CN1535976A - 一种从淫羊藿属植物中提取淫羊藿甙的方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种从淫羊藿属植物中提取淫羊藿甙的方法。该方法的技术关键在于在常压条件下利用层析技术，将淫羊藿属植物中浸提的淫羊藿甙粗品进行分离和提纯，最后进行重结晶获得淫羊藿甙纯品。本发明提供的方法可以高效分离提纯淫羊藿甙，从而获得高纯度和高回收率的淫羊藿甙纯品；使用低毒的有机溶剂，避免了产品中有毒有害的有机溶剂残留；并且其生产工艺简捷可行，耗时较短，且所用资源可再生利用，大大降低了生产成本。

Description

一种从淫羊藿属植物中提取淫羊藿甙的方法

技术领域

本发明涉及一种从淫羊藿植物中提取淫羊藿甙的方法。

背景技术

淫羊藿是小檗科(Berberidaceae)淫羊藿属(Epimedium)植物的地上部分，由于淫羊藿属植物在我国有20多种，占全球资源的一半以上，并且其中的许多成分可以药用，所以近年来国内、外为综合利用淫羊藿属植物的药用价值进行了广泛的研究。截至目前，已从该属植物中分离出20多种单体化合物，其从结构上大致可分为四种类型，即：黄酮甙类、木脂素类、生物碱类和其它类。淫羊藿甙是由生药中分离出来的一种8-异戊烯基黄酮醇甙类化合物，其分子式为C₃₃H₄₀O₁₅，黄色针状结晶，分子量676.67，熔点225-230℃。药理研究表明，淫羊藿甙的生理活性主要表现在改善心脑血管***功能、增强机体免疫力、促进DNA合成以及预防和治疗性功能障碍等方面。其次，淫羊藿甙还具有抗衰老和抗肿瘤作用。

通常，都是采用从淫羊藿属植物中提取淫羊藿甙。徐绥绪在其专利CN1283627中公开了从淫羊藿中提取淫羊藿甙的方法，包括采用加水浸泡、煎煮后滤渣取液，将提取液浓缩后经大孔树脂吸附，乙醇洗脱，用活性炭脱色等步骤。此法由于多步操作造成回收率低，成本高，而且不能得到高纯度的淫羊藿甙。彭树林在其专利CN1294132中公开了一种淫羊藿总黄酮的提取工艺，利用吸附-洗脱原理，先将淫羊藿甙从其水浸提液中吸附到大孔树脂上，再用乙醇将其洗脱，得到含量大于50％的淫羊藿甙粗品。由于此法采用的是传统的吸附工艺，分辨率难以保证，所以得到的产物纯度低，不便于进一步使用。综上所述，在现有的提取方法中主要存在的问题是：1、其技术关键是使用的传统的吸附-解吸工艺，产品纯度低；2、提纯步骤多，目的组分的中间损失大，回收率低；3、有些方法由于使用了氯仿等有毒有害的有机溶剂，造成其在产品中残留。

发明内容

本发明的目的在于克服现有工艺方法中存在的产品纯度及回收率低、产品中残留有害物质的缺陷，从而提供一种利用层析技术，使用低毒的有机溶剂，高效分离提纯淫羊藿甙的方法，以获得高纯度和高回收率的淫羊藿甙纯品。

本发明的目的是通过以下的技术方案实现的：

本发明提供一种从淫羊藿属植物中提取淫羊藿甙的方法，其工艺步骤如下：

1)从淫羊藿属植物中浸提淫羊藿甙：将原料叶子粉碎后，用其重量15～20倍量的有机溶剂的水溶液(I)回流提取；然后过滤，用有机溶剂的水溶液(I)洗涤滤渣数次；合并滤液及洗涤液，减压浓缩，得到淫羊藿甙粗品；所述有机溶剂的水溶液(I)中有机溶剂的含量为50～100v％；所述的有机溶剂包括甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、丙酮、乙酸甲酯、乙酸乙酯；

2)初分离淫羊藿甙：将非离子型的极性或弱极性大孔网状吸附树脂置于乙醇中浸泡过夜，然后用乙醇、去离子水依次淋洗，以使得树脂活化；将此活化后的树脂用重力沉降法装柱；用有机溶剂的水溶液(II)作为流动相，平衡层析柱，将步骤1)得到的淫羊藿甙粗品用有机溶剂的水溶液(II)溶解后上样；用有机溶剂的水溶液(III)洗脱；使用紫外监测洗脱过程，在270nm检测，收集第二个洗脱峰；减压浓缩所收集的洗脱液，得到淫羊藿甙初分离产物；所述有机溶剂的水溶液(II)中有机溶剂的含量为5～25v％；所述有机溶剂的水溶液(III)中有机溶剂的含量为45～70v％；所述有机溶剂包括甲醇、乙醇、异丙醇和丙酮；

3)提纯淫羊藿甙初分离产物：将以硅胶为基质的反相介质或以聚合物为基质的反相介质用重力沉降法装柱；用有机溶剂的水溶液(IV)作为流动相，平衡层析柱，将步骤2)得到的淫羊藿甙初分离产物用有机溶剂的水溶液(IV)溶解后上样；用有机溶剂的水溶液(V)作为洗脱液，梯度洗脱；使用紫外监测洗脱过程，在270nm检测，收集第三个洗脱峰；减压浓缩所收集的洗脱液，得到淫羊藿甙再分离产物；所述有机溶剂的水溶液(IV)中有机溶剂的含量为35～55v％；所述有机溶剂的水溶液(V)中有机溶剂的含量为40～80v％；所述有机溶剂包括甲醇、乙醇和异丙醇；

4)重结晶：用35～45v％的甲醇或乙醇将步骤3)得到的淫羊藿甙再分离产物进行重结晶，得到淫羊藿甙纯品。

所述步骤1)的淫羊藿属植物包括大叶淫羊藿、心叶淫羊藿、箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿、朝鲜淫羊藿、大花淫羊藿以及巫山淫羊藿。

所述步骤1)中的回流提取的次数为1～4次；所述的回流提取的时间为0.5～2小时。

所述步骤2)中的树脂包括聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸酯、丙烯酰胺与苯乙烯的共聚物，或甲基丙烯酸酯与苯乙烯的共聚物。

所述步骤3)中的以硅胶为基质的反相介质为市售的C₈和C₁₈反相介质；所述步骤3)中的以聚合物为基质的反相介质包括以聚苯乙烯、聚丙烯酸酯、苯乙烯-二乙烯基苯共聚物、烷基改性的聚苯乙烯醇为基质的反相介质。

本发明提供的从淫羊藿属植物中提取淫羊藿甙的方法不同于传统的吸附工艺，其利用层析技术，从而具有以下的优点：

a)产品可以达到很高的纯度和回收率；

b)避免了产品中有毒有害的有机溶剂残留；

c)生产工艺简捷可行，耗时较短，且所用资源可再生利用，大大降低了生产成本。

附图说明

图1为使用本发明提供的提取方法在步骤1)得到的淫羊藿甙粗品的HPLC图谱；其中峰1对应于淫羊藿甙；

图2为使用本发明提供的提取方法在步骤3)得到的淫羊藿甙再分离产物的HPLC图谱；其中峰2对应于淫羊藿甙。

具体实施方式

实施例1、以含淫羊藿甙0.56％的大叶淫羊藿草的地上部分为原料，分离提纯制备含淫羊藿甙97％的淫羊藿甙纯品

1)将20g含淫羊藿甙0.56％的大叶淫羊藿草原料叶子粉碎后，放入1000ml蒸馏瓶中，加入300ml 50v％乙醇水溶液，回流1小时；倾出上层清液后，向残余物再加入300ml 50v％乙醇水溶液，再回流1小时；过滤，用同样的乙醇水溶液洗涤滤渣数次；合并滤液及洗涤液，减压浓缩，得到淫羊藿甙粗品4.03g，经HPLC测定其中的淫羊藿甙含量为2.78wt％，回收率为100％；

2)将NKA-9树脂(南开大学化工厂生产，组分为聚苯乙烯)置于乙醇中浸泡过夜，然后用乙醇、去离子水依次淋洗，以使得树脂活化；将此活化后的树脂用重力沉降法装入15×200mm的层析柱；用25v％乙醇水溶液平衡此层析柱；将步骤1)得到的淫羊藿甙粗品4.0g用15ml 25v％乙醇充分溶解后上样，用25v％乙醇水溶液充分淋洗后，用65v％乙醇水溶液洗脱；UV270nm检测，收集第二个洗脱峰；减压浓缩所收洗脱液，得到淫羊藿甙初分离产物363.3mg，经HPLC测定其中淫羊藿甙含量为30wt％，回收率为98％；

3)将Polyspher PST 10(MERCK公司生产，组分为苯乙烯-二乙烯基苯共聚物)反相介质以重力沉降法装入16×100mm的层析柱，用45v％乙醇水溶液平衡此层析柱；将步骤2)得到的淫羊藿甙初分离产物360mg用8ml 45％乙醇水溶液充分溶解后上样，用50～80v％乙醇水溶液梯度洗脱；UV270nm检测，收集第三个洗脱峰；减压浓缩所收洗脱液，得到淫羊藿甙再分离产物122.7mg，经HPLC测定其中淫羊藿甙含量为88wt％，回收率为100％；

4)用40v％的甲醇水溶液将步骤3)得到的122.7mg淫羊藿甙再分离产物进行重结晶，得到淫羊藿甙纯品100.2mg，纯度为97％，回收率为90％。

实施例2、以含淫羊藿甙0.44％的心叶淫羊藿草的地上部分为原料，分离提纯制备含淫羊藿甙97.5％的淫羊藿甙纯品

1)将10g含淫羊藿甙0.44％的心叶淫羊藿草原料叶子粉碎后，放入500ml蒸馏瓶中，如实施例1中同样方法，用乙酸乙酯回流提取，每次使用乙酸乙酯200ml，回流1.5小时，共回流提取3次；过滤，用乙酸乙酯洗涤滤渣数次；合并滤液及洗涤液，减压浓缩，得到淫羊藿甙粗品1.7g，经HPLC测定其中的淫羊藿甙含量为2.63wt％，回收率为100％；

2)将X-5树脂(南开大学化工厂生产，组分为丙烯酰胺与苯乙烯的共聚物)置于乙醇中浸泡过夜，然后用乙醇、去离子水依次淋洗，以使得树脂活化；将此活化后的树脂用重力沉降法装入15×200mm的层析柱；用20v％乙醇水溶液平衡此层析柱；将步骤1)得到的淫羊藿甙粗品1.5g用10ml 20v％乙醇充分溶解后上样，用20v％乙醇水溶液充分淋洗后，用60v％乙醇水溶液洗脱；UV270nm检测，收集第二个洗脱峰；减压浓缩所收洗脱液，得到淫羊藿甙初分离产物121.4mg，经HPLC测定其中淫羊藿甙含量为32wt％，回收率为98.5％；

3)将C₁₈反相介质以重力沉降法装入16×100mm的层析柱，用35v％甲醇水溶液平衡此层析柱；将步骤2)得到的淫羊藿甙初分离产物120mg用5ml 35％甲醇水溶液充分溶解后上样，用35v％甲醇水溶液充分淋洗后，用40～80v％甲醇水溶液梯度洗脱；UV270nm检测，收集第三个洗脱峰；减压浓缩所收洗脱液，得到淫羊藿甙再分离产物39.0mg，经HPLC测定其中淫羊藿甙含量为88.5wt％，回收率为98％；

4)用45v％的甲醇水溶液将步骤3)得到的42.5mg淫羊藿甙再分离产物进行重结晶，得到淫羊藿甙纯品35.5mg，纯度为97.5％，回收率为92％。

实施例3、以含淫羊藿甙0.52％的箭叶淫羊藿草的地上部分为原料，分离提纯制备含淫羊藿甙98％的淫羊藿甙纯品

1)将30g含淫羊藿甙0.52％的箭叶淫羊藿草原料叶子粉碎后，放入1000ml蒸馏瓶中，加入350ml 60v％的甲醇水溶液，回流2小时，过滤，用同样的甲醇水溶液洗涤滤渣数次；合并滤液及洗涤液，减压浓缩，得到淫羊藿甙粗品5.74g，经HPLC测定其中的淫羊藿甙含量为2.72wt％，回收率为100％；

2)将XAD-4(Rohm & Hass公司生产，组分为甲基丙烯酸酯与苯乙烯的共聚物)置于乙醇中浸泡过夜，然后用乙醇、去离子水依次淋洗，以使得树脂活化；将此活化后的树脂用重力沉降法装入15×200mm的层析柱；用25v％异丙醇水溶液平衡此层析柱；将步骤1)得到的淫羊藿甙粗品5.0g用20ml 25v％异丙醇水溶液充分溶解后上样，用25v％异丙醇水溶液充分淋洗后，用45v％异丙醇水溶液洗脱；UV270nm检测，收集第二个洗脱峰；减压浓缩所收洗脱液，得到淫羊藿甙初分离产物444.3mg，经HPLC测定其中淫羊藿甙含量为31wt％，回收率为98.5％；

3)将Oligo R3(PE Biosystems公司生产，组分为烷基改性的聚苯乙烯醇)反相介质以重力沉降法装入16×100mm的层析柱，用40v％甲醇水溶液平衡此层析柱；将步骤2)得到的淫羊藿甙初分离产物400mg用15ml 40％甲醇水溶液充分溶解后上样，用40v％甲醇水溶液充分淋洗后，用45～70v％甲醇水溶液梯度洗脱；UV270nm检测，收集第三个洗脱峰；减压浓缩所收洗脱液，得到淫羊藿甙再分离产物134.7mg，经HPLC测定其中淫羊藿甙含量为92wt％，回收率为100％；

4)用40v％的乙醇水溶液将步骤3)得到的134.7mg淫羊藿甙再分离产物进行重结晶，得到淫羊藿甙纯品113.2mg，纯度为98.5％，回收率为90％。

实施例4、以含淫羊藿甙0.44％的柔毛淫羊藿草的地上部分为原料，分离提纯制备含淫羊藿甙97％的淫羊藿甙纯品

1)将20g含淫羊藿甙0.44％的柔毛淫羊藿草原料叶子粉碎后，放入500ml蒸馏瓶中，如实施例1中同样方法，用乙酸甲酯回流提取，每次使用乙酸甲酯200ml，回流0.5小时，共回流提取4次；过滤，用乙酸甲酯洗涤滤渣数次；合并滤液及洗涤液，减压浓缩，得到淫羊藿甙粗品3.52g，经HPLC测定其中的淫羊藿甙含量为2.50wt％，回收率为100％；

2)将XAD-10(Rohm & Hass公司生产，组分为聚丙烯酰胺)置于乙醇中浸泡过夜，然后用乙醇、去离子水依次淋洗，以使得树脂活化；将此活化后的树脂用重力沉降法装入15×200mm的层析柱；用5v％甲醇水溶液平衡此层析柱；将步骤1)得到的淫羊藿甙粗品2.4g用25ml 5v％甲醇充分溶解后上样，用5v％甲醇水溶液充分淋洗后，用35v％甲醇水溶液洗脱；UV270nm检测，收集第二个洗脱峰；减压浓缩所收洗脱液，得到淫羊藿甙初分离产物181.8mg，经HPLC测定其中淫羊藿甙含量为32wt％，回收率为97％；

3)将C₈反相介质以重力沉降法装入16×100mm的层析柱，用35v％甲醇水溶液平衡此层析柱；将步骤2)得到的淫羊藿甙初分离产物180.0mg用8ml 35％甲醇水溶液充分溶解后上样，用40～70v％甲醇水溶液梯度洗脱；UV270nm检测，收集第三个洗脱峰；减压浓缩洗脱液，得到淫羊藿甙再分离产物61.9mg，经HPLC测定其中淫羊藿甙含量为89wt％，回收率为95.6％；

4)用35v％的乙醇水溶液将步骤3)得到的61.9mg淫羊藿甙再分离产物进行重结晶，得到淫羊藿甙纯品52.5mg，纯度为97.5％，回收率为92.9％。

实施例5、以含淫羊藿甙0.48％的朝鲜淫羊藿草的地上部分为原料，分离提纯制备含淫羊藿甙98.5％的淫羊藿甙纯品

1)将30g含淫羊藿甙0.48％的朝鲜淫羊藿草原料叶子粉碎后，放入1000ml蒸馏瓶中，加入300ml 20v％正丁醇水溶液，回流2小时，过滤，用同样的正丁醇水溶液洗涤滤渣数次；合并滤液及洗涤液，减压浓缩，得到淫羊藿甙粗品5.41g，经HPLC测定其中的淫羊藿甙含量为2.62wt％，回收率为98.5％；

2)将XAD-7(Rohm & Hass公司生产，组分为聚甲基丙烯酸酯)置于乙醇中浸泡过夜，然后用乙醇、去离子水依次淋洗，以使得树脂活化；将此活化后的树脂用重力沉降法装入15×200mm的层析柱；用25v％丙酮水溶液平衡此层析柱；将步骤1)得到的淫羊藿甙粗品5.4g用20ml 25v％丙酮水溶液充分溶解后上样，用25v％丙酮水溶液充分淋洗后，50v％丙酮水溶液洗脱；UV270nm检测，收集第二个洗脱峰；减压浓缩所收洗脱液，得到淫羊藿甙初分离产物443.2mg，经HPLC测定其中淫羊藿甙含量为31wt％，回收率为97.1％；

3)将POROSR₂(PE Biosystems公司生产，组分为聚苯乙烯)反相介质以重力沉降法装入16×100mm的层析柱，用40v％乙醇水溶液平衡此层析柱；将步骤2)得到的淫羊藿甙初分离产物440mg用8ml 40％乙醇水溶液充分溶解后上样，用40v％乙醇水溶液充分淋洗后，用45～80v％乙醇水溶液梯度洗脱；UV270nm检测，收集第三个洗脱峰；减压浓缩所收洗脱液，得到淫羊藿甙再分离产物146.7mg，经HPLC测定其中淫羊藿甙含量为93wt％，回收率为100％；

4)用40v％的乙醇水溶液将步骤3)得到的146.7mg淫羊藿甙再分离产物进行重结晶，得到淫羊藿甙纯品124.6mg，纯度为98.5％，回收率为90％。

实施例6、以含淫羊藿甙0.47％的大花淫羊藿草的地上部分为原料，分离提纯制备含淫羊藿甙97.5％的淫羊藿甙纯品

1)10g含淫羊藿甙0.47％的大花淫羊藿草原料叶子粉碎后，放入500ml蒸馏瓶中，如实施例1中同样方法，用150ml 50％的丙酮水溶液回流提取，回流1小时，共回流提取2次；过滤，用同样浓度的丙酮水溶液洗涤滤渣数次；合并滤液及洗涤液，减压浓缩，得到淫羊藿甙粗品1.8g，经HPLC测定其中的淫羊藿甙含量为2.58wt％，回收率为99％；

2)将HP-30(日本三菱公司生产，组分为聚苯乙烯)置于乙醇中浸泡过夜，然后用乙醇、去离子水依次淋洗，以使得树脂活化；将此活化后的树脂用重力沉降法装入15×200mm的层析柱；用20v％异丙醇水溶液平衡此层析柱；将步骤1)得到的淫羊藿甙粗品1.8g用20ml 20v％异丙醇充分溶解后上样，用20v％异丙醇水溶液充分淋洗后，用45v％异丙醇水溶液洗脱；UV270nm检测，收集第二个洗脱峰；减压浓缩所收洗脱液，得到淫羊藿甙初分离产物143.6mg，经HPLC测定其中淫羊藿甙含量为32wt％，回收率为99％；

3)将TSK gel Octadecyl-NPR(TOSOH公司生产，组分为聚丙烯酸酯)介质以重力沉降法装入16×100mm的层析柱，用25v％异丙醇水溶液平衡此层析柱；将步骤2)得到的淫羊藿甙初分离产物140mg用5ml 25v％异丙醇水溶液充分溶解后上样，用25v％异丙醇水溶液充分淋洗层析柱，用30～60v％异丙醇水溶液梯度洗脱；UV270nm检测，收集第三个洗脱峰；减压浓缩所收洗脱液，得到淫羊藿甙再分离产物49.3mg，经HPLC测定其中淫羊藿甙含量为89wt％，回收率为98％；

4)用45v％的乙醇水溶液将步骤3)得到的49.3mg淫羊藿甙再分离产物进行重结晶，得到淫羊藿甙纯品42.3mg，纯度为97.5％，回收率为94％。

实施例7、以含淫羊藿甙0.51％的巫山淫羊藿草的地上部分为原料，分离提纯制备含淫羊藿甙97.5％的淫羊藿甙纯品

1)将10g含淫羊藿甙0.51％的巫山淫羊藿草原料叶子粉碎后，放入500ml蒸馏瓶中，如实施例1中同样方法，用40ml 50v％异丙醇水溶液回流提取，每次回流1小时，共回流提取2次；过滤，用同样浓度的异丙醇水溶液洗涤滤渣数次；合并滤液及洗涤液，减压浓缩，得到淫羊藿甙粗品1.96g，经HPLC测定其中的淫羊藿甙含量为2.60wt％，回收率为100％；

2)将S-8树脂(南开大学化工厂生产，组分为聚苯乙烯)置于乙醇中浸泡过夜，然后用乙醇、去离子水依次淋洗，以使得树脂活化；将此活化后的树脂用重力沉降法装入15×200mm的层析柱；用35v％的乙醇水溶液平衡此层析柱；将步骤1)得到的淫羊藿甙粗品1.9g用20ml 35v％的乙醇水溶液充分溶解后上样，用35v％的乙醇水溶液充分淋洗层析柱，用65v％的乙醇水溶液洗脱；UV270nm检测，收集第二个洗脱峰；减压浓缩洗脱液，得到淫羊藿甙初分离产物163mg，经HPLC测定其中淫羊藿甙含量为30wt％，回收率为99％；

3)将C₁₈反相介质以重力沉降法装入16×100mm的层析柱，用35v％甲醇水溶液平衡此层析柱；将步骤2)得到的淫羊藿甙初分离产物160mg用10ml 35％甲醇水溶液充分溶解后上样，用35v％甲醇水溶液充分淋洗后，用40～80v％甲醇水溶液梯度洗脱；UV270nm检测，收集第三个洗脱峰；减压浓缩所收洗脱液，得到淫羊藿甙再分离产物50.8mg，经HPLC测定其中淫羊藿甙含量为85wt％，回收率为90％；

4)用45v％的甲醇水溶液将步骤3)得到的50.8mg淫羊藿甙再分离产物进行重结晶，得到淫羊藿甙纯品40.3mg，纯度为97.5％，回收率为91％。

本实施例中用到的有机溶剂都可以回收后再次循环使用。

Claims (5)

1.一种从淫羊藿属植物中提取淫羊藿甙的方法，其工艺步骤如下：

1)从淫羊藿属植物中浸提淫羊藿甙：将原料叶子粉碎后，用其重量15～20倍量的有机溶剂的水溶液(I)回流提取；然后过滤，用有机溶剂的水溶液(I)洗涤滤渣数次；合并滤液及洗涤液，减压浓缩，得到淫羊藿甙粗品；所述有机溶剂的水溶液(I)中有机溶剂的含量为50～100v％；所述的有机溶剂包括甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、丙酮、乙酸甲酯、乙酸乙酯；

2)初分离淫羊藿甙：将非离子型的极性或弱极性大孔网状吸附树脂置于乙醇中浸泡过夜，然后用乙醇、去离子水依次淋洗，以使得树脂活化；将此活化后的树脂用重力沉降法装柱；用有机溶剂的水溶液(II)作为流动相，平衡层析柱，将步骤1)得到的淫羊藿甙粗品用有机溶剂的水溶液(II)溶解后上样；用有机溶剂的水溶液(III)洗脱；使用紫外监测洗脱过程，在270nm检测，收集第二个洗脱峰；减压浓缩所收集的洗脱液，得到淫羊藿甙初分离产物；所述有机溶剂的水溶液(II)中有机溶剂的含量为5～25v％；所述有机溶剂的水溶液(III)中有机溶剂的含量为45～70v％；所述有机溶剂包括甲醇、乙醇、异丙醇和丙酮；

3)提纯淫羊藿甙初分离产物：将以硅胶为基质的反相介质或以聚合物为基质的反相介质用重力沉降法装柱；用有机溶剂的水溶液(IV)作为流动相，平衡层析柱，将步骤2)得到的淫羊藿甙初分离产物用有机溶剂的水溶液(IV)溶解后上样；用有机溶剂的水溶液(V)作为洗脱液，梯度洗脱；使用紫外监测洗脱过程，在270nm检测，收集第三个洗脱峰；减压浓缩所收集的洗脱液，得到淫羊藿甙再分离产物；所述有机溶剂的水溶液(IV)中有机溶剂的含量为35～55v％；所述有机溶剂的水溶液(V)中有机溶剂的含量为40～80v％；所述有机溶剂包括甲醇、乙醇和异丙醇；

4)重结晶：用35～45v％的甲醇或乙醇将步骤3)得到的淫羊藿甙再分离产物进行重结晶，得到淫羊藿甙纯品。

2.按权利要求1所述的从淫羊藿属植物中提取淫羊藿甙的方法，其特征在于：所述步骤1)的淫羊藿属植物包括大叶淫羊藿、心叶淫羊藿、箭叶淫羊藿、柔毛淫羊藿、朝鲜淫羊藿、大花淫羊藿以及巫山淫羊藿。

3.按权利要求1所述的从淫羊藿属植物中提取淫羊藿甙的方法，其特征在于：所述步骤1)中的回流提取的次数为1～4次；所述的回流提取的时间为0.5～2小时。

4.按权利要求1所述的从淫羊藿属植物中提取淫羊藿甙的方法，其特征在于：所述步骤2)中的树脂包括聚苯乙烯、聚丙烯酰胺、聚甲基丙烯酸酯、丙烯酰胺与苯乙烯的共聚物，或甲基丙烯酸酯与苯乙烯的共聚物。

5.按权利要求1所述的从淫羊藿属植物中提取淫羊藿甙的方法，其特征在于：所述步骤3)中的以硅胶为基质的反相介质为市售的C₈和C₁₈反相介质；所述步骤3)中的以聚合物为基质的反相介质包括以聚苯乙烯、聚丙烯酸酯、苯乙烯-二乙烯基苯共聚物、烷基改性的聚苯乙烯醇为基质的反相介质。

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