CS202517B2 - Method of producing derivatives of 21-hydroxy-20-methyl-pregnane - Google Patents

Abstract

Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung von 21-Hydroxy-20-methylpregnan-Derivaten der allgemeinen Formel worin die Bindung ..... eine Einfachbindung oder eine Doppelbindung bedeutet, durch Fermentation von Zoo- oder Phytosterinen mit einer Kultur von Mycobacterium spec. NRRL B-3683 oder NRRL B-3805 oder seiner Varianten und Mutanten, welches dadurch gekennzeichnet ist, daß man die Fermentation bei einem pH-Wert von 6,0 bis 8,0 in Gegenwart von Borationen oder organischen Borverbindungen durchführt.

Description

(54) Způsob výroby derivátů 21-Ьу0гоху-20-те1Ьу1-ргедпапи(54) Method of production of 21-0у0гоху-20-те1Ьу1-ргедпапи derivatives

Předmětem vynálezu je způsob výroby derivátů 21-hydroxy~20-meehyl-pregnanu obecného vzorce I *-The present invention provides a process for the preparation of 21-hydroxy-20-methyl-pregnane derivatives of the general formula I * -

(I) ve kterém vazba(I) wherein the bond

.... značí jednoduchou vazbu nebo dvojnou vazbu, fereentací zoosterolů nebo · fytosterolů kulturou Mycooaaterium ·spec. NRRL B-3683 nebo NRRL B-3805 nebo jejími variantami a mutantami..... refers to a single bond or a double bond by the fereentation of zoosterols or phytosterols by Mycooaaterium culture spec. NRRL B-3683 or NRRL B-3805 or variants and mutants thereof.

Je známé, že kultury Mycoobateritm spec. NRRL B-3683 a NRRL B-3805 mmaí schopnost tvořit ze zoosterolů nebo fytosterolů deriváty 21-hydroxy-20-meethl-pregnanu obecného vzorce I (.Apppied. Microbiology 21» 19*72, 72 ff. a Apppied and Eivironrnennal Microbiology 22, 1976, 310 ff.). Tyto sloučeniny se však tvoří pouze ve stopách nebo ve velmi malém výtěžku, takže známý způsob·je technicky téměř nepoužitelný.It is known that Mycoobateritm spec. NRRL B-3683 and NRRL B-3805 have the ability to form 21-hydroxy-20-meetheptane of Formula I (Apppied. Microbiology 21, 19 * 72, 72 ff.) And Apppied and Environmental Microbiology 22 from zoosterols or phytosterols. 1976, 310 ff.). However, these compounds are only formed in traces or in very low yield, so that the known process is almost technically unusable.

202517 2202517 2

Způsobem podle vynálezu je možno dosáhnout význačné vyšších výtěžků derivátů 21-hydroxy-20-methyl~pregnenu obecného vzorce I, než způsobem známým.The process according to the invention yields significantly higher yields of the 21-hydroxy-20-methyl-pregnene derivatives of the general formula (I) than the known processes.

Zoosteroly a fytosteroly vhodné pro fermentaci jsou například cholesterol·, stigmasterol, kammesstroo, brašsikasterol nebo sitosteroly, 3-acylsloučeniny - jako například . acstáty těchto sterol ne^bo 3-^^- Δ4-_>ttsrsi^dy, zíslcané z -těchto sterolů. Oppénauerovou oxidací , jako například 4-cholssten-3-sn, 4-sti^mastsn-3-sn, Á-sito^en^-on nebo 4-k8mpesten-3-sn.Zoosterols and phytosterols suitable for fermentation are, for example, cholesterol, stigmasterol, cammesstroo, bagasicsterol or sitosterols, 3-acyl compounds - such as. ACST these sterol no ^b 3 - ^^ - _Δ4-> ttsrsi ^dy, zíslcané of -the following sterols. Oppenauer oxidation, such as 4-cholssten-3-sn, 4-sti-mastin-3-sn, s-silaphen-4-one or 4-chlorosten-3-sn.

Podle vynálezu .se fermentace provádí v příoomnoosi boritanových iontů nebo organických sloučenin boru. Vhodné sloučeniny boru jsou například kyselina booitá, meeaboritan sodný, tstrtbsrittn dvojsodný, mmeaboritan vápenatý nebo . t.ifeenylOoritto. Fsrmentace se výhodně provádí v 0,1 % až 0,5 % látek posilujících 0rritanové ionty.' Přidávání látek p^É^skyt^jzících ’ brгit(Olrvš ionty se výhodně provádí 10 až 30 hodin po začátku fe^e^ace.According to the invention, the fermentation is carried out in the presence of borate ions or organic boron compounds. Suitable boron compounds are, for example, booic acid, sodium metaborate, disodium trisodium, calcium metaborate or. t.ifeenylOoritto. The fermentation is preferably carried out in 0.1% to 0.5% of the 0-nitrite ion enhancer. The addition of the brilliant substances (preferably the ions are carried out 10 to 30 hours after the start of the reaction).

Při přidávání látek pon^t^ících bořitanové ionty je třeba dbát na to, aby hodnota pH fermentační kultury byla ·obvyklým způsobem upravena na hodnotu mezi 6,0 a 8,0.When adding borate ion-containing substances, care must be taken to adjust the pH of the fermentation culture to between 6.0 and 8.0 in the usual manner.

Jinak se fsrueohacr provádí za obvyklých podmínek. Mikroorganismy se kU-ti-vUj ve vhodném · ' živném prostředí za provzdušnování submmeaní kultury. Potom ss ks kul tímto přidá substrát (rozpuštěný vs vhodném rozpouštědle osbo výhodně emulgovaný) a fermentuje se až se dosáhne . maximéiání transformace a^t^b^s^rátu (asi 96 až 160 hoddn)'.Otherwise, the reaction is carried out under conventional conditions. The microorganisms are cultured in a suitable nutrient medium while aerating the submerged culture. Subsequently, the substrate (dissolved in a suitable solvent or preferably emulsified) is added to the beads and fermented until it is reached. maximizing the transformation of α (b) (about 96 to 160 hours).

Vhodná rozpouštědla t.ubotrátu jsou například mediáno o, ethanol, glykrlmononethhУlSher, dimethylfooraamid osOo <3101^1^8^^x1^. Ernulgace s^l^s^s^t^^átu . ss může dosáhnout nappíkltd tím, že ss subosrát v uikrroisováoé formě osOo rozpuštěný v rozpouštědle mísiteOném s vodou (jako v mmthiaiolu, ethanolu,. acetonu, glykolmenommehyyetheru, dimethylformtmidu osOo diueShyУsslfoxidu) ža silné turbulence ™ζ]ί^1.ί ve vodě (výhodně ve vychlazené), která obsahuje obvyklé emmlgační prostředky. Vhodné prostředky jsou ог^о^шО emulgátory, jako ntppíklad adukty ethylenoxidu osOo . estery mastných kyselin s polyglykoly. Jako vhodné smulgátory jsou pHklatoě jmenovka v Schodě obvyklá siráčedla Tegio(^R\ . T^at^, Teee^ a S^pao^^R\ aSuitable solvents include, but are not limited to, median o, ethanol, glycmononone ether, dimethylformamide amide, < 3101 &lt; 31 &gt; Ernulgation of the salt. The ss can be achieved, for example, by having the sicross-ossulfate sub-wax dissolved in a water-miscible solvent (such as methylthiool, ethanol, acetone, glycolmenomethyl ether, dimethylformamide or dihydroxyethylsulfide) and preferably strong turbulence (water). chilled), which contains conventional emulsifiers. Suitable formulations are emulsifiers, such as ethylene oxide adducts. fatty acid esters of polyglycols. Suitable smulgátory are pHklatoě label in the conventional stairs siráčedla Tegi ^(R \. ^ At ^ T, is leaking ^ and ^p ^, and ^R \ and

. Ernulgacs subos-rátů u fe2mrotacr často umožňuje zvýšené prosazení subosrátu a tím zvýšení koncentrace subas-rátu. Je však . samozřejmě také možné u způsobu podle vynálezu pouUívat jiné metody ks zvýšení ·prosazení .subosrátu·, jak jsou odborníkům v oboru ferusntαcs jistě známá. '. Ernulgacs of sub-substrates in phenografts often allow for increased throughput of the sub-substrate and thereby increase the concentration of the sub-substrate. It is. it is of course also possible to use other methods in the process according to the invention with the increase in the sucrose throughput, as is well known to those skilled in the art of ferrittation. '

Oppimmání koncentrace subosrátu, doba přidávání subosrátu a doba feгueohace jsou závislé na struktuře použitého substrátu. Tyto veličiny se uuus, jak je to př mikrobiologických ttriridoích transformací všeobecně potřebné, zjišťovat v jrdootliééu případě po- . kušně, jak je to pro odborníka běžoé.The concentration of the sub-substrate, the time of addition of the sub-substrate, and the time of digestion depend on the structure of the substrate used. These variables are generally required in microbiological three-dimensional transformations in the case of microbiological transformations. as usual for an expert.

Dalšího zvýšení· prodUktů způsobu je možno dosáhnout obvyklým způsobsm provedenou selekcí osOo mUscí myc^kte^í Species.Further enhancement of the process products can be achieved by a conventional method by selection of osoid mice.

Tak ss například mohou Mycobatteriím spec. NRRL B-3805 - účelně po · ošetření mutagsny - rozlít oa desky· krevního egaru a obdrží se jednotlivé kolonie rozdílného uorfolrgickšhr vzhledu. Izol^j-li ss tyto jedno o, li vé kolonie a zkoUš-lVM oa jejich schopnost vytvářet deriváty .21-hydioxyl20-uethyl-prβgnαou obecného vzorce I, zjistí se, žs zejména mezi selektivními kmeny, které tvoří kulaté kolonie, jsou často kmeny, které tvoří deriváty 21-hydroxyl20-uethyl-pregntnl v 1,5 až 3oátr0ně vyšším · výtěžku .osž kmen o^elek-lAvovaný. *Thus, for example, Mycobattery spec. NRRL B-3805 - expediently after mutagenic treatment - spill o and plates of blood egar and individual colonies of different uorfolrgic appearance are obtained. If these mono-colonies and trials are isolated and their ability to form the .21 -hydroxyl-20-ethylpropyl derivatives of the formula I, it is found that, in particular, among the selective strains which form round colonies, they are often strains which form 21-hydroxyl-20-ethyl-pregnancy derivatives in a 1.5 to 3 times higher yield are also eluted. *

Deriváty 21lhydioxyl20luethyl-pregntou obecného vzorce I jsou csnoé meziprodukty k syntéze farmtkologicky účinných staroi-dů. Tak je například možné tyto sloučeniny oxidovat oa rddeoVddtící kyseliny piegnιan20-kαiboxylovš obecného vzorce lil · které se mohou způsobem popsaným H. Ruschigem .a . kol. (Chem. Ber. 88, 1955, 883 ff) převádět v rddeoVddtjcí deriváty pregnano3,20idic)ou vzorce IV.The 21-hydroxy-20-ethyl-pregnancy derivatives of formula (I) are many intermediates for the synthesis of pharmacologically active old age. Thus, for example, it is possible to oxidize these compounds with the reductive acid of the piegnanoic 20-carboxylic acids of the general formula III, which can be prepared according to the method described by H. Ruschig. col. (Chem. Ber. 88, 1955, 883ff) to convert the pregnano3,20 -dione derivatives of formula IV.

(Y = vodík nebo 17* -hydroxy)(Y = hydrogen or 17 * -hydroxy)

Sloučeniny takto získané se jak známo vyznačují gestagenní účinností a jsou mimo to cennými meziprodukty к syntéze početných farmakologicky účinných steroidů.The compounds thus obtained are known to have gestagenic activity and are furthermore valuable intermediates for the synthesis of numerous pharmacologically active steroids.

Dále uvedené příklady slouží к bližšímu vysvětlení vynálezu.The following examples serve to explain the invention in more detail.

PřikladlHe did

a) Dvoulitrová Erlenmayerova baňka s 500 ml sterilního živného prostředí obsahujícího % kvasnicového extraktu(a) Two-liter Erlenmayer flask with 500 ml sterile culture medium containing% yeast extract

0,45 % hydrogenfosforečnanu dvoj sodného0.45% disodium hydrogen phosphate

0,34 % dihydrogenfosforečnanu draselného0.34% potassium dihydrogen phosphate

0,2 % Tágetu ^R02 -0.2% of Tent ^R 02 -

- upraveného na pH 6,7 - se zaočkuje suspenzí suché kultury Mycobacterium spec. NRRL B-3805 a 3 dny se třepe při 30 °C 190 otáčkami pro minutu.- adjusted to pH 6.7 - are inoculated with a dry culture suspension of Mycobacterium spec. NRRL B-3805 and shaken for 3 days at 30 ° C at 190 rpm.

b) 22 g sitosterolu se s 4,4 g Teginu^ a 430 ml vody při 95 °C emulguje s Ultra- ( rTb) 22 g of sitosterol are emulsified with Ultra- (rT) with 4.4 g of Tegin® and 430 ml of water at 95 ° C.

-Turraxenr ^} (firmy Jahnke a Kunkel) 25 minut a potom se doplní vodou na 513 g· Emulse se sterilisuje 20 minut při 120 °C.-Turraxenr ^} (Jahnke and Kunkel) for 25 minutes and then made up to 513 g with water. The emulsion is sterilized for 20 minutes at 120 ° C.

c) Erlenmayerova baňka obsahu 500 ml se 65 ml sterilního živného prostředí s obsahem g kukuřičného extraktu(c) Erlenmeyer flask of 500 ml capacity with 65 ml of sterile culture medium containing g of corn extract

0,3 g hydrogenfosforečnanu dvojamonného0.3 g of dicalcium phosphate

0,25 g Tagatu^(R)020.25 g of Tagat ^(R) 02

- upraveno na pH 6,5 - se zaočkuje 5 ml násadní kultury Mycobacterium spec. Potom se přidá 28 ml suspenze vyrobené podle 1b) (to odpovídá 1,2 g sitosterolu) a po 24 hodinách 4 ml 4% vodného roztoku tetraboritanu sodného a za třepání se fermentuje dalších 120 hodin při 30 °C.- adjusted to pH 6.5 - 5 ml of seed culture Mycobacterium spec. Then 28 ml of the suspension produced according to 1b) (corresponding to 1.2 g of sitosterol) are added and after 24 hours 4 ml of a 4% aqueous sodium tetraborate solution are fermented with shaking for a further 120 hours at 30 ° C.

Po provedené fermentaci se kulturová břečka dvakrát extrahuje vždy 1.00 ml ethylenchloridu. Ke spojeným ethylench.loridovým extraktům se pak přidá 11 g aktivního uhlí a filtruje se přes skládaný filtr. Filtrát se pak při 40 °C zahustí v rotační' odparce a chromatografuje se na kysličníku hlinitém. Po chromatografii se získá 135 mg 21-hydroxy-20-methyl-4-pregnen-3-onu o teplotě tání 140 až 141 °C (z ethylacetátu).After fermentation, the culture broth was extracted twice with 1.00 ml of ethylene chloride each time. 11 g of activated carbon are then added to the combined ethylene chloride extracts and filtered through a pleated filter. The filtrate is then concentrated on a rotary evaporator at 40 ° C and chromatographed on alumina. After chromatography, 135 mg of 21-hydroxy-20-methyl-4-pregnen-3-one of melting point 140 DEG-141 DEG C. (from ethyl acetate) is obtained.

Prcv^ádíM se reakce za stejných podmínek, · ale bez přídavku roztoku tetraboritenu sodného, ' tak se obdrží 45 mg 21-hydro2Qr-20-míthhl-4-pregnen-3-onu. Příklad 2The reaction was carried out under the same conditions, but without the addition of sodium tetraboritene solution, so as to obtain 45 mg of 21-hydroxy-20-trichloro-4-pregnen-3-one. Example 2

a) Jak popsáno v příkladu 1 b) připraví se z 22 g 4-cholesten-3-onu 513 g emuuze.a) As described in Example 1 b) 513 g of emulsion was prepared from 22 g of 4-cholesten-3-one.

b) Za podmínek příkladu 1 c) se kultivuje 70 ml kultury Miobaaterium spec. NRRLb) Under the conditions of Example 1 c), 70 ml of a culture of Miobaaterium spec. NRRL

B-3805, přidá se 28 ml emulze 4-cholesten-3-onu a po 24 hodinách 4 ml 4% vodného roztoku tetraboritanu sodného a·za třepání se fermentuje dalších 120 hodin při 30 °C. Fermentační násada se zpracuje jak popsáno v příkladu 1 c) a obdrží se 95 mg 21-hidroxy-20-1^^^1-4-pregnen^-onu o teplotě tání 142 až 144 °C. ,B-3805, 28 ml of 4-cholesten-3-one emulsion is added and after 24 hours 4 ml of 4% aqueous sodium tetraborate solution are fermented while shaking for a further 120 hours at 30 ° C. The fermentation batch was worked up as described in Example 1 (c) to give 95 mg of 21-hydroxy-20-l-1,4-pregnen-4-one, m.p. 142-144 ° C. ,

Pr^vád-li se-reakce za stejných podmínek, ale bez přídavku roztoku tetraboritarnu sodného, obdrží se 40 mg 21-h1dгobχ-20-míthh1-4-prtgnen-3-bnu.If the reaction was carried out under the same conditions but without the addition of sodium tetraborate solution, 40 mg of 21-halo-20-haveh-1-4-propylene-3-bnu was obtained.

Příklad 3 ml sitosterolové emulze připravené podle příkladu 1 b) se fermentuje, jak popsáno v příkladu 1 c), 70 · ml kultury Mioobcteriím spec. NRRL B-3805, přičemž se vodného roztoku tetraboritanu sodného použije přídavek 6 ml 4% suspenze meeabbbitanu vápenatého ve vodě.Example 3 ml of a sitosterol emulsion prepared according to example 1 b) is fermented as described in example 1 c) with 70 ml of a culture of Mioobacteria spec. NRRL B-3805, using an aqueous solution of sodium tetraborate using 6 ml of a 4% suspension of calcium meeabbitate in water.

Po·zpracování fermentační násady, jak popsáno v příkladu 1 o), se získá 120 mg 21-hydrox1-20-metlhyl-4-pregntn-3-onu o teplotě tání 141 ai 143 °C.· · ,After treatment of the fermentation broth as described in Example 1 (o), 120 mg of 21-hydroxy-20-methyl-4-pregnin-3-one of melting point 141 DEG-143 DEG C. is obtained.

Příklad 4' , . ' ml sitosterolové emuuze, jak popsáno v příkladu 1 · c)·, sefermentuje 70 ml kultury . Mioobateriím spec. NRRL B-3805, , přičemž se místo vodného roztoku tetraboritanu sodného použije přídavek 5 ml 4% roztoku triferyl. bořit anu.Example 4 '. ml of sitosterol emulsions as described in Example 1 c) were fermented with 70 ml of culture. Mioobaterií spec. NRRL B-3805, using 5 ml of 4% triferyl solution instead of aqueous sodium tetraborate. demolish anu.

. Po zpracování feríentační násady, jak popsáno v příkladu .1 c), · se·získá 125 mg 21-hydrbxy-20-míe]!hfl“4-pregntn-3-bnu o teplotě tání 142 · ai 143 °C.. After treatment of the fermentation batch as described in Example 1 (c), 125 mg of 21-hydroxy-20-methyl-4-pregnin-3-one having a melting point of 142 DEG-143 DEG C. is obtained.

Příklad 5. 'Example 5. '

o)Za podmínek příkladu 1 a) se kultivuje Myooaateriím spec. NRRL Β-36Θ3.o) Under the conditions of Example 1 (a), cultivate Myooaateria spec. NRRL Β-36-3.

b) K 65 ml živného prostředí popsaného v příkladu 1 o) se přidá 5 íL násadní kiltury Му^аНе^^ spec. NRRL B-3683. Potom se dá 28 ml kuLtury do emulze titbtttrblu popsané v příkladu 1 b) o po 24 hodinách se přidají 4 ml 4% roztoku tttrabbritcnu sodného o fermentuje se dalších 120 hodin. ^eгmtltι^<^l^:- násada se zpracuje, jak popsáno v příkladu 1 č), a obdrží se 90 mg 2-1-h1íг<»QУ20-míthhУ-114-prtgnaditn-3-onu o teplotě tání 180 až 182 °C (z tth1lccetdtu acetonu).b) To 65 ml of the culture medium described in Example 1 o) was added 5 µL of the hatching cap of Muco spec. NRRL B-3683. 28 ml of culture are then added to the titanium dioxide emulsion described in Example 1 (b). After 24 hours, 4 ml of a 4% sodium tartrate solution are added and fermented for a further 120 hours. The batch was worked up as described in Example 1 (c) to give 90 mg of 2-hexyl-2-hexahydro-114-propyl-3-one having a melting point of 180-182. ° C (from acetone acetyl).

Příklad 6 ’ · ml násadní kultury Myooaateriím spec. NRRL B-3805 -vyrobené podle příkladu 1 a) - se bdítřt(lujt při 4 000 otáčkách za minutu.Example 6 ´ · ml seed culture Myooaateri spec. NRRL B-3805 - produced according to example 1 a) - was rubbed (poured at 4000 rpm).

^l· ' v ^l · 'v

Takto získaná bakteriální hmctai se pak dvakrát promuje solným roztckem puffroviným na pH 6, který obsahuje 0,5 % chloridu sodného, 0,012 % ^гсш hořečnatého (hep^<tch1drtd^чt) a 1,36 % dih1drbgenibsfortčnanu draselného, suspenduje ·se ve 40 ml tohoto solného roztoku a přidá se · 10 ml · 0,5% 1-mítty1--зnitrb-1-nitobSbgucnidinu.The bacterial hmctai then twice with brine graduating puffroviným the clear solution at pH 6 containing 0.5% sodium chloride, 0.012% magnesium гсш ^ (hep ^{<tch1drtd ч} t) and 1.36% dih1drbgenibsfortčnanu potassium · suspended in 40 ml of this saline solution and add · 10 ml · 0.5% of 1-methyl-1-nitro-1-nitoborbobutidine.

Suspenze bakterií se hodinu inkubuje při 30 °C, bakterie se odstředí, dvakrát se promývá výše jmenovaným solným roztokem a rozlije sena desky krevního agaru (výrobní firma Oxoid Ltd., Londýn). Ze vzniklých jednotlivých kolonií se vždy volí ty, které tvoří kulaté kolonie a z těchto se vždy připraví násadní kultury, jak popsáno v příkladu 1 a). Násadní kultury vždy slouží к provádění fermentace popsané v příkladu 1 c), s následujícím výsledpregnen-3-onu s přídavkem tetraboritanu sodného kem:The bacterial suspension is incubated at 30 ° C for one hour, the bacteria are centrifuged, washed twice with the above-mentioned saline solution and spilled on blood agar plates (manufactured by Oxoid Ltd., London). From the individual colonies formed, those which form round colonies are always selected and seed cultures are prepared from these as described in Example 1 (a). Seed cultures always serve to carry out the fermentation described in Example 1 (c), with the following resultant-3-one with sodium tetraborate addition:

Počet testovaných selektivních kmenůNumber of selective strains tested

Výtěžek 2'1 -hydroxy-20-methyl-4bez přídavku tetraboritanu sodnéhoYield of 2'-hydroxy-20-methyl-4 without addition of sodium tetraborate

19 ' 19 ' 0 - 0 - 200 mg 200 mg — - 8 8 201 - 201 - 400 mg 400 mg — - 94 94 401 - 401 - 600 mg 600 mg — - 35 35 601 - 800 mg 601-800 mg — - 7 7 801 - 1 801 - 1 1 000 mg 1000 mg 1 550 - 2 1,550 - 2 1 00 mg 100 mg 0 0 1 001 - 1 1,001 - 1 1 020 mg 1,020 mg — - 6 6 1 021. - 1 1 021 - 1 1 040 mg 1,040 mg 1 900 - 3 1,900 - 3 000 mg 000 mg 1 1 1 041;.- 1 1 041; .- 1 1 060 mg 1,060 mg 2 900 2 900 mg mg (150 mg) (150 mg) . 0 . 0 1 061 - 1 061 - 1 080 mg 1,080 mg ... _ ... _ 1 1 1 081 - 2 000 mg 1,081-2,000 mg 3 450 3 450 mg mg (195 mg) (195 mg)

Claims (6)

PŘEDMĚT VYNÁLEZUSUBJECT OF THE INVENTION 1. Způsob výroby derivátů 21-hydroxy-20-methyl-přegnanu obecného vzorce I ve kterém značí vazba ..... jednoduchou vazbu nebo dvojnou vazbu, fermentací zoosterolů nebo kulturou Mycobacterium spec. NRRL B-3683 nebo NRRL В 3805 nebo jejími variantami nebo mutantami, vyznačený tím, že se fermentace provádí při hodnotě pH 6,0 až 8,0 v přítomnosti boritanových iontů nebo organických sloučenin boru.A process for the preparation of 21-hydroxy-20-methyl-pentane derivatives of the general formula I in which the bond is a single bond or a double bond, by fermentation of zoosterols or by a culture of Mycobacterium spec. NRRL B-3683 or NRRL В 3805 or variants or mutants thereof, characterized in that the fermentation is carried out at a pH of 6.0 to 8.0 in the presence of borate ions or organic boron compounds. 205517205517 2. Způsob podle bpdu 1, obecného.vzorce II ' vyznačený tím, že se fermentuje Zoosterol nebo fytosterol (II) ve.kterém značí vazby .... jednoduché vazby nebo dvojné vazby, X oxoskupinu - nebo atom vodíku, atom vodíku, methylovou, skupinu nebo ethylovou skupinu.2. A process according to claim 1, characterized in that Zoosterol or phytosterol (II) is fermented in order to denote single bond or double bond, X oxo - or hydrogen, hydrogen, methyl , a group or an ethyl group. 3. Způsob podle bodu 1 a 2, vyznačený tím, že se jako látka po Bytující boritiniové ionty použije kysseina orthobooitá, metaboritá, kyselina polybooitá nebo jejich soli s alkalickými kovy nebo 8 kovy alkalických ze^n. '3. A process according to claim 1 or 2, characterized in that orthoboic acid, metaboric acid, polybooic acid or their alkali metal or 8 alkali metal salts are used as the boronium ion-resisting substance. ' 4. Způsob podle bodů - 1 až 3, vyznačený tím, .že se jako organická sloučenina boru použije4. A process according to any one of claims 1 to 3, wherein the organic boron compound is used 5. Způsob . podle bodu 3, vyznačený tím, že se pro. litr kuLtury Mcorbateri^m spec, použije 1 až 5 g látky - pos^yt^ící bořit trnové ionty.5. Method. according to claim 3, characterized in that:. 1 liter of McBorbateri spec, used 1 to 5 g of thionic scavenger. 6. Způsob podle bodu 5, vyznačený . tím, že se látka p^t^J^k^yt^ující bořit trnové ionty přidá 10 až 30 hodin po začátku fermentace.6. Method according to claim 5, characterized by. by the addition of a substance which destroys thorn ions 10 to 30 hours after the start of the fermentation.