CN1978462B - 咪唑啉修饰的氨基酸,其合成方法及在多肽标记中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一系列新的经咪唑啉修饰的氨基酸，其合成方法及在多肽定点标记中的应用。本发明通过把2-取代-1，3-二氧基咪唑啉连接到L-Lys或L-Arg的碱性侧链或α-氨基上，或连接到L-Asp或L-Glu的酸性侧链或α-羧基上，制备得到含2-取代-1，3-二氧基咪唑啉的一系列氨基酸。试验证实，本发明咪唑啉修饰的氨基酸具有以下特性：1)良好的化学稳定性，可耐受多肽合成中的各种反应条件，保持自由基和清除自由基的性质不变，还可以象正常的L-氨基酸一样在多肽合成中按照需要***到多肽或蛋白质链的任意位置，实现定点ESR标记；2)良好的生物相容性。由本发明氨基酸定点标记获得多肽与现有技术中N端标记获得的多肽进行比较，二者的理化性质和生物活性完全一致。

Description

咪唑啉修饰的氨基酸，其合成方法及在多肽标记中的应用

技术领域

本发明涉及修饰的氨基酸，尤其涉及用咪唑啉修饰的氨基酸，其合成方法以及该修饰的氨基酸在多肽定点标记中的应用，属于化学领域。

背景技术

1970年，首次合成了通式1的nitronyl nitroxide(2-取代-1，3-二氧基咪唑啉)(Edwin F.Ullman，Call L and Jeanne H.Osiecki，Stable freeradicals：New Imino，Amidino and Carbamoyl nitroxides，J.Org.Chem.，1970，25，3623-3631)。1990年代，NO在生物机体中的作用逐渐被认识。Nitronyl Nitroxide由于能与NO发生专一性反应并且具有顺磁性，开始受到广泛关注。

通式1.Nitronyl nitroxide(2-取代-1，3-二氧基咪唑啉)的结构。式中的R＝烷基、芳基、杂芳基等。

1993年，采用电子顺磁共振技术定量检测了nitronyl nitroxide和NO反应生成的2-取代-1-氧基咪唑啉类产物(Joseph J，Kalyanaraman B，HydeJS.Trapping of nitric oxide by nitronyl nitroxides：an electron spinresonance investigation.Biochem Biophys Res Commun 1993；192：926-934)。Nitronyl nitroxide的ESR谱呈典型的2∶2∶1五裂分(图1)。反应产物2-取代-1-氧基咪唑啉的ESR谱呈典型的5∶2七裂分(图2)。

Nitronyl nitroxide和NO的反应活性及反应前后ESR谱的鲜明差异使得nitronyl nitroxide成为NO的专一的捕获剂，并用作研究NO功能的有力工具。Nitronyl nitroxide为揭示NO在生物***中作为信使因子和效应因子的双重功能确实起了关键的作用。例如，Maeda H等利用nitronylnitroxide揭示了NO在实体肿瘤血液渗透中的介导作用(Maeda H，NoguchiY，Sato K，Akaike T.Enhanced vascular permeability in solid tumoris mediated by nitric oxide and inhibited by both new nitric oxidescavenger and nitric oxide synthase inhibi tor.Jpn J Cancer Res1994；85：331-334)，为癌症的治疗提供了新的思路(Wartenberg M，Schallenberg M，Hescheler J，Sauer H.Reactive oxygenspecies-mediated regulation of eNOS and iNOS expression inmulticellular prostate tumor spheroids.Int J Cancer 2003；104：274-282)。Maeda H等还利用nitronyl nitroxide揭示了NO是巨噬细胞杀灭细菌等微生物的活性分子(Maeda H，Akaike T，Yoshida M，Sato K，Noguchi Y.A new nitric oxide scavenger，imidazolineoxyl N-oxidederivative，and its effects in pathophysiology and microbiology.Curr Top Microbiol Immunol 1995；196：37-50)。

Nitronyl nitroxide自身的自由基性质带来的特征性ESR谱，以及ESR测定的高灵敏性，使得这种类型的电子自旋共振标记(ESR标记)变得有价值。ESR标记由于既不象同位素标记那样会造成放射性污染，也不象荧光标记那样困难，因而正在成长为生物学研究的最重要的标记技术之一。

Nitronyl nitroxide对NO的专一捕获能力使得它本身在医学中有重要的应用价值。例如芳基类nitronyl nitroxide能有效的治疗内毒素性休克，保护心血管及肾脏功能(Yoshida M，Akaike T，Wada Y，et al.Therapeutic effects of imidazolineoxyl N-oxide against endotoxinshock through its direct nitric oxide-scavenging activity.BiochemBiophys Res Commun 1994；202：923-930)。又例如nitronyl nitroxide与抗血栓多肽偶联，生成的伪肽具有抗血栓和NO清除双重功能(JunlingLiu，Ming Zhao，Chao Wang，and Shiqi Peng，Synthesis andBioactivities of Nitronyl Nitroxide and RGD ContainingPseudopeptides，Bioorganic&Medicinal Chemistry Letters，2003，13，4065-4069)。再例如nitronyl nitroxide与溶血栓多肽偶联，生成的伪肽具有溶血栓和NO清除双重功能(Ming Zhao，Junling Liu，Chao Wang，LiliWang，Hu Liu，Shiqi Peng，Synthesis and Biological Activity ofNitronyl Nitroxide Containing Peptides，J Med.Chem.2005，48，4285-4292)。

目前，蛋白质和多肽的ESR标记仍然存在明显的局限性。文献报道的nitronyl nitroxide标记都是随机标记。当蛋白质和多肽存在碱性或酸性侧链(这种情况几乎不可避免)时随机标记的产物复杂。本发明人在前期研究中公开了一类新的nitronyl nitroxide，这些新的nitronyl nitroxide在化学上足够稳定，可以对蛋白质和多肽进行定位ESR标记，但是这些用于定位标记的nitronyl nitroxide只能连接到蛋白质和多肽的N端。所以目前的蛋白质和多肽ESR标记技术明显局限了生物学和药学研究，发展蛋白质和多肽的ESR定点标记技术具有明确的科学意义和应用价值。

发明内容

本发明首先所要解决的技术问题是克服现有技术的不足，提供一类新的经咪唑啉修饰的氨基酸，该氨基酸可以象正常的L-氨基酸一样在多肽合成中按照需要***到多肽或蛋白质链的任意位置，实现定点ESR标记。

本发明首先所要解决的技术问题是通过以下技术途径来实现的：

一类新的经咪唑啉修饰的氨基酸，具有下述通式(I)-(VI)的结构：

通式(I)中，R₁为苄氧羰基或氢原子；通式(II)中，R₂为叔丁氧羰基时，R₃为氢原子；R₂为氢原子时，R₃为甲基；通式(III)中，R₄为叔丁氧羰基时，R₅为甲基或氢原子；R₄为氢原子时，R₅为甲基；通式(IV)中，R₆为甲基或氢原子；通式(V)中，当R₇为叔丁氧羰基时，R₈为氢原子；R₇为氢原子，R₈为甲基或氢原子；通式(VI)中，R₉为叔丁氧羰基时，R₁₀为氢原子；R₉为氢原子时，R₁₀为甲基或氢原子。

另外，本发明还提供了制备通式(I)化合物的关键中间体：N^ω-苄氧羰基-N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]-Lys-OBzl；制备通式(V)化合物的关键中间体：Boc-Asp(NHCH₂CH₂Br)-OH；Boc-Asp(NHCH₂CH₂Br)-OCH₃；Boc-Asp[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-OCH₃；制备通式(VI)化合物的关键中间体：Boc-Glu(NHCH₂CH₂Br)-OH和Boc-Glu(NHCH₂CH₂Br)-OCH₃。

本发明通过把nitronyl nitroxide引到L-Lys和或L-Arg的碱性侧链或α-氨基上，把nitronyl nitroxide引到L-Asp或L-Glu的酸性侧链或α-羧基上，制备得到含nitronyl nitroxide的上述通式化合物。这些含nitronyl nitroxide的化合物具有良好的化学稳定性，可以耐受多肽合成中的各种反应条件、保持自由基和清除自由基的性质不变，还可以象正常的L-Lys、L-Arg、L-Asp和L-Glu一样在多肽合成中按照需要***到多肽或蛋白质链的任意位置，实现定点ESR标记。本发明化合物还具有良好的生物相容性，将本发明的定点ESR标记获得的含nitronyl nitroxide多肽与现有技术中采用N端标记获得的含nitronyl nitroxide多肽进行比较分析，二者的理化性质和生物活性完全一致。

当然，可以制备本发明化合物的盐，这些盐包括在本发明之中。

本发明化合物的酸加成盐优选为药学上可接受的，与适当的酸(例如盐酸、醋酸)形成无毒的盐。除了药物上可接受的盐以外，其它的盐也包括在本发明之中。

本发明还涉及一种制备通式(I)-(VI)化合物的方法，包括按现有技术方法合成4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯基乙酸；把2-取代-1，3-二氧基咪唑啉按照常规方法引到L-Lys或L-Arg的碱性侧链或α-氨基上，或与L-Asp或L-Glu的衍生物Boc-Asp(NHCH₂CH₂Br)-OH、Boc-Asp(NHCH₂CH₂Br)-OCH₃、Boc-Glu(NHCH₂CH₂Br)-OH或Boc-Glu(NHCH₂CH₂Br)-OCH₃实施氧-烷基化反应，即得本发明通式化合物。

此外，本发明还提供了采用上述通式(I)-(VI)化合物定点标记的新型多肽，包括N端含nitronyl nitroxide标记的L-Lys的PAK(Pro-Ala-[N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基乙酰基]Lys-OH]、N端含nitronyl nitroxide标记的L-Arg的RGDV(N^G-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基乙酰基]Arg-Gly-Asp-Val-OH)、3位含nitronyl nitroxide标记的L-Asp的RGDS(Arg-Gly-[β-天冬氨酰[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基丙氨基]Asp-Ser-OH]和N端含nitronyl nitroxide标记的L-Glu的谷胱甘肽(γ-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基丙氨基]Glu-Cys-Gly-OH)。通过这些代表性肽的合成，说明本发明的含nitronylnitroxide的L-Lys、L-Arg、L-Asp和L-Glu在多肽标记中有广泛的应用价值。这些新型多肽的结构如下：

本发明还提供了合成上述新型多肽的中间体，即：

合成Pro-Ala-[N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基乙酰基]Lys-OH的中间体：Boc-Ala-N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Lys-OCH₃；Ala-N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Lys-OCH₃；Boc-Pro-Ala-N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Lys-OCH₃；Boc-Pro-Ala-N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Lys-OH。

合成N^G-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基乙酰基]Arg-Gly-Asp-Val-OH的关键中间体：N^α-Boc-N^G-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]Arg-Gly-Ome；N^α-Boc-N^G-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]Arg-Gly-OH；N^α-Boc-N^G-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]Arg-Gly-Asp(OBzl)-Val-OMe；N^α-Boc-N^G-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]Arg-Gly-Asp-Val-OH。

合成Arg-Gly-[β-天冬氨酰[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基丙氨基]Asp-Ser-OH的关键中间体：Boc-Asp-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Ser-OCH₃；Asp-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Ser-OCH₃；Boc-Gly-Asp-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Ser-OCH₃；Gly-Asp-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Ser-OCH₃；Boc-Arg-Gly-Asp-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Ser-OCH₃；Boc-Arg-Gly-Asp-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Ser-OH。

合成γ-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基丙氨基]Glu-Cys-Gly-OH的关键中间体：Boc-Glu-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Cys-OMe；Boc-Glu-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Cys-OH；Boc-Glu-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Cys-Gly-OMe；Boc-Glu-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Cys-Gly-OH。

本发明采用α-氨基nitronyl nitroxide修饰的L-Arg合成了N端含nitronyl nitroxide标记的L-Arg的RGDS、RGDV和RGDF。将这些本发明新合成的多肽与现有技术中采用局限的N端的标记得到的含nitronylnitroxide的RGDS、RGDV和RGDF进行化学和生物学方面的比较，结果发现；两类多肽的理化性质和生物活性完全一致，说明采用本发明提供的含nitronyl nitroxide的L-Lys、L-Arg、L-Asp和L-Glu标记多肽可以在化学和生物学两方面保证准确无误。现有技术中的采用局限的N端的标记得到的含nitronyl nitroxide的多肽的结构如下：

将本发明制备的含1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉的Lys、Arg、Asp、Glu、Arg-Gly-Asp-Ser-OH、Arg-Gly-Asp-Val-OH和Glu-Cys-Gly-OH在电子自旋共振仪上测定，这些化合物都显示双NO自由基的特征ESR谱(图3)。该现象说明本发明化合物具有良好的化学耐受性，用于多肽合成反应可以保持双NO自由基的性质。

将本发明制备的含1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉的Lys、Arg、Asp、Glu、Arg-Gly-Asp-Ser-OH、Arg-Gly-Asp-Val-OH和Glu-Cys-Gly-OH的水溶液通入NO后都转化为单NO自由基产物，这些产物与在电子自旋共振仪上测定，都显示单NO自由基的特征ESR谱(图4)。该现象说明本发明化合物具有良好的化学耐受性，用于多肽合成反应可以保持NO清除活性。

通过将本发明制备的下述化合物：

N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基乙酰基]Arg-Gly-Asp-Ser-OH、N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基乙酰基]Arg-Gly-Asp-Val-OH和N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基乙酰基]Arg-Gly-Asp-Phe-OH与现有技术中的把4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基乙酸引入到Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser-OBzl、Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl和Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl的N端Arg残基的α氨基上再脱保护生成的产物同时进行抗血栓活性比较和评价，结果表明两类产物的抗血栓活性处在相同水平。

本发明所要解决的再一个技术问题是提供一种药用组合物，该药用组合物由本发明治疗上有效剂量的通式(I)-(VI)的任一化合物或由该化合物所标记的任意多肽与药学上可接受的载体组成，即将药学上可接受用量的通式(I)-(VI)的任一化合物或由该化合物所标记的多肽与药学上可接受的载体或稀释剂配合后，按本领域常规的制剂方法将其制备成任意一种适宜的药物组合物。

通常该组合物适合于口服给药和注射给药，也适合其他的给药方法。

该组合物可以是片剂、胶囊剂、粉剂、颗粒剂、锭剂、栓剂，或口服液等液体制剂形式。根据不同的给药方法，本发明药物组合物可以含有0.1％-99％重量，优选10-60％重量的本发明通式(I-VI)的任一化合物或该化合物所标记的任一多肽。

附图说明

图1为Nitronyl nitroxide的ESR谱；

图2为nitronyl nitroxide和NO反应生成的2-取代-1-氧基咪唑啉的ESR谱；

图3为本发明的含1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉的Lys、Arg、Asp、Glu、Arg-Gly-Asp-Ser-OH、Arg-Gly-Asp-Val-OH和Glu-Cys-Gly-OH给出相同的特征ESR谱；

图4为本发明的含1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉的Lys、Arg、Asp、Glu、Arg-Gly-Asp-Ser-OH、Arg-Gly-Asp-Val-OH和Glu-Cys-Gly-OH与NO反应生成的产物给出相同的特征ESR谱。

缩略注解：DCU(二环己基脲)；DCC(二环己基酰亚胺)；THF(四氢呋喃)；Me(甲基)；Bzl(苄基)；Ach(乙酰胆碱)；NS(肝素生理盐水)；BOC(叔丁氧羰基)；DMF(二甲基甲酰胺)；UK(脲激酶)；NE(去甲肾上腺素)；cHex(环己基)；SNP(硝普钠)；Tos(对甲苯磺酰基)。

以下通过实施例来进一步描述本发明的有益效果，应该理解的是，这些实施例仅用于例证的目的，决不限制本发明的保护范围。

具体实施方式

4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基乙酸的合成路线。

[中间体制备实施例1]2，3-二甲基-2，3-二硝基丙烷(化合物2)的制备

往130ml NaOH(6mol/l)水溶液中加入69.0g(0.78mol)2-硝基丙烷(1)。得到的溶液在冰浴中搅拌5分钟，然后缓慢滴加20ml(0.38mol)Br₂，历时1小时。然后往反应混合物中加240ml乙醇并在90℃水浴上回流3小时，期间出现片状沉淀。将反应混合物趁热倒入800ml冰水中，待冰溶化后减压抽滤收集片状结晶。干燥后得63.0g(92％)标题化合物。

[中间体制备实施例2]2，3-二甲基-2，3-二羟氨基丁烷(化合物3)的制备

由10.0g(56.82mmol)2，3-二甲基-2，3-二硝基丙烷(2)、5.6g NH₄Cl和112ml乙醇溶液(50％构成的悬浮液在冰浴及搅拌下加入22.9g锌粉，历时3小时。然后反应混合物室温搅拌3小时。反应混合物减压抽滤，滤饼用50％乙醇水溶液反复洗涤。合并洗涤液和滤液，用浓盐酸调pH 2，减压浓缩至泥浆状。得到的泥浆状物与适量K₂CO₃混和均匀至PH 10，然后置于索氏提取器中用CHCl₃提取6小时。提取液减压浓缩，残留物用石油醚析晶，得到4.0g(47.57％)标题化合物，为无色片状结晶，Mp157-159℃。

[中间体制备实施例3]1，3-二羟基-2-(4’-羟基苯基)-4，4，5，5-四甲基咪唑烷(化合物4)的制备

由990mg(8.107mmol)对羟基苯甲醛、1.196g(8.078mmol)2，3-二甲基-2，3-二羟氨基丁烷(3)及4.8ml甲醇构成的溶液室温搅拌6小时，TLC显示原料点消失，反应混合物减压抽滤，得到1.47g(72％)标题化合物，为无色结晶，ESI-MS(m/e)＝236[M]⁺；R_f0.64(CHCl₃/CH₃OH，10∶1)，mp：168-169；IR(KBr，em^-1)：3340、1600、1450；NMR(CDCl₃)δ＝1.14(s，4-CH₃)，4.78(s，CH)，7.31-7.51(m，5-ArH)，7.71(2-OH)。元素分析：C₁₃H₂₀N₂O₂计算值为：C，66.07；H，8.53；N，11.85。

[中间体制备实施例4]1，3-二氧-2-(4’-羟基苯基)-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉(化合物5)的制备

往1.47g(5.83mmol)1，3-二羟基-2-(4’-羟基苯基)-4，4，5，5-四甲基咪唑烷与81ml甲醇的溶液中加入8.14g PbO₂(34.40mmol)。室温搅拌0.5hr后，TLC显示原料点消失。反应混合物过滤，滤液减压浓缩，残留物用硅胶柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯，2∶1)。收集到的含产物的馏份减压浓缩，得到1.06g(73％)标题化合物，为兰色固体。R_f＝0.54(CHCl₃/CH₃OH，20∶1)；mp 84-85℃；ESI-MS(m/e)＝233[M]⁺；IR(KBr，cm^-1)：3325、1610、1500、1450、765；元素分析：C₁₃H₁₇N₂O₂计算值为：C，66.93；H，7.34；N，12.01。

[中间体制备实施例5]1，3-二氧-2-(4-乙氧羰基甲氧基苯基)-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉(化合物6)的制备

由500mg(2mmol)1，3-二氧-2-(4’-羟基苯基)-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉(5)、0.6ml溴代乙酸乙酯、405mg乙醇钠，以及6ml无水四氢呋喃构成的溶液于60℃搅拌5小时，TLC显示原料点消失。反应混合物减压浓缩，残留物用硅胶柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯，2∶1)。含所需组分的馏份减压浓缩至干，得到650mg(97％)标题化合物，Mp107-109℃；IR(cm^-1，KBr)：2830、1750、1610、1370、840；ESI-MS(m/e)＝336[M]⁺。

[中间体制备实施例6]4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酸(化合物7)的制备

由100mg(0.2985mmol)1，3-二氧-2-(4-乙氧羰基甲氧基苯基)-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉(6)与3ml甲醇构成的溶液与20滴NaOH水溶液(2mol/l)混合、室温搅拌30分钟、TLC显示原料点消失。反应混合物减压浓缩，残留物与5ml饱和食盐水混后用盐酸(2mol/l)调pH 5。得到的弱酸性溶液用CHCl₃(3ml×3)萃取。合并有机相，减压浓缩，得到92mg(100％)标题化合物，为兰色固体。Mp155-157℃，ESI-MS(m/e)＝307[M]⁺；IR(cm^-1，KBr)：2330-2502、1760、1605、1490、1450、1260、830；元素分析：C₁₅H₁₉N₂O₅计算值为：C，68.62；H，6.23；N，9.12；实测值为C，68.51；H，6.08；N，9.27。

N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基乙酰基]萘氨酸甲酯、N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基乙酰基]萘氨酸、α-Boc-N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基乙酰基]萘氨酸、N^ω-苄氧羰基-N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基乙酰基]萘氨酸苄酯、N^ω-苄氧羰基-N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基乙酰基]萘氨酸和N^α-[4-(1，3--4，4，5，5四甲-2-咪唑啉-2-基)苯氧基乙酰基]萘氨酸的合成路线.

[实施例1]N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]-Lys-OMe(化合物8)的制备

由203mg(0.66mmol)4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯基乙酸、130mg(0.66mmol)HCl·Lys-OMe与20ml无水四氢呋喃构成的溶液于冰浴下先滴加N-甲基吗啉调pH 9，然后滴加168mg(0.82mmol)DCC与12ml无水四氢呋喃的溶液。反应混和物于0℃搅拌2小时、室温搅拌过夜，TLC显示原料点消失。反应混合物过滤，滤液减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解。得到的溶液依次用5％KHSO₄水溶液洗、饱和NaHCO₃水溶液洗、饱和NaCl水溶液洗。分出乙酸乙酯层，无水Na₂SO₄干燥，过滤，滤液减压浓缩至干，得到196mg(83％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3431、1708、1658、1605、1490、1450、1260、830；ESI-MS(m/e)＝449[M]⁺；[α]²⁰ _D＝143.8(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₂H₃₃N₄O₆计算值为：C，58.78；H，7.40；N，12.46；实测值为C，58.77；H，7.26；N，12.62。

[实施例2]N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]-Lys-OH(化合物9)的制备

由200mg(0.223mmol)N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯基乙酰基]-Lys-OMe(8)与10ml甲醇构成的与2ml NaOH水溶液(1mol/l)0℃混合后室温搅拌30分钟，TLC显示原料点消失。反应混合物减压浓缩，残留物与20ml饱和食盐水混和，用2mol/l盐酸调pH 5。得到的弱酸性溶液用乙酸乙酯萃取(6ml×3)。得到180mg(93％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3422、2341-2520、1746、1668、1605、1490、1450、1260、830；ESI-MS(m/e)＝435[M]⁺。[α]²⁰ _D＝-241.8(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₁H₃₁N₄O₆计算值为：C，57.92；H，7.17；N，12.87；实测值为C，57.76；H，7.33；N，12.45。

[实施例3]N^α-Boc-N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]-Lys-OH(化合物10)的制备

200mg(0.46mmol)N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯基乙酰基]-Lys-OH、15ml 1N NaOH水溶液构成的溶液、120mg(0.552mmol)Boc₂O与15ml二氧六环的溶液在冰浴搅拌下用2N NaOH水溶液调节pH 8.6，持续反应12小时，TLC显示原料点基本消失。反应混合物减压浓缩至干、残留物用少量水溶解后用饱和硫酸氢钾水溶液调节pH 2.0、用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯层用饱和氯化钠溶液洗至中性、无水硫酸钠干燥过夜、过滤、滤液减压浓缩至干、残留物在乙酸乙酯-石油醚中固化。得到218mg(91％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3435、1750、1662、1603、1496、1452、1392、1274、836；ESI-MS(m/e)＝519[M]⁺。[α]²⁰ _D＝-155.2(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₆H₃₉N₄O₇计算值为：C，60.10；H，7.57；N，10.78；实测值为C，60.27；H，7.39；N，10.62。

[实施例4]N^ω-苄氧羰基-N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]-Lys-OBzl(化合物11)的制备

200mg(0.65mmol)4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯基乙酸、320mg(0.78mmol)Lys(Z)-OBzl、90mg(0.65mmol)HOBt和10ml无水四氢呋喃构成的溶液于冰浴下先滴加N-甲基吗啉调pH 9，然后滴加160mg(0.78mmol)DCC和10ml无水四氢呋喃构成的溶液。反应混合物0℃搅拌2小时、室温搅拌过夜，TLC显示原料点消失。反应混合物过滤、滤液减压浓缩至干、残留物用乙酸乙酯溶解，得到的溶液依次用5％KHSO₄水溶液洗、以及饱和NaHCO₃水溶液洗、饱和NaCl水溶液洗。分出乙酸乙酯层、无水Na₂SO₄干燥、过滤、滤液减压浓缩至干得到280mg(65％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3430、1757、1669、1600、1487、1450、1270、821；ESI-MS(m/e)＝659[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-183.9(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₃₆H₄₃N₄O₈计算值为：C，65.54；H，6.57；N，8.49；实测值为C，65.71；H，6.75；N，8.64。

[实施例5]N^ω-苄氧羰基-N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]-Lys-OH(化合物12)的制备

冰浴下将180mg(0.27mmol)N^ω-苄氧羰基-N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯基乙酰基]-Lys-OBzl溶解于10ml甲醇中，得到的溶液加入3.5ml 1mol/1NaOH水溶液，反应混合物0℃搅拌30min，TLC显示原料点消失。的混合溶液，搅拌1小时，TLC显示原料点消失。反应液减压浓缩至干、残留物用2mol/l盐酸调pH 5，得到的弱酸性溶液用乙酸乙酯萃取(20ml×3)。得到110mg(90％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3434、2365-2603、1752、1663、1605、1482、1455、1273、834；ESI-MS(m/e)＝435[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-92.9(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₉H₃₇N₄O₈计算值为：C，61.15；H，6.55；N，9.84；实测值为C，61.02；H，6.73；N，9.66。

[实施例6]N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]-Lys-OH(化合物13)的制备

冰浴下将180mg(0.02731mmol)N^ω-苄氧羰基-N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]-Lys-OH与2.5ml三氟乙酸的溶液与2.5ml三氟乙酸/三氟甲磺酸(4∶1)的混合溶液混合、搅拌1小时，TLC显示原料点消失。反应混合物减压浓缩至干，残留物用15ml乙酸乙酯溶解并减压浓缩至干。该操作反复3次，以便除净残留的三氟乙酸和三氟甲磺酸，残留物最后用4ml***溶解并减压浓缩至干，得到110mg(90％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3423、2360-2598、1750、1660、1602、1480、1450、1275、830；ESI(m/e)＝435[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-183.9(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₁H₃₁N₄O₆计算值为：C，57.92；H，7.17；N，12.87；实测值为C，58.11；H，7.33；N，12.69。

Boc-N^G-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基乙酰基]精氨酸、N^G-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基乙酰基]精氨酸甲酯和N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基乙酰基]精氨酸的合成路线。

[实施例7]N^α-Boc-N^G-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]-Arg-OMe(化合物14)的制备

往258mg(0.90mmol)Boc-Arg-OMe与4ml无水四氢呋喃的溶液中加入143mg(2.39mmol，40％)氢化钠。得到的悬浮液与100mg(0.30mmo l)1，3-二氧-2-(4-乙氧羰基甲氧基苯基)-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉与3ml无水四氢呋喃的溶液混合。反应混合物室温搅拌过夜，TLC显示原料点消失。反应混合物过滤、滤液减压浓缩至干、残留物用乙酸乙酯溶解，得到的溶液依次用5％KHSO₄水溶液洗、饱和NaHCO₃水溶液洗、饱和NaC l水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水Na₂SO₄干燥、过滤、滤液减压浓缩至干、残留物用硅胶柱层析分离(氯仿/甲醇，5∶1)，得到150mg(87％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3409、1762、1668、1601、1483、1454、1395、1370、1272、833；ES I(m/e)＝577[M]⁺；[α]²⁰ _D＝70.2(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₇H₄₁N₄O₈计算值为：C，56.14；H，7.15；N，14.55；实测值为C，56.28；H，7.32；N，14.39。

[实施例8]N^α-Boc-N^G-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]-Arg-OH(化合物15)的制备

往58mg(0.10mmol)N-Boc-N^G-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯基乙酰基]-Arg-OMe与6ml甲醇的溶液中加入3mlNaOH水溶液(1mol/l)。反应混合物0℃搅拌1小时，TLC显示原料点消失。反应混合物减压浓缩，残留物与2ml饱和食盐水混合，用2mol/l盐酸调pH 5。得到的弱酸性溶液用乙酸乙酯萃取(6ml×3)。乙酸乙酯层减压浓缩至干得到43mg(73％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3414、2366-2590、1752、1665、1606、1482、1454、1395、1272、833；ESI-MS(m/e)＝563[M]⁺；[α]²⁰ _D＝58.1(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₆H₃₉N₄O₈计算值为：C，55.41；H，6.97；N，14.91；实测值为C，55.24；H，6.79；N，15.10。

[实施例9]N^G-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]-Arg-OMe(化合物16)的制备

冰浴下将110mg(0.19mmol)N-Boc-N^G-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯基乙酰基]-Arg-OMe溶于15ml乙酸乙酯中。往得到的溶液中加入2.5ml氯化氢/乙酸乙酯溶液(4mol/l)、搅拌20分钟，TLC显示原料点消失。反应液减压浓缩至干，残留物用10ml乙酸乙酯溶解后再减压浓缩至干。该操作反复3次，以便除净残留的氯化氢。残留物再用10ml***溶解并减压浓缩至干，得到90mg(98％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3402、1760、1664、1605、1480、1452、1370、1270、830；ESI(m/e)＝477[M]⁺；ESI-MS(m/e)＝477[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-206.9(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₂H₃₃N₆O₆计算值为：C，55.33；H，6.97；N，17.60；实测值为C，55.51；H，6.60；N，17.78。

[实施例10]N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]-Arg-OMe(化合物17)的制备

往168mg(0.90mmol)H-Arg-OMe与8ml无水四氢呋喃的溶液中加入2.4ml N-甲基吗啉，调pH 9。得到的悬浮液与100mg(0.30mmol)1，3-二氧-2-(4-乙氧羰基甲氧基苯基)-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉与3ml无水四氢呋喃的溶液混合。反应混合物室温搅拌过夜，TLC显示原料点消失。反应混合物过滤、滤液减压浓缩至干、残留物用乙酸乙酯溶解，得到的溶液依次用5％KHSO₄水溶液洗、饱和NaHCO₃水溶液洗、饱和NaCl水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水Na₂SO₄干燥、过滤、滤液减压浓缩至干、残留物用硅胶柱层析分离(氯仿/甲醇，5∶1)，得到150mg(87％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3345、3239、1766、1662、1604、1485、1455、1396、1373、1275、836；ES I(m/e)＝491[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-159.2(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₃H₃₅N₆O₆计算值为：C，56.20；H，7.18；N，17.10；实测值为C，56.05；H，7.02；N，17.27。

[实施例11]N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]-Arg-OH(化合物18)的制备

往49mg(0.10mmol)N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯基乙酰基]-Arg-OMe与6ml甲醇的溶液中加入3ml NaOH水溶液(1mol/l)。反应混合物0℃搅拌1小时，TLC显示原料点消失。反应混合物减压浓缩，残留物与2ml饱和食盐水混合，用2mol/l盐酸调pH 5。得到的弱酸性溶液用乙酸乙酯萃取(6ml×3)。乙酸乙酯层减压浓缩至干得到43mg(73％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3389、2362-2594、1754、1662、1604、1477、1452、1274、835；ESI-MS(m/e)＝477[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-125.6(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₂H₃₃N₆O₆计算值为：C，55.33；H，6.97；N，17.60；实测值为C，55.52；H，6.78；N，17.44。

Boc-β-天冬氨酰[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基丙氨基]天冬氨酸和β-天冬氨酰[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基丙氨基]天冬氨酸的合成路线。

[中间体制备实施例7]Boc-Asp(NHCH₂CH₂Br)-OH(化合物19)的制备

冰浴下往500mg(2.1mmol)Boc-Asp-OH、435mg(2.1mmol)BrCH₂CH₂NH₂·HBr和30ml无水四氢呋喃的溶液中滴加1.4ml N-甲基吗啉，调pH 9。得到的溶液与440mg(2.1mmol)DCC及30ml无水四氢呋喃构成的溶液混合、0℃搅拌2小时、室温搅拌过夜、TLC显示原料点消失。反应混合加10％KHSO₄水溶液至pH 2-3、过滤、滤液减压浓缩、残留物加乙酸乙酯，滤出生成的无色固体，得到580mg(81％)标题化合物。IR(cm^-1，KBr)：3326、2360-2594、1750、1625、1482、1454、1395、1272、833；ESI-MS(m/e)＝338[M]⁺。[α]²⁰ _D＝-33.4元素分析：C₁₁H₁₉N₂O₅计算值为：C，38.95；H，5.65；N，8.26；实测值为C，39.13；H，5.82；N，8.42。

[实施例12]Boc-Asp[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-OH(化合物21)的制备

由226mg(0.91mmol)1，3-二氧-2-(4’-羟基苯基)-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉、243mg(0.72mmol)Boc-Asp(NHCH₂CH₂Br)-OH、240mg乙醇钠和6ml无水四氢呋喃构成的溶液于60℃搅拌2小时，TLC显示原料点消失。反应液过滤，滤液减压浓缩。残留物加10％KHSO₄水溶液并用乙酸乙酯提取。合并的有机相用饱和NaCl水溶液洗。分出乙酸乙酯层并用无水Na₂SO₄干燥、过滤、滤液减压浓缩至干、残留物用硅胶柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯，2∶1)，得到221mg(48％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3406、2342-2587、1750、1662、1603、1489、1450、1393、1270、830；ESI-MS(m/e)＝523[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-42.7(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₅H₃₉N₄O₈计算值为：C，57.35；H，7.51；N，10.70；实测值为C，57.21；H，7.69；N，10.52。

[实施例13]Asp[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-OH(化合物22)的制备

冰浴下将200mg(0.39mmol)Boc-Asp[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-OH溶解在5ml乙酸乙酯中，得到的溶液与3ml氯化氢/乙酸乙酯溶液(4mol/l)、搅拌40分钟，TLC显示原料点消失。反应液减压浓缩至干，残留物用10ml乙酸乙酯溶解后再减压浓缩至干。该操作反复3次，以便除净残留的氯化氢。残留物再用10ml***溶解并减压浓缩至干，得到150mg(94％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3416、2340-2581、1753、1660、1605、1484、1452、1272、834；ESI-MS(m/e)＝423[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-157.1(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₀H₃₁N₄O₆计算值为：C，56.72；H，7.38；N，13.23；实测值为C，56.90；H，7.56；N，13.07。

Boc-β-天冬氨酰[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基丙氨基]天冬氨酸甲酯和β-天冬氨酰[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基丙氨基]天冬氨酸甲酯的合成路线。

[中间体制备实施例8]Boc-Asp(NHCH₂CH₂Br)-OCH₃(化合物20)的制备

冰浴下往517mg(2.1mmol)Boc-Asp-OCH₃、435mg(2.1mmol)BrCH₂CH₂NH₂·HBr和30ml无水四氢呋喃的溶液中滴加1.4ml N-甲基吗啉，调pH 9。得到的溶液与440mg(2.1mmol)DCC及30ml无水四氢呋喃构成的溶液混合、0℃搅拌2小时、室温搅拌过夜、TLC显示原料点消失。反应混合加10％KHSO₄水溶液至pH 2-3、过滤、滤液减压浓缩、残留物加乙酸乙酯，滤出生成的无色固体，得到580mg(85％)标题化合物。IR(cm^-1，KBr)：3335、1754、1622、1480、1450、1395、1370、1274、835；ESI-MS(m/e)＝352[M]⁺。[α]²⁰ _D＝-42.5元素分析：C₁₂H₂₁N₂O₅计算值为：C，40.81；H，5.99；N，7.93；实测值为C，41.00；H，5.81；N，7.78。

[实施例14]Boc-Asp[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-OCH₃(化合物23)的制备

由226mg(0.91mmol)1，3-二氧-2-(4’-羟基苯基)-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉、253mg(0.72mmol)Boc-Asp(NHCH₂CH₂Br)-OCH₃、240mg乙醇钠和6ml无水四氢呋喃构成的溶液于60℃搅拌2小时，TLC显示原料点消失。反应液过滤，滤液减压浓缩。残留物加10％KHSO₄水溶液并用乙酸乙酯提取。合并的有机相用饱和NaCl水溶液洗。分出乙酸乙酯层并用无水Na₂SO₄干燥、过滤、滤液减压浓缩至干、残留物用硅胶柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯，2∶1)，得到264mg(54％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3406、1755、1660、1601、1454、1395、1370、1274、833；ESI-MS(m/e)＝537[M]⁺；[α]²⁰ _D＝？(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₆H₄₁N₄O₈计算值为：C，58.08；H，7.69；N，10.42；实测值为C，58.22；H，7.85；N，10.27。

[实施例15]Asp[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-OCH₃(化合物24)的制备

冰浴下将209mg(0.39mmol)Boc-Asp[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-OCH₃溶解在5ml乙酸乙酯中，得到的溶液与3ml氯化氢/乙酸乙酯溶液(4mol/l)、搅拌40分钟，TLC显示原料点消失。反应液减压浓缩至干，残留物用10ml乙酸乙酯溶解后再减压浓缩至干。该操作反复3次，以便除净残留的氯化氢。残留物再用10ml***溶解并减压浓缩至干，得到150mg(94％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3403、1756、1662、1603、1480、1450、1276、830；ESI-MS(m/e)＝437[M]⁺；[α]²⁰ _D＝？(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₁H₃₃N₄O₆计算值为：C，57.65；H，7.60；N，12.81；实测值为C，57.79；H，7.41；N，12.62。

Boc-γ-谷氨酰[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基丙氨基]谷氨酸和γ-谷氨酰[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基丙氨基]谷氨酸的合成路线。

[中间体制备实施例9]Boc-Glu(NHCH₂CH₂Br)-OH(化合物25)的制备

冰浴下往100mg(0.40mmol)HO-Glu(Boc)-OH、83mg(0.40mmol)BrCH₂CH₂NH₂.HBr和10ml无水四氢呋喃的溶液中滴加N-甲基吗啉，调pH 9。得到的溶液与83mg(0.40mmol)DCC和10ml无水四氢呋喃构成的溶液混合、0℃搅拌2小时、室温搅拌过夜，TLC显示原料点消失。反应混合物用10％KHSO₄水溶液调pH 2-3、过滤、滤液减压浓缩、残留物加乙酸乙酯、滤出生成的无色固体，得到54mg(38％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3326、2364-2597、1755、1625、1480、1453、1393、1270、830；ESI(m/e)＝352[M]⁺；IR(neat)：3326，1625cm^-1；[α]²⁰ _D＝-107.8(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₁₂H₂₁N₂O₅计算值为：C，40.81；H，5.99；N，7.93；实测值为C，41.00；H，6.19；N，7.75。

[实施例16]Boc-Glu[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-OH(化合物27)的制备

由150mg(0.6mmol)1，3-二氧-2-(4’-羟基苯基)-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉、253mg(0.72mmol)Boc-Glu(NHCH₂CH₂Br)-OH、210mg乙醇钠和15ml无水四氢呋喃构成的溶液于60℃搅拌2小时，TLC显示原料点消失。反应混合物过滤、滤液减压浓缩。残留物加KHSO₄水溶液(10％)溶解后用乙酸乙酯提取。合并的有机相用饱和NaCl水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水Na₂SO₄干燥、过滤、滤液减压浓缩至干、残留物用硅胶柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯，2∶1)，得到150mg(48％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3320、3252、2348-2590、1750、1662、1602、1486、1455、1270、836；ESI-MS(m/e)＝537[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-77.1(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₆H₄₁N₄O₈计算值为：C，58.08；H，7.69；N，10.42；实测值为C，58.22；H，7.86；N，10.23。

[实施例17]Glu[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-OH(化合物28)的制备

冰浴下将200mg(0.40mmol)Boc-Glu[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-OH溶解在15ml乙酸乙酯，然后加入2.5ml氯化氢/乙酸乙酯溶液(4mol/l)并搅拌20分钟，TLC显示原料点消失。反应液减压浓缩至干，残留物用10ml乙酸乙酯溶解后再减压浓缩至干。该操作反复3次，以便除净残留的氯化氢。残留物再用10ml***溶解并减压浓缩至干，得到160mg(100％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3366、2306-2570、1750、1662、1603、1486、1450、1270、836；ESI-MS(m/e)＝437[M]⁺，[α]²⁰ _D＝-116.5(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₁H₃₃N₄O₆计算值为：C，57.65；H，7.60；N，12.81；实测值为C，57.47；H，7.44；N，12.98。

Boc-γ-谷氨酰[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基丙氨基]谷氨酸甲酯γ-谷氨酰[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基丙氨基]谷氨酸甲酯的合成路线。

[中间体制备实施例10]Boc-Glu(NHCH₂CH₂Br)-OCH₃(化合物26)的制备

冰浴下往108mg(0.40mmol)HO-Glu(Boc)-OH、83mg(0.40mmol)BrCH₂CH₂NH₂.HBr和10ml无水四氢呋喃的溶液中滴加N-甲基吗啉，调pH 9。得到的溶液与83mg(0.40mmol)DCC和10ml无水四氢呋喃构成的溶液混合、0℃搅拌2小时、室温搅拌过夜，TLC显示原料点消失。反应混合物用10％KHSO₄水溶液调pH 2-3、过滤、滤液减压浓缩、残留物加乙酸乙酯、滤出生成的无色固体，得到81mg(55％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3328、1750、1626、1483、1450、1395、1275、833；ESI(m/e)＝367[M]⁺；IR(nea t)：3326，1625cm^-1；[α]²⁰ _D＝-80.6(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₁₃H₂₃N₂O₅计算值为：C，42.52；H，6.31；N，7.63；实测值为C，42.70；H，6.16；N，7.79。

[实施例18]Boc-Glu[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-OCH₃(化合物29)的制备

由150mg(0.6mmol)1，3-二氧-2-(4’-羟基苯基)-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉、264mg(0.72mmol)Boc-Glu(NHCH₂CH₂Br)-OCH₃、210mg乙醇钠和15ml无水四氢呋喃构成的溶液于60℃搅拌2小时，TLC显示原料点消失。反应混合物过滤、滤液减压浓缩。残留物加KHSO₄水溶液(10％)溶解后用乙酸乙酯提取。合并的有机相用饱和NaCl水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水Na₂SO₄干燥、过滤、滤液减压浓缩至干、残留物用硅胶柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯，2∶1)，得到150mg(48％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3329、3254、1752、1665、1604、1482、1450、1396、1371、1273、834；ESI-MS(m/e)＝551[M]⁺；[α]²⁰ _D＝？(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₇H₄₃N₄O₈计算值为：C，58.78；H，7.86；N，10.16；实测值为C，58.95；H，7.69；N，10.25。

[实施例19]Glu[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-OCH₃(化合物30)的制备

冰浴下将220mg(0.40mmol)Boc-Glu[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-OCH₃溶解在15ml乙酸乙酯，然后加入2.5ml氯化氢/乙酸乙酯溶液(4mol/l)并搅拌20分钟，TLC显示原料点消失。反应液减压浓缩至于，残留物用10ml乙酸乙酯溶解后再减压浓缩至干。该操作反复3次，以便除净残留的氯化氢。残留物再用10ml***溶解并减压浓缩至干，得到162mg(98％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3326、3252、1755、1661、1602、1485、1452、1371、1275、832；ESI-MS(m/e)＝451[M]⁺，[α]²⁰ _D＝？(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₂H₃₅N₄O₆计算值为：C，58.52；H，7.81；N，12.41；实测值为C，58.38；H，7.64；N，12.59。

Pro-Ala-[N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基乙酰基]Lys-OH的合成路线。

[实施例20]Boc-Ala-N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Lys-OCH₃(化合物31)的制备

冰浴下往166mg(0.37mmol)N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Lys-OCH₃、77mg(0.41mmol)Boc-Ala-OH、50mg(0.37mmol)HOBT和8ml无水四氢呋喃构成的溶液中滴加N-甲基吗啉调pH 9。得到的溶液与85mg(0.41mmol)DCC及8ml无水四氢呋喃构成的溶液混合、0℃搅拌2小时、室温搅拌过夜，TLC显示原料点消失。反应混合物过滤、滤液减压浓缩至干、残留物用乙酸乙酯溶解、得到的溶液依次用5％KHSO₄水溶液洗、饱和NaHCO₃水溶液洗、饱和NaCl水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水Na₂SO₄干燥、过滤、滤液减压浓缩至干、残留物用硅胶柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯，2∶1)，得到196mg(85％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3344、3251、1753、1662、1605、1480、1455、1395、1370、1274、832；ESI-MS(m/e)＝620[M]⁺，[α]²⁰ _D＝-132.0(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₃₀H₄₆N₅O₉计算值为：C，58.05；H，7.47；N，11.28；实测值为C，58.22；H，7.66；N，11.43。

[实施例21]Ala-N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Lys-OCH₃(化合物32)的制备

冰浴下将196mg(0.38mmol)Boc-Ala-N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Lys-OCH₃溶于10ml乙酸乙酯，然后加入2.5ml氯化氢/乙酸乙酯溶液(4mol/l)并搅拌12分钟，TLC显示原料点消失。反应液减压浓缩至干，残留物用10ml乙酸乙酯溶解后再减压浓缩至干。该操作反复3次，以便除净残留的氯化氢。残留物再用10ml***溶解并减压浓缩至干，得到164mg(93％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3340、3252、1750、1664、1603、1482、1454、1372、1276、830；ESI-MS(m/e)＝520[M]⁺；[α]²⁰ _D＝+112.2(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₅H₃₈N₅O₇计算值为：C，57.68；H，7.36；N，13.45；实测值为C，57.49；H，7.19；N，13.62。

[实施例22]Boc-Pro-Ala-N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Lys-OCH₃(化合物33)的制备

冰浴下往164mg(0.30mmol)Ala-N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Lys-OCH₃、75mg(0.35mmol)Boc-Pro-OH、43mg(0.32mmol)HOBT和8ml无水四氢呋喃构成的溶液中滴加N-甲基吗啉调pH 9。得到的溶液与72mg(0.35mmol)DCC及8ml无水四氢呋喃构成的溶液混合、0℃搅拌2小时、室温搅拌过夜，TLC显示原料点消失。反应混合物过滤、滤液减压浓缩至干、残留物用乙酸乙酯溶解、得到的溶液依次用5％KHSO₄水溶液洗、饱和NaHCO₃水溶液洗、饱和NaCl水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水Na₂SO₄干燥、过滤、滤液减压浓缩至干、残留物用硅胶柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯，2∶1)、得到170mg(80.5％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3360、3250、1754、1662、1605、1480、1452、1395、1370、1272、834；ESI-MS(m/e)＝717[M]⁺；[α]²⁰ _D＝+169.4(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₃₅H₅₃N₆O₁₀计算值为：C，58.56；H，7.44；N，11.71；实测值为C，58.38；H，7.62；N，11.90。

[实施例23]Boc-Pro-Ala-N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Lys-OH(化合物34)的制备

由250mg(0.35mmol)Boc-Pro-Ala-N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Lys-OCH₃和15ml甲醇构成的溶液与2mlNaOH(1mol/l)水溶液混和后0℃搅拌30分钟，TLC显示原料点消失。反应混合物减压浓缩，残留物用10ml饱和食盐水溶解并用盐酸(2mol/l)调pH 5。得到的弱酸性溶液用乙酸乙酯萃取(3ml×3)、分离的乙酸乙酯层用无水Na₂SO₄干燥、过滤、滤液减压浓缩至干，得到230mg(94％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3334、3250、2316-2572、1755、1660、1605、1484、1453、1275、834；ESI-MS(m/e)＝703[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-136.0(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₃₄H₅₁N₆O₁₀计算值为：C，58.02；H，7.30；N，11.94；实测值为C，58.21；H，7.49；N，11.77。

[实施例24]Pro-Ala-N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Lys-OH(化合物35)的制备

冰浴下将200mg(0.29mmol)Boc-Pro-Ala-N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Lys-OH和10ml乙酸乙酯的溶液与3ml氯化氢/乙酸乙酯溶液(4mol/l)混合并搅拌60分钟，TLC显示原料点消失。反应液减压浓缩至干，残留物用10ml乙酸乙酯溶解后再减压浓缩至干。该操作反复3次，以便除净残留的氯化氢。残留物再用10ml***溶解并减压浓缩至干，得到170mg(99％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3320、3239、2312-2574、1751、1662、1603、1483、1455、1270、832；ESI-MS(m/e)＝603[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-166.5(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₉H₄₃N₆O₈计算值为：C，57.70；H，7.18；N，13.92；实测值为C，57.53；H，7.00；N，13.74。

N^G-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基乙酰基]Arg-Gly-Asp-Val-OH的合成路线。

[实施例25]N^α-Boc-N^G-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]Arg-Gly-OMe(化合物36)的制备

冰浴下往380mg(0.68mmol)N-Boc-N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]Arg-OH、85mg(0.68mmol)HCl·GlyOMe、90mg(0.68mmol)HOBT和15ml无水四氢呋喃构成的溶液中滴加N-甲基吗啉，调pH 9。得到的溶液与180mg(0.87mmol)DCC及3ml无水四氢呋喃的溶液混合、0℃搅拌2小时、室温搅拌过夜，TLC显示原料点消失。反应混合物过滤、滤液减压浓缩至干、残留物用乙酸乙酯溶解，得到的溶液依次用5％KHSO₄水溶液洗、饱和NaHCO₃水溶液洗、饱和NaCl水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水Na₂SO₄干燥、过滤、滤液减压浓缩至干、残留物用硅胶柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯，2∶1)，得到420mg(98％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3339、3253、1752、1664、1603、1482、1455、1396、1372、1275、830；ESI-MS(m/e)＝634[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-48.3(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₉H₄₄N₇O₉计算值为：C，54.88；H，6.99；N，15.45；实测值为C，54.70；H，7.17；N，15.62。

[实施例26].N^α-Boc-N^G-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]Arg-Gly-OH(化合物37)的制备

由250mg(0.35mmol)N-Boc-N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]Arg-Gly-OMe和15ml甲醇构成的溶液与2ml NaOH(1mol/l)水溶液混合，反应混合物0℃搅拌1小时，TLC显示原料点消失。反应混合物减压浓缩，残留物用10ml饱和食盐水溶解并用盐酸(2mol/l)调pH 5。得到的弱酸性溶液用乙酸乙酯萃取(10ml×3)、分离的乙酸乙酯层用无水Na₂SO₄干燥、过滤、滤液减压浓缩至干，得到210mg(95％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3328、3233、2314-2577、1753、1665、1606、1485、1452、1274、835；ESI-MS(m/e)＝620[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-259.1(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₈H₄₂N₇O₉计算值为：C，54.18；H，6.82；N，15.80；实测值为C，54.36；H，7.02；N，15.63。

[实施例27]N^α-Boc-N^G-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]Arg-Gly-Asp(OBzl)-Val-OMe(化合物38)的制备

冰浴下往270mg(0.44mmol)N-Boc-N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]Arg-Gly-OH、150mg(0.44mmol)HCl·Asp(Bzl)-Val-OMe、60mg(0.44mmol)HOBT和10ml无水四氢呋喃的溶液中滴加N-甲基吗啉，调pH 9。得到的溶液与100mg(0.49mmol)DCC及5ml无水四氢呋喃构成的溶液混合、0℃搅拌2小时、室温搅拌过夜，TLC显示原料点消失。反应混合物过滤、滤液减压浓缩至干、残留物用乙酸乙酯溶解，得到的溶液依次用5％KHSO₄水溶液洗、饱和NaHCO₃水溶液洗、饱和NaCl水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水Na₂SO₄干燥、过滤、滤液减压浓缩至干、残留物用硅胶柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯，2∶1)，得到240mg(59％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3329、3250、1750、1662、1606、1480、1452、1395、1370、1274、833；ESI-MS(m/e)＝924[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-70.9(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₄₄H₆₂N₉O₁₃计算值为：C，57.13；H，6.76；N，13.63；实测值为C，57.30；H，6.91；N，13.45。

[实施例28]N^α-Boc-N^G-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]Arg-Gly-Asp-Val-OH(化合物39)的制备

由240mg(0.26mmol)N-Boc-N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]Arg-Gly-Asp(OBzl)-Va l-OMe和15ml甲醇构成的溶液与5ml NaOH(1mol/l)水溶液混合，反应混合物0℃搅拌1小时，TLC显示原料点消失。反应混合物减压浓缩，残留物用10ml饱和食盐水溶解并用盐酸(2mol/l)调pH 5。得到的弱酸性溶液用乙酸乙酯萃取(10ml×3)、分离的乙酸乙酯层用无水Na₂SO₄干燥、过滤、滤液减压浓缩至干，得到200mg(97％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3332、3230、2325-2586、1755、1662、1604、1482、1455、1276、835；ESI-MS(m/e)＝834[M]⁺；[α]²⁰ _D＝+13.8(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₃₇H₅₆N₉O₁₃计算值为：C，52.23；H，6.76；N，15.10；实测值为C，52.40；H，6.89；N，15.28。

[实施例29]N^G-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]Arg-Gly-Asp-Val-OH(化合物40)的制备

冰浴下将200mg(0.26mmol)N-Boc-N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]Arg-Gly-Asp-Val-OH和10ml乙酸乙酯的溶液与3ml氯化氢/乙酸乙酯溶液(4mol/l)混合并搅拌30分钟，TLC显示原料点消失。反应液减压浓缩至干，残留物用10ml乙酸乙酯溶解后再减压浓缩至干。该操作反复3次，以便除净残留的氯化氢。残留物再用10ml***溶解并减压浓缩至干，得到180mg(97％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3329、3232、2318-2579、1753、1660、1605、1480、1453、1272、830；ESI-MS(m/e)＝734[M]⁺；[α]²⁰ _D＝+11.5(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₃₂H₄₈N₉O₁₁计算值为：C，52.31；H，6.58；N，17.16；实测值为C，52.49；H，6.76；N，17.36。

Arg-Gly-[β-天冬氨酰[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基丙氨基]Asp-Ser-OH的合成路线

[实施例30]Boc-Asp-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Ser-OCH₃(化合物41)的制备

冰浴下往209mg(0.40mmol)Boc-Asp-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-OH、62mg(0.40mmol)HCl·Ser-OMe、54mg(0.40mmol)HOBt和10ml无水四氢呋喃的溶液中滴加N-甲基吗啉，调pH9。得到的溶液与80mg(0.40mmol)DCC及10ml无水四氢呋喃的溶液混合、0℃搅拌2小时、室温搅拌过夜，TLC显示原料点消失。反应混合物过滤、滤液减压浓缩至干、残留物用乙酸乙酯溶解，得到的溶液依次用5％KHSO₄水溶液洗、饱和NaHCO₃水溶液洗、饱和NaCl水溶液洗，分出的乙酸乙酯层用无水Na₂SO₄干燥，过滤、滤液减压浓缩至干、残留物用硅胶柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯，2∶1)、得到231mg(95％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3433、3330、3252、1753、1664、1604、1485、1451、1394、1372、1270、834；ESI-MS(m/e)＝608[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-100.4(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₈H₄₂N₅O₁₀计算值为：C，52.31；H，6.58；N，17.16；实测值为C，52.50；H，6.41；N，17.33。

[实施例31]Asp-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Ser-OCH₃(化合物42)的制备

冰浴下540mg(0.892mmol)Boc-Asp-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Ser-OCH₃和12ml乙酸乙酯构成的溶液与2.5ml氯化氢/乙酸乙酯溶液(4mol/l)混合并搅拌45分钟，TLC显示原料点消失。反应液减压浓缩至干，残留物用10ml乙酸乙酯溶解后再减压浓缩至干。该操作反复3次，以便除净残留的氯化氢。残留物再用10ml***溶解并减压浓缩至干，得到450mg(98％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3430、3335、3250、1756、1667、1605、1483、1456、1372、1274、832；ESI-MS(m/e)＝508[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-78.1(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₃H₃₄N₅O₈计算值为：C，54.32；H，6.74；N，13.77；实测值为C，54.18；H，6.57；N，13.95。

[实施例32]Boc-Gly-Asp-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Ser-OCH₃(化合物43)的制备

冰浴下往225mg(0.45mmol)Asp-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Ser-OCH₃、78mg(0.45mmol)Boc-Gly-OH、61mg(0.45mmol)HOBT和10ml无水四氢呋喃的溶液中滴加N-甲基吗啉，调pH9。得到的溶液与90mg(0.45mmol)DCC及5ml无水四氢呋喃的溶液混合、0℃搅拌2小时、室温搅拌过夜，TLC显示原料点消失。反应混合物过滤、滤液减压浓缩至干、残留物用乙酸乙酯溶解，得到的溶液依次用5％KHSO₄水溶液洗、饱和NaHCO₃水溶液洗、饱和NaCl水溶液洗。分出的乙酸乙酯层用无水Na₂SO₄干燥、过滤、滤液减压浓缩至干、残留物用硅胶柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯，2∶1)，得到36mg(61％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3430、3334、3250、1751、1662、1606、1483、1450、1395、1375、1272、830；ESI-MS(m/e)＝665[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-53.8(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₃₀H₄₅N₆O₁₁计算值为：C，54.13；H，6.81；N，12.62；实测值为C，54.30；H，7.00；N，12.81。

[实施例33]Gly-Asp-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Ser-OCH₃(化合物44)的制备

冰浴下360mg(0.54mmol)Boc-Gly-Asp-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Ser-OCH₃和10ml乙酸乙酯构成的溶液与35ml氯化氢/乙酸乙酯溶液(4mol/l)混合并搅拌35分钟，TLC显示原料点消失。反应液减压浓缩至干，残留物用10ml乙酸乙酯溶解后再减压浓缩至干。该操作反复3次，以便除净残留的氯化氢。残留物再用10ml***溶解并减压浓缩至干，得到300mg(98％)标题化合物，为兰色固体。ESI-MS(m/e)＝565[M]⁺；IR(cm^-1，KBr)：3430、3334、3250、1751、1662、1606、1483、1450、1395、1375、1272、830；[α]²⁰ _D＝-121.7(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₅H₃₇N₆O₉计算值为：C，53.09；H，6.59；N，14.86；实测值为C，52.91；H，6.41；N，14.68。

[实施例34]Boc-Arg-Gly-Asp-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Ser-OCH₃(化合物45)的制备

冰浴下往360mg(0.64mmol)Gly-Asp-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Ser-OCH₃、175mg(0.54mmol)Boc-Arg-OH、73mg(0.54mmol)HOBt和15ml无水四氢呋喃中滴加N-甲基吗啉，调pH 9。得到的溶液与108mg(0.54mmol)DCC和5ml无水四氢呋喃的溶液混合、0℃搅拌2小时、室温搅拌过夜，TLC显示原料点消失。反应混合物过滤、滤液减压浓缩至干、残留物用乙酸乙酯溶解，得到的溶液依次用5％KHSO₄水溶液洗、饱和NaHCO₃水溶液洗、饱和NaCl水溶液洗、分出的乙酸乙酯层用无水Na₂SO₄干燥、过滤、滤液减压浓缩至干、残留物用硅胶柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯，2∶1)，得到244mg(55％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3429、3330、3252、1752、1664、1603、1481、1452、1396、1372、1275、833；ESI-MS(m/e)＝821[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-148.4(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₃₆H₅₇N₁₀O₁₂计算值为：C，52.61；H，6.99；N，17.04；实测值为C，52.42；H，6.80；N，17.22。

[实施例35]Boc-Arg-Gly-Asp-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Ser-OH(化合物46)的制备

由170mg(0.21mmol)Boc-Arg-Gly-Asp-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Ser-OCH₃和10ml甲醇构成的溶液与3mlNaOH(1mol/l)水溶液混合，反应混合物0℃搅拌1小时，TLC显示原料点消失。反应混合物减压浓缩，残留物用10ml饱和食盐水溶解并用盐酸(2mol/l)调pH 5。得到的弱酸性溶液用乙酸乙酯萃取(15ml×3)、分离的乙酸乙酯层用无水Na₂SO₄干燥、过滤、滤液减压浓缩至干，得到142mg(84％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3329、3232、2318-2579、1753、1660、1605、1480、1453、1272、830；ESI-MS(m/e)＝807[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-171.3(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₃₅H₅₅N₁₀O₁₂计算值为：C，52.03；H，6.86；N，17.34；实测值为C，51.86；H，6.70；N，17.17。

[实施例36]Arg-Gly-Asp-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Ser-OH(化合物47)的制备

冰浴下140mg(0.89mmol)Boc-Arg-Gly-Asp-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Ser-OH和10ml乙酸乙酯构成的溶液与3.5ml氯化氢/乙酸乙酯溶液(4mol/l)混合并搅拌15分钟，TLC显示原料点消失。反应液减压浓缩至干，残留物用10mi乙酸乙酯溶解后再减压浓缩至干。该操作反复3次，以便除净残留的氯化氢。残留物再用10ml***溶解并减压浓缩至干，得到120mg(98％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3332、3239、2325-2584、1750、1664、1602、1483、1455、1274、835；ESI-MS(m/e)＝707[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-138.5(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₃₀H₄₇N₁₀O₁₀计算值为：C，50.91；H，6.69；N，19.79；实测值为C，51.10；H，6.51；N，19.98。

γ-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基丙氨基]Glu-Cys-Gly-OH的合成路线。

[实施例37]Boc-Glu-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Cys-OMe(化合物48)的制备

冰浴下往200mg(0.38mmol)Boc-Glu-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-OH、72mg(0.42mmol)HCl·Cys-OMe、50mg(0.38mmol)HOBT和10ml无水四氢呋喃的溶液中滴加N-甲基吗啉，调pH9。得到的溶液与90mg(0.42mmol)DCC及5ml无水四氢呋喃的溶液混合、0℃搅拌2小时、室温搅拌过夜，TLC显示原料点消失。反应混合物过滤、滤液减压浓缩至干、残留物用乙酸乙酯溶解，得到的溶液依次用5％KHSO₄水溶液洗、饱和NaHCO₃水溶液洗、饱和NaCl水溶液洗、分出的乙酸乙酯层用无水Na₂SO₄干燥、过滤、滤液减压浓缩至干、残留物用硅胶柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯，2∶1)，得到230mg(95％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3430、3326、3245、1750、1661、1607、1482、1454、1395、1370、1272、835；ESI-MS(m/e)＝638[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-91.0(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₉H₄₄N₅O₉S计算值为：C，54.53；H，6.94；N，10.96；实测值为C，54.70；H，7.13；N，10.78。

[实施例38]Boc-Glu-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Cys-OH(化合物49)的制备

由230mg(0.37mmol)Boc-Glu-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Cys-OMe和15ml甲醇构成的溶液与5ml NaOH(1mol/l)水溶液混合，反应混合物0℃搅拌1小时，TLC显示原料点消失。反应混合物减压浓缩，残留物用10ml饱和食盐水溶解并用盐酸(2mol/l)调pH 5。得到的弱酸性溶液用乙酸乙酯萃取(3ml×3)、分离的乙酸乙酯层用无水Na₂SO₄干燥、过滤、滤液减压浓缩至干，得到170mg(70％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3336、3232、2329-2588、1753、1662、1605、1480、1453、1272、833；ESI-MS(m/e)＝624[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-115.7(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₈H₄₂N₅O₉S计算值为：C，53.83；H，6.78；N，11.21；实测值为C，53.66；H，6.96；N，11.40。

[实施例39]Boc-Glu-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Cys-Gly-OMe(化合物50)的制备

冰浴下往160mg(0.25mmol)Boc-Glu-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Cys-OH、40mg(0.31mmol)HCl·Gly-OMe、40mg(0.30mmol)HOBt和10ml无水四氢呋喃的溶液中滴加N-甲基吗啉，调pH 9。得到的溶液与62mg(0.29mmol)DCC及10ml无水四氢呋喃的溶液混合、0℃搅拌2小时、室温搅拌过夜，TLC显示原料点消失。反应混合物过滤、滤液减压浓缩至干、残留物用乙酸乙酯溶解，得到的溶液依次用5％KHSO₄水溶液洗、饱和NaHCO₃水溶液洗、饱和NaCl水溶液洗、分出的乙酸乙酯层用无水Na₂SO₄干燥、过滤、滤液减压浓缩至干、残留物用硅胶柱层析分离(石油醚/乙酸乙酯，2∶1)，得到156mg(90％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3427、3320、3242、1755、1663、1604、1476、1455、1396、1372、1275、834；ESI-MS(m/e)＝695[M]⁺；[α]²⁰ _D＝+161.9(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₃₁H₄₇N₆O₁₀S计算值为：C，53.51；H，6.81；N，12.08；实测值为C，53.69；H，6.98；N，11.84。

[实施例40]Boc-Glu-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Cys-Gly-OH(化合物51)的制备

由120mg(0.16mmol)Boc-Glu-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Cys-Gly-OMe和15ml甲醇构成的溶液与5ml NaOH(1mol/l)水溶液混合，反应混合物0℃搅拌2小时，TLC显示原料点消失。反应混合物减压浓缩，残留物用2ml饱和食盐水溶解并用盐酸(2mol/l)调pH 5。得到的弱酸性溶液用乙酸乙酯萃取(3ml×3)、分离的乙酸乙酯层用无水Na₂SO₄干燥、过滤、滤液减压浓缩至干，得到60mg(51％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3332、3228、2341-2583、1756、1660、1603、1485、1450、1274、835；ESI-MS(m/e)＝681[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-304.4(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₃₀H₄₅N₆O₁₀S计算值为：C，52.85；H，6.65；N，12.33；实测值为C，52.67；H，6.47；N，12.51。

[实施例41]Glu-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Cys-Gly-OH(化合物52)的制备

冰浴下120mg(0.18mmol)Boc-Glu-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]-Cys-Gly-OH和10ml乙酸乙酯构成的溶液与2.5ml氯化氢/乙酸乙酯溶液(4mol/l)混合并搅拌40分钟，TLC显示原料点消失。反应液减压浓缩至干，残留物用10ml乙酸乙酯溶解后再减压浓缩至干。该操作反复3次，以便除净残留的氯化氢。残留物再用10ml***溶解并减压浓缩至干，得到80mg(78％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3340、3235、2328-2582、1754、1666、1605、1480、1456、1277、836；ESI-MS(m/e)＝581[M]⁺；[α]²⁰ _D＝+124.5(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₂₅H₃₇N₆O₈S计算值为：C，51.62；H，6.41；N，14.45；实测值为C，51.44；H，6.23；N，14.63。

N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基乙酰基]Arg-Gly-Asp-AA-OH的合成路线，70和73中AA＝Ser、71和74中AA＝Val、72和75中AA＝Phe。

[中间体制备实施例11]Boc-Ser(Bzl)OBzl(化合物53)的制备

33mg(0.10mmol)Cs2CO3溶于蒸馏水，加入到59mg(0.20mmol)Boc-Ser(Bzl)-OH的无水乙醇溶液中，40min后减压除去溶剂，残留物置于干燥器过夜，得到的白色固体溶于无水DMF，滴加34mg(0.2mmol)溴苄，于50℃恒温搅拌16hr后，滤除CsBr沉淀，滤液减压蒸馏至干，残留物用乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠、5％硫氢酸钾水溶液洗涤，分出的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在37℃下减压浓缩，残留物以石油醚研磨，得到76mg(99％)标题化合物。

[中间体制备实施例12]HCl Ser(Bzl)OBzl(化合物54)的制备

77mg(0.2mmol)Boc-Ser(Bzl)OBzl溶于6ml 4mol/L无水氯化氢-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，1hr后TLC显示原料点消失。反应混合物在室温下减压浓缩，残留物用乙酸乙酯溶解并在室温下浓缩，如此反复数次，直到除净游离的氯化氢。残留物用无水***研磨，得标题化合物，直接用于下一步反应。

[中间体制备实施例13]Boc-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)OBzl(化合物55)的制备

63mg(0.2mmol)Boc-Asp(OcHex)-OH溶于3ml无水THF中，冰溶下加入30mg(0.22mmol)N-羟基苯并三氮唑和48mg(0.22mmol)DCC，混合30min后待用。将64mg(0.2mmol)HCl  Ser(Bzl)OBzl溶于5ml无水THF，滴加N-甲基吗啉使溶液pH9，加入上面得到的混合物，0℃反应2hr后，室温反应12hr，TLC显示原料点消失，停止反应，滤除DCU，滤液在37℃减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠、5％硫氢酸钾水溶液洗涤，分出的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在37℃下减压浓缩至干，得到114mg(98％)标题化合物，为无色固体；[α]²⁰ _D＝15(C＝0.2，CHCl₃)。

[中间体制备实施例14]HCl Asp(OcHex)-Ser(Bzl)OBzl(化合物56)的制备

116mg(0.2mmol)Boc-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)OBzl溶于6ml 4mol/L无水氯化氢-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，1hr后TLC显示原料点消失。反应混合物在室温下减压浓缩，残留物用乙酸乙酯溶解并在室温下浓缩，如此反复数次，直到除净游离的氯化氢。残留物用无水***研磨，得标题化合物，直接用于下一步反应。

[中间体制备实施例15]Boc-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)OBzl(化合物57)的制备

35mg(0.2mmol)Boc-Gly-OH溶于3ml无水THF中，冰溶下加入30mg(0.22mmol)N-羟基苯并三氮唑和48mg(0.22mmol)DCC，混合30min后待用。将104mg(0.2mmol)HCl Asp(OcHex)-Ser(Bzl)OBzl溶于5ml无水THF，滴加N-甲基吗啉使溶液pH8-9，加入上面得到的混合物，0℃反应2hr后，室温反应12hr，TLC显示原料点消失，停止反应，滤除DCU，滤液在37℃减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠、5％硫氢酸钾水溶液洗涤，分出的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在37℃下减压浓缩至干，得到120mg(94％)标题化合物，为无色固体。[α]²⁰ _D＝-3(C2，CHCl₃)。

[中间体制备实施例16]HCl·Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)OBzl(化合物58)的制备

128mg(0.2mmol)Boc-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)OBzl溶于6ml 4mol/L无水氯化氢-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，1hr后TLC显示原料点消失。反应混合物在室温下减压浓缩，残留物用乙酸乙酯溶解并在室温下浓缩，如此反复数次，直到除净游离的氯化氢。残留物用无水***研磨，得标题化合物，直接用于下一步反应。

[中间体制备实施例17]HCl·ValOBzl(化合物59)的制备

61mg(0.2mmol)Boc-ValOBzl溶于6ml 4mol/L无水氯化氢-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，1hr后TLC显示原料点消失。反应混合物在室温下减压浓缩，残留物用乙酸乙酯溶解并在室温下浓缩，如此反复数次，直到除净游离的氯化氢。残留物用无水***研磨，得标题化合物，直接用于下一步反应。

[中间体制备实施例18]Boc-Asp(OcHex)-ValOBzl(化合物60)的制备

63mg(0.2mmol)Boc-Asp(OcHex)-OH溶于3ml无水THF中，冰溶下加入30mg(0.22mmol)N-羟基苯并三氮唑和48mg(0.22mmol)DCC，混合30min后待用。将49mg(0.2mmol)HCl ValOBzl溶于5ml无水THF，滴加N-甲基吗啉使溶液pH8-9，加入上面得到的混合物，0℃反应2hr后，室温反应12hr，TLC显示原料点消失，停止反应，滤除DCU，滤液在37℃减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠、5％硫氢酸钾水溶液洗涤，分出的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在37℃下减压浓缩至干，得到99mg(98％)标题化合物，为无色固体。[α]²⁰ _D＝13(C2，CHCl₃)

[中间体制备实施例19]HCl Asp(OcHex)-ValOBzl(化合物61)的制备

101mg(0.2mmol)Boc-Asp(OcHex)-ValOBzl溶于6ml 4mol/L无水氯化氢-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，1hr后TLC显示原料点消失。反应混合物在室温下减压浓缩，残留物用乙酸乙酯溶解并在室温下浓缩，如此反复数次，直到除净游离的氯化氢。残留物用无水***研磨，得标题化合物，直接用于下一步反应。

[中间体制备实施例20]Boc-Gly-Asp(OcHex)-ValOBzl(化合物62)的制备

35mg(0.2mmol)Boc-Gly-OH溶于3ml无水THF中，冰溶下加入30mg(0.22mmol)N-羟基苯并三氮唑和48mg(0.22mmol)DCC，混合30min后待用。将88mg(0.2mmol)HCl Asp(OcHex)-ValOBzl溶于5ml无水THF，滴加N-甲基吗啉使溶液pH8-9，加入上面得到的混合物，0℃反应2hr后，室温反应12hr，TLC显示原料点消失，停止反应，滤除DCU，滤液在37℃减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠、5％硫氢酸钾水溶液洗涤，分出的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在37℃下减压浓缩至干，得到107mg(95％)标题化合物，为无色固体。[α]²⁰ _D＝7(C2，CHCl₃)

[中间体制备实施例21]HCl·Gly-Asp(OcHex)-ValOBzl(化合物63)的制备

112mg(0.2mmol)Boc-Gly-Asp(OcHex)-ValOBzl溶于6ml 4mol/L无水氯化氢-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，1hr后TLC显示原料点消失。反应混合物在室温下减压浓缩，残留物用乙酸乙酯溶解并在室温下浓缩，如此反复数次，直到除净游离的氯化氢。残留物用无水***研磨，得标题化合物，直接用于下一步反应。

[中间体制备实施例22]Boc-PheOBzl(化合物64)的制备

33mg(0.10mmol)Cs2CO3溶于蒸馏水，加入到53mg(0.20mmol)Boc-Phe-OH的无水乙醇溶液中，40min后减压除去溶剂，残留物置于干燥器过夜，得到的白色固体溶于无水DMF，滴加34mg(0.2mmol)溴苄，于50℃恒温搅拌16hr后，滤除CsBr沉淀，滤液减压蒸馏至干，残留物用乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠、5％硫氢酸钾水溶液洗涤，分出的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在37℃下减压浓缩，残留物以石油醚研磨，得到70mg(99％)标题化合物，为无色固体。

[中间体制备实施例23]HCl·PheOBzl(化合物65)的制备

71mg(0.2mmol)Boc-PheOBzl溶于6ml 4mol/L无水氯化氢-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，1hr后TLC显示原料点消失。反应混合物在室温下减压浓缩，残留物用乙酸乙酯溶解并在室温下浓缩，如此反复数次，直到除净游离的氯化氢。残留物用无水***研磨，得标题化合物，直接用于下一步反应。

[中间体制备实施例24]Boc-Asp(OcHex)-PheOBzl(化合物66)的制备

63mg(0.2mmol)Boc-Asp(OcHex)-OH溶于3ml无水THF中，冰溶下加入30mg(0.22mmol)N-羟基苯并三氮唑和48mg(0.22mmol)DCC，混合30min后待用。将58mg(0.2mmol)HCl PheOBzl溶于5ml无水THF，滴加N-甲基吗啉使溶液pH8-9，加入上面得到的混合物，0℃反应2hr后，室温反应12hr，TLC显示原料点消失，停止反应，滤除DCU，滤液在37℃减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠、5％硫氢酸钾水溶液洗涤，分出的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在37℃下减压浓缩至干，得到109mg(98％)标题化合物，为无色固体。[α]²⁰ _D＝12(C2，CHCl₃)

[中间体制备实施例25]HCl·Asp(OcHex)-PheOBzl(化合物67)的制备

冰浴下将110mg(0.2mmol)Boc-Asp(OcHex)-PheOBzl溶于6ml 4mol/L无水氯化氢-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，1hr后TLC显示原料点消失。反应液减压浓缩至干，残留物用10ml乙酸乙酯溶解后再减压浓缩至干。该操作反复3次，以便除净残留的氯化氢。残留物再用10ml***溶解并减压浓缩至干，得标题化合物，直接用于下一步反应。

[中间体制备实施例26]Boc-Gly-Asp(OcHex)-PheOBzl(化合物68)的制备

35mg(0.2mmol)Boc-Gly-OH溶于3ml无水THF中，冰溶下加入30mg(0.22mmol)N-羟基苯并三氮唑和48mg(0.22mmol)DCC，混合30min后待用。将98mg(0.2mmol)HCl Asp(OcHex)-PheOBzl溶于5ml无水THF，滴加N-甲基吗啉使溶液pH8-9，加入上面得到的混合物，0℃反应2hr后，室温反应12hr，TLC显示原料点消失，停止反应，滤除DCU，滤液在37℃减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠、5％硫氢酸钾水溶液洗涤，分出的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在37℃下减压浓缩至干，得到12lmg(97％)标题化合物，为无色固体。[α]²⁰ _D＝-2(C2，CHCl₃)

[中间体制备实施例27]HCl·Gly-Asp(OcHex)-PheOBzl(化合物69)的制备

冰浴下将122mg(0.2mmol)Boc-Gly-Asp(OcHex)-PheOBzl溶于6ml4mol/L无水氯化氢-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，1hr后TLC显示原料点消失。反应液减压浓缩至干，残留物用10ml乙酸乙酯溶解后再减压浓缩至干。该操作反复3次，以便除净残留的氯化氢。残留物再用10ml***溶解并减压浓缩至干，得标题化合物，直接用于下一步反应。

[实施例42]N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]Arg-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl(化合物70)的制备

95mg(0.20mmol)N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]Arg-OH溶于4ml无水THF，冰溶下加入30mg(0.22mmol)N-羟基苯并三氮唑和48mg(0.22mmol)DCC，混合30min后待用。将115mg(0.2mmol)HCl·Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)OBzl溶于5ml无水THF，滴加N-甲基吗啉使溶液pH8-9，加入上面得到的混合物，0℃反应2h后，室温反应12h，TLC显示原料点消失，停止反应，滤除DCU，滤液在37℃减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠、5％硫氢酸钾水溶液洗涤，分出的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在37℃下减压浓缩至干，得标题化合物191mg(97％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3341、3332、3240、1750、1663、1603、1485、1456、1276、834；ESI-MS(m/e)＝985[M]⁺；[α]²⁰ _D＝17.8(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₅₀H₆₆N₉O₁₂计算值为：C，60.96；H，6.75；N，12.80；实测值为C，61.15；H，6.56；N，12.62。

[实施例43]N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]Arg-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl(化合物71)的制备

95mg(0.20mmol)N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]Arg-OH溶于4ml无水THF，冰溶下加入30mg(0.22mmol)N-羟基苯并三氮唑和48mg(0.22mmo l)DCC，混合30min后待用。将100mg(0.2mmol)HCl·Gly-Asp(OcHex)-Val(Bzl)OBzl溶于5ml无水THF，滴加N-甲基吗啉使溶液pH8-9，加入上面得到的混合物，0℃反应2h后，室温反应12h，TLC显示原料点消失，停止反应，滤除DCU，滤液在37℃减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠、5％硫氢酸钾水溶液洗涤，分出的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在37℃下减压浓缩至干，得标题化合物171mg(94％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3338、3330、3242、1753、1662、1604、1486、1452、1277、836；ESI-MS(m/e)＝907[M]⁺；[α]²⁰ _D＝19.5(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₄₅H₆₄N₉O₁₁计算值为：C，59.59；H，7.11；N，13.90；实测值为C，59.39.15；H，7.27；N，13.72。

[实施例44]N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]Arg-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl(化合物72)的制备

91mg(0.20mmol)N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙氨基]Arg-OH溶于4ml无水THF，冰溶下加入30mg(0.22mmol)N-羟基苯并三氮唑和48mg(0.22mmol)DCC，混合30min后待用。将109mg(0.2mmol)HCl·Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)OBzl溶于5ml无水THF，滴加N-甲基吗啉使溶液pH8-9，加入上面得到的混合物，0℃反应2h后，室温反应12h，TLC显示原料点消失，停止反应，滤除DCU，滤液在37℃减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠、5％硫氢酸钾水溶液洗涤，分出的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在37℃下减压浓缩至干，得标题化合物191mg(97％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3339、3330、3244、1752、1661、1605、1486、1452、1274、832；ESI-MS(m/e)＝954[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-13(C＝0.2，CHCl₃∶CH₃OH，10∶1)。元素分析：C₄₉H₆₄N₉O₁₁计算值为：C，61.62；H，6.75；N，13.20；实测值为C，61.44；H，6.92；N，13.37。

[实施例45]N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]Arg-Gly-Asp-Ser-OH(化合物73)的制备

99mg(0.1mmol)N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl与1ml苯甲醚及2ml无水HF混合、0℃反应1小时、减压除去HF。再次通入6ml HF、0℃反应1小时、减压除去HF。残留物用无水***固化，得到的无色固体物在***中放置过夜后转变为兰色。兰色固体用SephadexG10纯化，用蒸馏水洗脱。收集兰色带、冷冻干燥、得到55mg(76％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3337、3326、3235、2327-2588、1755、1662、1604、1483、1454、1276、833；ESI-MS(m/e)＝722[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-40.0(C＝1.0，H₂O)。元素分析：C₃₀H₄₄N₉O₁₂计算值为：C，49.86；H，6.14；N，17.44；实测值为C，49.67；H，6.31；N，17.30。

[实施例46]N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]Arg-Gly-Asp-Va l-OH(化合物74)的制备

95mg(0.1mmol)N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]Arg-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl与1ml苯甲醚及2ml无水HF混合、0℃反应1小时、减压除去HF。再次通入6ml HF、0℃反应1小时、减压除去HF。残留物用无水***固化，得到的无色固体物在***中放置过夜后转变为兰色。兰色固体用SephadexG10纯化，用蒸馏水洗脱。收集兰色带、冷冻干燥、得56mg(76％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3341、3329、3233、2329-2589、1753、1664、1605、1480、1456、1274、836；ESI-MS(m/e)＝734[M]⁺；[α]²⁰ _D＝17.0(C＝1.0，H₂O)。元素分析：C₃₂H₄₈N₉O₁₁计算值为：C，52.31；H，6.58；N，17.16；实测值为C，52.50；H，6.42；N，17.35。

[实施例47]N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]-Gly-Asp-Phe-OH(化合物75)的制备

95mg(0.1mmol)N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]Arg-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl与1ml苯甲醚及2ml无水HF混合、0℃反应1小时、减压除去HF。再次通入6ml HF、0℃反应1小时、减压除去HF。残留物用无水***固化，得到的无色固体物在***中放置过夜后转变为兰色。兰色固体用SephadexG10纯化，用蒸馏水洗脱。收集兰色带、冷冻干燥、得60mg(80％)标题化合物，为兰色固体。IR(cm^-1，KBr)：3339、3327、3235、2327-2586、1754、1662、1605、1482、1457、1276、834；ESI-MS(m/e)＝782[M]⁺；[α]²⁰ _D＝20(C＝1.0，H₂O)。元素分析：C₃₆H₄₈N₉O₁₁计算值为：C，55.23；H，6.18；N，16.10；实测值为C，55.42；H，6.35；N，16.28。

[实施例48].Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)OBzl(化合物76)的制备

86mg(0.20mmol)Boc-Arg(Tos)-OH溶于4ml无水THF，冰溶下加入30mg(0.22mmol)HOBt和48mg(0.22mmol)DCC，搅拌30min。将115mg(0.2mmol)HCl·Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)OBzl溶于5ml无水THF，滴加N-甲基吗啉使溶液pH9，加入得到的Boc-Arg(Tos)-OH混合物，0℃反应2hr、室温反应12hr、TLC显示原料点消失。停止反应、滤除DCU、滤液在37℃减压浓缩至干、残留物用乙酸乙酯溶解。乙酸乙酯溶液依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗、饱和氯化钠洗、5％硫氢酸钾水溶液洗。分出的有机层、无水硫酸钠干燥、过滤、滤液在37℃下减压浓缩至干，得到133mg(70％)标题化合物，为无色固体。IR(cm^-1，KBr)：3342、3325、3239、1766、1665、1605、1600、1590、1482、1457、1395、1370、1274、832；ESI-MS(m/e)＝949[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-3.0(C＝2.0，CHCl₃)。元素分析：C₄₇H₆₃N₇O₁₂计算值为：C，59.41；H，6.68；N，10.32；实测值为C，59.59；H，6.80；N，10.15。

[实施例49].HCl·Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)OBzl(化合物77)的制备

冰浴下将189mg(0.2mmol)Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)OBzl溶于6ml 4mol/L无水氯化氢-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，1hr后TLC显示原料点消失。反应液减压浓缩至干，残留物用10ml乙酸乙酯溶解后再减压浓缩至干。该操作反复3次，以便除净残留的氯化氢。残留物再用10ml***溶解并减压浓缩至干，得标题化合物，直接用于下一步反应。

[实施例50].N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl(化合物78)的制备

61mg(0.2mmol)4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酸溶于3ml无水THF中，冰浴下加入30mg(0.22mmol)N-羟基苯并三氮唑和48mg(0.22mmol)DCC，混合30min后待用。将177mg(0.2mmol)HClArg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)Obzl溶于5ml无水THF，滴加N-甲基吗啉使溶液pH8-9，加入上面得到的混合物，0℃反应2hr后，室温反应12hr，TLC显示原料点消失，停止反应，滤除DCU，滤液在37℃减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠、5％硫氢酸钾水溶液洗涤，分出的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在37℃下减压浓缩至干，硅胶闪式柱层析(氯仿∶甲醇＝10∶1)，得到207mg(91％)标题化合物，为兰色固体。Mp76-78℃；IR(cm^-1，KBr)：3338、3322、3250、1763、1662、1602、1591、1480、1455、1270、830；ESI-MS(m/e)＝1138[M]⁺；[α]²⁰ _D＝50(C＝1.0，CH₃OH)。元素分析：C₅₇H₇₂N₉O₁₄S计算值为：C，60.09；H，6.37；N，11.06；实测值为C，60.27；H，6.52；N，11.28。

[实施例51].Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl(化合物79)的制备

86mg(0.2mmol)Boc-Arg(Tos)-OH溶于4ml无水THF，冰溶下加入30mg(0.22mmol)N-羟基苯并三氮唑和48mg(0.22mmol)DCC混合，搅拌30min。将99mg(0.2mmol)HCl·Gly-Asp(OcHex)-ValOBzl溶于5ml无水THF，滴加N-甲基吗啉使溶液pH9，加入上面得到的Boc-Arg(Tos)-OH混合物，0℃反应2hr，室温反应12hr，TLC显示原料点消失。停止反应、滤除DCU、滤液在37℃减压浓缩至干、残留物用乙酸乙酯溶解。乙酸乙酯溶液依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗、饱和氯化钠水溶液洗、5％硫氢酸钾水溶液洗。分出的有机层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液在37℃下减压浓缩至干，得到132mg(76％)标题化合物，为无色固体。Mp79-81℃；IR(cm^-1，KBr)：3340、3322、3236、1761、1660、1602、1601、1593、1480、1455、1396、1372、1276、830；ESI-MS(m/e)＝871[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-6(C＝2.0，CHCl₃)。元素分析：C₄₂H₆₁N₇O₁₁S计算值为：C，57.85；H，7.05；N，11.24；实测值为C，58.03；H，7.22；N，11.38。

[实施例52].HCl·Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl(化合物80)的制备

冰浴下将174mg(0.2mmol)Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-ValOBzl溶于6ml 4mol/L无水氯化氢-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，1hr后TLC显示原料点消失。反应液减压浓缩至干，残留物用10ml乙酸乙酯溶解后再减压浓缩至干。该操作反复3次，以便除净残留的氯化氢。残留物再用10ml***溶解并减压浓缩至干，得标题化合物，直接用于下一步反应。

[实施例53].N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Val-OBzl(化合物81)的制备

61mg(0.2mmol)4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酸溶于3ml无水THF中，冰浴下加入30mg(0.22mmol)N-羟基苯并三氮唑和48mg(0.22mmol)DCC混合，搅拌30min。将161mg(0.2mmol)HCl·Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-ValOBzl溶于5ml无水THF，滴加N-甲基吗啉使溶液pH9，加入上面得到的4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酸的混合物，0℃反应2hr，室温反应12hr，TLC显示原料点消失。停止反应，滤除DCU，滤液在37℃减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗、饱和氯化钠水溶液洗、5％硫氢酸钾水溶液洗。分出的有机层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液在37℃下减压浓缩至干、硅胶闪式柱层析(氯仿∶甲醇＝10∶1)，得到190mg(90％)标题化合物，为兰色固体。Mp92-94℃；IR(em^-1，KBr)：3338、3325、3234、1760、1664、1606、1600、1590、1483、1450、1275、832；ESI-MS(m/e)＝1060[M]⁺；[α]²⁰ _D＝55(C＝1.0，CH₃OH)。元素分析：C₅₂H₇₀N₉O₁₃S计算值为：C，58.85；H，6.65；N，11.88；实测值为C，58.69；H，6.83；N，11.69。

[实施例54].Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-PheOBzl(化合物82)的制备

86mg(0.2mmol)Boc-Arg(Tos)-OH溶于4ml无水THF中，冰溶下加入30mg(0.22mmol)N-羟基苯并三氮唑和48mg(0.22mmol)DCC，混合30min后待用。将109mg(0.2mmol)HCl Gly-Asp(OcHex)-PheOBzl溶于5ml无水THF，滴加N-甲基吗啉使溶液pH8-9，加入上面得到的混合物，0℃反应2hr后，室温反应12hr，TLC显示原料点消失，停止反应，滤除DCU，滤液在37℃减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠水溶液、饱和氯化钠、5％硫氢酸钾水溶液洗涤，分出的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，滤液在37℃下减压浓缩至干，得标题化合物110mg(60％)mp79-81℃[α]²⁰ _D-8(C2，CHCl₃)

[实施例55].HCl·Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-PheOBzl(化合物83)的制备

184mg(0.2mmol)Boc-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-PheOBzl溶于6ml4mol/L无水氯化氢-乙酸乙酯溶液，室温搅拌，1hr后TLC显示原料点消失。反应混合物在室温下减压浓缩，残留物用乙酸乙酯溶解并在室温下浓缩，如此反复数次，直到除净游离的氯化氢。残留物用无水***研磨，得标题化合物，直接用于下一步反应。

[实施例56].N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl(化合物84)的制备

61mg(0.2mmol)4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酸溶于3ml无水THF中，冰浴下加入30mg(0.22mmol)N-羟基苯并三氮唑和48mg(0.22mmol)DCC混合，搅拌30min。将171mg(0.2mmol)HClArg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-PheObzl溶于5ml无水THF，滴加N-甲基吗啉使溶液pH9，加入上面得到的4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酸的混合物，0℃反应2hr，室温反应12hr，TLC显示原料点消失。停止反应，滤除DCU，滤液在37℃减压浓缩至干，残留物用乙酸乙酯溶解，依次用饱和碳酸氢钠水溶液洗、饱和氯化钠水溶液洗、5％硫氢酸钾水溶液洗。分出的有机层用无水硫酸钠干燥、过滤、滤液在37℃下减压浓缩至干、硅胶闪式柱层析(氯仿∶甲醇＝10∶1)，得到200mg(90％)标题化合物，为兰色固体。Mp108-110℃；IR(cm^-1，KBr)：3336、3322、3230、1764、1662、1604、1601、1593、1480、1452、1273、830；ESI-MS(m/e)＝1108[M]⁺；[α]²⁰ _D＝-38(C＝1.0，CH₃OH).元素分析：C₅₆H₇₀N₉O₁₃S计算值为：C，60.63；H，6.36；N，11.36；实测值为C，60.80；H，6.17；N，11.18。

[实施例57].N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]-Arg-Gly-Asp-SerOH(化合物85)的制备

140mg(0.1mmol)N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Ser(Bzl)-OBzl与1ml苯甲醚及2ml无水HF混合、0℃反应1小时、减压除去HF。再次通入6ml HF、0℃反应1小时、减压除去HF。残留物用无水***固化，得到的无色固体物在***中放置过夜后转变为兰色。兰色固体用SephadexG10纯化，用蒸馏水洗脱。收集兰色带、冷冻干燥、得到60mg(73％)标题化合物，为兰色固体。Mp 154℃分解，IR(cm^-1，KBr)：3335、3328、3233、2324-2585、1753、1662、1604、1480、1456、1274、830；[α]²⁰ _D＝-40(C＝1.0，H₂O)，ESI-MS(m/e)＝722[M]⁺。元素分析：C₃₀H₄₄N₉O₁₂计算值为：C，49.86；H，6.14；N，17.44；实测值为C，50.01；H，5.97；N，17.63。

[实施例58].N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]-Arg-Gly-Asp-Val-OH(化合物86)的制备

106mg(0.1mmo l)N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]-Arg(Tos)-Gl y-Asp(OcHex)-Va l-OBz l与1ml苯甲醚及2ml无水HF混合后，0℃反应1小时、减压除去HF。再次通入6ml HF、0℃反应1小时、减压除去HF。残留物用无水***固化，得到的无色固体物在***中放置过夜后转变为兰色。兰色固体用SephadexG10纯化，用蒸馏水洗脱。收集兰色带、冷冻干燥、得到50mg(70％)标题化合，为兰色固体。Mp 160℃分解，IR(cm^-1，KBr)：3341、3329、3233、2329-2589、1753、1664、1605、1480、1456、1274、836；[α]²⁰ _D＝17(C＝1.0，H₂O)，ESI-MS(m/e)＝734[M]⁺。元素分析：C₃₂H₄₈N₉O₁₁计算值为：C，52.31；H，6.58；N，17.16；实测值为C，52.47；H，6.74；N，17.29。

[实施例59]N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]-Arg-Gly-Asp-PheOH(化合物87)的制备

111mg(0.1mmol)N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]-Arg(Tos)-Gly-Asp(OcHex)-Phe-OBzl与1ml苯甲醚及2ml无水HF混合后，0℃反应1小时，减压除去HF。再次通入6ml HF、0℃反应1小时、减压除去HF。残留物用无水***固化，得到的无色固体物在***中放置过夜后转变为兰色。兰色固体用SephadexG10纯化，用蒸馏水洗脱。收集兰色带、冷冻干燥、得到60mg(80％)标题化合物，为兰色固体。Mp 158℃分解，IR(cm^-1，KBr)：3337、3325、3233、2329-2588、1756、1661、1603、1484、1455、1273、831；[α]²⁰ _D＝20(C＝1.0，H₂O)，ESI-MS(m/e)＝782[M]⁺。元素分析：C₃₆H₄₈N₉O₁₁计算值为：C，55.23；H，6.18；N，16.10；实测值为C，55.42；H，6.00；N，16.28。

[试验例1]本发明化合物保护细胞抗自由基损伤的活性测定

一、供试化合物：本发明实施例所制备的下述化合物：化合物9、化合物12、化合物13、化合物15、化合物16、化合物18、化合物21、化合物22、化合物23、化合物24、化合物28、化合物35、化合物40、化合物47、化合物52、化合物73、化合物74、化合物75。

上述化合物的溶液以DMSO(二甲基亚砜)(DMSO含量低于0.5％，V∶V)助溶在DMEM无血清培养液中，经φ0.22μm微孔滤膜过滤除菌，分装成小包装-85℃冰箱保存。实验时化冻，用无血清培养液稀释成不同浓度。

二、试验材料和试剂：

硝普钠(Sodium Nitroprus side，SNP)，MTT(四甲基偶氮唑盐)，多聚L-赖氨酸；丙酮酸钠购自Sigma公司；高糖Dulbecco’s modified Eagle’smedium(DMEM)培养基，胎牛血清购自Gibco BRL公司；马血清购自HyClone公司；硫酸亚铁，双氧水购自北京试剂公司。

PC12细胞为大鼠肾上腺嗜铬细胞瘤克隆株。

完全培养液：高糖DMEM培养液，内含10％马血清，5％胎牛血清，1.0mM丙酮酸钠，100U·mL^-1青霉素，100g·mL^-1链霉素，pH为7.2左右。

含药培养液：分别将不同的化合物以0.5％DMSO助溶，配成浓度分别为12.5μM，25μM，50μM，100μM，200μM的高糖DMEM培养液，含1.0mM丙酮酸钠，100U·mL^-1青霉素，100g·mL^-1链霉素，pH为7.2左右，不含血清。

三、试验方法

PC12细胞在37℃、相对湿度100％、5％CO₂-95％空气条件下，培养在高糖DMEM完全培养液中，2-3天换一次液，5-6天传一代。传代时以0.02％EDTA消化1min，吹打分散细胞，成单细胞悬液，离心(800rpm，5min)，经PBS洗涤一次，再以完全培养液悬浮细胞，接种于包被了多聚L-赖氨酸的培养瓶。取处于对数生长期的细胞以2×10⁴/孔的密度，传代接种于预先包被了多聚L-赖氨酸的96孔培养板中，培养24小时以后分别进行以下三项试验：

1、一氧化氮清除活性测定

细胞接种于96孔板24小时以后，弃除原培养液，加入含有不同种类和不同浓度供试化合物的含药培养液，放在37℃、相对湿度100％、5％CO₂-95％空气条件下培养40min以适应药物环境，然后加入含SNP(硝普钠)的无血清培养液10μl，使终浓度达到0.5mM，作用12小时以后，进行细胞活性测定。实验设置不加损伤的空白对照组、单加损伤的模型组，以及既加药物又加损伤的实验组，每组设4个复孔作平行样。单加药物的药物对照和DMSO的空白对照经实验证明与正常培养的空白对照没有显著性差异，故药物和DMSO对实验的影响忽略不计。

2、过氧化氢清除活性测定

方法与一氧化氮的实验模型基本一致，损伤条件为400μMH₂O₂作用12小时

3、羟自由基清除活性测定

方法与一氧化氮的实验模型基本一致，损伤条件为80μM H₂O₂/30μMFe(II)，作用12小时。

采用MTT法测定细胞的活性，具体方法如下：

MTT法的基本原理是黄色可溶的底物MTT[3-(4，5)-双甲基-2-噻唑-(2，5)-二苯基溴化四氮唑蓝]可被线粒体内琥珀酸脱氢酶还原为不溶的蓝色颗粒(formazan)，由于受损伤的细胞或死细胞的琥珀酸脱氢酶的活性降低或丧失，可根据生成formazan的多少来评价细胞的相对活力。

具体操作时将待测细胞加入2.5mg/ml MTT溶液，10μl/孔，使终浓度达到0.5mg/mL，放入CO₂孵箱，5％CO₂，37℃孵育4小时，移去MTT溶液，加入DMSO 100μl/孔，水平摇床摇匀，20分钟后用全自动酶标仪检测蓝色甲瓒的生成量，检测波长为570/630nm。

细胞保护效应的计算：

药物对细胞的保护效应按照如下公式计算：Effect％＝(A_drug-A_model)/(A_control-A_model)×100。由药物的浓度和保护效率进行非线性拟合做计量效应曲线，求出每种化合物的半数有效浓度EC₅₀值。

四、试验结果

试验结果见表1。

表1  本发明化合物自由基清除活性试验结果

n＝6

试验结果表明，本发明化合物具有良好的自由基清除活性。

[试验例2]本发明化合物清除NO的活性试验

一、试验材料

1、供试药物：本发明实施例所制备的下述化合物：化合物9、化合物12、化合物13、化合物15、化合物16、化合物18、化合物21、化合物22、化合物23、化合物24、化合物28、化合物35、化合物40、化合物47、化合物52、化合物73、化合物74、化合物75。

2、实验动物：体重250-300g，雄性Wistar大鼠，购自北京大学医学部实验动物部。

二、试验方法及结果

体重250-300g雄性Wistar大鼠，随机分为空白对照组和试验组。术前禁食12小时，自由饮水，颈椎脱位致死，开胸迅速摘取胸主动脉，剥离附着的***，将血管剪成3-5mm长的动脉环，置于15ml灌流浴槽内，浴槽盛有通以95％O₂＝5％CO₂气体的37℃恒温Krebs-Henseleit(KH)液15ml，固定动脉环的挂钩连接张力换能器，在二道记录仪上描记血管舒缩曲线，纸速为1mm/min。调整静止张力为1.0g，平衡30min后给予终浓度为1×10^-9mol/L NE(去甲肾上腺素)使动脉收缩以起预激作用，洗去NE，平衡30min后，给予终浓度为1×10^-9mol/L的NE，待收缩张力持续稳定于平台水平后，空白对照组加入无水乙醇15μl，试验组加入终浓度分别为为10^-4、10^-5、10^-6mol/L的供试药物15μl(溶于无水乙醇)，待平稳后，加入1.5μl Ach(终浓度为10^-6mol/L)。药物清除NO的能力以抑制Ach舒张百分比来表示(n＝6)，试验结果见表2。

表2.本发明的代表性咪唑啉-氨基酸及咪唑啉-RGD肽抑制Ach舒张血管活性

n＝6

试验结果表明，本发明化合物具有良好的一氧化氮清除活性。

[试验例3]本发明化合物的抗血栓活性

一、试验材料

1、供试化合物：本发明实施例所制备的化合物73、化合物74、化合物75；阳性对照药物：阿斯匹林(Asprine)；阴性对照药物：肝素生理盐水(NS)。

2、实验动物：体重250-300g雄性Wistar大鼠，购自北京大学医学部实验动物部。

二、试验方法及结果

雄性Wistar大鼠，腹腔注射戊巴比妥钠溶液进行麻醉，分离出右颈总动脉和左颈外静脉，在聚乙烯管的中段放入事先称重的6cm长的丝线，以肝素生理盐水(50IU/kg)充满聚乙烯管，将一端***左颈外静脉，用注射器将生理盐水(3ml/kg)，阿司匹林的生理盐水溶液(20mgl/kg)，供试化合物的生理盐水溶液从另一端缓慢注入聚乙烯管中，此时管中原有的肝素已被推入右颈外静脉中，管内大部分为被测化合物溶液，然后将注射药物端***右颈总动脉。血液从右颈总动脉经聚乙烯管流向左颈外静脉，15min后中断血流，取出丝线称重，总重量减去丝线重量即为血栓湿重。湿血栓在干燥器中放置1周后，测量血栓干重。统计各组的血栓重量的均值和标准差(X±SE)，并作t检验，空白对照组、阳性对照组和不同的化合物给予的血栓重量值见表3。

表3.本发明的咪唑啉-RGD肽抑制血栓形成活性

n＝10，a)与NS比较，p＜0.05；b)与Asprine比较，p＞0.05

试验结果说明，本发明化合物73、化合物74和化合物75具有良好的抗血栓活性。

[试验例4]本发明咪唑啉-PAK的溶血栓活性活性试验

一、1、供试化合物：本发明实施例所制备的化合物35；2、对照化合物：PAK(Pro-Ala-Lys)；UK(脲激酶)、NS(生理盐水)。

二、试验方法及结果：

血栓的制备：往垂直固定的玻璃管(长15mm，内径2.5mm，外径5.0mm，管底用胶帽密封)中注满大鼠动脉新鲜血液，往管内迅速***一支针灸针质料的血栓固定螺栓。该血栓固定螺旋用直径为0.2mm的针灸针在4号针头上绕成，螺旋部分长12mm，含15个螺圈，螺圈的直径为1.0mm，托柄与螺旋相连，长7.0mm，呈问号状。血液凝固15分钟后，小心去除玻璃管底部的胶帽，用镊子小心将血栓与玻璃管口处粘沾部位轻轻分开，然后用镊子固定血栓固定螺旋的托柄，从玻璃管中小心地取出被血栓包裹的血栓固定螺旋。精确称重。

旁路管道的制备：旁路管道由三段构成，中段为聚乙烯胶管，长60.0mm，内径3.5mm，两端为相同质料的聚乙烯管，管长100.0mm，内径1.0mm，外径2.0mm。该管的一端拉成尖管(用于***大鼠颈动脉或静脉)，外径为1.0mm，另一端的外部套一段长7.0mm，外径为3.5mm的聚乙烯管(加粗；用于与中段的聚乙烯胶管衔接)，三段管的内壁均用2％的硅油***溶液硅烷化。将血栓包裹的血栓固定螺旋放入中段聚乙烯胶管内，胶管的两端分别与两根聚乙烯的加粗端相套。用注射器通过尖管端将管中注满肝素生理盐水溶液(50IU/kg，30mg/90ml)备用。

大鼠颈动静脉旁路溶栓模型：Wistar大鼠(雄性，180g-320g)购自北京大学医学部实验动物部(许可证号：医动字第01-3056)。按80mg/kg剂量腹腔注射戊巴比妥钠溶液进行麻醉。麻醉大鼠仰卧位固定后进行手术：分离气管，分离右颈总动脉，在右颈总动脉的近心端用动脉夹夹住血管，在尽可能远心端小心地剪一斜口，***一根一端拉成尖管的聚乙烯管(内径1.0mm，外径2.0mm)，从管中放出约1ml动脉血后，重新用动脉夹夹住动脉，立即按1.1所述方法制备血栓。在制备血栓的同时，分离左颈总静脉。待血栓作好并按1.2所述方法作好旁路管道后，在暴露的左颈总静脉近心端上小心地剪一斜口，将上面制备好的旁路管道的尖管由斜口***左颈总静脉开口的近心端，用4号手术缝线与静脉固定，旁路管道中段内血栓固定螺旋的托柄指向静脉端。用注射器通过旁路管道另一端的尖管推入准确量的肝素生理盐水溶液(50IU/kg)后，用动脉夹在近心端夹住静脉，从聚乙烯管的尖部取下注射器，从动脉取下放血管，将聚乙烯管的尖部***动脉斜口的近心端，用4号手术缝线与动脉固定，打开动脉夹，使血流通过旁路管道从动脉流向静脉，此即大鼠颈动静脉旁路溶栓模型。

溶栓实验：采用序惯法给药。模型操作同上，在最后打开动脉夹之前，用头皮针将生理盐水(空白对照)，尿激酶生理盐水溶液(阳性对照)，待测化合物的生理盐水溶液，通过旁路管的中段，刺入远离血栓固定螺旋的近静脉处，打开动脉夹后，3分钟内缓慢将药物注入到血液中，按静脉-心脏一动脉的顺序作用到血栓上。从开始注射时立即计时，90分钟后从旁路管道中取出血栓固定螺旋，精确称重，求出每只大鼠旁路管道中血栓固定螺旋给药前后的重量差，统计各组的血栓重量的差值均值和标准差(X±S)，并作t检验。

试验结果见表4。

表4.本发明的咪唑啉-PAK溶血栓活性

n＝10。

试验结果表明，本发明化合物35具有良好的溶血栓活性。

Claims (9)

1.下述通式(I)-(VI)的化合物：

其中，通式(I)中，R₁为苄氧羰基或氢原子；通式(II)中，R₂为叔丁氧羰基时，R₃为氢原子；R₂为氢原子时，R₃为甲基；通式(III)中，R₄为叔丁氧羰基时，R₅为甲基或氢原子；R₄为氢原子时，R₅为甲基；通式(IV)中，R₆为甲基或氢原子；通式(V)中，当R₇为叔丁氧羰基时，R₈为氢原子；当R₇为氢原子时，R₈为甲基或氢原子；通式(VI)中，R₉为叔丁氧羰基时，R₁₀为氢原子；R₉为氢原子时，R₁₀为甲基或氢原子。

2.权利要求1中通式(I)化合物的中间体：N^ω-苄氧羰基-N^α-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧乙酰基]-Lys-OBzl。

3.一种制备权利要求1的通式(I)-(VI)化合物的方法，包括；把2-取代-1，3-二氧基咪唑啉按照常规方法引到L-Lys或L-Arg的碱性侧链或d-氨基上，或与L-Asp或L-Glu的衍生物Boc-Asp(NHCH₂CH₂Br)-OH、Boc-Asp(NHCH₂CH₂Br)-OCH3、Boc-Glu(NHCH₂CH₂Br)-OH、Boc-Glu(NHCH₂CH₂Br)-OCH₃实施氧-烷基化反应，即得本发明通式化合物。

4.由权利要求1的通式(II)、通式(III)、通式(V)、通式(VI)化合物定点标记的下述肽：Pro-Ala-[N^ω-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基乙酰基]Lys-OH；N^G-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基乙酰基]Arg-Gly-Asp-Val-OH；Arg-Gly-[β-天冬氨酰[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基丙氨基]Asp-Ser-OH；γ-[4-(1，3-二氧-4，4，5，5-四甲基-2-咪唑啉-2-基)苯氧基丙氨基]Glu-Cys-Gly-OH；上述4种肽的结构式分别如下：

5.权利要求1中通式(I)-(VI)的任一化合物在合成多肽中的应用。

6.权利要求1中通式(I)-(VI)的任一化合物在制备清除一氧化氮、过氧化氢或羟自由基药物中的应用。

7.权利要求4的任一肽在制备清除一氧化氮药物中的用途。

8.一种药用组合物，其特征是由治疗上有效剂量的权利要求1通式(I)-(VI)的任一化合物和药学上可接受的载体组成。

9.一种药用组合物，其特征是由治疗上有效剂量的权利要求4的任一肽和药学上可接受的载体组成。