CN1544614A - 一种生物拮抗菌及其应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种生物拮抗菌及其应用,其目的是提供一种可有效防治果蔬采后病害的生物拮抗菌。本发明所提供的生物拮抗菌,是罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii(Kuffer.)Skinner)BAY-3 CGMCC №1029。经实验证明,Cryptococcus laurentii BAY-3能有效地防治果蔬采后青霉病(Penicillium expansum Link),灰霉病(Botrytis cinerea Pers.:Fr.),黑霉(Alternaria alternata(Fr.:Fr.)Keissl)和褐腐病(Moniliniafructicola(G.Wint.)Honey)等主要果蔬采后病害。
Description
技术领域
本发明涉及微生物和生物防治领域中一种生物拮抗菌及其应用,特别是涉及一种生物拮抗菌及其在防治果蔬采后病害中的应用。
背景技术
果蔬采后由于腐烂而造成的损失非常巨大。目前,控制果蔬采后腐烂的一般方法是使用化学农药,然而,长期使用化学农药会导致病原菌产生抗药性而降低化学药剂的防病效果,同时,频繁和高浓度地使用化学药剂会造成农药在果蔬中的残留量增加而威胁人类的健康,并造成环境的污染。随着人们对身体健康及环境条件的日益关注,研究者不得不寻求更加安全有效的防治果蔬采后病害的新技术。
生物防治是近年来被证明很有成效的新途径,它主要是利用微生物之间的拮抗作用,选择对农产品不造成危害的微生物来抑制引起采后腐烂的病原真菌的生长。尤其是拮抗酵母菌,由于它不产生对人体有毒副作用的抗生素而成为近年来生物防治研究的热点。到目前为止,病理学家们已经在从苹果、柑橘、梨、桃、樱桃、猕猴桃等多种水果上筛选出几十种拮抗菌,它们对各采后果实的主要病害具有明显的抑病效果,有几种拮抗菌已经形成商品被人们所接受,例如美国的“Aspire”,“Biosave-100”和“Biosave-110”。
使用拮抗菌防治果蔬采后病害,可以减少化学农药的用量和在果蔬产品上的残毒,对保护人体健康和防止环境污染都极为重要。同时,也有利于我国优质果蔬产品的出口创汇,经济效益和社会效益十分显著。
发明创造内容
本发明的目的是提供一种可有效防治果蔬采后病害的生物拮抗菌。
本发明所提供的生物拮抗菌,是罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii(Kuffer.)Skinner)BAY-3 CGMCC №1029,该菌株分离自苹果果实表面,已于2003年11月12日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC),保藏号为CGMCC №1029。
罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii(Kuffer.)Skinner)BAY-3的菌落成乳白色,表面光滑,在常温下及常规培养基上生长良好。
本发明的第二个目的是提供一种果蔬生物杀菌剂。
本发明所提供的果蔬生物杀菌剂,它的活性成分为罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii(Kuffer.)Skinner)BAY-3 CGMCC №1029。菌体的使用浓度范围为1×106以上个细胞/ml菌液,在可能达到的细胞浓度条件下,随着使用浓度的增加,效果增强。
为达到更好的防病效果,所述果蔬生物杀菌剂还可以包括化学杀菌剂,如杀菌剂戴挫霉、杀菌剂stroby或CaCl2。
经实验证明,罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii(Kuffer.)Skinner)BAY-3 CGMCC №1029是一种安全、无毒、能有效地防治果蔬采后青霉病(Penicilliumexpansum Link),灰霉病(Botrytis cinerea Pers.:Fr.),黑霉(Alternariaalternata(Fr.:Fr.)Keissl)和褐腐病(Monilinia fructicola(G.Wint.)Honey)等主要果蔬采后病害的拮抗酵母菌。该菌对人畜无致病性(鉴定报告IMI number386832英国国际微生物研究所(CABI Bioscience Identification Services)),能安全地用于果蔬采后病害的生物防治。该菌可与常规的采后处理措施如使用化学杀菌剂、钙处理、冷藏和气调等处理方法结合使用,且效果更佳。
附图说明
图1为拮抗酵母菌C.laurentii BAY-3在室温下对甜樱桃果实青霉病、灰霉病、黑霉病和软腐病的防治效果柱状图
图2为拮抗酵母菌C.laurentii BAY-3在气调条件下对甜樱桃果实青霉病及黑霉病的防治效果柱状图
图3为室温下C.laurentii BAY-3单独使用或与杀菌剂配合使用对冬枣果实采后黑霉及褐腐病的抑制效果柱状图
图4为室温下C.laurentii BAY-3单独使用或与氯化钙配合使用对苹果果实采后青霉病的抑制效果柱状图
具体实施方式
实施例1、拮抗菌的分离及特性
1、拮抗菌的分离
拮抗酵母菌Cryptococcus laurentii BAY-3是从苹果果实表面分离得到。经英国国际微生物研究所(CABI Bioscience Identification Services)鉴定为罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii(Kuffer.)Skinner)BAY-3。
分离方法如下:将苹果果实放在0.05M的磷酸缓冲液中振荡5分钟后,再将果实放在磷酸缓冲液中,用超声波清洗液器洗果10分钟。洗液用稀释平板法在NYDA培养基上分离获得单菌落,4℃下保存。
2、Cryptococcus laurentii BAY-3的菌学特性
Cryptococcus laurentii BAY-3的菌落成乳白色,表面光滑,在常温普通培养基上生长良好。
实施例2、Cryptococcus laurentii BAY-3处理对甜樱桃果实采后主要病害的防治效果
本实施例以红灯甜樱桃果实(Prunus avivumL.)为试验材料。果实来源于山东。
拮抗菌:Cryptococcus laurentii BAY-3,使用浓度为1×106个细胞/ml菌液。
病原菌:青霉菌(Penicillium expansum Link),灰霉菌(Botrytis cinereaPers.:Fr.),黑霉(Alternaria alternata(Fr.:Fr.)Keissl)和软腐菌(Rhizopusstolonifer)Honey)。
甜樱桃果实刺伤后分别接种以下处理液:Cryptococcus laurentii BAY-3和CK(无菌水)。接种量为20μl。4h后,分别接种15μl浓度为1×104个孢子/ml孢子悬液的青霉、灰霉、黑霉和软腐四种病原菌孢子悬浮液。果实处理后贮藏于室温下,接种青霉和黑霉的果实同时贮藏于气调条件下,观察其发病率及病斑直径。
拮抗酵母菌Cryptococcus laurentii BAY-3在室温下和气调贮藏条件下对甜樱桃果实青霉病,灰霉病,黑霉病和软腐病的防治效果如图1和图2所示,表明C.laurentii BAY-3在常温下对甜樱桃果实采后青霉病(Penicillium expansum),灰霉病(Botrytis cinerea),黑霉(Alternaria alternata)和软腐病(Rhizopusstolonifer)等主要果实采后病害都有显著的抑制效果,在气调条件下对甜樱桃果实采后青霉和黑腐病害也有显著的抑制效果。
实施例3、Cryptococcus laurentii BAY-3处理对冬枣果实(Zizyphus jujubacv Dongzao)采后主要病害的防治效果
本实施例以冬枣果实(Zizyphus jujuba cv Dongzao)为试验材料。果实来源于山东。
拮抗菌:Cryptococcus laurentii BAY-3,使用浓度为1×106个细胞/ml菌液。
病原菌:褐腐菌(Monilinia fructicola(G.Wint.)Honey)和黑霉菌(Alternaria alternata(Fr.:Fr.)Keissl)。使用浓度均为1×104个孢子/ml孢子悬液。
冬枣果实刺伤后分别接种以下处理液:A、Cryptococcus laurentii BAY-3;B、Cryptococcus laurentii BAY-3+浓度为25ppm的杀菌剂戴挫霉;C、C.laurentiiBAY-3+浓度为50ppm的杀菌剂stroby;D、浓度为25ppm的杀菌剂戴挫霉;E、浓度为50ppm的杀菌剂stroby;CK、无菌水。各处理液接种量为25μl。4h后,分别接种20μl浓度为1×104个/ml的褐腐菌和黑霉菌的病菌孢子悬浮液。果实处理后贮藏于室温下,5天后观察其发病率及病斑直径。
结果如图3所示,表明单独使用C.laurentii BAY-3和两种杀菌剂在室温条件下能够有效抑制冬枣果实采后黑霉及褐腐病。两种杀菌剂都显著地提高了拮抗菌C.laurentii BAY-3的抑病效果。
实施例4、拮抗酵母菌C.laurentii BAY-3在常温下对苹果果实采后青霉病的防治效果
本实施例以苹果果实((Malus domestica Borkh.cv Golden Delicious))为试验材料。果实来源于北京林果所。
拮抗菌:Cryptococcus laurentii BAY-3,使用浓度为1×106个细胞/ml菌液。
病原菌:青霉菌(Penicillium expansum)。使用浓度均为1×104个孢子/ml孢子悬液。
苹果果实刺伤后分别接种以下处理液:CK,无菌水;Ca,2%氯化钙;Cryptococcus laurentii BAY-3+Ca,Cryptococcus laurentii BAY-3+2%氯化钙。各处理液接种量为30μl。4h后,分别接种20μl浓度为1×104个/ml的青霉病菌孢子悬浮液。果实处理后贮藏于室温下,7天后观察其发病率。
结果如图4所示,单独使用C.laurentii BAY-3和2%氯化钙在室温条件下能够抑制冬枣果实采后青霉病。氯化钙显著地提高了拮抗菌C.laurentii BAY-3的抑病效果。
Claims (6)
1、罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii(Kuffer.)Skinner)BAY-3 CGMCC№1029。
2、罗伦隐球酵母(Cryptococcus laurentii(Kuffer.)Skinner)BAY-3 CGMCC№1029在防治果蔬采后病害中的应用。
3、根据权利要求2所述的应用,其特征在于:所述果蔬采后病害为青霉病(Penicillium expansum Link),灰霉病(Botrytis cinerea Pers.:Fr.),黑霉(Alternaria alternata(Fr.:Fr.)Keissl)和褐腐病(Monilinia fructicola(G.Wint.)Honey)。
4、一种果蔬生物杀菌剂,它的活性成分为罗伦隐球酵母BAY-3 CGMCC №1029。
5、根据权利要求4所述的果蔬生物杀菌剂,其特征在于:所述果蔬生物杀菌剂还包括化学杀菌剂和/或CaCl2。
6、根据权利要求4或5所述的果蔬生物杀菌剂,其特征在于:所述化学杀菌剂为杀菌剂戴挫霉或杀菌剂stroby。
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