CN1893957A

CN1893957A - 治疗心血管疾病的供氧化氮衍生物

Info

Publication number: CN1893957A
Application number: CN 200480036099
Authority: CN
Inventors: N·黄; J·塔克; D·R·麦卡弗里
Original assignee: Resverlogix Corp
Current assignee: Resverlogix Corp
Priority date: 2003-10-07
Filing date: 2004-10-07
Publication date: 2007-01-10

Abstract

诱导ApoAl表达的化合物，该化合物包含可供氧化氮部分和清除自由基部分。优选，提供用于治疗患者的包括高胆固醇血症、血管氧化性应激反应和内皮功能障碍的疾病的1，2－二苯乙烯、多元酚、黄酮类化合物和异黄酮类化合物的氧化氮衍生物及其使用方法。

Description

治疗心血管疾病的供氧化氮衍生物

发明领域

本发明涉及合成和使用适用于加到食品、药品、保健品(nutraceuticals)的黄酮类化合物(flavonoids)及其衍生物的领域，和用此类物质治疗有需要个体的方法。

发明背景

心血管疾病是用于说明一类心脏和血管疾病的通用术语，包括高血压、冠心病、脑血管疾病、周围血管疾病、心力衰竭、风湿性心脏病、先天性心脏病和心肌病。心血管疾病的主要原因是动脉粥样硬化、动脉壁上的脂质沉淀蓄积。高血液胆固醇水平与发生动脉粥样硬化的风险密切相关，因此在开发降血液胆固醇的疗法中投入巨大的医学研究。

动脉粥样硬化与内皮功能障碍有关，内皮功能障碍是其中血管***内层正常功能受损的疾病，除了是多种其它心血管疾病，例如心绞痛、心肌梗塞和脑血管疾病的主要风险因素外，它还是动脉粥样硬化的发病机制。内皮功能障碍的特征包括氧化性血管应激反应提高和血管收缩，以及高血液胆固醇水平，它们均促使相互加速发生心血管疾病。为最有效阻止疾病发生，需要改进抗多种心血管疾病病因风险因素的治疗策略。

胆固醇代谢

由于其不溶性，胆固醇在血中通过称为脂蛋白的脂质和蛋白质的复合物转运。据认为，低密度脂蛋白(LDL)负责将胆固醇从肝脏转运至身体的其它组织，因而变为俗称的“坏胆固醇”。LDL颗粒由中密度脂蛋白(IDL)转化而来，中密度脂蛋白本身通过从极低密度脂蛋白(VLDL)中除去甘油三酸酯而生成。VLDL在肝脏中由甘油三酸酯和几种载脂蛋白合成，然后由此它们直接分泌到血流中。

据认为，高密度脂蛋白(HDL)是将胆固醇从肝外组织转运到肝脏的主要载体分子，它在肝脏中发生分解代谢，然后在称为胆固醇逆转运(RCT)的过程中消除，因而HDL获得“好胆固醇”的绰号。在肝脏发生的消除过程中，胆固醇转化为胆汁酸，然后排出体外。

目前治疗高脂血症的方法

目前批准的降胆固醇的药物通过攻击正常胆固醇代谢途径上的多个不同点提供治疗益处。胆汁酸结合树脂，例如考来烯胺吸附到胆汁酸，排出体外，导致胆固醇转化为胆汁酸增加，结果降低血液胆固醇。树脂仅降低最大20％血清胆固醇，引起胃肠副作用，并且不能与其它药物同时给药，因为树脂会结合，导致此类其它药物***。

烟酸抑制脂蛋白合成，减少制备LDL所需要的VLDL颗粒生成。当需要高浓度给药以增加HDL水平时，发生严重的副作用，例如潮红。

据认为，贝特类药物(Fibrates)，例如氯贝特和非诺贝特激活属于核激素受体的过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)家族的转录因子。这些转录因子上调涉及HDL生成的基因，下调涉及LDL生成的基因。贝特类药物用于治疗高脂血症，因为它们通过降低VLDL部分减少血清甘油三酸酯。但是，由于其在患者中脂质反应的异种性质和缺乏在冠心病患者中观测到的效力，它们在美国尚未批准为高胆固醇血症的治疗药物。贝特类药物的使用也与严重的副作用有关，例如胃肠癌、胆囊疾病和高非冠心病死亡发生率。

他汀类药物(Statins)，又称为HMG CoA还原酶抑制剂通过阻断肝胆固醇合成限速酶减少VLDL、LDL和IDL胆固醇。他汀类药物仅少量增加HDL水平，且许多肝和肾功能障碍副作用与使用这些药物有关。

依泽替米贝是一类新心血管治疗药物中的第一个批准的药物，它通过抑制肠中胆固醇摄取起作用。依泽替米贝降低LDL，但基本上不增加HDL水平，不涉及身体中合成的胆固醇，也不涉及在血流中循环或存在于动脉粥样硬化斑块的胆固醇。还发现影响胆固醇吸收的其它化合物，包括胆汁酸结合剂考来烯胺和植物甾醇。

尽管已开发出这些治疗方法，但在增加血液HDL水平方面几乎没有进展，目前批准的所有药物的疗效受到副作用和效力的限制。因此，需要改进治疗方法以安全地提高HDL，因而增加胆固醇逆转运的速率，以降低血液胆固醇的水平。

内皮功能障碍和动脉粥样硬化

内皮功能受损发生在动脉粥样硬化发生的早期，实际上发生在检测到脂质沉淀前。内皮功能障碍的特征症状在于血管收缩，并导致高血压，它是其它心血管疾病，例如中风和心肌梗塞的熟知风险因素。研究发现动脉粥样硬化患者的内皮功能降低与氧化氮(NO)的生物利用度减少有关，氧化氮是诱导血管舒张的信号分子。

NO的生物利用度减少还激活在动脉粥样硬化发病中起作用的其它机制。例如，熟知NO抑制以动脉粥样硬化为特征的脂质斑块发展必要步骤的血小板凝集。NO也是抑制白细胞粘着的重要内源性介质，白细胞粘着是动脉粥样硬化发展的主要步骤，并可能是高脂血症患者血管氧化性应激反应增加的结果。粘着白细胞还通过释放大量活性氧类物质增加氧化剂应激反应。

血管氧化性应激反应增加和高胆固醇血症被分别鉴定为造成NO生物利用度减少的原因。氧化增加还导致动脉粥样硬化损害形成的另一个诱导物，即自由基介导的脂质过氧化。总之，将会出现正反馈环，其中这三种主要因素：高胆固醇血症、血管氧化性应激反应和NO生物利用度减少中的每一种增加其它因素的程度和病理严重性。

用于动脉粥样硬化-内皮功能障碍的氧化氮疗法

使用提供NO的已知化合物的治疗模式已用于临床，试图打破动脉粥样硬化-内皮功能障碍循环，但未获成功。已证实供NO药物释放的外源性NO不仅生成NO，而且生成为活性氧化剂的过亚硝酸阴离子，它进一步增加氧化性应激反应。通过NO供体产生的过亚硝酸盐和由氧化性应激反应增加导致的随后下调对NO的反应，可能是在用有机硝酸酯长期治疗患者中产生良好耐受性记录的基础。据认为，供NO药物在它们释放NO前还需要通过硫醇中间体过渡，硫醇的生物利用度在此类氧化性应激反应条件下显著减少。

抗氧化剂/氧化氮联合疗法

在试图减轻供NO药物造成的血管氧化性应激反应恶化，联合提供给患者抗氧化剂和NO供体。某些研究证明抗氧化剂和NO供体联合显著增加高胆固醇血症患者的内皮依赖性血管舒张。

但是，这些结果受到用该治疗方法未发现内皮依赖性血管舒张改善的其他人的质疑，可能由于难以达到足够的胞内剂量所致，和NO供体治疗远未与任何延迟动脉粥样硬化发展或活动动脉粥样硬化患者的寿命增加相关的事实。另外，NO供体和NO供体/抗氧化剂联合疗法均不直接针对动脉粥样硬化-内皮功能障碍循环的高胆固醇血症方面。

供NO和抗氧化剂与治疗基于动脉粥样硬化的高胆固醇血症的现有疗法联合也不是很理想的方法，因为目前批准的药物不能有效地利用HDL增加将胆固醇有效地转运出身体。

但是，人们可能假设优选的抗氧化剂和/或NO供体组合会确保抗氧化剂和NO供体在身体中在相同时间存在于相同位置，以便使抗氧化剂最有效地抵消NO潜在的氧化性副作用。用不同释放速率和生物利用度的几种不同药物组合满足该需求的问题在于很可能由于NO一旦从供体分子中释放，其在细胞环境中的半衰期短并加剧。

1，2-二苯乙烯(stilbenes)、多元酚和黄酮类化合物抗氧化剂

可通过正常细胞呼吸产生的活性氧类物质(ROS)是身体中氧化性损伤的主要原因。最有效抗ROS的方法之一是通过提供与ROS结合的抗氧化剂化合物“清除”活性基团，从而防止它们与细胞中的关键蛋白和DNA不适当的结合。能消除ROS的非常有效的抗氧化剂化合物通常含至少一种酚环结构。酚环是活性结构，ROS和酚环可形成共价键，因而它消除ROS的强氧化活性。1，2-二苯乙烯、多元酚和黄酮类化合物都含有至少两个酚环结构，因而使它们成为潜在有效的抗氧化剂。

白藜芦醇(resveratrol)、其它1，2-二苯乙烯和多元酚以及黄酮类化合物促载脂蛋白A1剂

除它们的抗氧化剂活性外，1，2-二苯乙烯、多元酚和黄酮类化合物还具有用于治疗高胆固醇血症的活性。例如，有人提出在某些植物中发现的天然多元酚，即一种熟知的1，2-二苯乙烯，白藜芦醇(3，4′，5-三羟基反式1，2-二苯乙烯)是称为“法国矛盾(French Paradox)”的流行病学观察的基础。该矛盾是指不考虑可比较的高脂肪饮食，观察到法国人口患心血管疾病的机率是北美人口的1/3。与北美人口消耗的红酒相比，法国矛盾与法国人口消耗大量红酒有关。白藜芦醇在红葡萄皮中很丰富，因此发现它在红酒中的量显著，而在白酒或其它酒精饮料中几乎不存在。

白藜芦醇减少心血管疾病发生机率的机制仍是争论想当多的题目，有几个竞争的假设。已证实白藜芦醇是有效的抗氧化剂，它表明导致较低LDL颗粒过氧化水平，和随后抑制动脉粥样硬化形成。白藜芦醇还推断为白细胞粘附和血小板凝集的抑制剂。此外，由于所述它调节P21和p53活性水平的能力，正在研究白藜芦醇作为潜在抗癌治疗药物的可能性。

白藜芦醇已鉴定为抗炎药物，提出的机理包括抑制环加氧酶-1酶(参见美国专利6,541,045；Jayatilake等J Nat Prod.1993年10月；56(10)：1805-10；美国专利6,414,037)和抑制蛋白激酶(美国专利申请0030171429)。因此，白藜芦醇可能具有作为镇痛剂、解热药治疗药使用治疗关节炎、哮喘病、银屑病、肠胃病、眼病、肺炎性疾病、癌症或治疗与血管疾病、中枢神经***紊乱和细菌、真菌和病毒感染有关炎症的潜力。

近年来，将白藜芦醇描述为激活sirtuin的化合物，提示通过直接与SirT1相互作用增长寿命，导致下调p53。也已知白藜芦醇拮抗芳烃受体，兴奋***受体，和描述为通过激活ERK 1/2途径和通过增加转录因子egr-1活性介导活性。

更近年来，我们证实白藜芦醇具有增加载脂蛋白A1转录的能力，推断通过在ApoA-1基因的启动子区域中的核苷酸序列S位点介导(PCT/CA 03/01220)。

将在S位点中发现的序列AGCCCCCGC描述为“Egr-1反应元件”共有序列。该基元包含在人APO AI启动子的跨越-196至-174核苷酸中(Kilbourne等1995，JBC，270(12)：7004-10)。不受任何具体理论约束，提出发现包含在S位点的该AGCCCCCGC元件是白藜芦醇通过其介导其活性的序列，但这不排除其它潜在需要的元件。

据认为，当与异源启动子进行连接以调节报道基因表达时，包含S位点的核苷酸序列或AGCCCCCGC元件的约任何8个相邻碱基起增强子元件作用。

1，2-二苯乙烯、黄酮类化合物和其它多元酚治疗应用的缺点

不幸地是，作为治疗药物使用1，2-二苯乙烯例如白藜芦醇和其它多元酚以及黄酮类化合物可能有问题。

每日不能大量消费最丰富和可供消费者利用的白藜芦醇资源，即红酒，因为过量酒精消耗的有害作用有许多记载。就是说，不存在酒精时，白藜芦醇的作用可能更好或更安全。

可制备许多具有潜在有益品质的1，2-二苯乙烯、多元酚和黄酮类化合物，它们不能天然合成，且尚未描述或制备以供测试。在人临床研究测试前，必须在实验室制备此类化合物，在合适的体外和体内测定中测试以证明有益治疗活性。

已知许多生物来源的1，2-二苯乙烯、多元酚和黄酮类化合物，因为它们通常通过植物合成。已测试过许多这些化合物的潜在有益特性，例如它们已知的在体外抗氧化能力、推断的它们抗癌效力和它们对心血管疾病的表观有益作用。虽然对此类化合物作过一些人研究，但是结果很不明确，而且有时还是矛盾的。例如，人临床研究的发现还必须证明对主要临床终点有益的明确证据，例如动脉粥样硬化斑块大小或减少例如心脏病发作的心血管事件。在某些动物研究中发现的情形中，用例如兔或大鼠的研究与人研究结果无关联。例如，虽然在人研究中观察到给予柚苷配基(作为给予柑桔(Citrus)汁中发现的许多黄酮类化合物组分的一个实例)增加HDL，但对LDL或甘油三酸酯无影响，但发现当给予兔柚苷配基时，减少LDL，但对HDL无影响。

另外，至今没有临床研究描述用于治疗人心血管疾病的黄酮类化合物例如柚苷配基或1，2-二苯乙烯例如白藜芦醇或其它多元酚的合适剂量。

具有保护基团的化合物可经历更长的血清半衰期、增加效力、减少毒性和提高治疗效果

作为治疗药物给予有需要个体的化合物通常在***前在身体中代谢为多种代谢物。此类代谢物通常在毒性、效力和驻留在血清中的时间方面与母体化合物不同。对于许多化合物，代谢物不如母体化合物有效，而且毒性可能更大。

在代谢外源给予的治疗化合物中，可能发生多种不同的变化，例如加入各种化学部分或除去关键基团。发生在体内的一个代谢反应是除去羟基。从具有黄酮类化合物、1，2-二苯乙烯和其它多元酚化合物、包括本发明化合物的供氧化氮衍生物的母核结构的化合物中除去羟基，可显著减少这些化合物对胆固醇代谢的正影响的能力，因为前述羟基是此类分子的活性部位的主要部分。因此，如果利用某些保护羟基以降低代谢速率从而增加化合物驻留在身体中的时间的机理，有利于改善给予本发明化合物的有益作用。

常用于实验室化学反应的一种保护机理是使用保护基团，它与大分子的容易修饰的不稳定化学基团连接，以便防止不稳定基团变性或失去。可将保护基团以后除去以恢复原始分子，不改变整个分子中的任何共价键。可对预定给予患者的化合物使用类似的保护形式，其中已知身体中很可能发生重新组成活性分子的反应。可控制保护基团从分子中释放的速度，以影响药物的释放速度。本发明的目的是提供在体内半衰期延长和/或延迟***的有效化合物。

存在改善心血管疾病疗法的需要

鉴于以上所述，很明显，需要开发可安全和有效地降低血液胆固醇，同时减少内皮功能障碍和减少血管氧化性应激反应的改进疗法和化合物。

发明概述

本发明的一个方面是提供各类新化合物，这些新化合物具有同时供给氧化氮并随清除自由基的抗氧化剂分子释放而共同定位(co-localized)的能力；以及用它们治疗的方法。这些新化合物同时具有诱导ApoAl表达的能力，并因而增加血液HDL水平和降低血液胆固醇水平。此外，这些化合物具有其它有益的活性，包括抑制HMG-CoA还原酶、增加PPAR活性、抑制ACAT、增加ABCA-1活性和降低血液LDL和甘油三酸酯的活性水平。这些化合物的联合多重作用可用于减少内皮功能障碍、减少血管氧化性应激反应和降低高脂血症，因而治疗心血管疾病，例如动脉粥样硬化、高血压、冠状动脉疾病、脑血管疾病等。

根据本发明的各个方面和原理，提供以下化合物。

含以下结构的1，2-二苯乙烯化合物：

其中

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉和R₁₀可各自独立为氢、羟基[OH]、羟烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO₂]、甲氧基[OCH₃]、乙氧基[OCH₂CH₃]、氟[F]、氯[Cl]、CF₃、CCl₃、磷酸酯基、R₁₁、R₁₂、OR₁₁、OR₁₂、OCOR₁₁、OCOR₁₂、O-硫酸酯[硫酸酯缀合物]或O-葡糖醛酸酯(glucoronidate)[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)缀合物]，条件是R₁-R₁₀中的至少一个为硝基氧基、R₁₂、OR₁₂或OCOR₁₂；和

其中OCOR表示

且R为R₁₁或R₁₂，

其中R₁₁为C_1-18、芳基、杂芳基或其衍生物，其中所述衍生物任选被取代和任选为支链，并可具有一个或多个被S、N或O置换的C原子，和

其中R₁₂为C_1-18、芳基、杂芳基或其衍生物，其中所述衍生物任选被取代，任选为支链，可具有一个或多个被S、N或O置换的C原子，且含一个或多个ONO₂，和其中X可为单、双或三键。

含以下结构的黄酮类化合物：

其中

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉、R₁₀、R₁₃和R₁₄可各自独立为氢、羟基[OH]、羟烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO₂]、甲氧基[OCH₃]、乙氧基[OCH₂CH₃]、氟[F]、氯[Cl]、CF₃、CCl₃、磷酸酯基、R₁₁、R₁₂、OR₁₁、OR₁₂、OCOR₁₁、OCOR₁₂、O-硫酸酯[硫酸酯缀合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)缀合物]，条件是R₁-R₁₀或R₁₃或R₁₄中至少一个为硝基氧基、R₁₂、OR₁₂或OCOR₁₂；和

其中OCOR表示

且R为R₁₁或R₁₂，

其中R₁₂为C_1-18、芳基、杂芳基或其衍生物，其中所述衍生物任选被取代，任选为支链，可具有一个或多个被S、N或O置换的C原子，且含一个或多个ONO₂；

X可为O、CR₁₃或NR₁₃；

Y可为CO[仍然保留6原子环结构的酮]、CR₁₄或NR₁₄；和

Z可为单键或双键。

含以下结构的异黄酮类化合物(isoflavonoid)：

其中

其中OCOR表示

且R为R₁₁或R₁₂，

X可为O、CR₁₃或NR₁₃；

Y可为CO[仍然保留6原子环结构的酮]、CR₁₄或NR₁₄；和

Z可为单键或双键。

含以下结构的查尔酮(chalcone)化合物：

其中

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉、R₁₀和R₁₃可各自独立为氢、羟基[OH]、羟烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO₂]、甲氧基[OCH₃]、乙氧基[OCH₂CH₃]、氟[F]、氯[Cl]、CF₃、CCl₃、磷酸酯基、R₁₁、R₁₂、OR₁₁、OR₁₂、OCOR₁₁、OCOR₁₂、O-硫酸酯[硫酸酯缀合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)缀合物]，条件是R₁-R₁₀或R₁₃中至少一个为硝基氧基、R₁₂、OR₁₂或OCOR₁₂；和

其中OCOR表示

且R为R₁₁或R₁₂，

X可为单键或双键；

Y可为单键或双键；和

Z可为CO[酮]、CR₁₃或NR₁₃；

条件是X和Y不都为双键，和如果Z为CO，则Y不为双键。

含以下结构的多元酚化合物：

其中

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉和R₁₀可各自独立为氢、羟基[OH]、羟烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO₂]、甲氧基[OCH₃]、乙氧基[OCH₂CH₃]、氟[F]、氯[Cl]、CF₃、CCl₃、磷酸酯基、R₁₁、R₁₂、OR₁₁、OR₁₂、OCOR₁₁、OCOR₁₂、O-硫酸酯[硫酸酯缀合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)缀合物]，条件是R₁-R₁₀中的至少一个为硝基氧基、R₁₂、OR₁₂或OCOR₁₂；和

其中OCOR表示

且R为R₁₁或R₁₂，

其中R₁₁为C_1-18、芳基、杂芳基或其衍生物，其中所述衍生物任选被取代和任选为支链，可具有一个或多个被S、N或O置换的C原子，和

其中R₁₂为C_1-18、芳基、杂芳基或其衍生物，其中所述衍生物任选被取代，任选为支链，可具有一个或多个被S、N或O置换的C原子，且含一个或多个ONO₂；和

X可为C、S、(CO)、SO、AKA酮、(SO₂)N、(CO)C、(CO)N、(CO)O、C-N[单键]、C＝N[双键]、C-O、N-O、N-N[单键]或N＝N[双键]。

此外，还提供治疗患者的与心血管、胆固醇或脂质有关的疾病的方法，该方法包括给予需要治疗的患者治疗有效量的任何前述化合物。另一种优选的用于诱导患者的ApoA1表达，同时提供抗氧化剂活性的治疗方法包括给予所述患者任何前述化合物。其它本发明优选的用于降低患者血清胆固醇的方法还包括给予所述患者任何前述化合物。

此外，还提供治疗或预防患者的早老性痴呆、糖尿病、肥胖症、缺血性再灌注损伤、充血性心力衰竭和相关疾病的方法，该方法包括给予需要治疗的患者治疗有效量的任何前述化合物。低血清HDL水平与早老性痴呆风险增大有关(Suryadevara等2003 J.Gerontol ABiol.Sci.Med.Sci.58(9)：M859-61)。发现本发明化合物调节PPARγ活性；PPARγ功能障碍与糖尿病、肥胖症、缺血性再灌注损伤、充血性心力衰竭和有关疾病有关(Ferre等2004 Diabetes 53增补版1：S43-50；Yue 2003 Drugs Today(Bare)39(12)：949-60)。

本发明和最佳模式详述

按照本发明的原理和各方面，提供关于使用1，2-二苯乙烯、多元酚和黄酮类化合物及其衍生物的供NO类似物治疗心血管疾病的方法、化合物和描述潜在作用机理的详细说明。理解潜在的作用机理可导致增加开发更多具有治疗益处进一步提高的衍生物和类似物，它们也在本发明的范围内。

很明显有许多因素影响心血管疾病的发病。现代药物中缺乏同时治疗发生疾病的三个主要方面，即血管氧化性应激反应增加、氧化氮的生物利用度减少和高胆固醇血症的方法也是显而易见的。因此，本发明通过提供单一新的具有抗氧化剂活性、氧化氮释放活性和诱导胆固醇逆转运能力的分子，详述同时针对所有三个因素的方法。根据氧化氮释放时，抗氧化能力和氧化氮供给同时发生的事实，使得本发明化合物和治疗方法更有效，因此尤其优选它们。本发明提供与以下的物质有任何类型有利连接的并仍保留本发明提供活性的供NO部分：形成本发明期望化合物母核的1，2-二苯乙烯、其它多元酚和黄酮类化合物的几乎任何部分，或保留抗氧化性质和诱导载脂蛋白A1转录能力或具有增加胆固醇逆转运或降低血清胆固醇活性的此类化合物的任何衍生物，或甚至有抗氧化剂和降低血清胆固醇能力的任何化合物。

本发明提供的化合物包括具有当给予患者时，能够释放氧化氮的连接部分的白藜芦醇、其它1，2-二苯乙烯、其它多元酚和黄酮类化合物的类似物。此类化合物包括但不限于白藜芦醇、其它1，2-二苯乙烯、其它多元酚和黄酮类化合物的类似物，其中供氧化氮部分属于有机硝酸酯、烷氧基硝酸酯、diazeniumdiolate、硫代硝基氧基(thionitroxy)等类型化学结构。

实施本发明不需要理解通过其改变本发明化合物的确切机理。本文中公开的机理是非限制性的，仅用于更好地描述本发明。虽然不受理论限制，据认为，由于由至少一个芳环结构组成的活性和必需母核，并且芳环上具有至少一个羟基的分子结构，白藜芦醇产生前述作用。天然产生的白藜芦醇本身尤其由两个芳环组成，两个羟基位于一个环的3和5位，一个羟基位于另一个环的4′位，两个芳环通过两个碳原子连接，两个碳原子之间有双键。据认为，该大类的其它化合物，所述类是含有至少一个芳环结构，且环上至少有一个羟基的那些化合物，具有与列举的白藜芦醇那些相同的能力和产生相同的结果。

因此，含有通过两个碳原子连接的两个芳环的1，2-二苯乙烯；其它多元酚，例如含有通过1、2或3个原子连接的两个或多个优选两个芳环的那些多元酚，所述原子独立选自氮、碳、氧和硫，它们可以或不可以被侧基例如酮的氧独立取代；和黄酮类化合物，例如但不限于天然存在的黄酮类化合物，例如但不限于柚苷配基、槲皮素、piceatannol、紫铆因、非瑟酮、异甘草素和橙皮素(hesperitin)，是具有类似于所述白藜芦醇的那些性质的所有化合物。结果发现，当用于预防或治疗疾病、障碍或病症，尤其但不限于与胆固醇、心血管疾病、高血压、氧化性损害、异常脂血症、载脂蛋白A1或apoB调节有关的那些疾病、障碍或病症，或在改变或调节胆固醇代谢的其它方面，例如抑制HMG CoA还原酶、增加PPAR活性、抑制ACAT、增加ABCA-1活性、升高HDL或降低LDL或甘油三酸酯，可认为任何这些化合物与白藜芦醇功能可互换。例如在美国专利5,877,208、6,455,577、5,763,414、5,792,461、6,165,984和6,133,241中已说明不含与供氧化氮部分连接的黄酮类化合物具有潜在降低血清胆固醇的活性。

类似的，当用于从S位点，从AGCCCCCGC元件调节转录，或当用于抑制白细胞粘附或血小板凝集，或抑制COX-1时，可认为该类任何1，2-二苯乙烯、其它多元酚和黄酮类化合物与白藜芦醇功能可互换。这并不意味所有化合物在这些功能或能力的每一顶，或体内毒性或效力或生物利用度的活性水平方面相同。在简单试验的过程中，通过本领域技术人员容易操作而不需要过度的实验，这些化合物证明其中某些化合物提供相当于其它化合物提高的能力或功能，因此比其它的化合物优选作为治疗药物。

还已知酚羟基，例如在本发明改进的碱化合物中发现的那些酚羟基易于发生促使***的葡糖醛酸酯化(glucoronidation)和硫酸酯化反应。通过阻断酚羟基与其它化学基团，例如硝酸酯(又称为有机硝酸酯或ONO₂)基、烷氧基硝基氧基或反向酯硝基氧基反应来阻止这些反应的保护进一步延长分子在身体中的半衰期和延迟***。

作为实例，白藜芦醇所含的三个推断重要和治疗活性羟基可通过用硝酸酯(又称为硝基氧基或ONO₂，偶尔称为“硝氧基”，但它不应与NO₂混淆)、烷氧基硝基氧基或反向酯硝基氧基替换来保护，而在体内，随时间推移它们被羟基置换重新组成白藜芦醇活性化合物。因为在一定时间内，供氧化氮基团每次被一个羟基置换，而含一个或两个供氧化氮基团的白藜芦醇分子仍然有部分活性，因此在体内的白藜芦醇活性有效半衰期延长。这种策略还允许使用相对于羟基化形式的白藜芦醇母体化合物更低剂量的硝酸酯形式的白藜芦醇，然后硝酸酯形式的白藜芦醇对患者造成的副作用较小。显然，这种方法对本发明期望的其它1，2-二苯乙烯、其它多元酚和黄酮类化合物也有效，因为期望它们也包含可形成分子活性部位主要部分的一个或多个羟基。

本发明提供上述1，2-二苯乙烯、多元酚和黄酮类化合物以外化合物的硝基氧基衍生物的合成、组合物和处理方法，其中由其合成硝基氧基衍生物的所述化合物含芳环或杂芳环、一个或多个羟基，和已知调节血清胆固醇水平。含芳环或杂芳环、一个或多个羟基，和已知调节血清胆固醇水平的这类化合物的一个实例包括HMG CoA还原酶抑制剂，又称为他汀类药物。本发明提供市售他汀类药物的硝基氧基衍生物，市售他汀类药物包括阿托伐他汀、洛伐他汀、普伐他汀、辛伐他汀、氟伐他汀、西立伐他汀和罗苏伐他汀。在本说明书范围内的含芳环或杂芳环、一个或多个羟基和已知调节血清胆固醇水平的两种其它化合物是依泽替米贝和烟酸。因此，本发明还提供依泽替米贝和烟酸的硝基氧基衍生物。

合成1，2-二苯乙烯、多元酚、黄酮类化合物、他汀类药物和依泽替米贝的供氧化氮衍生物

用已知方法，例如其中硝基氧基取代母体分子上羟基的Hakimelahi法可将有机硝酸酯(又称为硝基氧基、硝酸酯、ONO₂，偶尔称为“硝氧基”，但它不应与NO₂混淆)基加到化合物上(Hakimelahi等1984.Helv.Chim.Acta.67：906-915)。

用例如美国专利5,861,426中说明的方法可将烷氧基硝基氧基加到化合物上。可通过各种方法，包括例如美国专利4,954,526、5,039,705、5,155,137、5,405,919和6,232,336中说明的方法合成Diazeniumdolates，所有这些专利通过引用结合到本文中。

供氧化氮部分最好可通过共价键或离子键与1，2-二苯乙烯例如白藜芦醇、多元酚或黄酮类化合物例如柚苷配基或本发明中所述和提供的其它化合物，例如他汀类药物成员或其衍生物或类似物连接。优选供氧化氮部分或各部分通过一个或多个共价键连接。供氧化氮部分可与分子的任何部分有利地连接。在一个实施方案中，供氧化氮部分置换了一个或多个羟基。在一个优选的实施方案中，是有机硝酸酯基代替羟基。在另一个优选的实施方案中，是与酯或反向酯连接的有机硝酸酯基代替羟基。在另一个优选的实施方案中，各供氧化氮部分置换了1，2-二苯乙烯例如白藜芦醇、多元酚或黄酮类化合物例如柚苷配基或本发明所述和提供的其它化合物例如他汀类药物任何成员的所有羟基或其衍生物或类似物的所有羟基。

对于本发明所有化合物，还期望和提供被氟离子、氯离子、溴离子、CF₃基团、CCl₃基团、CBr₃、任选取代的任选支链的1-18个碳原子烷基链、或任选取代的任选支链的1-18个碳原子烷氧基链取代的羟基，如此修饰母体化合物是已知增加药物稳定性而不改变作用机理的通常作法，本领域技术人员可容易地完成。

对于所有本发明化合物，还期望和提供化合物的乙酰化衍生物，如此修饰母体化合物是已知提高药物的有益作用而不改变作用机理的通常作法，本领域技术人员可容易地完成。乙酰化衍生物包括酯、反向酯、具有连接供氧化氮部分(包括但不限于硝基氧基)的酯和连接供氧化氮部分(包括但不限于硝基氧基)的反向酯。

对于所有本发明化合物，还期望和提供化合物的磷酸酯化衍生物，如此修饰母体化合物是已知提高药物的有益作用而不改变作用机理的通常作法，本领域技术人员可容易地完成。

本文中还期望本发明期望化合物的葡糖醛酸酯化衍生物，因为葡糖醛酸酯化是作为体内1，2-二苯乙烯、其它多元酚和黄酮类化合物代谢一部分的自然发生过程。一旦提供给患者，多数本发明化合物会在体内被修饰，因此会以葡糖醛酸酯化的形式存在于体内。因此，在给药前，葡萄糖醛酸与本发明化合物的缀合不排除体内研究测得的化合物功能或治疗效用。因此，认为与另外的糖部分连接的本发明化合物的功能可与母体化合物相比，因此本发明提供它们。例如在Otake方法中使用人肝微粒体(Otake等2002.Drug Metab.Disp.30(5)：576-581)，可实现本发明期望的使任何1，2-二苯乙烯、多元酚或黄酮类化合物衍生物的葡糖醛酸酯化。

类似地，本文中还期望本发明期望的化合物的硫酸酯化衍生物，因为硫酸酯化是作为体内1，2-二苯乙烯、其它多元酚和黄酮类化合物代谢一部分的自然发生过程。一旦提供给患者，某些本发明化合物会在体内被修饰，因此会以硫酸酯化的形式存在于体内。因此，硫酸酯化不排除体内研究测得的化合物功能或治疗效用。因此，认为经硫酸酯化反应的本发明化合物的功能可与母体化合物相比，因此本发明提供它们。例如可用Varin的离子-空气(ion-air)萃取方法(Varin等1987.Anal.Biochem.161：176-180)，实现本发明期望的使任何1，2-二苯乙烯、多元酚或黄酮类化合物衍生物硫酸酯化。

本发明还提供包括优选用于药物制剂的那些盐的本文中所述化合物的盐。

本发明期望的化合物

为明确，本发明提供的化合物提供说明性化学结构，但这不会将本发明范围限制在下列化合物。当使用术语“硝基氧基”时，它表示硝酸酯基-ONO₂。当使用术语“羟基”时，它表示基团-OH。当使用术语“反向酯”时，它表示基团

其中O-键与黄酮类化合物、1，2-二苯乙烯或多元酚结构的母体化合物连接，

且R为C_1-18、芳基、杂芳基或其衍生物，其中所述衍生物任选被取代，任选为支链，和可具有一个或多个被S、N或O置换的C原子。

当使用术语“反向酯硝基氧基”时，它表示基团

且R为C_1-18、芳基、杂芳基或其衍生物，其中所述衍生物任选被取代，任选为支链，和可具有一个或多个被S、N或O置换的C原子，并含有一个或多个ONO₂。

本发明提供具有1，2-二苯乙烯通用结构的化合物：

其可进一步划分为以下结构：

其中

其中OCOR表示

且R为R₁₁或R₁₂，

其中R₁₂为C_1-18、芳基、杂芳基或其衍生物，其中所述衍生物任选被取代，任选为支链，可具有一个或多个被S、N或O置换的C原子，且含有一个或多个ONO₂。

本发明还提供以下通用结构化合物：

其中

其中OCOR表示

且R为R₁₁或R₁₂，

其中R₁₂为C_1-18、芳基、杂芳基或其衍生物，其中所述衍生物任选被取代、任选为支链，可具有一个或多个被S、N或O置换的C原子，且含有一个或多个ONO₂；

且X和Y可各自独立为C、N、O，条件是如果X或Y的任一个为C，则另一个不为C。

本发明还提供以下通用结构化合物：

其中

其中OCOR表示

且R为R₁₁或R₁₂，

本发明还提供具有多元酚通用结构的化合物：

其可进一步分为以下结构：

其中

X为C或S，

和R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉和R₁₀可各自独立为氢、羟基[OH]、羟烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO₂]、甲氧基[OCH₃]、乙氧基[OCH₂CH₃]、氟[F]、氯[Cl]、CF₃、CCl₃、磷酸酯基、R₁₁、R₁₂、OR₁₁、OR₁₂、OCOR₁₁、OCOR₁₂、O-硫酸酯[硫酸酯缀合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)缀合物]，条件是R₁-R₁₀中的至少一个为硝基氧基、R₁₂、OR₁₂或OCOR₁₂；和

其中OCOR表示

且R为R₁₁或R₁₂，

本发明还提供具有黄酮类化合物通用结构的化合物：

其可进一步分为以下结构：

本发明还提供具有异黄酮类化合物通用结构的化合物：

其可进一步分为以下结构：

其中

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉、R₁₀、R₁₁、R₁₂、R₁₅和R₁₆可各自独立为氢、羟基[OH]、羟烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO₂]、甲氧基[OCH₃]、乙氧基[OCH₂CH₃]、氟[F]、氯[Cl]、CF₃、CCl₃、磷酸酯基、R₁₃、R₁₄、OR₁₃、OR₁₄、OCOR₁₃、OCOR₁₄、O-硫酸酯[硫酸酯缀合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)缀合物]，条件是R₁-R₁₂或R₁₅或R₁₆中至少一个为硝基氧基、R₁₄、OR₁₄或OCOR₁₄；和

其中OCOR表示

且R为R₁₃或R₁₄，

其中R₁₃为C_1-18、芳基、杂芳基或其衍生物，其中所述衍生物任选被取代和任选为支链，可具有一个或多个被S、N或O置换的C原子，和

其中R₁₄为C_1-18、芳基、杂芳基或其衍生物，其中所述衍生物任选被取代，任选为支链，可具有一个或多个被S、N或O置换的C原子，且含有一个或多个ONO₂；

X可为O、CR₁₅或NR₁₅；

Y可为CO[仍然保留6原子环结构的酮]、CR₁₆或NR₁₆；和

Z可为单键或双键。

本发明还提供具有查尔酮(chalcone)通用结构的化合物：

其某些结构由以下结构代表：

其中

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉、R₁₀和R₁₁可各自独立为氢、羟基[OH]、羟烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO₂]、甲氧基[OCH₃]、乙氧基[OCH₂CH₃]、氟[F]、氯[Cl]、CF₃、CCl₃、磷酸酯基、R₁₃、R₁₂、OR₁₃、OR₁₂、OCOR₁₃、OCOR₁₂、O-硫酸酯[硫酸酯缀合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)缀合物]，条件是R₁-R₁₁中的至少一个为硝基氧基、R₁₂、OR₁₂或OCOR₁₂；和

其中OCOR表示

且R为R₁₂或R₁₃，

其中R₁₂为C_1-18、芳基、杂芳基或其衍生物，其中所述衍生物任选被取代，任选为支链，可具有一个或多个被S、N或O置换的C原子，且含有一个或多个ONO₂；和

其中

X可为单键或双键；

Y可为单键或双键；和

Z可为CO[酮]、CR₁₁或NR₁₁；

本发明中提供的降胆固醇化合物的其它供NO衍生物包括：

本发明还提供以下通式化合物

其中

R₁、R₂、R₃、R₄可各自独立为氢、羟基[OH]、羟烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO₂]、甲氧基[OCH₃]、乙氧基[OCH₂CH₃]、氟[F]、氯[Cl]、CF₃、CCl₃、磷酸酯基、R₁₁、R₁₂、OR₁₁、OR₁₂、OCOR₁₁、OCOR₁₂、O-硫酸酯[硫酸酯缀合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)缀合物]，条件是R₁-R₄中的至少一个为硝基氧基、R₁₂、OR₁₂或OCOR₁₂；和

其中OCOR表示

且R为R₁₁或R₁₂，

本发明还提供化合物

其中

R₁为硝基氧基、R₁₂、OR₁₂或OCOR₁₂；和

其中OCOR表示

且R为R₁₂，

本发明还提供化合物

其中

R₁为硝基氧基、R₁₂、OR₁₂或OCOR₁₂；和

其中OCOR表示

且R为R₁₂，

本发明还提供以下通式化合物

其中

R₁、R₂、R₃可各自独立为氢、羟基[OH]、羟烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO₂]、甲氧基[OCH₃]、乙氧基[OCH₂CH₃]、氟[F]、氯[Cl]、CF₃、CCl₃、磷酸酯基、R₁₁、R₁₂、OR₁₁、OR₁₂、OCOR₁₁、OCOR₁₂、O-硫酸酯[硫酸酯缀合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)缀合物]，条件是R₁-R₃中的至少一个为硝基氧基、R₁₂、OR₁₂或OCOR₁₂；和

其中OCOR表示

且R为R₁₁或R₁₂，

本发明还提供以下通式化合物

其中

其中OCOR表示

且R为R₁₁或R₁₂，

本发明还提供以下通式化合物

其中

其中OCOR表示

且R为R₁₁或R₁₂，

本发明还提供以下通式化合物

其中

其中OCOR表示

且R为R₁₁或R₁₂，

本发明还提供以下通式化合物

其中

R₁、R₂可各自独立为氢、羟基[OH]、羟烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO₂]、甲氧基[OCH₃]、乙氧基[OCH₂CH₃]、氟[F]、氯[Cl]、CF₃、CCl₃、磷酸酯基、R₁₁、R₁₂、OR₁₁、OR₁₂、OCOR₁₁、OCOR₁₂、O-硫酸酯[硫酸酯缀合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)缀合物]，条件是R₁-R₂中的至少一个为硝基氧基、R₁₂、OR₁₂或OCOR₁₂；和

其中OCOR表示

且R为R₁₁或R₁₂，

本发明还提供化合物

其中

R₁为硝基氧基、R₁₂、OR₁₂或OCOR₁₂；和

其中OCOR表示

且R为R₁₂，

合成1、2-二苯乙烯、多元酚和黄酮类化合物的供NO衍生物的方法

对本领域技术人员而言，存在许多合成1，2-二苯乙烯例如白藜芦醇、多元酚或黄酮类化合物例如柚苷配基或其它抗氧化剂、降血清胆固醇或激活胆固醇逆转运或升HDL化合物的供氧化氮类似物或衍生物的方法是显而易见的。尽管有已知方法，但此类化合物以前从未描述或合成过。优选此类化合物是与供氧化氮部分结合的1，2-二苯乙烯例如白藜芦醇、多元酚或黄酮类化合物例如柚苷配基或其它抗氧化剂、降血清胆固醇或激活胆固醇逆转运或升HDL的化合物的类似物或衍生物。最优选此类化合物是用一个或多个ONO₂基团(又称为硝酸酯基、有机硝酸酯基或硝基氧基)替代母体化合物羟基的l，2-二苯乙烯例如白藜芦醇、多元酚或黄酮类化合物例如柚苷配基或其它抗氧化剂、降血清胆固醇或激活胆固醇逆转运或升HDL的化合物的类似物或衍生物。

本发明提供的化合物的一个实例是用代替存在于天然白藜芦醇的3个羟基的有机硝酸酯基取代的白藜芦醇。该化合物命名为3，4′，5-三硝基氧基反式1，2-二苯乙烯或白藜芦醇三硝酸酯，或用IUPAC命名法为1，3-二-硝基氧基-5-[2-(4-硝基氧基-苯基)-乙烯基]-苯。本发明提供的这种化合物的另一个实例是用代替存在于天然柚苷配基的3个羟基的有机硝酸酯基取代的柚苷配基。该化合物命名为柚苷配基三硝酸酯，或用IUPAC命名法为5，7-二-硝基氧基-2-(4-硝基氧基-苯基)-苯并二氢吡喃-4-酮。本发明提供的化合物的另一个实例是柚苷配基的反向酯硝基氧基类似物，其三个羟基被取代，为5-硝基氧基-戊酸4-[5，7-二-(5-硝基氧基-戊酰基氧基)-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]-苯基酯。尽管不受本文中示例描述的那些化合物的限制，但在本发明实施例部分提供更多的实例。

用于反应的反式白藜芦醇原料可从Bio-Stat Limited(Stockport，U.K.)或Sigma Chemical Co.(St.Louis，MO，USA)购买得到，用Goldberg等的方法(1995)Am.J.Enol.Vitic.46(2)：159-165，从葡萄酒中分离。或者，可按Toppo在美国专利6,048,903中说明的方法，或通过Waterhouse由Moreno-Manas和Pleixats方法改良的Wittig反应，由适当取代的苯酚为原料，合成反式白藜芦醇。

用作合成反应成分的柚苷配基是天然存在的化合物，容易从广泛的市场来源得到，或者可用熟知方法从天然来源例如柑桔汁中分离，无需过度的实验。

给药

为治疗以上提及的疾病，可单独使用化合物，但更优选提供含有可接受的载体或赋形剂的药学上可接受的制剂形式。尽管在任何具体情况中，最适合的给药形式取决于所治疗疾病的程度和严重性以及使用具体化合物的性质，但这些制剂包括适用于口服、直肠、局部、口颊和肠胃外(例如皮下、肌内、皮内或静脉内)给药的那些制剂。

适用于口服给药的制剂可以不连续单位提供，例如胶囊剂、扁囊剂、锭剂或片剂，各自含预定量化合物粉末或颗粒；为水或非水液体溶液或混悬液；或为水包油或油包水乳剂。按说明，可通过任何合适的药剂方法制备此类制剂，这些方法包括使活性化合物与载体或赋形剂(它们可组成一种或多种附加组分)组合的步骤。按照与制剂中的其它组分相容和必须对接受者无害的原则，载体必须是可接受的。载体可以是固体或液体或两者，优选与化合物一起配制成单位剂量制剂，例如片剂，它可含0.05％-95％(重量)活性化合物。也可使用包括其它化合物的其它药理活性物质。可通过任何熟知的药剂技术制备基本上由混合各组分组成的本发明制剂。

对于固体组合物，常规无毒固体载体包括例如药用级甘露醇、乳糖、淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、滑石粉、纤维素、葡萄糖、蔗糖、碳酸镁等。可通过例如将本文中所述活性化合物和任选的药用助剂溶解、分散等在赋形剂，例如水、盐水、葡萄糖水溶液、甘油、乙醇等中，从而形成溶液或混悬液，制备药理学上可使用的液体组合物。一般而言，最好通过将活性化合物与液体或固体载体细粉或两者均匀和充分地混合，然后如需要使产物成形，制备合适的制剂。例如，可通过将化合物和任选与一种或多种辅助组分的粉末或颗粒压缩或模制制备片剂。可通过在合适的机器上，压缩任选与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂和/或表面活性剂/分散剂混合的自由流动形式例如粉末或颗粒状化合物，制备压制片。可通过在合适的机器上，将化合物粉末用惰性液体稀释剂润湿，通过模制制备模制片。

适用于口颊(舌下)给药的制剂包括含矫味基质通常为蔗糖和***胶(atacia)或黄芪胶和化合物的锭剂，和含化合物和惰性基质例如明胶和甘油或蔗糖和***胶的软锭剂(pastilles)。

适用于肠胃外给药的本发明制剂包括化合物的无菌水性制剂，它们与接受者的血液基本等渗。这些制剂经静脉内给予，也可通过皮下、肌内或皮内注射给予。可通过使化合物与水混合，将得到的溶液灭菌并使其与血液等渗，便利地制备此类制剂。本发明注射用组合物通常含0.1-5％w/w活性化合物。

以单位剂量栓剂提供适用于直肠给药的制剂。可通过将化合物与一种或多种常规固体载体例如可可脂混合，然后使得到混合物成形，制备这些制剂。

适用于皮肤局部应用的制剂优选采用软膏、霜剂、洗剂、糊剂、凝胶剂、喷雾剂、气雾剂或油的形式。可使用的载体和赋形剂包括凡士林、羊毛脂(lanoline)、聚乙二醇、醇和其中两种或多种的组合。通常存在的活性化合物的浓度以组合物计为0.1-15％w/w，例如0.5-2％。

给予活性化合物的量自然取决于待治疗的患者、患者的体重、给药的方式和处方医师的判断。在本发明方法中，给药方案通常涉及每天或每半天给予可理解的1μg-1000mg剂量的封囊化合物。封囊化帮助进入作用部位，允许同时给予各活性成分，理论上产生协同作用。按照标准给药方案，医师容易确定最佳剂量，能容易地改进给药以达到这样的剂量。

实施例

提出以下实施例以帮助理解本发明，但不应理解为对本文所述和要求保护的发明的具体限定。在本领域技术人员认识范围内的本发明的此类变化形式，包括现已知或其后开发等同化合物的取代，包括制剂改变或实验设计的较小改变，认为在结合在本文中的本发明范围内。

对于本文中提供的所有实施例，除另有说明外，术语“各种化合物”或“化合物”是指本发明中提供的任何化合物。

实施例1：制备1，3-二-硝基氧基-5-[2-(4-硝基氧基-苯基)-乙烯基]-苯

在25℃下，向1mmol 5-[(E)-2-(4-羟基-苯基)-乙烯基]-苯-1，3-二酚(同义词：白藜芦醇；3，4′，5-三羟基反式1，2-二苯乙烯)的5ml无水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物(1，3-二-硝基氧基-5-[(E)-2-(4-硝基氧基-苯基)-乙烯基]-苯)和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例2：制备piceatannol四硝酸酯

在25℃下，向1mmol(E)-4-(2-(3，5-二羟基苯基)乙烯基)-1，2-苯二酚(同义词：piceatannol)的5ml无水THF溶液中加入4mmolSOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物(piceatannol四硝酸酯)和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例3：制备紫铆因四硝酸酯

在25℃下，向1mmol 3，4，2′，4′-四羟基查尔酮(同义词：紫铆因)的5ml无水THF溶液中加入4mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，使溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物紫铆因四硝酸酯和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例4：制备异甘草素三硝酸酯

在25℃下，向1mmol 4，2′，4′-三羟基查尔酮(同义词：异甘草素)的5ml无水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物异甘草素四硝酸酯和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例5：制备非瑟酮四硝酸酯

在25℃下，向1mmol 3，7，3′，4′-四羟基黄酮(同义词：非瑟酮)的5ml无水THF溶液中加入4mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物非瑟酮四硝酸酯和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例6：制备槲皮素五硝酸酯

在25℃下，向1mmol 3，5，7，3′，4′-五羟基黄酮(同义词：槲皮素)的5ml无水THF溶液中加入5mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物槲皮素五硝酸酯和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例7：制备N-(3，5-二-硝基氧基-苯基)-N′-(4-硝基氧基-苯基)-肼

在25℃下，向1mmol 5-[N′-(4-羟基-苯基)-肼基]-苯-1，3-二酚的5ml无水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物N-(3，5-二-硝基氧基-苯基)-N′-(4-硝基氧基-苯基)-肼和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例8：制备1，3-二-硝基氧基-5-(4-硝基氧基-苯基二硫基)-苯

在25℃下，向1mmol 5-(4-羟基-苯基二硫基)-苯-1，3-二酚的5ml无水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物1，3-二-硝基氧基-5-(4-硝基氧基-苯基二硫基)-苯和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例9：制备1，3-二-硝基氧基-5-(4-硝基氧基-苯基过氧基)-苯

在25℃下，向1mmol 5-(4-羟基-苯基过氧基)-苯-1，3-二酚的5ml无水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物1，3-二-硝基氧基-5-(4-硝基氧基-苯基过氧基)-苯和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例10：制备1，3-二-硝基氧基-5-(4-硝基氧基-苯基硫基甲基)-苯

在25℃下，向1mmol 5-(4-羟基-苯基硫基甲基)-苯-1，3-二酚的5ml无水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物1，3-二-硝基氧基-5-(4-硝基氧基-苯基硫基甲基)-苯和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例11：制备N-(3，5-二-硝基氧基-苯基-O-(4-硝基氧基-苯基)-羟基胺

在25℃下，向1mmol 5-(4-羟基-苯氧氨基)-苯-1，3-二酚的5ml无水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物N-(3，5-二-硝基氧基-苯基-O-(4-硝基氧基-苯基)-羟基胺和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例12：制备苄基-(4-硝基氧基-苯基)-胺

在25℃下，向1mmol 4-苄基氨基-苯酚的5ml无水THF溶液中加入1mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使硝酸酯化产物苄基-(4-硝基氧基-苯基)-胺通过硅胶层析纯化和分离。

实施例13：制备2-(亚水杨基氨基)苯酚二硝酸酯

在25℃下，向1mmol 2-(亚水杨基氨基)苯酚的5ml无水THF溶液中加入2mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物2-(亚水杨基氨基)苯酚二硝酸酯和部分硝酸酯化产物(其中任一羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例14：制备(2，4-二-硝基氧基-苯基)-(2-硝基氧基-苯基)-二氮烯

在25℃下，向1mmol 4-(2-羟基-苯基偶氮基)-苯-1，3-二酚(同义词：4-((2-羟基苯基)偶氮基)-1，3-苯二酚)的5ml无水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物2，4-二-硝基氧基-苯基)-(2-硝基氧基-苯基)-二氮烯和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例15：制备二-(2，2′-硝基氧基-苯基)-二氮烯

在25℃下，向1mmol二-(2，2′-羟基-苯基)-二氮烯(同义词：1-羟基-2-(2-羟基苯基偶氮基)苯)的5ml无水THF溶液中加入2mmolSOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物二-(2，2′-硝基氧基-苯基)-二氮烯和部分硝酸酯化产物(其中任一羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例16：制备N-(3-硝基氧基-苯基)-苯磺酰胺

在25℃下，向1mmol N-(3-羟基-苯基)-苯磺酰胺(同义词：N-(3-羟基苯基)苯磺酰胺)的5ml无水THF溶液中加入1mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使硝酸酯化产物N-(3-硝基氧基-苯基)-苯磺酰胺通过硅胶层析纯化和分离。

实施例17：制备N-(4-硝基氧基-苯基)-苯磺酰胺

在25℃下，向1mmol N-(4-羟基-苯基)-苯磺酰胺(同义词：N-(4-羟基苯基)苯磺酰胺)的5ml无水THF溶液中加入1mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使硝酸酯化产物N-(4-硝基氧基-苯基)-苯磺酰胺通过硅胶层析纯化和分离。

实施例18：制备3，3′，4，5′-四硝基氧基联苄

在25℃下，向1mmol 3，3′，4，5′-四羟基联苄的5ml无水THF溶液中加入4mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物3，3′，4，5′-四硝基氧基联苄和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例19：制备1-苄氧基-2-硝基氧基-苯

在25℃下，向1mmol 2-苄氧基-苯酚的5ml无水THF溶液中加入1mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使硝酸酯化产物1-苄氧基-2-硝基氧基-苯通过硅胶层析纯化和分离。

实施例20：制备苯甲酸3-硝基氧基-苯基酯

在25℃下，向1mmol苯甲酸3-羟基-苯基酯(同义词：间苯二酚单苯甲酸酯)的5ml无水THF溶液中加入1mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使硝酸酯化产物苯甲酸3-硝基氧基-苯基酯通过硅胶层析纯化和分离。

实施例21：制备2-硝基氧基-苯甲酸苯酯

在25℃下，向1mmol 2-羟基-苯甲酸苯酯(同义词：水杨酸苯酯)的5ml无水THF溶液中加入1mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使硝酸酯化产物2-硝基氧基-苯甲酸苯酯通过硅胶层析纯化和分离。

实施例22：制备2-硝基氧基-N-(4-硝基氧基-苯基)-苯甲酰胺

在25℃下，向1mmol 2-羟基-N-(4-羟基-苯基)-苯甲酰胺(同义词：柳胺酚(osalmid))的5ml无水THF溶液中加入2mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物2-硝基氧基-N-(4-硝基氧基-苯基)-苯甲酰胺和部分硝酸酯化产物(其中任一羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例23：制备2-硝基氧基-N-(3-硝基氧基-苯基)-苯甲酰胺

在25℃下，向1mmol 2-羟基-N-(3-羟基-苯基)-苯甲酰胺的5ml无水THF溶液中加入2mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物2-硝基氧基-N-(3-硝基氧基-苯基)-苯甲酰胺和部分硝酸酯化产物(其中任一羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例24：制备3，4，5-三-硝基氧基-N-苯基-苯甲酰胺

在25℃下，向1mmol 3，4，5-三羟基-N-((Z)-1-亚甲基-丁-2-烯基)-苯甲酰胺(同义词：没食子酰苯胺)的5ml无水THF溶液中加入3mmolSOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物3，4，5-三-硝基氧基-N-苯基-苯甲酰胺和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例25：制备1-(2，4-二-硝基氧基-苯基)-2-苯基-乙酮

在25℃下，向1mmol 1-(2，4-羟基-苯基)-2-苯基-乙酮(同义词：苄基2，4-二羟基苯基酮)的5ml无水THF溶液中加入2mmolSOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物1-(2，4-二-硝基氧基-苯基)-2-苯基-乙酮和部分硝酸酯化产物(其中任一羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例26：制备1，2-二-硝基氧基-3-苯氧基-苯

在25℃下，向1mmol 3-苯氧基-苯-1，2-二酚的5ml无水THF溶液中加入2mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物1，2-二-硝基氧基-3-苯氧基-苯和部分硝酸酯化产物(其中任一羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例27：制备1，2-二-硝基氧基-3-(2-硝基氧基-苯氧基)-苯

在25℃下，向1mmol 3-(2-羟基-苯氧基)-苯-1，2-二酚的5ml无水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物1，2-二-硝基氧基-3-(2-硝基氧基-苯氧基)-苯和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例28：制备1-硝基氧基-2-苯氧基-苯

在25℃下，向1mmol 2-苯氧基-苯酚的5ml无水THF溶液中加入1mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使硝酸酯化产物1-硝基氧基-2-苯氧基-苯通过硅胶层析纯化和分离。

实施例29：制备5，5-亚磺酰基双间苯二酚四硝酸酯

在25℃下，向1mmol 5，5-亚磺酰基双间苯二酚的5ml无水THF溶液中加入4mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物5，5-亚磺酰基双间苯二酚四硝酸酯和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例30：制备4，4′-硫代双1，3-苯二酚四硝酸酯

在25℃下，向1mmol 4，4′-硫代双1，3-苯二酚的5ml无水THF溶液中加入4mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物4，4′-硫代双1，3-苯二酚四硝酸酯和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例31：制备2，2′-硫代双苯酚二硝酸酯

在25℃下，向1mmol 2，2′-硫代双苯酚的5ml无水THF溶液中加入2mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物2，2′-硫代双苯酚二硝酸酯和部分硝酸酯化产物(其中任一羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例32：制备1-苄基-2，4-二-硝基氧基-苯

在25℃下，向1mmol 4-苄基-苯-1，3-二酚(同义词：3-苯基甲基-1，3-苯二酚)的5ml无水THF溶液中加入2mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物1-苄基-2，4-二-硝基氧基-苯和部分硝酸酯化产物(其中任一羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例33：制备2-苄基-1，4-二-硝基氧基-苯

在25℃下，向1mmol 2-苄基-苯-1，4-二酚(同义词：4-苯基甲基-1，4-苯二酚)的5ml无水THF溶液中加入2mmolSOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物2-苄基-1，4-二-硝基氧基-苯和部分硝酸酯化产物(其中任一羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例34：制备(2，3，4-三-硝基氧基-苯基)-(3，4，5-三-硝基氧基-苯基)-甲酮

在25℃下，向1mmol(2，3，4-三羟基-苯基)-(3，4，5-三羟基-苯基)-甲酮(同义词：依昔苯酮)的5ml无水THF溶液中加入6mmolSOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物(2，3，4-三-硝基氧基-苯基)-(3，4，5-三-硝基氧基-苯基)-甲酮和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例35：制备(2-硝基氧基-苯基)-苯胺

在25℃下，向1mmol 2-苯基氨基-苯酚的5ml无水THF溶液中加入1mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使硝酸酯化产物(2-硝基氧基-苯基)-苯胺通过硅胶层析纯化和分离。

实施例36：制备2-(3，5-二-硝基氧基-苯基)-6-硝基氧基-4H-苯并吡喃

在25℃下，向1mmol 5-(6-羟基-4H-苯并吡喃-2-基)-苯-1，3-二酚的5ml无水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物2-(3，5-二-硝基氧基-苯基)-6-硝基氧基-4H-苯并吡喃和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例37：制备2-(3，5-二-2硝基氧基-苯基)-6-硝基氧基-1，4-二氢-萘

在25℃下，向1mmol 5-(6-羟基-1，4-二氢-萘-2-基)-苯-1，3-二酚的5ml无水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物2-(3，5-二-硝基氧基-苯基)-6-硝基氧基-1，4-二氢-萘和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例38：制备2-(3，5-二-硝基氧基-苯基)-6-硝基氧基-1，2，3，4-四氢-萘

在25℃下，向1mmol 5-(6-羟基-1，2，3，4-四氢-萘-2-基)-苯-1，3-二酚的5ml无水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物2-(3，5-二-硝基氧基-苯基)-6-硝基氧基-1，2，3，4-四氢-萘和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例39：制备5，7-二-硝基氧基-2-(4-硝基氧基-苯基)-苯并二氢吡喃-4-酮

在25℃下，向1mmol 5，7-二羟基-2-(4-羟基-苯基)-苯并二氢吡喃-4-酮(同义词：柚苷配基)的5ml无水THF溶液中加入3mmolSOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物5，7-二-硝基氧基-2-(4-硝基氧基-苯基)-苯并二氢吡喃-4-酮和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例40：制备5，7-二-硝基氧基-2-(4-硝基氧基-苯基)-苯并吡喃-4-酮

在25℃下，向1mmol 5，7-二羟基-2-(4-羟基-苯基)-苯并吡喃-4-酮(同义词：芹黄素)的5ml无水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物5，7-二-硝基氧基-2-(4-硝基氧基-苯基)-苯并吡喃-4-酮和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例41：制备5，7-二-硝基氧基-3-(4-硝基氧基-苯基)-苯并吡喃-4-酮

在25℃下，向1mmol 5，7-二羟基-3-(4-羟基-苯基)-苯并吡喃-4-酮(同义词：染料木黄酮)的5ml无水THF溶液中加入3mmolSOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物5，7-二-硝基氧基-3-(4-硝基氧基-苯基)-苯并吡喃-4-酮和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例42：制备2-(3，4-二-硝基氧基-苯基)-3，4，5，7-四-硝基氧基-苯并二氢吡喃

在25℃下，向1mmol 2-(3，4-二羟基-苯基)-苯并二氢吡喃-3，4，5，7-四醇(同义词：白西尼多)的5ml无水THF溶液中加入6mmolSOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物2-(3，4-二-硝基氧基-苯基)-3，4，5，7-四-硝基氧基-苯并二氢吡喃和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例43：制备6-羟基-7-硝基氧基-3-(4-硝基氧基-苯基)-苯并二氢吡喃-4-酮

在25℃下，向1mmol 6，7-二羟基-3-(4-羟基-苯基)-苯并二氢吡喃-4-酮(同义词：6，7，4′-三羟基异黄烷酮)的5ml无水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物6-羟基-7-硝基氧基-3-(4-硝基氧基-苯基)-苯并二氢吡喃-4-酮和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例44：制备Quracol B四硝酸酯

在25℃下，向1mmol Quracol B的5ml无水THF溶液中加入4mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物Quracol B四硝酸酯和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例45：制备1-(4-羟基-2，6-二-硝基氧基-苯基)-3-(4-硝基氧基-苯基)-丙-1-酮

在25℃下，向1mmol 3-(4-羟基-苯基)-1-(2，4，6-三羟基-苯基)-丙-1-酮(同义词：根皮素)的5ml无水THF溶液中加入4mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物1-(4-羟基-2，6-二-硝基氧基-苯基)-3-(4-硝基氧基-苯基)-丙-1-酮和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例46：制备1-硝基氧基-4-((Z)-3-苯基-烯丙基)-苯

在25℃下，向1mmol 4-((Z)-3-苯基-烯丙基)-苯酚(同义词：(E)-4-(3-苯基-2-丙烯基)-苯酚)的5ml无水THF溶液中加入1mmolSOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物1-硝基氧基-4-((Z)-3-苯基-烯丙基)-苯通过硅胶层析纯化和分离。

实施例47：制备1-硝基氧基-4-((E)-3-苯基-丙烯基)-苯

在25℃下，向1mmol 4-((E)-3-苯基-丙烯基)-苯酚的5ml无水THF溶液中加入1mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使硝酸酯化产物1-硝基氧基-4-((E)-3-苯基-丙烯基)-苯通过硅胶层析纯化和分离。

实施例48：制备5，6，7-三-硝基氧基-2-苯基-苯并吡喃-4-酮

在25℃下，向1mmol 5，6，7-三羟基-2-苯基-苯并吡喃-4-酮(同义词：贝加因)的5ml无水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物5，6，7-三-硝基氧基-2-苯基-苯并吡喃-4-酮和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例49：制备芦丁四硝酸酯

在25℃下，向1mmol 2-(3，4-二羟基-苯基)-5，7-二羟基-3-[(2S，3R，5S，6R)-3，4，5-三羟基-6-((2R，3R，4R，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-甲基-四氢-吡喃-2-基氧基甲基)-四氢-吡喃-2-基氧基]-苯并吡喃-4-酮(同义词：芦丁)的5ml无水THF溶液中加入4mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物2-(3，4-二-硝基氧基-苯基)-5，7-二-硝基氧基-3-[(2S，3R，5S，6R)-3，4，5-三羟基-6-((2R，3R，4R，5R，6S)-3，4，5-三羟基-6-甲基-四氢-吡喃-2-基氧基甲基)-四氢-吡喃-2-基氧基]-苯并吡喃-4-酮(芦丁四硝酸酯)和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例50：制备5-羟基-2-(4-羟基苯基)-7-(2-O-α-L-鼠李吡喃糖基-β-D-吡喃葡萄糖基氧基)-4-苯并二氢吡喃酮(chromanon)二硝酸酯

在25℃下，向1mmol 5-羟基-2-(4-羟基苯基)-7-(2-O-α-L-鼠李吡喃糖基-β-D-吡喃葡萄糖基氧基)-4-苯并二氢吡喃酮(同义词：柚皮苷)的5ml无水THF溶液中加入2mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物5-羟基-2-(4-羟基苯基)-7-(2-O-α-L-鼠李吡喃糖基-β-D-吡喃葡萄糖基氧基)-4-苯并二氢吡喃酮二硝酸酯和部分硝酸酯化产物(其中任一羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例51：制备(E)-(3S，5R)-7-[3-(4-氟-苯基)-1-异丙基-1H-吲哚-2-基]-1，3，5-三-硝基氧基-庚-6-烯-1-酮

在25℃下，向1mmol(E)-(3S，5R)-7-[3-(4-氟-苯基)-1-异丙基-1H-吲哚-2-基]-3，5-二羟基-庚-6-烯酸(同义词：氟伐他汀；Novartis)的5ml无水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物(E)-(3S，SR)-7-[3-(4-氟-苯基)-1-异丙基-1H-吲哚-2-基]-1，3，5-三-硝基氧基-庚-6-烯-1-酮和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例52：制备N-苯基-[5-(4-氟-苯基)-2-异丙基-4-苯基-1-((3R，5R)-3，5，7-三-硝基氧基-7-氧代-庚基)-1H-吡咯-1-基]-3-甲酰胺

在25℃下，向1mmol(3R，5R)-7-[2-(4-氟-苯基)-5-异丙基-3-苯基-4-苯基氨基甲酰基-吡咯-1-基]-3，5-二羟基-庚酸(同义词：阿托伐他汀；Parke-Davis)的5ml无水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物N-苯基-[5-(4-氟-苯基)-2-异丙基-4-苯基-1-((3R，5R)-3，5，7-三-硝基氧基-7-氧代-庚基)-1H-吡咯-1-基]-3-甲酰胺和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例53：制备(E)-(3R，5S)-7-[4-(4-氟-苯基)-2，6-二异丙基-5-甲氧基甲基-吡啶-3-基]-1，3，5-三-硝基氧基-庚-6-烯-1-酮

在25℃下，向1mmol(E)-(3R，5S)-7-[4-(4-氟-苯基)-2，6-二异丙基-5-甲氧基甲基-吡啶-3-基]-3，5-二羟基-庚-6-烯酸(同义词：西立伐他汀；Bayer)的5ml无水THF溶液中加入3mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物(E)-(3R，5S)-7-[4-(4-氟-苯基)-2，6-二异丙基-5-甲氧基甲基-吡啶-3-基]-1，3，5-三-硝基氧基-庚-6-烯-1-酮和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例54：制备(S)-2-甲基-丁酸(1S，3S，7S，8S，8aR)-7-甲基-3-硝基氧基-8-((4R，6R)-3，5，7-三-硝基氧基-7-氧代-庚基)-1，2，3，7，8，8a-六氢-萘-1-基酯

在25℃下，向1mmol(2R，4R)-3，5-二羟基-7-[(1S，2S，6S，8S，8aR)-6-羟基-2-甲基-8-((S)-2-甲基-丁酰基氧基)-1，2，6，7，8，8a-六氢-萘-1-基]-庚酸(同义词：普伐他汀；Bristol-Myers Squibb)的5ml无水THF溶液中加入4mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物(S)-2-甲基-丁酸(1S，3S，7S，8S，8aR)-7-甲基-3-硝基氧基-8-((4R，6R)-3，5，7-三-硝基氧基-7-氧代-庚基)-1，2，3，7，8，8a-六氢-萘-1-基酯和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例55：制备2，2-二甲基-丁酸(1S，3R，7S，8S，8aR)-3，7-二甲基-8-[2-((2R，4R)-4-硝基氧基-6-氧代-四氢-吡喃-2-基)-乙基]-1，2，3，7，8，8a-六氢-萘-1-基酯

在25℃下，向1mmol 2，2-二甲基-丁酸(1S，3R，7S，8S，8aR)-8-[2-((2R，4R)-4-羟基-6-氧代-四氢-吡喃-2-基)-乙基]-3，7-二甲基-1，2，3，7，8，8a-六氢-萘-1-基酯(同义词：辛伐他汀；Merck)的5ml无水THF溶液中加入1mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物2，2-二甲基-丁酸(1S，3R，7S，8S，8aR)-3，7-二甲基-8-[2-((2R，4R)-4-硝基氧基-6-氧代-四氢-吡喃-2-基)-乙基]-1，2，3，7，8，8a-六氢-萘-1-基酯通过硅胶层析纯化和分离。

实施例56：制备(S)-2-甲基-丁酸(1S，3R，7S，8S，8aR)-3，7-二甲基-8-[2-((2R，4R)-4-硝基氧基-6-氧代-四氢-吡喃-2-基)-乙基]-1，2，3，7，8，8a-六氢-萘-1-基酯

在25℃下，向1mmol(S)-2-甲基-丁酸(1S，3R，7S，8S，8aR)-8-[2-((2R，4R)-4-羟基-6-氧代-四氢-吡喃-2-基)-乙基]-3，7-二甲基-1，2，3，7，8，8a-六氢-萘-1-基酯(同义词：洛伐他汀；Merck)的5ml无水THF溶液中加入1mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使硝酸酯化产物(S)-2-甲基-丁酸(1S，3R，7S，8S，8aR)-3，7-二甲基-8-[2-((2R，4R)-4-硝基氧基-6-氧代-四氢-吡喃-2-基)-乙基]-1，2，3，7，8，8a-六氢-萘-1-基酯通过硅胶层析纯化和分离。

实施例57：制备N-[4-(4-氟-苯基)-6-异丙基-5-((E)-(3R，SR)-3，5，7-三-硝基氧基-7-氧代-庚-1-烯基)-嘧啶-2-基]-N-甲基-甲磺酰胺

在25℃下，向1mmol(E)-(3R，SR)-7-[4-(4-氟-苯基)-6-异丙基-2-(甲磺酰基-甲基-氨基)-嘧啶-5-基]-3，5-二羟基-庚-6-烯酸(同义词：罗苏伐他汀；Astra-Zeneca)的5ml无水THF溶液中加入1mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使硝酸酯化产物N-[4-(4-氟-苯基)-6-异丙基-5-((E)-(3R，SR)-3，5，7-三-硝基氧基-7-氧代-庚-1-烯基)-嘧啶-2-基]-N-甲基-甲磺酰胺通过硅胶层析纯化和分离。

实施例58：制备硝基氧基-吡啶-3-基-甲酮

在25℃下，向1mmol烟酸的5ml无水THF溶液中加入1mmolSOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使硝酸酯化产物硝基氧基-吡啶-3-基-甲酮通过硅胶层析纯化和分离。

实施例59：制备(S)-1-(4-氟-苯基)-3-[(S)-3-(4-氟-苯基)-3-硝基氧基-丙基]-4-(4-硝基氧基-苯基)-氮杂环丁-2-酮

在25℃下，向1mmol(S)-1-(4-氟-苯基)-3-[(S)-3-(4-氟-苯基)-3-羟基-丙基]-4-(4-羟基-苯基)-氮杂环丁-2-酮(同义词：依泽替米贝；Merck)的5ml无水THF溶液中加入2mmol SOCl(NO₃)或SO(NO₃)₂。1h后，加入Et₂O(***)，将溶液用水洗涤，干燥，蒸发。使完全硝酸酯化产物(S)-1-(4-氟-苯基)-3-[(S)-3-(4-氟-苯基)-3-硝基氧基-丙基]-4-(4-硝基氧基-苯基)-氮杂环丁-2-酮和部分硝酸酯化产物(其中任何羟基独立被ONO₂基团置换)通过硅胶层析纯化和分离。

实施例60：使本发明化合物葡糖醛酸酯化的方法

该实施例描述制备本发明葡糖醛酸酯化化合物的方法。在该具体实施例中，将二硝酸酯化形式的白藜芦醇(按实施例1制备的3，4′-硝基氧基-5-羟基白藜芦醇)(50-1000μM)和10μl人肠、25μl结肠或10μl肝微粒体(分别为200、400、200μg蛋白质)、20μl重组UDP-葡糖醛酸基转移酶(400μg蛋白)在含10mM MgCl₂的50mM Tris HCl缓冲液(pH 7.8)溶液的最终体积为500μl溶液，在37℃下预温育5min。加入1mM 5′-二磷酸葡糖醛酸引发反应。将反应混合物在37℃下温育60min。将样品在冰上冷却，用合适(oasis)亲水-亲油平衡值的1cc C₁₈萃取柱(Waters Corp，Milford，MA)进行固相萃取。将柱用1-ml甲醇冲洗，用1-ml水平衡。加载0.5ml样品后，将柱用5％甲醇冲洗，用2ml 100％甲醇洗脱。在40℃、氮气下将甲醇洗脱液干燥，将样品再溶于250μl流动相，用于HPLC分析。

实施例61：使本发明化合物硫酸酯化的方法

该实施例描述制备本发明硫酸酯化化合物的方法。在该具体的实施例中，用前述离子对萃取方法(Varin等1987.Anal.Biochem.161：176-180)，通过磺基转移酶将二硝酸化形式的白藜芦醇，即按实施例1制备的3，4′-硝基氧基-5-羟基白藜芦醇硫酸酯化。总体积100μl的典型反应混合物含0.1-200μM 3，4′-硝基氧基-5-羟基白藜芦醇、1μM[³⁵S]PAPS和2.5μl混合人肝细胞溶胶(50μg蛋白)、2.5μl人空肠细胞溶胶(30μg)、Caco-2细胞溶胶(225μg)或0.25μl重组磺基转移酶和33mM Tris-HCl缓冲液(pH 7.4)以及8mM二硫苏糖醇和0.0625％牛血清白蛋白。将样品在37℃下温育30min，加入10μl 2.5％乙酸、20μl 0.1μM四丁基硫酸氢铵和500μl乙酸乙酯终止反应。经过混合和离心后，加入可生物降解的计数闪烁体(Amersham Biosciences，Piscataway，NJ)后，使400μl乙酸乙酯萃取液经历液体闪烁计数。

实施例62：测定ACAT抑制

可通过已知方法，例如在美国专利6,165,984说明的和以下所述的方法，测定作为ACAT抑制剂的本发明化合物的活性。

首先，通过断头处死大鼠，切除肝脏。每个肝取1g，放入5ml匀化介质(0.1M KH₂PO₄，pH 7.4，0.1mM EDTA和10mM β-巯基乙醇)中匀化。在4℃下，以3,000次.g将匀浆离心10min，在4℃下，以15,000次.g将得到的上清液离心15min，得到上清液。在4℃下，将上清液放入超速离心管(Beckman)中，以100,000次.g离心1小时，得到微粒体沉淀，然后将其悬浮于3ml匀化介质中，在4℃下，以100,000次.g离心1小时。将如此得到的沉淀悬浮于1ml匀化介质中。通过Lowry氏法测定得到的悬浮液中的蛋白质浓度，然后调至4-8mg/ml。将得到的悬浮液储存在冷藏箱(Biofreezer，Forma ScientificInc.)。

将6.67μl 1mg/ml胆固醇的丙酮溶液与6μl 10％Triton WR-1339(Sigma Co.)的丙酮溶液混合，然后用氮气通过蒸发除去混合物中的丙酮。将蒸馏水加入得到的混合物中，加入的量将胆固醇的浓度调至30mg/ml。

向10μl得到的胆固醇水溶液中加入10μl 1M KH₂PO₄(pH 7.4)、5μl 0.6mM牛血清白蛋白(BSA)、在(步骤1)中得到的10μl微粒体溶液和55μl蒸馏水(总计90μl)。在水浴中，在37℃下，将混合物预温育30min。

将10μl(1-¹⁴C)油酰基-CoA溶液(0.05μCi，终浓度：10μM)加入预温育的混合物中，在37℃下，将得到的混合物用水浴温育30min。向混合物中加入500μl异丙醇∶庚烷混合物(4∶1(v/v))、300μl庚烷和200μl 0.1M KH₂PO₄(pH 7.4)，通过旋转剧烈混合混合物，然后在室温下静置2min。

将得到的200μl上清液放入闪烁瓶中，向其中加入4ml闪烁液(Lumac)。用液体闪烁计数器测定混合物的放射性。按每mg蛋白每min.合成的油酸胆甾醇微微摩尔数计算ACAT活性(pmole/min/mg蛋白)。观测到给予本发明化合物的大鼠组的ACAT活性小于对照组。

实施例63：测定HMG-CoA还原酶抑制

可用已知方法，例如在美国专利5,877,208中说明的方法测定本发明化合物抑制HMG-CoA还原酶的效力。该方法概述如下。

通过断头处死大鼠，切除肝脏，立即放入冰冷却匀化介质(50mMKH₂PO₄(pH 7.0)、0.2M蔗糖、2mM二硫苏糖醇(DTT))中。用Waring混合器(在Potter-Elvehjem型玻璃匀化器中用发动机驱动的Teflon槌撞击3次)将肝脏在匀化介质(2ml介质/g肝)中匀化15秒。以15,000次.g将匀浆离心10min，将得到的上清液以100,000次.g离心75min，得到微粒体沉淀，然后将其再悬浮于含50mM EDTA的匀化介质中，以100,000次.g离心60min。含微粒体的上清液用作酶源。

按如下Shapiro等的方法(Biochemica et Biophysica Acta，370，369-377(1974))，用放射性标记的¹⁴C HMG-CoA测定HMG-CoA还原酶的活性。

在37℃下，将在(步骤1)中得到的含微粒体上清液中的酶活化30min。加入到内含20μl HMG-CoA还原酶测定缓冲液(0.25M KH₂PO₄(pH 7.0)，8.75mM EDTA，25mM DTT，0.45M KCl和0.25mg/mlBSA)、5μl 50mM NADPH、5μl放射性标记的¹⁴C HMG-CoA(0.05μCi/管，终浓度120μM)和10μl活化微粒体酶(0.03-0.04mg)的反应管中，将混合物在37℃下温育30min。通过将10μl 6M HCl加入到混合物中终止反应，将混合物在37℃下温育15min，使产物完全内酯化。通过以10,000次.g离心1min除去沉淀，将上清液点在硅胶60G TLC板(Altech，Inc.，Newark，U.S.A.)上，然后用苯∶丙酮(1∶1，v/v)展开。用一次性盖片(cover slips)刮去适当的区域，用1450 Microbeta液体闪烁计数器(Wallacoy，Finland)测定放射性。按每mg蛋白每min.合成的甲羟戊酸微微摩尔数计算酶活性(pmol/min/mg蛋白)。对照大鼠显示相对高的HMG-CoA还原酶活性，而观测到给予本发明化合物的大鼠的HMG-CoA活性比对照组低。

实施例64：测定本发明化合物激活PPAR

通过几种已知方法，例如在美国专利6,369,098已说明过的下述那些方法测定本发明化合物调节PPARγ和PPARα活性的能力。

基于抑制NF-κB活化筛选调节PPARγ和PPARα活性的化合物的方法

测试本发明化合物抑制NF-κB活性的能力。已知人内皮细胞和血管平滑肌细胞(VSMC)表达PPARγ和PPARα(Neve BP等BiochemPharmacol.，60：1245-1250(2000))。或者，自正常健康人供体分离的人外周T淋巴细胞或用PPARγ和/或PPARα表达载体转染的哺乳动物细胞系例如Jurkat T细胞系可用于这些实验。用以下一种或多种刺激这些选择的细胞类型之一：植物凝集素/佛波醇-12-豆蔻酸酯-13-乙酸酯(PHA/PMA)，TNF-α，干扰素-γ或激活NF-κB的其它因子。可通过与前述(Rossi A等Proc Natl Acad Sci USA，94：746-50(1997))相似的电泳迁移率变动分析测定NF-κB的激活。将相同细胞用5μmol本发明化合物预温育2小时，然后加入NF-κB活化剂，在这些化合物不存在时观测到NF-κB激活受到抑制。

基于抑制NFAT活化筛选调节PPARγ和PPARα活性的化合物的方法

用PHA/PMA、TNF-α、干扰素-γ或其它激活NFAT的因子中的一种或多种刺激自正常健康人供体分离的人外周T淋巴细胞或PPARγ和/或PPARα表达载体转染的哺乳动物细胞系例如Jurkat T细胞系。可通过与前述Yang等J Biol Chem.；275：4541-4(2000)相似的电泳迁移率变动分析测定NFAT的转录激活。将相同细胞与5μmol本发明化合物预温育2小时，然后加入NFAT活化剂，在无所述化合物存在时观测到的NFAT激活受到抑制。

基于抑制IL-2产生筛选调节PPARγ和PPARα活性的化合物的方法

用PHA/PMA、TNF-α、干扰素-γ或其它激活诱导IL-2基因表达的因子中的一种或多种刺激分离的人T淋巴细胞或用PPARα和/或PPARγ表达载体转染的哺乳动物细胞系如Jurkat T细胞系。按Yang等J Biol Chem.，275：4541-4(2000)所述，用Endogen试剂盒(Wolbum)测量细胞上清液中IL-2的浓度，测定产生的IL-2。将相同细胞与5μmol本发明化合物预温育12小时，然后加入IL-2产生活化剂，在无所述化合物存在时观测到的IL-2产生活化受到抑制。

实施例65：测定本发明化合物激活ABCA-1能力的方法

用美国专利6,548,548说明的已知方法，该测试证实本发明化合物对ABCA-1基因表达的有效性。简单地说，用pGL3萤光素酶报道基因载体***(Promega，Madison，Wis.)构建重组质粒，以测量在ABCA-1启动子控制下报道基因表达。

用质粒pGL3-Basic(Promega，Madison，Wis.；目录编号#E1751)作含无启动子萤光素酶基因的对照质粒。通过将ABCA-1基因的5′旁侧区(hAPR1 5′启动子，对应于SEQ ID No：3的核苷酸1080-1643)基因组片段克隆到GL3-Basic质粒的SacI部位生成质粒GL-6a，制备含ABCA-1启动子和萤光素酶基因的报道基因构件。下一步，用SpeI和Acc65I消化质粒GL-6a。代表对应于SEQ ID No：3的核苷酸1-1534的ABCA-1基因组序列的由λ亚克隆切除的BsiWI-SpeI片段，连接到由该消化产生的剩余载体/ABCA-I启动子片段上。得到的质粒pAPR1在1.75kb人ABCA-1启动子序列的转录控制下，编码萤光素酶报道基因。

对照或转染到RAW 264.7细胞融合培养基的pAPR1质粒wisas保存在含10％胎牛血清的DMEM中。在12孔皿中的每个孔中用pGL3-Basic、pGL3-启动子或pAPR1 DNA(1μg)、萤光素酶质粒DNA(1μg)和12μl Geneporter试剂(Gene Therapy Systems，San Diego，Calif.；目录编号#T201007)转染5小时。另外，加入0.1μg pCMVβ质粒DNA、(Clontech，Palo Alto，Calif.，目录编号#6177-1)用作转染效率的对照。5小时后，在乙酰化LDL(100μg/ml)存在或不存在下，用无血清的DMEM/BSA替换培养基，温育24小时。

转染后，将各孔中的细胞在70μl细胞溶胞剂(Promega，Madison，Wis.，目录编号#E3971)中溶解1次，经历1次冷冻-解冻循环，通过以12,000g离心5分钟使溶胞物澄清。离心后，将100μl萤光素酶测定试剂(Promega，Madison，Wis.；目录编号#E1501)加入到10μl溶胞物中。用发光计以光单位测量各溶胞物的萤光素酶活性。另外，按生产商(Tropix Inc.，Bedford，Mass.目录编号#BL100G)的说明，用Galacto-light试剂盒中提供的化学发光测定试剂测量各溶胞物的β-半乳糖苷酶活性。通过萤光素酶活性值除以测得的β-半乳糖苷酶值，测定各溶胞物的归一化的萤光素酶活性，用相对光单位报道。

在该测定中，本发明化合物证实ABCA-1基因表达增加。

实施例66：测量人载脂蛋白A1蛋白表达

该研究测量了本发明化合物对通过CaCO2细胞、人肠细胞系或Hep G2细胞、人肝细胞系中的内源性APO AI基因表达的载脂蛋白A1蛋白水平的作用。将本发明化合物溶于适当的溶剂中，然后提供给在含有血清细胞培养基中的CaCO2或Hep G2细胞，送回组织培养箱中，在37℃下培养12、24、36或48小时。随后用不含血清的培养基冲洗细胞，将细胞固定，溶解，用市售人载脂蛋白A1抗体(例如小鼠抗人载脂蛋白A1抗体，Intracel Resources LLC，Frederick，MD，USA)检测载脂蛋白A1的存在。观测到用本发明化合物处理的细胞载脂蛋白A1蛋白表达丰度与仅用溶剂处理细胞的表达丰度之间的差异。通过用约0.1pmol至最高达约100mmol的不同浓度的各化合物按2倍浓度幅度重复实验，测定用于检测其载脂蛋白表达调节活性的各化合物的最佳浓度。检测到与细胞结合的抗体次数增加证实化合物诱导载脂蛋白A1表达增加。

实施例67：测量ApoA-1启动子诱导

将CaCO2或Hep G2细胞暴露于有效浓度的本发明化合物。用标准技术，用报道基因构件、pAI.474-Luc和pRSV-B半乳糖苷酶一起转染细胞，pRSV-B半乳糖苷酶监控转染效率。pAI.474-Luc是用常规分子生物技术构建的构件，含有融合到报道基因的-474至-7的大鼠APO AI启动子核苷酸，该构件是萤火虫的萤光素酶(Luc)(美国专利申请10/222,013)。将本发明化合物溶于适当溶剂(例如DMSO)，然后加入培养基，保持16小时。在处理结束时，收获细胞，用标准市售萤光素酶测定方案测量萤光素酶活性。还用蛋白质印迹分析法测定暴露于细胞36小时后的培养基中其APO AI蛋白的含量。细胞溶胞物或用过的培养基中萤光素酶活性增加表明本发明化合物具有载脂蛋白A1表达诱导活性。

实施例68：测量AGCCCCCGC序列元件诱导

将CaCO2或Hep G2细胞暴露于有效浓度的本发明化合物。先用标准技术，用含用作增强子元件的9个核苷酸5′-AGCCCCCGC-3′的一个或多个模板的报道基因构件转染细胞(Kilbourne等，JBC，270(12)：7004-7010，1995)，可与启动子(例如胸苷激酶(TK)启动子)连接，可和pRSV-B半乳糖苷酶一起与报道基因(例如萤光素酶，CAT或载脂蛋白A1基因)连接，pRSV-B半乳糖苷酶监控转染效率(如美国专利申请10/222,013说明的那样)。然后将本发明化合物溶于适当溶剂(例如DMSO)，然后加入培养基，保持16小时。在处理结束时，收获细胞，用标准市售测定方法测量报道基因活性。报道基因活性增加或减少表明本发明化合物具有调节从含9个核苷酸序列5′-AGCCCCCGC-3′的启动子转录的能力，据认为其包含egr-1效应元件。因此，本发明化合物可用于治疗与egr-1活性有关的病症、疾病或障碍。

实施例69：用环试验测量化合物舒张血管的活性

用标准分离的血管环确定本发明提供的化合物效能。在37℃下，将新西兰白兔胸主动脉环悬浮于pH 7.4缓冲液中，给每条环预加10g负荷。平衡2小时后，这些环用去甲肾上腺素预收缩。通过将浓度连续递增的本发明化合物加入器官浴测量诱导松驰的克数，建立每个化合物的剂量效应曲线。用硝普钠和***作阳性对照。

还通过在按Reynolds等(J.Pharmacol.Exp.Therap.252，915，1990)所述方法制备的组织中，测量肾上腺素引起收缩的抑制，在分离大鼠主动脉中测定血管扩张活性。

通过加入本发明化合物引起的松驰增加，证明这些化合物的血管扩张活性以及治疗或预防许多与高血压有关的疾病，例如心血管疾病的有效性。

实施例70：测量NO供给

为证明本发明化合物作为氧化氮释放剂的效用，将本发明化合物溶于适当溶剂和pH 7.4的磷酸盐缓冲液，在37℃水浴中温育。通过用惰性氮气冲洗溶液，然后将新生成的NO吹扫进化学发光检测器，每隔4-7分钟将产生的信号积分，定期测量NO释放速率。相对于阴性对照，NO释放增加，潜在适当的阴性对照是例如羟基化而非硝酸酯化形式的同一化合物，证实NO释放活性和治疗或预防与高血压有关的障碍、疾病或病症，例如心血管疾病的有效性。

实施例71：测量抗氧化剂有效性

通过用公开的基于染料的颜色测定法(FOX测定法，参见Zadeh，″Methods in Enzymology″，300，58(1999))测量由铜催化自氧化低密度脂蛋白过氧化氢的程度，证明本发明化合物抗氧化剂性能。用只含LDL和硫酸铜不含测试物质的样品作阳性对照，与含测试物质的相同混合物对比。

将人低密度脂蛋白(Sigma Chemical Company L2139)的磷酸盐缓冲水溶液pH-7.4与硫酸铜混合。与有效量的本发明化合物在25℃或37℃下于常压下温育，完成氧化，在零时间点和3-20小时温育期间自混合物取样，用FOX测定法测量过氧化氢。用微量滴定板读出器阅读样品。FOX测定法测量的过氧化氢减少表明本发明化合物的抗氧化剂活性和它们治疗或预防与氧化有关的障碍、疾病或病症的有效性，或从使用抗氧化剂受益。从抗氧化剂治疗受益的这种病症的实例是心血管疾病。

实施例72：通过LDL氧化测定法测量抗氧化剂活性：

可使用Esterbauer法(Esterbauer，H.，Striegl，G.，Puhl，H.，Rotheneder，M.，″Continuous monitoring of in vitro oxidation of humanlow density lipoprotein″(体外连续监测氧化人低密度脂蛋白)，FreeRadic.Res.Commun，1989；6(1)：67-75)，某些改进如下：

将化合物与适当增溶剂溶于磷酸盐缓冲液(PBS，0.15M NaCl-0.05M磷酸钠缓冲液-pH 7.4)。记录确切的浓度(约30-60μg/mL待测萃取液)。向100μL该溶液中加入900μL氧化缓冲液(由人LDL(120μL5mg/mL溶液，其中d＝1.019-1.063g/mL，购自PerImmune，Rockville，Md.)和硫酸铜(20μL 10mM水溶液)的8mL PBS溶液制备)。还制备用100μL PBS和900μL氧化缓冲液制备的空白样品。然后将各溶液转移至1cm石英比色皿，将该比色皿放入恒温器(37℃)。用HP-8452A二极管阵列分光光度计在234nm(OD₂₃₄)测量光密度，每5分钟测量一次。以光密度曲线的第一衍生物的最大值计算氧化的滞后时间。每次测定时测定含抗坏血酸的标准品。

实施例73：测量和对比HDL、LDL、VLDL和甘油三酸酯水平

每日早晨，通过经口喂饲1.5％羧甲基纤维素/0.2％吐温-20(给药溶媒)给予食物饲养的雄性Sprague-Dawley大鼠或雌性肥胖Zucker大鼠化合物或单独给予溶媒，连续7天。在整个研究中，每日将动物称重，任其自由食用啮齿动物食物和饮水。在开始给药前禁食6小时后，采集眼框血样，在第7次给药后也采集血样。在第7次给药后，晚上处死动物，测定血清总胆固醇和甘油三酸酯、脂蛋白胆固醇曲线、VLDL加混合LDL胆固醇(又称为含脂蛋白胆固醇的apo B或非-HDL胆固醇)、HDL胆固醇，以及HDL胆固醇与VLDL加LDL胆固醇的比率。

实施例74：测量和对比人HDL、LDL、VLDL和甘油三酸酯水平对化合物给予的反应

每日给予人受试者本发明化合物。监测其它饮食摄取，个体之间保持一致。在给予化合物前，在第0日采集血样，每周一次，持续3-6月。测定血清总胆固醇和甘油三酸酯、脂蛋白胆固醇曲线、VLDL加混合LDL胆固醇(又称为含脂蛋白胆固醇的apo B或非-HDL胆固醇)、HDL胆固醇、HDL₂和HDL₃胆固醇组分，以及HDL胆固醇与VLDL加LDL胆固醇的比率，用标准的市售胆固醇测试法，例如VAP测试(Atherotech Inc，Birmingham，AL)，它可从少量人血样品中再现性测量这些参数。或者，可通过Kulkarni法(Kulkarni等1997.J.LipidRes.38：2353-64)或通过Gidez法(Gidez等1982.J.Lipid Res.23：1206-23)测量血中的HDL₂和HDL₃。在这种血测试中测得的增加总HDL、增加HDL₂、减少总LDL、减少VLDL、减少甘油三酸酯或增加HDL/总胆固醇或HDL/LDL比率的本发明化合物用于治疗与胆固醇或脂质有关的疾病。

实施例75：用蛋白聚糖-结合-缺陷LDL测量动脉粥样硬化损害大小

可用核酸构件产生小鼠表达蛋白聚糖-结合-缺陷LDL。连续17周给予转基因小鼠含1.2％胆固醇、0.5％胆酸盐和20％脂肪的食物。然后处死小鼠，将主动脉灌注固定，用en face方法分析，其中将整个主动脉平整固定，用苏丹IV染色，用形态度量图象分析***(图象-1/AT)分析，定量动脉粥样硬化的程度。

实施例76：测量活动物高血压下降

通过含肝素化盐水导管将压力传感器与右颈动脉连接。记录平均动脉压和心律。用戊巴比妥，以初始剂量35mg/kg体重，如需要采用另外更小的注射剂量麻醉大鼠。将化合物溶于药物载体(例如Abbott的5％葡萄糖USP)，通过右股骨静脉导管注射给大鼠。可使用的阳性对照包括硝普钠和NaNO₂，而可用NaNO₃作阴性对照。结果表明本发明提供的化合物是有效的降压药，它可显著降压。应在短时间内达到血压下降峰值，例如注射约1分钟后，而此后血压应很快又开始上升，应在约10-15分钟内血压完全恢复。

实施例77：测量高胆固醇兔动脉损伤后再狭窄的减少程度

可使用美国专利号5,595,974中和Goodman在美国专利6,022,901进一步描述的Tomaru法评价本发明化合物防止高胆固醇兔再狭窄的效用。

实施例78：用于预防人再狭窄

可按Goodman在美国专利6,022,901中所述实施Tardif等(1997)，New England J.Med.337(6)：365-67的方法，不同之处在于用我们的化合物替代反式白藜芦醇检验。

实施例79：测量血小板抗凝集活性

可按Bertele等(Science 220，517，1983)所述方法，体外评价对凝血酶刺激人血小板的血小板抗凝集活性。

实施例80：测量对ADP诱导兔血小板凝集的影响

血小板凝集试验：用涂覆硅的注射器通过兔心脏穿刺采集兔血样品。将该血样品与3.8％柠檬酸钠以9∶1的比率混合，按1,000rpm旋转6分钟。将1ml富含血小板的血浆转移至涂覆硅的2ml小池中，混合，用分光光度计记录透光度(Ti)。加入0.02ml ADP(10μM)，搅拌，每分钟一次记录含血小板血浆的透光度，在10分钟内得到最大透光度(Tm)。将血样以3000rpm旋转45分钟，记录透光度。

实施例81：测量对体内胶原诱导的血小板减少的影响

用戊巴比妥钠(65mg/kg，Vet Labs，Limited，Inc.，Lenexa，KA)麻醉雄性大鼠(Charles River，CRL：CD(SD)，400-450g)。制备两条切口，暴露两条颈静脉。用输注泵(Harvard Apparatus，South Natick，Mass.)和5cc注射器，按0.39ml/min速度将19g蝴蝶(butterfly)，测试化合物或溶媒输注到左颈静脉，持续3min。输注化合物/溶媒2min后，用1ml注射器将胶原(60μg/kg)(Helena Laboratories，Beaumont，TX)注射到右颈静脉。打开体腔，暴露腔静脉，采集血样。注射胶原1min后，停止输注化合物，用含0.3mg 4.5％EDTA/Tris(0.1M)(pH 7.35)加150μM吲哚美辛的3cc注射器从腔静脉采集血样(在30秒内)。通过以126次.g离心血样10min制备富含血小板的血浆(PRP)。在Coulter记数器上，在20ml Isoton.RTM.III中对5μl PRP计数。通过将在处理动物中统计的血小板数与未给予胶原动物的血小板数和给予溶媒和胶原的动物的血小板数进行对比，计算胶原诱导凝集的抑制百分率。根据胶原诱导的血小板减少抑制来估计效能。

实施例82：测量体内抗银屑病的有效性

给予患有银屑病的人患者的感染部位含本发明化合物的局部用制剂。将不含本发明化合物的对照制剂应用到该患者的同等部位上。给药后第3天和第7天，通过分析与施用对照制剂的部位比较，施用化合物部位的炎症改善和增殖细胞减少，测定化合物的有效性。

实施例83：测量蛋白激酶抑制

在适当缓冲液中，将本发明化合物与放射性标记的ATP、适当的蛋白激酶和适当的底物混合。温育后，通过点在滤纸上终止反应，用闪烁计数器定量加入底物的ATP差异，它测量与对照比较的受抑制的蛋白激酶量。

实施例84：测量嗜中性粒细胞活化的抑制

用Tudan方案(Tudan.1999.Biochem.Pharmacol.58：1869-80测试本发明化合物。该试验证实测试化合物抑制结晶和化学引诱剂例如fMLP导致的嗜中性粒细胞活化的能力。

实施例85：测量TPA引起的炎症的抑制

通过改进的Marks法(Marks等1976.Cancer Res.36：2636)测试本发明化合物，以证明化合物抗用12-O-十四烷酰基佛波醇-13-乙酸酯(TPA)诱发的炎症的有效性。将化合物施用在小鼠耳上，随后施用TPA。将小鼠耳活组织检查法穿孔，4小时后称重，测量水肿，与未使用化合物的另一个耳的活组织检查法穿孔对比。

实施例86：测量COX-1抑制

通过Van der Ouderaa法(Van der Ouderaa.1982.Methods Enzymol.86：60)测试本发明化合物。通过将花生四烯酸加入含测试化合物的0.1M磷酸钠(pH 7.4)溶液、1.0mM苯酚、0.01mM氯高铁血红素和COX-1酶的混合物中，引发反应。

实施例87：测量角叉菜胶诱发的炎症的抑制

通过Slowing法(Slowing等1994.J.WrhnophEMxol.43：9)，在Wistar大鼠上测试本发明化合物。将弗氏佐剂经皮注射到动物尾中。7天后，给予测试化合物，1小时后，将角叉菜胶的生理盐水悬浮液给予左后爪中。通过水体积描记法测量爪体积，与对照对比。

实施例88：测量癌化学预防活性

通过Mondal法(Mondal等1976.Cancer Res.36：2254-2260)，用本发明化合物处理C3H/10T1/2克隆8细胞(ATCC)。培养基中的细胞用3-甲基胆蒽处理24小时，随后在新鲜的培养基中温育5天，洗涤。随后将TPA加入含或不含测试化合物的培养基中。实现融合7周后，用甲醇固定，用Giemsa染色显示II和III型转化的病灶(foci)，将其评分，以证明测试化合物抑制两期转化的有效性。

实施例89：在一个或多个羟基被一个或多个硝基氧基置换前，合成包括1，2-二苯乙烯、多元酚和黄酮类化合物的本发明化合物的氟衍生物的方法

因为可能需要用氟置换本发明化合物的一个或多个羟基以提高化合物用作治疗药物的有效性，根据Cramer和Coffman的方法(Cramerand Coffman，1961 J Org.Chem.26：4164)，在此提供描述如何用氟取代与芳环连接的羟基的实施例。这种方法非常适用于用氟置换本发明任何化合物的任何羟基，无需本领域技术人员进行过度的实验。因为在该实施例中所述的氟化条件有些苛刻，所以可通过由构体而非氟化制备化合物来提高某些本发明化合物的收率。当化合物用氟代替羟基，以及用一个或多个硝基氧基置换其它羟基时(例如在实施例1-59中)，应先完成氟加成反应，然后进行硝基氧基加成反应。

以下反应描述合成白藜芦醇的氟衍生物。

在400mL容量的不锈钢衬里的高压釜中加入250mmol 5-[(E)-2-(4-羟基-苯基)-乙烯基]-苯-1，3-二酚(同义词：白藜芦醇)，抽真空。加入500mmol四氟氧化硫，震动反应混合物，在150℃下加热9小时。将主要为磺酰氟的气体产物在-49℃至-44℃下蒸馏。将剩余物用5％氢氧化钠水溶液和水洗涤。在蒸馏时，发现该液体含有含以下完全和部分氟化的产物的混合物：3-氟-5-[(E)-2-(4-羟基-苯基)-乙烯基]-苯酚、5-[(E)-2-(4-氟-苯基)-乙烯基]-苯-1，3-二酚、4-[(E)-2-(3，5-二氟-苯基)-乙烯基]-苯酚和1，3-二氟-5-[(E)-2-(4-氟-苯基)-乙烯基-苯。通过硅胶层析纯化和分离各种产物。

分离白藜芦醇的氟衍生物后，可按实施例1-59所述进一步修饰化合物以含有硝基氧基。该方法无需过度实验而将氟加到任何本发明化合物上。

实施例90：合成含通过含-(CO)NH-的连接基团连接的两个芳环多元酚的方法

本发明期望的多元酚化合物包括含两个通过连接基团相互连接的芳环化合物，其中所述连接基团含以下基团：

通过该反应，用易于得到的原料容易地合成以下通式多元酚化合物

其中X为NH，

和R_1-10各自独立选自H或OH。

本发明这些化合物用作中间体化合物，可用它们随后合成实施例1-59中所述硝基氧基衍生物，和可进一步修饰以包含磷酸酯基、氟、酯基和其它修饰基团的硝基氧基衍生物。通过以下方法合成中间体化合物实例N-(3，5-二羟基-苯基)-4-羟基-苯甲酰胺，随后可用它制备其硝基氧基衍生物。

向4-羟基-苯甲酸(6mmol)的无水DMF(15ml)溶液中加入EDCI(9mmol)、HOBt(9mmol)和三乙胺(12mmol)。在室温下搅拌24小时后，滴加入5-氨基-苯-1，3-二酚，在室温、氩气下继续反应48小时。然后加入水(300ml)，将混合物搅拌5min。然后将产物用乙酸乙酯(5*50ml)萃取。将合并的有机萃取液用盐水(40ml)洗涤，经硫酸钠干燥，过滤，除去溶剂。通过硅胶层析完成纯化产物N-(3，5-二羟基-苯基)-4-羟基-苯甲酰胺。

或者，用5-氨基甲基-苯-1，3-二酚代替5-氨基-苯-1，3-二酚进行反应，导致合成N-(3，5-二羟基-苄基)-4-羟基-苯甲酰胺。该合成证明合成该实施例的其中X为NHCH₂的通式化合物的方法。类似地，作为证明，对苯酚的烷基修饰会导致对所得产物的连接基团的相同修饰。

通过例如氟化、溴化、氯化或乙酰化芳基或通过杂芳族芳基，或通过C_1-18烷基，或通过双环芳基等，取代与该合成说明提供的氨基试剂连接的R基团(即取代5-氨基-苯-1，3-二酚的苯1，3-二酚基团)，会生成适当修饰的产物，这对本领域技术人员而言是显而易见的。

最好，通过该方法合成的产物可用作用于合成本发明的供NO、硝基氧基衍生物的中间体化合物。

实施例91：合成含通过含-C-NH-的连接基团连接的两个芳环多元酚的方法

本发明期望的多元酚化合物包括含通过连接基团相互连接的两个芳环的化合物，其中所述连接基团含与氮原子连接的碳原子单键。通过该反应，由易于得到的原料试剂容易地合成以下通式多元酚化合物。

其中X为CH₂，Y为NH，或X为NH，Y为CH₂，

和R_1-10各自独立选自H或OH。

本发明这些化合物用作中间体化合物，可用它们随后合成实施例1-59中所述硝基氧基衍生物，和可进一步修饰以包含磷酸酯基、氟、酯基和其它修饰基团的硝基氧基衍生物。通过以下方法合成中间体化合物实例5-(4-羟基-苄基氨基)-苯1，3-二酚，可用它制备其硝基氧基衍生物。

将5-氨基-苯-1，3-二酚(1.5mmol)加入4-羟基-苯甲醛(1.5mmol)的苯(40ml)溶液中，在氩气下，用Dean-Stark阱将混合物加热回流24小时。然后将反应混合物浓缩以完全除去苯，将残渣溶于甲醇(15ml)。同时搅拌，在30min内，分三部分加入氰基硼氢化钠(3mmol)，在室温下，将反应混合物再搅拌1小时。然后向反应混合物中加入含37％HCl的饱和NaCl溶液(100ml)。将反应混合物用乙酸乙酯(3*50ml)萃取。合并的有机层用盐水(10ml)洗涤，经硫酸钠干燥，浓缩，得到粗产物5-(4-羟基-苄基氨基)-苯1，3-二酚，通过硅胶层析将它进一步纯化。

或者，用4-羟基-苯基-乙醛代替4-羟基-苯甲醛进行反应，导致合成5-[2-(4-羟基-苯基)-乙基氨基]-苯-1，3-二酚。该合成证明合成该实施例的其中X为(CH₂)₂，Y为NH的通式化合物的方法。类似地，作为证明，对苯酚的烷基修饰会导致对所得产物的连接基团的相同修饰。

实施例92：合成含通过-CO-连接基团连接的两个芳环多元酚的方法

本发明期望的多元酚化合物包括含通过连接基团相互连接的两个芳环化合物，其中所述连接基团含与氧原子连接的碳原子单键。通过该反应，由易于得到的原料试剂容易地合成以下通式多元酚化合物，

其中X为CH₂，Y为氧，

和R_1-10各自独立选自H或OH。

本发明这些化合物用作中间体化合物，可用它们随后合成实施例1-59中所述硝基氧基衍生物，和可进一步修饰以包含磷酸酯基、氟、酯基和其它修饰基团的硝基氧基衍生物。通过以下方法合成中间体化合物实例5-(4-羟基-苯氧基甲基)-苯1，3-二酚，可用它制备其硝基氧基衍生物。

在氩气和搅拌下，将叔丁基氯代二甲基硅烷固体(25mmol)加入4-羟基-苯甲醛(17mmol)和咪唑(42.5mmol)的无水N，N-二甲基甲酰胺(100ml)溶液。4小时后，将反应混合物倾入水中，用***萃取。将有机萃取液用水和盐水洗涤，干燥，浓缩至有色油状物。通过硅胶垫过滤，用20％乙酸乙酯-己烷为洗脱剂，得到甲硅烷基醚4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-苯甲醛。将4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-苯甲醛(14mmol)和间-氯过苯甲酸(20mmol)的二氯甲烷(100ml)溶液加热回流2小时，然后在室温下放置过夜。然后将反应混合物萃取到***中，随后将有机层用氢氧化钠水溶液(1M)、水和盐水洗涤，干燥，减压蒸发，得到固体。将其预吸附到硅胶上，然后通过硅胶塞经历快速过滤。将得到的甲酸酯，即甲酸4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-苯基酯的甲醇(70ml)溶液加入碳酸钾(10mmol)中。20分钟后，加入1-溴甲基-3，5-二-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-苯(14mmol，基本上按与以上甲酸4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-苯基酯相同的硅烷基保护方法制备)。6小时后，反应混合物的体积减少，加入水，将溶液用盐酸水溶液(1M)酸化。将它用***萃取，使***萃取液通过Pearson法(Pearson等1967J Org Chem 32：2358)进行后处理。用2-80％乙酸乙酯-己烷作洗脱液，梯度洗脱干柱层析，得到1，3-二-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-5-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-苯氧基甲基]-苯。使1，3-二-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-5-[4-(叔丁基-二甲基-硅烷氧基)-苯氧基甲基]-苯的四氢呋喃溶液用四-正丁基氟化铵三水合物处理。3.5小时后，加入水和***。将水层用盐酸水溶液(1M)酸化，用***再萃取。然后通过Pearson法对有机萃取液进行后处理。通过硅胶塞(20％乙酸乙酯-己烷)过滤，得到油状物。用己烷研磨，同时在丙酮-干冰浴中冷却，该油状物结晶。通过二氯甲烷-己烷重结晶，得到产物5-(4-羟基-苯氧基甲基)-苯1，3-二酚，通过硅胶层析将其进一步纯化。

实施例93：合成含通过含-C＝N-的连接基团连接的两个芳环多元酚的方法

本发明期望的多元酚化合物包括含通过连接基团相互连接的两个芳环化合物，其中所述连接基团含与氮原子连接的碳原子双键。通过该反应，由易于得到的原料试剂容易地合成以下通式多元酚化合物，

其中X为CH，Y为N，或X为N，Y为CH，

和R_1-10各自独立选自H或OH。

本发明这些化合物用作中间体化合物，可用它们随后合成实施例1-59中所述硝基氧基衍生物，和可进一步修饰以包含磷酸酯基、氟、酯基和其它修饰基团的硝基氧基衍生物。通过以下方法合成中间体化合物实例5-{[(E)-4-羟基-苯基亚氨基]-甲基}-苯1，3-二酚，可用它制备其硝基氧基衍生物。

在Dean和Stark装置中，将3，5-二羟基-苯甲醛(1mmol)和4-氨基-苯酚(1mmol)的甲苯(5ml)溶液加热回流16小时。将溶剂真空除去后，将产物5-{[(E)-4-羟基-苯基亚氨基]-甲基}-苯1，3-二酚通过甲醇重结晶，和通过硅胶层析进一步纯化。

实施例94：合成含通过含-C＝C-的连接基团连接的两个芳环的1，2-二苯乙烯(和二氢1，2-二苯乙烯)的通用方法

本发明期望的1，2-二苯乙烯化合物包括含通过连接基团相互连接的两个芳环化合物，其中所述连接基团含与另一个碳原子连接的碳原子双键。通过该反应，由易于得到的原料试剂容易地合成以下通式1，2-二苯乙烯化合物，

其中X为CH，Y为CH，

和R_1-10各自独立选自H或OH。

本发明这些化合物用作中间体化合物，可用它们随后合成实施例1-59中所述硝基氧基衍生物，和可进一步修饰以包含磷酸酯基、氟、酯基和其它修饰基团的硝基氧基衍生物。通过以下方法合成中间体化合物实例白藜芦醇(同义词：5-[(E)-2-(4-羟基-苯基)-乙烯基]-苯1，3-二酚)，可用它制备其硝基氧基衍生物。

在密封管中，将3，5-二羟基-苄基-溴(10mmol)和亚磷酸三甲酯(30mmol)的混合物在180℃油浴中加热8小时。混合物冷却后，将过量亚磷酸三甲酯真空除去。残渣经快速短柱层析纯化后，得到产物(3，5-二羟基-苄基)-膦酸二甲酯。在室温下，向(3，5-二羟基-苄基)-膦酸二甲酯的充分搅拌的还含新鲜粉状KOH(2mmol)、18-冠醚-6(0.1mmol)的2ml CH₂Cl₂溶液的悬浮液中加入芳醛4-羟基-苯甲醛(1mmol)。将混合物搅拌6小时后，将混合物用15ml CH₂Cl₂稀释，用水(10ml)和盐水(2*10ml)洗涤。有机层经硫酸镁干燥，真空浓缩。将残渣溶于2mlCH₂Cl₂。

向该溶液中加入Girard氏试剂T(0.5mmol)和AcOH(5mmol)，在室温下，将得到的混合物搅拌2小时。滤除不溶物，将滤液真空浓缩，将残渣溶于15ml EtOAc。将溶液用盐水(3*10ml)洗涤，经硫酸镁干燥，将溶剂真空除去，得到白藜芦醇的E和Z异构体混合物。向该混合物的庚烷(5ml)溶液中加入催化量的碘，然后加热回流12小时。将反应混合物用20ml***稀释，用饱和亚硫酸氢钠水溶液(10ml)和盐水(2*10ml)洗涤。有机层经硫酸镁干燥，真空浓缩，得到需要的E-白藜芦醇。

最好，用该方法合成任何1，2-二苯乙烯化合物，它为合成本发明期望的供NO、硝基氧基衍生物的中间体化合物。

二氢1，2-二苯乙烯为相应1，2-二苯乙烯的衍生物，不同之处在于在连接基团的两个碳原子之间具有单键，最好可由1，2-二苯乙烯母体化合物合成。通用方法如下。

在40psi下，在10％披钯碳(60mg)存在下，使1，2-二苯乙烯(1mmol)的乙醇(120ml)溶液氢化18-24小时。使催化剂通过硅藻土垫过滤除去，将滤液中的溶剂蒸发，得到二氢1，2-二苯乙烯衍生物。

最好用该方法合成任何二氢1，2-二苯乙烯化合物，它是合成本发明期望的供NO、硝基氧基衍生物的中间体化合物。

实施例95：合成本发明磷酸酯-衍生物的方法

最好，可使磷酸酯基代替羟基取代某些本发明化合物，因为磷酸酯基可改变血清中化合物的代谢和半衰期。作为本文中所述合成白藜芦醇的磷酸酯衍生物的实施例，但不限于该实施例，最好在其它羟基被氟、酯和硝基氧基(即硝酸酯或硝酸酯基)置换之后发生。

先按实施例1中所述合成、分离和纯化白藜芦醇的单一硝基氧基取代的衍生物(例如3-[(E)-2-(4-羟基-苯基)-乙烯基]-5-硝基氧基-苯酚)。将单一硝基氧基取代的衍生物(4g)和N，N-(二甲氨基)吡啶(0.2g)的无水乙腈(30ml)溶液冷却至-10℃，加入四氯化碳(5当量)和DIEA(2当量)。在-10℃和氩气下，将混合物搅拌30min，加入磷酸二苄酯(1当量)，将溶液搅拌12小时，然后倾入0.5M磷酸二氢钾。将混合物用乙酸乙酯萃取，将有机相的溶剂真空除去，得到有色油状物。使其经历快速柱层析(4∶1己烷/乙酸乙酯)，将磷酸酯产物回收，为有色油状物。

在0℃下，向该磷酸酯产物的无水二氯甲烷(15ml)溶液中加入溴代三甲基硅烷(2当量)，将混合物搅拌2小时。加入水(10ml)，将溶液搅拌1小时，用乙酸乙酯洗涤，将水相冷冻干燥至白色固体。向该固体的乙醇(30ml)溶液中加入甲醇钠(0.6g)，将悬浮液搅拌12小时。将溶剂真空除去，将得到的有色油状物溶于水。将溶液用乙酸乙酯洗涤，然后冷冻干燥，得到高收率、高纯度含具有磷酸酯基、羟基和硝基氧基的白藜芦醇衍生物混合物的无色固体。通过硅胶层析，将需要的衍生物分离和纯化。

最好，可用该合成方法使磷酸酯代替羟基取代本发明任何化合物。

实施例96：合成本发明乙酰基衍生物的方法

最好，可使乙酰基代替羟基取代本发明某些化合物，因为某些乙酰基可改变亲脂性程度，因而改变血清中化合物的代谢速率和半衰期。例如，将白藜芦醇的一个或多个羟基置换，形成白藜芦醇的乙酸酯衍生物降低血清中的代谢速率和延长半衰期。本文中描述最好在加一个或多个硝酸酯(即ONO₂或硝酸酯基)基团和在加磷酸酯基前(如果需要如此，但在氟化后)合成白藜芦醇的乙酸酯衍生物。

将白藜芦醇(0.5mmol)溶于无水二氯甲烷(5ml)。加入过量无水吡啶，随后加入1mmol乙酸酐。将得到的溶液在室温下搅拌5小时。将反应混合物浓缩，再溶于二氯甲烷(20ml)。将有机层用氯化氢溶液(0.1M，10ml)、碳酸氢钠(饱和，10ml)和盐水洗涤。有机层经硫酸镁干燥，过滤，浓缩，得到高收率和纯度的白藜芦醇乙酸酯衍生物的混合物，其中1、2或所有3个羟基被乙酸酯基置换。各种产物通过硅胶层析纯化和分离。

还可用乙酰卤(例如乙酰氯)或活化乙酸酯(例如N-羟基琥珀酰亚胺酯)合成乙酸酯衍生物。用相同方法，用其它活化酯或酰卤代替乙酸酐，类似地合成本发明化合物的其它酯。可取代本发明期望的任何化合物上的任何羟基的此类酯的实例由下式描述：

其中R可为C_1-18、芳基、杂芳基及其任选取代的衍生物。

最好，可按实施例1-59中所述进行硝酸酯化合成步骤，随后合成乙酸酯衍生物，通过硅胶层析分离和纯化。

实施例97：合成用作中间体化合物的本发明化合物的甲氧基和乙氧基衍生物的方法，由这些中间体化合物合成硝基氧基衍生物，它们为本发明期望的所有化合物。

最好本发明某些化合物可具有提供给R基团的甲氧基(OCH₃)或乙氧基(OCH₂CH₃)，因为已知甲氧基和乙氧基为亲脂性的，因而可改变体内药物半衰期而不降低其活性。已知芳烃(例如苯、苯酚等)的许多甲氧基和乙氧基衍生物，并容易在市场上得到，或容易通过熟知的方法合成。因此容易得到用于制备1，2-二苯乙烯类和其它多元酚类化合物的构体，并可在例如实施例90-94中使用。因此，可合成本申请定义的多元酚和1，2-二苯乙烯，以使R基团可独立地任选包含甲氧基(OCH₃)或乙氧基(OCH₂CH₃)。

实施例98：证明本发明化合物抗真菌活性的方法

用美国专利6,165,998说明的方法证明本发明抗真菌化合物。简单地说，将约10⁶个白色念珠菌(C.albicans)或酿酒酵母(S.cerevisiae)细胞暴露于25μg/ml本发明抗真菌化合物中，持续45分钟，未留下可检测的菌落形成单位。

此外，本发明抗真菌化合物在鼠科动物全身性念珠菌病模型中有效。本发明抗真菌化合物延长治疗小鼠的平均存活时间和存活时间中值。IP给予化合物，产生与口服阳性对照化合物氟康唑相似的存活方式。本发明抗真菌化合物和氟康唑均减少治疗动物肾的可恢复菌落。当经口给予建立的全身性念珠菌(Candida)感染的小鼠时，本发明抗真菌化合物也有效。通过测量存活时间、治愈百分率和肾负担(burden)，证明经口给予化合物的效力与氟康唑相似。本发明抗真菌化合物还对耐氟康唑的白色念珠菌(C.albicans)菌株引起的全身性念珠菌病有效。

实施例99：证明本发明化合物抗癌活性的方法

按美国专利5,145,839说明的方法，用以下动物癌症模型和用本发明化合物治疗，证明本发明化合物的抗癌活性。

按每组10只，将具有淋巴瘤YC8(腹水型)的O BALB C小鼠和具有欧利希氏(Ehrlich)腹水细胞的Swiss小鼠(20-22g，Charles River育种)随机分组。每组分别接受：

组I对照，肿瘤细胞和NaCl等渗溶液(0.2ml/小鼠，2次/日，i.p.途径)；

组II：具有肿瘤细胞的小鼠接受本发明化合物0.2ml/小鼠，2次/日，通过i.p给药；

组III：具有肿瘤细胞的小鼠接受本发明化合物：0.2ml/小鼠，2次/日，i.p.途径和i.p给予化疗药物；

组IV：具有肿瘤细胞的小鼠接受本发明化合物：0.2ml/小鼠，2次/日，i.m给药。

将具有这些细胞的小鼠的腹水肿瘤细胞加入无菌培养基中，保持15-20天。将0.1ml腹水悬浮液与10ml缓冲液(pH 7.2)：(NaCl 7.2g/l；Na₂HPO₄ 4.3g/l和KH₂PO₄ 0.4g/l)混合。测定细胞数目(通过Malassez细胞)，将细胞悬浮液稀释，以便使细胞数接近40.000-50.000/ml。立即通过i.p.途径将0.1ml该悬浮液注射到组I、II和III小鼠中，和通过i.m.途径注射到组IV小鼠中。

注射肿瘤细胞48小时后：组II小鼠接受(i.p)在37℃加热、在微孔滤膜上过滤的本发明化合物，连续5天治疗；连续5天用本发明化合物和抗生素之一的混合物处理(i.p)组III小鼠；连续5天组I小鼠(对照)只接受(i.p)等渗溶液；连续15天组IV小鼠接受(i.m)本发明化合物。停止治疗后，观察小鼠1或2个月。只考虑身体条件良好的存活动物。因此如该试验所证实，本发明化合物可用作抗癌药物。

实施例100：证明本发明化合物抗糖尿病活性的方法

用美国专利6,410,596说明的方法证明本发明化合物降糖活性。该试验证实本发明化合物在C57BL/ks糖尿病(db/db)小鼠，即本领域公认的非胰岛素依赖性糖尿病(NIDDM)模型中降低血浆葡萄糖水平的活性。

实施例101：证明本发明化合物抗病毒活性的方法

在鼠流感模型中体内评价南方贝壳杉双黄酮(Robustaflavone)

进行体内实验，以证明本发明化合物在无特异性病原BALB/c小鼠中抗实验诱发的流感病毒感染有效。这些实验基本上按美国专利6,399,654中实施例11说明的方法，用本发明化合物代替南方贝壳杉双黄酮进行。

实施例102：制备5-硝基氧基-戊酸4-[5，7-二-(5-硝基氧基-戊酰基氧基)-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]-苯基酯

合成5-硝基氧基-戊酸

在40℃下，将5-溴-戊酸(180mg，1mmol)、硝酸银(255mg，1.5mmol)在乙腈中的混合物搅拌。通过薄层色谱法(TLC)监测反应。结束后，加入二氯甲烷，将混合物用水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗产物经柱层析纯化。

合成5-硝基氧基-戊酸(2，5-二氧代-吡咯烷-1-基)酯

在室温和N₂下，将5-硝基氧基-戊酸(163mg，1mmol)、N-羟基琥珀酰亚胺(173mg，1.5mmol)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺(EDC，288mg，1.5mmol)在二氯甲烷中的混合物搅拌。通过TLC监测反应。结束后，加入二氯甲烷，将混合物用水洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。残渣经柱层析纯化。

合成柚苷配基的反向酯硝基氧基类似物

在室温或40℃、N₂下，将柚苷配基(758mg，1mmol)、5-硝基氧基-戊酸(2，5-二氧代-吡咯烷-1-基)酯(1.3g，5mmol)和N，N-二异丙基乙胺(646mg，5mmol)在乙腈中的混合物搅拌。通过TLC监测反应。结束后，加入二氯甲烷，将混合物用盐酸溶液(0.1N)、饱和碳酸氢钠水溶液和水洗涤。有机层经硫酸钠干燥，过滤，浓缩。粗产物经柱层析纯化。

或者，用其它活化羧酸类似物(酰氯、酸酐等)制备该产物。

可通过用于本发明期望的所有化合物的该方法合成反向酯硝基氧基衍生物，例如，提供合成柚苷配基的方法可用于实施例1-59的任何原料化合物，其然后随后导致生成所述原料化合物的反向酯硝基氧基衍生物而非所述原料化合物的硝基氧基衍生物。

方法1：建议的合成“反向酯硝基氧基”化合物的方法

方法2：建议的合成“反向酯硝基氧基”化合物的方法

实施例103：制备5-硝基氧基-戊酸4-[5，7-二-(5-硝基氧基-戊酰基氧基)-4-氧代-苯并二氢吡喃-2-基]-苯基酯的备选方法

合成5-溴-戊酸(2，5-二氧代-吡咯烷-1-基)酯

在室温、N₂下，将5-溴-戊酸(180mg，1mmol)、N-羟基琥珀酰亚胺(173mg，1.5mmol)、N-(3-二甲基氨基丙基)-N′-乙基碳二亚胺(EDC，288mg，1.5mmol)在二氯甲烷中的混合物搅拌。通过TLC监测反应。结束后，加入二氯甲烷，将混合物用水洗涤。有机层经无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。使残渣通过柱层析纯化。

用活化5-溴-戊酸类似物合成柚苷配基的三-(5-溴-戊酸酯)

在室温或40℃、N₂下，将柚苷配基(272mg，1mmol)、5-溴-戊酸(2，5-二氧代-吡咯烷-1-基)酯(1.39g，5mmol)和N，N-二异丙基乙胺(646mg，5mmol)在乙腈中的混合物搅拌。通过TLC监测反应。结束后，加入二氯甲烷，将混合物用盐酸溶液(0.1N)、饱和碳酸氢钠水溶液和水洗涤。有机层经硫酸钠干燥，过滤，浓缩。使粗产物经柱层析纯化。

或者，用其它活化羧酸类似物(酰氯、酸酐等)制备产物。

合成柚苷配基的反向酯硝基氧基类似物

在40℃下，将柚苷配基的三-(5-溴-戊酸酯)(758mg，1mmol)和硝酸银(850mg，5mmol)在乙腈中搅拌。通过TLC监测反应。结束后，加入二氯甲烷，将混合物用水洗涤，经无水硫酸钠干燥，过滤，浓缩。使粗产物通过柱层析纯化。

可通过用于本发明期望的所有化合物的该方法合成反向酯硝基氧基衍生物，例如，提供合成柚苷配基的方法可用于实施例1-59的任何原料化合物，然后其随后导致生成所述原料化合物的反向酯硝基氧基衍生物而非所述原料化合物的硝基氧基衍生物。

Claims

1.一种诱导ApoA1表达导致血液HDL水平升高而血液胆固醇水平降低的化合物，所述化合物包含可供氧化氮部分和清除自由基的抗氧化剂分子。

2.权利要求1的化合物，所述化合物包括含以下结构的黄酮类化合物：

其中

其中OCOR表示

且R为R₁₁或R₁₂，

X可为O、CR₁₃或NR₁₃；

Y可为CO[仍然保留6原子环结构的酮]、CR₁₄或NR₁₄；和

Z可为单键或双键。

3.一种药用组合物，所述组合物包含权利要求2的黄酮类化合物以及组合应用的药学上可接受的载体。

4.一种治疗患者的心血管、胆固醇或脂质相关疾病的方法，所述方法包括给予需要治疗的患者治疗有效量的权利要求2的黄酮类化合物。

5.一种在患者中诱导ApoA1表达同时提供抗氧化剂活性的方法，所述方法包括给予所述患者权利要求2的黄酮类化合物。

6.一种降低患者血清胆固醇的方法，所述方法包括给予所述患者权利要求2的黄酮类化合物。

7.权利要求1的化合物，所述化合物包括含以下结构的异黄酮类化合物：

其中

R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆、R₇、R₈、R₉、R₁₀、R₁₃和R₁₄可各自独立为氢、羟基[OH]、羟烷基、氨基烷基、溴(Br)、碘(I)、硝基氧基[ONO₂]、甲氧基[OCH₃]、乙氧基[OCH₂CH₃]、氟[F]、氯[Cl]、CF₃、CCl₃、磷酸酯基、R₁₁、R₁₂、OR₁₁、OR₁₂、OCOR₁₁、OCOR₁₂、O-硫酸酯[硫酸酯缀合物]或O-葡糖醛酸酯[葡萄糖醛酸(AKA葡萄糖醛酸)缀合物]，条件是R₁-R₁₀或R₁₃或R₁₄中至少一个为硝基氧基、R₁₂、OR₁₂或OCOR₁₂；且

其中OCOR表示

且R为R₁₁或R₁₂，

其中R₁₁为C_1-18、芳基、杂芳基或其衍生物，其中所述衍生物任选被取代和任选为支链，并可具有一个或多个被S、N或O置换的_C原子，和

X可为O、CR₁₃或NR₁₃；

Y可为CO[仍然保留6原子环结构的酮]、CR₁₄或NR₁₄；和

Z可为单键或双键。

8.一种药用组合物，所述组合物包含权利要求7的异黄酮类化合物以及组合应用的药学上可接受的载体。

9.一种治疗患者的心血管、胆固醇或脂质相关疾病的方法，所述方法包括给予需要治疗的患者治疗有效量的权利要求7的异黄酮类化合物。

10.一种在患者中诱导ApoA1表达同时提供抗氧化剂活性的方法，所述方法包括给予所述患者权利要求7的异黄酮类化合物。

11.一种降低患者血清胆固醇的方法，所述方法包括给予所述患者权利要求7的异黄酮类化合物。

12.权利要求1的化合物，所述化合物包括含以下结构的1，2-二苯乙烯化合物：

其中

其中OCOR表示

且R为R₁₁或R₁₂，

其中X可为单键、双键或三键。

13.一种药用组合物，所述组合物包含权利要求12的1，2-二苯乙烯化合物以及组合应用的药学上可接受的载体。

14.一种治疗患者的心血管、胆固醇或脂质相关疾病的方法，所述方法包括给予需要治疗的患者治疗有效量的权利要求12的1，2-二苯乙烯化合物。

15.一种在患者中诱导ApoA1表达同时提供抗氧化剂活性的方法，所述方法包括给予所述患者权利要求12的1，2-二苯乙烯化合物。

16.一种降低患者血清胆固醇的方法，所述方法包括给予所述患者权利要求12的1，2-二苯乙烯化合物。

17.权利要求1的化合物，所述化合物包括含以下结构的查尔酮化合物：

其中

其中OCOR表示

且R为R₁₁或R₁₂，

X可为单键或双键；

Y可为单键或双键；

Z可为CO[酮]、CR₁₃或NR₁₃。

18.一种治疗患者的心血管、胆固醇或脂质相关疾病的方法，所述方法包括给予需要治疗的患者治疗有效量的权利要求17的化合物。

19.一种在患者中诱导ApoA1表达同时提供抗氧化剂活性的方法，所述方法包括给予所述患者权利要求17的化合物。

20.一种降低患者血清胆固醇的方法，所述方法包括给予所述患者权利要求17的化合物。

21.权利要求1的化合物，所述化合物包括含以下结构的多元酚化合物：

其中

其中OCOR表示

且R为R₁₁或R₁₂，

22.一种治疗患者的心血管、胆固醇或脂质相关疾病的方法，所述方法包括给予需要治疗的患者治疗有效量的权利要求21的化合物。

23.一种在患者中诱导ApoA1表达同时提供抗氧化剂活性的方法，所述方法包括给予所述患者权利要求21的化合物。

24.一种降低患者血清胆固醇的方法，所述方法包括给予所述患者权利要求21的化合物。