CN1951429A - 一种夏天无提取物的制备工艺及其新用途 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种夏天无提取物的制备工艺及其新用途。本发明的夏天无提取工艺采用0.05－5.5％的盐酸作溶媒提取碱化后，经大孔吸附树脂吸附再用水和30％－98％的乙醇依次洗脱，高浓度乙醇洗脱液过氧化铝层析柱吸附除杂，回收乙醇后在pH1－5条件下溶出，再在pH8－10的条件析出，得夏天无总生物碱提取物，该提取物及其制剂可用于中风偏瘫、跌扑损伤、风湿性关节痛、小儿麻痹后遗症、降血压、抗心律失常、脑血管痉挛、心肌梗死、防治青少年近视眼、镇痛、戒毒脱瘾。
Description
技术领域
本发明涉及一种一种夏天无提取物的制备工艺及其新用途。
背景技术
夏天无系罂粟科植物伏生紫堇Corydalis decumbens(Thunb.)Pers.的干燥块茎。上世纪六十年代，江西天施康中药股份有限公司(原江西余江制药厂)从民间发掘出夏天无，对其生物学特性、栽培技术、化学成分、药理作用、毒性反应、临床应用进行了***的研究，并相继研制出夏天无系列制剂。随着科学技术发展和现代分析技术的应用，对夏天无的研究得以进一步深入，从夏天无植物中分离出原阿片碱、紫堇米定碱、延胡索乙素、毕扣扣灵、巴马汀、小檗碱等20多种生物碱。
传统的夏天无总生物碱提取工艺以稀盐酸提取，通过阳离子交换树脂吸附纯化，用氨水的乙醇溶液回流洗脱，回收乙醇，得夏天无提取物。该工艺提取的夏天无总生物碱纯度较低，较多的杂质使制剂的稳定性差，通常多用于制备口服固体制剂。
2003年该公司用大孔吸附树脂提取夏天无总生物碱，并将其用于治疗中枢神经***退化性疾病的治疗进行了深入研究和二次开发，申报了夏天无总生物碱的提取方法及其新用途专利并获专利证书。为进一步保护新工艺提取的夏天无总生物碱及其应用，公司通过多项试验摸索出几种夏天无提取物的制备工艺，并证实了在其他领域中的应用。
发明内容
本发明的目的在于提供一种夏天无提取物的制备工艺及其新用途。该工艺提取的夏天无总生物含量达到80％以上，其中原阿片碱占总生物碱的50％以上。该夏天无中间体及其制剂可应用于中风偏瘫、跌扑损伤、风湿性关节痛、小儿麻痹后遗症、降血压、抗心律失常、脑血管痉挛、心肌梗死、防治青少年近视眼、镇痛、戒毒脱瘾。
本发明是这样来实现的，将夏天无药材打成粗粉，过10目筛，以0.05％-5.5％的稀盐酸为溶媒提取，收集提取液，用氢氧化钠调节PH值至7，以每分钟5ml的速度过大孔吸附树脂柱，至流出液生物碱呈阳性即饱和；水洗大孔吸附树脂柱，再用30％-60％的中浓度乙醇洗至颜色变浅后再用60％-98％高浓度乙醇洗脱，至洗脱液生物碱反应呈阴性后，收集高浓度乙醇洗脱液，然后以每分钟5ml的流速过氧化铝层析柱吸附除去杂质。经氧化铝层析柱除杂后，减压回收乙醇，浓缩物在PH1-5的酸性条件下溶解过滤，滤液在PH8-10的碱性条件下析出沉淀，干噪，得夏天无提取物。
本发明用0.05％-5.5％盐酸为溶媒提取的方法可以是渗漉、回流、浸渍工艺，调节PH1-5酸性时用盐酸，调节PH8-10碱性用氢氧化钠。
本发明的夏天无提取物为夏天无的有效部位总生物碱，其总生物碱含量达到80％以上，其中原阿片碱含量可达到50％以上。
本发明的夏天无提取物可作为各类制剂的中间体，加上适当的辅料制成口服固体制剂的硬胶囊剂、颗粒剂、片剂、滴丸、丸剂、软胶囊剂，口服液体制剂、注射剂、滴眼剂、经皮吸收制剂的贴剂、巴布膏剂、膜剂。
本发明的夏天无提取物及其制剂可用于中风偏瘫、跌打损伤、风湿性关节痛、小儿麻痹后遗症、降血压、抗心律失常、脑血管痉挛、心肌梗塞、防治青少年近视眼、镇痛、戒毒脱瘾。
具体实施方式
实施例1：取夏天无药材1000g，打碎，过10目筛，加1.0％(v/v)稀盐酸浸渍48小时后以每分钟1-3ml的速度渗漉，收集渗漉液，至渗漉液生物碱反应呈阴性为止。加10％(g/v)氢氧化钠溶液调PH值至7，过AB-8型大孔吸附树脂柱，至流出液呈生物碱反应呈阳性止。依次用水、40％(v/v)乙醇洗至颜色变淡，再用95％(v/v)乙醇洗脱，直到洗出液呈生物碱阴性反应为止，收集95％乙醇洗脱液，过氧化铝层析柱，收集流出液并减压回收乙醇，在浸膏中加1.0％(v/v)稀盐酸调节PH至2-3条件下溶解，然后再次用10％氢氧化钠溶液调PH至9.0析出生物碱，过滤，沉淀物减压低温干燥，即得夏天无提取物。
实施例2：取夏天无药材1000g，打成粗粉，加0.5％(v/v)稀盐酸回流提取二次，第一次加12倍量稀盐酸，第二次加10倍量稀盐酸，每次1小时，过滤，合并滤液，加10％(g/v)氢氧化钠溶液调节PH至7，过AB-8型大孔吸附树脂柱，至大孔吸附树脂饱和为止，先用水洗柱，再用30％-40％(v/v)乙醇洗脱，流出液颜色变淡后用95％(v/v)乙醇洗脱，直至洗脱液生物碱呈阴性反应。合并95％乙醇洗脱液，过氧化铝层析柱除杂，流出液减压回收乙醇后，加0.5％稀盐酸调节PH2-3溶解浸膏，再用10％氢氧化钠溶液调PH值至9.0，析出提取物，过滤，沉淀物在80℃以下干燥，得夏天无提取物。
实验结果研究
实验一：夏天无提取物对大鼠实验性脑血栓形成的影响
取SD大鼠50只，雄性，体重350±30g，随机分成5组，将夏天无总碱配成溶液剂，灌胃给药，1ml/100g，每天一次，连续7天。模型组灌生理盐水，对照组灌尼莫地平悬浊液16mg/kg/d，观察组用高、中、低夏天无提取物，剂量分别为1.0、0.5、0.25mg/kg/d。
1、夏天无提取物对大鼠脑梗塞区伊文思蓝含量的影响
脑血栓模型制造后，肉眼可明显看出右侧脑半球蓝染，以颅底蓝染程度为甚，左半球看不到蓝染，说明右侧脑半球血栓模型制造成功。研究表明，夏天无提取物大、中剂量(1.0、0.5mg/kg/d)可减少梗塞半球的伊文思蓝含量，说明其能减轻大鼠脑梗塞的严重程度。尼莫地平作为临床常用药对大鼠血栓模型有明显的治疗作用。
表1夏天无提取物对大鼠脑血栓伊文思蓝含量的影响(
±S)
| 组别 | 例数 | 剂量/kg | A/脑半球重量 | P |
| 模型组 | 10 | 20ml | 0.08089±0.0105 | |
| 尼莫地平组 | 10 | 16ml | 0.05879±0.006165 | ＜0.001 |
| 夏天无提取物 | ||||
| 小剂量 | 10 | 0.25mg | 0.07216±0.01278 | ＞0.05 |
| 中剂量 | 10 | 0.5mg | 0.06133±0.02114 | ＜0.05 |
| 大剂量 | 10 | 1mg | 0.05721±0.01854 | ＜0.01 |
2、夏天无提取物对大鼠脑血栓左右半球湿重的影响
与模型组比较表明，脑血栓模型形成后，右脑湿重/左脑湿重的比例有所增加，夏天无提取物可减轻脑栓塞引起的脑组织水肿。
表2夏天无提取物对大鼠脑梗塞侧脑组织水肿程度的影响(
±S)
| 组别 | 例数 | 剂量/kg | 右/左脑半球重量 | P |
| 模型组 | 10 | 20ml | 1.0987±0.035087 | |
| 尼莫地平组夏天无提取物 | 10 | 16ml | 1.0564±0.02055 | ＜0.001 |
| 小剂量 | 10 | 0.25mg | 1.0983±0.0444 | ＞0.05 |
| 中剂量 | 10 | 0.5mg | 1.06015±0.01375 | ＜0.01 |
| 大剂量 | 10 | 1mg | 1.0567±0.01444 | ＜0.01 |
实验二：夏天无提取物戒毒脱瘾作用实验
夏天无提取物对小鼠具有减少自主活动、抑制扭体反应及延长戊巴比妥钠阈上剂量睡眠时间的作用，提示该药对中枢神经***具有抑制作用。实验对戊巴比妥钠阈下、阈上剂量催眠作用的影响。
1、对戊巴比妥钠阈下剂量催眠作用的影响
取小鼠40只，随机分成4组，即空白对照组，夏天无提取物3个剂量组(0.5、1.0、1.50mg/kg)。实验时各组小鼠灌胃给药，于给药后30min各组小鼠腹腔注射戊巴比妥钠(25mg/kg)，翻正反射消失达1min以上者为发生睡眠。结果夏天无提取物对戊巴比妥钠在阈下催眠的剂量下高剂量组(1.50mg/kg)可使少量动物(3只)产生催眠作用，其它各组无明显影响，长方检验无统计学意义。
2、对戊巴比妥钠阈上剂量催眠作用的影响
取小鼠40只，实验分组给药同上，于给药后30min各组小鼠腹腔注射戊巴比妥钠(40mg/kg)，以翻正反射为指标，观察各组小鼠催眠潜伏期的缩短以及睡眠时间的延长(以小鼠翻正反射消失为睡眠指标)，详见表3，结果表明，夏天无提取物具有一定的催眠作用。
表3夏天无提取物对戊巴比妥钠阈下剂量催眠作用的影响
(
±S，n＝10，t/min)
| 组别 | 剂量(mg/kg) | Sleepingdelitescence | Sleepingmainten-ance time |
| 空白组 | 8.50±1.95 | 14.90±2.55 | |
| 低剂量组 | 0.5 | 7.60±1.04 | 17.40±3.75* |
| 中剂量组 | 1.0 | 6.70±1.76 | 18.40±4.14* |
| 高剂量组 | 1.50 | 6.50±1.64 | 20.70±5.90* |
*P＜0.05，与空白组对照
3、对小鼠自主活动的影响
取小鼠50只，雌雄兼用，随机分成5组，即空白对照组(生理盐水组)，阳性药腹腔注射戊巴比妥钠(25mg/kg)、夏天无提取物3个剂量组(0.5、1.0、1.5mg/kg)。灌胃给药，分别测定各组小鼠给药前及给药后30min、60min的自主活动，方法是将小鼠置于小鼠自主活动仪中稳定5min，测定10min内小鼠自主活动次数，给药后30min、60min与对照组比较差异有显著意义(P＜0.01，P＜0.001＝，见表4。结果表明夏天无提取物具有一定的镇静作用。
表4夏天无提取物对小鼠自主活动的影响(
±S，n＝10)
| 组别 | 剂量 | 自主活动时间 | ||
| 给药前 | 30分钟 | 60分钟 | ||
| 空白组 | 1690.30±396.84 | 1694.00±427.15 | 1745.60±489.14 | |
| 戊巴比妥 | 25mg/kg | 1682.40±531.76 | 1010±635.19* | 941.20±439.84** |
| 低剂量组 | 0.5mg/kg | 1634.00±361.57 | 960.00±651.00** | 764.00±501.40*** |
| 中剂量组 | 1.0mg/kg | 1696.60±404.30 | 1110.00±590.39* | 1042.40±541.20** |
| 高剂量组 | 1.5mg/kg | 1529.20±485.90 | 933.50±266.38*** | 1073.00±222.16*** |
*P＜0.05，**P＜0.01，***P＜0.001，与空白组比较
实验三：夏天无提取物对大鼠体内血小板聚集的影响
将大鼠随机分为空白对照组、阿司匹林组、夏天无提取物低、中、高3个剂量组、夏天无提取物按每天(0.25、0.5、1.0mg/kg)给药，阿司匹林组按50mg/kg给药，给药体积为每100g体重每天1ml灌胃。连续7天，第8天给药后用20％乌来糖麻醉。常规法制备血小板悬液，用Born’s比浊法测定血小板聚集性。
人体外给药，抽取健康人静脉血液以3.8％的枸橼酸钠溶液抗凝，血与抗凝剂之比为9∶1，取出富血小板血浆(PRP)，分别加入不同浓度的夏天无提取物溶液，37℃温育5min，操作方法同上。测定结果并计算血小板最大聚集率。血小板聚集抑制率(％)＝(对照管最大聚集率—给药管最大聚集率)/对照管最大聚集率。
SIPA的检测方法。家兔心脏取血，以3.8％的枸橼酸钠溶液1∶9抗凝，取血后离心制备PRP和PPP，将受试药品分为三个剂量加入血小板样品中，37℃温育5min，然后取出加入到粘质仪锥板中，剪切应力为8000达因/cm2，剪切时间为5min，吸取20μl锥板中的PRP，计数游离血小板数目，按CA610血细胞方析仪说明书介绍的单通道检测血小板数目的方法进行检测，按原始通用公式计算出SIPA值。
1、夏天无提取物对大鼠体内血小板聚集的影响
夏天无提取物对ADP诱导血小板聚集影响见表5。不同浓度的夏天无提取物对花生四烯酸诱导的血小板聚集的影响见表6。中、高剂量对血小板聚集有明显的抑制作用。
表5夏天无提取物对ADP诱导血小板聚集的影响(
±S)
| 组别 | 剂量/(mg/kg) | n | 最大聚集率(％) | 1min聚集率(％) | 2min聚集率(％) | 5min聚集率(％) | 平均聚集率(％) | 最大抑制百分率(％) |
| 空白组 | 等容量 | 9 | 64.9±22.4 | 52.4±22.6 | 58.7±24.4 | 61.3±23.1 | 55.6±22.0 | |
| 夏天无取物 | 总碱提 | |||||||
| 小剂量 | 0.25 | 7 | 44.4±6.5* | 31.6±7.5* | 39.7±9.5* | 40.1±8.5* | 36.0±6.9* | 31.6 |
| 中剂量 | 0.5 | 8 | 35.O±13.O** | 30.1±13.1** | 33.6±12.9* | 29.7±12.9** | 29.9±12.2** | 46.1 |
| 大剂量 | 1 | 7 | 19.9±17.O** | 12.6±14.5** | 17.1±16.9** | 16.1±18.O** | 14.1±14.9** | 69.3 |
| 阿司匹林 | 50 | 7 | 25.0±13.1** | 19.0±9.6** | 22.9±12.4** | 20.3±12.7** | 19.3±10.5** | 61.5 |
与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
表6夏天无提取物对花生四烯酸诱导血小板聚集的影响(
±S)
| 组别 | 剂量/(mg/kg) | n | 最大聚集率(％) | 1min聚集率(％) | 2min聚集率(％) | 5min聚集率(％) | 平均聚集率(％) | 最大抑制百分率(％) |
| 空白组 | 等容量 | 8 | 59.0±10.3 | 43.1±16.9 | 52.1±12.3 | 54.5±9.4 | 48.4±10.3 | |
| 夏天无取物 | 总碱提 | |||||||
| 中剂量 | 0.5 | 8 | 33.6±17.6** | 25.8±15.2** | 30.3±15.9* | 29.9±16.6** | 27.4±14.7** | 43.1 |
| 大剂量 | 1 | 6 | 20.0±9.4** | 25.7±12.2** | 36.2±14.8** | 43.8±17.5** | 35.6±10.2** | 66.1 |
| 阿司匹林 | 50 | 7 | 13.7±8.6** | 11.7±9.6** | 10.9±6.5** | 4.1±5.7** | 7.6±5.6** | 76.8 |
与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
2、夏天无提取物对人血小板聚集的影响
夏天无提取物对ADP诱导的血小板聚集的影响见表7，对花生四烯酸诱导血小板聚集的影响见表8。表7、表8结果表明，中、高剂量对血小板聚集有明显的抑制作用。
表7夏天无提取物对ADP诱导人血小板聚集的影响(
±S)
| 组别 | n | 最大聚集率(％) | 1min聚集率(％) | 2min聚集率(％) | 5min聚集率(％) | 平均聚集率(％) | 最大抑制百分率(％) |
| 空白组 | 12 | 71.7±10.3 | 56.8±9.5 | 68.4±10.8 | 65.5±11.8 | 60.4±9.3 | |
| 夏天无提取物 | |||||||
| 小剂量 | 12 | 65.3±14.0 | 48.2±10.3* | 59.0±12.2* | 60.6±15.3 | 53.7±11.6 | 9.0 |
| 中剂量 | 12 | 45.8±9.9** | 38.9±7.6** | 43.0±9.3** | 38.7±12.9** | 37.9±8.9** | 36.2 |
| 大剂量 | 12 | 28.3±11.2** | 24.9±10.4** | 23.3±14.6** | 20.1±12.3** | 21.0±10.9** | 60.6 |
| 阿司匹林 | 12 | 31.0±8.6** | 28.9±9.0** | 23.4±11.8** | 13.9±12.6** | 20.3±9.5** | 56.7 |
与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
表8夏天无提取物对花生四烯酸诱导人血小板聚集的影响
| 组别 | n | 最大聚集率(％) | 1min聚集率(％) | 2min聚集率(％) | 5min聚集率(％) | 平均聚集率(％) | 最大抑制百分率(％) |
| 空白组 | 11 | 70.6±9.9 | 51.5±13.5 | 66.6±12.7 | 63.6±9.2 | 58.3±10.6 | |
| 夏天无提取物 | 11 | ||||||
| 小剂量 | 11 | 69.8±10.4 | 48.3±13.7 | 66.4±11.2 | 64.0±11.3 | 58.0±9.4 | 1.1 |
| 中剂量 | 11 | 59.8±14.0* | 32.3±17.6** | 45.7±15.2** | 53.5±15.7* | 46.6±11.9* | 15.3 |
| 大剂量 | 10 | 50.4±12.3** | 25.7±12.2** | 36.2±14.8* | 43.8±17.5** | 35.6±10.2** | 28.6 |
| 阿司匹林 | 10 | 27.6±17.8** | 20.2±14.5** | 20.0±18.8** | 21.5±21.4** | 21.1±14.7** | 60.9 |
与空白组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。
3、夏天无提取物对SIPA的影响
夏天无提取物对剪切力诱导的血小板聚集的影响见表9，中、高剂量对SIPA有明显的抑制作用。
表9夏天无提取物对剪切力诱导的血小板聚集的影响(
±S)
| 组别 | n | SIPA值(％) |
| 空白值模型组小剂量组中剂量组高剂量组阳性药 | 8101010108 | 12.6±9.359.5±12.556.1±16.645.3±9.7**41.9±18.6**36.0±10.1** |
与模型组比较，**P＜0.01。
Claims (6)
1、一种夏天无提取物的制备工艺及其新用途，其特征在于：将夏天无药材打成粗粉，用0.05-5.5％的稀盐酸提取，提取液经碱化后过大孔吸附树脂柱，水洗后依次用30％-60％中浓度的乙醇和60％-95％高浓度的乙醇洗脱，收集高浓度乙醇洗脱液合并，过氧化铝层析柱，回收乙醇后在酸性条件溶出，在碱性条件下析出所需要的夏天无提取物。
2、如权利要求1所述的一种夏天无提取物的制备方法，其特征在于：用0.05％-5.5％的稀盐酸提取夏天无，其提取方法选自渗漉、回流、浸渍，其碱化用氢氧化钠调PH至中性。
3、如权利要求1所述的一种夏天无提取物的制备方法，其特征在于：在酸性条件下溶出，其酸性条件是PH1-5，在碱性条件下析出，其碱性条件是PH8-10。
4、一种夏天无提取物的新用途，其特征在于：夏天无提取物具有活血通络，行气止痛的功效，有止痛、兴奋平滑肌、解除肌肉痉挛的作用；具有抑制血栓形成和血小板粘附，减轻脑梗塞引起的伊文思蓝蓝染和脑水肿；能扩张脑血骨和下肢血管的作用；能显著对抗缺血性和复灌性心律失常的反应。
5、如权利要求5所述的夏天无提取物的新用途，其特征在于：夏天无提取物在中风偏瘫、跌扑损伤、风湿性关节炎、坐骨神经痛、小儿麻痹后遗症、降血压、抗心律失常、脑血管痉挛、心肌梗死、防治青少年近视眼、镇痛、戒毒脱瘾中的应用。
6、如权利要求5所述的夏天无提取物的应用，其特征在于：夏天无提取物可制成口服固体制剂、口服液体制剂、注射剂、滴眼剂、经皮吸收制剂。
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Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
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| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |
Open date: 20070425 |