CN1717240A - 糖酐酯的新用途 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及糖酐酯、或其药用衍生物在制备用于治疗立即经血液介导的炎性反应(IBMIR)的药剂中的应用。此外，本发明涉及糖酐酯、或其药用衍生物在制备用于治疗由IBMIR引起的细胞移植物的形态破坏以及细胞移植物的移植排斥的药剂中的应用。本发明可以应用于患有I型糖尿病的患者，其中猪朗格罕氏岛被移植到其门静脉。根据本发明给予糖酐酯可以抑制和预防移植胰岛的排斥和破坏并使得患者的血糖量正常成为可能。

Description

糖酐酯的新用途
技术领域
本发明涉及糖酐酯(葡聚糖硫酸酯)的新用途。
背景技术
现今，世界范围内约一千万人患有I型糖尿病，其也被称作胰岛素依赖型糖尿病。然而，受影响人群的数目估计会显著增加并且到2010年可影响多达两千五百万。目前，进行的研究正尝试通过引入产生胰岛素的β-细胞以在I型糖尿病患者中达到永久的血糖量正常。两种主要的方法是移植血管化的胰移植物或分离的郎格罕氏岛(胰岛)。虽然用血管化的移植物(整个器官)已获得一定成功，但问题仍然存在，这主要是由于手术危险性和术后并发症。此外，还存在缺乏适当的胰移植物供体的问题。相反，移植分离的胰岛通常通过将胰岛经肝注射到门静脉来进行，从而这些胰岛在肝的门静脉树中发生栓塞。
最近由Shapiro以及合作者[1]引入的胰岛同种异体移植的新方法将无疑有益于许多患有I型糖尿病的患者。然而，甚至用这种新方法，原来是来自单个供体胰的胰岛移植不足以在患者中产生血糖量正常[2]。因此，预期在治疗中人胰岛的供给会变成限制因素。因而必须发现产生胰岛素细胞的可替换来源。一种方案是使用制备自动物组织的胰岛，其中来自猪的胰岛是主要选择物。
在胰岛异种移植变成可能之前要解决的主要障碍之一是当在体外和体内暴露于新鲜人血时猪胰岛诱发的有害炎性反应[3]。此外，当门静脉内移植时暴露于患者的ABO-匹配血液时，人胰岛会诱导有害炎性反应[4]。炎性反应的特征在于血小板的快速消耗和活化，其粘附于胰岛表面，从而促进凝血级联和补体级联的活化。此外，这些胰岛变成包埋在凝块中并由CD11b+白细胞浸润，其一起导致细胞形态的破坏以及患者血糖量正常的丧失[3-4]。另外，炎症在后期可以加速以后的细胞介导的特异性免疫应答[5-8]。因此，抑制立即经血液介导的炎性反应(IBMIR)，称为有害炎性反应，似乎是胰岛同种异体移植和异种移植成功的关键。
两个最近由Buheler等[5]和Cantarovich等[6]进行的研究已表明，甚至在大量的传统技术的免疫抑制的条件下，当门静脉内移植到非人灵长类动物的肝中时，成年猪胰岛会立即被破坏。在这些研究中，作者得出结论：强有力的先天性免疫应答，IBMIR，其不受免疫抑制药物的影响，与异种胰岛的破坏有关。
Fiorante等已研究了使用糖酐酯预防血管化的不一致异种移植物的超急性排斥(HAR)[9]。在异种移植模型中，灌注以柠檬酸盐抗凝人血的猪肺在30分钟后受到HAR。然而，加入2mg/ml糖酐酯延长肺存活至约200分钟。血管化的整个器官的HAR是通过人血中抗体的作用所介导，其识别并结合于移植器官的血管的内皮细胞上的暴露抗原。补体***的成分会增强这种抗体介导的HAR反应[8，10，11]。由于还已知糖酐酯抑制补体活化[9，12]，因此认为在所用异种移植模型中，当使用糖酐酯时延长的肺存活是来自糖酐酯的这种抗补体效应。
Nakano和合作者已将分离的同基因胰岛移植到STZ-诱导的糖尿病小鼠的肝中以研究在改善高血糖症时肝细胞生长因子(HGF)的作用[13]。已知糖酐酯可增强HGF的效应，因此HGF和糖酐酯一起腹膜内给予受体小鼠。这种给药在所有研究的小鼠中产生血糖量正常。并且在几个小鼠中单独给予糖酐酯显示出一定有益效应，但当肾被膜下是胰岛移植部位时则没有。
对给予糖酐酯小鼠的另外的抗HGF抗体治疗会完全消除糖酐酯的有益效应，这表明在小鼠的这种同种异体胰岛移植模型中糖酐酯的效应是经过内源性HGF所介导。
Thomas等[14]已证明，可溶右旋糖酐衍生物在体外可抑制补体活化和补体介导损伤。在人血清中温育的猪主动脉内皮细胞导致补体消耗和在内皮细胞上沉积活化片段C3、C5以及次膜复合物C5b-9。加入25mg/ml CMDB25糖酐酯会抑制补体活化以及细胞溶解型复合物沉积在细胞上。天然右旋糖酐没有这种效应。
发明内容
本发明克服了现有技术方案的这些和其他缺点。
本发明的一般目的是提供用于立即经血液介导的炎性反应(IBMIR)的疗法。
本发明的另一个目的是提供用于由IBMIR引起的细胞移植物的形态破坏的疗法。
本发明的又一个目的是提供用于由IBMIR引起的细胞移植物的移植排斥的疗法。
本发明可以满足这些和其他目的，如所附专利权利要求所详细说明的。
简而言之，本发明涉及糖酐酯、及其衍生物，在用于治疗立即经血液介导的炎性反应(IBMIR)中的用途。当细胞或细胞簇在体外和体内暴露于异种血液时，就会触发这种新特征形式的炎症。IBMIR的一个非常重要的实例是当同种异体或异种细胞移植物被移植到受体哺乳动物患者、尤其是人患者体内时。然后IBMIR将导致移植细胞或细胞簇的形态破坏和毁坏，正如表现为结构和形状的丧失，另外，IBMIR还通常导致细胞移植物的移植排斥。
给予糖酐酯、或其衍生物可消除IBMIR有害效应并有效地预防移植排斥和细胞移植物的形态破坏。根据本发明的糖酐酯的分子量可以是低分子量糖酐酯(LMW-DS)，例如从几百或几千道尔顿(Da)，至高分子量糖酐酯(HMW-DS)，通过具有超过500000Da的分子量，例如＞1000000Da。对于LMW-DS，糖酐酯的有益效应尤其显著，但通过给予更高分子量的糖酐酯也观察到正效应。根据本发明更大糖酐酯分子对IBMIR的有益影响可以通过增加硫含量来增强，即，在右旋糖酐链中每个葡糖基残基的硫酸酯基团的数目。LMW-DS通常具有低于20000Da的平均分子量，如低于10000Da以及例如约5000Da。LMW-DS的平均硫含量可以是约10至25％，如15至20％，其相应于每个葡糖基残基约两个硫酸酯基团。对于平均分子量高于20000Da的糖酐酯，可以采用更大的硫含量。
糖酐酯、以及其衍生物可以全身递送到IBMIR或细胞移植的部位，或可以直接递药(局部地)到该部位。因而，根据本发明，糖酐酯、以及其衍生物可以以下述方式给予：口服、静脉内给药、腹膜内给药、皮下给药、含服、直肠给药、皮肤给药、鼻给药、气管给药、支气管给药、局部给药、通过任何其他肠外途径或经过吸入，并以药物制剂的形式，其在药用剂型中包括活性组分。
在治疗哺乳动物、尤其人时，糖酐酯以及其衍生物可以单独给予，但通常作为与药用佐剂、稀释剂、或载体混合的药剂剂型给予，其可以适当地考虑到给药途径以及标准的药物实践加以选择。
在剂型中糖酐酯、或其衍生物的量将取决于病症的严重性和要治疗的患者、以及采用的实际剂型和给药途径，并且可以由技术人员非创造性地确定。根据本发明，给予的糖酐酯、或其衍生物的浓度不应太高以便将任何与糖酐酯有关的副作用减至最低程度。在大多数临床情况下，在治疗和/或预防治疗哺乳动物、尤其是人患者时，糖酐酯、或其衍生物的适当剂量是那些剂量，其产生低于5mg/ml的平均血液浓度，或许小于2mg/ml以及尤其小于1mg/ml。优选的浓度范围是在0.01mg/ml和1mg/ml糖酐酯之间，如大于0.05mg/ml、大于0.08mg/ml、或大于0.1mg/ml，和/或小于0.8mg/ml、小于0.6mg/ml、小于0.4mg/ml、或小于0.2mg/ml，例如在0.01mg/ml和0.2mg/ml和/或0.05mg/ml和0.2mg/ml的浓度范围内。
根据本发明的糖酐酯尤其适用于预防移植到I型糖尿病患者的产生胰岛素的β-细胞的移植排斥。在这类患者中，来自其他人或哺乳动物的朗格罕氏岛(islets of Langerhans)、优选猪胰岛，可以通过将这些胰岛注入患者的门静脉来进行移植。然而，这些胰岛一旦暴露于患者的血液，就会触发IBMIR，并且将破坏这些胰岛的胰岛素调节功能以及排斥这些胰岛。因而，在进行细胞或细胞簇的移植以后，优选至少局部地在移植部位达到糖酐酯、或其衍生物的治疗浓度。这可以通过在实际移植之前给予糖酐酯来实现。可替换地，可以注射溶解于溶液中的胰岛，其包括根据本发明的糖酐酯，以抑制IBMIR和预防任何胰岛的排斥的破坏，从而使患者的血糖量正常成为可能。在这种细胞和糖酐酯溶液中的糖酐酯浓度优选足够高，以便至少局部地在移植部位在移植后的最初几小时内，可以达到糖酐酯的治疗浓度，即，优选小于5mg/ml，更优选0.01mg/ml至1.0mg/ml，以及尤其是0.01mg/ml至0.2mg/ml。然后糖酐酯将从移植部位扩散并降低局部糖酐酯浓度。在某些应用中，不需要额外的糖酐酯以抑制IBMIR、细胞移植物的形态破坏和/或移植排斥，因为或许仅在移植后的最初24-48小时需要治疗浓度的糖酐酯。然而，每当需要时，可以加入另外的糖酐酯，例如，静脉内、腹膜内、或通过其他给药途径。如本领域技术人员所明了的，在实际移植之前，给予糖酐酯溶液(包括要给予的细胞或细胞簇)也可以与给予糖酐酯、或其衍生物相结合。
糖酐酯、或其衍生物也可以与可用于治疗移植组织的移植排斥的其他治疗药剂相结合。适当但非限制性的这类免疫抑制药剂(其可以与糖酐酯一起使用，来治疗移植排斥)的实例是环孢菌素、他克莫司、皮质类固醇、雷帕霉素(西罗莫司)、以及霉酚酸酯。给予根据本发明的糖酐酯还可以与给予抗TF抗体和/或位点灭活因子VIIa相配合，其在抑制IBMIR方面也具有一定功能。
附图说明
根据下文结合附图进行的描述，本发明以及其另外的目的和优点将更为明了，其中：
图1是示出在用人血灌注猪胰岛期间LMW-DS对产生C3a的影响示图；
图2是示出在用人血灌注猪胰岛期间LMW-DS对产生sC5b-9的影响示图；
图3是示出存在LMW-DS的情况下温育人血清时LMW-DS对补体***的直接影响示图；
图4示出了在用不含LMW-DS的人血灌注以后在猪胰岛中白细胞的分布；
图5示出了在用含有1mg/ml LMW-DS的人血灌注以后在猪胰岛中白细胞的分布；
图6示出了在用不含LMW-DS的人血灌注以后在猪胰岛中血小板的分布；
图7示出了在用含有1mg/ml LMW-DS的人血灌注以后在猪胰岛中血小板的分布；
图8示出了在门静脉内移植到没有LMW-DS治疗的糖尿病无胸腺小鼠以后胰岛素在猪胰岛中的表达；
图9示出了在门静脉内移植到经LMW-DS治疗的糖尿病无胸腺小鼠以后胰岛素在猪胰岛中的表达；
图10示出了在门静脉内移植到没有LMW-DS治疗的糖尿病无胸腺小鼠以后白细胞在猪胰岛中的分布；以及
图11示出了在门静脉内移植到经LMW-DS治疗的糖尿病无胸腺小鼠以后白细胞在猪胰岛中的分布。
具体实施方式
本发明一般地涉及糖酐酯对立即经血液介导的炎性反应(IBMIR)、以及由IBMIR引起的细胞移植物的形态破坏和移植排斥的新的意外影响。
IBMIR是较为新近识别的炎性反应，其是由细胞或细胞簇暴露于或接触异种血液所触发。该IBMIR的特点在于在细胞上表达组织因子，其触发局部产生凝血酶。其后，活化的血小板粘附于细胞表面，从而促进凝血和补体***的活化。此外，白细胞被补充并浸润这些细胞。在与异种血液接触后的最初几小时内，这些效应一起引起细胞形态的破坏和毁坏。IBMIR还加速其后的在后期的细胞介导的特异性免疫应答。
IBMIR的一个非常重要的实例是当细胞或细胞簇被移植到优选哺乳动物患者、尤其是人患者体内时。在与受体患者的血液接触以后，这些细胞触发IBMIR，其导致细胞形态的破坏以及细胞移植物的一般移植排斥。在同种异体细胞移植中，其中来自具有ABO-匹配血液的供体的细胞被移植到患者，以及在异种细胞移植中，其包括猪到猴以及猪到人异种移植细胞和/或细胞簇，均检测到IBMIR。
在本发明中，表达“细胞移植物”通常指单细胞、几个单细胞、或许多细胞的簇，其被移植到优选哺乳动物、尤其是人患者的受体体内。并且更大的非血管化组织的细胞簇包括在表达细胞移植物中，如本文所使用的。根据本发明的细胞移植物的实例是同种异体或异种朗格罕氏岛，其被移植到I型糖尿病患者的肝的门静脉。另外的一个实例可以是在帕金森病患者的纹状体中移植胚胎异种神经组织/细胞。
如在背景技术部分简要讨论的，在I型糖尿病患者中获得血糖量正常的有前景的方法是将产生胰岛素的β-细胞移植到例如门静脉。适当的产生胰岛素的细胞，例如以朗格罕氏岛形式，可以获自同种异体和异种供体。因为需要来自几个供体的胰岛以获得血糖量正常以及缺少适当的人供体，所以可以使用异种、优选猪胰岛。然而，当暴露于受体患者的血液时，同种异体和异种胰岛均诱发IBMIR。因此，在移植以后的几小时内，细胞的形态会破坏和受到破坏，通常表现为丧失细胞的完整性、结构、以及形状。这导致起初从朗格罕氏岛大大增加的胰岛素释放，接着减少或丧失胰岛素释放。换而言之，在移植后很快丧失血糖量正常。另外，IBMIR也引起细胞移植物的移植排斥。
给予预防产生抗体和器官排斥的传统免疫抑制药对IBMIR或由IBMIR引起的细胞移植物的移植排斥没有作用。这表明IBMIR和细胞移植物的移植排斥的主要机制不同于在移植整个器官和血管化的组织时发现的排斥机制。
下文更详细综述IBMIR的症状，以及尤其是血小板消耗、凝血和补体活化、以及白细胞浸润。另外，综述糖酐酯对相应症状的的影响。为了更详细讨论糖酐酯的这些影响，参考实施例部分。
从血小板消耗开始，IBMIR影响暴露于同种异体或异种细胞或细胞簇的血液的血小板计数。在血液-细胞接触后在血液中可以检测到游离循环血小板的显著降低。这些血小板变得活化并粘附于细胞，导致血小板聚集。在粘附于细胞后，血小板释放几种物质，包括血小板磷脂，其对于凝块形成和凝血***的活化是重要的。
给予根据本发明的有效量的糖酐酯可抑制血小板的消耗，如随着血液的血小板计数的增加所看到的，其回到在暴露于异种细胞或细胞簇之前在血液中测得的数值。此外，糖酐酯相当大程度上减少粘附于细胞的血小板，虽然仍然可以观察到围绕胰岛有痕量血小板。然而，这些剩余血小板的影响不一定是缺点。动物研究表明，在移植后，在检测到血管生成之前至少经过1周[15，16]。血小板含有许多重要的生长因子，如血小板源生长因子(PDGF)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、以及纤维母细胞生长因子(FGF)[17，18]，其可以在患者体内支持再血管化(血管再生)和胰岛移入。在临床胰岛移植的情况下，当胰岛被栓塞到门静脉时，粘附血小板的螺旋形物可以以类似方式支持其移入和在肝组织中存活。
在与血液接触后，通过组织因子在细胞上的表达以及通过由粘附和聚集血小板所释放的物质，异种细胞活化凝血***。简而言之，由细胞产生的组织因子(TF)与凝血因子VIIa复合并酶催化地作用于因子X以形成活性因子X(FXa)。其后发生不同因子活化的级联，其最后导致从凝血酶原产生凝血酶。凝血酶本身又引起纤维蛋白原分子聚合成纤维蛋白纤维，从而围绕细胞形成纤维蛋白凝块，其是本领域技术人员公知的。凝血酶还激活引发血液凝固的内源性途径，其中因子XII(哈松曼因子)变成活化的(FXIIa)以及本身又酶催化地活化因子XI(凝血活酶前体)，导致FXIa-因子XI的活化形式。并且就外源性TF活化途径而言，这种途径最后导致从凝血酶原产生凝血酶。
血液凝固可以由抗凝血酶，一种循环丝氨酸蛋白酶抑制物加以抑制，其灭活FXIIa、FXIa、以及凝血酶，从而形成因子XIIa-抗凝血酶(FXIIa-AT)、因子XIa-抗凝血酶(FXIa-AT)、以及凝血酶-抗凝血酶(TAT)复合物。此外，Cl酯酶抑制剂是已知的FXIa和FXIIa的抑制剂，其形成因子XIa-Cl酯酶抑制剂(FXIa-Cl 1NH)和因子XIIa-Cl酯酶抑制剂(FXIIa-Cl 1NH)复合物。
以前围绕细胞或细胞簇形成的纤维蛋白凝块可以通过纤维蛋白溶解***的纤溶酶的作用除去。纤溶酶将纤维蛋白凝块降解成纤维蛋白降解产物，从而防止进一步凝固。然而，纤溶酶的作用受到α2-抗纤溶酶的抑制，其结合于并灭活游离纤溶酶，从而形成纤溶酶-α2-抗纤溶酶(PAP)复合物。
IBMIR的特点在于，在体外和体内围绕暴露于异种血液的细胞形成纤维蛋白凝块。此外，检测到FXIa-AT、FXIIa-AT、TAT、以及PAP的增加。IBMIR对FXIa-Cl 1NH或FXIIa-Cl 1NH的量没有影响。给予有效量的根据本发明的糖酐酯可取消IBMIR对凝血活化的影响，其表现为在血液中检测到的FXIa-AT、FXIIa-AT、TAT、以及PAP的量下降。糖酐酯对凝血活化的影响可以通过凝血***本身、通过糖酐酯对血小板活化的抑制影响、或通过两者加以介导。
在血小板和凝血活化以后，在IBMIR中接着发生补体级联。补体***的成分之一是C3，当被活化时其***成较小的C3a片段，一种炎症的肽介质，以及较大的片段C3b。C3b本身又结合于补体***的其他成分，从而形成C5转化酶，其将C5***成C5a(其扩散离开)，以及活性形式C5b(其附着于细胞表面)。结合的C5b然后结合于四种更多的补体成分，从而形成膜攻击复合物c5b-9。此复合物代替膜磷脂，从而形成较大的跨膜通道，其使膜破裂并使离子和小分子能够自由扩散。因而，细胞不能保持其渗透稳定性并由流入的水所溶解以及失去电解质。
在可以检测出IBMIR的补体介导效应之前大多数血小板消耗已经发生，这提示凝固反应可诱导补体活化。IBMIR可引起显著的补体活化，如在血液中由C3a和可溶膜攻击复合物sC5b-9的增加所测得的。给予有效量的根据本发明的糖酐酯可以在血液中以剂量依赖方式减少这些补体成分的量。
IBMIR的特点还在于白细胞浸润细胞或细胞簇。通过免疫组织化学染色法清楚地检测到CD11b+多形核细胞和单核细胞浸润细胞。免疫组织化学分析表明，通过给予糖酐酯完全取消了白细胞浸润。
根据本发明的第一个方面提供糖酐酯、或其药用衍生物在制备用于治疗立即经血液介导的炎性反应(IBMIR)的药剂中的应用。
根据本发明的另一个方面提供糖酐酯、或其药用衍生物在制备用于治疗移植的细胞移植物的形态破坏的药剂中的应用。并且使用糖酐酯、或其药用衍生物制备治疗细胞移植物的移植排斥的药剂也在本发明的范围内。在哺乳动物、优选人患者中，对移植的细胞、细胞簇、或非血管化的组织的这两种效应，即，细胞形态的破坏和移植排斥是由于IBMIR的有害效应。在人到人移植(具有ABO-匹配供体)、以及使用其他哺乳动物优选猪供体的情况下，均发生对细胞移植的IBMIR介导效应。因此，糖酐酯对同种异体和异种细胞移植均具有有利的治疗效应。
为了避免疑问，如本文所使用的，术语“治疗”包括治疗和/或预防性治疗IBMIR。“药用衍生物”包括盐和溶剂合物。
根据本发明使用的糖酐酯、或其衍生物的分子量可以是低分子量糖酐酯(LMW-DS)，例如从几百或几千道尔顿(Da)，至高分子量糖酐酯(HMW-DS)，通过具有超过500000Da的分子量，例如＞1000000Da。对于LMW-DS，糖酐酯的有益效应尤其显著，但通过给予更高分子量的糖酐酯也观察到正效应。然而，更大的糖酐酯分子可活化FXII，导致某些副作用，其在下文会详细讨论。根据本发明更大糖酐酯分子对IBMIR的有益影响可以通过增加硫含量来增强，即，增加右旋糖酐链中每个葡糖基残基的硫酸酯基团的数目。LMW-DS通常具有低于20000Da的平均分子量，如低于10000Da以及例如约5000Da。LMW-DS的平均硫含量可以是约10％至25％，如15％至20％，其相应于每个葡糖基残基约两个硫酸酯基团。对于平均分子量高于20000Da的糖酐酯，可以采用更大的硫含量。
根据本发明的又一个方面提供治疗IBMIR的方法，其包括给予需要这种治疗的患者有效治疗量的糖酐酯、或其药用衍生物。
本发明的另外方面是治疗细胞移植物的移植排斥的方法，其包括给予需要这种治疗的患者有效治疗量的糖酐酯、或其药用衍生物；以及治疗移植的细胞移植物的形态破坏的方法，其包括给予需要这种治疗的患者有效治疗量的糖酐酯、或其药用衍生物。
利用技术人员公知的适当的给药方式，糖酐酯、以及其衍生物可以全身递药到IBMIR或细胞移植的部位，或可以直接递药(局部地)到该部位。
因此，根据本发明，糖酐酯(dextran sulfate)、以及其衍生物可以以下述方式给予：口服、静脉内给药、腹膜内给药、皮下给药、含服、直肠给药、皮肤给药、鼻给药、气管给药、支气管给药、局部给药、通过任何其他肠外途径或经过吸入，并以药物制剂的形式，其在药用剂型中包括活性组分。依赖于细胞移植的形式、移植部位、要治疗的患者、以及给药途径，可以以不同剂量给予这些组合物。
在治疗哺乳动物、尤其人时，糖酐酯以及其衍生物可以单独给予，但通常作为与药用佐剂、稀释剂、或载体混合的药剂剂型给予，其可以适当地考虑到给药途径以及标准的药物实践加以选择。
在剂型中糖酐酯、或其衍生物的量将取决于病症的严重性和要治疗的患者、以及采用的实际剂型和给药途径，并且可以由技术人员非创造性地确定。根据本发明，给予的糖酐酯、或其衍生物的浓度不应太高以便将任何与糖酐酯有关的副作用减至最低程度。在大多数临床情况下，在治疗和/或预防治疗哺乳动物、尤其是人患者时，糖酐酯、或其衍生物的适当剂量是那些剂量，其产生低于5mg/ml的平均血液浓度，或许小于2mg/ml以及尤其小于1mg/ml。优选的浓度范围是在0.01mg/ml和1mg/ml糖酐酯之间，如大于0.05mg/ml、大于0.08mg/ml、或大于0.1mg/ml，和/或小于0.8mg/ml、小于0.6mg/ml、小于0.4mg/ml、或小于0.2mg/ml，例如在0.01mg/ml和0.2mg/ml和/或0.05mg/ml和0.2mg/ml的浓度范围内。这些浓度已证明是足够大以预防或抑制IBMIR以及细胞移植物的形态破坏和移植排斥，但仍然足够低以将任何通常与给予糖酐酯有关的副作用减至最低程度。此外，在0.01至1mg/ml的浓度范围内，在LMW-DS中培养胰岛对胰岛功能并没有有害效应。在任何情况下，医师或技术人员能够确定实际剂量，其最适合于个别患者、并可以随特定患者的年龄、体重、以及反应而变化。上述确定的剂量是一般情况的优选剂量的实例。然而，可以有个别情况，其中更高或更低剂量范围是有价值的，并且这样的剂量是在本发明的范围内。
目前，糖酐酯已用于抵抗HIV的抗病毒治疗的临床研究、和尿激酶一起治疗急性脑梗死、以及抗高脂血症治疗，其中糖酐酯偶联于固相。在前两种类型的研究中，注射速率是约45mg/小时，通过连续注射糖酐酯(MW 8000Da)其保持2-3周，并且发现血液浓度为大约0.01mg/ml。在所有这些患者中，在治疗3天后观察到凝血细胞减少(有时伴随出血)，并且约半数患者报告脱发。然而，这两种效应均是可逆的。估计给予糖酐酯来抑制IBMIR、细胞移植物的形态破坏和/或移植排斥通常进行长达1-2天、或几天。因此，以上确定的副作用在这样短的给药期间(与2-3周相比，仅几天)将是非常温和的。
很久以来已知道，通过释放由血浆激肽释放酶的活化产生的缓激肽糖酐酯可诱导低血压。然而，这种观察主要是在HMW-DS已固定于血浆去除柱用于治疗高脂血症时进行而不是在注射糖酐酯期间进行。这种效应是直接活化FXII到FXIIa的结果。然而，在本文献中，支持因子XII并不是由LMW-DS直接活化。如上所述，当细胞暴露于没有LMW-DS的异种血液时FXIIa-AT和PAP水平提高。然而，当加入LMW-DS时，这些高水平恢复正常。
为了预防细胞移植后的IBMIR、和/或细胞移植物形态破坏和移植排斥，在进行细胞移植以后，优选至少局部地在移植部位达到糖酐酯、或其衍生物的治疗浓度。这可以通过在实际移植之前给予糖酐酯来实现。可替换地，可以注射溶解于溶液中的要移植到患者的细胞或细胞簇，该溶液包括根据本发明的糖酐酯。在这种细胞和糖酐酯溶液中的糖酐酯浓度优选足够高，以便在移植部位在移植后的最初几小时内，可以(局部地)达到糖酐酯的治疗浓度，即，优选小于5mg/ml，以及更优选在0.01mg/ml至1.0mg/ml内。如本领域技术人员所明了的，当移植溶解于具有糖酐酯的溶液中的细胞或细胞簇时，糖酐酯、或其衍生物的实际浓度可以暂时高于在患者血液中的最佳浓度。其后，糖酐酯将从移植部位扩散并降低局部糖酐酯浓度。在某些应用中，不需要额外的糖酐酯以抑制IBMIR、细胞移植物的形态破坏和/或移植排斥，因为或许仅在移植后的最初24-48小时需要治疗浓度的糖酐酯。然而，每当需要时，可以加入另外的糖酐酯，例如，静脉内、腹膜内、或通过其他以上确定和给药途径。如本领域技术人员所明了的，在实际移植之前，给予糖酐酯溶液(包括要移植的细胞或细胞簇)也可以与给予糖酐酯、或其衍生物相结合。
根据本发明的另外方面，提供用于治疗IBMIR的药剂剂型，包括有效量的糖酐酯、或其药用衍生物。
本发明还涉及用于治疗细胞移植物的移植排斥的药剂剂型，其包括有效量的糖酐酯、或其药用衍生物；以及用于治疗移植的细胞移植物的形态破坏的药剂剂型，其包括有效量的糖酐酯、或其药用衍生物。
糖酐酯、以及其衍生物也可以与可用于治疗移植组织的移植排斥的其他治疗药剂相结合。适当但非限制性的这类免疫抑制药剂(其可以和糖酐酯一起使用，来治疗移植排斥)的实例是环孢菌素、他克莫司、皮质类固醇、雷帕霉素(西罗莫司)、以及麦考酚酸吗乙酯。给予根据本发明的糖酐酯、或其衍生物还可以与给予抗TF抗体和/或位点灭活因子VIIa相配合，其在抑制IBMIR方面已显示出具有一定功能。
实施例
试剂
平均分子量为5000Da以及硫含量为大约17％的低分子量糖酐酯(LMW-DS)获自Sigma Chemicals(St.Louis，MO，美国)。平均分子量为＞1000000Da以及硫含量为16-19％的高分子量糖酐酯(HMW-DS)购自Amersham Bioscience(Uppsala，瑞典)。低分子量右旋糖酐(LMW-D；MW 5000Da)和高分子量右旋糖酐(HMW-D；MW＞1000000Da)分别获自Fluka Chemical(Buchs，瑞士)和SigmaChemicals(St.Louis，MO，美国)。
肝素处理
按照制造商的建议所有与全血接触的材料备有Corline肝素表面(Corline Systems AB，Uppsala，瑞典)。肝素的表面浓度是0.5μg/cm2，相应于大约0.1U/cm2，同时抗凝血酶结合量为2-4pmol/cm2。
血液的制备
获自至少14天未接受药剂的健康自愿者的新鲜人血收集在表面肝素化的60ml注射器中(18规格，Microlance；Becton Dickinson，Franklin Lakes，NJ)。注射器的插管连接于表面肝素化的硅管。在取样期间，连续旋转注射器。
动物
来自Bomholt Gaard Breeding and Research有限公司(Ry，Denmark)、20-25g的雄性自交无胸腺小鼠(nu/nu Black-6，BomMice)用作受体。所有动物可以自由获得标准饮食和水。
胰岛分离
如由Ricordi等[19，20]所建议的，通过酶和机械胰消化程序、接着在Ficoll梯度上过滤和分离胰岛，从2至3岁的瑞典Landrace母猪(200至300kg)的胰分离成年猪胰岛(API)。这些胰岛悬浮在M199培养基(GIBCO，BRL，Life Technologies有限公司，Paisley，苏格兰)中，其补充以10％猪血清(GIBCO，BRL)、1mM硝酸钙、0.02μM硒、20mM烟酰胺、25mM HEPES、两性霉素B洗剂(500μg/l)、以及庆大霉素(50mg/l)，并在250mi烧瓶中在37℃、5％CO2、以及增湿空气下培养1至4天。在第一天改变培养基，其后每隔一天改变培养基。在用双硫腙(Sigma Chemicals，St.Louis，MO)染色后，在倒置显微镜下确定胰岛的体积和纯度。
在无胸腺小鼠中诱导糖尿病
按照Wennberg等[20]通过静脉(i.v.)注射来自Sigma Chemicals(Palo Alto，CA，美国)的链脲霉素，在无胸腺小鼠中诱导糖尿病。对于无胸腺小鼠链脲霉素剂量是250mg/kg体重。如果动物的血糖(B-葡萄糖)水平连续两天或更多天超过20mmol/l(＞360mg/dl)，则认为动物患有糖尿病。
将API移植到用或未用LMW-DS治疗的糖尿病无胸腺小鼠
在培养4天后，将来自5次分离的5μl API(约5000IEQs)经过11只雄性自交(近亲交配)糖尿病无胸腺小鼠的门静脉移植到肝，在外科手术期间小鼠用异氟醚进行麻醉。静脉注射LMW-DS对5只小鼠进行治疗。在移植前10分钟注射0.15mg的LMW-DS，并在移植后6小时注射另外的0.3mg。其后，在移植后的1-2、3-4、以及5-6天每天两次分别给予下降剂量1、0.5、以及0.25mg的LMW-DS。6只(未治疗的)小鼠以相同方式注射以相同体积的盐水。
统计分析
所有数值表示为平均值±标准平均误差并利用Friedman方差分析(表1)、斯图顿特成对t-检验(表3)、威尔科克森符号秩检验(表4)、以及Scheffe后检验(表5)以后的单向阶乘方差分析进行比较。在移植胰岛的形态研究中，利用威尔科克森秩检验评估了凝块形成的频率和白细胞浸润的强度。P值＜0.05被认为是统计显著的。
胰岛质量
进行了静态葡萄糖刺激(SGS)试验作为API的功能试验。精选了15个胰岛并在37℃下在含有Krebs-Ringer碳酸氢盐的1.6mM葡萄糖中温和摇振60分钟。其后，葡萄糖浓度改变到16.7mM再摇振60分钟。收集上清液并储存在-20℃直到分析。通过ELISA(DAKO Diagnostics有限公司，Ely，英国)分析了上清液中胰岛素含量。刺激指数计算为分别在高葡萄糖和低葡萄糖下胰岛素浓度的比率。在此研究中使用的API的纯度在81％至95％的范围内(平均值，88.5±2.2％)。在静态葡萄糖刺激试验中刺激指数是在0.8至7.8之间(3.4±1.2)，而平均胰岛素含量为85.5±6.2pmol/μg DNA。
此外，利用ApoGlowTM试剂盒(LumiTech有限公司，Nottingham，英国)测量ADP/ATP比率以评估培养的API的生存力。简单地说，75胰岛当量(IEQ)的API在PBS中洗涤，然后在室温下与100μl核苷酸释放试剂混合10分钟。其后，20μl核苷酸监测试剂加入溶液，接着利用光度计(FB 12光度计，BertholdDetection Systems GmbH，Pforzheim，德国)测量ATP水平并表示为相对光单位(RLU)数。10分钟以后，通过加入20μl ADP转化试剂，溶液中的ADP被转化成ATP，然后测量为RLU数。其后，如Bradbury等[21]所建议的，计算在API中的ADP/ATP比率。在API中的胰岛素/DNA比率是按照Wennberg等[22]进行测量并表示为pmol/μg。培养的API的存活率计算为与第0天相比第3天获得的IEQ值的百分数。
LMW-DS的任何可能毒性是通过在有(0.01、0.1、或1mg/ml)或没有LMW-DS的情况下培养来自3种不同胰的API三天进行评估。对照试样和具有三种不同LMW-DS浓度的试样的存活率、刺激指数、ADP/ATP比率、以及胰岛素/DNA比率的结果提供在以下的表1中。在任何试验浓度，LMW-DS对API的功能、生存力、或存活率没有显示有害效应。另外，在经LMW-DS处理的API的形态和在没有LMW-DS的情况下培养的API的形态之间没有差异。
                           表1
  未用LMW-DS培养的API   用LMW-DS培养的API(0.01mg/ml)   用LMW-DS培养的API(0.1mg/ml)   用LMW-DS培养的API(1mg/ml)
  存活率(％IEQ)   57.0±5.2   43.6±6.7   58.4±4.3   68.9±2.6
  在SGS试验中的刺激指数 1.77±0.17 2.26±0.51 3.22±0.89 1.42±0.35
  ADP/ATP比率   0.11±0.03   0.08±0.03   0.10±0.03   0.11±0.01
  胰岛素/DNA比率(pmol/μg)   79.0±11.4   66.1±5.8   69.1±9.6   71.6±7.4
凝固时间
从四位健康自愿者将血液吸入含有柠檬酸盐的VacutainerTM管。在37℃下在聚丙烯试样杯中并用ReoRoxTM血流速度计(GlobalHaemostasis International，Gothenburg，瑞典)，用2μl的API温育全血(980μl)。在存在或不存在不同种类的右旋糖酐(LMW-DS、HMW-DS、LMW-D、及HMW-D)的情况下，通过加入20μl的1MCaCl2开始凝血反应。每6秒，杯被设置成围绕其垂直轴自由扭转振荡，并记录振荡的阻尼和频率。凝固时间等同为最大阻尼点。
从凝固时间实验获得的结果提供在以下的表2中。在钙化后平均6.1±0.3分钟，在柠檬酸盐人血中温育的API迅速诱导凝块形成。在有LMW-DS的情况下，所有试验剂量都完全取消凝块形成，而HMW-DS仅在0.1mg/ml抑制凝块形成。与对照试样(没有添加剂)相比，LMW-DS和HMW-DS都仅在较小的程度上延长凝固时间。因此，DS的硫化对于观察到的抑制能力似乎是关键的。
                              表2
  实验1   实验2   实验3   实验4
  没有添加剂LMW-DS(0.01mg/ml)LMW-DS(0.1mg/ml)HMW-DS(0.01mg/ml)HMW-DS(0.1mg/ml)LMW-D(0.01mg/ml)LMW-D(0.1mg/ml)HMW-D(0.01mg/ml)HMW-D(0.1mg/ml)   5.6＞60＞6015.8＞6019.225.219.814.2   6.3＞60＞6036.9＞6011.325.813.833.2   6.9＞60＞6021.0＞60   5.5＞60＞6038.3＞60
通过LMW-DS抑制IBMIR
在肝素化PVC管环中的成年猪胰岛灌注被用作测定LMW-DS对IBMIR和猪到人异种移植的影响的模型。此方案的进行基本上如先前所述[4，23]，其中有一些改进。一般而言，使用由PVC制成的环(直径6.3mm，长度390mm)，其内表面提供有固定肝素。管用特殊设计的肝素化连接物结合在一起。当连接物的末端被紧密地推入管末端的腔中时则形成圆形环。放置在37℃培养箱中的摇动装置用来在环内产生血流。在设置时摇动这些环，其防止血液与连接物接触。
利用分离自四只不同猪的API进行7个60分钟胰岛实验。在0、0.01、0.1、以及1mg/ml(终浓度)下试验了溶解于盐水中的LMW-DS。对于每个实验，包括含有新鲜人血和没有API的盐水的一个环作为对照。在两个实验中，包括一个环，其含有新鲜人血和1mg/ml的没有API的LMW-DS。同时，在5个实验中试验了用1mg/ml的LMW-右旋糖酐(其未硫化)预温育人血。在每个实验中，来自相同供体的7ml新鲜人血加入每个环。然后这些环被放置在摇动装置上5分钟，具有LMW-DS或盐水。其后，打开这些环，并将100μl存在或不存在5μl API(大约5,000IEQ)的盐水加入这些环，接着在37℃的摇动装置上再温育60分钟。在灌注前用葡萄糖仪(glucometer)(Glucometer Elite；Bayer Diagnostics，Leverkusen，德国)测量血糖水平。
在每次灌注以后，通过70μm直径过滤器(Filcons，Cuptype；DAKO，丹麦)过滤环内含物。在过滤器上收回的宏观血块和组织被急速冷冻在异戊烷中用于免疫组织化学染色。剩余的过滤血液收集在4.1mM EDTA(终浓度)中并用于血液分析(血小板、淋巴细胞、单核细胞、以及粒细胞)和测定凝血活化(凝血酶-抗凝血酶[TAT]、因子XIa抗凝血酶复合物[FXIa-AT]、以及因子XIIa抗凝血酶复合物[FXIIa-AT])、纤维蛋白溶解活化(纤溶酶-α2-抗纤溶酶复合物[PAP])、补体活化(C3a和sC5b-9)、以及Cl酯酶抑制物活化(因子XIa-Cl酯酶抑制物[FXIa-Cl INH]、因子XIIa-Cl酯酶抑制物[FXIIa-Cl INH])。还分析了在0、15、以及30分钟获得的样品。在0分钟样品中，血液未加入管环而是立即转移到含EDTA管。在4℃和3290×g下离心血液样品20分钟，接着，收集血浆并储存在-70℃直到分析。在API灌注以前血糖水平在4.8至6.2mmol/l的范围内。
血小板计数和白细胞分类计数是利用EDTA处理的血液并用Coulter ACT-diff分析器(Beckman Coulter，FL，美国)进行分析。利用商业上可获得的酶免疫测定(EIA)试剂盒(Enzygnost TAT，Behringswerke，Marburg，德国；ImuclonePAP，AmericanDiagnostica Inc.，Greenwich，美国)对TAT和PAP进行量化。按照Sanchez等[24]的方法分析了FXIa-AT、FXIIa-AT、FXIa-Cl INH、以及FXIIa-Cl INH。C3a是由Nilsson Ekdahl等[25]先前描述的方法加以分析，而sC5b-9则是利用Mollnes等[25，26]描述的EIA的改进方法加以分析。
在含有新鲜人血而没有API的管环中，血细胞计数和凝血以及补体参数仅稍许变化，如在以下的表3中可以看到的。所有这些变化被认为是正常的本底变化，其来自血液与管表面以及液体-空气界面的相互作用。
LMW-DS可以剂量依赖方式防止宏观凝固、抑制血细胞消耗、以及减少凝血和补体活化(见表3)。在0.01mg/ml LMW-DS的浓度下可以看到在经LMW-DS处理的血液中血小板显著增加，说明在此低浓度LMW-DS下血细胞计数已恢复到接近正常水平。在0.01mg/ml的LMW-DS下凝血活化产物TAT、FXIa-AT、以及FXIIa-AT受到抑制，但在0.1至1mg/ml LMW-DS的剂量范围内FXIa-AT再次稍微增加。
LMW-DS可减少补体活化，如通过产生C3a和可溶膜攻击复合物sC5b-9所测定的，如在表3所看到的。图1更详细说明，在管环模型中，在用新鲜人血的60分钟API灌注期间，LMW-DS对产生C3a的影响。在加入LMW-DS的样品中，在API灌注以血液之前，用新鲜人血预温育糖酐酯5分钟。空圆圈对应于0mg/ml LMW-DS，黑圆圈表示0.01mg/ml LMW-DS，而空正方形和黑正方形分别对应于0.1mg/ml和1mg/ml LMW-DS。LMW-DS对产生sC5b-9的影响的相应示意图见图2。如从图1和图2的示意图清楚地看到的，主要补体活化发生在API灌注后约30分钟。给予0.1mg/ml和1mg/mlLMW-DS完全抑制C3a和膜攻击复合物sC5b-9的产生，而低浓度LMW-DS(0.01mg/ml)则显著减少C3a的产生。
在60分钟灌注期间在试验的管环中没有产生FXIa-Cl INH(数据未示出)。在存在或不存在LMW-DS的情况下FXIIa-Cl INH没有变化。
在没有LMW-DS的情况下PAP增加，而在0.01mg/ml LMW-DS下则显著抑制PAP。
                            表3
  灌注前(n＝7)                                         灌注后
  无API(n＝7)                         API，具有LMW-DS(mg/ml)
  0(n＝7)   0.01(n＝7)   0.1(n＝7)   1(n＝7)
  血小板(×109/l)淋巴细胞(×109/l)单核细胞(×109/l)粒细细胞(×109/l)TAT(μg/ml)FXIa-AT(μmol/l)FXIIa-AT(μmol/l)C3a(ng/m/l)sC5b-9(AU/ml)FXIIa-ClINH(μmol/l)PAP(ng/ml) 252.7±9.92.15±0.090.39±0.062.90±0.359.0±3.70.03±0.010.05±0.0163.0±7.824.0±2.70.07±0.01585.7±240.9 141.8±11.82.04±0.100.31±0.022.66±0.36144.0±63.80.10±0.030.06±0.01590.2±105.3104.7±20.70.09±0.03443.6±179.4 6.4±5.61.66±0.210.15±0.031.17±0.347042.5±1314.13.00±0.602.02±0.631122.5±132.0182.1±33.40.06±0.011012.5±224.0 108.2±12.9*1.90±0.110.48±0.102.20±0.40645.3±177.4*0.13±0.01*0.08±0.02*630.6±103.4*151.4±27.90.10±0.03398.2±60.7* 146.1±8.1*1.91±0.120.40±0.07*2.80±0.50*61.0±8.6*0.08±0.01191.7±36.6*61.9±6.5* 162.3±8.9*1.89±0.100.31±0.05*2.92±0.37*15.0±5.6*1.17+0.41*215.6±52.2*53.9±7.1*
*显著差异，利用斯图顿特t-检验与没有LMW-DS的API环比较。
借助于类似于LMW-DS的管环模型(如上所述)研究了在用新鲜人血的60分钟API灌注以后，LMS-右旋糖酐对血细胞计数、凝血、以及补体参数的影响。LMW-D和LMW-DS对IBIMR症状的影响的比较见表4。LMS-右旋糖酐(其未硫化)对IBMIR仅具有边界效应。这些数据表明，硫化对于由API触发的右旋糖酐对IBMIR的抑制效应似乎是关键的。
                         表4
  LMW-DS(1mg/ml，n＝5)   LMW-D(1mg/ml，n＝5)
  血小板(×109/1)淋巴细胞(×109/1)单核细胞(×109/1)粒细胞(×109/1)TAT(μg/ml)FXIa-AT(μmol/l)C3a(ng/ml)sC5b-9(AU/ml)   181.1±16.3*1.94±0.120.38±0.103.23±0.21*12.8±4.9*1.56±0.82171.5±72.4*41.6±11.5*   44.9±18.72.14±0.320.29±0.081.90±0.434429.2±2002.51.09±0.081490.3±406.4157.3±19.1
*显著差异，利用威尔科克森符号秩检验与有LMW-D的API环比较。
在人血清中LMW-DS对补体***的直接影响
通过在聚丙烯管中温育人血清研究了LMW-DS对补体级联的直接影响。每个管中加入血清(1ml)以及LMW-DS，终浓度为0、0.01、0.1、或1mg/ml。在37℃下在血清温育5、10、15、30、45、以及60分钟以后，将100μl血清转移到含有10mM EDTA的管中。在分析补体成分C3a和sC5b-9之前，这些样品储存在-70℃。
图3说明在人血清中LMW-DS对补体***的C3a和sC5b-9的存在的影响。数值表示为在对照样品(没有LMW-DS)中C3a和sC5b-9的量的百分数。实条线表示产生的C3a而空条线对应于sC5b-9。在0.01mg/ml LMW-DS时，增加的补体活化反映在增加产生C3a和sC5b-9，但在1mg/ml时则看到抑制效应。虽然不能直接比较对全血和血清的影响，但在最低LMW-DS剂量下，LMW-DS很可能单独地诱导补体活化。在更高浓度下，抑制效应则占优势。
在糖尿病无胸腺小鼠中移植物的存活
利用Glucometer Elite血糖测量仪器(Bayer AB，Gothenburg，瑞典)测量了在获自受体尾部的血液中的血糖水平。测量是每日在12am之前进行并表示为mmol/l(1mmol≈18mg/dl)。如果血糖水平超过11.1mmol/l(＞200mg/dl)连续两天或更多天，则认为移植物功能已丧失。移植物后的血糖量正常(＜200mg/dl)持续时间被定义为移植物存活时间。
所有链脲霉素诱导的糖尿病无胸腺小鼠在移植前是严重高血糖症的，在不同组的受体中观测不到血糖水平差异。在所有门脉内移入API的糖尿病受体中在移植后，非空腹血糖水平立即下降。然而，未治疗小鼠保持血糖量正常仅有限的时间，见表5。在6只未治疗小鼠中有4只的血糖水平在移植后最初3天再次增加。相反，经LMW-DS治疗的小鼠的血糖量正常持续时间要显著长于未治疗小鼠(8.8±1.9天对3.5±1.2天，p＝0.045，表5)。研究表明，所有在本研究中使用的API可治愈糖尿病无胸腺小鼠，当相同的量被移植在肾被膜下腔的下面时(除去移植物支撑肾迅速导致提高的血糖水平)。
                             表5
  植入部位   治疗   n   个体移植物存活(天)   平均移植物存活(天)
肝   盐水LMW-DS   65   1，1，2，3，6，84，6，8，12，14   3.5±1.2*8.8±1.9*
  肾被膜下   -   5   ＞56(×5)   ＞56*
*在所有组中都是显著的。
免疫组织化学实验
在用血液以及存在LMW-DS(0.1mg/ml和1mg/ml)或不存在LMW-DS(对照)灌注60分钟以后在过滤器上收回胰岛和宏观凝块，然后收集在包埋介质(Tissue-Tek；Miles，Eckhart，IN，美国)中并急速冷冻在异戊烷中。对胰岛进行切片，其后用辣根过氧化物酶(HRP)结合小鼠抗人CD41a(R&D Systems，Abigdon，英国)和抗CD11b+(Clone 2LPM 19c，DAKO，Carpinteria，CA，美国)进行染色。在此体内研究中，在移植后10天提取含有API的小鼠肝并急速冷冻在异戊烷中。对样品进行切片并用豚鼠抗胰岛素(DAKA，Carpinteria，Ca，美国)和大鼠抗小鼠CD11b+(Serotec有限公司，Scandinavia，Oslo，挪威)进行染色。
在60分钟以后，始终如一地发现提取自未治疗对照环的胰岛包埋在凝块中。免疫组织化学染色显示在这些胰岛周围有纤维蛋白和血小板的囊状物。图4示出了CD11b+多形核细胞和单核细胞浸润对照胰岛。相反，当在温育期间加入1mg/ml LMW-DS时，则看到完全抑制凝块形成，并浸润CD11b+细胞的数目显著下降，其示于图5。在0.1mg/ml下也观察到类似效应。对照样品还呈现粘附于细胞的厚层血小板，如在图6中所示。在LMW-DS处理样品中观察到粘附于胰岛的更薄层血小板，其示于图7。在使用的所有染色中，未暴露于血液的对照胰岛是阴性的。
大多数提取自未治疗小鼠的胰岛被俘获在凝块中，如图8所示的。在图8中，箭头表示具有俘获猪胰岛的血栓形成。然而，仅几个来自经LMW-DS治疗的小鼠的胰岛被俘获，其示于图9。免疫组织化学染色显示，CD11b+(MAC-1+)白细胞浸润提取自未治疗小鼠的胰岛，如在图10所看到的。相反，在LMW-DS治疗的小鼠中存在显著更少的浸润CD11b+(MAC-1+)细胞，其示于图11。凝块形成的频率和白细胞浸润的强度在LMW-DS治疗受体中显著低于未治疗受体(p＝0.034)。图4至图9的放大倍数为200，而图10和图11的放大倍数为100。
本领域技术人员应当明了，可以对本发明作出各种改进和变化而不偏离本发明的范围，其由所附权利要求所限定。
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Claims (22)

1.糖酐酯、或其药用衍生物在制备用于治疗立即经血液介导的炎性反应(IBMIR)的药剂中的应用。
2.根据权利要求1所述的糖酐酯的应用，其特征在于，所述IBMIR是在细胞移植物植入异种受体以后由所述细胞移植物暴露于血液所引起。
3.糖酐酯、或其药用衍生物在制备用于治疗移植的细胞移植物的形态破坏的药剂中的应用。
4.根据权利要求3所述的糖酐酯的应用，其特征在于，所述细胞移植物的形态破坏是起因于立即经血液介导的炎性反应(IBMIR)。
5.糖酐酯、或其药用衍生物在制备用于治疗细胞移植物的移植排斥的药剂中的应用。
6.根据权利要求5所述的糖酐酯的应用，其特征在于，所述细胞移植物的移植排斥是起因于立即经血液介导的炎性反应(IBMIR)。
7.根据权利要求2至6中任一项所述的糖酐酯的应用，其特征在于，所述细胞移植物被植入人受体。
8.根据权利要求2至7中任一项所述的糖酐酯的应用，其特征在于，所述细胞移植物选自如下：
同种异体细胞移植物；或异种细胞移植物。
9.根据权利要求2至8中任一项所述的糖酐酯的应用，其特征在于，所述细胞移植物选自如下：
单个细胞；
细胞簇；或
非血管化的组织。
10.根据权利要求2至9中任一项所述的糖酐酯的应用，其特征在于，所述细胞移植物是朗格罕氏岛。
11.根据前述权利要求中任一项所述的糖酐酯的应用，其特征在于，所述糖酐酯的分子量小于20000Da，优选小于10000Da。
12.根据前述权利要求中任一项所述的糖酐酯的应用，其特征在于，所述糖酐酯的硫含量为10-25％，优选15-20％。
13.一种治疗立即经血液介导的炎性反应(IBMIR)的方法，其包括将有效治疗量的糖酐酯、或其药用衍生物给予需要这种治疗的患者。
14.根据权利要求13所述的方法，其特征在于，所述患者是人患者，而所述IBMIR是在细胞移植物植入所述患者的体内以后由所述细胞移植物暴露于异种血液所引起。
15.一种治疗细胞移植物的移植排斥的方法，其包括将有效治疗量的糖酐酯、或其药用衍生物给予需要这种治疗的患者。
16.根据权利要求15所述的方法，其特征在于，所述患者是人患者，而所述细胞移植物的移植排斥是起因于立即经血液介导的炎性反应(IBMIR)。
17.一种治疗移植的细胞移植物的形态破坏的方法，其包括将有效治疗量的糖酐酯、或其药用衍生物给予需要这种治疗的患者。
18.根据权利要求17所述的方法，其特征在于，所述患者是人患者，而所述细胞移植物的形态破坏是起因于立即经血液介导的炎性反应(IBMIR)。
19.根据权利要求13至18中任一项所述的方法，其特征在于，所述有效治疗量的糖酐酯导致在所述患者的血液中的糖酐酯浓度小于5mg/ml、优选0.01-1mg/ml、而更优选0.05-0.2mg/ml糖酐酯。
20.根据权利要求14、15或17所述的方法，其特征在于，所述糖酐酯是通过注射溶解于所述糖酐酯的所述细胞移植物来给予。
21.根据权利要求13至20中任一权项所述的方法，其特征在于，
所述糖酐酯的分子量小于20000Da，优选小于10000Da。
22.根据权利要求13至21中任一权项所述的方法，其特征在于，
所述糖酐酯的硫含量为10-25％，优选15-20％。
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