CN204514934U - 一种快速定量检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白的试纸 - Google Patents
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Abstract
本实用新型公开了一种快速定量检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白的试纸，所述试纸包括支撑垫片(1)，位于所述支撑垫片上的硝酸纤维素膜(2)，所述硝酸纤维素膜的一端连接吸水垫(3)，另一端连接偶合物垫片(4)，所述偶合物垫片连接样本垫片(5)，所述样本垫片另一端部的下方设有第一固定部件(6)，上方设有第二固定部件(7)，其特征在于，所述硝酸纤维素膜(2)中间部位检测线(8)包被有可溶性生长刺激表达基因2蛋白抗体，检测线两边分别设有控制线(9)，所述偶合物垫片(4)上涂布有金标记的可溶性生长刺激表达基因2蛋白单克隆抗体或多克隆抗体以及控制线偶合物。
Description
技术领域
本实用新型属于临床医学诊断领域，具体涉及一种用于定量检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白的试纸。
背景技术
可溶性生长刺激表达基因2蛋白(ST2)基因是1989年由Tominaga等首先在BALB/c-3T3细胞系中得到的，是I L-1(白细胞介素1)受体家族成员之一，该基因表达两种蛋白产物：一种带有跨膜结构，称为跨模型ST2(ST2L)，一种可以分泌到细胞外，称为分泌型ST2(sST2)。研究发现ST2可由心脏成纤维细胞和心肌细胞表达，是生物机械应力诱导产生的一种心肌蛋白。ST2基因表达于肥大细胞激活的辅助性T细胞2(Th2)巨噬细胞和心肌细胞。人的ST2基因约40kb，位于人类染色体2q12，可编码一种可溶性蛋白(sST2)和一种跨膜形式蛋白(ST2L)，两者的转录分别受到不同的启动子调控。
研究表明sST2是IL-33的诱骗受体，它可以与IL-33结合，从而阻断IL-33与ST2L结合，继而削弱IL-33/ST2L信号通路的心血管保护作用在心肌受到过度牵拉造成损伤的过程中，大量sST2生成使心肌缺乏足够的IL-33的保护，从而加速心肌重构和心室功能障碍，最终导致死亡风险增高。IL-33是IL-1家族成员，可以与靶细胞上的膜受体结合后介导下游信号通路，或者被运输到靶细胞的细胞核作为DNA结合因子行使功能。研究表明，机械应力可刺激心脏成纤维细胞产生IL-33，与其受体复合物(由ST2L和IL-1RAcP组成)结合后，将活化信号传递至细胞内，经过下游的IL-1相关蛋白激酶髓样分化因子88和肿瘤坏死因子受体相关因子6等一系列信号分子，激活核转录因子κB(nuclear factorκB，NF-κB)和促***原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase，MAPK)，从而调节基因转录，导致Th2细胞效应分子IL-5 IL-4和IL-13等的释放。当心脏成纤维细胞和心肌细胞受到过大的压力负荷时，这些效应分子可以使心脏作出适应性反应，防止过度牵拉导致的心肌肥大和心肌纤维化发生。与此同时，心肌sST2大量生成，sST2与IL-33结合后竞争性抑制其与ST2L结合，阻断经ST2L 的信号传导，最终抑制NF-B和MAPK激活，从而大大降低IL-33/ST2L信号通路的内源性心肌保护作用。ST2能够独立的诊断心力衰竭，结合NT-proBNP时，其对心衰的诊断的敏感性和特异性均高于ST2和NT-proBNP单独诊断的结果。基于ST2水平能够很好的预测病患在一年内的死亡率，所以其在指导病患是否进行心脏移植时提供数据支持，有利于提前干预提高病患的治愈率和成活率。
目前，检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白的方法目前主要是酶联免疫技术(ELISA)，ELISA技术存在以下缺点：检测设备要求高，成本高；干扰因素较多，重复性不好；检测时间长。因此酶联免疫技术检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白不适合临床快速诊断。鉴于目前尚无快速的定量检测方法，本实用新型的目的是提供一种可用于快速定量检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白的试纸以及一种可用于快速定量检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白的试纸盒，所述试纸和试纸盒具有方便快捷、操作简单、结果准确等优点。
实用新型内容
本实用新型的一个目的是提供一种快速定量检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白的试纸，本实用新型所述快速定量检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白的试纸具有方便快捷、操作简单、结果准确等优点，适于临床快速诊断。
本实用新型的技术方案是：
一种用于定量检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白的试纸，所述试纸包括支撑垫片1，位于所述支撑垫片上的硝酸纤维素膜2，所述硝酸纤维素膜的一端上方层叠连接吸水垫3，另一端上方层叠连接偶合物垫片4，所述偶合物垫片上方层叠连接样本垫片5，所述样本垫片另一端部的下方设有第一固定部件6，上方设有第二固定部件7，其特征在于，所述硝酸纤维素膜2中间部位设有检测线8并包被有可溶性生长刺激表达基因2蛋白抗体，检测线两边分别设有控制线9，所述偶合物垫片4上涂布有金标记的可溶性生长刺激表达基因2蛋白单克隆抗体或多克隆抗体以及控制线偶合物。
进一步地，所述控制线9包被有抗DNP抗体，所述控制线偶合物为DNP-BSA标记的胶体金。
进一步地，所述第一固定部件6为双面胶，第二固定部件7为单面胶。
进一步地，所述试纸外还包括一外壳10，所述外壳包裹在所述试纸外，露出样本垫片5、硝酸纤维素膜2上的检测线8和两条控制线9、以及吸水垫3。
所述外壳优选塑料外壳。
进一步地，所述两条控制线9与检测线8为平行设置。
本实用新型所述的试纸盒具有方便携带和贮存的优点。
本实用新型所述的快速定量检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白的试纸或试纸盒的工作原理是：采用双向侧流免疫反应原理，通过双抗体夹心法制备而成。检验时样本中的可溶性生长刺激表达基因2蛋白抗原首先与偶合垫上的可溶性生长刺激表达基因2蛋白抗体偶合物发生免疫反应，形成免疫复合物。其后免疫复合物随着样本在硝基纤维素膜上层析流动，当免疫复合物层析至硝基纤维素膜上的检测区(ST2检测线)时，与预先包被在硝基纤维素膜上的抗可溶性生长刺激表达基因2蛋白抗体发生反应从而被固定在硝基纤维素膜的检测线上。血液中的可溶性生长刺激表达基因2蛋白越多，检测线上的复合物越多，条带上的光密度值就越高。同时，在检测过程中，控制线偶合物(即DNP-BSA标记的胶体金)，也会随样本在硝基纤维素膜上层析，当层析至硝基纤维素膜的控制线时，DNP-BSA胶体金会与预先包被在硝基纤维素膜上的抗DNP抗体发生反应从而被固定在对照区(控制线)上。由于胶体金为红色，因而固定在硝基纤维素膜控制线上的抗DNP中的DNP-BSA胶体金免疫复合物将显示红色。当样本中不含可溶性生长刺激表达基因2蛋白时，则只显示两条控制线。当样本含可溶性生长刺激表达基因2蛋白时，检测线就会清晰的显示出来。
当反应结束后，利用多功能免疫检测仪(瑞莱生物工程(深圳)有限公司)将控制线和检测线的光密度进行分析，并将所分析得到的结果进行运算，从而得到相对光密度值(RI)。然后检测仪根据已预先设置在检测仪内的标准曲线对可溶性生长刺激表达基因2蛋白的浓度进行计算并显示结果，以ng/mL为单位表示。
附图说明
图1是本实用新型所述快速定量检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白的试纸的一种优选实施方式的结构示意图。
其中，1:支撑垫片，2：硝酸纤维素膜，3:吸水垫，4:偶合物垫片，5:样本垫片，6:第一固定部件，7:第二固定部件，8:检测线，9:控制线。
图2是本实用新型所述快速定量检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白的试纸盒的一种优选实施方式的示图。
其中，3:吸水垫，5:样本垫片，8:检测线，9:控制线，10：外壳。
具体实施方式
以下结合附图对本实用新型所述快速定量检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白的试纸或试纸盒进行详细说明，不能理解为是对本实用新型的限制。以下实施例中所使用的材料和试剂除特别说明外，均为普通市售。
【实施例1】制备快速定量检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白的试纸
如图1所示的试纸结构，包括支撑垫片1，位于所述支撑垫片上的硝酸纤维素膜2，所述硝酸纤维素膜的一端上方层叠连接吸水垫3，另一端上方层叠连接偶合物垫片4，所述偶合物垫片远离硝酸纤维素膜2的一端上方层叠连接样本垫片5，所述样本垫片另一端部的下方粘接第一固定部件6，优选双面胶，上方粘接第二固定部件7，优选单面胶，其特征在于，所述硝酸纤维素膜2中间部位检测线8包被有可溶性生长刺激表达基因2蛋白抗体，检测线两边分别设有控制线9，所述偶合物垫片4上涂布有金标记的可溶性生长刺激表达基因2蛋白单克隆抗体或多克隆抗体以及控制线偶合物。
所述控制线9包被有抗DNP抗体，所述控制线偶合物为DNP-BSA标记的胶体金。
其中，硝酸纤维素膜2在试纸中用于固定包被抗体，同时也是免疫反应的发生处；检测线8是将可溶性生长刺激表达基因2蛋白抗体使用1*PBS、甲醇等缓冲液稀释到1mg/ml的浓度，取1ul/cm划线于所述硝酸纤维素膜2上，干燥即得；控制线9是将抗DNP抗体使用1*PBS、甲醇等缓冲液稀释到0.5mg/ml的浓度，取1ul/cm划线于所述硝酸纤维素膜2上，干燥即得。
其中，所述偶合物垫片4的原材料为玻璃纤维滤膜，将用于制备偶合物垫片的玻璃纤维滤膜放入预封闭缓冲液(包含0.1-1％的酪蛋白，0.5-5％的牛血清白蛋白、0.005-0.5％的硼酸、0.01-0.2％的PEG)中浸泡5分钟后取出，干燥后，用Biodot包膜仪器将金标记的可溶性生长刺激表达基因2蛋白单克隆抗体或多克隆抗体以及控制线偶合物涂布在偶合物垫片4上，涂布量是1ul/mm，干燥，即得。优选地，所述偶合物垫片4的预封闭缓冲液包含0.8％的酪蛋白，4％的牛血清白蛋白，0.007％的硼酸，0.1％的PEG。
其中，所述样本垫片5可对液态样品起到初步过滤作用。将样本垫片用141封闭液(包含：0.1-1％的Tris，0.1-1％的Tween20，0.1-1％的酪蛋白，0.05-0.5％的鼠抗人红细胞)浸泡5分钟后，过夜37℃干燥，即得。优选地，所述141封闭液包含：0.3％的Tris，0.8％的酪蛋白，0.3％的鼠抗人红细胞。
将上述各组成部件按图1所示结构粘贴在支撑垫片1上，获得快速定量检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白的试纸。
【实施例2】用本实用新型所述试纸快速定量检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白
取本实用新型优选的一种快速定量检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白的试纸，如图1所示，所述试纸包括支撑垫片1，位于所述支撑垫片上的硝酸纤维素膜2，所述硝酸纤维素膜的一端上方层叠连接吸水垫3，另一端上方层叠连接偶合物垫片4，所述偶合物垫片远离硝酸纤维素膜2的一端上方层叠连接样本垫片5，所述样本垫片另一端部的下方粘接第一固定部件6，优选双面胶，上方粘接第二固定部件7，优选单面胶，其特征在于，所述硝酸纤维素膜2中间部位检测线8包被有可溶性生长刺激表达基因2蛋白抗体，检测线两边分别设有控制线9，所述偶合物垫片4上涂布有金标记的可溶性生长刺激表达基因2蛋白单克隆抗体或多克隆抗体以及控制线偶合物。优选地，所述控制线9包被有抗DNP抗体，所述控制线偶合物为DNP-BSA标记的胶体金。按以下步骤进行检测：1)抽取的病人血清、血浆或全血等待检样本，如低温保存样本需恢复至室温。2)将待测样品加入样本垫片5上，反应。3)判读，将所述试纸置于多功能免疫检测仪,SSJ-2或MINI(瑞莱生物工程(深圳)有限公司)中判定结果。
【实施例3】用本实用新型所述试纸盒快速定量检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白
取本实用新型优选的一种快速定量检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白的试纸盒，如图1和图2所示，所述试纸包括支撑垫片1，位于所述支撑垫片上的硝酸纤维素膜2，所述硝酸纤维素膜的一端连接吸水垫3，另一端连接偶合物垫片4，所述偶合物垫片连接样本垫片5，所述样本垫片另一端部的下方粘接第一固定部件6，优选双面胶，上方粘接第二固定部件7，优选单面胶，其特征在于，所述硝酸纤维素膜2中间部位检测线8包被有可溶性生长刺激表达基因2蛋白抗体，检测线两边分别设有控制线9，所述偶合物垫片4上涂布有金标记的可溶性生长刺激表达基因2蛋白单克隆抗体或多克隆抗体以及控制线偶合物。优选地，所述控制线9包被有抗DNP抗体，所述控制线偶合物为DNP-BSA标记的胶体金。所述试纸还包括一外壳10，所述外壳包裹在所述试纸，露出样本垫片5、硝酸 纤维素膜2上的检测线8和两条控制线9、以及吸水垫3。按以下步骤进行检测：1)抽取的病人血清、血浆或全血等待检样本，如低温保存样本需恢复至室温。2)将待测样品加入样本垫片5上，反应。3)判读，将所述试纸置于多功能免疫检测仪,SSJ-2或MINI(瑞莱生物工程(深圳)有限公司)中判定结果。
Claims (5)
1.一种用于定量检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白的试纸，所述试纸包括支撑垫片(1)，位于所述支撑垫片上的硝酸纤维素膜(2)，所述硝酸纤维素膜的一端上方层叠连接吸水垫(3)，另一端上方层叠连接偶合物垫片(4)，所述偶合物垫片上方层叠连接样本垫片(5)，所述样本垫片另一端部的下方设有第一固定部件(6)，上方设有第二固定部件(7)，其特征在于，所述硝酸纤维素膜(2)中间部位设有检测线(8)并包被有可溶性生长刺激表达基因2蛋白抗体，检测线两边分别设有控制线(9)，所述偶合物垫片(4)上涂布有金标记的可溶性生长刺激表达基因2蛋白单克隆抗体或多克隆抗体以及控制线偶合物。
2.如权利要求1所述的试纸，其特征在于，所述控制线(9)包被有抗DNP抗体，所述控制线偶合物为DNP-BSA标记的胶体金。
3.如权利要求1所述的试纸，其特征在于，所述第一固定部件(6)为双面胶，第二固定部件(7)为单面胶。
4.如权利要求1-3中任一项所述的试纸，其特征在于，所述试纸外还包括一外壳(10)，所述外壳包裹在所述试纸外，露出样本垫片(5)、硝酸纤维素膜(2)上的检测线(8)和两条控制线(9)、以及吸水垫(3)。
5.如权利要求4所述的试纸，其特征在于，所述两条控制线(9)与检测线(8)为平行设置。
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| CN201520186562.XU CN204514934U (zh) | 2015-03-30 | 2015-03-30 | 一种快速定量检测可溶性生长刺激表达基因2蛋白的试纸 |
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Cited By (2)
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|---|---|---|---|---|
| CN105259353A (zh) * | 2015-10-15 | 2016-01-20 | 北京市心肺血管疾病研究所 | 一种主动脉瘤和/或主动脉夹层患者血液中可溶性st2的检测试剂盒及检测方法 |
| CN105445450A (zh) * | 2015-12-30 | 2016-03-30 | 天津诺星生物医药科技有限公司 | 一种心衰疾病检测*** |
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| CN105259353B (zh) * | 2015-10-15 | 2017-03-22 | 北京市心肺血管疾病研究所 | 一种主动脉瘤和/或主动脉夹层患者血液中可溶性st2的检测试剂盒及检测方法 |
| CN105445450A (zh) * | 2015-12-30 | 2016-03-30 | 天津诺星生物医药科技有限公司 | 一种心衰疾病检测*** |
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