CN1710075A - 小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基基因的核酸序列及应用 - Google Patents
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- CN1710075A CN1710075A CN 200510043470 CN200510043470A CN1710075A CN 1710075 A CN1710075 A CN 1710075A CN 200510043470 CN200510043470 CN 200510043470 CN 200510043470 A CN200510043470 A CN 200510043470A CN 1710075 A CN1710075 A CN 1710075A
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Abstract
本发明公开了小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基基因的核酸序列和对应的氨基酸序列，以及基于该序列通过生物技术方法改良小麦加工品质的应用。本发明涉及的高分子量麦谷蛋白类似小麦13亚基基因是出现在优质小麦体细胞杂种种子的一种储藏蛋白亚基，该亚基与小麦的面筋弹性呈正相关。根据该基因序列设计特异简并PCR引物，可以通过基于PCR分子标记方法进行定向育种，培育出优质小麦。根据该基因序列克隆了该基因，构建了真核表达载体，可以通过基因枪转化、农杆菌介导、花粉管通道等方法将该基因导入小麦等作物，以培育出加工品质优良的小麦品质及种质。
Description
技术领域：
本发明属于生物基因工程技术领域，特别涉及一种小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基基因的核酸序列，及其基于该序列通过生物技术方法改良小麦加工品质的应用。
背景技术：
小麦高分子量麦谷蛋白(High Molecular Weight Glutenin)是小麦的一类重要的储藏蛋白。编码这类蛋白的基因座位(Glu-1)位于小麦第一同源染色体群(1A，1B，1D)的长臂上。每一位点由两个紧密连锁的基因组成，它们分别编码一个分子量相对较高的x型亚基和一个分子量相对较小的y型亚基。因此，理论上每种六倍体小麦应该包含6个不同的亚基，而实际上，绝大多数的普通小麦胚乳中只有3-5个高分子量麦谷蛋白亚基。这主要是由于一些编码麦谷蛋白的亚基基因发生了沉默。Glu-1的三个位点的亚基在小麦中存在着广泛的变异，其中Glu-B1位点变异程度最大，而Glu-A1位点变异程度最小。Glu-A1通常编码1、2*等亚基；Glu-B1通常编码7+8、7+9、17+18、14+15、13+16等亚基组合；Glu-D1通常编码2+12、5+10、5+12等亚基组合。高分子量麦谷蛋白亚基组成对小麦面包加工品质有非常重要的影响，不同亚基或亚基组合对面包加工品质的贡献大小不同。Payne品质评分标准已经在国际上通用，其中5+10亚基的评分最高，它们对面包加工品质的贡献最大已经得到公认。宋健民等(作物学报，2003年，第29卷，第6期，829-834页)测定了233份小麦面粉样品的高分子量麦谷蛋白亚基含量、Zeleny沉降值和谷蛋白大聚体(GMP)含量、并根据SDS-PAGE结果计算了其Payne亚基品质评分。结果表明，中国小麦HMW-GS对品质的影响与其他国家和地区有所差异，对Payne品质评分标准进行了调整，在所有的亚基组合中，13+16亚基的GS品质评分、沉降值评分均是最高。但从中国小麦的亚基组成看，评分相对较高的优质亚基5+10、13+16、14+15、17+18出现的频率明显较低，这可能也是中国小麦品质普遍较差的一个重要原因。公
开号为CN1428354A的中国专利申请，提供了小麦高分子量麦谷蛋白14亚基的基因序列，也说明选择具有这些优质亚基的新品种对于提高中国小麦的品质可能是非常有效的必须的。
发明内容：
本发明的目的是提供小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基基因的核酸序列及在小麦品质的改良、新品种和新种质的培育方面的应用。
本发明是通过以下方法实现的：
以实验室获得的优质稳定遗传的体细胞杂种小麦II-12为材料，通过PCR扩增到下列HMW-GS类13基因的完整编码序列，并将该基因克隆到一种克隆载体中，以质粒和转化的大肠杆菌两种形式保存起来；另外，用该基因已经构建了原核和真核表达载体，同样以质粒和转化的大肠杆菌两种形式保存起来。
本发明所述的小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基基因的核酸序列，其特征是该基因序列为：
1 atggctaagc ggttggtcct ctttgcggca gtagtcgtcg ccctcgaggc tctcaccgcc
61 gctgaaggtg aggcctctgg acaactacaa tgtgagcgcg agctcgaggc atgccaacag
121 gtggtggacc agcaacttcg agacgttagc cccgggtgcc gccccatcac cgtcagcccg
181 ggcacgagac aatacgagcg gcaacctgtg gtgccgtcca aggccggatc cttctacccc
241 agcaagacta cgccttcgca gcaactccaa caaatgatat tttggggaat acctgcacta
301 ctaagaaggt attacccaag tgtaacttct tcgcagcagg ggtcatacta tccaggccaa
361 gcttctccgc aacagttagg acaaggacag cagccaggac aaggacagca accaagacaa
421 gagcaacaag atcagcagcc aggacaaaga caacaaggat actacccaac ttctccgcaa
481 cagccaggac aagggcaacg actgggacaa gggcaaccag ggtactaccc aacttcacag
541 cagccaggac aaaagcagca ggcaggacaa gggcaacaat caggacaagg acaacaaggg
601 tactacccaa cttccccgca acagtcagga caagggcaac aaccgggaca agggcaagca
661 gggtactacc caacttctcc gcagcagtca ggacaatggc agcaaccagg acaagggcaa
721 cagccaggac aagggcagca atcaggacaa gggcaacaag gtcagcagcc aggacaaggg
781 caacgaccag gacaaggaca acaagggtac tacccaactt ctccgcaaca gccgggacaa
841 gggcaacaat caggacaagg gcaaccaggg tactgcccaa cttctttgcg gcagccagga
901 caatggcagc aaccaggaca agggcagcaa ccaggacaag ggcaacaagg tcagcagcca
961 ggacaaggac aacaaccagg acaaggacaa caaggatact acccaacttc tctgcaacag
1021 ccaggacaag ggcaacaacc gggacaaggg caaccagggt actacccaac ttcgcagcag
1081 tcggaacaag ggcagcagcc aggacaagga aagcaaccag gacaaggaca acaagggtac
1141 tacccaactt cttcacaaca gtcaggacaa gggcaacaac tgggacaagg gcaaccaggg
1201 tactacccaa cttctccaca gcagtcagga caaggacaac aatcaggaca aggacaacaa
1261 gggtactacc caacttctcc gcaacagtca ggacaagggc aacaaccggg acaagggcaa
1321 tcggggtact tcccaacttc tcggcagcag tcaggacaag ggcagcagcc aggacaagga
1381 caacagtcgg gacaagggca acaaggtcag caaccagggc agggacaaca agcgtactac
1441 ccaacttctt cgcaacagtc aggacaaagg caacaggcag gacaatggca acggccggga
1501 caagggcaat cagggtacta cccaacctct ccacagcagc cagggcaaga gcaacagtca
1561 ggacaagcgc aacaatcagg acaatggcaa ctagtgtact acccaacttc tccgcaacag
1621 ccaggccaat tgcaacaacc agcacaaggg caacaaccag cacaagggca acaatcagca
1681 caagagcaac agccagggca agcgcaacaa tcaggacaat ggcaactagt gtactaccca
1741 acttctccgc aacagccagg gcaattgcaa caaccagcac aagggcaaca agggtactac
1801 ccaacttctc cacaacagtc aggacaaggg caacaagggt actacccgac ttatccgcaa
1861 cagtcaggac aagggcaaca agggtactac ccaacttctc cgcaacagtc aggacaaggg
1921 cagcagccag gacaaggaca acagccaaga caagggcaac aagggtacta cccaatttct
1981 ccgcagcagt caggacaagg gcaacaacca ggacaagggc aacaaggata ctacccaact
2041 tctccgcagc agtcaggaca agggcaacaa ccaggacatg agcaacagcc aggacaatgg
2101 ctgcaaccag gacaagggca acaagggtac tatccaactt cttcacagca gtcaggacaa
2161 gggcagcaat caggacaagg gcaacaaggg tactacccaa cttctctgtg gcaaccagga
2221 caagggcaac aaccaggaca agggcaacaa ggctacgaca gcccatacca tgttagcgcg
2281 gagtaccagg cggcccgcct aaaggtggca aaggcgcagc agctcgcggc acagctgccg
2341 gcaatgtgcc ggctggaggg cagcgacgca ttgtcggcca gccagtgata g
蛋白质序列：
1 11 21 31 41 51
| | | | | |
1 MAKRLVLFAA VVVALEALTA AEGEASGQLQ CERELEACQQ VVDQQLRDVS PGCRPITVSP 60
61 GTRQYERQPV VPSKAGSFYP SKTTPSQQLQ QMIFWGIPAL LRRYYPSVTS SQQGSYYPGQ 120
121 ASPQQLGQGQ QPGQGQQPRQ EQQDQQPGQR QQGYYPTSPQ QPGQGQRLGQ GQPGYYPTSQ 180
181 QPGQKQQAGQ GQQSGQGQQG YYPTSPQQSG QGQQPGQGQA GYYPTSPQQS GQWQQPGQGQ 240
241 QPGQGQQSGQ GQQGQQPGQG QRPGQGQQGY YPTSPQQPGQ GQQSGQGQPG YCPTSLRQPG 300
301 QWQQPGQGQQ PGQGQQGQQP GQGQQPGQGQ QGYYPTSLQQ PGQGQQPGQG QPGYYPTSQQ 360
361 SEQGQQPGQG KQPGQGQQGY YPTSSQQSGQ GQQLGQGQPG YYPTSPQQSG QGQQSGQGQQ 420
421 GYYPTSPQQS GQGQQPGQGQ SGYFPTSRQQ SGQGQQPGQG QQSGQGQQGQ QPGQGQQAYY 480
481 PTSSQQSGQR QQAGQWQRPG QGQSGYYPTS PQQPGQEQQS GQAQQSGQWQ LVYYPTSPQQ 540
541 PGQLQQPAQG QQPAQGQQSA QEQQPGQAQQ SGQWQLVYYP TSPQQPGQLQ QPAQGQQGYY 600
601 PTSPQQSGQG QQGYYPTYPQ QSGQGQQGYY PTSPQQSGQG QQPGQGQQPR QGQQGYYPIS 660
661 PQQSGQGQQP GQGQQGYYPT SPQQSGQGQQ PGHEQQPGQW LQPGQGQQGY YPTSSQQSGQ 720
721 GQQSGQGQQG YYPTSLWQPG QGQQPGQGQQ GYDSPYHVSA EYQAARLKVA KAQQLAAQLP 780
781 AMCRLEGSDA LSASQ
本发明的小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基基因的核酸序列可以通过基因枪、农杆菌介导、花粉管通道等本领域工作人员所熟知的方法导入小麦，培育出加工品质优良的小麦新品种和小麦新种质；或改良现有小麦的品质；
小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基基因的核酸序列可以建立特异的小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基基因的分子标记体系，并通过该体系进行辅助育种，获得加工品质优良的小麦新品种或新种质；
根据该序列可以构建原核表达载体，通过本领域共知的研究方法将小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基基因导入大肠杆菌等原核生物，通过诱导大量表达出小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基，用于研究类似13亚基的结构、对面粉加工品质的贡献，及作为面粉改良剂。
用本发明的测序结果检索发现，小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基基因是不同于已经公布的所有小麦高分子量麦谷蛋白亚基基因的一种新的基因类型，该序列特征显示该序列的独特之处和导致优质的潜在因素。
具体实施方式：
下面给出发明的四个最佳实施例。
实施例一：小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基基因的克隆
按本发明的技术方案，选取含有类似13+16亚基的小麦品种，提取该小麦材料的总DNA，利用小麦高分子量麦谷蛋白亚基基因特异的简并PCR引物，参考下述的PCR条件扩增小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基基因。
根据已经公开的其他小麦高分子量麦谷蛋白亚基基因序列设计简并引物，序列如下：
P1：5’-ATGGCTAAGCGGC/TTA/GGTCCTCTTTG-3’
P2：(5’-CTATCACTGGCTA/GGCC GACAATGCG-3’基因的扩增：
CTAB法提取体细胞杂种小麦总DNA按照下述条件扩增目的基因：
反应体系：2×GC buffer I 25μl，10mM dNTP 3μl，100μM Primer 1和Primer 2各1.5μl，DNA Template 250ng，LA GC Taq 1μl，加水补足到50μl。反应程序为：95℃预变性3min，然后进行36个循环，每一个循环包括94℃变性40s和68℃复性及延伸4。最后保持在68℃下延伸10min。
将扩增产物电泳分离后回收2.4kb大小的条带，与pUCm-T载体进行连接，转化大肠杆菌DH10B感受态细胞，并通过PCR法、酶切质粒法等进行验证克隆产物是否正确。然后制备缺失亚克隆，进行测序和拼接。
序列结果如下：
1 atggctaagc ggttggtcct ctttgcggca gtagtcgtcg ccctcgaggc tctcaccgcc
61 gctgaaggtg aggcctctgg acaactacaa tgtgagcgcg agctcgaggc atgccaacag
121 gtggtggacc agcaacttcg agacgttagc cccgggtgcc gccccatcac cgtcagcccg
181 ggcacgagac aatacgagcg gcaacctgtg gtgccgtcca aggccggatc cttctacccc
241 agcaagacta cgccttcgca gcaactccaa caaatgatat tttggggaat acctgcacta
301 ctaagaaggt attacccaag tgtaacttct tcgcagcagg ggtcatacta tccaggccaa
361 gcttctccgc aacagttagg acaaggacag cagccaggac aaggacagca accaagacaa
421 gagcaacaag atcagcagcc aggacaaaga caacaaggat actacccaac ttctccgcaa
481 cagccaggac aagggcaacg actgggacaa gggcaaccag ggtactaccc aacttcacag
541 cagccaggac aaaagcagca ggcaggacaa gggcaacaat caggacaagg acaacaaggg
601 tactacccaa cttccccgca acagtcagga caagggcaac aaccgggaca agggcaagca
661 gggtactacc caacttctcc gcagcagtca ggacaatggc agcaaccagg acaagggcaa
721 cagccaggac aagggcagca atcaggacaa gggcaacaag gtcagcagcc aggacaaggg
781 caacgaccag gacaaggaca acaagggtac tacccaactt ctccgcaaca gccgggacaa
841 gggcaacaat caggacaagg gcaaccaggg tactgcccaa cttctttgcg gcagccagga
901 caatggcagc aaccaggaca agggcagcaa ccaggacaag ggcaacaagg tcagcagcca
961 ggacaaggac aacaaccagg acaaggacaa caaggatact acccaacttc tctgcaacag
1021 ccaggacaag ggcaacaacc gggacaaggg caaccagggt actacccaac ttcgcagcag
1081 tcggaacaag ggcagcagcc aggacaagga aagcaaccag gacaaggaca acaagggtac
1141 tacccaactt cttcacaaca gtcaggacaa gggcaacaac tgggacaagg gcaaccaggg
1201 tactacccaa cttctccaca gcagtcagga caaggacaac aatcaggaca aggacaacaa
1261 gggtactacc caacttctcc gcaacagtca ggacaagggc aacaaccggg acaagggcaa
1321 tcggggtact tcccaacttc tcggcagcag tcaggacaag ggcagcagcc aggacaagga
1381 caacagtcgg gacaagggca acaaggtcag caaccagggc agggacaaca agcgtactac
1441 ccaacttctt cgcaacagtc aggacaaagg caacaggcag gacaatggca acggccggga
1501 caagggcaat cagggtacta cccaacctct ccacagcagc cagggcaaga gcaacagtca
1561 ggacaagcgc aacaatcagg acaatggcaa ctagtgtact acccaacttc tccgcaacag
1621 ccaggccaat tgcaacaacc agcacaaggg caacaaccag cacaagggca acaatcagca
1681 caagagcaac agccagggca agcgcaacaa tcaggacaat ggcaactagt gtactaccca
1741 acttctccgc aacagccagg gcaattgcaa caaccagcac aagggcaaca agggtactac
1801 ccaacttctc cacaacagtc aggacaaggg caacaagggt actacccgac ttatccgcaa
1861 cagtcaggac aagggcaaca agggtactac ccaacttctc cgcaacagtc aggacaaggg
1921 cagcagccag gacaaggaca acagccaaga caagggcaac aagggtacta cccaatttct
1981 ccgcagcagt caggacaagg gcaacaacca ggacaagggc aacaaggata ctacccaact
2041 tctccgcagc agtcaggaca agggcaacaa ccaggacatg agcaacagcc aggacaatgg
2101 ctgcaaccag gacaagggca acaagggtac tatccaactt cttcacagca gtcaggacaa
2161 gggcagcaat caggacaagg gcaacaaggg tactacccaa cttctctgtg gcaaccagga
2221 caagggcaac aaccaggaca agggcaacaa ggctacgaca gcccatacca tgttagcgcg
2281 gagtaccagg cggcccgcct aaaggtggca aaggcgcagc agctcgcggc acagctgccg
2341 gcaatgtgcc ggctggaggg cagcgacgca ttgtcggcca gccagtgata g
蛋白质序列：
1 11 21 31 41 51
| | | | | |
1 MAKRLVLFAA VVVALEALTA AEGEASGQLQ CERELEACQQ VVDQQLRDVS PGCRPITVSP 60
61 GTRQYERQPV VPSKAGSFYP SKTTPSQQLQ QMIFWGIPAL LRRYYPSVTS SQQGSYYPGQ 120
121 ASPQQLGQGQ QPGQGQQPRQ EQQDQQPGQR QQGYYPTSPQ QPGQGQRLGQ GQPGYYPTSQ 180
181 QPGQKQQAGQ GQQSGQGQQG YYPTSPQQSG QGQQPGQGQA GYYPTSPQQS GQWQQPGQGQ 240
241 QPGQGQQSGQ GQQGQQPGQG QRPGQGQQGY YPTSPQQPGQ GQQSGQGQPG YCPTSLRQPG 300
301 QWQQPGQGQQ PGQGQQGQQP GQGQQPGQGQ QGYYPTSLQQ PGQGQQPGQG QPGYYPTSQQ 360
361 SEQGQQPGQG KQPGQGQQGY YPTSSQQSGQ GQQLGQGQPG YYPTSPQQSG QGQQSGQGQQ 420
421 GYYPTSPQQS GQGQQPGQGQ SGYFPTSRQQ SGQGQQPGQG QQSGQGQQGQ QPGQGQQAYY 480
481 PTSSQQSGQR QQAGQWQRPG QGQSGYYPTS PQQPGQEQQS GQAQQSGQWQ LVYYPTSPQQ 540
541 PGQLQQPAQG QQPAQGQQSA QEQQPGQAQQ SGQWQLVYYP TSPQQPGQLQ QPAQGQQGYY 600
601 PTSPQQSGQG QQGYYPTYPQ QSGQGQQGYY PTSPQQSGQG QQPGQGQQPR QGQQGYYPIS 660
661 PQQSGQGQQP GQGQQGYYPT SPQQSGQGQQ PGHEQQPGQW LQPGQGQQGY YPTSSQQSGQ 720
721 GQQSGQGQQG YYPTSLWQPG QGQQPGQGQQ GYDSPYHVSA EYQAARLKVA KAQQLAAQLP 780
781 AMCRLEGSDA LSASQ
实施例二：基于小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基基因序列的分子标记结合生化标记的辅助育种。
按本发明的技术方案，并根据小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基基因的序列设计特异的示踪小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基基因的PCR引物(上游引物：5’-ATGGCTAAGCGGTTGGTCCTC下游引物：5’-CTGTCCTTGTCCTAACTGTTG)PCR扩增在Biometra T1 Thermocycler PCR仪上进行。PCR反应体系为：20ul体系中加入10倍PCR Buffer 2ul，MgCl2终浓度为1.5mmol/l，dNTP浓度为0.2mmol/l，两引物各加150ng，Taq DNA聚合酶1U，模板DNA300ng。PCR反应条件为：94℃预变性5min；然后94℃变性1min，67℃复性1min，72℃延伸1min，循环24次；最后72℃延伸7min。
扩增产物在1.0％琼脂糖凝胶中100V电泳1小时左右，在(0.5ug/ml)溴化乙锭溶液中染色30分钟，在紫外凝胶成像仪中成像拍照。
结果显示，设计的引物为类13亚基基因的特异引物，在B基因组(济南177、4072、II-12、小堰6号、烟361、、中国春)上的其它亚基均没有扩增。
通过初步筛选，在体细胞杂种后代株系中初步筛选了2033、2064和2082的后代，得到了大量的阳性株系，结合生化标记发现全部都有类13亚基。参考上述的PCR条件，建立小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基的分子标记体系。最终，利用该标记体系进行定向的育种获得含有该亚基的优质小麦新种质和新品种。
实施例三：基于小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基基因序列原核表达及应用
按本发明的技术方案，并根据小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基基因的序列克隆类似小麦13亚基的基因。
选用的原核表达载体为pET-24a(+)(Novagen)
根据基因序列在信号肽的尾部和另外一端分别加上Nde I和EcoR I的酶切位点，引物如下：
Forward Primer 5’-ACC
CATATGGAAGGTGAGGCCTCTG-3’
(下划线处为Nde I的酶切位点)
Reverse Primer 5’-CTA
GAATTCCTATCACTGGCTGGCCGA-3’
(下划线处为EcoR I的酶切位点)
PCR反应体系程序
质粒DNA 2μl
LA GC Taq聚合酶 0.5μl
2XGC buffer 50μl
dNTPs(2.5mM each) 8μl
表达引物F/R(50μM)各 2μl
ddH2O 37.5μl
Total 100μ
回收经双酶切后与经同样双酶切的pET-24a原核表达载体连接，构建原核表达载体。转化大肠杆菌BL21(DE3)pLysS，经IPTG诱导，在原核细胞中表达得到了小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基。原核表达载体以质粒和在大肠杆菌中两种形式存放。
如果大量表达分离提取纯化后，可用于研究该亚基的结构、与面粉加工品质的关系、作为面粉天然改良剂。
实施例四：基于小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基基因序列的小麦品质改良
按本发明的技术方案，并根据小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基基因的序列克隆小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基。构建了小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基基因的真核表达载体，以质粒和在大肠杆菌中两种形式存放。然后通过电转化、基因枪转化、农杆菌介导、花粉管通道等本领域所熟知的方法转化至小麦、水稻等作物的基因组中，改良它们的加工品质。
Claims (2)
1.小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基基因的核酸序列，其特征是该基因序列为：
1 atggctaagc ggttggtcct ctttgcggca gtagtcgtcg ccctcgaggc tctcaccgcc
61 gctgaaggtg aggcctctgg acaactacaa tgtgagcgcg agctcgaggc atgccaacag
121 gtggtggacc agcaacttcg agacgttagc cccgggtgcc gccccatcac cgtcagcccg
181 ggcacgagac aatacgagcg gcaacctgtg gtgccgtcca aggccggatc cttctacccc
241 agcaagacta cgccttcgca gcaactccaa caaatgatat tttggggaat acctgcacta
301 ctaagaaggt attacccaag tgtaacttct tcgcagcagg ggtcatacta tccaggccaa
361 gcttctccgc aacagttagg acaaggacag cagccaggac aaggacagca accaagacaa
421 gagcaacaag atcagcagcc aggacaaaga caacaaggat actacccaac ttctccgcaa
481 cagccaggac aagggcaacg actgggacaa gggcaaccag ggtactaccc aacttcacag
541 cagccaggac aaaagcagca ggcaggacaa gggcaacaat caggacaagg acaacaaggg
601 tactacccaa cttccccgca acagtcagga caagggcaac aaccgggaca agggcaagca
661 gggtactacc caacttctcc gcagcagtca ggacaatggc agcaaccagg acaagggcaa
721 cagccaggac aagggcagca atcaggacaa gggcaacaag gtcagcagcc aggacaaggg
781 caacgaccag gacaaggaca acaagggtac tacccaactt ctccgcaaca gccgggacaa
841 gggcaacaat caggacaagg gcaaccaggg tactgcccaa cttctttgcg gcagccagga
901 caatggcagc aaccaggaca agggcagcaa ccaggacaag ggcaacaagg tcagcagcca
961 ggacaaggac aacaaccagg acaaggacaa caaggatact acccaacttc tctgcaacag
1021 ccaggacaag ggcaacaacc gggacaaggg caaccagggt actacccaac ttcgcagcag
1081 tcggaacaag ggcagcagcc aggacaagga aagcaaccag gacaaggaca acaagggtac
1141 tacccaactt cttcacaaca gtcaggacaa gggcaacaac tgggacaagg gcaaccaggg
1201 tactacccaa cttctccaca gcagtcagga caaggacaac aatcaggaca aggacaacaa
1261 gggtactacc caacttctcc gcaacagtca ggacaagggc aacaaccggg acaagggcaa
1321 tcggggtact tcccaacttc tcggcagcag tcaggacaag ggcagcagcc aggacaagga
1381 caacagtcgg gacaagggca acaaggtcag caaccagggc agggacaaca agcgtactac
1441 ccaacttctt cgcaacagtc aggacaaagg caacaggcag gacaatggca acggccggga
1501 caagggcaat cagggtacta cccaacctct ccacagcagc cagggcaaga gcaacagtca
1561 ggacaagcgc aacaatcagg acaatggcaa ctagtgtact acccaacttc tccgcaacag
1621 ccaggccaat tgcaacaacc agcacaaggg caacaaccag cacaagggca acaatcagca
1681 caagagcaac agccagggca agcgcaacaa tcaggacaat ggcaactagt gtactaccca
1741 acttctccgc aacagccagg gcaattgcaa caaccagcac aagggcaaca agggtactac
1801 ccaacttctc cacaacagtc aggacaaggg caacaagggt actacccgac ttatccgcaa
1861 cagtcaggac aagggcaaca agggtactac ccaacttctc cgcaacagtc aggacaaggg
1921 cagcagccag gacaaggaca acagccaaga caagggcaac aagggtacta cccaatttct
1981 ccgcagcagt caggacaagg gcaacaacca ggacaagggc aacaaggata ctacccaact
2041 tctccgcagc agtcaggaca agggcaacaa ccaggacatg agcaacagcc aggacaatgg
2101 ctgcaaccag gacaagggca acaagggtac tatccaactt cttcacagca gtcaggacaa
2161 gggcagcaat caggacaagg gcaacaaggg tactacccaa cttctctgtg gcaaccagga
2221 caagggcaac aaccaggaca agggcaacaa ggctacgaca gcccatacca tgttagcgcg
2281 gagtaccagg cggcccgcct aaaggtggca aaggcgcagc agctcgcggc acagctgccg
2341 gcaatgtgcc ggctggaggg cagcgacgca ttgtcggcca gccagtgata g
蛋白质序列为：
1 11 21 31 41 51
| | | | | |
1 MAKRLVLFAA VVVALEALTA AEGEASGQLQ CERELEACQQ VVDQQLRDVS PGCRPITVSP 60
61 GTRQYERQPV VPSKAGSFYP SKTTPSQQLQ QMIFWGIPAL LRRYYPSVTS SQQGSYYPGQ 120
121ASPQQLGQGQ QPGQGQQPRQ EQQDQQPGQR QQGYYPTSPQ QPGQGQRLGQ GQPGYYPTSQ 180
181QPGQKQQAGQ GQQSGQGQQG YYPTSPQQSG QGQQPGQGQA GYYPTSPQQS GQWQQPGQGQ 240
241QPGQGQQSGQ GQQGQQPGQG QRPGQGQQGY YPTSPQQPGQ GQQSGQGQPG YCPTSLRQPG 300
301QWQQPGQGQQ PGQGQQGQQP GQGQQPGQGQ QGYYPTSLQQ PGQGQQPGQG QPGYYPTSQQ 360
361SEQGQQPGQG KQPGQGQQGY YPTSSQQSGQ GQQLGQGQPG YYPTSPQQSG QGQQSGQGQQ 420
421GYYPTSPQQS GQGQQPGQGQ SGYFPTSRQQ SGQGQQPGQG QQSGQGQQGQ QPGQGQQAYY 480
481PTSSQQSGQR QQAGQWQRPG QGQSGYYPTS PQQPGQEQQS GQAQQSGQWQ LVYYPTSPQQ 540
541PGQLQQPAQG QQPAQGQQSA QEQQPGQAQQ SGQWQLVYYP TSPQQPGQLQ QPAQGQQGYY 600
601PTSPQQSGQG QQGYYPTYPQ QSGQGQQGYY PTSPQQSGQG QQPGQGQQPR QGQQGYYPIS 660
661PQQSGQGQQP GQGQQGYYPT SPQQSGQGQQ PGHEQQPGQW LQPGQGQQGY YPTSSQQSGQ 720
721GQQSGQGQQG YYPTSLWQPG QGQQPGQGQQ GYDSPYHVSA EYQAARLKVA KAQQLAAQLP 780
781AMCRLEGSDA LSASQ
2.根据权利要求1所述的小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基基因核酸序的应用，其特征是通过以下途径应用：
1)根据该序列构建真核表达载体，通过基因枪、农杆菌介导、花粉管通道本领域工作人员所熟知的方法将小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基基因导入小麦，一方面可以改良现有小麦品种的品质；另一方面可以培育出加工品质优良的小麦新品种或小麦新种质；
2)根据该基因序列建立特异的小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基基因的分子标记体系，并通过该体系进行定向育种，获得加工品质优良的小麦新品种或新种质；
3)根据该序列构建原核表达载体，通过本领域共知的研究方法将小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基基因导入大肠杆菌等原核生物及酵母等低等真核生物，通过诱导，大量表达出小麦体细胞杂种类似13谷蛋白亚基，用于研究类似13亚基的结构、对面粉加工品质的贡献，及作为面粉改良剂。
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Cited By (2)
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|---|---|---|---|---|
| CN102178690A (zh) * | 2011-01-14 | 2011-09-14 | 泰州市病毒研究所 | 一种抗流行性感冒病毒egs核酸药物的制备方法 |
| CN101463391B (zh) * | 2009-01-08 | 2012-08-22 | 中国科学院遗传与发育生物学研究所 | 一种对dna片段进行测序的方法 |
-
2005
- 2005-05-10 CN CN 200510043470 patent/CN1710075A/zh active Pending
Cited By (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101463391B (zh) * | 2009-01-08 | 2012-08-22 | 中国科学院遗传与发育生物学研究所 | 一种对dna片段进行测序的方法 |
| CN102178690A (zh) * | 2011-01-14 | 2011-09-14 | 泰州市病毒研究所 | 一种抗流行性感冒病毒egs核酸药物的制备方法 |
| CN102178690B (zh) * | 2011-01-14 | 2013-10-02 | 泰州市病毒研究所 | 一种抗流行性感冒病毒egs核酸药物的制备方法 |
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