CS276874B6 - 1-(3-azido-2,3-dideoxy-beta-d-allocofuranosyl)thymine, process of its preparation and application - Google Patents

Abstract

l-(3-Azido-2,3-dideoxy-p-D-allokofuranosyl) thymin obecného vzorce I je nová, dosud nepopsaná látka připravená v krystalickém stavu. Je popsána příprava této látky a použití pro přípravu 3-azido-2 ,3 ,- -dideoxythymidinu.1- (3-Azido-2,3-dideoxy-β-D-allokofuranosyl) thymine of formula I is novel, not yet described crystalline substance status. The preparation of this substance is described and use for the preparation of 3-azido-2, 3, - -dideoxythymidine.

Description

Předmětem vynálezu je l-(3-azido-2,3-dideoxy-p-D-allokofuranosil) thymin vzorce I, způsob jeho přípravy a použití spočívající v tom. že se převede na 3'-azido-2',3'- dideoxythymidin (AZT),The invention relates to 1- (3-azido-2,3-dideoxy-β-D-allocofuranosil) thymine of the formula I, to a process for its preparation and to its use. that it is converted to 3'-azido-2 ', 3'-dideoxythymidine (AZT),

Retrovir^, Zidovudin , který se používá jako léčivo při onemocnění podmíněných získaných selháním imunitního systému (AIDS).Retrovir®, Zidovudine, which is used as a drug in diseases caused by immune system failure (AIDS).

Dosavadní metody přípravy 3'-azido-2',3'-dideoxythymidinu vycházejí z chráněných derivátů 2'- deoxythymidinu (J.P.Horwitz, J.Chua, M.Noel, J.Org.Chem. 29, 2076 (1964); J.S.Lin, W.Prusoff,Conventional methods for the preparation of 3'-azido-2 ', 3'-dideoxythymidine are based on protected 2'-deoxythymidine derivatives (JPHorwitz, J.Chu., M. Noel, J. Org. Chem. 29, 2076 (1964); , W.Prusoff,

J.Med.Chem. 21, 109 (1978); R.P.Glinski, M.Khan, R.Kalams,J.Med.Chem. 21, 109 (1978); R.P.Glinski, M.Khan, R.Kalams,

M.Sporn, J.Org.Chem. 38, 4299 (1973). Zdroje 2'-deoxythymidinu, který se získává enzymovou hydrolysou deoxyribonukleových kyselin, jsou však značně omezené. Syntetické postupy výroby 2'-deoxythymidinu vycházející z methylace 2'-deoxyuridinu (např. A.Holý, Collection Czechoslov.Chem.Commun. 37, 4072 (1972);M.Sporn, J.Org.Chem. 38, 4299 (1973). However, the sources of 2'-deoxythymidine obtained by enzymatic hydrolysis of deoxyribonucleic acids are severely limited. Synthetic processes for the production of 2'-deoxythymidine based on the methylation of 2'-deoxyuridine (e.g. A.Holý, Collection Czechoslov.Chem.Commun. 37, 4072 (1972));

C.B.Reese, Y.S.Sanghvi, J.Chem.Soc.,Chem.Commun. 1983,877) nebo z deoxygenace 5-methyluridinu (A.Holý, D.Cech,Collection Czechoslov. Chem.Commun. 39, 3157 (1974);M.J. Robins, J.S.Wilson,C.B. Reese, Y.S.Sanghvi, J.Chem.Soc., Chem.Commun. 1983, 877) or from the deoxygenation of 5-methyluridine (A. Holy, D. Czech, Collection Czechoslov. Chem. Commun. 39, 3157 (1974); M. J. Robins, J. S. Wilson,

F.Hansske, J.Amer.Chem.Soc. 105. 4059 (1983); C.H.Kim,F.Hansske, J.Amer.Chem.Soc. 105. 4059 (1983); C.H.Kim,

V.E.Marquez, S.Broder, H.Mitsuya, J.S.Driscoll, J.Med.Chem. 30, 862 (1987), jsou závislé na nákladných výchozích surovinách (2'-deoxyuridinu, uridinu, D-ribose). Tuto závislost výroby 3'-azido-2',3'-dideoxy-thymidenu na 2'-deoxythymidinu odstraňuje postup založený na l-(3,5-di-0-benzoyl-2-deoxy-p-D-threo-pentofuranosyl) thyminu (čs.autorské osvědčení č.265967), jako výchozí látce. Nevýhodou tohoto postupu je, že mezi produkty při výrobě cukerné složky nejsou krystalické. Například monoisopropylidenxyloso je nutné čistit vakuovou destilací. Posledním reakčním stupněm při tomto postupu výroby 3'-azido-2'-dideoxythymidinu je hydrolysa tritylskupiny kyselinou octovou. Z této reakční směsi se produkt v čisté krystalické formě isoluje dosti obtížně a často je třeba k dočištění použít chromatografie na koloně se silikagelem.V.E.Marquez, S.Broder, H.Mitsuya, J.S.Driscoll, J.Med.Chem. 30, 862 (1987), are dependent on expensive starting materials (2'-deoxyuridine, uridine, D-ribose). This dependence of the production of 3'-azido-2 ', 3'-dideoxy-thymidine on 2'-deoxythymidine is eliminated by a process based on 1- (3,5-di-O-benzoyl-2-deoxy-β-D-threo-pentofuranosyl) thymine. (Czechoslovak author's certificate No. 265967), as a starting material. The disadvantage of this process is that they are not crystalline among the products in the production of the sugar component. For example, monoisopropylideneoxylose must be purified by vacuum distillation. The final reaction step in this process for the preparation of 3'-azido-2'-dideoxythymidine is the hydrolysis of the trityl group with acetic acid. From this reaction mixture, the product in pure crystalline form is quite difficult to isolate and it is often necessary to use silica gel column chromatography for purification.

Tyto nedostatky uvedeného postupu odstraňuje předmětný vynález 1-(3-azido-2,3-dideoxy-p-D-allokofuranosyl) thyminu vzor/1/The present invention overcomes these shortcomings of the present process with 1- (3-azido-2,3-dideoxy-β-D-allocofuranosyl) thymine of formula (1).

a způsob jeho přípravy, vyznačeného tím, že se 5-methyl-2,4-bis/ trimethylsilyloxy/pyridin vzorce IIand a process for its preparation, characterized in that 5-methyl-2,4-bis (trimethylsilyloxy) pyridine of formula II

/11/ nechá reagovat s I,2-di-0-acetyl-3,5,6,-tri-0-benzoyl-D-glukofuranosou vzorce III(11) is reacted with 1,2-di-O-acetyl-3,5,6, -tri-O-benzoyl-D-glucofuranose of formula III

kde B_z je benzozl a AC acetyl, v přítomnosti Lewisovy kyseliny, s výhodou chloridu cíničitého, a to v inertním aprotickém rozpouštědle, s výhodou I,2-dichlorethanu,získaný I-/2-O-acetyl-3 5,6-tri-0-benzoyl-p-D-glukofuranosyl/thymin vzorce IVwherein B _z is benzosyl and AC acetyl, in the presence of a Lewis acid, preferably stannous chloride, in an inert aprotic solvent, preferably 1,2-dichloroethane, obtained I / 2-O-acetyl-3,5,6-tri -O-benzoyl-β-D-glucofuranosyl / thymine of formula IV

se uvede do reakce s chlorovodíkem ve směsi dioxanu s vodou poté se produkt vzorce V ois reacted with hydrogen chloride in a mixture of dioxane and water then the product of formula V o

nechá reagovat s methansulfonylchloridem v pyridinu, získaný meziprodukt vzorce VI 0reacted with methanesulfonyl chloride in pyridine to give the intermediate of formula VI 0

OMs kde Ms je methannsulfonyl reaguje s 1,8-diazabicyklo [5,4,0] undec-7-enem v acetonitrilu, vzniklá látka vzorce VIIOMs where Ms is methanesulfonyl is reacted with 1,8-diazabicyclo [5.4.0] undec-7-ene in acetonitrile, the resulting compound of formula VII

/VII/, se zahřívá s roztokem chlorovodíku v demethylformamidu na teplotu °C až 120 °C a získaný chlorderivát vzorce VIII(VII), is heated with a solution of hydrogen chloride in demethylformamide to a temperature of ° C to 120 ° C and the obtained chlorine derivative of formula VIII

CL /VIII/ se refluxuje s roztokem tri-n-butylstanamu v inertním rozpouštědle, s výhodou benzenu, toluenu nebo dioxanu, a to v přítomnosti 2,2'-azobis/2-methylpropionirilu/, vzniká látka vzorce IXCL (VIII) is refluxed with a solution of tri-n-butylstannam in an inert solvent, preferably benzene, toluene or dioxane, in the presence of 2,2'-azobis (2-methylpropioniril) to give a compound of formula IX

QQ

/IX/, která se po methanolyse v přítomnosti methoxidu sodného izoluje krystalizací jako I,/2-deoxy-3-D-glukofuranosyl/thymin vzorce X(IX), which after isolation in the presence of sodium methoxide is isolated by crystallization as 1,2-deoxy-3-D-glucofuranosyl / thymine of formula X

který se uvede do reakce s 2,2-dimethoxipropanem ve směsi acetonu a dimethylformanidu v přítomnosti minerální kyseliny, s výhodou kyseliny sírové, získaný 5,6-O-isopropylidenderivát vzorce XIwhich is reacted with 2,2-dimethoxipropane in a mixture of acetone and dimethylformanide in the presence of a mineral acid, preferably sulfuric acid, to give the 5,6-O-isopropylidene derivative of formula XI

/XI// XI /

se nechá reagovat s methansulfonylchloridem v pyridinu a získanýis reacted with methanesulfonyl chloride in pyridine and obtained

se zahřívá s azidem alkalického kovu, s výhodou azidem sodným nebo lithým v dimethyIformamidu, na teplotu 80 °C až 120°C a látka vzorce I se získá kyselou hydrolysou, s výhodou za katalysy silně kyselým katexem v H* cyklu.is heated with an alkali metal azide, preferably sodium or lithium azide in dimethylformamide, to a temperature of 80 ° C to 120 ° C and the compound of formula I is obtained by acid hydrolysis, preferably by catalysis with a strongly acidic cation exchange resin in the H * cycle.

Dále je předmětem vynálezu použití látky vzorce I jako výchozí suroviny k přípravě látky 3'-azido-2',3'-azido-2',3'-dideoxythymiden vzorce XIII. λThe invention furthermore relates to the use of a compound of the formula I as starting material for the preparation of a 3'-azido-2 ', 3'-azido-2', 3'-dideoxythymide of the formula XIII. λ

HO /XIII/HO / XIII /

Důležitým znakem tohoto vynálezu je, že klíčivý meziprodukt I-/2.O.acetyl-3,5,6-tri-0-benzoyl-p-D-glukofuranosyl/thymin vzorce IV se připraví kondensací derivátu thyminu s vhodně chráněným derivátem I-O-acetyl-D-glukofuranosy. Nejvýhodněji se tato reakce realizuje použitím 5-methyl-2,4-bis/trimethylsilyl/pyrimidinu vzorce II, který je snadno dostupný reakcí thyminu s hexamethyldisilazenem, a dále použitím chloridu cíničitého jako katalysátoru této reakce (U.Niedballa, H.Vorbrúggen, J. Org. Chem. 39, 3668/1974/).An important feature of the present invention is that the key intermediate I- (2.O.acetyl-3,5,6-tri-O-benzoyl-β-D-glucofuranosyl) thymine of formula IV is prepared by condensing a thymine derivative with a suitably protected IO-acetyl- D-glucofuranose. Most preferably, this reaction is carried out using 5-methyl-2,4-bis (trimethylsilyl) pyrimidine of formula II, which is readily available by reacting thymine with hexamethyldisilazene, and using tin tetrachloride as a catalyst for this reaction (U.Niedballa, H. Vorbrüggen, J Org. Chem. 39, 3668 (1974).

Dalším znakem tohoto vynálezu je volba vhodného cukerného derivátu pro uvedenou nukleosidovou kondenzaci: požadované nároky zcela splňuje 1,2-di-O-acetyl-3,5,6-tri-O-benzoyl-D-glukofuranosa vzorce III /R.J.Ferrier, S.R. Haines, J.Chem.sOc., Perkin Trans. I, 1984, 1675), snadno dostupná z 1,2:5,6-di-0-isopropyliden-(2 “ -D-glukofuranosy parciální hydrolysou za katalysy silně kyselého katexu v H⁺ cyklu, následující benzoylací a acetolysou. Všechny meziprodukty jsou krystalické a vznikají ve vysokých výtěžcích. Produkt acetolysy, 1,2-di-O-acetyl-3,5,6-tri-0-benzoyl-D-glukofuranosa vzorce III se použije bez dalšího čištění pro nukleosidovou reakci, která probíhá s výhodou v 1,2-dichlorethanu, ale může se použít i methylenchlorid nebo acetonitril. Pro provedení kondensace se reakční směs rozloží vodným roztokem hydrogenuhličitanu sodného, nerozpustná sraženina se odfiltruje, organická vrstva se vysuší a odpaří. Odparek reakčního produktu vzorce IV reaguje se směsí organického rozpouštědla mísitelného s vodou, s výhodou dioxanu, s koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou.Another feature of the present invention is the choice of a suitable sugar derivative for said nucleoside condensation: 1,2-di-O-acetyl-3,5,6-tri-O-benzoyl-D-glucofuranose of formula III / RJFerrier, SR Haines fully meets the required requirements. , J.Chem.sOc., Perkin Trans. I, 1984, 1675), readily available from 1,2: 5,6-di-O-isopropylidene- (2'-D-glucofuranose by partial hydrolysis with strongly acidic cation exchange ^{catalyzes in the H +} cycle, followed by benzoylation and acetolysis. The product of acetolysis, 1,2-di-O-acetyl-3,5,6-tri-O-benzoyl-D-glucofuranose of formula III, is used without further purification for the nucleoside reaction which proceeds with preferably in 1,2-dichloroethane, but methylene chloride or acetonitrile may also be used to quench the reaction mixture with aqueous sodium bicarbonate, the insoluble precipitate is filtered off, the organic layer is dried and evaporated. a water-miscible solvent, preferably dioxane, with concentrated hydrochloric acid.

Poté se reakční směs zředí organickým rozpouštědlem nemísitelným s vodou, s výhodou ethylacetátem, promyje se vodou, roztokem hydrogenuhličitanu sodného a po vysušení se organická rozpouštědla odpaří. Krystalizací odparku z toluenu se získá produkt vzorce V s volnou hydroxyskupinou v poloze 2'. Tento produkt se působením methansulfonylchloridu v pyridinu převede ve vysokém výtěžku na mesylderivát vzorce VI, který se převede působením l,8-diazabicyklo(5,4,0)undec-7-enu v acetonitrilu na 2, 2'-anhydroderivát vzorce VII obdobně jako tomu je v PV 5686-87. Otevření 2,2'-anhydroderivátu vzorce VII na 2'-chlor-2'-deoxyderivát vzorce VIII se s výhodou provede zahříváním v 1 M roztoku chlorovodíku v dimethylformamidu na 80 °C až 120 °C. Odparek surové látky vzorce VIII se bez čištění použije v dalším reakčním stupni, kde se získaný chlorderivát vzorce VIII redukuje tri-n-butylstannanem. Reakce se s výhodou provádí v přítomnosti 2.2'-azobis (2-propionitrilu) v benzenu, toluenu a vysrážením se získá sraženina látky vzorce IX, která se bez čištění použije pro přípravu volného nukleosidu vzorce X methanolysou za přítomnosti methoxidu sodného. Volný nukleosid vzorce X se pak převede na 5,6-O-isopropylidenderivát vzorce XI působením 2,2-dimethoxypropanu ve směsi acetonu a dimethylformamidu za kyselé katalysy, např. kyselinou sírovou. Produkt se získá krystalizací ze směsi 2-propanolu a etheru. Chromatografií na koloně se silikagelem lze získat jeho další podíl. Působením methansulfonylchloridu v pyridinu na tuto látku se získá ve výtěžku mesylderivát vzorce XII, který se bez dalšího čištění použije pro reakci s azidem sodným nebo lithným v dimethylformamidu při teplotě 80 až 120 ° C; reakci je vhodné provádět v argonové atmosféře. Vzniklý produkt vzorce XII se nakonec kysele hydrolysuje, výhodné je provést hydrolysu ve vodném methanolu silně kyselým katexem v H+ cyklu. lonex se odfiltruje, promyje methanolem a spojené filtráty se za vakua odpaří. Krystalizací odparku z vody se získá l-(3-azido-2,3-dideoxy-p-D-allokofuranosyl)thymin vzorce I.The reaction mixture is then diluted with a water-immiscible organic solvent, preferably ethyl acetate, washed with water, sodium bicarbonate solution and, after drying, the organic solvents are evaporated. Crystallization of the residue from toluene gives the product of formula V with a free hydroxy group in the 2 'position. This product is converted in high yield by treatment with methanesulfonyl chloride in pyridine to the mesyl derivative of formula VI, which is converted by treatment with 1,8-diazabicyclo (5,4,0) undec-7-ene in acetonitrile to the 2,2'-anhydro derivative of formula VII in a similar manner to this is the case in PV 5686-87. The opening of the 2,2'-anhydro derivative of formula VII to the 2'-chloro-2'-deoxy derivative of formula VIII is preferably carried out by heating in a 1 M solution of hydrogen chloride in dimethylformamide to 80 ° C to 120 ° C. The crude residue of formula VIII is used without purification in the next reaction step, where the chlorine derivative of formula VIII obtained is reduced with tri-n-butylstannane. The reaction is preferably carried out in the presence of 2,2'-azobis (2-propionitrile) in benzene, toluene and precipitation gives a precipitate of the compound of formula IX which is used without purification to prepare the free nucleoside of formula X by methanolysis in the presence of sodium methoxide. The free nucleoside of formula X is then converted to the 5,6-O-isopropylidene derivative of formula XI by treatment with 2,2-dimethoxypropane in a mixture of acetone and dimethylformamide under acid catalysis, e.g. sulfuric acid. The product is obtained by crystallization from a mixture of 2-propanol and ether. Additional chromatography can be obtained by silica gel column chromatography. Treatment with methanesulfonyl chloride in pyridine afforded the mesyl derivative of formula XII in yield, which was used without further purification to react with sodium or lithium azide in dimethylformamide at 80-120 ° C; the reaction is suitably carried out in an argon atmosphere. The resulting product of formula XII is finally acid hydrolyzed, it is preferred to carry out the hydrolysis in aqueous methanol with a strongly acidic cation exchange resin in the H + cycle. the lonex is filtered off, washed with methanol and the combined filtrates are evaporated in vacuo. Crystallization of the residue from water gave 1- (3-azido-2,3-dideoxy-β-D-allocofuranosyl) thymine of formula I.

Dalším důležitým znakem tohoto vynálezu je, že látka vzorce I se velmi snadno ve vysokém výtěžku převede na 3'-azido-2',3'dideoxythymidin vzorce XIII (AZT). Tato transformace spočívá ve štěpení vicinálního 5,6-diolového seskupení reakcí s jodistanem sodným a následující redukcí intermediátu odvozeného od dialdehydopentosy. Pro zjednodušení lze s výhodou tuto reakci provést s oběma činidly vázanými na středně nebo silně basický anex. Tím odpadá složitá deionisace reakčních směsí a zrychluje se isolace citlivého konečného produktu AZT. Na roztok látky vzorce I ve vodném methanolu se působí anexem v jodistanovém cyklu a po jeho odfiltrování a promytí methanolem se spojené filtráty odpaří na původní objem. Na tento roztok se působí anexem v tetrahydroboritanovém cyklu. lonex se opět odfiltruje, promyje methanolem a spojené filtráty se za vakua odpaří. 3'-Azido-2',3'-dideoxythymidin vzorce XIII se tak získá ve velmi čistém stavu krystalizací z vody.Another important feature of the present invention is that the compound of formula I is very easily converted to the 3'-azido-2 ', 3'-dideoxythymidine of formula XIII (AZT) in high yield. This transformation consists of cleavage of the vicinal 5,6-diol group by reaction with sodium periodate and subsequent reduction of the dialdehyde-pentose-derived intermediate. For simplicity, this reaction can be advantageously performed with both reagents bound to a moderately or strongly basic anion exchange resin. This eliminates the complex deionization of the reaction mixtures and accelerates the isolation of the sensitive final AZT product. A solution of the compound of formula I in aqueous methanol is treated with an anion exchanger in a periodate cycle and, after being filtered off and washed with methanol, the combined filtrates are evaporated to the original volume. This solution is treated with an anion exchange resin in a tetrahydroborate cycle. the lonex is filtered off again, washed with methanol and the combined filtrates are evaporated in vacuo. The 3'-azido-2 ', 3'-dideoxythymidine of the formula XIII is thus obtained in a very pure state by crystallization from water.

Důležitými přednostmi tohoto vynálezu jsou tedy:Thus, important advantages of the present invention are:

a) nová výchozí látka pro výrobu významného léčiva, jehož výroba není závislá na omezeně dostupných nebo nákladných surovinách,a) a new starting material for the production of an important medicinal product, the production of which does not depend on limited or expensive raw materials,

b) způsob její výroby, který vychází z domácích surovin, především z laciné D-glukosy, která je dostupná ve velkém množství,b) the method of its production, which is based on domestic raw materials, especially cheap D-glucose, which is available in large quantities,

c) způsob výroby nevyžaduje mimořádných reakčních podmínek, rozpouštědel ani nákladných, nedostupných či citlivých činidel ,c) the production method does not require extraordinary reaction conditions, solvents or expensive, unavailable or sensitive reagents,

d) přeměna látky vzorce na 3'-azido-2',3'-dideoxythymidinu vzorce XIII spočívá ve velmi jednoduchém dvoustupňovém procesu,d) the conversion of a compound of formula to 3'-azido-2 ', 3'-dideoxythymidine of formula XIII consists in a very simple two-step process,

e) 3'-azido-2', 3'-dideoxythymidin vzorce XIII se získá ve vysoké čistotě.e) The 3'-azido-2 ', 3'-dideoxythymidine of formula XIII is obtained in high purity.

V dalším je předmětná látka, způsob její přípravy a použití vysvětlena na příkladech provedení, aniž se tím jakkoli omezuje.In the following, the subject matter, its preparation and use are explained by way of non-limiting examples.

Příklad 1Example 1

K roztoku 30,3 g 95 % l,2-di-0-acetyl-3,5,6-tri-0-benzoyl-Dglukofuranosy vzorce III ve 100 ml 1,2-dichlorethanu se za míchání přidá 13,5 g 5-methyl-2,4-bis(trimethylsilyloxy)pyrimidinu vzorce II a 5 ml chloridu cíničitého. Roztok se nechá přes noc při teplotě místnosti a potom se za míchání nakape do 1,5 1 5 % roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Po 5 hodinách stání se čirá vodná vrstva oddělí a zbytek se za vakua odpaří. Odparek se extrahuje třikrát 250 ml ethylacetátu. Spojené extrakty se promyjí 200 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného a 100 ml nasyceného roztoku chloridu sodného. Po vysušení bezvodým síranem hořečnatým se roztok za vakua odpaří. Získá se 33,5 g surového produktu vzorce IV.To a stirred solution of 30.3 g of 95% 1,2-di-O-acetyl-3,5,6-tri-O-benzoyl-D-glucofuranose of formula III in 100 ml of 1,2-dichloroethane was added 13.5 g of 5 -methyl-2,4-bis (trimethylsilyloxy) pyrimidine of formula II and 5 ml of stannous chloride. The solution is left overnight at room temperature and then added dropwise to 1.5 l of 5% sodium bicarbonate solution with stirring. After standing for 5 hours, the clear aqueous layer was separated and the residue was evaporated in vacuo. The residue is extracted three times with 250 ml of ethyl acetate. The combined extracts were washed with 200 ml of 5% sodium bicarbonate solution and 100 ml of saturated sodium chloride solution. After drying over anhydrous magnesium sulfate, the solution was evaporated in vacuo. 33.5 g of crude product of formula IV are obtained.

Ten se rozpustí ve 200’ ml dioxanu, k roztoku se přidá za míchání 13 ml koncentrované kyseliny chlorovodíkové a směs se míchá 2 dny při teplotě místnosti. Přitom se zředí 800 ml ethylacetátu, promyje se 200 ml a 200 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného. Organická vrstva se vysuší bezvodým síranem hořečnatým a za vakua odpaří. Křystalizaci odparku z toluenu se získá 12 g (40% hmot, na výchozí 1,2-di-0-acetyl-3,5,6-tri-0-benzoyl-D-glukofuranosu vzorce III) látky vzorce V, t.t. 116 až 119 °C. Chromatografií odparku matečných louhů na koloně se silikagelem (2 kg) v soustavě ethylacetát - toluen (1:1) a křystalizaci z toluenu se získá ještě 2,9 g (9 % hmot).látky vzorce V.This was dissolved in 200 ml of dioxane, 13 ml of concentrated hydrochloric acid was added to the stirred solution, and the mixture was stirred at room temperature for 2 days. It is diluted with 800 ml of ethyl acetate and washed with 200 ml and 200 ml of 5% sodium bicarbonate solution. The organic layer was dried over anhydrous magnesium sulfate and evaporated in vacuo. Crystallization of the residue from toluene gave 12 g (40% by weight, of starting material 1,2-di-O-acetyl-3,5,6-tri-O-benzoyl-D-glucofuranose of the formula III) of the compound of the formula V, m.p. 116-119 ° C. Chromatography of the residue of the mother liquors on a silica gel column (2 kg) in ethyl acetate-toluene (1: 1) and crystallization from toluene gave a further 2.9 g (9%) of the compound of formula V.

K roztoku 12 g látky vzorce V v 65 ml pyridinu ochlazenému v ledové lázni se za míchání přidá 6,5 ml methansulfonyl chloridu. Reakční směs se potom nechá 4 hodiny při teplotě místnosti, ochladí se v ledové lázni a přidá se 5 ml vody. Potom se za vakua odpaří pyridin a odparek se rozpustí ve 400 ml ethylacelátu. Roztok odparku se promyje 100 ml vody, 5% kyselinou chlorovodíkovou do kyselé reakce vodné vrstvy, 100 ml vody a 50 ml 5% roztoku hydronuhličitanu sodného. Potom se vysuší bezvodým síranem hořečnatým a za vakua odpaří. Roztok odparku v 60 ml toluenu se za míchání nakape do 300 petroletheru. Vzniklá sraženina se odfiltruje, promyje 50 ml petroletheru a na vzduchu vysuší. Získá se 13 g (96 % hmot.) látky vzorce VI.To a stirred solution of 12 g of the compound of formula V in 65 ml of pyridine cooled in an ice bath was added 6.5 ml of methanesulfonyl chloride. The reaction mixture is then left at room temperature for 4 hours, cooled in an ice bath and 5 ml of water are added. The pyridine is then evaporated off in vacuo and the residue is dissolved in 400 ml of ethyl acetate. The residue solution was washed with 100 ml of water, 5% hydrochloric acid until the aqueous layer was acidic, 100 ml of water and 50 ml of 5% sodium bicarbonate solution. It is then dried over anhydrous magnesium sulphate and evaporated in vacuo. A solution of the residue in 60 ml of toluene is added dropwise to 300 g of petroleum ether with stirring. The precipitate formed is filtered off, washed with 50 ml of petroleum ether and air-dried. 13 g (96% by weight) of the compound of the formula VI are obtained.

K roztoku 13 g látky vzorce VI ve 130 ml acetonitrilu se přidá 4,1 ml l,8-diazabicyklo/5,4,0,/undec-7-enu. Roztok se nechá přes noc při teplotě místnosti, odpaří se na 1/3 objemu a zředí se 400 ml ethylacetátu. Roztok se promyje 130 ml vody, 130 ml jednoprocentní kyseliny chlorovodíkové a 130 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného, vysuší bezvodým síranem hořečnatým a za vakua odpaří. Krystalizaci odparku z methanolu se získá 10,6 g (96 % hmot.) produktu vzorce 7, t.t. 174 až 176 °C.To a solution of 13 g of the compound of formula VI in 130 ml of acetonitrile is added 4.1 ml of 1,8-diazabicyclo [5.4.0] undec-7-ene. The solution is left overnight at room temperature, evaporated to 1/3 volume and diluted with 400 ml of ethyl acetate. The solution was washed with 130 ml of water, 130 ml of 1% hydrochloric acid and 130 ml of 5% sodium bicarbonate solution, dried over anhydrous magnesium sulphate and evaporated in vacuo. Crystallization of the residue from methanol gave 10.6 g (96%) of the product of formula 7, m.p. 174-176 ° C.

Roztok 10,6 g látky VII v 36 ml 1M roztoku chlorovodíku v dimethylformamidu se zahřívá 45 min na teplotu 100 °C. Potom se za vakua odpaří, zkodestiluje s 80 ml xylenu a rozpustí ve 300 ml ethylacetátu. Roztok se promyje 80 ml vody, 80 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného, vysuší bezvodým síranem hořečnatým a za vakua odpaří. Odparek se suší 4 hod při 40 °C/13 Pa. Získá se 10,4g produktu vzorce VII ve formě tuhé pěny.A solution of 10.6 g of VII in 36 ml of a 1M solution of hydrogen chloride in dimethylformamide is heated at 100 DEG C. for 45 minutes. It is then evaporated in vacuo, distilled off with 80 ml of xylene and dissolved in 300 ml of ethyl acetate. The solution was washed with 80 ml of water, 80 ml of 5% sodium bicarbonate solution, dried over anhydrous magnesium sulfate and evaporated in vacuo. The residue is dried for 4 hours at 40 ° C / 13 Pa. 10.4 g of product of formula VII are obtained in the form of a solid foam.

K roztoku této látky ve 45 1 toluenu zahřátému na 100 °C se za míchání přidá 30 ml 1M roztoku tributylstannanu v toluenu a 300 mg 2,2'-azobis (2-methylpropionitrilu). Po 45 min se roztok za vakua odpaří a odparek se rozmíchá se 150 ml petroetheru. Vyloučená sraženina se odfiltruje, promyje ve 100 ml petroletheru a na vzduchu vysuší. Získá se 8,5 g sraženiny látky vzorce IX.To a stirred solution of this material in 45 L of toluene heated to 100 ° C was added 30 mL of a 1 M solution of tributylstannane in toluene and 300 mg of 2,2'-azobis (2-methylpropionitrile). After 45 minutes, the solution is evaporated in vacuo and the residue is stirred with 150 ml of petroleum ether. The precipitate formed is filtered off, washed with 100 ml of petroleum ether and air-dried. 8.5 g of a precipitate of the compound of the formula IX are obtained.

Roztok této látky v 85 ml 0,lM roztoku methoxidu sodného v methanolu se nechá přes noc při teplotě místnosti. Potom se zneutralizuje katexem, např. Dowexem 50 (H⁺) předem promytým methanolem. lonex se potom odfiltruje a promyje 3 x 40 ml methanolu. Spojené filtráty se zalkalizují kapkou triethylaminu a za vakua odpaří. Odparek se rozmíchá s etherem a vykrystalováná látka vzorce X se odfiltruje, promyje etherem a na vzduchu vysuší. Získá se 3,3 g produktu, což odpovídá výtěžku 67 % hmot, počítáno na látku vzorce VII. T.t.168 až 169 °C.A solution of this material in 85 mL of a 0.1 M solution of sodium methoxide in methanol was left overnight at room temperature. It is then neutralized with a cation exchange resin, such as Dowex 50 (H ⁺ ), pre-washed with methanol. the lonex is then filtered off and washed with 3 x 40 ml of methanol. The combined filtrates were basified with a drop of triethylamine and evaporated in vacuo. The residue is stirred with ether and the crystalline substance of formula X is filtered off, washed with ether and air-dried. 3.3 g of product are obtained, corresponding to a yield of 67% by weight, based on the compound of the formula VII. Mp 168-169 ° C.

K míchané suspensi této látky v 60 ml acetonu se přidá 30 ml dimethylformamidu, 18 ml 2,2-dimethoxypropanu a 0,1 ml koncentrované kyseliny sírové. Roztok se míchá 30 min a potom se přidá 1,5 g rozetřeného hydrogenuhličitanu sodného. Po 15 min míchání se nerozpustný podíl odfiltruje a promyje acetonem. Spojené filtráty se zalkalizují kapkou triethylaminu a za vakua odpaří. Odparek se kodestiluje se 40 ml xylenu a 40 ml toluenu. Krystalizaci odparku ze směsi 2-propanolether se získá 2,4 g produktu vzorce XI, t.t. 176 až 177 ^GC. Chromatografii odparku matečných louhů na sloupci 50 g silikagelu ethylenacetátem se získá 0,6 g téhož produktu. Celkový výtěžek je 83 % hmot.To a stirred suspension of this substance in 60 ml of acetone are added 30 ml of dimethylformamide, 18 ml of 2,2-dimethoxypropane and 0.1 ml of concentrated sulfuric acid. The solution was stirred for 30 minutes and then 1.5 g of triturated sodium bicarbonate was added. After stirring for 15 minutes, the insoluble matter was filtered off and washed with acetone. The combined filtrates were basified with a drop of triethylamine and evaporated in vacuo. The residue is codistilled with 40 ml of xylene and 40 ml of toluene. Crystallization of the residue from 2-propanol ether gave 2.4 g of the product of formula XI, m.p. 176 DEG-177 ^DEG C. Chromatography of the mother liquor column on a column of 50 g of silica gel with ethylene acetate gave 0.6 g of the same product. The total yield is 83% by weight.

K roztoku 3,1 g látky vzorce XI ve 30 ml pyridiu ochlazenému v ledové lázně se přidají za míchání 3 ml methansulfonylchloridu. Reakční směs se nechá 5 hod při teplotě místnosti. Potom se ochladí v ledové lázni a přidají se 3 ml vody. Po 10 min se reakční směs za vakua odpaří. Roztok odparu v 80 ml ethylacetátu se promyje 2x 30 ml vody, 15 ml 2% kyseliny chlorovodíkové, 10 ml vody, 10 ml 5% roztoku hydrogenuhličitanu sodného, vysuší se bezvodým síranem hořečnatým, za vakua odpaří a suší při 40 °C/13 Pa. Získá se 3,5 g (91 % hmot.) mesylderivátu vzorce XII ve formě chromatograf icky jednotné tuhé pěny.To a stirred solution of 3.1 g of the compound of formula XI in 30 ml of pyridine cooled in an ice bath was added 3 ml of methanesulfonyl chloride. The reaction mixture was left at room temperature for 5 hours. It is then cooled in an ice bath and 3 ml of water are added. After 10 min, the reaction mixture was evaporated in vacuo. A solution of the residue in 80 ml of ethyl acetate is washed twice with 30 ml of water, 15 ml of 2% hydrochloric acid, 10 ml of water, 10 ml of 5% sodium bicarbonate solution, dried over anhydrous magnesium sulphate, evaporated in vacuo and dried at 40 ° C / 13 Pa. . 3.5 g (91% by weight) of the mesyl derivative of the formula XII are obtained in the form of a chromatographically uniform solid foam.

K roztoku látky vzorce XII ve 40 ml dimethylformamidu se přidá 2,6 g rozetřeného azidu sodného. Ze směsi se za vakua odpaří 20 ml dimethylformamidu. Zbytek se za míchání pod argonovou atmosférou zahřívá 5 hodin na teplotu 100 °C. Potom se za vakua odpaří a odparek se rozpustí ve 125 ml ethylacetátu. Roztok se promyje 3x 20 ml vody, vysuší síranem hořečnatým a za vakua odpaří. Odparek se rozpustí ve 40 ml 80% vodného methanolu. ' K roztoku se přidají 4 ml katexu, např. Dowexu 50 (H⁺) a směs se míchá 40 min. při teplotě 80 °C. Potom se ionex odfiltruje, promyje 3x 20 ml methanolu, spojené filtráty se zalkalizují kapkou triethylaminu a za vakua odpaří. Krystalizací odparku z vody se získá 2,09 g (76 % hmot.) látky vzorce I.T.t. 164 až 165 °C. H NMR (100 MHy) spektrum v hexa-deuteriodimethylsulfoxidu: 1,79 s, 3 H (CH₃): 2,13 - 2,43 m, 2 H (2x H-2'); 3,44 t, 2 H (2xH- 6',J(6',OH)=J(6',5')=4,5);3,65 p lH(H-5',J(5',OH)=J(5',6a') =J(5',6b')=4,5: J(5',4')=4,1); 3,86 t, 1H (H-4, J(4',3')=3,9; J(4',5')=4,1); 4,50 p,l H (H-3',J(3',4')=J(3',2a')= 3,9;J(3',2b') =7,3);4,71t, 1 H (6'-OH,J(OH, 6a') =J(0H, 6b')= 4,5; 5,33 d, 1 H (5'-OH, J (OH,5')=4,5:) 6,09t,lH (H-l',J(1,2a') = J(l',2b')= 6,7; 7,65d, 1 Η (H-6, J=l,0); 11,30 s, 1 H (NH).To a solution of the compound of formula XII in 40 ml of dimethylformamide was added 2.6 g of triturated sodium azide. 20 ml of dimethylformamide are evaporated off from the mixture in vacuo. The residue was heated to 100 ° C for 5 hours with stirring under an argon atmosphere. It is then evaporated in vacuo and the residue is dissolved in 125 ml of ethyl acetate. The solution is washed 3 times with 20 ml of water, dried over magnesium sulphate and evaporated in vacuo. The residue was dissolved in 40 mL of 80% aqueous methanol. 4 ml of cation exchange resin, e.g. Dowex 50 (H ⁺ ), are added to the solution and the mixture is stirred for 40 minutes. at 80 ° C. The ionex is then filtered off, washed 3 times with 20 ml of methanol, the combined filtrates are basified with a drop of triethylamine and evaporated in vacuo. Crystallization of the residue from water gave 2.09 g (76%) of the title compound of formula ITt 164-165 ° C. 1 H NMR (100 MH +) spectrum in hexa-deuteriodimethylsulfoxide: 1.79 s, 3 H (CH ₃ ): 2.13 - 2.43 m, 2 H (2x H-2 '); 3.44 t, 2 H (2xH-6 ', J (6', OH) = J (6 ', 5') = 4.5), 3.65 p 1H (H-5 ', J (5' , OH) = J (5 ', 6a') = J (5 ', 6b') = 4.5: J (5 ', 4') = 4.1); 3.86 t, 1H (H-4, J (4 ', 3') = 3.9; J (4 ', 5') = 4.1); 4.50 p, 1H (H-3 ', J (3', 4 ') = J (3', 2a ') = 3.9; J (3', 2b ') = 7.3); , 71t, 1H (6'-OH, J (OH, 6a ') = J (OH, 6b') = 4.5, 5.33 d, 1H (5'-OH, J (OH, 5 ' ) = 4.5 :) 6.09t, 1H (H-1 ', J (1,2a') = J (1 ', 2b') = 6,7; 7,65d, 1 Η (H-6, J = 1.0), 11.30 s, 1H (NH).

Příklad 2 .Example 2.

K roztoku 3,0 g l-(3-azido-2,3-dideoxy-p-D-allokofuranosyl)thyminu vzorce I v 70 ml 80% vodného methanolu se přidá 15 g suchého anexu, např. Dowexu 1 (I0₄~). Směs se intenzívně míchá 1 hod při teplotě místnosti. Potom se ionex odfiltruje a promýchá methanolem do vymizení UV absorce eluátu. Spojené filtráty se za vakua odpaří na objem 70 ml, přidá se 15 g anexu, např. Dowexu 1 (BH₄) a směs se intenzívně míchá 1 hod. při teplotě místnosti. Ionex se odfiltruje a promývá methanolem do vymizení UV absorbce eluátu. Spojené filtráty se za vakua odpaří. Krystalizací odparku z vody se získá 2,2 g /81 % hmot./ 3'-azido-2', 3'-dideoxythymidinu vzorce XIII, t.t. 119 až 122 °C. Krystalizací odparku matečných louhů z vody se získá dalších 0,24 g /9 % hmot./ látky vzorce XIII o stejné teplotě tání.To a solution of 3.0 g of 1- (3-azido-2,3-dideoxy-β-D-allocofuranosyl) thymine of formula I in 70 ml of 80% aqueous methanol is added 15 g of a dry anion exchange resin, e.g. Dowex 1 (IO ₄ -). The mixture was stirred vigorously for 1 hour at room temperature. The ionex is then filtered off and washed with methanol until the UV absorption of the eluate disappears. The combined filtrates are evaporated in vacuo to a volume of 70 ml, 15 g of anion exchange resin, e.g. Dowex 1 (BH ₄ ), are added and the mixture is stirred vigorously for 1 hour at room temperature. The ionex is filtered off and washed with methanol until the UV absorption of the eluate disappears. The combined filtrates were evaporated in vacuo. Crystallization of the residue from water gave 2.2 g (81% w / w) of 3'-azido-2 ', 3'-dideoxythymidine of formula XIII, mp 119-122 ° C. Crystallization of the mother liquor residue from water gave an additional 0.24 g (9% w / w) of the title compound of formula XIII.

Claims (3)

PATENTOVÉ NÁROKYPATENT CLAIMS 1. l-(3-Azido-2,3-dideoxy-p-D-allokofuranosyl)thymin vzorce I1- (3-Azido-2,3-dideoxy-β-D-allocofuranosyl) thymine of formula I ^N3 , _ ^N 3, _ 2. Způsob přípravy látky vzorce I podle nároku 1, spočívající v tom, že se 5-methyl-2,4-bis(trimethylsilyloxy) pyrimidin vzorce IIProcess for the preparation of a compound of formula I according to claim 1, which comprises 5-methyl-2,4-bis (trimethylsilyloxy) pyrimidine of formula II uvede do reakce s 1,2-di-O-acetyl-3,5,6-tri-O-benzoyl-D-glukofuranosou vzorce IIIreacted with 1,2-di-O-acetyl-3,5,6-tri-O-benzoyl-D-glucofuranose of formula III BzO .BzO. OAC kde BzO značí benzoyl, AC acetyl, v přítomnosti Lewisovy kyseliny, s výhodou chloridu cíničitého, a to v inertním aprotickém rozpouštědle, s výhodou 1,2-di-chlorethanu, přičemž získaný 1-(2-O-acetyl-3,5,6-tri-0-benzoyl-3-D-glukofuranosyl)thymin vzorce IV _n OAC wherein BzO is benzoyl, AC acetyl, in the presence of a Lewis acid, preferably stannous chloride, in an inert aprotic solvent, preferably 1,2-dichloroethane, to give 1- (2-O-acetyl-3,5 , 6-tri-O-benzoyl-3-D-glucofuranosyl) thymine of formula IV _n OAC se uvede do reakce s chlorovodíkem ve směsi dioxanu s vodou, deacetylovaný produkt vzorce VThe OAC is reacted with hydrogen chloride in a mixture of dioxane and water, the deacetylated product of formula V OH se převede reakcí s meziprodukt vzorce VI methansulfonylchloridem v pyridinu naOH is converted by reaction with an intermediate of formula VI with methanesulfonyl chloride in pyridine to /VI/,/ VI /, BzO—BzO— OMs kde M^s je methansulfonyl, - který reaguje s 1,8-diazabicyklo [5,4,0] undec-7-enem v acetonitrilu za vzniku látky vzorce VIIOMs wherein M ^s is methanesulfonyl, which is reacted with 1,8-diazabicyclo [5.4.0] undec-7-ene in acetonitrile to give the compound of formula VII CC zahřívá s roztokem chlorovodíku v dimethylformanidu 80 až 120 °C, přičemž získaný chlorderivát vzorce která se na teplotu VIIIis heated with a solution of hydrogen chloride in dimethylformanide of 80 to 120 ° C, the chlorine derivative of formula /Vílí/, se refluxuje s roztokem tributylstananu v inertním rozpouštědle, s výhodou v benzenu, toluenu nebo dioxanu a to v přítomnosti 2,2'-azobis/2-methyl-propionitrilu/ za vzniku látky vzorce IX q(Vli) is refluxed with a solution of tributylstannane in an inert solvent, preferably benzene, toluene or dioxane, in the presence of 2,2'-azobis (2-methylpropionitrile) to give the compound of formula IX q která se po methanolyse v přítomnosti methoxidu sodného isoluje krystalizací jako I/2-deoxy-p-D-glukofuranosyl/thymin vzorce Xwhich, after methanolysis in the presence of sodium methoxide, is isolated by crystallization as I / 2-deoxy-β-D-glucofuranosyl / thymine of formula X /X/, který se uvede do reakce s 2,2-dimethoxypropanem ve směsi acetonu a dimethylformamidu v přítomnosti minerální kyseliny, s výhodou kyseliny sírové, získaný 5,6-O-isopropylidenderivát vzorce XI 0(X), which is reacted with 2,2-dimethoxypropane in a mixture of acetone and dimethylformamide in the presence of a mineral acid, preferably sulfuric acid, to give the obtained 5,6-O-isopropylidene derivative of formula X10 se ponechá reagovat s methansulfonyIchloridem v pyridinu a získaný derivát vzorce XIIis reacted with methanesulfonyl chloride in pyridine and the derivative obtained of formula XII se zahřívá s azidem alkalického kovu, s výhodou azidem sodným nebo lithným v dimethylformamidu, na teplotu 80 až 120 °C, načež se látka vzorce I získá kyselou hydrolysou.is heated with an alkali metal azide, preferably sodium or lithium azide in dimethylformamide, to a temperature of 80 to 120 ° C, after which the compound of formula I is obtained by acid hydrolysis. 3. Použití látky vzorce I jako výchozí suroviny pro přípravu3. Use of a compound of formula I as a starting material for preparation 3'-azido-2',3'-dideoxythimidinu obecného vzorce XIII.3'-azido-2 ', 3'-dideoxythimidine of formula XIII.