发明内容:
本发明所要解决的技术问题在于设计有效抗疱疹病毒的中药。
本发明提供了一种抗疱疹病毒的外用中药制剂,该制剂含有作为活性成分的中药金银花、板兰根、细辛提取的浸膏与药用辅料组成的酊剂、搽剂、乳膏剂、喷雾剂、气雾剂或凝胶剂等。
本发明活性成分含金银花、板兰根、细辛,三味药按任意比例提取获得浸膏,也可加入其他具有抗菌、止痛、消炎作用的药物,以提高上述三味药的作用。
本发明优选的活性成分重量百分比配方为金银花0.1-99.8%、板兰根0.1-99.8%、细辛0.1-99.8%、野菊0-35%、青蒿0-30%、鱼腥草0-35%、冰片0-10%。
本发明上述中药可以为不同产地、不同品种的中药材,以及由上述药材所提取的中间体、中药制剂。
板兰根为十字花科植物菘蓝Isatis indigotica Fort.的干燥根,具有清热解毒,抗菌、抗病毒的作用,清血热,为君药。
金银花为忍冬科植物忍冬Lonicera japonica Thunb.红腺忍冬Lonicera hypoglauca Miq.、山银花Lonicera confusa DC.毛花柱忍冬Lomcera dasystyla Rehd.的干燥花蕾或带初开的花,具有清热解毒,凉散风热,为臣药。
细辛为马兜铃科植物北细辛Asarum heterotropodesFr.var.mandshuricum(Maxim.)Kitag.、汉城细辛Asarum sieboldiiMiq.var.seoulense Nakai或华细辛Asarum sieboldii Miq.的干燥全草,具有祛风散寒,通窍止痛,抗病毒的作用。
鱼腥草为三白草科植物蕺菜Houtuynia cordata Thunb.的干燥地上部分,具有清热解毒,消痈排脓、利尿通淋的作用青蒿为菊科植物黄花蒿Artemisia annua L。的干燥地上部分,具有清热结暑,除蒸,截疟的作用。
野菊为菊科植物野菊Chrysanthemum indicum L的干燥头状花序,具有清热解毒止痒的作用。
冰片为龙脑香科植物龙脑香树Dryobalanops,aromatica Gaem f.的树脂加工品,菊科植物大风艾Blumea balsamifera DC.的鲜叶经蒸馏,冷却所得的结晶体,以及人工合成的机制冰片(Bomeolumsyntneticum),具有开窍醒神,清热止痛的作用。
上述各味药合理组配共同起到清热解毒消肿止痒止痛抗病毒敛疮口的作用。
本发明的制剂可用于治疗人或动物由疱疹病毒引起的疾病,特别是单纯性疱疹性角膜炎、口腔炎,带状疱疹、生殖性疱疹。
单纯疱疹与带状疱疹都是病毒性皮肤病,使用本发明制剂(病毒灵制剂),可使疱疹疮口收敛,抑制病毒的蔓延,使创口愈合,结痂,并可减少疼痛,一般1-2天即可起到明显的效果。
本发明制剂的药效学研究结果如下:
(1)板兰根对多种细菌具有抗菌抗病毒作用
1)细胞培养实验:
HR1(水提醇沉工艺样品),HR2(水提醇沉工艺样品),HR3(水提絮凝工艺样品),HR4(总水溶性样品),MW2(微波诱导提取工艺样品),AT1(脂溶性样品)六个样品各50克,用培养液配成30%DMSO悬液,2倍稀释不同浓度,加入正常和感染细胞,测定毒性,感染后2小时将最大无毒浓度加入细胞培养观察对甲乙型流感病毒细胞病变的抑制作用。
HR1,HR2,HR3,HR4,AT1和MW2最大无毒浓度对甲、乙型都有弱抑制作用,感染前24小时预防给药无效。
2)小鼠口服1次急性毒性:
HR2,HR3,30g/kg无毒;
HR1,HR4 MW2:30g/kg有毒,25g/kg无毒;
AT1:25g/kg有毒,15g/kg无毒;
AA2:10g/kg口服每天2次4天共8次无毒。
3)小鼠口服亚急性毒性:
HR1,HR2,HR3,HR4实验最大剂量用10g/kg,HR1,HR2和HR4口服每天2次4天共8次无毒,HR3:10g/kg有毒,5g/kg无毒;
MW2最大剂量用5g/kg,口服每天2次4天共8次无毒;
AT1,AA2,最大5g/kg口服每天2次4天共8次有毒,2.5g/kg无毒。
(2)金银花
①体外对多种细菌有抗菌抗病毒作用
表2六样品对病毒致细胞病变作用比较
病毒唑 50%有效浓度(EC50)ug提取物/ml, (IT)
病毒
125ug/m 1 2 3 4 5 6
l
A3 ++ 83.9(6.7) 167.5(6.6) 236.6(4.7) - 236.6(9.4)
HVJ ++ 167.5(3.4) - - - - -
RSV +- - - - - - -
ECHO11 + - - - - - -
CoxB4 + - - - - - -
Ad3 - - - - - - -
Ad7 - - - - - - -
HSV-I ++ - - - - - 561.2(4.0)
HSV-II + - - - - - 472.1(4.7)
“+”为有效”-“为无效。
结果 1号药对流感和副流感病毒有抑制作用,3、4号药对流感病毒有不同程度的抑制作用,6号药对流感病毒、疱疹病毒I、II型均有一定的抑制作用,对流感病毒作用最强。
②1∶4水煎剂体外对若干皮肤真菌有轻度抑制作用
③延缓呼吸道病毒对细胞的病变作用。
④毒性很小,小鼠皮下注射之半数致死量为53g/kg。
表3六样品对Hep-2培养细胞的毒性试验结果
毒性试验结果(ug提取物/ml)
样品 1 2 3 4 5 6 病毒唑
CC50 561.8 561.8 1111.0 1111.0 1111.0 2232.0 714.3
⑤热水浸剂对大鼠幽门结扎性胃溃疡有轻度预防作用。
(3)细辛
①局部麻醉作用,水浸剂、醇浸剂(20%-100%)有浸润麻醉作用。煎剂无效。
②解热镇痛作用。
③抑菌作用
④毒性:小鼠灌胃与静脉注射,起半数致死量为123.75mg/10g;7.78mg/10g,细辛浸出液毒性大于水煎剂。
(4)鱼腥草
①抗菌体外实验表明对卡他球菌、流感杆菌、肺炎球菌、金黄色葡萄球菌有明显抑制作用,从鱼腥草中提出一种油状物,对许多微生物生长有抑制作用,特别是酵母菌和霉菌。
②抗病毒用人胚肾原代单层上皮细胞组织培养,观察到鱼腥草(1∶10)对流感亚洲甲型京科68-1株有抑制作用;对HSV1、HSV2有抑制作用。
③其他:镇痛、止血、抑制浆液分泌,促进组织再生等作用。
(5)青蒿水煎剂(1∶3)在试管内对某些皮肤真菌有抑制作用。
(6)野菊花
①抗菌抗病毒作用:体外对多种细菌金黄色葡萄球菌、白喉杆菌及痢疾杆菌有抑制作用;(1∶80)能延缓孤儿病毒感染后的细胞的病变。
②毒性低,慢性给药无蓄积现象,犬每日服提取物1300mg/kg连续三周,无严重毒性反应,肝肾功能正常。
将本发明制剂进行有关临床研究,结果如下:
1、临床研究
肽丁胺软膏对照,疗效标准参照《中医病证诊断疗效标准》,统计学处理以卡方检验。
组 别 |
例数 |
治愈 |
有效 |
无效 |
显效率% |
有效率% |
治疗 |
热疮(单纯疱疹) |
40 |
21 |
14 |
5 |
52.5 |
87.5 |
蛇窜疮(带状疱疹) |
42 |
12 |
24 |
6 |
28.6 |
85.7 |
生殖器疱疹 |
30 |
18 |
10 |
2 |
60.0 |
93.3 |
对照 |
热疮(单纯疱疹) |
30 |
8 |
15 |
7 |
26.7 |
76.7 |
蛇窜疮(带状疱疹) |
30 |
3 |
12 |
15 |
10.0 |
50.5 |
结果显示,治疗组总有效率为88.8%,同比对照组为63.3%,具显著差异(P<0.01)
2、科研临床研究
本发明制剂-病毒灵搽剂为纯中药制剂,外用于治疗单纯疱疹和带状疱疹。本品科研临床研究目的是验证其临床疗效与安全性,并比较多种工艺剂型的疗效。
本次验证共观察72例患者,入选标准为临床上有典型的局部症状和体征,无全身症状或全身症状轻微,符合带状疱疹和颜面部、生殖器单纯疱疹的诊断,皮损出现时间不超过3天,一周内未内服或外用过抗疱疹病毒药物,四周内未使用过作用于免疫***药物的患者。
治疗组用病毒灵搽剂,对照组予肽丁胺软膏,疗程中不同时应用其他内、外用药物。
疗效判定标准:以用药后症状体征的总积分下降为疗效判断依据,分为痊愈、显效、有效和无效。计算疗效指数方法:疗效指数(治疗前病情总积分-治疗后病情总积分)/治疗前病情总积分*100%。痊愈为疗效指数100%,显效为疗效指数60~90%,有效为疗效指数20~59%,无效为疗效指数<20%。
表1 治疗组与对照组各36例,疗效如下:
|
痊愈 |
显效 |
有效 |
无效 |
总有效率(%) |
治疗组 |
带状疱疹 |
3 |
4 |
4 |
1 |
91.7 |
单纯疱疹 |
4 |
5 |
3 |
0 |
100 |
生殖器疱疹 |
5 |
5 |
2 |
0 |
100 |
对照组 |
带状疱疹 |
0 |
2 |
5 |
5 |
58.3 |
单纯疱疹 |
1 |
2 |
4 |
5 |
58.3 |
生殖器疱疹 |
1 |
2 |
5 |
4 |
66.7 |
治疗组总有效率为97.2%,对照组总有效率为61%,对比有显著差异。两组患者中均无不良反应出现。
上述结果表明病毒灵搽剂组对单纯性疱疹、带状疱疹、生殖性疱疹的治疗总有效率88.8%,而对照组酞丁安软膏总有效率63.3%,经统计学检验有显著性差异(p<0.01)。临床应用显示,本制剂湿敷患处,既能迅速缓解疼痛,又能使创面迅速收敛,进而控制局部蔓延,促进疮口结痂愈合,病毒灵外用制剂充分发挥了中药的综合作用--抗病毒、止痛、抗炎、止痒等,并明显地缩短病程。本发明制剂的特点为起效快,疗程短,无刺激及其它副作用,特别对耐阿昔洛韦的患者效果更好。
本发明的另一目的是提供了上述抗疱疹病毒外用中药制剂的制备方法。
本发明制剂中的活性成分浸膏是通过对处方各组分采用微波提取+传统工艺提取、超临界提取+传统工艺提取、微波提取+超临界提取、单纯传统工艺提取或单纯微波提取方法获得;制剂的制备采用常规方法制得,辅料为常规药用辅料。
本发明所述的传统工艺提取包括冷浸法、渗漉法或热回流提取法等。
本发明所述的微波诱导萃取是指粉碎后的药材在功率175W~12KW,溶剂浓度在0~95%,提取时间为10~60min条件下进行的提取,其中所述的溶剂选自水、醇类、酮类、氯仿、酯类、苯类、醚类等有机溶剂。
本发明所述的超临界萃取是指将粉碎后的药材在33~50℃,压力80~300kg,时间30min~3hr,气体流量50~200kg/hr,乙醇50~95%夹带或不用乙醇做夹带剂的条件下提取。
本发明制剂具体通过下述技术方案获得:
1、提取工艺:
实验材料与设备
药材:板兰根金银花细辛青蒿鱼腥草野菊(均购自上海养和堂饮片厂),其余试剂为分析纯。
微波炉(惠而浦VIP272)HA-420超临界设备(江苏南通),升降恒温水浴锅(上海申胜生物技术有限公司),旋转蒸发器(上海申胜生物技术有限公司),电子天平(上海精科天平厂),电子天平FA1004(上海精科天平厂),PHSJ-4型pH计(上海精科雷慈),TDL-5-A高速离心机(上海安亭科学仪器厂),电热恒温水浴锅(上海天平仪器厂),ZK82J型电热真空干燥箱(上海实验仪器总厂),高效液相色谱仪Waters510,均匀设计软件包V4.0(东北制药总厂研文所)。
(1)传统工艺提取:
a、冷浸法将药材混合,加入5~10倍量的0~95%乙醇,浸泡0~1年,过滤,合并药液,总量为药材量的2~6倍;或
b、渗漉法将药材混合,浸润0~1hr,加入0~95%乙醇,高过液面2~5cm,浸泡0~15天,然后以1~10ml/min的速度渗漉,收集渗漉,总量为药材量的2~5倍;或
c、热回流提取将药材混合,加入浓度0~95%的乙醇、用量6~12倍、提取次数1~3次、时间10~120min,过滤,合并药液,减压浓缩至1∶1~1∶2体积,室温放置或冷藏1天~2天,密度0.97~1.03,pH4.5~5.5,加50%~95%乙醇至一定体积,总量为药材量的2~5倍;或
(2)微波诱导萃取
将药材混合后直接使用、单独粉碎再混合或者将药材混合后再粉碎,打成粗粉或超微粉碎,在功率175W~12KW、溶剂的浓度0~95%、提取时间10min~60min、浸泡时间0~0.5hr的条件下提取,药液减压浓缩至1∶1,密度为0.97~1.03g/ml,pH4.5~5.5,有效成分绿原酸含量为1.9~3.1mg/ml,浸膏得率为5~20%;或
(3)超临界萃取将药材单独粉碎再混合或者药材混合后再粉碎,打成粗粉或超微粉碎,在温度33~50℃、压力80~300kg、时间30min~3hr、气体流量50~200kg/hr,使用或不用乙醇做夹带剂的条件下提取,挥发油的得率为0.0544~0.505%;
2、制备制剂:
按提取物0.01-99.9%与辅料99.9-0.011%的任意配比制成100%的组成,制备酊剂、搽剂、乳膏剂、喷雾剂、气雾剂、凝胶剂、搽剂外用制剂。
上述三种提取工艺对活性成份提取物结果比较如下:
|
绿原酸含量 |
挥发油量 |
浸膏量 |
传统热回流 |
2.1-3mg/ml |
≤0.1ml/100g |
15% |
微波提取 |
1.9~3mg/ml |
<0.1ml/100g |
10% |
超临界提取 | |
0.35ml/100g |
3% |
|
提取时间(min) |
溶剂用量 |
杂质 |
传统热回流 |
240 |
24倍 |
3~13% |
微波提取 |
60 |
10倍 |
2~4% |
超临界提取 |
180 |
2倍 | |
由上述比较结果可见,微波提取时间短,效率高,溶剂用量少,杂质少,纯度高,并且有效成分含量与传统提取相当。
为保证各药材有效成份的充分提取,同时节约溶剂,提高提取物纯度,本发明活性成份浸膏可采用微波提取与传统工艺提取相结合(可删去)、或超临界提取与传统工艺提取相结合、或微波提取和超临界提取相结合、或单独采用传统工艺、或单独采用微波提取的方法。
本发明的制剂用微波萃取技术提取中药复方有效成分可提高产品的得率和纯度,大幅度地减少提取时间和降低能耗,使产品优质低价,具备极强的竞争性。超临界萃取技术的使用可以提高药物的稳定性,还可以除去杂质(蜡质、树脂),一步完成,减少工序,提高效率,节省能源。
本发明抗疱疹病毒的中药制剂组方科学,工艺先进,质量可控,疗效确切。
具体实施方式:
实施例1 酊剂的制备
将金银花15g、野菊15g、板兰根15g、冰片4g、细辛9g混合,加入60%的乙醇5倍量,浸泡两个月,压榨过滤,收集药液即得。绿原酸含量不低于0.5mg/ml,pH4.5-5.5,乙醇醇度45-55%。
实施例2 乳膏剂的制备
(1)提取物的制备:采用两步,第一步采用超临界提取挥发油,第二步再用微波提取非挥发油部分。将金银花2000g、板兰根2000g、鱼腥草800g、细辛720g混合,粉碎,装入萃取釜中,控制压力210kg,温度35℃,提取时间为1.5小时,挥发油得率为0.3578%;非挥发油部分,再用微波提取,取超临界提取后的药渣,加入50%的乙醇3L,微波功率2000W,提取10分钟,过滤,减压浓缩至(1∶1)。测得绿原酸含量不低于2.mg/ml,挥发油不低于0.1ml/100g,浸膏得率9.57%。
(2)制剂制备
处方:
提取物 240g
蜂蜡 25g
单硬脂酸甘油酯 90g
凡士林 100g
液状石蜡 60g
十二烷基硫酸钠 10g
甘油 50g
氮酮 10g
蒸馏水加至 1000g
制备:将油相蜂蜡、单硬脂酸甘油酯、凡士林、液状石蜡加热至80℃,水相提取物、氮酮、十二烷基硫酸钠、甘油、水加热略高于80℃,将水相缓缓加到油相,边加边搅拌,渐渐成乳。
绿原酸含量不低于0.5mg/ml,挥发油不低于0.05ml/100g,最小装量30g/盒,
实施例3 喷雾剂的制备
(1)提取物的制备
采用微波方法提取,将金银花150g、野菊150g、板兰根90g、细辛60g、鱼腥草120g称重,混合,加入70%的乙醇600ml,浸泡30分钟,微波功率595w,提取15分钟,过滤,减压浓缩至(1∶1)570ml。测得绿原酸含量不低于2.6mg/ml,挥发油不低于0.1ml/100g,浸膏得率9.57%。
(2)制剂制备
处方
中药提取物 400g
甘油 50g
吐温 10g
氮酮 10g
乙醇加至 2500ml
制备按处方将药物混合,灌装于喷雾瓶中,每瓶30ml。测得绿原酸含量不低于1.0mg/ml,挥发油不低于0.04ml%,pH4.5-5.5,乙醇醇度45-55%。
实施例4 凝胶剂的制备
将药材金银花125g、板兰根75g、细辛45g、野菊45g、鱼腥草75g、青蒿60g称重,混合,用微波提取,用90%乙醇3200ml浸泡20min,微波功率340w,提取45min,减压浓缩至320ml,冷藏,离心除去沉淀,1%的活性炭脱色,温度60℃,脱色1小时,然后加入对羟基苯甲酸乙酯1g,Carbopol 940 10%,甘油50g,冰片20g,加水至1000g。绿原酸不低于1.0mg/ml,挥发油不低于0.1ml/100g。
实施例5 气雾剂的制备
(1)提取物的制备将金银花900g、野菊900g、板兰根900g、细辛540g、鱼腥草900g称重,混合,加入70%的乙醇40L,浸泡30分钟,微波功率4000w,提取15分钟,过滤,减压浓缩至(1∶1)4L。
(2)制剂制备
中药提取物 570g
甘油 50g
吐温 10g
氮酮 10g
甲基丙烯酸酯 50g
F12 50g
丙二醇 100ml
乙醇加至 1000ml
制备:冰片4g溶于乙醇中,与处方中其他药物混合,灌装于气雾瓶中。测得绿原酸含量不低于1.5mg/ml,挥发油不低于0.1ml/ml,pH4.5-5.5,乙醇醇度45-55%。
实施例6软膏剂的制备
(1)提取物的制备第一步采用超临界提取挥发油,将金银花2000g、板兰根2000g、鱼腥草800g、细辛720g 合,粉碎,装入萃取釜中,控制压力270kg,温度50℃,提取时间为3小时。(挥发油得率为0.3578%);第二步采用传统提取,取超临界提取后药渣500g,用50%乙醇5000ml热回流,提取2次,每次2小时,减压浓缩,加入2倍量乙醇使沉淀,冷藏过夜,离心,取上层,减压浓缩至相对密度为1.20mg/ml,作为传统工艺提取物待用。
(2)制剂制备
处方
超临界提取物 9g
传统工艺提取物 300g
羊毛脂 50g
对羟基苯甲基乙酯 1g
凡士林加至 1000g
制备:凡士林、羊毛脂加热融化,趁热加入提取物。测得绿原酸含量不低于1.5mg/ml,挥发油不低于0.1ml/ml。
实施例7搽剂的制备
采用超临界提取(使用乙醇做夹带剂)与微波提取
第一步采用超临界提取挥发油,将金银花2000g、板兰根2000g、野菊花800g、细辛720g混合,粉碎,装入萃取釜中,控制压力270kg,温度50℃,加入90%乙醇3L做夹带剂,提取时间为3小时, 收集萃取液2.8L,离心取上清夜;超临界后药渣用微波提取,加入30%的乙醇40L,微波功率2000W,提取60分钟,过滤,减压浓缩至(1∶1),将超临界提取物与微波提取物合并,加乙醇至7000ml。测得绿原酸含量不低于1.5mg/ml,挥发油不低于0.1ml/100ml,浸膏得率9.57%。
实施例8喷雾剂的制备
用微波萃取与传统工艺相结合
板兰根1500g用微波提取,用90%乙醇1200ml浸泡20min,微波功率680w,提取60min,减压浓缩至1500ml;金银花1500g、野菊花1500g、细辛900g、青蒿720g混合,加70%乙醇10000ml,浸润7天,以3ml/min速度渗滤,收集渗滤液,合并板兰根提取液,加冰片40g,使液体总量达15000ml。灌装于喷雾瓶中,30ml/瓶,测得绿原酸含量不低于1.5mg/ml,挥发油不低于0.1ml/100ml,醇度45-55%。