CZ20023063A3 - Způsob detekce Helicobacter pylori a heilmanii ve vzorcích stolice, slin a bioptickém materiálu - Google Patents
Způsob detekce Helicobacter pylori a heilmanii ve vzorcích stolice, slin a bioptickém materiálu Download PDFInfo
- Publication number
- CZ20023063A3 CZ20023063A3 CZ20023063A CZ20023063A CZ20023063A3 CZ 20023063 A3 CZ20023063 A3 CZ 20023063A3 CZ 20023063 A CZ20023063 A CZ 20023063A CZ 20023063 A CZ20023063 A CZ 20023063A CZ 20023063 A3 CZ20023063 A3 CZ 20023063A3
- Authority
- CZ
- Czechia
- Prior art keywords
- antibody
- pylori
- pathogen
- solid phase
- human
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 20
- 241000590002 Helicobacter pylori Species 0.000 title claims abstract description 9
- 229940037467 helicobacter pylori Drugs 0.000 title claims abstract description 9
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 title abstract 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 title description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 41
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 41
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 41
- 244000052769 pathogen Species 0.000 claims abstract description 21
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 claims abstract description 21
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 claims abstract description 17
- 229940096329 human immunoglobulin a Drugs 0.000 claims abstract description 5
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 claims abstract 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims abstract 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract 2
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 claims description 27
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 19
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 claims description 14
- 230000003248 secreting effect Effects 0.000 claims description 9
- 241000589989 Helicobacter Species 0.000 claims description 7
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 claims description 7
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 claims description 7
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000011616 biotin Substances 0.000 claims description 7
- 230000028993 immune response Effects 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims description 4
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 3
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 claims description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 claims description 2
- 241000589876 Campylobacter Species 0.000 claims description 2
- 229910052693 Europium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- KJTLSVCANCCWHF-UHFFFAOYSA-N Ruthenium Chemical compound [Ru] KJTLSVCANCCWHF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N europium atom Chemical compound [Eu] OGPBJKLSAFTDLK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 239000010931 gold Substances 0.000 claims description 2
- 229910052707 ruthenium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 102000004366 Glucosidases Human genes 0.000 claims 1
- 108010056771 Glucosidases Proteins 0.000 claims 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 claims 1
- 230000003389 potentiating effect Effects 0.000 claims 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 abstract description 11
- 238000005406 washing Methods 0.000 abstract description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 abstract 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 19
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 14
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 10
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 9
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 9
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 8
- 208000007882 Gastritis Diseases 0.000 description 6
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 6
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 5
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 4
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 4
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 3
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 3
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 3
- 239000000137 peptide hydrolase inhibitor Substances 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 229940124158 Protease/peptidase inhibitor Drugs 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 239000002250 absorbent Substances 0.000 description 2
- 230000002745 absorbent Effects 0.000 description 2
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 2
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 2
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 2
- 210000001156 gastric mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N phenylmethanesulfonyl fluoride Chemical compound FS(=O)(=O)CC1=CC=CC=C1 YBYRMVIVWMBXKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 101150063569 slgA gene Proteins 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 2
- SUBDBMMJDZJVOS-UHFFFAOYSA-N 5-methoxy-2-{[(4-methoxy-3,5-dimethylpyridin-2-yl)methyl]sulfinyl}-1H-benzimidazole Chemical compound N=1C2=CC(OC)=CC=C2NC=1S(=O)CC1=NC=C(C)C(OC)=C1C SUBDBMMJDZJVOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 206010061825 Duodenal neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 102000002464 Galactosidases Human genes 0.000 description 1
- 108010093031 Galactosidases Proteins 0.000 description 1
- 206010017964 Gastrointestinal infection Diseases 0.000 description 1
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 208000002193 Pain Diseases 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 1
- 206010054184 Small intestine carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108010057517 Strep-avidin conjugated horseradish peroxidase Proteins 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 229960003022 amoxicillin Drugs 0.000 description 1
- LSQZJLSUYDQPKJ-NJBDSQKTSA-N amoxicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=C(O)C=C1 LSQZJLSUYDQPKJ-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000002223 anti-pathogen Effects 0.000 description 1
- 239000012131 assay buffer Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000000711 cancerogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 1
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 229960002626 clarithromycin Drugs 0.000 description 1
- AGOYDEPGAOXOCK-KCBOHYOISA-N clarithromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@](C)([C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)OC)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 AGOYDEPGAOXOCK-KCBOHYOISA-N 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 230000005757 colony formation Effects 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 208000019836 digestive system infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 229940042399 direct acting antivirals protease inhibitors Drugs 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 201000000312 duodenum cancer Diseases 0.000 description 1
- 201000006549 dyspepsia Diseases 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 210000004051 gastric juice Anatomy 0.000 description 1
- 201000011587 gastric lymphoma Diseases 0.000 description 1
- 208000024798 heartburn Diseases 0.000 description 1
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 244000144972 livestock Species 0.000 description 1
- 238000000504 luminescence detection Methods 0.000 description 1
- 230000000873 masking effect Effects 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 229960000282 metronidazole Drugs 0.000 description 1
- VAOCPAMSLUNLGC-UHFFFAOYSA-N metronidazole Chemical compound CC1=NC=C([N+]([O-])=O)N1CCO VAOCPAMSLUNLGC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 229960000381 omeprazole Drugs 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 229940043515 other immunoglobulins in atc Drugs 0.000 description 1
- LSQZJLSUYDQPKJ-UHFFFAOYSA-N p-Hydroxyampicillin Natural products O=C1N2C(C(O)=O)C(C)(C)SC2C1NC(=O)C(N)C1=CC=C(O)C=C1 LSQZJLSUYDQPKJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 1
- 235000020030 perry Nutrition 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 229940126409 proton pump inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 239000000612 proton pump inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 1
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 1
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56911—Bacteria
- G01N33/56922—Campylobacter
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/543—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor with an insoluble carrier for immobilising immunochemicals
- G01N33/54306—Solid-phase reaction mechanisms
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56911—Bacteria
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/68—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving proteins, peptides or amino acids
- G01N33/6854—Immunoglobulins
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Steroid Compounds (AREA)
Description
Dodavadní stav techniky
Lidská žaludeční slizníce je často osídlována bakterií rodu Helicobacter pylori a heilmanii nebo Campylobacter. Infekce těmito bakteriemi jsou pravděpodobně přenosné z člověka na člověka, ale zdrojem infekce může být i pitná voda a potraviny. Druh Helicobacter heilmanii je přenosný z domácích zvířat, jako například koček, psů, králíků a též hospodářských zvířat, jako například krav. Z tohoto důvodu jsou infekcí ohroženi zejména lidé obhospodařující tato zvířata. V Německu je H. pylorí infikováno přibližně 10 % dětí školou povinných, 30 % lidí kolem 30 let a přibližně 75 % starších občanů. Ve světovém měřítku nese přibližně 50 % populace tuto infekci. 80 % výskytu gastritid, 95 % karcinomu dvanáctníku a 70 % ventrikulámího karcinomu je způsobeno H. pylorí. Chronická gastritida způsobená H.pylorí (gastritida typu B) je navíc považována za prekurzor gastro-adeno karcinomu a gastrického lymfomu. Podle WHO je H.pylorí karcinogen patřící do třídy s nejvyšším rizikem karcinomu. Pouze malý podíl H.pylori se po infekci projeví symptomy. Mnoho postižených, přestože trpí gastritidou, si výrazně nestěžují nebo přisuzují poněkud nespecifické symptomy jiným příčinám. Akutní gastritida vyvolaná H.pylorí se projevuje neurčitou bolestí v horní a střední části žaludku, pocitem tlaku a plnosti, kyselými návaly, pálením žáhy, nevolností a zvedáním žaludku. Prakticky u všech pacientů s gastritidou typu B je možné nalézt infekci H.pylorí. Navzdory obecné mohutné imunitní reakci infekce přechází u těchto pacientů v chronický stav. Zda se vyvine vřed, závisí na imunitním systému pacienta a na agresivitě bakterie nebo typu bakterie. Ke spontánnímu uzdravení dojde zřídka. Neléčená infekce H.pylorí zpravidla přetrvává po celý život.
Infekce H.pylorí může být diagnostikována kultivací patogenu z dutiny nebo biopsií tkáně nebo histologickým testováním tkáně. Další diagnostické metody zahrnují CLO test (test na organismy podobné Campylobacteru) nebo test hydrolýzy močoviny (urease urea test), dechová zkouška na izotop 13C, detekci protilátek proti H.pylorí v séru, detekci DNA Helicobacteru v žaludeční šťávě pomocí PCR nebo vzorku stolice a detekci antigenů H.pylori ve vzorku stolice.
US 5 716 791 (Larka a kol.) a EP 0 806 667 (Meridian Diagnostics lne.) popisují imunoanalýzu antigenů H.pylori ve stolici. Metoda je založená na dvou afinitních přečištěných polyklonálních protilátkách proti antigenů H.pylori. Firma Connex GmbH, Martinsried, Německo, nabízí rychlý test, založený na laterální průtokové chromatografii zlatém značených monoklonálních protilátek proti antigenům H.pylori ve stolici. Tyto tak zvané HpSA testy (Helicobacter pylori Stool Antigen) měly v různých klinických studiích dobrou shodu s případy diagnostikovanými jinými metodami, ale vysoké procento testů nevedlo k jednoznačný výsledkům. HpSA test je navíc nevhodný pro monitorování léčby, protože funguje pouze při velkých množstvích antigenů H.pylori ve stolici. Další diagnostické metody jsou částečné velmi komplikované, stresující pro pacienta nebo drahé pro rutinní testování. Serologické metody jsou nevýhodné v tom, že neumožňují monitorování léčby, protože titr protilátky zůstává po vymícení bakterie po dobu měsíců velice vysoký. Monitorování průběhu léčby je však nezbytné, protože může být přítomna rezistence proti použitým antibiotikům, jako například clarithromycinu, metronidazolu, amoxicilinu, omeprazolu nebo inhibitoru protonové pumpy. Léčba infekcí použitím antibiotik a alternativními přírodními prostředky proto vyžaduje jednoduchý, spolehlivý a citlivý způsob testování H.pylori.
Podstata vynálezu
Podstatou způsobu detekce patogenních antigenů Helicobacter ve vzorku je, že se vzorek odebere pacientovi a vytvoří se suspenze vzorku v pracovním pufru pro testování patogenu; načež se vzorek obsahující antigen patogenu smíchá v pufru s pevnou fází, na kterou jsou navázány alespoň dvě různé primární protilátky, z nichž jedna je schopna vázat patogen antigenů a druhá je schopná vazby lidského imunoglobulinu; dále se promyje pevná fáze s nespecificky vázanými antigeny; smíchá se sekundární protilátkou, která specificky rozeznává antigeny patogenu, přičemž se provede kvantitativní stanovení navázaných sekundárních protilátek.
Kvantitu navázaných sekundárních protilátek k pevné fázi lze ve vzorku stanovit například pomocí značení protilátky. Značka může být radioaktivní, luminiscenční nebo fluorescenční. Skupina biotinu se může vázat s další molekulou, jako například streptavidinem nebo enzymem jako například peroxidázou, která katalyzuje detekci reakce. Kvantitu navázané sekundární protilátky je možné dále stanovit pomocí další • 9 ·
• 9 999 999· • · «
999
9 *· 9·
9
9 • 9 ·* 999 protilátky, která specificky rozeznává typ sekundární protilátky a nese jednu nebo více uvedených značek.
Sekundární primární protilátkou proti lidskému imunoglobulinu, vážící se na pevnou fázi, je s výhodou protilátka, která váže lidský IgA a výhodněji váže sekundární lidský IgA, který je vylučován do slin a tlustého střeva. Navržení sekundární protilátky IgA zahrnuje IgA, případně též takzvané sekreční komponenty (MW: 70 kDa), které jsou tvořeny epiteliálními transportními buňkami a ochranu IgA před proteolytickými enzymy. Zvláště výhodné jsou protilátky proti lgA2, protože Helicobacter a jiné mikroorganismy tvoří proteasy, které mohou štěpit slgA1. Zvláště výhodná je směs dvou primárních protilátek které specificky vážou lgA1 a lgA2.
Ve výhodném provedení podle vynálezu je první primární protilátkou, vážící se k pevné fázi, polyklonální králičí protilátka anti-H.pylori. Druhou primární protilátkou, vážící se k pevné fázi, je polyklonální kozí protilátka anti-human-sIgA testovaná na křížovou reaktivitu. Sekundární protilátkou je s biotinem konjugovaná králičí protilátka arti-H.pylori, takže kvantitu navázané sekundární protilátky je možné stanovit podle vazby s peroxidasou konjugovaného streptavidinu a barevné reakce s tetramethylbenzidinem.
V druhém výhodném provedení podle vynálezu je první primární protilátkou, vážící se k pevné fázi, králičí protilátka arAi-H.pylori, druhou primární protilátkou je králičí protilátka anti-human -slgA a sekundární protilátkou je polyklonální kozí protilátka arAi-H.pylori konjugovaná s křenovou peroxidasou. Mohou být však použity i jiné imunoglobuliny, jako například koňské, kočičí, prasečí, ovčí, kozí, králičí, z morčete, krysy, myši nebo jiných zvířat. Je důležité zjistit, zda se druhá primární protilátka proti lidskému imunoglobulinu neváže na sekundární protilátku proti antigenu patogenu ve vzorcích slin a stolice. Protilátky mohou být v principu monoklonální. Zejména druhá primární protilátka může být monoklonální protilátkou proti lidskému lgA2. Doporučuje se použít více monoklonálních protilátek, které rozeznávají různé epitopy patogenu lidského imunoglobulinu. U monoklonálních primárních protilátek se doporučuje použít směs většího množství monoklonálních protilátek pro zvýšení specificity stanovení.
Sekundární protilátky jsou s výhodou konjugovány s jednou nebo více značkami, jako například biotinem, fíuoresceinem, rutheniem, europiem, částicemi zlata, alkalickou fosfatasou, galaktosidasou nebo křenovou peroxidasou. Mohou být však použity jiné vhodné značky nebo detekční systémy.
·· »
Princip stanoveni uveden na příkladu ELISA
ELISA {enzyme-linked immunosorbent assay) se podle vynálezu používá pro kvalitativní a kvantitativní stanovení antigenú H.pylori ve vzorcích slin, stolice a bioptickém materiálu, Antigen H.pylori se v prvním kroku uvolní ze vzorku a s výhodou naváže pomocí polyklonální protilátky anti-H.py/on, která se běžně váže na mikrotitrační destičku nebo některou jinou pevnou fázi, K pevné fázi se dále naváže druhá primární protilátka, která rozeznává lidský imunoglobulin a s výhodou lidský sekreční IgA. Protože protilátky H.pylori ve vzorcích slin a stolice byly v kontaktu s pacientovým vlastním imunitním systémem, některé nebo všechny epitopy H.pylori jsou již navázány na imunoglobuliny a nejsou již schopné vazby na principu první primární protilátky s patogenem. Přesto jsou však patogenní antigeny ve vzorcích stolice, slin a bioptickém materiálu koncentrovány a vážou se na pevnou fázi druhou primární protilátkou proti lidskému imunogíobulínu, ačkoli imunitní reakce oproti nim již existuje, Na jedné straně se tak antigeny H.pylori přímo vážou a na druhé straně nepřímo pomocí své vazby k sekrečnímu lidskému imunogíobulínu ve slinách a zažívacím traktu. V druhém kroku je pak vazba antigenú H.pylori přímo detekována sekundární protilátkou anti-H pytori. Vhodným systémem se pak stanoví kvantitativně vazba sekundární protilátky.
Pro vysokou specificitu sekundární protilátky proti antigenú H.pylori jsou falešně pozitivní výsledky vyloučeny. Celková specificita stanovení dvojitou protilátkou je zejména u substancí určena specificitou sekundární protilátky. Skutečnost, že se v prvním kroku váže též lidská sekreční protilátka s antigeny patogenu, se v případě H.pylori zvyšuje nejen citlivost, ale též rozsah stanovení. Překvapující je zejména to, že ve významně velkém počtu případů jsou lidskou imunitní reakcí rozeznávány všechny imunogenní epitopy H.pylori. V případě organismu Helícobacter je množství imunogenních epítopů významně omezena, to znamená, že epitopy patogenu rozeznávané lidským imunitním systémem a zvířecí primární a sekundární protilátkou u stanovení na základě dvojité protilátky, jsou často shodná. To má za následek zejména u H.pylori tvorbu kolonií v ústech a v pozdější fázi léčbu, kdy imunitní reakce zkresluje snížené množství epítopů H.pylori, které jsou stále přítomny ve vzorcích stolice a slin. Způsobem testu podle vynálezu je možné detekovat malá a dokonce maskovaná množství antigenú H. pylori.
Přítomnost Helícobacter pylori ve slinách byla dosud podrobena pouze akademickému zájmu z hlediska tohoto domnělého způsobu přenosu (Namavar F. a kol., Eur. J. Clin. Microbiol. Infect. Dis., 1995, 14(3), str. 234-7; Shimada T. a kol.,
Lancet, 1994, 343(8913), str. 1636-7). Ve způsobu podle vynálezu je hranice detekce H.pylori tak nízká, že lze infekci H.pylorí stanovit i ve slinách. Stanovení antigenů H. pylori ve slinách je důležité především pro sledování léčby pacientů. Prováděné pokusy ukázaly, že v ústech - pravděpodobné při kovových plombách, zubních protézách a podobně je možné nalézt ložiska infekce H.pylori, která přežívají běžnou medikamentózní léčbu a po ukončení léčby se obnoví infekce v žaludeční sliznici. Léčbu je proto možné považovat za ukončenou pouze v případě, že nejsou nalezeny antigeny H.pylori ani ve vzorku stolice ani slin.
Použití sendvičového principu stanovení podle vynálezu s druhou primární protilátkou proti lidskému imunoglobulinu, zejména proti lidskému sekrečnímu IgA, není omezeno pouze na mikrotitrační destičku. Může být uzpůsobeno na plně automatizovaný proces, který používá potažené kuličky nebo částice. Princip podle vynálezu, který používá druhou primární protilátku proti lidskému sekrečnímu IgA, je obecně vhodný pro diagnózu patogeneze vyskytující se v ústech nebo zažívacím traktu a způsobuje rozsáhlou imunitní reakcí.
Obecně je výhodné, pokud je první primární protilátka současně polyklonální protilátkou proti různým typům H. pylori. Totéž platí i pro sekundární protilátku, protože se tím zvyšuje spolehlivost testu.
Vynález a jeho výhody jsou popsány pomocí výhodných provedení podle vynálezu a příkladů a pomocí doprovodných obrázků.
Popis obrázků
Obr. 1; Schéma principu imunoanalýzy antigenů H.pylori podle vynálezu.
Obr. 2: Další typ příkladu imunoanalýzy podle vynálezu.
Obr. 3: Grafické zobrazení rozložení koncentrace antigenů H.pylori ve slinách stanovené podle vynálezu před a po léčbě.
• · ··· ···· ·* ·«·
Příklady provedení vynálezu
Příklad 1
Detekce antigenu H.pylorí ve stolici a slinách
Příprava vzorku stolice: Navážilo se přibližně 100 mg stolice a za laboratorní teploty rozsuspendovalo v 5 ml promývacího pufru PBS obsahujícího 0,1% Triton X-100 (8 mM Na2HPO4, 15 mM K2H2PO4, 3 mM KCI, 12,5 mM NaCI, 0,1 % Triton X-100, 0,02% Thimerosal, pH 7,4). Dávkování a homogenizace vzorku stolice se prováděla výhodně pomocí systému na přípravu vzorků firmy Roche Diagnostik, Mannheim, Německo (objednávka číslo 745804). Homogenizát se centrifugoval na stolní centrifuze, 10 minut při otáčkách 3000 otáček za minutu, 1 ml produktu se přeneslo do Eppendorfovy zkumavky a centrifugovalo 5 minut při otáčkách 13000 za minutu v centrifuze Eppendorf. Produkt se pak přímo použil pro ELISA stanovení.
Příprava vzorku slin: Vzorek slin se naředil v pracovním pufru 1:4 nebo 1:5 v závislosti na viskozitě a přímo se použil pro stanovení vazby. V případě vzorků slin je výhodné, pokud pufr pro stanovení obsahuje inhibitor proteázy, jako například 5 mM PMSF. Je možné též použít komerční proteázové inhibitory, jako například Pefablock SC (Roche Diagnostics).
Potažení mikrotitrační destičky: Jamky mikrotitrační destičky se potáhly polyklonální protilátkou proti antigenu H.pylorí a lidskému imunoglobulinu-A. Za tímto účelem se do každé jamky nadávkovalo 100 μ9 komerčně dostupné protilátky králičí anti-H.py/ori (DAKO, Hamburg) rozpuštěné v 200 μ! 60 mM NaCCb, pH 9,6 a destička se inkubovala přes noc při 4 °C. Roztok králičí protilátky anti-H.py/ori se z jamek odstranil a každá jamka se promyla 200 μΙ promývacího pufru (PBS, pH 7,4 0,1% Triton X-100). Do každé jamky se nadávkovalo 100 mg protilátky králičí anti-human-slgA (DAKO, Hamburg) rozpuštěné v 200 μΙ 60 mM NaCO3, pH 9,6 a destička se ikubovala 1 hodinu při laboratorní teplotě. Roztok protilátky anti-human -IgA se z jamek odstranil a každá jamka se promyla pětkrát 125 μΙ promývacího pufru. Po posledním promývání se jamky destičky vyklepaly na savý papír.
Stanovení vazby: Všechna stanovení se prováděla dvojmo. 100 μΙ standardu a vzorku se napipetovalo dvojmo do protilátkou pokrytých jamek mikrotitrační destičky a inkubovalo za třepání 1 hodinu při laboratorní teplotě. Roztok se odstranil a jamky destičky se promyly pětkrát, pokaždé 250 μ! promývacího pufru. Po posledním promývání se jamky destičky vyklepaly na savý papír.
Detekce vazby: Do každé jamky se nadávkovalo 100 μΙ s biotinem konjugované polyklonální králičí protilátky anti-H.pyton {1.10000; DAKO, Hamburg) nebo s křenovou peroxidasou (HRP)-konjugované polyklonální kozí protilátky anti-H.py/ori (KPL, Kirkehard and Perry Laboratories, Gaithersburg, MD; směs polyklonální protilátky proti H.pylorí typu ATCC 43504, 43526, 43579) zředěná promývacím pufrem 1:1000 a destička se za třepání inkubovala 1 hodinu za laboratorní teploty. Roztok se odstranil z jamek a každá jamka se promyla pětkrát 200 μΙ promývacího pufru.
Kvantitativní stanovení: Za účelem barevné reakce se do každé jamky nadávkovala s peroxidem konjugovaná kozí protilátka ant\-H. pylorí, 100 μΙ substrátového roztoku tetramethylbenzidinu (TMB) (ready-for-use, NOVUM Diagnostika GmbH, Dietzenbach, Německo) a po přibližné 20 minutách se barevná reakce zastavila přídavkem 50 μΙ 0,4 M H2SO4. V případě s biotinem konjugované králičí protilátky antiH.pylori se použilo potažení 100 μΙ s křenovou peroxidasou konjugovaným streptavidinem (DAKO), zředěným promývacím pufrem 1:10000 a následovala inkubace destičky za třepání po dobu 1 hodiny za laboratorní teploty, promývání pětkrát promývacím pufrem a teprve pak se přidala chromogenní látka. Zbarvení se vždy stanovilo měřením absorbance (optické hustoty) při 450 nm. Následující tabulky 1 a 2 uvádí reprezentativní výsledky kontrolní skupiny a pacientů infikovaných H.pylorí, kdy se podle vynálezu stanovení opakovala v různé dny. Stanovení byla prováděna podle doporučení pomocí různých detekčních systémů a/nebo sekundárních protilátek.
Srovnávací příklad 2
Imunoanalýza bez sekundární protilátky proti lidskému imunoglobulinu A
Příprava vzorků stolice a slin a stanovení vazby se provádělo přesně podle příkladu 1, s tím rozdílem, že jamky mikrotitrační destičky se výjimečně pokryly afinitně přečištěným polyklonálním králičím imunoglobulinem proti Helicobacter pylorí nebo protilátkou anti-human-slgA. Všechna promývání, potahování, vazebné kroky a barevná reakce se prováděla paralelně na téže mikrotitrační destičce.
* ·
Ad1: Všechny hodnoty absorbance jsou průměrnou hodnotou dvou měření.
| Nespecifická vazba (Standard, pufr) | Pat.Hof | Pat.Hal | Pat .Tas | Pat.K | Pat.Woz | Pat:Car | C. 15294 | Pat T. | £ & £ o> c 3 | Sekundární protilátka | Mikrotítrační destička potažená primární protilátkou |
| 0,150 | 1 | 0,258 | 0,925 | 2,050 | O o o | 12.01.00 | Biotln-konjugovaná králičí anii-H.pylori-A3 | Polyklonální králičí anli-H.pylori-AB Srovnání Srovnání + bez anti- pouze anti- Polyklonální králičí anti- human-slgA-ΑΒ human- human- slgA slgA | |||
| 0,219 | 1 | 0,270 | 0,654 | 1,635 | o tn 00 | b o o | |||||
| 0,228 | 1,023 | 0,222 | 1,798 | 0,377 | 0,162 | 0,505 | n.g. | 0,461 | 25.01.00 | ||
| 0,211 | 0,831 | 0,263 | 1,768 | 0,141 | 0,101 | 0,300 | 3 (O | 0,436 | 25.01.00 | ||
| 0,154 | 0,315 | 0,199 | 0,107 | 0,284 | 0,117 | 0,313 | n,g, | 0,144 | 25.01.00 | ||
| 0,200 | 0,463 | 0,189 | 0990 | 0,538 | 0,233 | 0,720 | 3 <p | 0,258 | 25.01.00 | p * o c (Q § Q> □ Oj, £ ΰ, OJ 3 £ ?· > 03 | Anti-H.pyforí Srovnání bez Srovnání + anti-human-sIgA pouze anti- anti-human-sIgA human-sIgA |
| 0,157 | 0,163 | 0,121 | 0,447 | 0,112 | 0,085 | 0,210 | ‘6‘u | 0,170 | 25.01.00 | ||
| 0,187 | 0,398 | 0,183 | 0,182 | 0,449 | 0,216 | 0,690 | N.g, | 0,181 | j 25.01.00 |
Tabulka 1
Absorbance (optická hustota -OD) při 450 nm * · • · · · • · · M<
• t · ·· ♦· ·· ····
| Pat.Hof | Pat.Hal | Pat .Tas | Pat.K | Pat.Woz | D Dl 1—9 Ó Dl “Ί | o S 2 | PatT. | Měření/datum | protilátka | Sekundární | protilátkou | potažená primární | destička | mikrotitrační | |
| 1 | 0,108 | 0,775 | (O o o | 0,250 | 12.01.00 | Biotin-kor | slgA-AB | + Polyklonál | AB | Polyklonál | |||||
| 1 | 0,270 | I 0,654 | 1,635 | 0,239 | 14.01.00 | ijugovaná I | 3' 2: 03 | 3; £2! 0) | |||||||
| o 3 01 | -0,006 | 1,570 | φ?·< 1 | -0,066 | tíͧ| | n.g. | 0,233 | 25.01.00 | < 3. č: m □ Τ' ,1 | nti- human- | 3 r* T Ϊ š | ||||
| 1 ?! s '\*ι V | 0,052 | 1,557 | ys -3 | -0,110 | ςΗΗ | 3 <b | 0,225 | 25.01.00 | ξ. Ο | human-sIgA | bez a nti- | Srovnání | |||
| b 2ř w '··$# | 0,045 | 1 O O u -xl | /fóiD Í'.Šr,‘-; | -0,037 | mH | *6‘u | -0,010 | 25.01.00 | human-sIgA | pouze a nti- | Srovnání | ||||
| o 2 | -0,011 | 0,380 | © 6» 6* © | 0,033 | |2j fP | 0,058 | 25.01.00 | HRP-konjugovan | anti-human- slgA | + | > □ JE §. | ||||
| -0,006 | -0,036 | 0,290 | s ' f-;r ' | -0,072 | '-$SB | ‘6‘u | 0,013 | 25.01.00 | 01' ?r o n 01 I Ϊ > CD | Anti-human | Srovnání b | ||||
| θ' 2 A | -0,004 | -0,005 | b M 8 | 0,029 | !£AU w 'w í®· ÍXg o | ‘6‘u | 1 O b o o | 25.01.00 | anti-human-sIgA | Srovnání pouze | |||||
| wSí |
Tabulka 2
Naměřené hodnoty (odečtena nespecifická vazba)
Z tabulky č. 1 a 2 je zřejmé, že někteří pacienti měli ve vzorku stolice antigeny H.pylori zcela maskovány vlastním imunitním systémem, a proto nemohly být navázány analytickou primární protilátkou proti patogenům, V případě tohoto maskování antigenů běžná imunoanalýza dvěma protilátkami vedla k falešně negativním výsledkům infekce H.pylori nebo odstraněné infekce. Naopak způsobem podle vynálezu se antigeny H.pylori již vázané nebo maskované lidským imunitním systémem vázaly na pevnou fázi (viz Tabulka 2, pole s šedým pozadím) druhou primární protilátkou antihuman-sIgA. Maskující účinek nebyl závislý ani na použité sekundární protilátce, ani na tom, zda se jednalo o vzorek slin nebo stolice. Z výsledků je zřejmé, že v mnoha případech je primární vazba H.pylori k pevné fázi pomocí protilátek anti-human-algA a protilátek arúi-H.pylori vzájemně výjimečná, takže vzhledem k vazbě je výsledek jednoznačný. Možná primární vazba antigenů H.pylori k pevné fázi pomocí vazby k lidskému imunoglobulinu A podle vynálezu je proto nezbytným nástrojem pro diagnostiku.
Příklad 3
Screening slin
Od 150 pacientů podezřelých na infekci H.pylori nebo po dokončení léčby se odebraly vzorky slin a testovaly se na přítomnost antigenů H.pylori. Analýza se prováděla podle příkladu 1 s tím rozdílem, že pracovní pufr navíc obsahoval proteasový inhibitor. Detekční limit antigenů Helicobacter leží u slin v oblasti výše uvedeného testu (s HRP-konjugovanou kozí protilátkou anti-H.pylori a tetramethylbenzidinem) přibližně pří 2 pg antigenů H.pylori na mililitr pracovního pufru. Po optimalizaci druhé protilátky proti antigenů patogenu a selekcí luminiscenčního detekčního systému by mělo být možné dosáhnout detekčního limitu 0,2 pg na mililitr a níže.
Výsledek screeningu vzorku je zobrazen na obr. 3 pomocí sloupcového diagramu. Ze sloupcového diagramu je zřejmé, že pacienti s infekcí H.pylori ve slinách mají zpravidla antigeny v množství vyšším než 60 ng/ml H.pylori. Testování slin je proto vhodné pro detekci infekce H.pylori. Koncentrace H.pylori nižší než 25 ng na ml slin naopak ukazuje nespecifickou křížovou reakci s jinými patogeny.
Poprvé tak bylo dokázáno, že infekci H.pylori je možné detekovat imunologickým testováním slin, které je prakticky relativně jednoduché. Úspěch léčby je tak možné relativně jednoduše sledovat. Předchozí analýzy slin na H.pylori naopak nedovolují diagnózu infekce zažívacího traktu H.pylori, ale byly založeny na vědeckém výzkumu možné cesty přenosu.
Claims (11)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Způsob detekce patogenních organismů ve vzorcích stolice, slin a sekrečních vzorků stanovením sendvičové vazby dvojí protilátky, vyznačující se tím, že se odebere a/ňebo disperguje vzorek obsahující antigen patogenu v roztoku pufru, načež se roztok pufru spojí s pevnou fází, ke které se vážou alespoň dvě primární protilátky, z nichž jedna se specficky váže k antigenu patogenu a druhá se specificky váže k lidskému imunoglobulinu A; dále se pevná fáze s nespecificky vázanými proteiny promyje a pevná fáze se spojí se sekundární protilátkou, která se specificky váže k antigenu patogenu, přičemž se stanoví množství specificky vázané sekundární protilátky.
- 2. Způsob podle nároku 1, vyznačující se tím, že druhá primární protilátka váže sekreční lidský IgA.
- 3. Způsob podle nároku 2, vyznačující se tím, že druhá primární protilátka váže sekreční lidský lgA2.
- 4. Způsob podle kteréhokoli z nároků 1 až 3, vyznačující se tím, že je sekundární protilátka konjugována s některou ze skupin zahrnující biotin, fluorescein, ruthenium, europium, částice zlata, alkalickou fosfatasu, glukosidasu a křenovou peroxidasu.
- 5. Způsob podle kteréhokoli nároku 1 až 4, vyznačující se tím, že první primární protilátka a druhá protilátka váže antigeny Helicobacter pylori.
- 6. Způsob podle kteréhokoli z nároků 1 až 5, vyznačující se tím, že první primární protilátka je směsí polyklonální a/nebo monoklonální protilátky proti různým typům Helicobacter pylori,
- 7. Způsob podle kteréhokoli z nároků 1 až 6, vyznačující se tím, že je sekundární protilátka směsí polyklonální a/nebo monoklonální protilátky proti různým typům Helicobacter pylori.• * • » ··· • · · i · · • · 9 ·· ·*··
- 8. Způsob podle kteréhokoli z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že patogenem je Campylobacter.
- 9. Způsob podle kteréhokoli z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že patogenem je Helicobacter heilmanii.
- 10. Způsob podle kteréhokoli z nároků 1 až 4, vyznačující se tím, že patogen vyvolává mohutnou imunitní reakci v těle pacienta.
- 11. Způsob podle kteréhokoli z nároků 1 až 10 pro diagnózu patogenů přetrvávajících v ústech po medikamentózní léčbě.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE10006432A DE10006432A1 (de) | 2000-02-14 | 2000-02-14 | Verfahren zum Nachweis von Helicobacter pylori in Stuhl- und Speichelproben |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CZ20023063A3 true CZ20023063A3 (cs) | 2003-01-15 |
| CZ299992B6 CZ299992B6 (cs) | 2009-01-14 |
Family
ID=7630808
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CZ20023063A CZ299992B6 (cs) | 2000-02-14 | 2001-02-14 | Zpusob detekce patogenních organismu ve vzorcích stolice, slin, sekrekcního a bioptického materiálu |
Country Status (10)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US20030148411A1 (cs) |
| EP (1) | EP1257823B1 (cs) |
| JP (1) | JP4122419B2 (cs) |
| AT (1) | ATE259065T1 (cs) |
| AU (2) | AU4643301A (cs) |
| CZ (1) | CZ299992B6 (cs) |
| DE (3) | DE10006432A1 (cs) |
| DK (1) | DK1257823T3 (cs) |
| ES (1) | ES2215126T3 (cs) |
| WO (1) | WO2001063285A2 (cs) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPH0833756A (ja) * | 1994-07-25 | 1996-02-06 | Asama Seisakusho:Kk | パチンコ機の弾球装置 |
| DE60138981D1 (de) * | 2000-05-18 | 2009-07-30 | Meridian Bioscience Inc | Immunoassay für H. pylori in Fäkalienproben mit Hilfe von gattungsspezifischen Antikörpern |
| DE10219741A1 (de) * | 2002-05-02 | 2003-11-13 | Georg S Wengler | Verfahren zur Vorbehandlung von Stuhlproben |
| CA2646497A1 (en) * | 2006-04-18 | 2007-10-25 | Wellstat Biologics Corporation | Detection of circulating endothelial cells |
| CN102980884A (zh) * | 2012-11-29 | 2013-03-20 | 江苏创生生物技术有限公司 | 胃黏膜样品中幽门螺旋杆菌的化学发光免疫测定法 |
| WO2015124707A1 (en) | 2014-02-20 | 2015-08-27 | Immundiagnostik Ag | In vitro diagnostic and prognosis of contrast induced nephropathy (cin) in patients undergoing coronary angiography |
| EP3499235A1 (en) | 2017-12-13 | 2019-06-19 | Immundiagnostik AG | Method of measuring auto-antibodies in bodily fluids |
Family Cites Families (43)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE3269567D1 (en) * | 1981-04-29 | 1986-04-10 | Ciba Geigy Ag | New devices and kits for immunological analysis |
| US5061237A (en) * | 1985-07-02 | 1991-10-29 | Cytomed Medizintechnik Gmbh | Method of purifying whole blood |
| US5459041A (en) * | 1988-02-18 | 1995-10-17 | Enteric Research Laboratories, Inc. | Campylobacter pylori antigens and uses thereof for detection of Campylobacter pylori infection |
| US5200051A (en) * | 1988-11-14 | 1993-04-06 | I-Stat Corporation | Wholly microfabricated biosensors and process for the manufacture and use thereof |
| US4968604A (en) * | 1989-07-20 | 1990-11-06 | Neorx Corporation | Method and test kit for detection of antibodies |
| US5075078A (en) * | 1989-10-05 | 1991-12-24 | Abbott Laboratories | Self-performing immunochromatographic device |
| US5646001A (en) * | 1991-03-25 | 1997-07-08 | Immunivest Corporation | Affinity-binding separation and release of one or more selected subset of biological entities from a mixed population thereof |
| US5248595A (en) * | 1991-10-08 | 1993-09-28 | Eastman Kodak Company | Wash composition, test kit and method for determination of microorganisms associated with periodontal diseases |
| DE69319240T2 (de) * | 1992-04-29 | 1999-04-08 | Auspharm Int Ltd | In vitro-test für helicobacter pylori |
| US5807752A (en) * | 1992-09-11 | 1998-09-15 | Boehringer Mannheim Corporation | Assay using an unblocked solid phase with immobilized analyte binding partner |
| FI92882C (fi) * | 1992-12-29 | 1995-01-10 | Medix Biochemica Ab Oy | Kertakäyttöinen testiliuska ja menetelmä sen valmistamiseksi |
| US6258359B1 (en) * | 1993-05-19 | 2001-07-10 | Institut Pasteur | Immunogenic compositions against helicobacter infection, polypeptides for use in the compositions, and nucleic acid sequences encoding said polypeptides |
| US5561045A (en) * | 1994-01-04 | 1996-10-01 | Intracel Corporation | Detection reagent, article, and immunoassay method |
| US7569341B2 (en) * | 1994-01-31 | 2009-08-04 | Trustees Of Boston University | Nucleic acid directed immobilization arrays and methods of assembly |
| WO1995029395A1 (en) * | 1994-04-26 | 1995-11-02 | The Regents Of University Of Michigan | Unitary sandwich enzyme immunoassay cassette, device and method of use |
| US5498528A (en) * | 1994-06-10 | 1996-03-12 | King; Wing | Detection of helicobacter pylori |
| DE4439452A1 (de) * | 1994-11-04 | 1996-05-09 | Boehringer Mannheim Gmbh | Antikörperklassenspezifisches Entstörungsreagenz |
| US5837240A (en) * | 1995-04-28 | 1998-11-17 | Oravax-Merieux Co. | Multimeric, recombinant urease vaccine |
| SE9503937D0 (sv) * | 1995-11-07 | 1995-11-07 | Anders Pettersson | Förebyggande av plötslig spädbarnsdöd |
| US5932430A (en) * | 1996-05-09 | 1999-08-03 | Meridian Diagnostics, Inc. | Immunoassay for H. pylori in fecal specimens |
| US5716791A (en) * | 1996-05-09 | 1998-02-10 | Meridian Diagnostics, Inc. | Immunoassay for H. pylori in fecal specimens |
| US6514731B1 (en) * | 1996-05-24 | 2003-02-04 | Chiron Corporation | Methods for the preparation of hepatitis C virus multiple copy epitope fusion antigens |
| US5876944A (en) * | 1996-06-10 | 1999-03-02 | Bayer Corporation | Method for amplification of the response signal in a sandwich immunoassay |
| US5922845A (en) * | 1996-07-11 | 1999-07-13 | Medarex, Inc. | Therapeutic multispecific compounds comprised of anti-Fcα receptor antibodies |
| JP4104665B2 (ja) * | 1996-12-19 | 2008-06-18 | カイロン コーポレイション | Ｈ． ｐｙｌｏｒｉ診断薬 |
| US6506384B1 (en) * | 1997-12-31 | 2003-01-14 | New York University | Early detection of mycobacterial disease |
| WO1999015898A1 (en) * | 1997-09-22 | 1999-04-01 | Chiron Corporation | Method for detecting antibodies in a sample |
| AU1203199A (en) * | 1997-11-18 | 1999-06-07 | Bio-Rad Laboratories, Inc. | Multiplex flow immunoassays with magnetic particles as solid phase |
| AUPP103497A0 (en) * | 1997-12-19 | 1998-01-15 | Panbio Pty Ltd | Assay apparatus |
| DE19758017C2 (de) * | 1997-12-29 | 2000-03-02 | Hanns Ludwig | Verfahren zum Nachweis von Borna-Disease-Virus (BDV)-Infektionen über den Nachweis zirkulierender Immunkomplexe und hierfür verwendbarer diagnostischer Kit |
| IT1299312B1 (it) * | 1998-02-13 | 2000-03-16 | Consortia Lab Srl | Dosaggio nei liquidi biologici di anticorpi diretti contro uno o piu' antigeni del helicobacter pylori mediante metodo immunologico |
| US7297312B2 (en) * | 1998-03-16 | 2007-11-20 | University Of Cincinnati | Simultaneous multianalyte electrochemical assay based on spatial resolution |
| US6303081B1 (en) * | 1998-03-30 | 2001-10-16 | Orasure Technologies, Inc. | Device for collection and assay of oral fluids |
| US6221579B1 (en) * | 1998-12-11 | 2001-04-24 | Kimberly-Clark Worldwide, Inc. | Patterned binding of functionalized microspheres for optical diffraction-based biosensors |
| ATE439452T1 (de) * | 1999-05-07 | 2009-08-15 | Life Technologies Corp | Verfahren zum nachweis von analyten mit hilfe von halbleiternanokrystallen |
| US6383740B2 (en) * | 1999-07-30 | 2002-05-07 | Bioergonomics, Inc. | Methods for simultaneously detecting both members of a binding pair |
| US6727073B1 (en) * | 1999-11-19 | 2004-04-27 | Binax, Inc. | Method for detecting enteric disease |
| TWI237695B (en) * | 1999-12-14 | 2005-08-11 | Joy Biomedical Corp | Helicobacter pylori antigens in blood |
| US6316205B1 (en) * | 2000-01-28 | 2001-11-13 | Genelabs Diagnostics Pte Ltd. | Assay devices and methods of analyte detection |
| US20020004246A1 (en) * | 2000-02-07 | 2002-01-10 | Daniels Robert H. | Immunochromatographic methods for detecting an analyte in a sample which employ semiconductor nanocrystals as detectable labels |
| US20010051351A1 (en) * | 2000-03-27 | 2001-12-13 | Racis Stanley Paul | Antigen-specific immune complex-based enzyme-linked immunosorbent assay |
| US6699722B2 (en) * | 2000-04-14 | 2004-03-02 | A-Fem Medical Corporation | Positive detection lateral-flow apparatus and method for small and large analytes |
| US6528325B1 (en) * | 2000-10-13 | 2003-03-04 | Dexall Biomedical Labs, Inc. | Method for the visual detection of specific antibodies in human serum by the use of lateral flow assays |
-
2000
- 2000-02-14 DE DE10006432A patent/DE10006432A1/de not_active Withdrawn
-
2001
- 2001-02-14 ES ES01919280T patent/ES2215126T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-14 AU AU4643301A patent/AU4643301A/xx active Pending
- 2001-02-14 AU AU2001246433A patent/AU2001246433B2/en not_active Ceased
- 2001-02-14 DE DE10190630T patent/DE10190630D2/de not_active Ceased
- 2001-02-14 AT AT01919280T patent/ATE259065T1/de active
- 2001-02-14 EP EP01919280A patent/EP1257823B1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-14 JP JP2001562198A patent/JP4122419B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 2001-02-14 DK DK01919280T patent/DK1257823T3/da active
- 2001-02-14 US US10/203,679 patent/US20030148411A1/en not_active Abandoned
- 2001-02-14 WO PCT/EP2001/001639 patent/WO2001063285A2/de active IP Right Grant
- 2001-02-14 DE DE50101435T patent/DE50101435D1/de not_active Expired - Lifetime
- 2001-02-14 CZ CZ20023063A patent/CZ299992B6/cs not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-10-03 US US11/542,293 patent/US20070087395A1/en not_active Abandoned
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JP2003526779A (ja) | 2003-09-09 |
| DE50101435D1 (de) | 2004-03-11 |
| ATE259065T1 (de) | 2004-02-15 |
| EP1257823A2 (de) | 2002-11-20 |
| WO2001063285A2 (de) | 2001-08-30 |
| WO2001063285A3 (de) | 2002-04-11 |
| US20070087395A1 (en) | 2007-04-19 |
| AU2001246433B2 (en) | 2005-03-24 |
| AU4643301A (en) | 2001-09-03 |
| ES2215126T3 (es) | 2004-10-01 |
| CZ299992B6 (cs) | 2009-01-14 |
| EP1257823B1 (de) | 2004-02-04 |
| DE10006432A1 (de) | 2001-08-16 |
| DE10190630D2 (de) | 2002-12-05 |
| DK1257823T3 (da) | 2004-05-24 |
| US20030148411A1 (en) | 2003-08-07 |
| JP4122419B2 (ja) | 2008-07-23 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US20090030054A1 (en) | Cytoplasmic antigens for detection of candida | |
| US20100273177A1 (en) | Methods and Devices for Testing Saliva | |
| US20070087395A1 (en) | Method for detecting pathogenic organisms in fecal and salivary specimens and in biopsy material | |
| KR20080082337A (ko) | 렙토스피라증 진단 키트 | |
| KR101678428B1 (ko) | 폐렴구군 검출방법 | |
| US20210364515A1 (en) | Optimizing diagnostics for galactofuranose containing antigens | |
| JP4323318B2 (ja) | ヘリコバクターピロリを検出するための非侵襲的方法 | |
| US20080038760A1 (en) | Method for Detecting Anti-Transglutaminase Antibodies | |
| WO2020184409A1 (ja) | 生体試料中のβ－Ｄ－グルカンの免疫学的分析方法、及びβ－Ｄ－グルカン分析用キット | |
| JP2002541457A (ja) | リポ多糖の免疫測定法と試験装置 | |
| US10288610B2 (en) | Vitro assays for detecting Salmonella enterica serotype typhi | |
| EP1580557A1 (en) | Method of examining staphylococcus aureus | |
| JPH0754321B2 (ja) | 免疫反応性リガンドを測定するための試験キットおよび測定方法 | |
| JP6867529B1 (ja) | ヘリコバクター・ピロリ検出用抗体 | |
| US6235487B1 (en) | Method of diagnosing Crohn's disease | |
| Cao et al. | Detection of spiral and coccoid forms of Helicobacter pylori using a murine monoclonal antibody | |
| JP2004524522A (ja) | 膵臓及び胃腸疾患の検出方法 | |
| Wienecka et al. | Detection of Giardia antigen in stool samples by a semi-quantitative enzyme immunoassay (EIA) test | |
| Gurung et al. | Development of 316v antibody enzyme-linked immunosorbent assay for detection of paratuberculosis in sheep | |
| WO2023145787A1 (ja) | 菌体可溶化画分を用いた、ヘリコバクター・スイス抗体の検出法 | |
| WO2004048976A1 (ja) | 黄色ブドウ球菌の検査方法 | |
| EP4220166A1 (en) | In vitro method for detecting antibodies in a sample | |
| US20030124633A1 (en) | Diagnostic methods | |
| WO2020158811A1 (ja) | ヘリコバクター・ピロリ菌株の同定方法、および同定用キット | |
| US20220244251A1 (en) | Targets and Methods of Diagnosing and Monitoring Lyme Disease |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of fee |
Effective date: 20140214 |