CN1687008A

CN1687008A - 从忍冬属植物叶中提取酚酸化合物的方法

Info

Publication number: CN1687008A
Application number: CN 200510038498
Authority: CN
Inventors: 李萍; 黄雄; 毕志明; 李会军
Original assignee: China Pharmaceutical University
Current assignee: China Pharmaceutical University
Priority date: 2005-03-22
Filing date: 2005-03-22
Publication date: 2005-10-26
Anticipated expiration: 2025-03-22
Also published as: CN1300096C

Abstract

一种具有强抗氧化作用的绿原酸和异绿原酸类组合物的制备方法，用忍冬属植物的叶，如灰毡毛忍冬叶为原料，脱脂后用一定浓度乙醇提取；浓缩乙醇提取液，上大孔树脂柱，先用0～10％乙醇洗脱，得绿原酸及其异构体；再用20～35％乙醇洗脱，得异绿原酸及其异构体；将二者以不同比例混合，处理后可得总酚酸，含量达到80％；本发明合理利用资源，成本低，一次提取、同时分离得到绿原酸和异绿原酸及其异构体，并确定了组合物中各主要成分的相应含量比例。

Description

从忍冬属植物叶中提取酚酸化合物的方法

技术领域

本发明属于从忍冬属植物叶中提取酚酸化合物的方法，具体为从忍冬属植物叶中提取分离具有强抗自由基、抗氧化能力作用的绿原酸和异绿原酸的方法。

背景技术

金银花中的绿原酸和异绿原酸(DCQ或二咖啡酰基奎宁酸)及其衍生物均有抗病毒作用(King PJ，Ma G，Miao W，et al.Structure-activity relationships：analogues of thedicaffeoylquinic and dicaffeoyltartaric acids as potent inhibitors of humanimmunodeficiency virus type 1 intergerase and repiciation[J]J.Med Chem，1999，42(3)：497-509)，另外具有较强的抗自由基作用，Heilmann和Weiss等利用人中性白细胞以酵母多糖或FMLP刺激产生呼吸爆发，检测氧自由基的生成情况，结果发现DCQ有很强的捕获超氧阴离子和羟自由基的能力(Heilmann J，Merfort T，Weiss M.Radical scavenger activityof different 3，4-dihydroxyflavonols and 1，5-dicaffeyolquinic acid studied byInhibition of chemiluninescence[J].Planta Med，1995，61(5)：435-438；Fraga CG，Martino VS，Ferraro GE，et al.Flavonoids as antioxidants evaluated by in vitro andin situ liver chemiluninescence[J].Biochem Pharmacol，1987，36(5)：717-720.)。

从金银花中提取分离的绿原酸或总酚酸的研究文献很多。如：CN1439410A从金银花中提取抗菌、抗病毒活性部位的方法，通过水醇法，大孔吸附树脂柱洗脱，聚酰胺柱洗脱得到金银花活性部份。再如：CN1199728从金银花中提取绿原酸的工艺，将金银花加酸性乙醇浸泡，加热回流提取，药渣再加酸性乙醇回流提取。因为在酸性条件下绿原酸较稳定。

忍冬属植物有灰毡毛忍冬、红腺忍冬(L.hypoglauca)、山银花(L.confusa)、细毡毛忍冬(L.similes)、毛花柱忍冬(L.dasystyla)、金花忍冬(L.chrysantha)等。灰毡毛忍冬是忍冬属植物L.macranthoieds Hand.-Mazz.的干燥花蕾。忍冬属植物叶的资源更为丰富且价格低廉，忍冬属植物叶中虽然也含有绿原酸和异绿原酸，但由于含有大量油脂、鞣质、多糖、蛋白质、叶绿素等多种杂质，影响绿原酸和异绿原酸的提取分离。

发明内容

本发明要解决的技术问题是研究如何从资源合理利用角度出发，利用资源更为丰富且价格低廉的忍冬属植物的叶，提取分离绿原酸和异绿原酸的可工业化使用的方法。并研究经一次提取、同时分离得到绿原酸和异绿原酸的方法。该提取分离方法可使绿原酸和异绿原酸结构、药效保持稳定，提高含量与得率。

为解决上述问题，本发明提供技术方案如下。

一种绿原酸和异绿原酸的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

a)取忍冬属植物叶为原料，用低极性溶剂进行脱脂；

b)取步骤a)的脱脂后的叶，用乙醇提取，得乙醇提取液；

c)浓缩步骤b)的乙醇提取液，得浓缩液；

d)取步骤c)的浓缩液，上大孔树脂柱，先用0～10％乙醇洗脱，收集0～10％乙醇洗脱液；再用20～40％乙醇洗脱，收集20～40％乙醇洗脱液；

e)取步骤d)的0～10％乙醇洗脱液，浓缩后，先加入乙醇至含醇量为45～60％，除去沉淀，上清液浓缩，再加入乙醇至含醇量为75～85％，除去沉淀，取上清液浓缩，得绿原酸粗品；

f)取步骤d)的20～40％乙醇洗脱液，浓缩至无醇味后，用盐酸调pH至2～3，用乙酸乙酯萃取，浓缩乙酸乙酯萃取液，得异绿原酸粗品。

该制备方法的步骤a)中所用原料选自灰毡毛忍冬叶、红腺忍冬叶、山银花叶、细毡毛忍冬叶；低极性溶剂选自石油醚、汽油、苯，脱脂时间不少于2小时；步骤b)中用60～80％乙醇回流提取；步骤c)的浓缩液无醇味；步骤d)的大孔树脂选自D101、AB-8、HPD100、HPD300、D1或D2。

优选的方法中，步骤a)中所用原料选自灰毡毛忍冬叶、红腺忍冬叶；用石油醚脱脂是指用石油醚回流2～10小时后，滤除石油醚液；步骤b)中用70～75％乙醇回流提取。

上述制备方法中的步骤d)上大孔树脂柱，先用5～10％乙醇洗脱，收集5～10％乙醇洗脱液；再用30～35％乙醇洗脱，收集30～35％乙醇洗脱液。步骤e)的乙醇洗脱液浓缩后，先加入乙醇至含醇量50％，除去沉淀，上清液浓缩至相对密度1.06～1.18，再加入乙醇至含醇量为80％，除去沉淀，取上清液浓缩，得绿原酸粗品。

所述制备方法中，取步骤e)的绿原酸粗品，用0-10％乙醇溶解，除去乙醇后的水液，用浓盐酸调pH2～3后，用乙酸乙酯萃取，浓缩乙酸乙酯萃取液，得绿原酸。

前述制备方法中，取步骤e)的绿原酸粗品，与步骤f)的异绿原酸合并后，先用50～80％乙醇溶解，浓缩后，再用浓盐酸调pH至2～3后，用乙酸乙酯萃取，将萃取液用活性炭脱色，浓缩，得到总酚酸。

较优选的制备方法中，取步骤e)的绿原酸粗品，用0-10％乙醇溶解，除去乙醇后的水液，用浓盐酸调pH2～3后，用乙酸乙酯萃取，浓缩乙酸乙酯萃取液，得绿原酸，再与步骤f)的异绿原酸合并后，先用60～70％乙醇溶解，浓缩后，再用浓盐酸调pH至2～3后，用乙酸乙酯萃取，将萃取液用活性炭脱色，浓缩，得到总酚酸。

忍冬属植物叶例如灰毡毛忍冬叶，用乙醇提取后，浓缩，经D101大孔树脂及其它型号如AB-8、HPD100、HPD300、D1或D2，用水和10％乙醇洗脱，或者直接用10％乙醇洗脱。取水和10％乙醇洗脱部分或者直接用10％乙醇洗脱部分，浓缩至于近无醇味后，用50％和80％乙醇二次醇沉，得绿原酸粗品；用35％乙醇洗脱，收集35％乙醇洗脱液，浓缩至于近无醇味后，用浓盐酸调PH至2，乙酸乙酯萃取，将萃取液浓缩得异绿原酸粗品。绿原酸粗品和异绿原酸粗品可以分别纯化。亦可将这二部分合并浓缩后，再用浓盐酸调PH至2，乙酸乙酯萃取纯化及精制，可得总酚酸部位，含量达到80％以上。提取物中绿原酸异构体3-咖啡酰基奎宁酸∶5-咖啡酰基奎宁酸∶4-咖啡酰基奎宁酸之间的含量比约为4.92～6.23∶0.85～1.23∶1；异绿原酸异构体3，5-双咖啡酰基奎宁酸，3，4-双咖啡酰基奎宁酸和4，5-双咖啡酰基奎宁酸之间的含量比约为0.19～0.48∶1.6～2.5∶1。

本发明从资源合理利用角度出发，利用资源更为丰富的忍冬属植物的叶，如灰毡毛忍冬叶以及红腺忍冬、山银花、细毡毛忍冬的叶，尤其是灰毡毛忍冬叶，提取分离了绿原酸和异绿原酸。从经济效益来说，叶的原料价格远远低于花蕾的价格，本发明显著降低了生产成本。

而且，本发明是一次提取、同时分离得到绿原酸和异绿原酸，可用于一次性提取分离绿原酸和异绿原酸。本发明以绿原酸、异绿原酸为指标成份研究总酚酸的制备工艺，并可将绿原酸、异绿原酸作为中间体进行质量控制。

本发明采用大孔吸附树脂的优良分离效果进行富集，并结合醇沉和酸性条件处理对其纯化和精制，HPLC检测单体含量，分光光度法测定总酚酸含量，最后得到高纯度绿原酸制备物中单体绿原酸含量可达到70％以上；总酚酸制备物中单体绿原酸含量可达50％以上，总酚酸含量可达到80％以上。并从目标产物的含量和资源的合理利用角度出发，对提取药材进行了优选。该提取分离方法使绿原酸和异绿原酸的含量与得率显著提高，使绿原酸和异绿原酸保持稳定。该方法工艺操作简单，方便，成本低，无有害溶剂，生产安全性高，适合工业化生产。

附图说明

图1：A：水洗脱液的液相色谱图

图2：B：大孔树脂10％乙醇洗脱液的液相色谱图

图3：C：大孔树脂20％乙醇洗脱液的液相色谱图

图4：D：大孔树脂35％乙醇洗脱液的液相色谱图

图5：E：总酚酸部分的液相色谱图

上述图中各标识峰的含义：1-绿原酸(3-咖啡酰基奎宁酸)；2-绿原酸异构体；3-绿原酸异构体4.异绿原酸a；5-异绿原酸b，6异绿原酸c；7-阿魏酰奎宁酸类；8-阿魏酰奎宁酸类

具体实施方式

实施例一

1含量测定方法

仪器与试剂高效液相色谱仪Aglientl100系列，二元泵G1312A，自动进样器，二极管阵列检测器，Chemstation A.06.01化学工作站，色谱柱：Aglient Zorbax 80A，Extend-C18(4.6mm×250mm，5cm)，实验用水(广州乐百氏食品饮料有限公司)，乙腈为色谱纯，磷酸为分析纯。

色谱条件流动相：0.2％磷酸溶液-乙腈(88∶12)，维持0-12min，在12-15min流动相比例线性改变至(83∶17)，15-30min维持比例(83∶17)；在30-60min线性改变至(50∶50)。流速为1.0mL·min^-1，检测波长为327nm，柱温30℃。

2药材的选择

忍冬属植物中灰毡毛忍冬、红腺忍冬(L.hypoglauca)、山银花(L.confusa)、细毡毛忍冬(L.similes)、毛花柱忍冬(L.dasystyla)、金花忍冬(L.chrysantha)的叶均可用本发明方法提取分离酚酸化合物。其中最优选的忍冬植物的叶是灰毡毛忍冬的叶，因其中酚酸类化合物含量较高。结果见下表.

表1金银花不同种的绿原酸含量比较

序号样品绿原酸含量

1 忍冬花蕾 2.24％

2 红腺忍冬花蕾 2.93％

3 山银花花蕾 3.36％

4 灰毡毛忍冬花蕾 7.44％

5 灰毡毛忍冬叶 4.94％

6 灰毡毛忍冬茎 0.95％

从绿原酸的含量测定结果显示，灰毡毛忍冬花蕾中所含有的量明显比忍冬高，而对于灰毡毛忍冬不同部位而言，叶中所含有的量为4.94％，明显高于忍冬花蕾，其茎中含量低。

所以优选用重庆市秀山县的忍冬属植物灰毡毛忍冬L.macranthoieds Hand.-Mazz.的干燥叶，药材的性状特征，粉末特征，理化鉴别特征均符合中国植物志“灰毡毛忍冬”项下的内容。

3、分离纯化工艺

提取液适当浓缩后，大孔树脂分段，依次分别用水，10％醇，20％醇，35％醇，40％，50％醇洗脱，收集每部分洗脱液，定容至100ml容量瓶，高效液相检测分析结果显示绿原酸主要集中在水和10％醇(即0～10％乙醇)洗脱液中，而异绿原酸主要集中在10％以上的乙醇(不包括10％乙醇)洗脱液中，直至35％乙醇洗脱液已将异绿原酸大部分洗脱，至40％乙醇时洗脱完全。为工业化生产操作简便，可以优选直接用10％乙醇洗脱绿原酸，浓缩洗脱液后得绿原酸粗品；然后再直接用35％乙醇洗脱异绿原酸，浓缩洗脱液得异绿原酸粗品。

绿原酸的纯化：大孔树脂柱的10％乙醇洗脱液中富集了绿原酸，但同时也有较多的多糖、蛋白质等杂质。故进行醇沉实验，提高绿原酸纯度。采取二次醇沉法，将洗脱液浓缩后，第一次加乙醇使含醇量为45～60％进行醇沉，优选含醇量达50％的浓度进行醇沉，静置24小时，离心，取上清液，上清液浓缩后，第二次加乙醇至含醇量为75～85％进行醇沉，优选含醇量达80％的浓度进行醇沉，离心，取上清液，上清液浓缩。将浓缩液用浓盐酸调PH2～3，乙酸乙酯萃取3次即得。绿原酸含量可达到70％以上。

异绿原酸的纯化：大孔树脂柱的35％乙醇洗脱液浓缩后，用浓盐酸调PH至2，用2倍量的乙酸乙酯萃取3次，将萃取液合并，浓缩。母液再用正丁醇萃取，发现正丁醇萃取液中的酚酸化合物含量很低，说明乙酸乙酯萃取3次即可比较完全。乙酸乙酯萃取液浓缩后，用紫外分光光度法检测总含量可达到80％以上，得到的这部分提取物主要含异绿原酸，即为异绿原酸部分。

总酚酸的纯化：将异绿原酸部分和高纯度绿原酸部分合并，比例为按干品重量计1～5∶5～1；先用70％乙醇溶解，浓缩后再用浓盐酸调PH至2～3。在酸性条件下，用乙酸乙酯反复萃取3次，萃取液合并，用活性炭脱色，浓缩，即得到总酚酸部分。

表2灰毡毛忍冬叶不同处理过程中的总酚酸含量

样品	氯原酸量(g)	酚酸量(g)	浸膏量(g)	总酚酸含量
样品	氯原酸量(g)	酚酸量(g)	浸膏量(g)	总酚酸含量	水洗脱液10％醇洗脱液水+10％醇洗脱液第一次醇沉第二次醇沉35％醇洗脱液异绿原酸粗品总酚酸制备物	1.7000.32422.0241.9221.894//1.785	//3.0602.6652.1511.29751.2102.818	8.694.8042.6302.4741.4663.433	//35.26％55.49％81.74％52.45％82.53％82.09％

最后得到的总酚酸制备物中绿原酸异构体之间的含量比为峰1∶峰2∶峰3(5.91∶1.01∶1)；异绿原酸异构本之间的含量比为峰4∶峰5∶峰6(0.43∶2∶1)。绿原酸和异绿原酸的含量比为1.8∶1。

5本发明提取的酚酸化合物的抗氧化作用研究

5.1材料与方法

药物：按本发明方法制备的绿原酸部分(绿原酸含量达80％)，主要是绿原酸不同异构体的组合物；异绿原酸部分(3种二咖啡酰基奎宁酸的异构体的组合物)；总酚酸部分(总酚酸含量达到80％以上，单体绿原酸含量达50％)(浓度以浸膏量计算)；金银花醇提液，金银花水提液(浓度以生药量计算)。

试剂：焦性没食子酸(邻苯三酚，遵义第二化学厂，分析纯)，3-氨基邻苯二甲酰肼(鲁米诺，Luminol，Sigma公司)。

方法：清除自由基O₂ ^-能力检测，取待测样品各10μl于测量杯中(以甲醇作空白对照)，加入1mmol/L邻苯三酚溶液20μl，原位注入970μl鲁米诺(1mmol/L)-碳酸缓冲液(pH10.2)，反应总体积1ml，启动发光，延时10s，测定240s内发光强度。一般用发光抑制率为50％时的浓度IC₅₀来衡量样品对自由基的清除能力。IC₅₀值越小，表明样品清除自由基的能力越强，即抗氧化能力越强。

实验表明：从灰毡毛忍冬叶中提取分离绿原酸部分、异绿原酸部分和总酚酸部分均显示出很强的抗自由基能力，其IC50接近单体化合物。说明根据本发明方法得到的制备物其抗氧化能力大大高于灰毡毛忍冬叶的水提液或醇提液。醇提液的抗自由基能力明显强于水提液，因为醇提液中的酚酸类成分含量明显高于水提液，这跟液相检测结果相符合，说明酚酸是金银花中抗氧化作用的活性成分。醇提液的强度依次为灰毡毛花蕾＞灰毡毛忍冬叶＞忍冬花蕾，可能也是由于绿原酸之类的总酚酸含量差别而造成的(见表3)。

表3清除活性氧自由基能力的比较

样品 IC₅₀(ug/ml)

绿原酸(3-咖啡酰基奎宁酸) 5.17

咖啡酸 3.43

绿原酸丁酯 8.72

绿原酸的异构体(1-咖啡酰基奎宁酸) 5.90

绿原酸部分 14.59

异绿原酸部分 10.49

总酚酸部分 12.0

忍冬花蕾醇提物 172.1

忍冬花蕾水提物 206.17

灰毡毛忍冬花蕾醇提物 70.03

灰毡毛忍冬花蕾水提物 130.35

灰毡毛忍冬叶醇提液 106.8

灰毡毛忍冬叶水提液 151

实施例二

取灰毡毛忍冬叶药材20kg，粉碎成40目粉，石油醚80℃索氏法提取6小时进行脱脂后，药材重量8倍体积的60％乙醇，85℃热回流提取二次，每次1小时。提取液合并，减压回收溶剂。所得浓缩液经D101大孔树脂分段，先用水洗脱，再依次用10％、35％乙醇洗脱。将水和10％醇洗脱液合并，浓缩后，先加入乙醇至含醇量为50％，醇沉，除去沉淀物，滤液浓缩至(70℃)相对密度1.08，再加入乙醇至含醇量为80％，醇沉，离心取上清液，浓缩真空干燥即得绿原酸粗品1.30kg，纯度为70.3％。

另将35％醇洗脱部分，浓缩至无醇味后，用浓盐酸调PH至2，用2倍量的乙酸乙酯萃取3次，将萃取液合并，浓缩，所得浸膏经真空干燥，即得异绿原酸粗品0.72kg，纯度为81.23％。

将上述绿原酸粗品和异绿原酸粗品用70％乙醇溶解后，浓缩至无醇味，再用浓盐酸调PH至2，乙酸乙酯萃取，浓缩乙酸乙酯萃取液，可得总酚酸部位1.6kg，含量达到80％以上。

实施例三

取灰毡毛忍冬叶药材30kg，粉碎成40目粉，石油醚85℃索氏法提取5小时进行脱脂后，药材重量10倍体积的75％乙醇热回流提取二次，每次1小时。提取液减压回收溶剂，浓缩液经D101大孔树脂分离，直接用10％乙醇洗脱，收集10％乙醇洗脱液；再用40％乙醇洗脱，收集40％乙醇洗脱液。取10％乙醇洗脱液，浓缩后，先加入乙醇至含醇量为50％，醇沉，除去沉淀物，滤液浓缩至(70℃)相对密度约1.10，再加入乙醇至含醇量为80％，醇沉，离心取上清液，浓缩真空干燥即得绿原酸粗品1.9kg，纯度为72.5％。

另将40％乙醇洗脱部分，浓缩至无醇味后，用浓盐酸调PH至2，用3倍量的乙酸乙酯萃取3次，将萃取液合并，浓缩，所得浸膏经真空干燥，得异绿原酸粗品1.02kg，纯度为80.50％。

将上述绿原酸粗品和异绿原酸粗品用70％乙醇合并后，浓缩，再用浓盐酸调PH至3，乙酸乙酯萃取纯化，可得总酚酸部位2.25kg，含量达到80％以上。

实施例四

取山银花叶药材20kg，粉碎成40目粉，石油醚85℃索氏法提取6小时进行脱脂后，药材重量12倍体积的60％乙醇90℃热回流提取三次，每次1小时。提取液合并，减压回收溶剂。所得浓缩液经D101大孔树脂分段，依次用10％、35％乙醇洗脱。将10％乙醇洗脱液浓缩至(70℃)相对密度为1.13后，先加入乙醇至含醇量为60％，醇沉，除去沉淀物，滤液浓缩，再加入乙醇至含醇量为85％，醇沉，离心取上清液，浓缩真空干燥即得绿原酸粗品1.28kg，纯度为71.8％。

另将35％乙醇洗脱部分，浓缩至无醇味后，用浓盐酸调PH至3，用2倍量的乙酸乙酯萃取3次，将萃取液合并，浓缩，所得浸膏经真空干燥，即得异绿原酸粗品0.70kg，纯度为82.35％。

将上述绿原酸粗品和异绿原酸粗品用70％乙醇合并后，浓缩至无醇味，再用浓盐酸调PH至2，乙酸乙酯萃取纯化，可得总酚酸部位1.46kg，含量达到80％以上。

实施例五

取细毡毛忍冬叶药材20kg，粉碎成40目粉，用汽油脱脂6小时后，取药材重量8倍体积的70％乙醇90℃热回流提取二次，每次1小时。提取液合并，减压回收溶剂。所得浓缩液经AB-8大孔树脂分段，依次用5％、30％乙醇洗脱。将5％醇洗脱液浓缩后，先加入乙醇至含醇量为45％，醇沉，除去沉淀物，滤液浓缩至(70℃)相对密度为1.18，再加入乙醇至含醇量为75％，醇沉，离心取上清液，浓缩真空干燥即得绿原酸粗品1.28kg，纯度为70.9％。

另将30％醇洗脱部分，浓缩至无醇味后，用浓盐酸调PH至2，用2倍量的乙酸乙酯萃取3次，将萃取液合并，浓缩，所得浸膏经真空干燥，即得异绿原酸粗品0.74kg，纯度为81.65％。

将上述绿原酸粗品和异绿原酸粗品用50％乙醇合并后，浓缩，再用浓盐酸调PH至2，乙酸乙酯萃取纯化，可得总酚酸部位1.50kg，含量达到80％以上。

实施例六

取红腺忍冬叶药材25kg，粉碎成40目粉，石油醚85℃索氏法提取4小时进行脱脂后，药材重量12倍体积的80％乙醇回流提取二次，每次1小时。提取液合并，减压回收溶剂。所得浓缩液经HPD100大孔树脂分段，依次用10％、40％乙醇洗脱。将10％醇洗脱液浓缩后，先加入乙醇至含醇量为50％，醇沉，除去沉淀物，滤液浓缩至无醇味，再加入乙醇至含醇量为80％，醇沉，离心取上清液，浓缩真空干燥即得绿原酸粗品1.61kg，纯度为73.1％。

另将40％醇洗脱部分，浓缩至无醇味后，用浓盐酸调PH至2，用2倍量的乙酸乙酯萃取3次，将萃取液合并，浓缩，所得浸膏经真空干燥，即得异绿原酸粗品0.91kg，纯度为81.0％。

将上述绿原酸粗品和异绿原酸粗品用60％乙醇溶解后，浓缩至无醇味，再用浓盐酸调PH至2，乙酸乙酯萃取纯化，可得总酚酸部位1.8kg，含量达到80％以上。

Claims

1、一种绿原酸和异绿原酸的制备方法，其特征在于包括如下步骤：

a)取忍冬属植物叶为原料，用低极性溶剂进行脱脂；

b)取步骤a)的脱脂后的叶，用乙醇提取，得乙醇提取液；

c)浓缩步骤b)的乙醇提取液，得浓缩液；

2、权利要求1的制备方法，其特征在于步骤a)中所用原料选自灰毡毛忍冬叶、红腺忍冬叶、山银花叶、细毡毛忍冬叶；低极性溶剂选自石油醚、汽油、苯，脱脂时间不少于2小时；步骤b)中用60～80％乙醇回流提取；步骤c)的浓缩液无醇味；步骤d)的大孔树脂选自D101、AB-8、HPD100、HPD300、D1或D2。

3、权利要求2的制备方法，其特征在于步骤a)中所用原料选自灰毡毛忍冬叶、红腺忍冬叶；用石油醚脱脂是指用石油醚回流2～10小时后，滤除石油醚液；步骤b)中用70～75％乙醇回流提取。

4、权利要求1的制备方法，其特征在于步骤d)上大孔树脂柱，先用5～10％乙醇洗脱，收集5～10％乙醇洗脱液；再用30～35％乙醇洗脱，收集30～35％乙醇洗脱液。

5、权利要求1的制备方法，其特征在于步骤e)的乙醇洗脱液浓缩后，先加入乙醇至含醇量50％，除去沉淀，上清液浓缩至相对密度1.06～1.18，再加入乙醇至含醇量为80％，除去沉淀，取上清液浓缩，得绿原酸粗品。

6、权利要求1的制备方法，其特征在于取步骤e)的绿原酸粗品，用0-10％乙醇溶解，除去乙醇后的水液，用浓盐酸调pH2～3后，用乙酸乙酯萃取，浓缩乙酸乙酯萃取液，得绿原酸。

7、权利要求1的制备方法，其特征在于，取步骤e)的绿原酸粗品，与步骤f)的异绿原酸合并后，先用50～80％乙醇溶解，浓缩后，再用浓盐酸调pH至2～3后，用乙酸乙酯萃取，将萃取液用活性炭脱色，浓缩，得到总酚酸。

8、权利要求7的制备方法，其特征在于，取步骤e)的绿原酸粗品，用0-10％乙醇溶解，除去乙醇后的水液，用浓盐酸调pH2～3后，用乙酸乙酯萃取，浓缩乙酸乙酯萃取液，得绿原酸，再与步骤f)的异绿原酸合并后，先用60～70％乙醇溶解，浓缩后，再用浓盐酸调pH至2～3后，用乙酸乙酯萃取，将萃取液用活性炭脱色，浓缩，得到总酚酸。