五、具体实施方式
实施例1富锗金针菇多糖粗品的制备
1.称取富锗金针菇菌丝体(由江苏神华药业有限公司购得,下同)50g,补足水至1000ml,70~80℃水浴提取8小时。间歇搅拌,3000r.p.m.离心去沉淀。提取液浓缩至200ml,加入浓缩液1/5体积的氯仿及1/25体积的正丁醇,剧烈振荡,静置分层,除去下层有机溶剂层及中间层,保留水层。反复萃取6次。所得水溶液对自来水透析72小时。透析液浓缩至100ml,逐步加入3倍量乙醇,4℃放置4小时。离心,沉淀依次以无水乙醇、丙酮、***洗涤,真空干燥得多糖粗品。
2.称取富锗金针菇菌丝体50g,补足水至800ml,70~80℃水浴提取10小时。间歇搅拌,3000r.p.m.离心去沉淀。提取液浓缩至200ml,加入浓缩液1/5体积的氯仿及1/25体积的正丁醇,剧烈振荡,静置分层,除去下层有机溶剂层及中间层,保留水层。反复萃取6次。所得水溶液对自来水透析72小时。透析液浓缩至100ml,逐步加入3倍量乙醇,4℃放置4小时。离心,沉淀依次以无水乙醇、丙酮、***洗涤,真空干燥得多糖粗品。
3.称取富锗金针菇菌丝体50g,补足水至1200ml,70~80℃水浴提取6小时。间歇搅拌,3000r.p.m.离心去沉淀。提取液浓缩至200ml,加入浓缩液1/5体积的氯仿及1/25体积的正丁醇,剧烈振荡,静置分层,除去下层有机溶剂层及中间层,保留水层。反复萃取6次。所得水溶液对自来水透析72小时。透析液浓缩至100ml,逐步加入3倍量乙醇,4℃放置4小时。离心,沉淀依次以无水乙醇、丙酮、***洗涤,真空干燥得多糖粗品。
实施例2富锗金针菇多糖精品FVP1,FVP2分离纯化的方法
步骤一.取粗品300mg,充分溶解于9ml蒸馏水中,上用蒸馏水平衡好的DEAE-Sephadex A-50离子交换柱,柱规格为2×44cm,以蒸馏水为洗脱液。分部收集,用硫酸蒽酮比色法跟踪检测,合并相同组分,冷冻干燥得半精品多糖。洗脱曲线如图1。
步骤二.将离子交换柱分离所得金针菇半精品多糖组分50mg溶于3ml蒸馏水中,上Sephacryl S-400分子筛柱层析,柱规格为1.5×65cm,以蒸馏水为洗脱液,分部收集,硫酸蒽酮比色法跟踪检测,合并相同组分。冷冻干燥得精品多糖FVP1、FVP2。洗脱曲线如图2。
实施例3 FVP多糖纯度的鉴定
1.凝胶柱层析纯度鉴定:分别取分离纯化所得的FVP1、FVP2溶液1.5ml,样品浓度为2mg/ml,分别上Sephacryl S-400层析柱,规格为1.0cm×100cm,分部收集,硫酸蒽酮比色法跟踪检测,合并相同组分,计算洗脱体积。FVP洗脱曲线为单一对称峰,证明为单一组分,洗脱体积为35.4ml。洗脱曲线如图3
FVP2洗脱曲线为单一对称峰,证明为单一组分,洗脱体积为71.9ml。洗脱曲线如图4
2.聚丙烯酰胺凝胶电泳法纯度鉴定:凝胶浓度为6%,缓冲液为0.025MpH9.0的硼砂液,样品为2mg/ml,每管进样20μl,电压为110V,每管电流量约2mA,电泳5小时,电泳结束后进行染色。先将凝胶置于基础液中固定2小时,然后放入氧化液中氧化1小时,再置于还原液中还原1小时,最后用阿利新蓝染色液浸泡2小时以上,染色完毕放入基础液中至背景退清。
基础液:20mg麝香草酚溶于75ml3%醋酸和25ml无水乙醇中
氧化液:0.5g高碘酸溶于100ml3%醋酸中(使用前配制)
还原液:0.5g偏重亚硫酸钠溶于100ml3%醋酸中(使用前配制)
阿利新蓝染色液:0.5g阿利新蓝溶于100ml基础液中
加样缓冲液配制:0.1%溴酚蓝 10%甘油 0.2M硼砂
结果如图5:电泳显示单一斑点,故可初步判定FVP1,FVP2均为单一组分。
实施例4 FVP多糖中总糖含量的测定
总糖含量的测定:精确配置100μg/mL的标准葡萄糖溶液,分别吸取0,0.1,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mL标准溶液置带塞试管中,补足蒸馏水至1mL,加入2mg/mL蒽酮试剂4ml,混匀,沸水浴煮10min。冷却后测定波长为620nm处的吸光度。以“0”管作空白对照,以吸光度对葡萄糖浓度作图得标准曲线(见图6)。取粗品多糖,半精品多糖,FVP1,FVP2多糖分别配成1mg/mL的溶液,吸取0.1mL,补足蒸馏水至1mL,其余操作同标准曲线的制备,再由回归方程算出相应浓度。
由实验可得粗品总糖含量为925.1μg/mL,半精品多糖总糖含量为982.3μg/mL,FVP1总糖含量为993.3μg/mL,FVP2总糖含量为991.5μg/mL。
实施例5 FVP多糖蛋白含量的测定
1.染料结合比色法测定蛋白含量—考马斯亮蓝G250
称取金针菇多糖FVP1,FVP2各2mg溶解于1ml蒸馏水中,准确吸取溶液各0.5ml于干燥烧杯中,溶液浓度为2mg/ml,加入CBG试剂50ml摇匀,室温静置3分钟,以蒸馏水作平行实验调零点,在波长595nm处比色。
CBG试剂的配制:称CBG100mg溶于50ml95%的乙醇,加蒸馏水约800ml,再加85%磷酸100ml,最后补足水至1000ml。
经实验测的分离纯化所得精品多糖FVP1、FVP2均不含蛋白质。
2.FVP多糖紫外光谱分析
由紫外图谱(图7,图8)可知,FVP1,FVP2在波长260、280nm处无明显吸收峰,说明几乎不含核酸和蛋白。
实施例6石墨炉原子吸收法测定富锗金针菇多糖中的痕量锗
1.仪器和试剂:岛津AA6800原子吸收分光光度计,锗空心阴极灯,热解石墨管,MARS5微波消解仪,Ni(NO3)2(国产)
2.锗的标准液的配置:纯水三次重蒸,准确称取GeO2 69.8mg,溶于1000ml水中,加入适量的KOH促溶,相当于Ge 48.4mg/L,备用。Ni(NO3)2溶液:用1%HNO3配制,浓度10mg/ml
3.锗标准曲线:
锗标准使用液:取锗标准液1ml,稀释至100ml,进行倍比稀释,配置成484μg/L、242μg/L、121μg/L、60.5μg/L标准液。分别取上述溶液1ml,加入1ml的Ni(NO3)2,并用无离子水稀释至10ml,配置成48.4ng/ml、24.2ng/ml、12.1ng/ml、6.05ng/ml的标准液,待测。
4.样品的预处理
样品的处理:称取粗品50.0mg,为UNK1-AV。
称取FVP1 44.6mg,为UNK2-AV。
称取FVP2 60.0mg,为UNK3-AV。
将样品1、2、3置于高压罐中,加5毫升HNO3,再加入1毫升过氧化氢,于150度的微波消解仪中消解0.5小时,冷却后用水反复冲洗样品液于烧杯中,微热蒸干,最后加入0.5ml的Ni(NO3)2溶液,定容至5ml。
5.测定
仪器工作条件:锗:灯电流10Ma,下缝0.2,波长265.2nm,进样10微升
石墨炉的升温程序
步骤 |
温度(℃) |
时间 (s) |
干燥 |
80~120 |
27 |
灰化 |
1100 |
27 |
原子化 |
2900 |
10 |
清洗 |
3000 |
3 |
结果见表1,经测定样品含锗分别为半精品多糖8.0130ng/ml,FVP1为4.3011ng/ml,FVP2为8.6740ng/ml。相当于半精品多糖含锗为801.30ng/g、FVP1含锗为482.19ng/g、FVP2含锗为722.83ng/g。
实施例7 FVP多糖分子量的测定
采用凝胶过滤法,依次从蓝色葡聚糖及标准分子量多糖Dextran T-10,T-40,T-70,T-500相继上Sephacryl S-400层析柱,规格为1.0cm×100cm。测外水体积Ve及标准分子量多糖洗脱体积Vt,按Vt/Ve与分子量对数关系作图,绘制标准曲线(见图9)。样品洗脱体积与标准曲线对照,确定分子量。
FVP1的洗脱体积为35.4ml,Ve/Vo=0.95418,由标准曲线得,平均分子量为2.58×106道尔顿。FVP2的洗脱体积为71.9ml,Ve/Vo=1.938,由标准曲线得,平均分子量为1.89×104道尔顿。
实施例8 FVP多糖薄层层析(TLC)分析单糖组分
称取FVP1,FVP2各5mg,置于干净的安瓿中,加入2mol/l三氟乙酸2ml,封管。100℃水解8小时后,将三氟乙酸蒸干,用甲醇洗4-5次后,用蒸馏水溶解,备用。精密称取D-葡萄糖,D-甘露糖,D-鼠李糖,D-***糖,D-半乳糖,D-岩藻糖各20mg,分别溶于1ml蒸馏水中。量取0.75%CMC-Na溶液(配好放置一周后用)16ml于研钵中,分次加入6g硅胶G,研磨均匀后均匀涂铺在干净的玻璃板上(10×20cm)。静置晾干,使用前在105℃活化1小时。将酸水解多糖样品和标准单糖样品用毛细管点样。按正丁醇∶乙酸乙酯∶异丙醇∶水=7∶4∶7∶2配成展开剂置于层析缸中,放入已活化、点好样的板,饱和10分钟后,上行展开。展开完毕后,取出,以苯胺-邻苯二甲酸溶液为显色剂显色后,于110℃加热10min。
FVP1,FVP2完全酸水解后进行薄层层析,结果显示清晰的葡萄糖斑点(见图10)。
实施例9 FVP多糖的糖醇乙酰化衍生物的气相分析
称取金针菇多糖FVP1,FVP2各10mg加2mol/L的三氟乙酸,于安瓿中封口,于100℃水解8h,水解产物于蒸发皿中蒸干后加入甲醇5-6次反复蒸干后溶于2ml水中,加入5mg硼氢化钠还原,3mg内标物肌醇,充分溶解后,65℃放置30min,水解液减压蒸干。然后加少量强酸型离子交换树脂732H+搅拌数分钟后,检查溶液呈酸性时过滤,树脂用少量水反复洗3次,合并滤液在水浴上蒸干,所得残余物加3ml甲醇溶解并蒸干,反复4次以上以除去硼化物,最后使还原产物于小安瓿管中彻底干燥。在上述还原产物中加入醋酐和无水吡啶各0.3ml,封口,于100℃水浴乙酰化20min,冷却,转移至蒸发皿中,加入0.5ml水,浓缩后反复加水2-3次直至蒸干,残渣用1ml三氯甲烷提取,提取液用1ml水洗,三氯甲烷溶液减压蒸干后,再用0.2ml三氯甲烷重溶。标准单糖(D-鼠李糖、D-***糖、D-甘露糖、D-葡萄糖、D-半乳糖)按相同方法处理。
气相条件为:惠普6890气相色谱仪,HP-55%苯甲基硅烷毛细管柱(30.0cm×0.25mm×0.25μm)。分流-不分流进样口,进样口温度260℃。程序升温110℃至190℃,3℃/min;190℃至206℃,2℃/min;206℃至280℃,20℃/min,保留2min。FID检测器,载气为N2,流速25.0ml/min,检测器温度300℃。
FVP1,FVP2酸水解产物的还原乙酰化产物进行气相色谱分析,都仅出现一个单峰,与标准单糖的保留时间对比,可认为FVP1,FVP2均由葡萄糖组成(见表2)。
实施例10过碘酸氧化与Smith降解
将NaIO4配成15mmol/L溶液,稀释250倍,再稀释成10个不同浓度,于波长223nm处测吸收值,作标准曲线(见图11)。
精确称取多糖FVP1,FVP2各10mg,加10ml NaIO4置4℃暗处,间或振摇,间隔时间取样,稀释250倍,在波长223nm处测吸收值,直至数值不再下降为止。由标准曲线查出NaIO4消耗量。反应终止后,以标定的0.01mol/L NaOH测定甲酸释放量。
FVP1,FVP2经15mM高碘酸完全氧化后,加入适量乙二醇搅拌30min以还原剩余的高碘酸。装入透析袋,对流水透析48h,蒸馏水透析12h,于70-80℃减压浓缩至最小体积,用NaBH4于室温暗处还原12h,用0.1mol/L乙酸调节至pH5.5,以分解剩余的硼氢化物,对蒸馏水透析24h后冷冻干燥。
将所得的多糖醇用2mol/L的三氟乙酸于100℃水解8h,水解液减压蒸干,乙酰化后进行气相分析。
根据实验结果,FVP1,FVP2经高碘酸氧化,经132h均可反应完全,高碘酸的消耗达到稳定。测得每mol FVP1消耗1.102mol高碘酸量并有0.154mol甲酸生成;每mol FVP2消耗1.132mol高碘酸量并有0.11mol甲酸生成。结合Smith降解产物经气相色谱分析,主要产物为赤藓醇,有少量甘油。推断FVP1,FVP2均以1→4糖苷键为主要连接方式,其中每七个葡萄糖主链通过1→6连接带有1个葡萄糖侧链。
实施例11甲基化分析
分别称取20mg彻底干燥的FVP1,FVP2,溶于10ml无水二甲亚砜(DMSO)充氮气封管,超声波振荡10分钟,加入200mg精细研磨的NaOH,充氮气密封,超声波振荡90min,放置90min,逐滴加入CH3I 6ml,超声波振荡30min,放置30min。减压蒸馏除去剩余的CH3I,加1ml H2O和1ml CHCl3,振荡,静置使分层,弃去水层,取有机层,用水(3×3ml)洗涤至中性,弃水层,CHCl3层加无水Na2SO4干燥过夜,过滤,减压蒸干。全甲基样品加2ml 90%(v/v)的甲酸,于安瓿中封口,于100℃水解6h,减压蒸干后,再加入3ml浓度为2mol/ml的三氟乙酸,安瓿中封口,于100℃水解6h,产物于蒸发皿中蒸干后加入甲醇5-6次反复蒸干后溶于2ml水中,加入5mg硼氢化钠还原,3mg内标物肌醇,充分溶解后,65℃放置30min,水解液减压蒸干。然后加少量强酸型离子交换树脂732H+搅拌数分钟后,检查溶液呈酸性时过滤,树脂用少量水反复洗3次,合并滤液在水浴上蒸干,所得残余物加3ml甲醇溶解并蒸干,反复4次以上以除去硼化物,最后使还原产物于小安瓿管中彻底干燥。在上述产物中加入醋酐和无水吡啶各0.3ml,封口,于100℃水浴乙酰化20min,冷却,转移至蒸发皿中,加入0.5ml水,浓缩后反复加水2-3次直至蒸干,残渣用1ml三氯甲烷提取,提取液用1ml水洗,三氯甲烷溶液减压蒸干后,再用0.2ml三氯甲烷重溶,进行GC和GC-MS分析。
根据GC保留时间(tR)及MS主要碎片(m/z),显示反应产物中有1,4,5-三乙酰基-2,3,6-三甲基葡萄糖,1,5-二乙酰基-2,3,4,6-四甲基葡萄糖及1,4,5,6-四乙酰基-2,3-二甲基葡萄糖,其摩尔比为6∶1∶1。表明1→4连接葡萄糖构成了多糖的基本骨架,7个葡萄糖残基有一个6-0位上分支(见表3)。
实施例12比旋测定
将FVP1,FVP2干燥失重后,精密称取25mg,定容至25ml,用旋光仪测定旋光度,由公式[α]D t=α/1c计算比旋。[α:旋光度;L:玻管长度(dm);c:溶液浓度(g/ml)]
经测定和计算,FVP1具有较高的正性比旋(+83.60°),表明FVP1和端基碳为α-构型。FVP2具有较高的正性比旋(+160.19°),表明FVP2的端基碳为α-构型。
实施例13红外光谱分析
FVP1,FVP2经干燥后称取1mg样,用溴化钾压片法在Nicolet-170X型红外光谱仪上于4000-400cm区间扫描。
FVP1的红外光谱图如图12所示。在3600-3200cm-1出现一种宽峰,是O-H的伸缩振动。在3000-2800cm-1的一组峰是糖类C-H伸缩振动,1400-1200cm-1的一些峰是C-H的变角振动。这两组峰是糖类化合物的特征吸收。1000-1200cm-1间的吸收峰是由C-O的伸缩振动所引起。935cm-1的吸收是由D-葡萄吡喃环的非对称环伸缩振动所引起。854cm-1的吸收是α-端基差向异构的的C-H变角振动的特征吸收,表明FVP1的端基碳为α-构型。773cm-1的吸收是由D-葡萄吡喃环的对称环伸缩振动所引起。
FVP2的红外光谱图如图13所示。在3600-3200cm-1出现一种宽峰,是O-H的伸缩振动。在3000-2800cm-1的一组峰是糖类C-H伸缩振动,1400-1200cm-1的一些峰是C-H的变角振动。这两组峰是糖类化合物的特征吸收。1000-1200cm-1间的吸收峰是由C-O的伸缩振动所引起。929cm-1的吸收是由D-葡萄吡喃环的非对称环伸缩振动所引起。853cm-1的吸收是α-端基差向异构的的C-H变角振动的特征吸收,表明FVP2的端基碳为α-构型。764cm-1的吸收是由D-葡萄吡喃环的对称环伸缩振动所引起。
实施例14 1H-NMR,13C-NMR分析
取纯化的FVP1,FVP2各15mg,溶于氘代水(D2O),60℃于Varian 500兆核磁共振仪上进行分析。
从1H-NMR图谱可以看出FVP1 C-1上的质子信号在δ 5.3756ppm,FVP2 C-1上的质子信号在δ5.4035ppm,13C-NMR中FVP1在δ102.4230ppm,FVP2在δ102.3985ppm的共振信号可进一步说明FVP1,FVP2的糖苷键构型为α-构型。另外在13C-NMR中FVP1δ74.1950,76.1877,79.7941,74.0116,63.3390ppm和FVP2δ74.3172,75.5031,79.7452,74.0116,63.3146ppm与文献对比应分别是C-2,C-3,C-4,C-5及C-6的信号(见表4)。通过以上数据可验证FVP1,FVP2的结构均是α-构型,以1→4糖苷键为主要连接方式。
实施例15多糖活性的研究
1.原代小鼠肝细胞的制备
用二步灌流法分离小鼠肝细胞。将小鼠用20mg/ml乌拉坦(2mg/10g)ip麻醉。用酒精棉球消毒小鼠表面后,用针头将其固定在手术台上,再次用酒精棉球消毒其腹部。打开腹腔,门静脉插管并固定。剪断下腔静脉,用37℃水浴预热的D-Hanks液以6ml/min的速度预灌流肝脏。10min后换37℃水浴预热的0.05%胶原酶溶液以3ml/min的速度灌流肝脏。10min后,取下肝脏置培养皿中,冲洗2~3次,然后轻轻撕开肝包膜。将肝细胞散落于1640培养基中,用200目不锈钢滤网过滤,500rpm,离心1min,弃上清,重复2次,以进行纯化。纯化后肝细胞用1640完全培养液重悬,即为肝细胞悬液。然后以台盼蓝排除实验检测肝细胞的存活率,存活率大于80%即可用于以下实验。
2.MTT法检测FVP对原代小鼠肝细胞活力的影响
将分离得到的原代小鼠肝细胞以1.5×105个/ml的密度接种于96孔板,每孔200ul。置于37℃5%CO2和饱和水蒸气的CO2培养箱内预培养,2h后药物孔加入不同浓度的FVP1,FVP2保护,使其终浓度为25、50、100、200、400ug/ml;同时设空白对照组和HGF(促肝细胞生成素)阳性对照组,HGF终浓度为200ug/ml。每组均设5个复孔。CO2培养箱内培养2h后,吸去100ul上清,加入5mg/ml的MTT 20ul。CO2培养箱内培养6h后吸走上清,加入DMSO 100ul。10min后,以调零孔调零,在酶标仪上测定各孔OD570值。结果如表5所示。
由表5可得FVP1,FVP2能显著增加小鼠原代肝细胞的活力。两者中剂量组和低剂量组效果明显,与对照组成极显著性差异(P<0.01)。FVP1高剂量组与对照组成显著性差异,FVP2高剂量组效果不明显。阳性对照HGF提高原代大鼠肝细胞活力的作用也极显著(P<0.01)。
3.FVP对四氯化碳损伤的原代小鼠肝细胞ALT活力的影响
用二步灌流法制备小鼠原代肝细胞,以5×104个/ml的密度接种于96孔板,置于37℃,5%CO2和饱和水蒸气的CO2培养箱内培养内预培养2h。然后加入不同浓度的FVP1,FVP2,使其终浓度为25、50、100、200、400ug/ml同时设空白对照组和HGF对照组(200ug/ml)。1h后加入CCl4,使其终浓度为10mmol/L,继续培养2h后,测定培养液中ALT活性。结果如表6所示。
实验结果表明FVP1中剂量组和低剂量组和FVP2中剂量组可使培养液中的ALT活性明显低于模型组,具有极显著性差异(p<0.01)。即ALT明显减少,说明对CCL4损伤的原代小鼠肝细胞具有保护作用。阳性对照HGF对CCL4损伤的原代小鼠肝细胞的保护作用也极显著(p<0.01)。
4.FVP对SMMC7721的抑制作用
将SMMC7721细胞株以2.5×105个/ml的密度接种于96孔板,加入不同浓度的FVP1,FVP2,使其终浓度为25、50、100、200、400ug/ml,同时设空白对照组和HGF对照组(200ug/ml),每组均设5个复孔,置于37℃5%CO2和饱和水蒸气的CO2培养箱内培养25h,。然后吸去100ul上清,加入5mg/ml的MTT20ul。CO2培养箱内培养6h后吸走上清,加入DMSO 100ul。10min后,以调零孔调零,在酶标仪上测定各孔OD570值。并按下式计算细胞生长抑制率(IR)和半数抑制浓度TC50。(见表7,图14)
IR(%)=(1-A实验组/A对照组)×100%
由图可得:FVP1的半数抑制浓度TC50=180ug/ml
FVP2的半数抑制浓度TC50=67ug/ml
表1 石墨炉原子吸收法测定锗
Action | Sample ID |
True Value(ng/mL) |
Conc.(ng/mL) | Abs | Pos | VOL | %RSD |
BLK-AV | | | |
0.0099 |
R1 |
10 |
1.4285 |
STD-AV |
STD1 |
6.0500 | |
0.0280 |
1 |
10 |
9.4589 |
STD-AV |
STD2 |
12.1000 | |
0.1538 |
2 |
10 |
14.1118 |
STD-AV |
STD3 |
24.2000 | |
0.5078 |
3 |
10 |
13.5135 |
STD-AV |
STD4 |
48.4000 | |
0.8029 |
4 |
10 |
18.1881 |
UNK1-AV |
001 | |
8.0130 |
0.1211 |
5 |
10 |
20.6829 |
UNK2-AV |
002 | |
4.3011 |
0.0554 |
6 |
10 |
19.3578 |
UNK3-AV |
003 | |
8.6740 |
0.1328 |
7 |
10 |
18.3659 |
标准曲线是:y=-0.02073+0.01770x r=0.98191704 s=0.07537717
表2 FVP1,FVP2气相分析
Retention time(min)Sugar26.722 27.133 37.614 38.180 38.384D-rhamnose +D-fucose +D-mannose +D-glucose +D-galactose +FVP1 +FVP2 + |
表3 FVP GC和GC-MS甲基化数据
MolarMethylated sugar MS main fragments(m/z) Linkagesratios2,3,4,6-Tetra-O-Me-Glc 1 43,45,71,87,101,117,129,145,161,205 G1c-(1→2,3,6-Tri-O-Me-Glc 6 43,45,87,99,101,113,117,233 →4)-Glc-(1→2,3-Di-O-Me-Glc 1 43,101,117,261 →4,6)-Glc-(1→ |
表4 FVP1,FVP2
13C-NMR数据
糖 化学位移(ppm)C-1 C-2 C-3 C-4 C-5 C-6FVP1 102.4230 74.1950 76.1877 79.7941 74.0116 63.3390FVP2 102.3985 74.3172 75.5031 79.7452 74.0116 63.3146 |
表5 MTT法检测FVP对原代小鼠肝细胞活力的影响(n=5
x±s)
Group Dosage(ug/ml) OD570
Control 0.068±0.008
FVP1 400 0.082±0.013△
200 0.182±0.022▲
100 0.176±0.011▲
50 0.154±0.018▲
25 0.108±0.013▲
FVP2 400 0.086±0.015
200 0.158±0.013▲
100 0.146±0.011▲
50 0.120±0.016▲
25 0.100±0.016▲
HGF 200 0.306±0.033▲
△P<0.05vs control ▲P<0.01vs control
表6 FVP对四氯化碳损伤的原代小鼠肝细胞ALT活力的影响.(n=5
x±s)
Group Dosage(ug/ml) OD505 ALT(caL’s unit)
Control 0.044±0.002 12.18±0.78
Model 0.083±0.003 25.86±1.00▲▲
FVP1 400 0.079±0.002 24.32±0.67
200 0.052±0.003 15.04±1.14▲
100 0.061±0.005 17.97±1.59▲
50 0.069±0.004 20.83±1.29▲
25 0.073±0.004 22.16±1.27▲
FVP2 400 0.082±0.004 25.58±1.34
200 0.059±0.004 17.55±1.53▲
100 0.063±0.002 18.67±0.84▲
50 0.074±0.002 22.51±0.80△
25 0.080±0.003 24.60±1.12
HGF 200 0.062±0.002 18.46±0.78▲
△P<0.05vs model ▲P<0.01vs model ▲▲P<0.01vs control
表7 FVP对SMMC7721的抑制作用 n=5
x±s
Group Dosage(ug/ml) OD570 IR(%)
Control 0.880±0.012
FVP1 400 0.320±0.019 63.60
200 0.400±0.022 54.50
100 0.560±0.029 36.40
50 0.620±0.019 29.50
25 0.740±0.024 16.00
FVP2 400 0.170±0.016 80.70
200 0.230±0.022 73.90
100 0.310±0.016 64.80
50 0.510±0.012 42.00
25 0.670±0.019 23.90
HGF 200 0.120±0.016 86.40