsanou v příkladě 1 části q.
Část n: N-Boc-L-a-amino-s-kaprolaktam
Do míchaného roztoku 10 g L-a-amino-s-kaprolaktamu ve 30 ml směsi dioxanu a vody v poměru 2:1 se přidá 7,8 ml IN roztoku hydroxidu sodného, a následně 18,8 g di-t-butyl-dikarbonátu. Reakční směs se 16 hodin míchá při teplotě místnosti a zahustí se ve vakuu. Vytvořený zbytek se rozpustí v etylacetátu a promyje se vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným, filtruje se a zahustí se odpařováním ve vakuu za vzniku surového materiálu, který se rozetře s hexanem. Po filtraci a sušení ve vakuu vznikne 16 g N-Boc-L-a-amino-s-kaprolaktamu.
TLC: Rf = 0,85, oxid křemičitý, eluční činidlo: směs heptanu a etylacetátu v poměru 1:1.
• · · · • ·
Část o: Boc-nor-Leu(cyklo)-Gly-OMe
Ve 100 ml dichlormetanu se rozpustí 10 g N-Boc-L-a-amino-s-kaprolaktamu. Pomalu se při teplotě -20°C přidá 1 ekv. 1M roztoku bis(trimetylsilyl)amidu ve směsi tetrahydrofuranu a cyklohexanu v poměru 1:1. Po 30 minutách míchání se přidají 4 ml metylbromacetátu a reakční směs se 2 hodiny míchá při teplotě místnosti. K ukončení reakce se přidá další část 1M roztoku bis(trimetylsilyl) amidu ve směsi tetrahydrofuranu a cyklohexanu v poměru 1:1. Reakční směs se zředí dichlormetanem a promyje se 0,lN roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, 5% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným, filtruje se a zahustí se odpařováním ve vakuu za vzniku zbytku, který se po absorbci na kolonu silikagelu čistí chromatografií při elucí směsí heptanu a etylacetátu v poměru 6:4. Vytvoří se 12 g výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,55, oxid křemičitý, eluční činidlo: směs heptanu a etylacetátu v poměru 4:6.
Část p: benzylS02-nor-Leu (cyklo) -Gly-OMe
Ve 30 ml směsi kyseliny trifluoroctové a dichlormetanu v poměru 1:1 se rozpustí 3 g Boc-nor-Leu(cyklo)-Gly-OMe a reakční roztok se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti. Reakční směs se odpařuje ve vakuu a vytvořený surový amin se rozpustí v 25 ml dichlormetanu. Pomalu se přidává roztok 2,25 g benzylsulfonylchloridu v 10 ml • 9 • 9
- 46 dichlormetanu při teplotě 0°C. Přidáváním trietylamínu se pH během reakce udržuje na hodnotě 8. Reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti, směs se zahustí ve vakuu a zbytek se rozpustí v etylacetátu a promy-je se 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným, filtruje se a zahustí se odpařováním ve vakuu za vzniku zbytku, který se po absorbci na kolonu oxidu křemičitého čistí chromatografií při eluci směsí dichlormetanu a etylacetátu v poměru 95:5 za vzniku 3,9 g benzylS02-nor-Leu (cyklo) -Gly-OMe.
TLC oxid křemičitý (dichlormetan:etylacetát = 9:1):
Rf 0,40.
Část q: benzylS02-nor-Leu (cyklo)-Gly-OH
Na roztok 3,9 g benzylS02-nor-Leu (cyklo)-Gly-OMe ve 100 ml dioxanu a vody v poměru 9:1 se při teplotě místnosti 2 hodiny působí IN roztokem hydroxidu sodného k pH 13. Po okyselení se směs vlije do vody a extrahuje se dichlormetanem. Organický podíl se promyje vodou a suší se nad síranem sodným. Filtrát se odpaří za vzniku 3,6 g výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,60, oxid křemičitý, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:20:6:11.
Část r: benzy!S02-nor-Leu (cyklo)-Gly-S-Ppa-Ψ [COCO]-OH
- 47 Vazebná reakce (za přítomnosti DCCI/HOBt) benzylSO2-nor-Leu(cyklo)-Gly-OH a H-S-Ppa(Boc)Ψ [CHOCHO]-OMe-HCI, saponifikace, Dess-Martinova oxidace, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny.
Rt (kapalinová chromatografie) = 27,41 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 13 l-Piq-Pro-Ppa-Ψ [COCO]-OH
N-(Cbz)-1-Piq-OH
Výroba sloučeniny je popsána v EP 0643073, příklad 1. TLC: Rf = 0,85, oxid křemičitý, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:20:6:11.
Část a: N-(Cbz)-1-Piq-Pro-OtBu
Do studeného roztoku 500 mg N-(Cbz)-1-Piq-OH v 5 ml N,N-dimetylformamidu o teplotě 0°C se postupně přidá 342 mg DCCI, 319 mg HOBT, 270 mg H-Pro-OtBu a 0,55 ml trietylaminu. Reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě 0°C, a pak se přes noc nechá při teplotě místnosti. Reakční směs se zchladí na -20°C a DCU (1,3-dicyklohexylurea) se odstraní filtrací. Filtrát se zahustí ve vakuu a zbytek se rozpustí v etylacetátu. Roztok se
- 48 postupně promyje 5% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, 3% vodným roztokem kyseliny citrónové, vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným, a zahustí se ve vakuu za vzniku zbytku, který se po absorbci na kolonu oxidu křemičitého čistí chromatografií při eluci směsí heptanu a etylacetátu v poměru 4:1. Vznikne 634 mg výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,90, oxid křemičitý, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:20:6:11.
Část b: N-(Cbz)-1-Piq-Pro-OH
Ve směsi 1 ml dichlormetanu, 3 ml kyseliny trifluoroctové a 0,15 ml anisolu se 1 hodinu při teplotě místnosti míchá 600 mg N-(Cbz)-1-Piq-Pro-OtBu. Reakční směs se zahustí ve vakuu při nízké teplotě a zbytek se rozpustí ve vodě o pH 9,5. Vodný podíl se promyje dietyleterem, následně se okyselí 2M roztokem kyseliny chlorovodíkové k pH 2,5. Voidný podíl se extrahuje etylacetátem a organický podíl se promyje nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a zahustí se ve vakuu za vzniku 588 mg N-(Cbz)-1-Piq-Pro-OH.
TLC: Rf = 0,54, oxid křemičitý, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 60:3:1:2.
- 49 Část c: l-Piq-Pro-Ppa-Ψ [COCO]-OH
Vazebná reakce (za přítomnosti DCCI/HOBt) N-(Cbz)-l-Piq-Pro-OH a H-Ppa (Boc) Ψ [CHOCHO]-OMe-HCI, saponifikace, Dess-Martinova oxidace, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny jako směsi diastereoisomerů. Rt (kapalinová chromatografie) = 19,8 a 20,31; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 14
H-D-Phe-Pro-Ppa-Ψ [COCO]-OH
Boc-D-Phe-Pro-OH se připraví podle příkladu 1.
Vazebná reakce (za přítomnosti DCCI/HOBt) Boc-D-Phe-Pro-OH a H-Ppa (Boc) Ψ [CHOCHO] -OMe -HCI, saponifikace, Dess-Martinova oxidace, odštěpení ochranných skupin a čištěni se provede podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny jako směsi diastereoisomerů.
Rt (kapalinová chromatografie) = 16,24 a 16,90 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 15
3.3- difenylpropionyl-Pro-Ppa-Ψ [COCO]-OH
3.3- difenylpropionyl-Pro-OH se připraví podle příkladu
1.
- 50 Vazebná reakce (za přítomnosti DCCI/HOBt) 3,3-difenylpropionyl-Pro-OH a H-Ppa (Boc) Ψ [CHOCHO]-OMe-HCl, saponifíkace, Dess-Martinova oxidace, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny jako směsi diastereoisomerů. Rt (kapalinová chromatografie) = 36,60 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 16
H-(N-Me)-D-Cha-Pro-Ppa-Ψ [COCO]-OH
Část a: Boc-D-Cha-OMe
Do roztoku 20 g Boc-D-Cha-OH ve 400 ml směsi dichlormetanu a metanolu v poměru 9:1 se přidá 22,7 g 2-(lH-benztriazol-l-yl)-1,1,3,3-tetrametyl-uronium-tetrafluorborátu (TBTU). Přidáním 10 ml trietylaminu se pH reakční směsi přivede na 8. Reakční směs se 16 hodin míchá při teplotě místnosti. Směs se promyje studeným IN roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného a vodou, suší se nad síranem sodným a filtrát se odpaří. Vytvořený zbytek se po absorbci na kolonu silikágelu čistí chromatografií při eluci směsí etylacetátu a heptanu v poměru 2:3. Podíly obsahující Boc-D-Cha-OMe se oddělí a rozpouštědlo se odpaří za vzniku 19,38 g výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,90, silikagel·, eluční činidlo: směs
9 4 • 4 · · • ··· · etylacetátu a heptanu v poměru 3:1.
Část b: Boc-(N-Me)-D-Cha-OMe
Ve 200 ml bezvodého N,N-dimetylformamidu se v atmosféře dusíku rozpustí 19,35 g Boc-D-Cha-OMe. Přidá se 4,22 mlmetyljodidu a po zchlazení směsi na teplotu 0°C se při- dá 2,71 g hydridu sodného jako 60% disperze v minerál- ním oleji. Reakčni směs se 3 hodiny míchá při teplotě místnosti, a pak se částečně zahustí. Přidá se etyl- acetát a organický podíl se promyje O,1M roztokem kyše- liny chlorovodíkové, vodou, 5% roztokem hydrogenuhli- čitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a zahustí se za vzniku 21,07 g výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,55, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu a heptanu v poměru 3:7.
Část c: H-(N-Me)-D-Cha-Pro-Ppa-Ψ [COCO]-OH
Podle postupu příkladu 1 se připraví Boc-(N-Me)-D-ChaPro-OH. Vazebná reakce (za přítomnosti DCCI/HOBt) Boc-(N-Me)-D-Cha-Pro-OH a H-PpaT[CHOCHO]-OMe-HCI, saponifikace, Dess-Martinova oxidace, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny jako směsi diastereoisomerů. Rt (kapalinová chromátografie) = 23,14 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
- 52 Příklad 17
Η-(N-Me)-D-Phe-Pro-Ppa-Ψ [COCO]-OH
Podle postupu příkladu 1 se připraví Boc-(N-Me)-D-Phe-Pro-OH. Vazebná reakce (za přítomnosti DCCI/HOBt)
Boc- (N-Me) -D-Phe-Pro-OH a H-Ppa (Boc) Ψ [CHOCHO]-OMe-HCl, saponifikace, Dess-Martinova oxidace, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny jako směsi diastereoisomerů.
Rt (kapalinová chromatografie) = 16,26/16,90 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 18
EtyiS02-D-Cha-Pro-Ppa-T [COCO] -OH
Boc-D-Cha-Pro-OPac (OPAc = fenacylester)
Boc-D-Cha-Pro-OPac se připraví podle postupu příkladu 1 za použití Boc-D-Cha-OH a H-Pro-OPac.
TLC: dichlormetan: metanol = 95:5 na oxidu křemičitém; Rf = 0,5.
Část a: etylS02-D-Cha-Pro-OPac
Ve 25 ml směsi kyseliny trifluoroctové a dichlormetanu v poměru 1:1 se rozpustí 3,8 g Boc-D-Cha-Pro-OPac.
Reakční směs se 30 minut míchá při teplotě místnosti, a následně se odpaří ve vakuu. Surový amin se rozpust! v 50 ml dichlormetanu a do roztoku se při teplotě -78°C přidá 0,8 ml etansulfonylchloridu. K pH 8 se přidává trietylamin. Reakční směs se 3 hodiny míchá při teplotě0°C, přidá se 25 ml vody a po 30 minutách míchání při teplotě místnosti se reakční směs zahustí ve vakuu. Vytvořený zbytek se rozpustí v dietyleteru a promyje se IN roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chlo- ridu sodného, suší se nad síranem sodným, filtruje se a zahustí se odpařováním ve vakuu za vzniku surového materiálu. Tento zbytek se rozetře s metanolem za vzniku 3,0 g etylS02-D-Cha-Pro-OPac.
TLC: dichlormetan: metanol = 95:5 na oxidu křemičitém; Rf = 0,6.
Část b: etylS02-D-Cha-Pro-OH
Do roztoku 10 g etylS02-D-Cha-Pro-OPac ve 250 ml tetrahydrofuranu se přidá 84 ml 1M roztoku tetrabutylamoniumfluoridu v tetrahydrofuranu. Reakční směs se 30 minut míchá při teplotě místnosti a vlije se do 1 1 vody. Vodný roztok se extrahuje etylacetátem. Sloučené organické podíly se postupně promyjí IN roztokem kyseliny chlorovodíkové a vodou, suší se nad síranem sodným a zahusti se ve vakuu. Vytvořený zbytek se čistí krystalizací ze směsi etylacetátu a diisopropyleteru za vzniku 6,0 g etylS02-D-Cha-Pro-0H.
- 54 ·· · · ·
······· · · ··
TLC: Rf = 0,2, oxid křemičitý, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 163:20:6:11.
Část c: EtylS02-D-Cha-Pro-Ppa-T [COCO]-OH
Vazebná reakce (za přítomnosti DCCI/HOBt) etylSO2-D-Cha-Pro-OH a H-Ppa (Boc) Ψ [CHOCHO]-OMe-HCI, saponifikace, Dess-Martinova oxidace, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny jako směsi diastereoisomerů. Rt (kapalinová chromatografie) = 35,90 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 19
N-Me-D-Cha-Azt-Ppa-(2-thiazolyl)
Část a: H-Azt-OBzl-HCI
V 50 ml dichlormetanu se rozpustí 4,60 g N-Boc-Azt-OH a do reakčního roztoku se přidá 2,47 g benzylalkoholu, 7,40 g 2-(lH-benztriazol-l-yl)1,1,3,3-tetrametyluronium-tetrafluorborátu a 6,3 ml trietylaminu. Reakční roztok se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti, reakční roztok se zředí IN roztokem kyseliny chlorovodíkové, organický podíl se oddělí, promyje se vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného. Po filtraci a odpařování ve vakuu vznikne surový produkt, který se čistí chromatografií na silikagelu při eluci směsí heptanu a etylacetátu v poměru 3:1 za vzniku 6,0 g N-Boc-Azt-OBzl. Během 1 hodiny se při teplotě místnosti postupně odštěpí ochranná skupina Boc působením 60 ml 3M roztoku kyseliny chlorovodíkové v dioxanu. Po odpařování dosucha vznikne 5,26 g požadovaného produktu.
TLC: Rf = 0,50, sílikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru
63:20:6:11.
Část b: Boc-(N-Me)D-Cha-Azt-OH
Podle postupu příkladu 1 pro syntézu dipeptidů proběhne vazebná reakce 1,5 g Boc-(N-Me)-D-Cha-OH (příklad 58) a 1,5 g H-Azt-OBzl-HCI. Hydrogenolýzou benzylesteru podle příkladu 1 vznikne 1,22 g Boc-(N-Me)D-Cha-Azt-OH.
TLC: Rf = 0,50, sílikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:20:6:11.
Část c: N-Me-D-Cha-Azt-Ppa-(2-thiazolyl)
Vazebnou reakcí podle příkladu 48 370 mg Boc-(N-Me)-D-Cha-Azt-OH a 610 mg H-Ppa-(Teoc)-(2-thiazolyl) -TsOH a čištěním vzniklého produktu chromatografií na silikagelu při eluci směsí dichlormetanu a metanolu v poměru 95:5 vznikne 684 mg Boc-(N-Me)-D-Cha-Azt-Ppa-(Teoc)-
- 56 ·»
-(2-thiazolyl). Postupným odstraněním ochranných skupin podle postupu příkladu 48 a po čištění HPLC vzniknou dva oddělené diastereoisomery.
Výtěžek: 76 mg. Rt(kapalinová chromatografie) = 26,9 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Výtěžek: 76 mg. Rt (kapalinová chromatografie) = 30,3 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 20
H-D-Hpl-Pro-Ppa-Ψ [COCO]-OH
Část a: H-D-Hpl-OMe
Ve směsi 4,8 ml IN roztoku kyseliny chlorovodíkové,
19.4 ml vody a 9,7 ml kyseliny octové se rozpustí 1,0 g H-D-Cha-OH. Při teplotě 0°C se pomalu přidává roztok
3.4 g dusitanu sodného v 5,8 ml vody. Reakční směs se přes noc míchá při teplotě místnosti. Přidá se 4,8 ml 37% roztoku kyseliny chlorovodíkové a reakční směs se 15 minut míchá při teplotě místnosti. Reakční směs se zahustí a zbytek se rozpustí ve směsi eteru a acetonu. Po filtraci se roztok zahustí ve vakuu a surový produkt se 18 hodin míchá v 25 ml metanolu. Hodnota pH je 1,5. Reakční směs se odpaří dosucha a zbytek se čistí chromatografií na oxidu křemičitém při eluci směsí toluenu ·· • · ·» ·· » · · · » · · · ··· · · • · »
- 57 a metanolu v poměru 97:3 za vzniku 612 mg H-D-Hpl-OMe. TLC: Rf = 0,9, oxid křemičitý, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 163:20:6:11.
Část b: THP-D-Hpl-OMe (THP = tetrahydropyran)
Do míchaného roztoku 450 mg H-D-Hpl-OMe ve 2 ml dichlormetanu se postupně přidává 0,29 ml 3,4-dihydro-2H-pyranu a 60 mg pyridinium-p-toluensulfonátu.
Reakční směs se 6 hodin míchá při teplotě místnosti, zředí se eterem, promyje se nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným, filtruje se a zahustí se odpařováním ve vakuu. Vznikne surový materiál, který se po absorbci na kolonu oxidu křemičitého čistí chromatografií při eluci směsí etylacetátu a heptanu v poměru 1:4 za vzniku 498 mg THP-D-Hpl-OMe.
TLC oxid křemičitý (etylacetát:heptan = 1:2): Rf 0,64.
Část c: THP-D-Hpl-OH
Na roztok 10,3 g THP-D-Hpl-OMe ve 200 ml směsi dioxanu a vody v poměru 9:1 se při teplotě místnosti 18 hodin působí IN roztokem hydroxidu sodného k pH 12. Po okyselení se reakční směs vlije do 500 ml vody a extrahuje se dichlormetanem. Organický podíl se promyje vodou a suší se nad síranem sodným. Filtrát se odpaří za vzniku 6,6 g výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,78, oxid křemičitý, směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 163:20:6:11.
- 58 Část d: THP-D-Hpl-Pro-OH
Do roztoku 5,87 g THP-D-Hpl-OH v 75 ml acetnitrilu se postupně přidává 4,84 g EDCI (1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochlorid) a 2,9 g N-hydroxysukcinimidu. Reakční směs se 16 hodin míchá při teplotě místnosti. Směs se zahustí ve vakuu a zbytek se rozpustí v etylacetátu. Tento roztok se promyje vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a zahustí se ve vakuu. Surový materiál se rozpustí v 100 ml N,N-dimetylformamidu a reakční roztok se přidá do roztoku 6,99 g prolin-HCI ve 200 ml směsi N-N-dimetylformamidu a vody v poměru 1:1, jehož pH se upraví přidáním hydroxidu sodného na pH 8,5. Reakční směs se přes noc míchá, zahustí se ve vakuu a zbytek se rozpustí ve vodě. Vodný roztok se při teplotě 0°C přivede na pH 2,5, a následně se extrahuje etylacetátem. Sloučené organické podíly se postupně promyji vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným, a zahustí se ve vakuu za vzniku surového materiálu, který se po absorbci na kolonu silikagelu čistí chromatografií při eluci směsí etylacetátu a metanolu v poměru od 8:2 do 6:4. Vznikne 6,75 g THP-D-Hpl-Pro-OH.
TLC: Rf = 0,52, oxid křemičitý, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 163:20:6:11.
• · • · · · • · · · · • · · · · ·
Část e: H-D-Hpl-Pro-Ppa-Ψ [COCO]-OH
Vazebná reakce (za přítomnosti DCCI/HOBt) THP-D-Hpl-Pro-OH a H-Ppa(Boc)Ψ [CHOCHO]-OMe-HCI, saponifikace, Dess-Martinova oxidace, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny jako směsi diastereoisomerů.
Rt (kapalinová chromatografie) = 31,05 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 21
3.3- difenylpropionyl-Pro-Ppa-Ψ [COCO]-OMe
3.3- difenylpropionyl-Pro-OH se připraví podle příkladu 1. Vazebná reakce (za přítomnosti DCCI/HOBt) 3,3-difenylpropionyl-Pro-OH a H-Ppa (Boc) Ψ [CHOCHO]-OMe-HCI, saponifikace, Dess-Martinova oxidace, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny jako směsi diastereoisomerů.
Rt (kapalinová chromatografie) = 21,7 min; od A 20%, B 60%, C 20% do A 20%, B 0%, C 80 % během 30 minut.
Příklad 22
EtylS02-D-Cha-Pro-Ppa-T [COCO] -OMe
- 60 příkladě 18.
etylSO2-D-Cha)ess-Martinova
Syntéza etylS02-D-Cha-Pro-0H je popsána v Vazebná reakce (za přítomnosti DCCI/HOBt)
-Pro-OH a H-Ppa (Boc) Ψ-[CHOCHO]-OMe-HCI, I oxidace, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny jako směsi diastereoisomerů.
Rt (kapalinová chromatografie) = 39,6 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 23
HOOC-CH,-Cha-Pro-Ppa-T [COCO] -OMe
Syntéza N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH je popsána v příkladě 1. Vazebná reakce (za přítomnosti DCCI/HOBt) N-(t-butyloxykarbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH a H-Ppa(Boc)-Ψ- [CHOCHO]-OMe-HCI, Dess-Martinova oxidace, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny jako směsi diastereoisomerů.
Rt (kapalinová chromatografie) = 25,75 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 24 etylSO.-D-Cha-Pro-Ppa-Ψ [COCO] -OEt
Příprava etylSO2-D-Cha-Pro-OH je obdobná uvedené přípravě příkladu 18.
Část a: Cbz-PpaT [CHOCHO]-OEt
Roztok 1 g Cbz-PpaT [CHOCHO]-OMe (část o příkladu 1) v 50 ml 3M roztoku chlorovodíku v etanolu se 4 hodiny míchá při teplotě -20’C. Teplota reakční směsi se zvýší na teplotu místnosti a reakční směs se odpařuje ve vakuu za vzniku 0,9 g oleje výsledné sloučeniny.
TLC: Rf·= 0,85, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:20:6:11.
Část b: Cbz-Ppa(Boc)Ψ [CHOCHO]-OEt
Do roztoku 0,9 g Cbz-PpaT [CHOCHO]-OEt a 0,55 g di-t-butyl-dikarbonátu v 10 ml N, N-dimetylformamidu se k pH 8,5 přidává trietylamin. Reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti, vlije se do vody a extrahuje se etylacetátem. Sloučené extrakty se promyjí 1M roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, suší se nad síranem sodným a zahustí se ve vakuu za vzniku 0,99 g oleje výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,60, silikagel, heptan : etylacetát = 1:1.
Část c: etylSO2-D-Cha-Pro-Ppa-T [COCO]-OEt
Hydrogenací Cbz-Ppa(Boc) Ψ [CHOCHO]-OEt podle postupu části q příkladu 2 vznikne H-Ppa (Boc) Ψ [CHOCHO] -OEt -HC1. Vazebná reakce (za přítomnosti DCCI/HOBt) H-Ppa(Boc)Ψ[CHOCHO] -OEt -HC1 a etylS02-D-Cha-Pro-OH, Dess-Martinova • · · · ·«· · ·······
- 62 oxidace, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny jako směsi diastereoisomerů.
Rt (kapalinová chromatografie) = 41,58 min; od A 20%, B80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 25
HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Ppa-T [COCO] -OEt
Syntéza N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH je popsána v příkladě 1. Vazebná reakce (za přítomnosti DCCI/HOBt) N-(t-butyloxykarbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH a H-Ppa(Boc)-Ψ- [CHOCHO]-OMe-HC1, Dess-Martinova oxidace, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny jako směsi diastereoisomerů.
Rt (kapalinová chromatografie) = 28,20 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 26 etylS02-D-Phe-Pro-Ppa-T [COCO] -OEt
Příprava etylS02-D-Phe-Pro-OH je obdobná uvedené pří-pravě příkladu 18. Vazebná reakce (za přítomnosti
DCCI/HOBt) etylS02-D-Phe-Pro-OH a H-Ppa (Boc) Ψ [CHOCHO] -OEt-HC1, Dess-Martinova oxidace, odštěpení ochranných
- 63 skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny jako směsi diastereoisomerů. Rt (kapalinová chromatografie) = 34,89 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 27 etylS02-D-Cha-Pro-Ppa (Eoc) -Ψ [COCO] -OEt (Eoc = etoxykarbonyl)
Část a: etylS02-D-Cha-Pro-Ppa-T [CHOCHO]-OEt
Syntéza etyiS02-D-Phe-Pro-Ppa-T [CHOCHO]-OEt probíhá obdobně jako v příkladě 24. Na 200 mg hydroxy-etylesteru se 1 hodinu při teplotě místnosti působí směsí kyseliny trifluoroctové a dichlormetanem za vzniku 210 mg výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,85, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:20:6:11.
Část b: etylS02-D-Cha-Pro-Ppa (Eoc) -Ψ [CHOCHO] -OEt
Do roztoku 210 mg etylS02-D-Cha-Pro-Ppa-T [CHOCHO]-OEt a 43,6 μΐ etylchlormravenčanu v 10 ml N,N-dimetylformamidu se přidává trietylamin k pH 8,5. Reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti, vlije se do vody a extrahuje se etylacetátem. Sloučené extrakty se promyjí ÍM roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, 5%
- 64 roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, suší se nad síranem sodným a odpařuje se ve vakuu za vzniku 220 mg oleje výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,50, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 463:20:6:11.
Část c: etylS02-D-Cha-Pro-Ppa (Eoc)-Ψ [COCO]-OEt
Dess-Martinova oxidace a čištění se provede podle postupu uvedeného v příkladě 1 za vzniku směsi diastereoisomerů výsledné sloučeniny.
Rt (kapalinová chromatografie) = 13,95 min; od A 0%, B 70%, C 30% do A 0%, B 30%, C 70 % během 40 minut.
Příklad 28 etylSO2-D-Cha-N-cyklopentyl-Gly-S-Ppa-(2-thiazolyl)
Část a: etylS02-D-Cha-N-cyklopentyl-Gly-OH
Vazebnou reakcí podle příkladu 1 za použití 2,65 g Boc-D-Cha-OH a N-cyklopentyl-Gly-OMe-HCI (příklad 2) vzniklo po čištění chromatografií na silikagelu 3,5 g dipeptidu N-Boc-D-Cha-N-cyklopentyl-Gly-OMe. Následným odstraněním Boc ochranné skupiny působením 38 ml směsi kyseliny trifluoroctové a dichlormetanu v poměru 1:1 a etylsulfonylací, popsané v příkladě 18, vznikne 1,4 g etylS02-D-Cha-N-cyklopentyi-Gly-0Me. Hydrolýzou metyl- 65 -
esteru podle příkladu 2 vznikne etylS02-D-Cha-N-cyklopentyl-Gly-OH.
TLC silikagel (dichlormetan:metanol = 9:1): Rf 0,2.
Část b: (2S)-2-azido-3-(piperidin-4-yl)propanová kyselina
Na 3,7 g (2S)-2-azido-3-[(1-(t-butyloxykarbonyl)-piperidin-4-yl]-propanové kyseliny (část e příkladu 12) se působí 30 ml 3M roztoku chlorovodíku v etylacetátu. Reakční směs se 30 minut míchá při teplotě místnosti, odpařuje se ve vakuu a vznikne 3,0 g krystalické pevné látky výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,35, oxid křemičitý, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:20:6:11.
Část c: (2S)-2-azido-3-[1-[(2-(trimetylsilyl)etoxykarbonyl]-piperidin-4-yl]-propanová kyselina
Na směs 3,0 g (2S)-2-azido-3-(piperidin-4-yl)-propanové kyseliny a 1-[2-(trimetylsilyl)etoxykarbonyloxy]pyrolidin-2,5-dionu (TeocSu, reference: Synthesis 1987,
346) se působí trietylaminem k pH 8,5. Reakční směs se 30 minut míchá při teplotě místnosti, vlije se od vody a extrahuje se etylacetátem. Sloučené extrakty se promyjí IN roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou a suší se nad síranem sodným. Odpařováním ve vakuu vznikne 4,93 g oleje výsledné sloučeniny.
eluční činidlo: směs octové a vody v poměru
TLC: Rf = 0,85, oxid křemičitý, etylacetátu, pyridinu, kyseliny 63:20:6:11.
Část d: (2S)-N-metyl-N-metoxy-2-azido-3-[1-[(2(trimetylsilyl)etoxykarbonyl]piperidin-4-yl]propanamid
Podle postupu části f příkladu 12 a za použití (2S)-2-azido-3-[1-[(2-(trimetylsilyl)etoxykarbonyl]-piperidin-4-yl]-propanové kyseliny vznikne (2S)-N-metyl-N-metoxy-2-azido-3-[1- [ (2-(trimetylsilyl)etoxykarbonyl]piperidin-4-yi]propanamid.
TLC: Rf = 0,85, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:20:6:11.
Část e: H-S-Ppa(Teoc)-N(Me)OMe
Za přítomnosti roztoku 0,5 g paladia na aktivním uhlí ve 100 ml tetrahydrofuranu a 13,3 ml IN roztoku kyseliny chlorovodíkové se nechá směsí obsahující 4,9 g (2S)-N-metyl-N-metoxy-2-azido-3-[1-[(2-(trimetylsilyl)etoxykarbonyl]piperidin-4-yl]propanamidu procházet vodík. Po spotřebování celého množství výchozí látky se katalyzátor odstraní filtrací a rozpouštědlo se odstraní ve vakuu za vzniku 5,7 g výsledné sloučeniny. TLC: Rf = 0,9, oxid křemičitý, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:20:6:11.
• 9
- 67 Část f: Boc-S-Ppa(Teoc)-N(Me)OMe
Na roztok 4,7 g H-S-Ppa(Teoc)-N(Me)OMe a 2,8 g di-tbutyl-dikarbonátu se působí trietylaminem k pH 8,5 směsi. Reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti, vlije se do vody a extrahuje se etylacetátem. Sloučené organické podíly se promyjí IN roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, suší se nad síranem sodným a odpařují se ve vakuu za vzniku 5,2 g oleje výsledné sloučeniny.
TLC:.Rf = 0,85, oxid křemičitý, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:20:6:11.
Chirální HPLC (kolona Chir 11; 250 x 4,6 mm; eluční směs hexanu a etanolu v poměru 9:1; rychlost průtoku lml/min): výtěžek 91%.
Část g: Boc-S-Ppa(Teoc)-(2-thiazolyl)
Do roztoku 31,7 ml 1,05 M roztoku n-butyllithia v eteru se při teplotě -78°C přidá v atmosféře dusíku 5,46 ml 2-bromthiazolu. Vznikne roztok, který se zchladí a kanylou se při teplotě -78°C a v atmosféře dusíku přidá 2,5 ekv. tohoto roztoku do roztoku Boc-S-Ppa(Teoc)N(Me)0Me ve 46 ml bezvodého tetrahydrofuranu. Reakční směs se 30 minut míchá při teplotě -78°C v atmosféře dusíku, vlije se do 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného a extrahuje se etylacetátem. Organický podíl se promyje vodou, suší se nad síranem sodným a odpařuje se • ·
ve vakuu za vzniku 5,0 g olejovitého zbytku. Tento zbytek se po absorbci na kolonu oxidu křemičitého čistí rychlou chromatografií při eluci směsí heptanu a etylacetátu v poměru 7:3. Vznikne 1,7 g výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,75, oxid křemičitý, eluční činidlo: směs heptanu a etylacetátu v poměru 7:3.
[a]D = +31,9°(c = 0,45 v chloroformu).
Část h: H-S-Ppa(Teoc)-(2-thiazolyl)-TsOH
Do roztoku 1,54 g Boc-S-Ppa(Teoc)-(2-thiazolyl) ve 14,2 ml bezvodého eteru se přidá roztok 0,96 g monohydrátu kyseliny p-toluensulfonové v 2,8 ml bezvodého etanolu. Reakční roztok se udržuje 1 hodinu při teplotě 30°C, a následně se odstraní eter. Vytvořená pevná látka se promyje bezvodým eterem za vzniku 1,5 g pevné látky výsledné sloučeniny.
TLC silikagel (dichlormetan:metanol = 9:1): Rf 0,85.
Část i: etylS02-D-Cha-N-cyklopentyl-Gly-S-Ppa- (2-thiazolyl)
Vazebnou reakcí 395 mg etylS02-D-Cha-N-cyklopentylGly-OH a H-S-Ppa(Teoc)-(2-thiazolyl) -TsOH podle postupu uvedeného v příkladě 48 vznikne 400 mg plně chráněného tripeptidu. Podle příkladu 48 se odstraní ochranná skupina Teoc za vzniku 300 mg surové etylSO2-D-Cha-N-cyklopentyl-Gly-S-Ppa-(2-thiazolyl) -TFA. Po čištění 150 mg této soli vznikne 112 mg výsledné sloučeniny.
• · · · • · ·· 4
Rt (kapalinová chromatografie) = 32,06 min; od A 20%, B 60%, C 20% do C 100 % během 40 minut.
Příklad 29 etylS02-D-Cha-N-oyklopentyl-Gly-S-Ppa(Eoc)-(2-thiazolyl)
V 10 ml N,N-dimetylformamidu se rozpustí 150 mg etylSO2D-Cha-N-cyklopentyl-Gly-S-Ppa-(2-thiazolyl) -TFA. Při zachování pH přibližně 8,5 působením trietylaminu se přidává 38 μΐ etylchlormravenčanu a reakční směs se 2 hodiny míchá při teplotě místnosti. Reakční směs se zředí 100 ml etylacetátu, promyje se IN roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou. Organický podlí se suší nad síranem sodným, filtruje se a zahustí se dosucha za vzniku 100 mg etylS02-D-Cha-N-cyklopentyl-Gly-S-Ppa(Eoc)-(2-thiazolyl).
TLC oxid křemičitý (dichlormetan:metanol = 9:1): Rf 0,45.
Příklad 30
HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Ppa-T [COCO] -NH2
Část a: N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ρρ3(Βοο)-Ψ- [CHOCHO]-OH
- 70 Syntéza Ν-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH je popsána v příkladě 1. Vazebná reakce N-(t-butyloxykarbonylmetyl ) -N-Boc-D-Cha-Pro-OH a H-Ppa(Boc)-Ψ[CHOCHO]-OMe -HCI a saponifikace se provede podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,80, silikagel, směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:20:6:11.
Část b: N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa(Boc)-Ψ- [CHOCHO]-NH2
Ve 12ml N, N-dimetylf ormamidu se rozpustí 400 mg N-(tbutyloxy-karbonylmetyl) -N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa (Boc) -Ψ[CHOCHOj-OH. Reakční roztok se zchladí v lázni ledu a vody a postupně se přidá 91,3 mg HOBt, 91,3 μΐ N-metylmorfolinu, 50,5 mg amoniumchloridu a 102 mg EDCI. Reakční směs se 16 hodin míchá při teplotě místnosti, vlije se do 1M roztoku kyseliny chlorovodíkové a extrahuje se etylacetátem. Sloučené extrakty se promyjí vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou, suší se nad síranem sodným a odpařují se ve vakuu za vzniku 400 mg výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,25, silikagel , eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:20:6:11.
Část c: HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Ppa-T [COCO]-NH2
Dess-Martinova oxidace, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 1 za vzniku
- 72 sloučeniny jako směsi diastereoisomerů.
Rt (kapalinová chromatografie) =28,05 a 28,34 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 33
HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Ppa-T [COCO] - (NH- (CH2)2-fenyl)
N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa(Boc)-Ψ- [CHOCHO] - (N-(CH2) 2-fenyl) se připraví podle postupu příkladu 30 za použití 2-(fenyl)etylaminu. Dess-Martinova oxidace, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny jako směsi diastereoisomerů.
Rt (kapalinová chromatografie) = 38,82 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 34
HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Ppa-T [COCO] - (NH-CH2fenyl)
N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa(Boc)-Ψ- [CHOCHO] - (NH-CH2-fenyl) se připraví podle postupu příkladu 30 za použití benzylaminu. Dess-Martinova oxidace, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny jako směsi diastereoisomerů.
• · ···« ·
Rt (kapalinová chromatografie) = 36,46 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 35 etylS02-D-Cha-Pro-Ppa-T [COCO] -NH2
EtylS02-D-Cha-Pro-OH se připraví podle postupu příkladu 18. Vazebná reakce (za přítomnosti DCCI/HOBt) etylSO2-D-Cha-Pro-OH a H-Ppa (Boc) Ψ [CHOCHO]-OMe-HCI, saponifikace a vazebná reakce za přítomnosti EDCI s amoniumchloridem se provede podle postupu příkladu 30. Dess-Martinova oxidace, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny jako směsi diastereoisomerů.
Rt (kapalinová chromatografie) = 36,70 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 36 etylS02-D-Cha-Pro-Ppa-Ψ [COCO] - (NH-CH2-fenyl)
EtylS02-D-Cha-Pro-OH se připraví podle postupu příkladu 18. Vazebná reakce (za přítomnosti DCCI/HOBt) etylSO2-D-Cha-Pro-OH a H-Ppa (Boc) Ψ [CHOCHO]-OMe-HCI, saponifikace a vazebná reakce za přítomnosti EDCI s benzylaminem se provede podle postupu příkladu 30. Dess-Martinova oxidace, odštěpení ochranných skupin a čištění se
provede podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny jako směsi diastereoisomerů.
Rt (kapalinová chromatografie) = 28,76 a 29,1 min; od A 20%,B 60%,C 20% do A 20%,B 0%,C 80 % během 30 minut.
Příklad 37 etylSOj-D-Cha-Pro-Ppa-T [COCO] -OME.
EtylS02-D-Cha-Pro-OH se připraví podle postupu příkladu 18. Vazebná reakce (za přítomnosti DCCI/HOBt) etylSO2-D-Cha-Pro-OH a H-Ppa(Boc)Ψ [CHOCHO]-OMe-HCI, saponifikace a vazebná reakce za přítomnosti EDCI s dimetylaminem se provede podle postupu příkladu 30. Dess-Martinova oxidace, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny jako směsi dvou diastereoisomerů.
A: Rt (kapalinová chromatografie) = 41,96 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
B: Rt (kapalinová chromatografie) = 43,49 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 38 etylS02-D-Phe-Pro-Ppa-T [COCO] -NH.
• · ···· · • ····
99 · 4 ·
4 9· « 494 9 4
9 9
44
- 75 EtylS02-D-Phe-Pro-0H se připraví podle postupu příkladu 18. Vazebná reakce (za přítomnosti DCCI/HOBt) etylSO2D-Phe-Pro-OH a H-Ppa (Boc) Ψ [CHOCHO]-OMe-HCI, saponifikace a vazebná reakce za přítomnosti EDCI s amoniumchloridem se provede podle postupu příkladu 30. Dess-Martinova oxidace, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny jako směsi diastereoisomerů.
A: Rt (kapalinová chromatografie) = 28,81 a 29,25 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 39
HOOC-CH2-p-Cl-D-Phe-Pro-Ppa-T [COCO] -NH2
N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-p-Cl-D-Phe-Pro-OH se připraví podle postupu příkladu 5. Vazebná reakce (za přítomnosti DCCI/HOBt) N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-p-Cl-D-Phe-Pro-OH a H-Ppa (Boc) Ψ [CHOCHO]-OMe-HCI, saponifikace a vazebná reakce za přítomnosti EDCI s amoniumchloridem se provede podle postupu příkladu 30. Dess-Martinova oxidace, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny jako směsi diastereoisomerů.
Rt (kapalinová chromatografie) = 23,35 min; od A 20%, B
80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 40
HOOC-CH2-p-Cl-D-Phe-Pro-Ppa-T [COCO] - (NH-CH2-fenyl)
N- (t-butyloxy-karbonylmetyl) -N-Boc-p-Cl-D-Phe-Pro-OH se připraví podle postupu příkladu 5. Vazebná reakce (za přítomnosti DCCI/HOBt) N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-p-Cl-D-Phe-Pro-OH a H-Ppa(Boc)Ψ [CHOCHO]-OMe-HCI, saponifikace a vazebná reakce za přítomnosti EDCI s benzylaminem se provede podle postupu příkladu 30. Dess-Martinova oxidace, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny jako dvou diastereoisomerů.
A: Rt (kapalinová chromatografie) = 19,29 min; od A 20%, B 60%, C 20% do A 20%, B 0%, C 80 % během 30 minut.
B: Rt (kapalinová chromatografie) = 37,61 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Přiklad 41 [l-oxo-2-[3-(fenylmetyl-sulfonylamino)-2-oxo-2H-pyridin-l-yl] etyl] Ppa-Ψ [COCO] - (NH-CH2fenyl)
Část a: [3-(fenyl-metylsulfonylamino)-2-oxo-2H-pyridin-1-yl]octová kyselina
Etylester kyseliny (3-amino-2-oxo-2H-pyridin-l-yl)octové se připraví podle J.Med.Chem., 1996, 37, 3090 - 77 • · · · ·
- 3099. Následná sulfonylace a saponifikace se provede podle postupu uvedeného v příkladě 12.
TLC: Rf = 0,4, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:20:6:11.
Část b: benzylS02-3-NH2-l-karboxymetylpyridin-2-on-Ppa-Ψ [COCO] - (NH-CH2fenyl)
Vazebná reakce benzylS02-3-NH2-l-karboxymetyl-pyridin-2-onu a H-Ppa (Boc) Ψ [CHOCHO]-OMe-HCI (příklad 1), saponifikace, vazebná reakce za přítomnosti amidu, DessMartinova oxidace, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 34 za vzniku dvou diastereoisomerů A a B výsledné sloučeniny.
A: Rt (kapalinová chromatografie) = 21,6 min; od A 20%,
B 60%, C 20% do C 100% během 40 minut.
B: Rt (kapalinová chromatografie) = 22,8 min; od A 20%,
B 60%, C 20% do C 100% během 40 minut.
Příklad 42 benzylS02-norLeu (cyklo) -Gly-S-Ppa-Ψ [COCO] - (NH-CH2f enyl)
Podle příkladu 12 se připraví benzylS02-norLeu (cyklo)-Gly-OH.
Vazebná reakce (za přítomnosti DCCI/HOBt) benzylS02-norLeu(cyklo)-Gly-OH a H-S-Ppa(Boc)Ψ[CHOHCO]-OMe -HCI (část m příkladu 12), saponifikace a vazebná reakce za
- 78 přítomnosti EDCI s benzylaminem se provede podle postupu příkladu 30. Dess-Martinova oxidace, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 1 za vzniku výsledné sloučeniny.
Rt (kapalinová chromatografie) = 23,46 min; od A 20%, B 60%, C 20% do A 20%, B 0%, C 80 % během 30 minut.
Příklad 43
HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Ppa- (2-benzthiazolyl)
Část a: Boc-Ppa(Cbz)OMe
Podle části m příkladu 1 se z Boc-Ppa(Cbz)-OH (příklad 45) připraví výsledná sloučenina.
Část b: Boc-Ppa(Cbz)-(2-benzthiazolyl)
Do 3,9 ml míchaného 1,3M roztoku n-butyllithia v hexanu o teplotě -30eC se po kapkách přidá roztok 675 mg benzthiazolu ve 25 ml tetrahydrofuranu. Reakční roztok se 15 minut míchá při teplotě -30*C, a pak se pomalu přidá při teplotě -40°C do roztoku 1,0 g Boc-Ppa(Cbz)OMe ve 25 ml bezvodého tetrahydrofuranu. Reakční směs se 2 hodiny míchá při teplotě -20°C, přidá se 5% vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného a směs se nechá ohřát na teplotu místnosti. Podíly se oddělí, vodný podíl se extrahuje etylacetátem a sloučené organické extrakty se promyjí vodou, suší se nad síranem sodným, filtrují se a zahustí se odpařováním za vzniku 1,83 g oleje. Tento
- 79 zbytek se po absorbci na kolonu oxidu křemičitého čistí chromatografií při eluci směsí heptanu a etylacetátu v poměru 1:2 za vzniku 230 mg.
TLC silikagel (heptan:etylacetát = 1:2): Rf 0,35.
Část c: N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-(Boc)-D-Cha-Pro-Ppa(Cbz)-(2-benzthiazolyl)
Odštěpení ochranné skupiny z Boc-Ppa(Cbz)-(2-benzthiazolyl) a vazebná reakce s N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-(Boc)-D-Cha-Pro-OH se provede podle postupu příkladu 45. Čištěním chormatografií na silikagelu při eluci gradientem koncentrací směsí heptanu a etylacetátu v poměru od 1:1 do 1:2 vznikne 200 mg výsledné sloučeniny.
TLC silikagel (heptan:etylacetát = 1:2): Rf 0,5.
Část d: HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Ppa-(2-benzthiazolyl)
Při teplotě místnosti se do směsi 6 ml kyseliny trifluoroctové a 0,6 ml thioanisolu přidá 0,45 g N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-(Boc)-D-Cha-Pro-Ppa(Cbz)-(2-benzthiazolyl). Po 4 hodinách se reakční směs zahustí a zbytek se rozpustí ve vodě. Vodný podíl se promyje dietyleterem a zahustí se ve vakuu. Surový materiál se čistí preparativní HPLC na koloně Deltapack C18 o velikosti částic sloupce 15gm, při eluci gradientem koncentrací elučního systému od A 20% a B 80% do A 20%, B 35% a C 45% během 45 minut při rychlosti průtoku 50 ml/min. Vzniknou dva diastereoisomery výsledné
sloučeniny.
Výtěžek 197 mg. Rt (kapalinová chromatografie) = 38,70 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Výtěžek 151 mg. Rt (kapalinová chromatografie) = 41,75 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 44
HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Ppa-(2-oxazolyl)
Část a: 1-[[2-(trimetylsilyl)etoxy]karbonyl]-4-[2-(t-butyloxy-karbonylamino)-3-hydroxy-3-(oxazol-2-yl)-propyl]piperidin
V atmosféře dusíku se při teplotě -78°C do roztoku 3,03 g Boc-Ppa(Teoc)N(Me)OMe (příklad 48) v 50 ml dichlormetanu přidá 20 ml ÍM roztoku diisobutylaluminiumhydridu v hexanu. Po 1 hodině chlazení se chladící lázeň odstraní, ihned se přidá 100 ml 0,25M roztoku kyseliny chlorovodíkové a další množství dichlormetanu. Po 5 minutách se vytvořená suspenze filtruje. Do filtrátu se přidá nasycený roztok chloridu sodného a organický podíl se oddělí. Po jeho sušení a zahuštění vznikne 2,36 g Boc-Ppa(Teoc)-H jako oleje. Směs tohoto 2,36 g aldehydu a 1,86 g 2-(trimetylsilyl)oxazolu (P.D. Edwards, D.J. Wolanin, D.W. Andisik a W.J. Davis, J.
- 81 Med. Chem. 38, 76 (1995)) se míchá a zahřívá 3 hodiny při teplotě 50eC. Reakční směs se nechá zchladit na teplotu místnosti a po třech dnech se reakční směs zahustí. Zbytek se rozpustí v 10 ml tetrahydrofuranu a 1 ml IN roztoku kyseliny chlorovodíkové. Po 1 hodině při teplotě místnosti se přidá etylacetát a nasycený roztok chloridu sodného. Po oddělení organického podílu se vodný podíl třikrát extrahuje etylacetátem. Sloučené organické podíly se suší nad síranem sodným a zahustí se. Protože proběhla jen částečná hydrolýza materiálu, zbytek se znovu rozpustí v 10 ml tetrahydrofuranu a IN roztoku kyseliny chlorovodíkové a po jedné hodině se přidá etylacetát a nasycený roztok chloridu sodného. Po oddělení organického podílu se vodný podíl třikrát extrahuje etylacetátem. Sloučené organické podíly se suší nad síranem sodným a zahustí se. Čištěním chromatografií na koloně silikagelu při eluci směsí etylacetátu a heptanu v poměru 3:2 vznikne 0,70 g výsledné sloučeniny.
TLC silikagel (etylacetát:heptan = 1:1): Rf 0,2.
Část b: Boc-Ppa-(Teoc)-(2-oxazolyl)
Do roztoku 0,70 g 1-[[2-(trimetylsilyl)etoxy]karbonyl]-4-[2-(t-butyloxy-karbonylamino)-3-hydroxy-3-(oxazol-2-yl)propyl]piperidinu v 10 ml dichlormetanu se přidá 0, 6 g Dess-Martinova činidla. Po 1 hodině míchání při teplotě místnosti se přidá 50 ml 5% vodného roztoku thiosulfátu sodného a reakční směs se 45 minut míchá při teplotě místnosti. Organický podíl se oddělí, promyje se vodou, 5% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a zahustí se. Čištěním chromatografií na koloně silikagelu při eluci směsí etylacetátua heptanu v poměru 3:2 vznikne 455 mg výsledné sloučeniny.
TLC (etylacetát:heptan = 1:1): Rf 0,5.
Část c: N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa(Teoc)-(2-oxazolyl)
Do roztoku 477 mg Boc-Ppa(Teoc)-(2-oxazolyl) ve 12 ml dietyleteru a 2 ml etanolu se přidá 213 mg monohydrátu kyseliny p-toluensulfonové a eter se odstraní za sníženého tlaku při teplotě 30°C. Olejovitý zbytek se 20 minut zahřívá na teplotu 60*C, etanol se odstraní za sníženého tlaku a zbytek se suší ve vakuu za vzniku 0,5 g H-Ppa(Teoc)-(2-oxazolyl) -TsOH. Do roztoku 0,29 g N- (t-butyloxy-karbonylmetyl) -N-Boc-D-Cha-Pro-OH (příklad 1) v 10 ml N,N-dimetylformamidu se při teplotě -20°C a v atmosféře dusíku přidá 0,078 ml isobutylchlormravenčanu a 0,208 ml N,N-diisopropyletylaminu. Po 30 minutách se přidá roztok 0,25 g H-Ppa(Teoc)-(2-oxazolyl) · •TsOH v N,N-dimetylformamidu a 0, 050 ml N,N-diisopropyletylaminu. Reakčni směs se nechá ohřát na teplotu místnosti. Po dvou hodinách se reakčni směs zahustí za sníženého tlaku a zbytek se rozpustí v etylacetátu, promyje se 5% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a zahustí se. Čištěním chromatografií na silikágelu při eluci gradientem koncentrací směsí heptanu a etylacetátu v poměru od 1:1 do 1:2 vznikne 200 mg výsledné sloučeniny.
TLC (heptan:etylacetát = 1:2): Rf 0,5.
Část d: HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Ppa-(2-oxazolyl)
Do roztoku 0,20 g N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa(Teoc)-(2-oxazolyl) ve 2 ml dichlormetanu se přidají 2 ml kyseliny trifluoroctové a reakční směs se míchá při teplotě místnosti. Po 4 hodinách se reakční směs zahustí a čistí se preparativní HPLC na koloně 100A Deltapak C18 15 μη při eluci gradientem koncentrací elučního systému od A 20% a B 80% do A 20%, B 51% a C 29% během 45 minut při rychlosti průtoku 20 ml/min. Vzniknou dva diastereoisomery výsledné sloučeniny.
Výtěžek 49 mg. Rt (kapalinová chromatografie) = 27,83
min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 %
během 40 minut •
Výtěžek 46 mg. Rt (kapalinová chromatografie) = 30,04
min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 %
během 40 minut.
- 84 Příklad 45
HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Ppa- (2-thiazolyl)
Část a: Boc-Ppa(Cbz)-OH
Přidáním 2N roztoku hydroxidu sodného se přivede pH roztoku 70 g H-Ppa-OH, 39,85 g pentahydrátu sulfátu mědnatého a 147 g benzyloxy-karbonyloxysukcinimidu na pH 9. Reakční směs se 16 hodin míchá při teplotě místnosti, sraženina se sebere a důkladně se promyje vodou. Filtrační koláč se rozpustí v dioxanu a přidáním 4N roztoku hydroxidu sodného a se přivede směs na pH 12,5. Přidá se 129 g di-t-butyldikarbonátu. Reakční směs se 16 hodin míchá, sraženina se oddělí a promyje dioxanem. Filtrát se zahustí na malý objem a směs se okyselí na pH 2,5. Vytvořený zbytek se zředí etylacetátem, organický podíl se promyje vodou, suší se nad síranem sodným a odpařuje se dosucha za vzniku 100 g oleje.
TLC: Rf = 0,77, silikagel, eluční činidlo: směs dichlormetanu a metanolu v poměru 9:1.
Část b: Boc-Ppa(Cbz)-N(Me)(OMe)
Do roztoku 22,5 g Boc-Ppa(Cbz)-OH v 500 ml dichlormetanu se přidá 7,54 g N,O-dimetyl-hydroxylaminu-HCI a 24,75 g TBTU. Přidáním trietylamínu se reakční směs přivede na pH 8,5. Reakční směs se 2 hodiny míchá při teplotě místnosti, promyje se IN roztokem kyseliny
- 85 ·· · · chlorovodíkové, vodou, 5% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, suší se nad síranem sodným a zahustí se ve vakuu. Po krystalizaci z diisopropyleteru vznikne 15,4 bílé pevné látky výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,5, oxid křemičitý, eluční činidlo: směs dichlormetanu a etylacetátu v poměru 8:2.
Část c: Boc-Ppa(Cbz)-(2-thiazolyl)
Do míchaného roztoku 0,11 mol n-butyllithia ve 100 ml dietyleteru o teplotě -78 °C se po kapkách přidá roztok 18,2 g (0,11 mol) 2-bromthiazolu ve 100 ml dietyleteru. Reakční roztok se nejprve 30 minut míchá při teplotě -78°C, a pak se pomalu přidává roztok 15 g (0,035 mol)
Boc-Ppa(Cbz)-N(Me)(OMe) ve 300 ml bezvodého tetrahydrofuranu. Reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě -78°C, a přidá se 5% vodný roztok hydrogenuhličitanu sodného. Směs se nechá ohřát na teplotu místnosti a podíly se oddělí. Vodný podíl se extrahuje etylacetátem. Sloučené organické podíly se promyjí vodou, suší se nad síranem sodným, filtrují se a zahustí se odpařováním za vzniku 15,1 g oleje. Tento zbytek se po absorbci na kolonu oxidu křemičitého čistí chromatografií při elucí směsí dichlormetanu a metanolu v poměru 99:1 za vzniku 3,2 g výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,45, silikagel, eluční činidlo: směs dichlormetanu a metanolu v poměru 95:5.
Část d: H-Ppa(Cbz)-(2-thiazolyl)-TFA
V 10 ml směsi kyseliny trifluoroctové a dichlormetanu v poměru 1:1 se rozpustí 500 mg N-Boc-Ppa(Cbz)-(2-thiazolyl) a reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti. Surový amin se po odstranění rozpouštědla odpařováním oddělí jako olej s kvantitativním výtěžkem a bez dalšího čištění se použije v následující syntéze. TLC: Rf = 0,40, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:20:6:11.
Část e: N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa(Cbz)-(2-thiazolyl)
Do míchaného roztoku 490 mg N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH a 170 μΐ N,N-diisopropyletylaminu ve 12 ml bezvodého N, N-dimetylformamidu se při teplotě -15°C přidá v atmosféře dusíku 130 μΐ isobutylchlormravenčanu. Po 15 minutách se za stálého míchání do studeného roztoku anhydridu po kapkách přidá roztok H-Ppa(Cbz)-(2-thiazolyl) -TFA v 10 ml bezvodého N,N-dimetylformamidu. Přidáváním N,N-diisopropyletylaminu se pH reakční směsi udržuje na hodnotě pH 8,5. Reakční směs se 60 minut míchá při teplotě -15°C, reakční směs se odpaří dosucha a vytvořený zbytek se rozpustí v etylacetátu, postupně se promyje 2% vodným roztokem kyseliny citrónové, vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a zahustí se ve vakuu. Zbytek se po absorbci na kolonu oxidu křemiči- 87 • · · · <
• « 4 ·· ·· tého čistí chromatografií při eluci směsí dichlormetanu a metanolu v poměru 99:1 za vzniku 470 mg N-(t-butyloxykarbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa(Cbz)-(2-thiazolyl) .
TLC: Rf = 0,65, silikagel, eluční činidlo: směs dichlormetanu a metanolu v poměru 95:5.
Část f: ' HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Ppa-(2-thiazolyl)
Při teplotě místnosti se 4 hodiny míchá roztok 470 mg N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa(Cbz)-(2-thiazolyl) v 5 ml kyseliny trifluoroctové a 0,5 ml thioanisolu. Rozpouštědlo se odstraní ve vakuu a zbytek se čistí preparativní chromatografií na koloně Delta-Pak C18-RP při eluci gradientem koncentrací elučního systému od A 20%, B 70%, C 10% do A 20% B 20% a C 60% během 40 minut při rychlosti průtoku 80 ml/min.
(A: 0,5M roztok fosfátového pufru, pH = 2,1; B: voda;
C: směs acetnitrilu a vody v poměru 3:2). Vznikne 177 mg výsledné sloučeniny.
Výtěžek 177 mg. Rt (kapalinová chromatografie) = 33,57 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 46
HOOC-CH2-p-MeO-D-Phe-Pro-Ppa- (2-thiazolyl)
Příprava N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-p-MeO-D• · ·· ·· • · · » » <
• · · ·« • · ··· * • · * 1 • »·*· ·· ·· ·· chromatografie) A 20%, B 20%, C chromatografie) A 20%, B 20%, C
-Phe-Pro-OH je uvedena v příkladě 6. Vazebná reakce 135 mg H-Ppa(Cbz)-(2-thiazolyl), následné odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu uvedeného v příkladě 45 za vzniku dvou diastereoisomerů .
= 27,17 %
= 30,15 %
Výtěžek 37 mg. min; od A 20%, během 40 minut. Výtěžek 47 mg. min; od A 20%, během 40 minut.
Rt (kapalinová B 80%, C 0% do
Rt (kapalinová B 80%, C 0% do
Příklad 47
HOOC-CH.-p-Cl-D-Phe-Pro-Ppa-(2-thiazolyl)
Příprava N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-p-Cl-D-Phe-Pro-OH je uvedena v příkladě 5. Vazebná reakce 322 mg H-Ppa(Cbz)-(2-thiazolyl), následné odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu uvedeného v příkladě 45 za vzniku dvou diastereoisomerů .
Výtěžek 73 mg. Rt (kapalinová chromatografie) = 31,07 min; od A 20%, B 60%, C 20% do A 20%, B 0%, C 80 % během 30 minut.
Výtěžek 94 mg. Rt (kapalinová chromatografie) = 18,21 min; od A 20%, B 60%, C 20% do A 20%, B 0%, C 80 % během 30 minut.
- 89 Příklad 48
HOOC-CH2-D-Nle-Pro-Ppa-(2-thiazolyl)
Syntéza N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Nle-Pro-OH je popsána v příkladě 8.
Část a: Boc-Ppa-N(Me)OMe
Do roztoku 820 mg Boc-Ppa(Cbz)-N(Me)OMe (část b příkladu 45) ve 25 ml N,N-dimetylformamidu se přidá 0,915 ml 2N roztoku kyseliny chlorovodíkové a 100 mg 10% paladia na aktivním uhlí. Reakční směs se 1 hodinu hydrogenuje při teplotě místnosti. Reakční směs se filtruje přes diacel, promyje se N,N-dimetylformamidem a neutralizuje se 0,15 ml trietylaminu. Jako surový produkt se použije v následující syntéze.
Část b: Boc-Ppa(Teoc)-N(Me)OMe
Do roztoku surového Boc-Ppa-N(Me)OMe se postupně přidává 567 mg 1-[2-(trimetylsilyl)etoxy-karbonyloxy]pyrolidin-2,5-dionu (TeocOSu; podle Synthesis 1987,
346) a 0,350 ml trietylaminu a reakční směs se 4,5 hodiny míchá při teplotě místnosti v atmosféře dusíku. Hodnota pH se udržuje na 8 přidáváním trietylaminu. Rozpouštědlo se odstraní odpařováním za sníženého tlaku, přidá se dichlormetan a roztok se promyje 100 ml 0,lN roztoku kyseliny chlorovodíkové, vodou, 5% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, suší se nad síranem hořečnatým a zahustí se ve vakuu za vzniku • ·
- 90 zbytku, který se po absorbci na kolonu oxidu křemičitého čistí chromatografií při eluci směsí heptanu a etylacetátu v poměru 8:2 za vzniku 784 mg výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,37, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu a heptanu v poměru 1:1.
Část c: ' Boc-Ppa(Teoc)-(2-thiazolyl)
V atmosféře dusíku se do 68,4 ml (1,07 mol/1) studeného roztoku n-butyllithium v dietyleteru o teplotě -70°C pomalu přidá 6,59 ml 2-bromthiazolu v 50 ml dietyleterua 30 minut se míchá při teplotě -70°C. Tento lithium- azolidový roztok se velmi pomalu přidává do studeného (-70°C) roztoku Boc-Ppa(Teoc)-N(Me)OMe ve 150 ml bezvodého tetrahydrofuranu a 1 hodinu se míchá pod dusíkem při teplotě -70°C. Reakční směs se zředí 200 ml 0,2N roztoku kyseliny chlorovodíkové, třikrát se extrahuje dichlořmetaném, organický podíl se promyje vodou, 5% vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, suší se nad síranem hořečnatým a zahustí se ve vakuu. Zbytek se po absorbci na kolonu silikagelu čistí chromatografií při eluci směsí heptanu a etylacetátu v poměru 8:2 za vzniku 11,35 g výsledné sloučeniny.
TLC (etylacetát:heptan = 1:1): Rf 0,68.
Část d: H-Ppa(Teoc)-(2-thiazolyl)-TsOH
Do roztoku 2,5 g Boc-Ppa(Teoc)-(2-thiazolyl) ve 100 ml dietyleteru se přidá 1,2 g kyseliny p-toluensulfonové.
• · · « · · · · · i
- 91 Reakční směs se pomalu odpařuje při teplotě 30’C a tlaku 20 kPa 1,5 hodiny při tlaku 1,5 kPa. Vznikne 3,03 g výsledné sloučeniny.
Část e: HOOC-CH2-D-Nle-Pro-Ppa- (2-thiazolyl)
Vazebná reakce N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Nle-Pro-OH a 307 mg H-Ppa(Teoc)-(2-thiazolyl) -TsOH, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 45 za vzniku dvou oddělených diastereoisomerů.
Výtěžek 96 mg. Rt (kapalinová chromatografie) = 23,45 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Výtěžek 99,6 mg. Rt (kapalinová chromatografie) = 26,60 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 49
HOOC-CH2-m-Cl-D,L-Phe-Pro-Ppa-(2-thiazolyl)
Příprava N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-m-Cl-D,L-Phe-Pro-OH je popsána v příkladě 4. Vazebná reakce s 325 mg H-Ppa(Teoc)-(2-thiazolyl)-TsOH, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 48 za vzniku čtyř oddělených diastereoisomerů. Výtěžek 80 mg. Rt (kapalinová chromatografie) = 28,68 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 %
9
- 92 • 9 · « · · ·· • · · · · · • · · • * · ·· během 40 minut.
Výtěžek 40 mg. Rt (kapalinová chromatografie) = 31,02 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Výtěžek 72 mg. Rt (kapalinová chromatografie) = 32,62 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Výtěžek 52 mg. Rt (kapalinová chromatografie) = 34,22 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 50
HOOC-CH.-D-Dpa-Pro-Ppa-(2-thiazolyl)
Část a: Boc-D-Dpa-Pro-OBzl
Vyzebnou reakcí 4,77 g Boc-D-Dpa-OH s 3,8 g H-Pro-OBzl se podle postupu příkladu 1 připraví 8,4 g výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,95, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 560:31:18:7.
Část b: Boc-D-Dpa-Pro-OH
Katalytickou hydrogenací 7 g Boc-D-Dpa-Pro-OBzl se podle postupu příkladu 1 připraví 5,5 g výsledné sloučeniny.
• ·
TLC: Rf = 0,59, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 520:31:18:7.
Část c: Boc-D-Dpa-Pro-Ppa(Teoc)-(2-thiazolyl)
Vazebnou reakcí 500 mg Boc-D-Dpa-Pro-OH a 573 mg H-Ppa(Teoc)-(2-thiazolyl) -TsOH se podle postupu uvedeného v příkladě 48 vznikne 712 mg výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,44, silikagel, eluční činidlo: směs heptanu a etylacetátu v poměru 4:6.
Část d: N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-D-Dpa-Pro-Ppa(Teoc)-(2-thiazolyl)
Na 712 mg Boc-D-Dpa-Pro-Ppa(Teoc)-(2-thiazolyl) se působí kyselinou p-toluensulfonovou podle postupu uvedeného v příkladě 48. Vznikne 761 mg H-D-Dpa-Pro-Ppa(Teoc)-(2-thiazolyl). Alkylací 761 mg tohoto produktu 0,138 ml t-butylbromacetátu podle postupu příkladu 1 vznikne 674 mg výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,54, silikagel, eluční činidlo: směs heptanu a etylacetátu v poměru 3:7.
Část e: HOOC-CH2-D-Dpa-Pro-Ppa-(2-thiazolyl)
Odštěpením ochranných skupin a čištěním podle postupu příkladu 48 vzniknou dva oddělené diastereoisomery.
Výtěžek: 64 mg. Rt (kapalinová chromatografie) = 35,16 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % • ·
- 94 během 40 minut.
Výtěžek: 96 mg. Rt (kapalinová chromatografie) = 36,80 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 51
HOOC-CH2-D-Cha-Ohi-Ppa-(2-thiazolyl)
Část a: N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-OH
Výsledná sloučenina se připraví podle postupu příkladu 45.
Část b: H-Ohi-OMe-HCl
Do roztoku 10 ml bezvodého metanolu o teplotě -15°C se po kapkách přidá 0,43 ml (0,7 g) thionylchloridu. Reak ční směs se 20 minut míchá při teplotě -10°C, přidá se 0,5 g kyseliny oktahydro-indolin-2-karboxylové (H-Ohi-OH) a reakční roztok se 3 hodiny míchá pod refluxem. Reakční směs se zahustí a odpařuje se s metanolem ve vakuu za vzniku 665 mg výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,68, silikagel, eluční činidlo: směs butanolu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 4:1:1:2.
Část c: N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Ohi-OMe
- 95 Do chladného roztoku 1,2 g N-(t-butyloxy-karbonylmetyl) -N-Boc-D-Cha-OH ve 40 ml dichlormetanu o teplotě 0°C se přidá 460 mg 1-hydroxybenztriazolu, 700 mg dicyklo-karbodiimidu a reakční směs se 20 minut míchá při teplotě 0°C. Do reakční směsi se přidá 665 mg H-Ohi-OMe-HCl a 0, 075 ml N,N-diisopropyletylaminu a reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě 0°C.
Následujích 7 dní se reakční směs udržuje při teplotě místnosti a pH 7 se upravuje N,N-diisopropyletylaminu. Reakční směs se zchladí na -20°C a dicyklohexylurea se odstraní filtrací. Filtrát se odpaří dosucha a vytvořený zbytek se rozpustí v etylacetátu a promyje se IN roztokem kyseliny chlorovodíkové, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chlori-du sodného, suší se nad síranem sodným a zahustí se ve vakuu. Zbytek se po absorbci na kolonu silikagelu čistí chromatografií při eluci směsí heptanu a etylacetátu v poměru 3:1 za vzniku 1,07 g výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,41, silikagel, eluční činidlo: směs heptanu a etylacetátu v poměru 3:1.
Část d: N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Ohi-OH
Do roztoku 1,05 g N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Ohi-OMe ve 30 ml směsi dioxanu a vody v poměru 2:1 se přidá 0,32 g monohydrátu hydroxidu lithného. Reakční směs se 6,5 hodiny míchá při teplotě místnosti.
- 96 »4·· 4 «
Dioxan se odstraní odpařováním za sníženého tlaku, přidá se etylacetát a pH se upraví přidáním kyseliny chlorovodíkové na pH 1,5. Vodný podíl se třikrát extrahuje etylacetátem. Organický podíl se promyje vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a zahustí se ve vakuu. Zbytek se po absorbci na kolonu silikagelu čistí chromatografií při eluci směsí heptanu a etylacetátu v poměru 1:2. Podíly obsahující výslednou sloučeninu se seberou a odpaří za vzniku 500 mg výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,25, silikagel, eluční činidlo: směs heptanu a etylacetátu v poměru 2:1.
Část e: HOOC-CH2-D-Cha-Ohi-Ppa-(2-thiazolyl)
Vazebnou reakcí N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Ohi-OH a 428 mg H-Ppa(Teoc)-(2-thiazolyl)· •TsOH, odštěpením ochranných skupin a čištěním podle postupu uvedeného v příkladě 48 vzniknou dva oddělené diastereisomery.
Výtěžek: 85 mg. Rt (kapalinová chromatografie) = 37,72 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Výtěžek: 127 mg. Rt (kapalinová chromatografie) = 42,46 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
- 97 Příklad 52
HOOC-CH2-D-Cha-Pro(4-cis-etyl)-Ppa-(2-thiazolyl)
Část a: N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro(4-cis-etyl)-OEt
N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-OH se připraví podle postupu příkladu 45. Do chladného roztoku 3,7 g N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-OH v 15 ml dichlormetanu o teplotě 0°C se přidá 1,43 g 1-hydroxybenztriazolu a 2,18 g dicyklohexyl-karbodiimidu a reakční směs se 15 minut míchá při teplotě 0°C. Podle WO 95/23608 se připraví 1,99 g H-Pro(4-cis-etyl)-OEt-HCl, který se přidá do reakční směsi spolu s 0,150 ml N, N-diisopropyletylaminu. Reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě 0°C, a další dvě hodiny se reakční směs udržuje při teplotě místnosti a při pH 7 použitím N, N-diisopropyletylaminu. Reakční směs se zchladí na teplotu -20°C, dicyklourea se odstraní filtrací a filtrát se odpaří dosucha. Zbytek se rozpustí v etylacetátu a promyje se IN roztokem kyseliny chlorovodíkové, nasyceným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a zahustí se ve vakuu. Zbytek se po absorbci na kolonu silikagelu čistí chromatografií při eluci směsí heptanu a etylacetátu v poměru 3:1. Podíly obsahující požadovaný produkt se seberou a odpaří za vzniku 3,87 g výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,46, silikagel, eluční činidlo: směs heptanu a etylacetátu v poměru 3:1.
Část b: N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro(4-cis-etyl)-OH
Do roztoku 3,85 g N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro(4-cis-etyl)-OEt ve směsi 50 ml dioxanu a vody v poměru 9:1 se přidá 7,5 ml IN roztoku hydroxidu sodného. Reakční směs se míchá při teplotě místnosti.
Po 60 hodinách se přidá roztok 70 mg monohydrátu hydroxidu lithného v 10 ml vody a směs se 12 hodin míchá. Reakční směs se zředí 100 ml vody, okyselí se na pH 1,5 přidáním kyseliny chlorovodíkové a vodný podíl se třikrát extrahuje dichlormetanem. Organický podíl se promyje vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a zahustí se ve vakuu.
Zbytek se po absorbci na kolonu silikagelu čistí chromatografií při eluci směsí heptanu a etylacetátu v poměru 1:2. Podíly obsahující výslednou sloučeninu se seberou a odpaří za vzniku 1,39 g výsledné sloučeniny. TLC: Rf = 0,79, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 126:20:11:6.
Část c: HOOC-CH2-D-Cha-Pro (4-cis-etyl)-Ppa-(2-thiazolyl)
Vazebnou reakcí N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro(4-cis-etyl)-OH a 325 mg H-Ppa(Teoc)-(2-thiazolyl) · TsOH, odštěpením ochranných skupin a čištěním podle postupu uvedeného v příkladě 48 vzniknou dva oddělené diastereisomery.
Výtěžek: 77,5 mg. Rt (kapalinová chromatografie) =
36,61 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Výtěžek: 104 mg. Rt (kapalinová chromatografie) = 40,05 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 53
HOOC-CH2-D-Coa-Pro-Ppa-(2-thiazolyl)
Část a: dietyl-2-acetylamino-2-(cyklooktylmetyl)-malonát
Do studené suspenze 5,36 g hydridu sodného ve 100 ml dioxanu o teplotě 0°C se po kapkách velmi pomalu přidá 134 ml bezvodého etanolu a reakční směs se 1,5 hodiny míchá v atmosféře dusíku a při teplotě 0°C. Vznikne etanolátový roztok, který se po kapkách přidá do roztoku 27,49 g cyklooktylmetylbromidu (část a příkladu 7), 2,0 g jodidu sodného a 29,10 g acetylaminomalonátu ve směsi 200 ml dioxanu a 20 ml etanolu. Reakční směs se 165 hodin energicky míchá při teplotě 80°C. Rozpouštědlo se odstraní odpařováním za sníženého tlaku, přidá se etylacetát, promyje se vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného,
- 100 suší se nad síranem hořečnatým a zahustí se ve vakuu. Zbytek se po absorbci na kolonu silikagelu čistí chromatografií při eluci směsí heptanu a etylacetátu v poměru 7:3. Podíly obsahující výslednou sloučeninu se seberou a odpařují se za vzniku 19,60 g výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,53, silikagel, eluční činidlo: směs heptanu a etylacetátu v poměru 7:3.
Část b: H-D,L-Coa-OH
Zahříváním roztoku 19,60 g dietyl-2-acetylamino-2-(cyklooktylmetyl)malonátu ve 450 ml směsi 4N roztoku kyseliny chlorovodíkové a kyseliny octové v poměru 2:1 pod refluxem vznikne po 75 hodinách H-Coa-OH. Reakční směs se zchladí, vytvořené krystaly se seberou filtrací a promyjí se dietyleterem za vzniku 9,83 g výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,59, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:20:6:11.
Část c: N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D, L-Coa-Pro-OBzl
Výsledná sloučenina se připraví podle postupu příkladu
1.
Část d: HOOC-CH2-D-Coa-Pro-Ppa-(2-thiazolyl)
N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-Coa-Pro-OH se
9
- 101 připraví hydrogenací 19,61 g N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-Coa-Pro-OBzl podle postupu příkladu 1. Na vytvořený olej se působí dietyleterem za vzniku dvou diastereoisomerů N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-Coa-Pro-OH, které se oddělí filtrací. Filtrát se odpaří za sníženého tlaku. Vzniklých 9,34 g tohoto produktu se použije ve vazebné reakci se 400 mg H-Ppa(Teoc)-(2-thiazolyl) · TsOH, odštěpením ochranných skupin a čištěním podle postupu uvedeného v příkladě 48 vzniknou dva oddělené diastereisomery.
Výtěžek: 137 mg. Rt (kapalinová chromatografie) = 36,10 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Výtěžek: 139 mg. Rt (kapalinová chromatografie) = 38,94 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 54
HOOC-CH2-D-Cha-Azt-Ppa- (2-thiazolyl)
Část a: N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-OH
N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-OH se připraví podle postupu příkladu 1.
Část b: N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Azt-OH
102
Do chlazeného roztoku 1,90 g N-(t-butyloxy-karbonylmetyl ) -N-Boc-D-Cha-OH a 0,6 ml N-metylmorfolinu v 15 ml dichlormetanu o teplotě -15 až -20°C se po kapkách přidá 0,71 ml isobutylchlor-mravenčanu. Po 45 minutách se přidá 0,50 g H-Azt-OH. Po 1 hodině se organický podíl extrahuje vodou, suší se nad síranem sodným, filtruje se rozpouštědlo se odstraní za sníženého tlaku. Vzniknou 2,3 g téměř bezbarvého oleje výsledné sloučeniny.
FAB-MS: m/e = 469 (M+H+) .
Část ·c: HOOC-CH2-D-Cha-Azt-Ppa- (2-thiazolyl)
Vazebnou reakcí s 428 mg H-Ppa(Teoc)-(2-thiazolyl), odštěpením ochranných skupin a čištěním podle postupu uvedeného v příkladě 48 vzniknou dva oddělené diastereoisomery.
Výtěžek: 72 mg. Rt (kapalinová chromatografie) = 28,10 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Výtěžek: 88 mg. Rt (kapalinová chromatografie) = 31,46 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 55
HOOC- (CH2) 2-D-Cha-Pro-Ppa- (2-thiazolyl)
Část a: N-(2-(t-butyloxy-karbonyl)etyl)-D-Cha-OMe • ·
- 103 Do suspenze 7,11 g D-Cha-OMe-HCI ve 25 ml acetnitrilu se přidá 2,6 ml N,N-diisopropyletylaminu a 25 ml terč. butylakrylátu. Reakční směs se zahřeje na 40°C a hodno ta pH se měřením pH papírkem a přidáváním N,N-diisopro pyletylaminu udržuje na pH 8. Po 1 týdnu se reakční směs zahustí a zbytek se rozpustí v etylacetátu, promy je se vodou a nasyceným roztokem chloridu sodného, sušíse nad síranem sodným a zahustí se za vzniku 11,78 g výsledné sloučeniny, která se bez dalšího čištění použije v následující syntéze.
TLC: Rf = 0,7, silikagel, eluční činidlo: směs heptanu a etylacetátu v poměru 1:1.
Část b: N-(2-(t-butyloxy-karbonyl)etyl)-N-Boc-D-Cha-OMe
Podle postupu popsaného pro přípravu N-(t-butyloxykarbonylmetyl ) -N-Boc-D-Cha-OMe (příklad 1) se 11,78 g N-(2-(t-butyloxy-karbonyl)etyl)-D-Cha-OMe přemění na 8,78 g N-(2-(t-butyloxy-karbonyl)etyl·)-N-Boc-D-Cha-OMe TLC: Rf = 0,7, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu a heptanu v poměru 1:2.
Část c: N-(2-(t-butyloxy-karbonyl)etyl)-N-Boc-D-Cha-OH
Podle postupu popsaného pro přípravu N-(t-butyloxykarbonylmetyl ) -N-Boc-D-Cha-OH (příklad 1) se saponifikuje 10,0 g N-(2-(t-butyloxy-karbonyl)etyl)-N-Boc-D-Cha-OMe za vzniku 4,31 g N-(2-(t-butyloxy104 karbonyl)etyl)-N-Boc-D-Cha-OH.
TLC: Rf = 0,1, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu a heptanu v poměru 1:5.
Část d: N-(2-(t-butyloxy-karbonyl)etyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-OBzl
Podle postupu popsaného pro přípravu N-(t-butyloxykarbonylmetyl )-N-Boc-D-Cha-Pro-OBzl (příklad 1) se provede vazebná reakce 3,14 g N-(2-(t-butyloxy-karbonyl) etyl) -N-Boc-D-Cha-OH s Pro-Obzl-HCI za vzniku 4,36 g N-(2-(t-butyloxy-karbonyl)etyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-OBzl. TLC: Rf = 0,5, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu a heptanu v poměru 1:2.
Část e: N-(2-(t-butyloxy-karbonyl)etyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH
Podle postupu popsaného pro přípravu N-(t-butyloxykarbonylmetyl ) -N-Boc-D-Cha-Pro-OH (příklad 1) se 4,33 g N- (2-(t-butyloxy-karbonyl)etyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-OBzl hydrogenuje za vzniku 3,96 g N-(2-(t-butyloxy-karbonyl)etyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH.
TLC: Rf = 0,15, silikagel, etylacetát.
Část f: N-(2-(t-butyloxy-karbonyl)etyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa(Teoc)-(2-thiazolyl)
Podle postupu popsaného pro přípravu N-(t-butyloxykarbonylmetyl )-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa(Teoc)-(2-oxazolyl) (příklad 44) se provede vazebná reakce 342 mg N-(2-(t- 105
-butyloxy-karbonyl)etyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-OH s H-Ppa(Teoc)-(2-thiazolyl) · TsOH (příklad 48) za vzniku 468 mg N-(2-(t-butyloxy-karbonyl)etyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa(Teoc)-(2-thiazolyl).
TLC: Rf = 0,25, silikagel, elučni činidlo: směs etylacetátu a heptanu v poměru 1:1.
Část g: ' HOOC-CH2CH2-D-Cha-Pro-Ppa-(2-thiazolyl)
Podle postupu popsaného pro přípravu HOOC-CH2-D-Cha-Pro-Ppa-(2-oxalyl) (příklad 44) se z 468 mg N-(2-(tbutyloxy-karbonyl)etyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa(Teoc)-(2-thiazolyl) odštěpí ochranná skupina za vzniku dvou diastereoisomerů N-(HOOC-CH2CH2)-D-Cha-Pro-Ppa-(2-thiazolyl) .
Výtěžek: 123 mg. Rt (kapalinová chromatografie) = 30,2 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Výtěžek: 138 mg. Rt (kapalinová chromatografie) = 33,6 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 56
HOOC-CH2-(N-Me)-D-Cha-Pro-Ppa-(2-thiazolyl)
Část a: Boc-D-Cha-OMe
Do roztoku 20 g Boc-D-Cha-OH ve 400 ml směsi dichlor- 106 metanu a metanolu v poměru 9:1 se přidá 22,7 g 2-(lH-benztriazol-l-yl)-1,1,3,3-tetrametyl-uronium-tetrafluorborátu (TBTU). Přidáním 10 ml trietylaminu se pH reakční směsi přivede na 8. Reakčni směs se 16 hodin míchá při teplotě místnosti. Směs se promyje studeným IN roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného a vodou, suší se nad síranemsodným a filtrát se odpaří. Vytvořený zbytek se po absorbci na kolonu silikagelu čistí chromatografií při eluci směsí etylacetátu a heptanu v poměru 2:3. Podíly obsahující Boc-D-Cha-OMe se oddělí a rozpouštědlo se odpaří za vzniku 19,38 g výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,90, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu a heptanu v poměru 3:1.
Část b: Boc-(N-Me)-D-Cha-OMe
Ve 200 ml N,N-dimetylkformamidu se v atmosféře dusíku rozpustí 19,35 g Boc-D-Cha-OMe. Přidá se 4,22 ml metyljodidu a směs se zchladí na teplotu 0°C. Přidá se 2,71 g hydridu sodného jako 60% disperze v minerálním oleji. Reakční směs se 3 hodiny míchá při teplotě místnosti. Reakční směs se částečně zahustí, přidá se etylacetát a organický podíl se promyje 0,lM roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a nasyceným roztokem chloridu sodného, suší se nad síranem sodným a zahustí se za vzniku 21,07 g výsledné sloučeniny.
- 107
TLC: Rf = 0,55, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu a heptanu v poměru 3:7.
Část c: Boc-(N-Me)-D-Cha-OH
Na roztok 20 g Boc-(N-Me)-D-Cha-OMe ve 400 ml dioxanu a vody v poměru 9:1 se 16 hodin působí 2M roztokem hydroxidu sodného k pH 12 při teplotě místnosti. Po okyselení se směs vlije do vody a extrahuje se dichlormetanem.Organický podíl se promyje vodou a suší se nad síranem sodným. Filtrát se odpaří za vzniku 21,2 g výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,75, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:20:6:11.
Část d: Boc-(N-Me)-D-Cha-OBzl
Ve 20 ml dichlormetanu se rozpustí 2 g Boc-(N-Me)-D-Cha-OH ve 20 ml dichlormetanu. Přidá se 2,24 g 2-(lH-benztriazol-l-yl)-1,1,3,3-tetrametyl-uronium-tetrafluorborátu (TBTU) a 0,76 g benzylalkoholu. Přidáním 10 ml trietylaminu se pH reakční směsi přivede na 8. Reakční směs se 1 hodinu míchá při teplotě místnosti. Směs se promyje studeným IN roztokem kyseliny chlorovodíkové, vodou, 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, suší se nad síranem sodným a filtrát se odpaří. Vytvořený zbytek se po absorbci na kolonu silikagelu čistí chromatografií při eluci směsí etylacetátu a heptanu v poměru 1:3. Podíly obsahující (N-Me)-Boc-D··· ·
- 108 -
-Cha-OBzl se oddělí a rozpouštědlo se odpaří za vzniku 1,56 g výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,75, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu a heptanu v poměru 3:1.
Část e: H-(N-Me)-D-Cha-OBzl
Na 1,56 g Boc-(N-Me)-D-Cha-OBzl se při teplotě místnos ti působí 20 ml 50% roztoku kyseliny trifluoroctové a dichlormetanu. Po 1 hodině při teplotě místnosti se reakční směs odpaří dosucha za vzniku 1,6 g výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,50, silikagel oxid křemičitý, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:20:6:11.
Část f: N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-(N-Me)-D-Cha-OBzl
Do míchaného roztoku 1,6 g Boc-(N-Me)-D-Cha-OBzl ve 40 ml acetnitrilu se přidá 0,81 g t-butylbromacetátu. Přidá se 150 mg tetrabutylamoniumbromidu. Reakční směs se přidáním N,N-diisopropyletylaminu přivede na pH 8,5 a reakční směs se 16 hodin míchá při teplotě 50°C, a následně se odpařuje ve vakuu. Zbytek se rozpustí v etylacetátu a roztok se promyje 5% roztokem hydrogenuhličitanu sodného a vodou, suší se nad síranem sodným a odpařuje se ve vakuu. Vytvořený zbytek se se po absorbci na kolonu silikagělu čistí chromatografií při
109 eluci směsí heptanu a etylacetátu v poměru 4:1 za vzniku 1,11 g N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-(N-Me)-D-Cha-OBzl.
TLC: Rf = 0,95, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:20:6:11.
Část g: · N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-(N-Me)-D-Cha-OH
Do roztoku 1,11 g N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-(N-Me)-D-Cha-OBzl ve 20 ml metanolu se přidá 100 mg 10% roztoku paladia na aktivním uhlí a 1,43 ml 2M roztoku kyseliny chlorovodíkové. Reakčni směs se 1 hodinu hydrogenuje při tlaku 0,lMPa a při teplotě místnosti. Katalyzátor se odstraní filtrací, rozpouštědlo se odstraní odpařováním za sníženého tlaku. Vznikne 970 mg N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-(N-Me)-D-Cha-OH.
TLC: Rf = 0,75, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 163:20:6:11.
Část h: HOOC-CH2-(N-Me)-D-Cha-Pro-Ppa-(2-thiazolyl)
N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-(N-Me)-D-Cha-Pro-OH se připraví podle postupu příkladu 1. Vazebná reakce za přítomnosti směsného anhydridů, odštěpení ochranných skupin a čištění se provede podle postupu příkladu 48. Vzniknou dva oddělené diastereoisomery.
Výtěžek: 79 mg. Rt (kapalinová chromatografie) = 30,87 min; od A 20%, B 80%,C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % • · • ··· · φ« • » φφ «φ φ · φ · φ φ φφ φφφφ · φ φ φ
ΦΦ ·· během 40 minut.
Výtěžek: 79 mg. Rt (kapalinová chromatografie) = 34,58 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 57
EtOOC-CH2-D-Cha-Pro-Ppa- (2-thiazolyl)
N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Pro-Ppa(Teoc)(2-thiazolyl) se připraví podle postupu uvedeného v příkladě 48. Odštěpení ochranných skupin se provede 3M roztokem chlorovodíku v etanolu. Čištěním vzniknou dva diastereoisomery: 37 mg a 44 mg.
Rt (kapalinová chromatografie) = 35,24 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Rt (kapalinová chromatografie) = 38,12 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 58
H-(N-Me)-D-Cha-Pro-Ppa-(2-thiazolyl)
Část a: Boc-(N-Me)-D-Cha-Pro-OH
Příprava výsledné sloučeniny je popsána v příkladě 16.
• ·
- 111
Část b: N-Me-D-Cha-Pro-Ppa-(2-thiazolyl)
Vazebná reakce 400 mg Boc-(N-Me)-D-Cha-Pro-OH s
H-Ppa(Cbz)-(2-thiazolyl) -TFA se provede podle postupu uvedeného v příkladě 45. Na získaný tripeptid se působí směsí kyseliny trifluoroctové a thioanisolu (viz příklad 45) a produkt se čistí HPLC za vzniku 218 mg směsi diástereoisomerů.
Rt (kapalinová chromatografie) = 31,96 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 59 etylSO.-D-Cha-Pro-Ppa-(2-thiazolyl)
Část a: etylS02-D-Cha-Pro-OH
Výsledná sloučenina se připraví podle postupu příkladu 18.
Část b: etylS02-D-Cha-Pro-Ppa-(2-thiazolyl)
Vazebnou reakcí 300 mg etylS02-D-Cha-Pro-OH s
H-Ppa(Cbz)-(2-thiazolyl), která se provede podle postupu uvedeného v příkladě 45, vznikne po čištění 560 mg etylS02-D-Cha-Pro-Ppa (Cbz) - (2-thiazolyl) . Odštěpením ochranných skupin a čištěním podle příkladu 45 vznikne etylS02-D-Cha-Pro-Ppa-(2-thiazolyl) jako směs diástereoisomerů.
Rt (kapalinová chromatografie) = 26,67 a 28,20 min; od • <·
- 112
A 20%, B 60%, C 20% do C 100% během 40 minut.
Příklad 60 etylS02-D-Phe-Pro-Ppa-(2-thiazolyl)
Vazebnou reakcí etylS02-D-Phe-Pro-OH (příklad 26) s H-Ppa(Teoc)-(2-thiazolyl) -TsOH (příklad 47), která se provede podle postupu uvedeného v příkladě 48, vznikne plně chráněný tripeptid. Podle příkladu 48 se provede odštěpení ochranných skupin a po HPLC se oddělí dva diastereoisomery.
Výtěžek 80 mg: Rt (kapalinová chromatografie) = 39,87 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Výtěžek 69 mg: Rt (kapalinová chromatografie) = 42,45 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 61
BenzylSO2-norLeu(cyklo)-Gly-Ppa-(2-thiazolyl)
Podle postupu příkladu 45 se provede vazebná reakce 235 mg benzylS02-nor-Leu(cyklo)-Gly-OH (příklad 12) s H-Ppa(Cbz)-(2-thiazolyl) -TFA. Odstraněním ochranné skupiny tripeptidu (příklad 45) vzniknou po čištěním HPLC dva diastereoisomery.
• ·
- 113 Výtěžek 99 mg: Rt (kapalinová chromatografie) = 37,99 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Výtěžek 86 mg: Rt (kapalinová chromatografie) = 38,68 min; od A 20%, B 80%, C 0% do A 20%, B 20%, C 60 % během 40 minut.
Příklad 62
Syntéza HOOC-CH2-D-Cha-X-Ppa-(2-thiazolyl) na pevné fázi (tabulka 62)
Část a: Teoc-Ppa(Boc)-OH
Přidáním 4N roztoku hydroxidu sodného se přivede pH roztoku 18,4 g H-Ppa-OH a 6,8 g pentahydrátu sulfátu měďnatého v 312 ml vody a 234 ml dioxanu, do kterého se přidá 33,9 g di-t-butyl-dikarbonátu, na pH 9. Reakční směs se 16 hodin míchá při teplotě místnosti, sraženina se sebere a promyje se vodou. Filtrační koláč se uvede do suspenze v dioxanu a přidáním 4N roztoku hydroxidu sodného se přivede směs na pH 12,5. Ve dvou částech se v 0,5 hodinových intervalech přidá 24 ml 2-trimetyl-silyl-etyloxy-karbonylchloridu. Reakční směs se 16 hodin míchá, sraženina se oddělí filtrací a promyje dioxanem. Filtrát se zahustí na malý objem a směs se okyselí na pH 2,5. Vytvořený zbytek se zředí etylacetátem, promyje se vodou, suší se nad síranem sodným a • ·
- 114 •« · · · ♦ · · • · · · · · • · · ···· · • · ··» ·«····· · · ·· odpařuje se dosucha za vzniku 24,9 g oleje.
TLC: Rf = 0,79, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:20:6:11.
Část b: Teoc-Ppa(Boc)-N(Me)OMe
Do roztoku 29,8 g Teoc-Ppa(Boc)-OH a 7,54 g N,0-dimetyl-hydroxylamin-hydrochloridu v 370 ml dichlormetanu se přidá 23 g 0-(benztriazol-l-yl)-Ν,Ν,Ν',N'-tetrametyluronium-tetrafluorborátu a 20,2 ml trietylaminu. Reakční směs se 2 hodiny míchá, extrahuje se vodou a 0,9M vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, suší se nad síranem hořečnatým a zahustí se. Zbytek se po absorbci na kolonu silikagelu čistí chromatografií při elucí gradientem koncentrací směsi od 0 do 5% roztoku metanolu v dichlormetanu. Vznikne 32,2 g výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,42, silikagel, eluční činidlo: směs toluenu a acetonu v poměru 3:1.
Část c: Teoc-Ppa(Boc)-(2-thiazolyl)
Roztok 70 ml 0,72 M roztoku n-butyllithia v dietyleteru se po kapkách přidá do čerstvě destilovaného roztoku 4,55 ml 2-bromthiazolu ve 40 ml dietyleteru o teplotě -78°C. Reakční roztok se nejprve 15 minut míchá, a pak se pomalu přidává roztok 7,2 g Teoc-Ppa(Boc)-N(Me)OMe ve 40 ml tetrahydrofuřanu. Reakční směs se 30 minut míchá, a pak se vlije do 200 ml vodného roztoku ·
9
- 115
hydrogenuhličitanu sodného. Éterový podíl se odděl! a vodný podíl se extrahuje eterem. Sloučené eterové podíly se promyjí vodou, suší se nad síranem hořečnatým a zahustí se. Zbytek se po absorbci na kolonu silikagelu čistí chromatografií za vzniku 6,43 g výsledné sloučeniny.
TLC: Rf = 0,61, silikagel, eluční činidlo: směs toluenu a acetonu v poměru 3:1.
Část d: Teoc-Ppa-(2-thiazolyl)-TsOH
Do roztoku 8 g Teoc-Ppa(Boc)-(2-thiazolyl) v 116 ml dietyleteru se přidá 3,16 g p-toluensulfonové kyseliny (1 H20). Reakční směs se pomalu zahustí v rotačním odpařovači při teplotě 30eC. Olejovitý zbytek se míchá další 2 hodiny v rotačním odpařovači ve vakuu za vzniku 9,2 g p-toluensulfonové soli'.
TLC: Rf = 0,6, silikagel, eluční činidlo: směs etylacetátu, pyridinu, kyseliny octové a vody v poměru 63:20:6:11.
Část e: Imobilizace Teoc-Ppa-(2-thiazolyl) -TsOH na hydroxymetylpolystyrenu (Teoc-Ppa(C(O)OCH2Pol) -(2-thiazolyl))
Do suspenze 10,0 g hydroxymetylpolystyrenu (HOCH2Pol) (0,97 mM/g) a 12,9 g di(N-sukcinimidyl)uhličitanu v 50 ml acetnitrilu a 50 ml dichlormetanu se přidá 7 ml trietylaminu. Reakční směs se 2 hodiny protřepává při teplotě místnosti. Pryskyřice se filtruje, postupně se • · · · · • ·
116 promyje dichlořmetaném, l-metyl-2-pyrolidinonem a dichlormetanem. Pryskyřice se znovu uvede do suspenze v 50 ml acetnitrilu a 50 ml dichlormetanu. Do suspenze se přidá 8,3 g Teoc-Ppa-(2-thiazolyl) -TsOH a 3,7 ml trietylaminu. Reakční směs se protřepává 17 hodin. Pryskyřice se oddělí filtrací, postupně se promyje dichlormetanem, l-metyl-2-pyrylidononem, dichlormetanem a dietyleterem a suší se ve vakuu za vzniku 13,3 g pryskyřice.
Část f: H-Ppa (C (O) OCH2Pol) - (2-thiazolyl) -HCl
Do 50 mg Teoc-Ppa(C(O) OCH2Pol)-(2-thiazolyl) se přidá 1,5 ml směsi kyseliny trifluoroctové a dichlormetanu v poměru 1:1. Reakční směs se 30 minut protřepává, pryskyřice se oddělí filtrací, promyje se dichlormetanem, 0,5M roztokem kyseliny chlorovodíkové ve směsi dioxanu a dichlormetanu v poměru 7:1 a dichlormetanem.
Část g: Boc-Phe-Ppa (C (O) OCH2Pol) - (2-thiazolyl)
Do roztoku 40 mg Boc-Phe-OH a 20 mg 1-hydroxybenztriazolu v 1 ml l-metyl-2-pyrolidinonu se přidá 23 μΐ N,N-diisopropyikarbodiimidu. Po 5 minutách míchání se do směsi přidá pryskyřice, a následně 5 μΐ 4-metylmorfolinu. Výsledná suspenze se 2 hodiny protřepává, filtruje se, promyje se l-metyl-2-pyrolidinonem, dichlormetanem a dietyleterem. Ostatní N-t-butyloxykarbonylaminokarboxylové kyseliny se naváží obdobným způsobem.
117
Část h: H-Phe-Ppa (C (O) OCH2Pol) - (2-thiazolyl) -HCl
Odstranění N-t-butyloxy-karbonylových skupin z Boc-Phe-Ppa (C (O) OCH2Pol) - (2-thiazolyl) se provede obdobně jako v popsaném, postupu pro odstranění Teoc skupiny z Teoc-Ppa(C(0) OCH2Pol)-(2-thiazolyl).
Část i: N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-Phe-Ppa(C (0) OCH2Pol)-(2-thiazolyl)
N-(t-butyloxy-karbonylmetyl)-N-Boc-D-Cha-OH se naváže s H-Phe-Ppa(C (0) OCH2Pol)-(2-thiazolyl) -HCl postupem popsaným pro vazbu Boc-Phe-OH s H-Ppa(C(0)OCH2Pol) -(2-thiazolyl).
Část j: HOOC-CH2-D-Cha-Phe-Ppa-(2-thiazolyl)
Na pryskyřici se působí 1 ml směsi kyseliny trifluoroctové a thioanisolu v poměru 10:1 a reakční směs se 4 hodiny protřepává. Reakční směs se filtruje, promyje se kyselinou trifluoroctovou a toluenem. Sloučené filtráty a promývací podíly se zahustí. Do pryskyřice se přidá heptan a směs se energicky míchá. Heptanový podíl se odstraní a nerozpustný olejovitý zbytek se promyje heptanem. Po sušení ve vakuu se vytvořený zbytek rozpustí ve vodě, filtruje se přes 0,45μ filtr a lyofilizuje se. Surový peptid se čistí preparativní chromatografií s vyloučením materiálu s určitou molekulovou hmotností na sloupci Superdex Peptide HR 10/30, při eluci směsí vody a acetnitrilu v poměru 4:1
- 118 * ft a při rychlosti průtoku 0,75 ml/min. Lyofilizací požadovaných podílů vznikne 6,4 mg HOOC-CH2-D-Cha-Phe-Ppa-(2-thiazolyl) .
Část k: HOOC-CH2-D-Cha-X-Ppa-(2-thiazolyl) (tabulka 62)
Podle postupu pro přípravu HOOC-CH2-D-Cha-Phe-Ppa- (2-thiazolyl) se připraví HOOC-CH2-D-Cha-X-Ppa-(2-thiazolyl) . Všechny sloučeniny se charakterizují kapalinovou chromatografií v reversní fázi na koloně Supelcosil LC-18-DB při rychlosti průtoku 1,0 ml/min a při užití systému elučních činidel: pufr A - 0,5M roztok fosfátovu draselného jako pufru (pH 2,1), pufr B - voda, pufr D - směs acetnitrilu a vody v poměru 9:1. Gradient od 0 do 30 minut: od 20%A/ 65%B/ 15%D do 20%A/ 25%B/ 55%D. Detekce v UV světle o vlnové délce 210 nm. Doba retence v minutách je uvedena v tabulce 62.
• ·
- 119 Tabulka 62
X doba retence X -doba retence
(a) Phe 27.5 (h) Thr 15.8
(b) Pro 21.7/23.8 (i) Gly 18.5/19.9
(c) lni 20.7/21.1 G) Gin 15.8/16.6
(d) Sar 20.3 (k) Om 12.0/12.8
(e) He 15.7 (1) Glu 17.8/19.3
(f) D-Phe 21.8 (m) Cha 20.8
(g) β-Ala 19.0/19.5
lni = kyselina isonipekotová (4-piperidinkarboxylová) Sar = sarkosin (N-methylglycin)
Orn = ornithin (kyselina S-(+)-2,5-diaminopentanová).
- 120 Příklad 63
Uvedenými postupy je možno připravit také následující sloučeniny:
- N-Me-D-Phe-Pro-Ppa-(2-thiazoiyl)
- HOOC-CH2-D-Phe-Pro-PpaT[COCO]-OH
- HOOC-CH2-D-Phe-Pro-Ppa-{2-thiazoiyI)
- HOOC-CH2-D-Cha-(N-cyclopentyJ)-Giy-Ppa-{2-thiazoiyI)
- HOOC-CHz-D-Cha-Pec-Ppa^PfCOCOJ-OH
- HOOC-CH2-D-Cha-Pec-Ppa-(2-thiazolyl)
-H(X3C-CH2-D-Cha-(N-<7clohexyi)-Gly-Ppa4ÚCOCO]-OH
- HOOC-CH2-D-Cha-{N-cyclohexyi)-Gíy-Ppa-(2-thiazoíyl)
- HOOC-CHz-D-Cha-^-^ciopropyO-Gly-Ppa^COCOl-OH
- HOOC-CH2-D-Cha-<N-cyc!opropyl)-Giy-Ppa-{2-thiazolyl)
- N-Me-D-Phe-^-cyciopentyO-Gly-PpaTfCOCOJ-OH
- N-Me-D-Phe-(N-cycÍopentyi)-Giy-Ppa-{2-thiazolyi)
- Z-propyl-pentanoyl-AspOOMej-Pro-PpaTTCOCOpOH
- 2-propyl-pentanoyl-Asp(OMe)-Pro-Ppa-(2-thiazolyi)
- Z-propyl-pentanoyl-Asp-Pro-Ppa^TCOCOj-OH
- 2-propyl-pentanoyl-Asp-Pro-Ppa-(2-thiazolyl)
- 1 -Piq-ÍN-cyclopentyO-Gly-PpaYtCOCOl-OH
- 1 -Piq-(N-cyclopentyl)-GIy-Ppa-{2-thiazolyl)
- Diphenylpropionyl-Pro-Ppa-(2-thiazolyl)
- N-Me-D-Nle-Pro-Ppa^PtCOCOl-OH
- N-Me-D-Nle-Pro-Ppa-(2-thiazolyl)
- EtSOz-D-Phe-Pro-PpaT^tCOCOJ-OH
- EtSOr-NíMej-D-Cha-Pro-PpaT^COCOl-OH
- EtSO2-N(Me)-D-Cha-Pro-Ppa-(2-thiazolyl)
- EtSOr-N(Me)-D-Cha-Pro-Ppa-(2-oxazolyl) -HOOC-CHrN(Me)-D-Cha-Pro-Ppa¥[COCO]-OH
- HOOC-CHi-N(Me)-D-Cha-Pro-Ppa-(2-thiazolyl)
- HOOC-CHr-N(Me)-D-Cha-Pro-Ppa-(2-oxazolyl) • · • · • · · · · » · ··· ··· · · 9 · · · • · · · · 9 · · · ·· · ♦ • · · · · · • •9 · ··· ···· ·· *·
- 121 Příklad 64
Zkouška na účinnost proti thrombinu
Thrombin (faktor Ha) je jeden z faktorů v koagulační kaskádě. Účinnost sloučenin podle vynálezu proti této látce byla zkoumána spektrofotometrickým měřením rychlosti hydrolýzy chromogenního substrátu s-2238 thrombinem. Tato zkouška na účinnost proti thrombinu v systému pufru byla použita pro- stanovení IC5Q pro zkoumané látky.
Prostředí
Prostředím pro vzorek byl pufr s tromethaminem, NaCl a polyethylenglykolem 6000 (pufr TNP). Referenční sloučeninou byla sloučenina 12581 (kabi). Nosným prostředím byl opět pufr TNP. Rozpouštění je možno usnadnit přidáním dimethylsulfoxidu, methanolu, ethanolu, acetonitrilu nebo terc.butylalkoholu, tyto látky nemají nepříznivý účinek až do koncentrace 2,5 % v konečné reakční směsi.
Provedení zkoušky
X
Reakční činidla :
1) Pufr s tromethaminem a NaCl (pufr TN). Pufr obsahuje 6,057 g, 50 mmol tromethaminu (tris), 5,844 g, 100 mmol NaCl a vodu do 1 litru. Hodnota pH roztoku se upraví na 7,4 při 37 °C přidáním HCI (10 mmol/1).
2) Pufr TNP: v pufru TN se rozpustí polyethylenglykol 6000 do koncentrace 3 g/litr.
3) Roztok S-2238: Jedna lahvička S-2238 s obsahem 25 mg (Kabi Diagnostica, Švédsko) se rozpustí ve 20 ml pufru ZN na koncentraci 1,25 mg/ml (2 mmol/litr).
• ·
- 122 4) Roztok thrombinu: Lidský thrombin v množství 16 000 nKat/lahvička (Centraal Laboratorium voor Bloedtransfusie, Amsterdam, The Netherlands) se rozpustí v pufru TNP na zásobní roztok s obsahem 835 nKat/ml. Bezprostředně před použitím se roztok zředí pufrem TNP na obsah 3,34 nKat/ml.
Všechny použité složky jsou analyticky čisté.
- Pro vodné roztoky se užije ultračistá voda (Milli-Q).
Příprava zkušebních a referenčních roztoků
Zkoumané referenční látky se rozpustí ve vodě Milli-Q _p na zásobní roztoky s koncentrací 10 mol/litr. Každý roztok se postupně ředí nosným prostředím za vzniku koncentra_3 —4 —5 ci 10 , 10 a 10 mol/litr. Tato ředění se včetně zásobního roztoku užijí v konečné koncentraci reakčni směsi při provedení zkoušky: 3 χ 10-3, 10~3, 3 χ ΙΟ-4, 10-4, 3 χ 10-5, 10-5, 3 χ 10“6 a 10“6 mol/litr.
Vlastní provedení:
Při teplotě místnosti se pipetou vloží střídavě 0,075 ml a 0,025 ml roztoku zkoumané látky nebo referenční látky nebo nosného prostředí do vyhloubení mikrotitrační plotny a tyto roztoky se pak zředí 0,115 ml a 0,0165 ml pufru TNP. Pak se do každého vyhloubení přidá 0,030 ml roztoku S-2238 a plotna se předehřeje a předběžně inkubuje za protřepávání v onkubátoru (Amersham) 10 minut při 37 °C. Po předběžné inkubaci se zahájí hydrolýza sloučeniny S-2238 přidáním 0,030 ml roztoku thrombinu do každého vyhloubení. Pak se plotna inkubuje při teplotě 37 °C za protřepávání po dobu 30 sekund. Po 1 minutě inkubace se každé 2 minuty měří absorbance každého vzorku při 405 nm po dobu 90 minut při odečítání kině- 123 • · • · · ft · · ft · · · · · · • ftft · · · ftftftft · • ftft ftftft • ft······ ftft ftft netickým odečítacím zařízením pro mikrotitrační plotny (Twinreader plus, Flow Laboratories).
Všechny údaje byly shromážděny v počítači IBM při použití systému LOTUS-MEASURE. Pro každou koncentraci zkoumané látky (vyjádřenou v mol/litr reakční směsi) a pro slepou zkoušku byl graficky znázorněn vztah mezi absorbancí a reakční dobou v minutách.
Vyhodnocení:
Pro každou konečnou koncentraci byla z křivky odečtena maximální absorbance. Hodnota ICc_ (konečná koncentrace v mikromol/litr, vyvolávající 50% inhibici maximální absorbance slepé zkoušky), byla vypočítána logitovou transformační analýzou podle publikace Hafner a další, Arzneim.-Forsch./Drug Res., 1977, 27(11). 1871 až 3.
V následující tabulce jsou uvedeny hodnoty IC5Q pro některé sloučeniny podle vynálezu:
sloučenina·z příkladu IC5o- ' (μΜ)
3 0.54
15 0.95
31 0.245
38 1.8
47 2.83
53 2.6
Zastupuje:
- 124

Claims (15)

  1. PATENTOVÉ
    1. Inhibitory serinproteázy
    NÁROKY obecného vzorce I
    A - B - X - NH - CH - C(O) - Y (I) kde
    A znamená atom vodíku, popřípadě substituovaný D,L-alfa-hydroxyacetyl, R1, R1-O-C(O)-, R1-C(O)-, R1-SO2~, R2OOC-(CHR2) -SO,-, R2OOC-(CHR2) -, H,NCO-(CHR2) nebo ochrannou skupinu na atomu dusíku, přičemž R znamená alkyl o 1 až 12 atomech uhlíku, alkenyl nebo alkinyl vždy o 2 až 12 atomech uhlíku nebo cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku, přičemž tyto skupiny mohou být substituovány substituentem ze skupiny cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku, alkoxyskupina o 1 až 6 atomech uhlíku, oxoskupina, OH, COOH, CF_ nebo atom hai logenu, nebo může R znamenat aryl o 6 až 14 atomech uhlíku, aralkyl o 7 až 15 atomech uhlíku nebo aralkenyl o 8 až 16 atomech uhlíku a arylové skupiny jsou popřípadě substituovány substituentem ze skupiny alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku, alkoxyskupina o 1 až 6 atomech uhlí2 ku, OH, COOH, CF, nebo atom halogenu, R znamena ne1 závisle atom vodíku nebo má stejný význam jako R a m znamená celé číslo 1, 2 nebo 3,
    B znamená jednoduchou chemickou vazbu, zbytek aminokyseliny vzorce -NH-CH/(CH2)pC(0)0H/-C(0)- nebo esterový derivát této skupiny, kde p znamená 0, 1, 2 nebo 3, • ·
    - 125 -N(alkyl)-CH2~C0- s alkylovou částí o 1 až 12 atomech uhlíku, N-(alkenyl)-CHg-CO- nebo -N(alkinyl)-CH2-COs alkenylovou nebo alkinylovou částí o 2 až 12 atomech uhlíku, -N(benzyl)-CH2~CO-, D-l-Tiq, D-3-Tiq,
    D-Atc, Aic, D-l-Piq, D-3-Piq nebo znamená B zbytek L- nebo D-aminokyseliny s hydrofobním postranním řetězcem, kterým je alkyl o 1 až 12 atomech uhlíku, popřípadě substituovaný nejméně jednou cykloalkylovou skupinou o 3 až 8 atomech uhlíku nebo arylovou skupinou o 6 až 14 atomech uhlíku, popřípadě obsahující heteroatom, například atom dusíku a může tedy jít o cyklohexyl, cyklooktyl, fenyl, pyridinyl, naftyl, tetrahydronaftyl a podobně, přičemž hydrofobní postranní řetězec je popřípadě substituován substituenty ze skupiny atom halogenu, trifluormethyl, nižší alkyl, jako methyl nebo ethyl, nižší alkoxyskupina, jako methoxyskupina, fenyloxyskupina, benzyloxyskupina a podobně, nebo B znamená zbytek L- nebo D-aminokyseliny s dózickým postranním řetězcem, například argininu nebo lysinu nebo znamená B zbytek L- nebo D-aminokyseliny s neutrálním postranním řetězcem, jako je methioninsulfon a podobně, přičemž hydrofobní, neutrální nebo bazický zbytek aminokyseliny je na atomu dusíku popřípadě substituován alkylovým zbytkem o 1 až 6 atomech uhlíku, nebo
    A a B společně tvoří zbytek R3R4-N-CHR5-C(0)-, v němž R3 a a 111
    R nezávisle znamenají R . R -0-C(0)-, R -C(0)-,
    R1-SO -, R2OOC-(CHR2) -S0„-, R2OOC-(CHR2) -, H NCO-(CHR2) iii 4* m m nebo ochrannou skupinu na atomu dusíku, nebo je některá 3 4 5 ze skupin R a R spojena s R za vzniku 5- nebo 6členného kruhu spolu se skupinou N-C, na niž jsou tyto substituenty vázány a uvedený kruh může být kondenzován • ·
    - 126 • · · · » · · • · · • ·····* s alifatickým nebo aromatickým 6-členným kruhem a znamená hydrofobní, bazický nebo neutrální postranní řetězec,
    X znamená zbytek L-aminokyseliny s hydrofobním postranním řetězcem kterým je alkylový zbytek o 1 až 12 atomech uhlíku, popřípadě substituovaný nejméně jednou cykloalkylovou skupinou o 3 až 8 atomech uhlíku nebo arylovou skupinou o 6 až 14 atomech uhlíku, popřípadě obsahující heteroatom, například atom dusíku, jde tedy o cyklohexyl, cyklooktyl, fenyl, pyridinyl, naftyl, tetrahydronaftyl a podobně, přičemž hydrofobní postran ní řetězec je popřípadě substituován substituenty ze skupiny atom halogenu, trifluormethyl, nižší alkyl, jako methyl nebo ethyl, nižší alkoxyskupina, jako methoxyskupina, fenyloxyskupina, benzyloxyskupina a podobně, nebo znamená X zbytek šeřinu, threoninu nebo cyklické aminokyseliny, například kyseliny 2-azetidinkarboxylové, prolinu, kyseliny pipekolové, 1-amino-l-karboxycykloalkanu o 3 až 8 atomech uhlíku v cykloalkylové části, kyseliny 4-piperidinkarboxylové nebo 4-thiazolidinkarboxylové, 3,4-dehydroprolinu, azaprolinu, 2-oktahydroindolkarboxylové kyseliny a podobně, přičemž cyklická aminokyselina popřípadě obsahuje další heteroatom ze skupiny dusík, kyslík nebo síra a je popřípadě substituována alkylovým zbytkem nebo alkoxyskupinou vždy o 1 až 6 atomech uhlíku, benzyloxyskupinou nebo oxoskupinou nebo znamená X skupinu p
    -NR -CH2~C(0)- nebo fragment vzorce z(CH\ •NH-CH N-CH2-C(O)- nebo
    - 127 • · kde n znamená 2, 3 nebo 4 a W znamená CH nebo N,
    Y znamená H, -CHF2, -CF^, -CO-NH-alkylen-C^H^ o 1 až 6 atomech uhlíku v alkylenové části, -COOR , kde R znamená atom vodíku nebo alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku, *7 Q *7 Q
    -CONR R , kde R a R nezávisle znamenají H nebo alkyl o 1 až 6 atomech uhlíku nebo společně tvoří alkylenový zbytek o 3 až 6 atomech uhlíku, nebo Y znamená heterocyklický zbytek ze skupiny 2-thiazol, 2-thiazolin, 2-benzothiazol, 2-oxazol, 2-oxazolin a 2-benzoxazol, přičemž tyto heterocyklické zbytky jsou popřípadě substituovány substituentem ze skupiny alkyl nebo alkoxyskupina vždy o 1 až 6 atomech uhlíku, fenyl, benzyloxyskupina nebo oxoskupina a r znamená celé číslo 0, 1,
  2. 2 nebo 3, jakož i prekurzory těchto látek nebo jejich farmaceuticky přijatelné soli.
    2. Inhibitory obecného vzorce I podle nároku 1, v nichž X znamená L-aminokyselinu s hydrofobním postranním 2 řetězcem, serin, threonin nebo -NR -CH2~C(O)-.
  3. 3. Inhibitory obecného vzorce I podle nároku 1, v nichž A má význam, uvedený v hlavním nároku,
    B znamená jednoduchou chemickou vazbu, zbytek aminokyseliny vzorce -NH-CH/(CH2)pC(O)OH/-C(O)- nebo její esterový derivát, kde p znamená 0, 1, 2 nebo 3,
    -N(alkyl)-CH2CO- o 1 až 6 atomech uhlíku v alkylové části, -N(alkenyl)-CH2-CO- o 2 až 6 atomech uhlíku v alkenylové části, -N(benzyl)-CH2~CO-, D-l-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-l-Piq, D-3-Piq nebo zbytek D-aminokyseliny s hydrofobním postranním řetězcem, popřípadě substituované na N alkylovým zbytkem o 1 až 6 atomech uhlíku, nebo
    X a ® · · · · · ® · ···· · a a · · · · · a ·· · ··· ···· ♦· ··
    - 128 A a B společně tvoří zbytek R3R4N-CHR5-C(0)-, znamená cyklickou aminokyselinu, popřípadě obsahující další heteroatom ze skupiny N, 0 nebo S a popřípadě substituovanou alkylovým zbytkem nebo alkoxyskupinou vždy o 1 až 6 atomech uhlíku, benzyloxyskupinou nebo oxoskupinou nebo X znamená -NR -CH2~C(O)- nebo fragment /CHA r \
    -NH-CH nebo
    N-CH2-C(O).
  4. 4. Inhibitory obecného vzorce I podle nároku 3, v nichž znamená atom vodíku, 2-hydroxy-3-cyklohexylpropionyl, 9-hydroxyfluoren-9-karboxyl, R^, R^-SOg-,
    R2OOC-(CHR2)m-S02-, R2OOC-(CHR2)m-, H2NCO-(CHR2)nebo ochrannou skupinu na atomu dusíku, přičemž R1 znamená alkyl o 1 až 12 atomech uhlíku, alkenyl o 2 až 12 atomech uhlíku, aryl o 6 až 14 atomech uhlíku, aralkyl o 7 až 15 atomech uhlíku nebo aralkenyl o 8 až 16 atomech uhlíku a skupiny R nezávisle znamenají atom vodíku nebo mají tentýž význam jako R^, znamená jednoduchou chemickou vazbu, D-l-Tiq, D-3-Tiq, D-Atc, Aic, D-l-Piq, D-3-Piq nebo zbytek D-aminokyseliny s hydrofobním postranním řetězcem, popřípadě substituované na dusíkovém atomu alkylovým zbytkem o 1 až 6 atomech uhlíku nebo tvoří A a B společně skupinu R3R4N-CHR5-C(0)-, znamená -CO-NH-alkylen-CfiHt- s alkylenovou částí o 1 O P 7 8 až 6 atomech uhlíku, -COOR , -CONR R nebo heterocyklický zbytek ze skupiny 2-thiazol, 2-thiazolin, • · • · · · 4 • · 4 ·· ··
    - 129 2-benzothiazol, 2-oxazol, 2-oxazolin a 2-benzoxazol.
  5. 5. Inhibitory obecného vzorce I podle nároku 4, v nichž
    A znamená vodík, R1-SO2- nebo R2OOC-(CHR2)m-,
    B znamená jednoduchou chemickou vazbu, D-l-Tiq, D-3-Tiq,
    D-Atc, Aic, D-l-Piq, D-3-Piq nebo zbytek aminokyseliny s hydrofobním postranním řetězcem nebo
    3 4 5
    A a B společně tvoří zbytek R R N-CHR -C(0)-, v němž alespoň e 3 4 .2 2 jeden ze symbolů R a R znamená R OOC-(CHR ) - nebo
    1 m R -S02~ a druhý nezávisle znamená alkyl o 1 až 12 atomech uhlíku, alkenyl nebo alkinyi o 2 až 12 atomech uhlíku, cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku, aralkyl o 7 až 15 atomech uhlíku, R1-SO?- nebo R2OOC-(CHR2) 5 2 m a R znamená hydrofobní postranní řetězec,
    Y znamená -CO-NH-alkylen-CcHc o 1 až 6 atomech uhlíku θ 6 6 v alkylenové části, -COORD, kde R° je atom vodíku nebo 7 8 alkyl o 1 až 3 atomech uhlíku, skupinu -CONR R , kde
    7 8
    R a R nezávisle znamenají vodík nebo alkyl o 1 až 3 atomech uhlíku nebo společně tvoří alkylenovou skupinu o 3 až 5 atomech uhlíku, nebo Y znamená heterocyklický zbytek ze skupiny 2-thiazol, 2-benzothiazol, 2-oxazol nebo 2-benzoxazol.
  6. 6. Inhibitory obecného vzorce I podle nároku 5, v nichž
    2 2
    A znamená skupinu R OOC-(CHR ) -,
    B znamená zbytek D-aminokyseliny s hydrofobním postranním řetězcem, nebo
    3 4 5
    A a B společně tvoří zbytek R R N-CHR -C(0)-, v němž alespoň « 3 4 2 2 jeden ze symbolů R a R znamená R OOC-(CHR ) - a druhý nezávisle znamená alkyl o 1 až 12 atomech uhlíku, alkenyl
    - 130 o 2 až 6 atomech uhlíku, cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku, benzyl, R1-SO2~ nebo R200C-(CHR2)m~ a
    X znamená zbytek kyseliny 2-azetidinkarboxylové, prolinu, kyseliny pipekolové nebo 4-thiazolidinkarboxylové,
    3.4- dehydroprolinu nebo kyseliny 2-oktahydroindokarboxylové nebo skupinu -/N-cykloalkyl/-CH2-C(O)- s cykloalkylovou částí o 3 až 8 atomech uhlíku.
  7. 7. Inhibitory obecného vzorce I podle nároku 6, v nichž
    A znamená skupinu HOOC-CH2-,
    B znamená D-Phe, D-Cha, D-Coa, D-Dpa, p-Cl-D-Phe, p-Omethyl-D-Phe, p-Oethyl-D-Phe, D-Nle, m-Cl-D-Phe,
    3.4- di-OMe-D-Phe nebo D-Chg, nebo
    A a B společně tvoří skupinu R R N-CHR -C(0)-, v níž alespoň o 3 4 jeden ze symbolu R a R znamena skupinu HOOC-CH2~ a druhý nezávisle znamená alkyl o 1 až 4 atomech uhlíku, alkyl-S0_- o 1 až 4 atomech uhlíku nebo H00C-CH2- a R znamená cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku, cykloalkylalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku v cykloalkylové části a 1 až 4 atomech uhlíku v alkylové části, fenyl, benzyl, popřípadě substituovaný atomem chloru nebo alkoxyskupinou o 1 až 4 atomech uhlíku.
  8. 8. Inhibitory obecného vzorce I podle nároku 7, v nichž A znamená HOOC-CH2~, B znamená D-Cha, X znamená prolin nebo -/N(cyklopentyl)/-CHg-C(0)-.
  9. 9. Inhibitory obecného vzorce I podle nároku 5, v nichž
    A znamená skupinu R^-SO2-,
    B znamená jednoduchou chemickou vazbu, D-l-Tiq, D-3-Tiq,
    D-Atc, Aic, D-l-Piq, D-3-Piq nebo zbytek D-aminokyseliny s hydrofobním postranním řetězcem nebo
    131
    3 4 5 společně tvoří skupinu R R N-CHR -C(0)-, v níž alespoň 3 4 1 jeden ze symbolů R a R znamená skupinu R -SOg- a druhý nezávisle znamená alkyl o 1 až 12 atomech uhlíku nebo skupinu rI-SC^-, znamená zbytek kyseliny 2-azetidinkarboxylové, prolinu, kyseliny pipekolové nebo 4-thiazolidinkarboxylové,
    3,4-dehydroprolinu nebo kyseliny 2-oktahydroindolkarboxylové nebo -/N-cykloalkyl/-CH2-C(0)- s cykloalkylovou částí o 3 až 8 atomech uhlíku nebo fragment
    -NH-CH ycH2)„\
    N-CH2-C(O)nebo nichž
    A
    B
    A a B
  10. 10. Inhibitory obecného vzorce I podle nároku 9, v znamená ethyl-SO2~ nebo benzyl-S02~, znamená jednoduchou chemickou vazbu, D-Phe, D-Cha,
    D-Coa, D-Dpa, p-Cl-D-Phe, p-Omethyl-D-Phe, p-Oethyl-DPhe, D-Nle, m-Cl-D-Phe, 3,4-di-OMe-D-Phe nebo D-Chg nebo společně tvoří skupinu R R N-CHR C(0)-, v níž alespoň jeden ze symbolů R3 a R4 znamená ethyl-SO2- nebo benzyl-S0?- a druhý nezávisle znamená alkyl o 1 až 12 atomech , 15, uhlíku nebo skupinu R -S02~ a R znamena cykloalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku, cykloalkylalkyl o 3 až 8 atomech uhlíku v cykloalkylové části a 1 až 4 atomech uhlíku v v alkylové části, fenyl, benzyl, difenylmethinyl, přičemž tyto skupiny jsou popřípadě substituovány atomem chloru nebo alkoxyskupinou o 1 až 4 atomech uhlíku.
    • · • · · · • · ··
    - 132
  11. 11. Inhibitory obecného vzorce I podle nároku 10, v nichž A znamená ethyl-SC^-» B znamená D-Cha, X znamená zbytek prolinu nebo -/N-(cyklopentyl)/-CH2-C(0)-.
  12. 12. Inhibitory obecného vzorce I podle některého z nároků 1 až 11, v nichž r = 1.
  13. 13. Farmaceutický prostředek, vyznačuj ící se t í m , že jako svou účinnou složku obsahuje inhibitory obecného vzorce I podle některého z nároků 1 až 12 spolu s farmaceutickými pomocnými látkami.
  14. 14. Inhibitory obecného vzorce I podle některého z nároků 1 až 12 pro použití k léčebným účelům.
  15. 15. Použití inhibitorů obecného vzorce I podle některého z nároků 1 až 12 pro výrobu farmaceutického prostředku pro léčení nebo prevenci chorob, vyvolaných nebo souvisejících s thrombinem.
CZ982779A 1996-03-01 1997-02-26 Inhibitory serinproteázy a farmaceutický prostředek CZ277998A3 (cs)

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP96200545 1996-03-01

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CZ277998A3 true CZ277998A3 (cs) 1999-02-17

Family

ID=8223738

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CZ982779A CZ277998A3 (cs) 1996-03-01 1997-02-26 Inhibitory serinproteázy a farmaceutický prostředek

Country Status (22)

Country Link
US (1) US6218365B1 (cs)
EP (1) EP1012164B1 (cs)
JP (1) JP2000506838A (cs)
KR (1) KR19990087416A (cs)
CN (1) CN1212705A (cs)
AR (1) AR006311A1 (cs)
AT (1) ATE277074T1 (cs)
AU (1) AU715765B2 (cs)
BR (1) BR9707812A (cs)
CA (1) CA2246722A1 (cs)
CZ (1) CZ277998A3 (cs)
DE (1) DE69730871D1 (cs)
HU (1) HUP9901503A3 (cs)
ID (2) ID16104A (cs)
IL (1) IL120311A (cs)
NO (1) NO983992L (cs)
NZ (1) NZ331486A (cs)
PL (1) PL328665A1 (cs)
TR (1) TR199801705T2 (cs)
TW (1) TW523513B (cs)
WO (1) WO1997031939A1 (cs)
ZA (1) ZA971733B (cs)

Families Citing this family (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US6214841B1 (en) 1997-05-15 2001-04-10 Eli Lilly And Company Antithrombotic compound
US6344450B1 (en) * 1999-02-09 2002-02-05 Bristol-Myers Squibb Company Lactam compounds and their use as inhibitors of serine proteases and method
BR0009674A (pt) 1999-04-09 2002-01-15 Basf Ag Composto, droga, e, uso de composto
WO2002006280A2 (en) * 2000-07-13 2002-01-24 Millennium Pharamaceuticals, Inc. INHIBITORS OF FACTOR Xa
CA2436774A1 (en) 2001-01-30 2002-08-08 R. Michael Lawrence Sulfonamide lactam inhibitors of factor xa
US6716869B2 (en) * 2001-12-17 2004-04-06 Pharmacia Corporation Protease inhibitors of the coagulation cascade isolated from Dysidea sponges
JP2005519098A (ja) * 2002-03-01 2005-06-30 ワーナー−ランバート・カンパニー、リミテッド、ライアビリティ、カンパニー 変形性関節症の治療方法
US7439226B2 (en) * 2003-09-30 2008-10-21 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Serine protease inhibitors
JP2008521853A (ja) * 2004-12-02 2008-06-26 プロビオドルグ エージー 神経疾患治療用の新規化合物
MX2008014838A (es) * 2006-05-23 2008-12-05 Irm Llc Metodos y composiciones como inhibidores de proteasa de activacion de canal.
BRPI0712021A2 (pt) 2006-05-23 2012-01-03 Irm Llc composto e composiÇÕes como inibidores da protease ativadora de canal
CN101600428A (zh) 2007-02-09 2009-12-09 Irm责任有限公司 作为通道活化蛋白酶抑制剂的化合物和组合物
MX2009008493A (es) * 2007-02-09 2009-08-20 Irm Llc Compuestos y composiciones como inhibidores de la proteasa activadora de canal.
AU2017282651B2 (en) 2016-06-21 2021-08-12 Orion Ophthalmology LLC Heterocyclic prolinamide derivatives
EP3472151A4 (en) 2016-06-21 2020-03-04 Orion Ophthalmology LLC CARBOCYCLIC PROLINAMIDE DERIVATIVES
DE102020103516B4 (de) 2020-02-11 2023-12-07 Universität Zu Lübeck Antivirale Wirkstoffe mit breiter Aktivität
US11124497B1 (en) 2020-04-17 2021-09-21 Pardes Biosciences, Inc. Inhibitors of cysteine proteases and methods of use thereof
US11174231B1 (en) 2020-06-09 2021-11-16 Pardes Biosciences, Inc. Inhibitors of cysteine proteases and methods of use thereof
KR20230040386A (ko) * 2020-06-09 2023-03-22 파르데스 바이오사이언시스, 인크. 시스테인 프로테아제의 억제제 및 이의 사용 방법
JP2023530267A (ja) 2020-06-10 2023-07-14 アリゴス セラピューティクス インコーポレイテッド コロナウイルス、ピコルナウイルス及びノロウイルス感染を治療するための抗ウイルス化合物
KR20240035513A (ko) 2021-07-09 2024-03-15 알리고스 테라퓨틱스 인코포레이티드 항바이러스 화합물

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
AU670381B2 (en) * 1993-04-30 1996-07-11 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
US5672582A (en) * 1993-04-30 1997-09-30 Merck & Co., Inc. Thrombin inhibitors
SE9301916D0 (sv) * 1993-06-03 1993-06-03 Ab Astra New peptides derivatives
IL112795A (en) * 1994-03-04 2001-01-28 Astrazeneca Ab Derivatives of peptides as antithrombotic drugs, their preparation, and pharmaceutical preparations containing them
WO1995035311A1 (en) * 1994-06-17 1995-12-28 Corvas International, Inc. 3-amino-2-oxo-1-piperidineacetic derivatives as enzyme inhibitors
JPH0820597A (ja) * 1994-07-07 1996-01-23 Meiji Seika Kaisha Ltd トロンビン阻害作用を有する複素環カルボニル化合物
AU4250596A (en) * 1994-12-22 1996-07-10 Biochem Pharma Inc. Low molecular weight bicyclic thrombin inhibitors
CN1212706A (zh) * 1996-02-13 1999-03-31 阿克佐诺贝尔公司 丝氨酸蛋白酶抑制剂

Also Published As

Publication number Publication date
NZ331486A (en) 1999-07-29
US6218365B1 (en) 2001-04-17
DE69730871D1 (de) 2004-10-28
JP2000506838A (ja) 2000-06-06
PL328665A1 (en) 1999-02-15
ZA971733B (en) 1997-09-10
TW523513B (en) 2003-03-11
CN1212705A (zh) 1999-03-31
HUP9901503A3 (en) 2001-10-29
NO983992L (no) 1998-10-30
ATE277074T1 (de) 2004-10-15
ID16105A (id) 1997-09-04
AR006311A1 (es) 1999-08-25
EP1012164A1 (en) 2000-06-28
KR19990087416A (ko) 1999-12-27
BR9707812A (pt) 1999-07-27
AU1795697A (en) 1997-09-16
WO1997031939A1 (en) 1997-09-04
NO983992D0 (no) 1998-08-31
ID16104A (id) 1997-09-04
IL120311A (en) 2001-10-31
TR199801705T2 (xx) 1998-12-21
EP1012164B1 (en) 2004-09-22
HUP9901503A2 (hu) 1999-08-30
IL120311A0 (en) 1997-06-10
AU715765B2 (en) 2000-02-10
CA2246722A1 (en) 1997-09-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CZ277998A3 (cs) Inhibitory serinproteázy a farmaceutický prostředek
KR100339456B1 (ko) 신규펩티드유도체
US6034067A (en) Serine protease inhibitors
US6534495B1 (en) Serine protease inhibitors
RU2178796C2 (ru) Ингибиторы тромбина
US6410684B1 (en) Serine protease inhibitors
JPH04208299A (ja) プロリルエンドペプチターゼ阻害ペプチド
EP0956293B1 (en) Thrombin inhibitors
RU2172321C2 (ru) Ингибиторы сериновых протеаз
US5877156A (en) Thrombin inhibitors
MXPA98007090A (en) Inhibitors of serine prote
MXPA98007091A (en) Inhibitors of protease being
EP0884325A1 (en) Thrombin inhibitors containing a peptidyl heterocycle
MXPA98003479A (en) Tromb inhibitors

Legal Events

Date Code Title Description
PD00 Pending as of 2000-06-30 in czech republic