CN1871898A - 一种薇菜组织培养的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种薇菜组织培养的方法，它通过薇菜的茎尖做为外植体，经诱导原球茎培养、扩繁培养、生根培养和炼苗移栽的步骤，对薇菜的茎尖进行组培，该方法简单实用，克服了薇菜孢子萌发组培受季节限制的缺点，实现了薇菜组培途径的多样化，能在短期内生产出大量薇菜组培苗，满足工厂化生产的需求。

Description

一种薇菜组织培养的方法
                               技术领域
本发明涉及一种蕨类植物组织培养的方法，特别是一种薇菜组织培养的方法。
                               背景技术
薇菜是一种生长在山林中的纯天然、无污染绿色保健食品，因富含蛋白质、铁、钙、硒等17种人体所需的营养成分，加上具有独特的清脆爽口的特点，深受日本、韩国及东南亚等国客户的喜爱，被誉为“林海山珍”。薇菜因常规分株繁殖较慢，故目前均采用组织培养的方法进行繁殖。韩敬、赵莉在其文章《蕨类植物繁殖研究进展》(安徽农业科学2005Vol.33No.7P.1261-1263)中指出各种蕨类植物的组织培养主要是孢子无菌萌发，即将孢子表面消毒后均匀涂布于培养基上，于恒温恒湿条件下进行无菌培养，待其萌发后经常规组培扩繁得到大量生根苗，然后炼苗移栽。目前国内薇菜组培均采用孢子无菌萌发，也有直接在温室基质中播种孢子萌发成苗的，但通过孢子萌发组培受季切的限制。
                              发明内容
本发明的目的在于提供一种薇菜组织培养的方法，它克服了现有技术中通过孢子萌发组培受季节限制的缺点，通过薇菜的茎尖做为外植体进行组培，实现了薇菜组培途径的多样化。
本发明的目的是这样实现的：一种薇菜组织培养的方法，它包括下列步骤：
a、外植体消毒：将薇菜展开叶片及根全部去掉，仅留幼嫩茎尖，用清水冲洗干净，在超净工作台上用0.1％升汞消毒液消毒5分钟-20分钟，然后用无菌水冲洗干净备用；
b、诱导原球茎培养：将a步骤消毒好的薇菜茎尖插于诱导培养基中，于20℃-27℃温度下避光培养3天-7天后光照培养，光照强度由弱渐强，培养20天-40天即可在嫩叶上形成大量原球茎，以一升培养基用量，诱导培养基配方为
MS             250毫升-4000毫升
激动素         0.5毫克-4毫克
3-吲哚丁酸     0.5毫克-4毫克
磷酸二氢钠     100毫克-2000毫克
活性炭         1000毫克-3000毫克
蔗糖           30000毫克
琼脂           9000毫克；
以一升培养基用量，诱导培养基的配方还可为
MS                250毫升-4000毫升
6-苄氨基嘌呤      0.5毫克-4毫克
3-吲哚丁酸        0.5毫克-4毫克
磷酸二氢钠        100毫克-2000毫克
活性炭            1000毫克-3000毫克
蔗糖              30000毫克
琼脂              9000毫克；
c、扩繁培养：b步骤生成的原球茎继续培养30天-40天便萌发形成原叶体，然后分切原叶体在继代培养基中继代培养25天-35天为一个周期，如此循环培养即可得大量组培苗，以一升培养基用量，继代培养基配方为
MS             250毫升-4000毫升
激动素         0.5毫克-4毫克
3-吲哚丁酸     0.1毫克-4毫克
磷酸二氢钠     100毫克-2000毫克
活性炭         1000毫克-3000毫克
蔗糖           30000毫克
琼脂           9000毫克；
以一升培养基用量，继代培养基的配方还可为
MS             250毫升-4000毫升
6-苄氨基嘌呤   0.5毫克-4毫克
3-吲哚丁酸     0.1毫克-4毫克
磷酸二氢钠     100毫克-2000毫克
活性炭         1000毫克-3000毫克
蔗糖           30000毫克
琼脂           9000毫克。
d、生根培养：c步骤扩繁培养所得的组培苗转入生根培养基中培养，30天后能形成孢子体，再继续培养30天即可形成羽状叶并长出数条根须，以一升培养基用量，生根培养基的配方为
MS             250毫升-4000毫升
激动素         0.5毫克-4毫克
磷酸二氢钠     100毫克-2000毫克
活性炭         1000毫克-3000毫克
蔗糖           30000毫克
琼脂           9000毫克；
e、炼苗移栽：将d步骤已生根的组培苗瓶放到大棚中摆放3天-7天，然后取出组培苗，洗净培养基后栽入基质中，控制环境温度在20℃，湿度在90％，遮荫并逐步增加光照，15天后即可按常规种苗进行管理。
本发明是利用植物细胞的全能性采取适当的外植体，再配以合适的激素配比，即可于短期内扩繁出大量薇菜组培苗。与孢子无菌萌发组培相比，本发明优点在于：提供了一条全新的薇菜组培途径，同时对其它蕨类植物的组培具有借鉴参考价值；突破了孢子组培的季节性限制，可一年四季采集外植体进行组培。
                              具体实施方式
实施例一
薇菜组织培养的步骤如下：
1、将薇菜展开叶片及根全部去掉，仅留幼嫩茎尖，并用自来水冲洗干净。然后在超净工作台上用0.1％升汞消毒5-20分钟，最后用无菌水冲洗干净备用。
2、将消毒好的薇菜茎尖插于诱导培养基中，于20℃-27℃环境中避光培养3-7天后光照培养，强度由弱渐强。约20-40天即可在嫩叶上形成大量原球茎。
以一升培养基用量，诱导培养基配方为：
MS                 250毫升
激动素             0.5毫克
磷酸二氢钠         100毫克
活性炭             1000毫克
蔗糖               30000毫克
琼脂               9000毫克
3、原球茎继续培养30天便萌发形成原叶体，然后分切原叶体在继代培养基中进行继代培养，约25-35天一个周期。如此不断循环便可得到大量组培苗。
以一升培养基用量，继代培养基配方为
MS                250毫升
激动素            0.5毫克
3-吲哚丁酸        0.1毫克
磷酸二氢钠        100毫克
活性炭            1000毫克
蔗糖              30000毫克
琼脂              9000毫克
4、获得所需数量的组培苗后转入生根培养基中培养，培养30天后就能形成孢子体，再经培养30天即可形成羽状叶并长出数条根须。以一升培养基用量，生根培养基配方为：
MS                250毫升
激动素            0.5毫克
磷酸二氢钠        100毫克
活性炭            1000毫克
蔗糖              30000毫克
琼脂              9000毫克
5、将已生根的组培苗瓶搬到大棚中自然摆放3-7天，使组培苗逐渐适应环境的温差变化。然后自瓶中取出组培苗，洗净培养基后栽入基质中。移栽后的一周内应控制环境温度在20℃左右，湿度在90％左右，适当遮荫并逐步增强光照。15天后即可按常规种苗进行管理。
实施例二
薇菜组织培养的步骤及培养条件同实施例一，诱导培养基配方为(以一升培养基用量)
MS                2500毫升
激动素            2毫克
3-吲哚丁酸        2毫克
磷酸二氢钠        1000毫克
活性炭            2000毫克
蔗糖              30000毫克
琼脂              9000毫克
继代培养基配方为(以一升培养基用量)
MS                2500毫升
激动素            2毫克
3-吲哚丁酸        2毫克
磷酸二氢钠        1000毫克
活性炭            2000毫克
蔗糖              30000毫克
琼脂              9000毫克
生根培养基配方为(以一升培养基用量)
MS                2500毫升
激动素            2毫克
磷酸二氢钠        1000毫克
活性炭            2000毫克
蔗糖              30000毫克
琼脂              9000毫克
实施例三
薇菜组织培养的步骤及培养条件同实施例一，诱导培养基配方为(以一升培养基用量)
MS            4000毫升
激动素        4毫克
3-吲哚丁酸    4毫克
磷酸二氢钠    2000毫克
活性炭        3000毫克
蔗糖          30000毫克
琼脂          9000毫克
继代培养基配方为(以一升培养基用量)
MS            4000毫升
激动素        4毫克
3-吲哚丁酸    4毫克
磷酸二氢钠    2000毫克
活性炭        3000毫克
蔗糖          30000毫克
琼脂          9000毫克
生根培养基配方为(以一升培养基用量)
MS            4000毫升
激动素        4毫克
磷酸二氢钠    2000毫克
活性炭        3000毫克
蔗糖          30000毫克
琼脂          9000毫克
实施例四
薇菜组织培养的步骤及培养条件同实施例一，诱导培养基配方为(以一升培养基用量)
MS            250毫升
6-苄氨基嘌呤  0.5毫克
3-吲哚丁酸    0.5毫克
磷酸二氢钠    100毫克
活性炭        1000毫克
蔗糖          30000毫克
琼脂          9000毫克
继代培养基配方为(以一升培养基用量)
MS            250毫升
6-苄氨基嘌呤        0.5毫克
3-吲哚丁酸          0.1毫克
磷酸二氢钠          100毫克
活性炭              1000毫克
蔗糖                30000毫克
琼脂                9000毫克
生根培养基配方为(以一升培养基用量)
MS                  250毫升
激动素              0.5毫克
磷酸二氢钠          100毫克
活性炭              1000毫克
蔗糖                30000毫克
琼脂                9000毫克
实施例五
薇菜组织培养的步骤及培养条件同实施例一，诱导培养基配方为(以一升培养基用量)
MS                  2000毫升
6-苄氨基嘌呤        2毫克
3-吲哚丁酸          2毫克
磷酸二氢钠          1000毫克
活性炭              2000毫克
蔗糖                30000毫克
琼脂                9000毫克
继代培养基配方为(以一升培养基用量)
MS                  2000毫升
6-苄氨基嘌呤        2毫克
3-吲哚丁酸          1.5毫克
磷酸二氢钠          1000毫克
活性炭              2000毫克
蔗糖                30000毫克
琼脂                9000毫克
生根培养基配方为(以一升培养基用量)
MS                  2000毫升
激动素              2毫克
磷酸二氢钠          1000毫克
活性炭        2000毫克
蔗糖          30000毫克
琼脂          9000毫克
实施例六
薇菜组织培养的步骤及培养条件同实施例一，诱导培养基配方为(以一升培养基用量)
MS            4000毫升
6-苄氨基嘌呤  4毫克
3-吲哚丁酸    4毫克
磷酸二氢钠    2000毫克
活性炭        3000毫克
蔗糖          30000毫克
琼脂          9000毫克
继代培养基配方为(以一升培养基用量)
MS            4000毫升
6-苄氨基嘌呤  4毫克
3-吲哚丁酸    4毫克
磷酸二氢钠    2000毫克
活性炭        3000毫克
蔗糖          30000毫克
琼脂          9000毫克
生根培养基配方为(以一升培养基用量)
MS            4000毫升
激动素        4毫克
磷酸二氢钠    2000毫克
活性炭        3000毫克
蔗糖          30000毫克
琼脂          9000毫克

Claims (3)

1、一种薇菜组织培养的方法，其特征在于它包括下列步骤：
a、外植体消毒：将薇菜展开叶片及根全部去掉，仅留幼嫩茎尖，用清水冲洗干净，在超净工作台上用0.1％升汞消毒液消毒5分钟-20分钟，然后用无菌水冲洗干净备用；
b、诱导原球茎培养：将a步骤消毒好的薇菜茎尖插于诱导培养基中，于20℃-27℃温度下避光培养3天-7天后光照培养，光照强度由弱渐强，培养20天-40天即可在嫩叶上形成大量原球茎，以一升培养基用量，诱导培养基配方为
MS            250毫升-4000毫升
激动素        0.5毫克-4毫克
3-吲哚丁酸    0.5毫克-4毫克
磷酸二氢钠    100毫克-2000毫克
活性炭        1000毫克-3000毫克
蔗糖          30000毫克
琼脂          9000毫克；
c、扩繁培养：b步骤生成的原球茎继续培养30天-40天便萌发形成原叶体，然后分切原叶体在继代培养基中继代培养25天-35天为一个周期，如此循环培养即可得大量组培苗，以一升培养基用量，继代培养基配方为
MS             250毫升-4000毫升
激动素         0.5毫克-4毫克
3-吲哚丁酸     0.1毫克-4毫克
磷酸二氢钠     100毫克-2000毫克
活性炭         1000毫克-3000毫克
蔗糖           30000毫克
琼脂           9000毫克；
d、生根培养：c步骤扩繁培养所得的组培苗转入生根培养基中培养，30天后能形成孢子体，再继续培养30天即可形成羽状叶并长出数条根须，以一升培养基用量，生根培养基的配方为
MS             250毫升-4000毫升
激动素         0.5毫克-4毫克
磷酸二氢钠     100毫克-2000毫克
活性炭         1000毫克-3000毫克
蔗糖           30000毫克
琼脂          9000毫克；
e、炼苗移栽：将d步骤已生根的组培苗瓶放到大棚中摆放3天-7天，然后取出组培苗，洗净培养基后栽入基质中，控制环境温度在20℃，湿度在90％，遮荫并逐步增加光照，15天后即可按常规种苗进行管理。
2、根据权利要求1所述的一种薇菜组织培养的方法，其特征是：以一升培养基用量，诱导培养基的配方还可为
MS            250毫升-4000毫升
6-苄氨基嘌呤  0.5毫克-4毫克
3-吲哚丁酸    0.5毫克-4毫克
磷酸二氢钠    100毫克-2000毫克
活性炭        1000毫克-3000毫克
蔗糖          30000毫克
琼脂          9000毫克。
3、根据权利要求1所述的一种薇菜组织培养的方法，其特征是：以一升培养基用量，继代培养基的配方还可为
MS            250毫升-4000毫升
6-苄氨基嘌呤  0.5毫克-4毫克
3-吲哚丁酸    0.1毫克-4毫克
磷酸二氢钠    100毫克-2000毫克
活性炭        1000毫克-3000毫克
蔗糖          30000毫克
琼脂          9000毫克。
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