具体实施方式
下面发结合实施例对本发明进一步详细说明,但本发明不限于这些实施例。
实施例1
以生产本发明片剂产品1000片为例所用的药用原料和辅料及其重量配比为:
云芝菌丝体 14222g
淀粉 加至400g。
取云芝菌丝体14222g,加10倍量水煎煮三次,每次2小时,合并煎液,在60℃减压浓缩至相对密度为1.04~1.10,放冷,加4倍量乙醇使含醇量达75%,在0±5℃静置8~12小时,抽滤或离心得沉淀物,70℃真空干燥,粉碎,过3号筛,加入淀粉至400g,混合均匀,加95%乙醇润湿16目筛制粒,60℃以下烘干,14目筛整粒,压片,包装,即得。每片重0.4g,每片含云芝菌丝体14.222g。
实施例2
以生产本发明胶囊剂产品1000粒为例所用的药用原料和辅料及其重量配比为:
云芝菌丝体 10667g
淀粉 加至300g。
其制备方法按本发明胶囊剂的制备方法进行。每粒重0.3g,每粒含云芝菌丝体10.667g。
实施例3
以生产本发明颗粒剂产品1000克为例所用的药用原料和辅料及其重量配比为:
云芝菌丝体 8533g
蔗糖 400g
糊精 加至1000g。
其制备方法按本发明颗粒剂的制备工艺进行。每袋重5g,每克含云芝菌丝体8.533g。
实施例4
以生产本发明口服液产品1000mL为例所用的药用原料和辅料及其重量配比为:
云芝菌丝体 4267g
蔗糖 400g
蒸馏水 加至1000mL。
其制备方法按本发明口服液制备方法进行。每瓶10mL,每毫升含云芝菌丝体4.267g。
为了验证本发明药物对疲劳治疗的效果,发明人采用本发明药物的原料药云芝菌丝体的提取物云芝多糖进行了药效试验,各种试验情况如下:
试验目的:采用整体动物试验,观察本发明药物的抗疲劳作用,反映本发明药物的功效与主治,为临床试验提供理论依据。
受试药物:云芝菌丝体的提取物云芝多糖,由上海康舟真菌多糖有限公司生产。
实验试剂:蛋白定量(双缩脲)试剂盒,南京建成生物工程研究所;超氧化物歧化酶(SOD)测试盒,南京建成生物工程研究所;丙二醛(MDA)测试盒,南京建成生物工程研究所;总抗氧化能力(T-AOC)测试盒,南京建成生物工程研究所;谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)测试盒,南京建成生物工程研究所;过氧化氢酶(CAT)测试盒,南京建成生物工程研究所;一氧化氮(NO)测试盒,南京建成生物工程研究所;一氧化氮合成酶(NOS)测试盒,南京建成生物工程研究所;乳酸脱氢酶(LDH)测试盒,南京建成生物工程研究所;肌糖原及肝糖原试剂盒,南京建成生物工程研究所;考马斯亮兰蛋白试剂盒,南京建成生物工程研究所;肌酐测定试剂盒,南京建成生物工程研究所;天门冬氨酸氨基转移酶试剂,南京建成生物工程研究所;丙氨酸氨基转移酶试剂盒,南京建成生物工程研究所;肌酸激酶试剂盒,南京建成生物工程研究所;血糖测定试剂盒,南京建成生物工程研究所;氯化高铁血红蛋白标准液,南京建成生物工程研究所;血红蛋白测定试剂盒,南京建成生物工程研究所;肝素抗凝,南京建成生物工程研究所;羧甲基纤维素钠0.3%,自制;无水乙醇(AR),西安市化学试剂厂;***(AR),中国医药集团上海化学试剂公司;冰醋酸(AR),天津市化学试剂三厂。
实验器材:电动跑台,中国杭州段氏制作;TGL-16G台式高带冷冻离心机,上海安亭科学仪器厂;721B型分光光度计,上海第三分析仪器厂;751B型紫外分光光度计,上海第三分析仪器厂;DK-98-1A恒温浴锅,天津泰斯特有限公司;BCD-203A容声冰箱,中国科龙电器股份有限公司;TN-100托盘扭力天平,武汉自动化仪表厂;onso-TCS-2000A电子称,武汉自动化仪表厂;R-200D型电子称,德国;MP-200-1型双圈版电子称,上海第二天平仪器厂。
实验动物:雄性健康大鼠32只,体重170-220g,由西安交通大学医学院实验动物中心提供。国家标准啮齿类动物干燥饲料喂养,自由饮食,动物室温度23℃±5℃,相对湿度40%-70%,分笼饲养备用。
1、建立实验动物模型
实验动物适应性饲养7d后,以15m/min,5min/d运动量对动物进行为期3d的筛选,淘汰个别不适应跑台训练者。将剩余大鼠随机分为4组:安静对照组8只、安静加药组8只、运动力竭对照组8只、运动力竭加药组8只。安静对照组和安静加药组在安静状态下饲养,对运动力竭对照组和运动力竭加药组进行运动,每周(W)六次,运动方案见表1。在最后一次训练时进行力竭运动,力竭判定标准为,动物跟不上预定速度,大鼠臀部压在笼具后壁,后肢随转动皮带后拖达30秒,毛刷刺激驱赶无效。行为特征为呼吸深急、幅度大,神情疲倦,俯卧位,垂头,刺激后无反应。
每天训练前以15m/min的速度做适应运动5min后正式训练,训练模型基于Bedford模型结合实际略加调整,训练期8周。具体实验方案见表1。
表1 实验动物运动方案
周 |
坡度 |
速度(m/min) |
运动时间(min/d) |
运动距离(m/w) |
12345678 |
00000000 |
1520252530303535 |
2020203030404040 |
15002000250037504500600070007000 |
2、给药方法
安静对照组:用0.3%的羧甲基纤维素钠生理盐水溶液2ml灌胃给药,一天一次,共42天。
运动对照组:用0.3%的羧甲基纤维素钠理盐水溶液2ml灌胃给药,一天一次,共42天。
运动给药组:将云芝多糖溶于2ml浓度为0.3%的羧甲基纤维素钠生理盐水溶液中,加药组剂量为140mg/kg/d,一天一次,共42天。
3、制备实验标本
第八周最后1天,安静对照组和安静加药组在安静状态下称重,运动对照组和运动加药组在力竭运动后记录力竭时间、称重外,各组用***麻醉,断头取血,迅速取脑、肾、肝、心、以及股四头肌置于预冷的生理盐水中洗净血污后,用滤纸吸干后置于-20℃冰箱保存备用。
制备血清:取血后置37℃水浴中30分钟后,然后以2500~3000转/分离心10分钟,提取上清即血清并于4℃冰箱保存备用。
制备组织匀浆:称取0.2~1g组织按W(g)组织块重量/V(ml)匀浆介质为1/9的比例加取预冷的匀浆介质(pH7.4,0.01mol/L Tris-HCL,0.0001mol/L乙二胺四乙酸二钠[EDTA-2Na],0.01mol/L蔗糖,0.8%的NaCL溶液)于烧杯中,用眼科小剪尽快剪碎组织块(以上全部操作在冰水浴中进行)。手工制备匀浆后,3000转/分低温离心10~15分钟,分离提取上清液4℃冰箱冷藏或-20℃冰箱冰冻备用,弃去下面沉淀。
统计学处理:由SPSS统计软件进行数据处理,常规方法计算均值±标准差
进行t检验,确定差异的显著性。
4、实验结果
(1)云芝菌丝体对实验大鼠体重及某些脏器指数的影响
实验方法:实验动物处死前称体重,处死后立即取心、肝、脾、胸腺组织,取出后用生理盐水洗净,并用滤纸吸干后称重。
测试结果见表2。
表2 云芝菌丝体对实验大鼠体重及某些脏器指数的影响
组别 |
安静对照组(n=8) |
安静加药组(n=8) |
运动对照组(n=8) |
运动加药组(n=8) |
体重(g)心系数(g/mg)肝指数(g/mg)脾指数(g/mg)胸腺指数(g/mg) |
327.17±10.543.02±0.1127.73±2.091.82±0.211.22±0.16 |
321.75±7.723.17±0.2130.02±2.51★1.97±0.181.31±0.17 |
316.80±11.473.86±0.0528.18±1.491.75±0.200.97±0.16 |
312.45±4.803.94±0.1033.22±2.94★△1.91±0.241.14±0.18 |
注:★表示与安静对照组相比 ★P<0.05 ★★P<0.05
△表示与运动对照组相比 △P<0.05 △△P<0.05
表2结果显示,安静加药组大鼠和运动加药组大鼠体重都稍低于其对照组,但无显著性差异,安静加药组的心系数、肝指数、脾指数和胸腺指数都高于安静对照组,但只有肝指数差异显著(P<0.05);运动对照组的各脏器指数与安静对照组相比无显著差异;运动加药组的各脏器指数均比运动对照组高,但只有肝指数差异显著(P<0.05)。
(2)云芝菌丝体对跑台运动大鼠力竭时间的影响
实验方法:在给大鼠服药的第八周最后1天,将运动对照组和运动加药组大鼠分别置于动物跑台上,进行一次性力竭试验并进行力竭时间指标的测试,力竭判定标准为,动物跟不上预定速度,大鼠臀部压在笼具后壁,后肢随转动皮带后拖达30秒,毛刷刺激驱赶无效。行为特征为呼吸深急、幅度大,神情疲倦,俯卧位,垂头,刺激后无反应。
测试结果见表3。
表3 云芝菌丝体对跑台训练大鼠力竭时间的影响
组别 |
力竭运动对照组(n=8) |
力竭运动加药组(n=8) |
力竭时间(min)时间延长百分率 |
93.20±10.40 |
116.10±17.30▲24.57% |
注:▲表示与运动训练组相比有显著差异(P<0.05)
表3结果显示,云芝菌丝体可以显著延长大鼠跑台运动至力竭的时间,与运动对照组相比,运动加药组力竭时间延长了24.57%。
(3)云芝菌丝体对大强度耐力运动大鼠某些血清指标的影响
实验方法:分别取全血0.05ml和血清1ml进行丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、BUN(尿素氮)、Hb(血红蛋白)、Cr(肌酐、Bla(血乳酸)指标的测试,测试方法分别按照丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶、尿素氮、血红蛋白、肌酐、血乳酸测试试剂盒的操作方法进行。测试结果见表4。
表4 云芝菌丝体对跑台训练大鼠某些血清酶活性和血清尿素氮、
血红蛋白、肌酐、血乳酸含量的影响
组别 |
安静对照组(n=8) |
安静加药组(n=8) |
运动对照组(n=8) |
运动加药组(n=8) |
ALT(U/L)AST(U/L)LDH(U/L)CK(U/L)BUN(mmol/l)Hb(g/L)Cr(μmol/L)BLa(mmol/l) |
52.00±10.30168.50±17.821257.40±167.961572.64±22.375.70±1.75144.76±16.2493.41 ±8.064.23±0.94 |
48.37±7.61164.11±20.941208.13±208.411543.12±24.685.24±0.77161.02±11.98★131.54±9.31★★3.76±0.93 |
75.50±9.61★★272.44±21.38★★1964.38±273.21★2166.78±41.80★10.83±2.31★★122.53±10.06★84.81±12.0310.39±1.66★★ |
60.75±11.59△232.57±35.03△1729.50±300.56△1736.10±31.74△8.96±1.15△139.84±9.52△117.66±15.71△8.56±1.61△ |
注:★表示与安静对照组相比 ★P<0.05 ★★P<0.05
△表示与运动对照组相比 △P<0.05 △△P<0.05
表4结果显示,与安静对照组相比,安静加药组大鼠血血红蛋白和肌酐含量显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),其他数值则无显著差异;运动对照组与安静对照组相比血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶活性和尿素氮、血乳酸含量均显著或极显著上升(P<0.05或P<0.01),血红蛋白含量显著降低(P<0.05),肌酐含量有降低趋势但比较无显著差异;与运动对照组相比,运动加药组大鼠血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、肌酸激酶、乳酸脱氢酶活性和血尿素氮、血乳酸含量均显著降低(P<0.05),血红蛋白和肌酐含量显著升高(P<0.05)。
(4)云芝菌丝体对大强度耐力训练大鼠血糖、肝糖原和肌糖原含量的影响
实验方法:分别取血清0.2ml、0.37g股四头肌和0.75g肝组织进行血糖及肌肝糖原指标的测试,测试方法分别按照血糖和肝糖原测试试剂盒的操作方法进行。
测试结果见表5。
表5 云芝菌丝体对大强度耐力训练大鼠血糖、肝糖原和肌糖原含量的影响
组别 |
安静对照组(n=8) |
安静加药组(n=8) |
运动对照组(n=8) |
运动加药组(n=8) |
血糖(mmol/L)肝糖原(mg/g组织)肌糖原(mg/g组织) |
6.93±0.813.51±1.351.47±0.23 |
7.32±0.79★5.90±1.87★1.61±0.30 |
4.70±0.53★★2.38±1.31★★1.05±0.26★ |
5.27±0.93△4.01±0.25△△1.37±0.22△△ |
注:★表示与安静对照组相比 ★P<0.05 ★★P<0.05
△表示与运动对照组相比 △P<0.05 △△P<0.05
由表5可以看出,安静加药组大鼠的血糖和肝糖原含量均显著高于安静对照组(P<0.05),安静加药组大鼠的肌糖原含量与安静对照组相比有上升趋势,但差异不显著;力竭运动对照组大鼠血糖,肝糖原水平与安静对照组相比,均有显著或极显著性的降低(P<0.05或P<0.01);力竭加药组大鼠的血糖、肝糖原和肌糖原水平均显著或极显著高于力竭运动组(P<0.05或P<0.01)。
(5)云芝菌丝体对大强度耐力训练大鼠心肌组织自由基代谢的影响
实验方法:取血清1ml进行血清自由基代谢指标的测试,测试方法分别按照总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)测试试剂盒的操作方法进行。
测试结果见表6。
表6 云芝菌丝体对大强度耐力训练大鼠心肌组织自由基代谢的影响
组别 |
安静对照组(n=8) |
安静加药组(n=8) |
运动对照组(n=8) |
运动加药组(n=8) |
T-AOC(U/mg prot)MDA(nmol/mg prot)CAT(U/mg prot)SOD(U/mg prot)GSH-Px(U/mg prot) |
2.24±0.314.73±0.514.05±0.73235.55±98.1227.68±4.95 |
2.33±0.47★4.12±0.42★4.18±0.87270.06±91.54★29.91±5.36★ |
1.63±0.56★★9.94±2.20★★3.05±0.63★281.37±106.48★17.59±3.99★★ |
2.02±0.49△7.89±1.66△3.54±0.47317.27±84.90△20.01±2.68△ |
注:★表示与安静对照组相比 ★P<0.05 ★★P<0.05
△表示与运动对照组相比 △P<0.05 △△P<0.05
由表6可以看出,安静加药组大鼠心肌组织中总抗氧化能力、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶均显著高于安静对照组(P<0.05), 过氧化氢酶与安静对照组相比有升高趋势但无显著性差异,丙二醛与安静对照组相比显著降低(P<0.05);运动对照组心肌组织中总抗氧化能力、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶低于安静对照组,数据差异有显著或极显著意义(P<0.05或P<0.01),而丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性显著或极显著高于安静对照组(P<0.05或P<0.01);运动加药组大鼠心肌与运动力竭组相比总抗氧化能力、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶显著升高(P<0.05),丙二醛水平显著降低(P<0.05)。
(6)云芝菌丝体对大强度耐力训练大鼠肝组织自由基代谢的影响
实验方法:取肝组织匀浆1ml进行肝组织自由基代谢指标的测试,测试方法分别按照总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)测试试剂盒的操作方法进行。
测试结果见表7。
表7 云芝菌丝体对大强度耐力训练大鼠肝组织自由基代谢的影响
组别 |
安静对照组(n=8) |
安静加药组(n=8) |
运动对照组(n=8) |
运动加药组(n=8) |
T-AOC(U/mg prot)MDA(nmol/mg prot)CAT(U/mg prot)SOD(U/mg prot)GSH-Px(U/mg prot) |
0.77±0.091.73±0.558.72±1.2774.42±5.9763.62±8.07 |
0.81±0.11★1.60±0.71★8.95±1.4277.87±7.32★65.48±9.91 |
0.60±0.07★2.57±0.54★★4.80±0.88★★52.14±8.60★★36.62±6.18★★ |
0.70±0.05△2.19±0.66△6.11±1.02△62.46±7.40△△57.41±7.87△△ |
注:★表示与安静对照组相比 ★P<0.05 ★★P<0.05
△表示与运动对照组相比 △P<0.05 △△P<0.05
由表7可以看出,安静加药组大鼠肝组织中总抗氧化能力、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶均显著高于安静对照组(P<0.05),过氧化氢酶与安静对照组相比有升高趋势但无显著性差异,丙二醛与安静对照组相比显著降低(P<0.05);运动训练组肝组织中总抗氧化能力、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶低于安静对照组,数据差异有显著或极显著意义(P<0.05或P<0.01),而丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性均极显著高于安静对照组(P<0.01);运动加药组大鼠肝组织与运动力竭组相比总抗氧化能力、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶显著升高(P<0.05),丙二醛水平显著降低(P<0.05)。
(7)云芝菌丝体对大强度耐力训练大鼠股四头肌组织自由基代谢的影响
实验方法:取股四头肌组织匀浆1ml进行股四头肌组织自由基代谢指标的测试,测试方法分别按照总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)测试试剂盒的操作方法进行。
测试结果见表8。
表8 云芝菌丝体对大强度耐力训练大鼠股四头肌组织自由基代谢的影响
组别 |
安静对照组(n=8) |
安静加药组(n=8) |
运动对照组(n=8) |
运动加药组(n=8) |
T-AOC(U/mg prot)MDA(nmol/mg prot)CAT(U/mg prot)SOD(U/mg prot)GSH-Px(U/mg pro)t |
0.64±0.054.41±0.744.76±0.9175.03±7.1532.33±3.91 |
0.68±0.09★4.10±0.64★5.33±0.74★90.14±6.88★35.85±3.32 |
0.62±0.066.25±0.90★★2.36±0.78★★94.28±7.81★27.52±4.54★ |
0.73±0.06△5.19±0.87△3.82±0.97△△103.07±7.38△31.17±5.10△ |
注:★表示与安静对照组相比 ★P<0.05 ★★P<0.05
△表示与运动对照组相比 △P<0.05 △△P<0.05
由表8可以看出,安静加药组大鼠股四头肌组织中总抗氧化能力、超氧化物歧化酶和过氧化氢酶均显著高于安静对照组(P<0.05),谷胱甘肽过氧化物酶与安静对照组相比有升高趋势但无显著性差异,丙二醛与安静对照组相比显著降低(P<0.05);运动训练组股四头肌组织中过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶低于安静对照组,数据差异有显著或极显著意义(P<0.05或P<0.01),而丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性显著或极显著高于安静对照组(P<0.05或P<0.01);运动加药组大鼠股四头肌组织与运动力竭组相比总抗氧化能力、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶显著或极显著升高(P<0.05或P<0.01),丙二醛水平显著降低(P<0.05)。
(8)云芝菌丝体对大强度耐力训练大鼠肾组织自由基代谢的影响
实验方法:取肾组织匀浆1ml进行肾组织自由基代谢指标的测试,测试方法分别按照总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)测试试剂盒的操作方法进行。
测试结果见表2。
表9 云芝菌丝体对大强度耐力训练大鼠肾组织自由基代谢的影响
组别 |
安静对照组(n=8) |
安静加药组(n=8) |
运动对照组(n=8) |
运动加药组(n=8) |
T-AOC(U/mg prot)MDA(nmol/mg prot)CAT(U/mg prot)SOD(U/mg prot)GSH-Px(U/mg prot) |
3.84±0.772.21±0.782.75±0.8357.76±4.3556.49±4.71 |
3.90±0.572.13±0.65★2.92±0.61★59.33±5.24★58.02±6.33 |
2.63±0.68★★2.44±0.71★2.11±0.49★46.93±6.97★39.54±5.93★★ |
3.11±0.52△2.29±0.88△2.34±0.70△51.55±6.58△43.39±5.43△ |
注:★表示与安静对照组相比 ★P<0.05 ★★P<0.05
△表示与运动对照组相比 △P<0.05 △△P<0.05
由表9可以看出,安静加药组大鼠肾组织中超氧化物歧化酶和过氧化氢酶均显著高于安静对照组(P<0.05),谷胱甘肽过氧化物酶和总抗氧化能力与安静对照组相比有升高趋势但无显著性差异,丙二醛与安静对照组相比显著降低(P<0.05);运动训练组肾组织中总抗氧化能力、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶低于安静对照组,数据差异有显著或极显著意义(P<0.05或P<0.01),而丙二醛含量显著高于安静对照组(P<0.05);运动加药组大鼠肾组织与运动力竭组相比总抗氧化能力、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶均显著升高(P<0.05),丙二醛水平显著降低(P<0.05)。
(9)云芝菌丝体对大强度耐力训练大鼠脑组织自由基代谢的影响
实验方法:取脑组织匀浆1ml进行脑组织自由基代谢指标的测试,测试方法分别按照总抗氧化能力(T-AOC)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)测试试剂盒的操作方法进行。
测试结果见表10。
表10 云芝菌丝体对大强度耐力训练大鼠脑组织自由基代谢的影响
组别 |
安静对照组(n=8) |
安静加药组(n=8) |
运动对照组(n=8) |
运动加药组(n=8) |
T-AOC(U/mg prot)MDA(nmol/mg prot)CAT(U/mg prot)SOD(U/mg prot)GSH-Px(U/mg prot) |
2.19±0.321.93±0.704.65±0.8273.44±8.8151.11±6.18 |
2.22±0.49★1.61±0.52★5.00±0.68★77.79±6.54★53.16±6.40★ |
1.93±0.18★2.26±0.59★2.96±0.77★★57.17±8.39★★41.13±4.47★★ |
2.10±0.37△2.14±0.66△3.18±0.6164.01±7.90△48.29±6.67△ |
注:★表示与安静对照组相比 ★P<0.05 ★★P<0.05
△表示与运动对照组相比 △P<0.05 △△P<0.05
由表10可以看出,安静加药组大鼠脑组织中总抗氧化能力、超氧化物歧化酶、过氧化氢酶和谷胱甘肽过氧化物酶均显著高于安静对照组(P<0.05),丙二醛与安静对照组相比显著降低(P<0.05);运动训练组脑组织中总抗氧化能力、过氧化氢酶、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶低于安静对照组,数据差异有显著或极显著意义(P<0.05或P<0.01),而丙二醛含量显著高于安静对照组(P<0.05);运动加药组大鼠脑组织与运动力竭组相比总抗氧化能力、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽过氧化物酶显著升高(P<0.05),过氧化氢酶高于运动训练组但差异不显著,丙二醛水平显著降低(P<0.05)。
(10)云芝菌丝体对大强度耐力训练大鼠部分组织总一氧化氮合成酶活性的影响
实验方法:分别取肝组织匀浆、心肌组织匀浆、股四头肌组织匀浆、脑组织匀浆、肾组织匀浆0.1ml进行各组织总一氧化氮合成酶活性的测试,测试方法按照一氧化氮合成酶测试试剂盒的操作方法进行。
测试结果见表11。
表11 云芝菌丝体对大强度耐力训练大鼠组织总一氧化氮合成酶活性的影响(单位:U/mg prot)
组织 |
安静对照组(n=8) |
运动对照组(n=8) |
运动加药组(n=8) |
肝心肌股四头肌脑肾 |
1.02±0.080.80±0.070.43±0.061.20±0.120.48±0.09 |
1.47±0.10★★0.84±0.110.56±0.08★1.13±0.090.75±0.16★★ |
1.66±0.06△0.95±0.08△0.72±0.10△1.27±0.11△0.76±0.21 |
注:★表示与安静对照组相比 ★P<0.05 ★★P<0.05
△表示与运动对照组相比 △P<0.05 △△P<0.05
由表11可以看出,力竭运动对照组大鼠肝、肾、股四头肌组织中的总一氧化氮合成酶活性较安静对照组高,具有显著或极显著差异(P<0.05或P<0.01),而心肌中总一氧化氮合成酶活性较安静对照组高但差异不显著,脑组织中的总一氧化氮合成酶活性低于安静对照组,差异不显著;力竭运动加药组的肝、心肌、股四头肌和脑组织中总一氧化氮合成酶活性高于力竭运动组,且有显著差异(P<0.05),肾组织中总一氧化氮合成酶活性与力竭对照组相比无显著差异。
(11)云芝菌丝体对大强度耐力训练大鼠部分组织诱导型一氧化氮合成酶活性的影响
实验方法:分别取肝组织匀浆、心肌组织匀浆、股四头肌组织匀浆、脑组织匀浆、肾组织匀浆0.1ml进行各组织诱导型一氧化氮合成酶活性的测试,测试方法按照一氧化氮合成酶测试试剂盒的操作方法进行。
测试结果见表12。
表12 云芝菌丝体对大强度耐力训练大鼠组织诱导型一氧化氮合成酶活性的影响(单位:U/mg prot)
组织 |
安静对照组(n=8) |
运动对照组(n=8) |
运动加药组(n=8) |
肝心肌股四头肌脑肾 |
0.38±0.050.22±0.080.13±0.060.42±0.090.17±0.07 |
0.55±0.12★★0.74±0.10★★0.31±0.09★0.47±0.120.38±0.09★ |
0.42±0.05△0.37±0.07△△0.18±0.07△0.56±0.13△0.33±0.10 |
注:★表示与安静对照组相比 ★P<0.05 ★★P<0.05
△表示与运动对照组相比 △P<0.05 △△P<0.05
由表12可以看出,力竭对照组大鼠肝、心肌、股四头肌、肾组织中的诱导型一氧化氮合成酶活性显著或极显著高于安静对照组(P<0.05或P<0.01),脑组织中较安静对照组高但差异不显著;力竭加药组大鼠肝、心肌、股四头肌中诱导型一氧化氮合成酶活性较力竭对照组低,有显著或极显著差异(P<0.05或P<0.01)。肾组织中诱导型一氧化氮合成酶活性较力竭对照组低,但差异不显著。脑组织中诱导型一氧化氮合成酶活性显著高于力竭对照组水平(P<0.05)。
(12)云芝菌丝体对大强度耐力训练大鼠部分组织一氧化氮含量的影响
实验方法:分别取肝组织匀浆、心肌组织匀浆、股四头肌组织匀浆、脑组织匀浆、肾组织匀浆0.1ml进行各组织一氧化氮含量的测试,测试方法按照一氧化氮测试试剂盒的操作方法进行。
测试结果见表13。
表13 云芝菌丝体对大强度耐力训练大鼠组织一氧化氮含量的影响(单位:μmol/g prot)
组织 |
安静对照组(n=8) |
运动对照组(n=8) |
运动加药组(n=8) |
肝心肌股四头肌脑肾 |
0.46±0.221.72±0.481.79±0.573.21±1.241.33±0.40 |
0.58±0.261.76±0.541.83±0.933.14±1.371.71±0.33★ |
0.87±0.16△2.20±0.78△2.82±0.62△3.45±1.52△1.70±0.41 |
注:★表示与安静对照组相比 ★P<0.05 ★★P<0.05
△表示与运动对照组相比 △P<0.05 △△P<0.05
由表13可以看出,力竭对照组肝、股四头肌、肾组织中一氧化氮含量高于安静对照组,但只有肾组织差异显著(P<0.05),心肌一氧化氮含量高于安静对照组,但差异不显著。脑中一氧化氮含量低与安静对照组,但差异不显著;力竭加药组大鼠肝、心肌、股四头肌、脑组织中一氧化氮含量均显著高于力竭对照组水平(P<0.05),肾组织中一氧化氮含量与力竭对照组相比无显著差异。
5、实验结论
(1)云芝菌丝体能够明显延长大强度耐力训练大鼠跑台运动至力竭的时间,具有抗疲劳作用。
(2)云芝菌丝体可以提高大鼠的脏器指数,改善它们的功能,还有可能增强大鼠的免疫能力,同时对大鼠生长发育无不良影响。
(3)云芝菌丝体能显著降低运动训练及力竭运动造成的大鼠血清丙氨酸氨基转移酶、天门冬氨酸氨基转移酶、乳酸脱氢酶、肌酸激酶活性的增加,提示提示云芝菌丝体可以减轻力竭运动对大鼠肝脏、心肌等组织的损伤。
(4)云芝菌丝体能显著升高因力竭运动造成的血红蛋白含量下降,显著降低力竭运动造成血尿素氮、血乳酸含量的升高,使大鼠血中肌酐含量升高,提示云芝菌丝体能提高有氧运动能力,降低运动大鼠体内蛋白质分解速率,增加肌肉中肌酸和磷酸肌酸含量,提高肌肉质量。
(5)云芝菌丝体可以增加大鼠体内糖储备,保证中枢神经***、运动肌及红细胞等组织的能量供给,延缓中枢及外周疲劳的发生,从而提高运动能力。
(6)云芝菌丝体能能够显著降低大强度耐力训练大鼠心、肝、肌、脑、肾中丙二醛的含量,提高超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、过氧化氢酶等酶的活性,提高运动训练大鼠机体总抗氧化能力,从而对运动引起的因自由基的过量产生而导致的运动疲劳的发生有明显的延缓作用。
(7)云芝菌丝体能提高大鼠机体总一氧化氮合成酶活性,适度提高大鼠组织一氧化氮含量,有效地改善运动时骨骼肌、心肌等组织血流量,保证氧和其他营养物质的供给及代谢物质的带出。
本发明的功能:消除自由基、提高免疫能力、抗心肌和脑缺血缺氧、抗疲劳功能。
本发明的规格:本发明药物胶囊剂每粒重0.3g,每粒含云芝菌丝体10.667g;本发明药物片剂每片重0.4g,每片含云芝菌丝体14.222g;本发明药物颗粒剂每袋重5g,每克含云芝菌丝体8.533g;本发明药物口服液每瓶10mL,每毫升含云芝菌丝体4.267g。
本发明的用法用量:每日口服三次,每次口服胶囊剂4粒或片剂3片或颗粒剂1袋或口服液1瓶。