CN1434053A - 知母提取物及其制备方法和用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及医药技术领域，是知母提取物及其制备方法和将知母提取物用于制备防治糖尿病药物的用途。将知母药材用含水乙醇热提或冷浸得提取液，采用大孔吸附树脂分离，精制知母提取物。知母提取物的主要活性成分是芒果苷及新芒果苷，二者总含量高达50％以上，芒果苷与新芒果苷的含量比为1∶1～5∶1。经动物试验，能有效防治糖尿病，所以知母提取物可用于制备防治糖尿病的药物。

Description

知母提取物及其制备方法和用途

技术领域：

本发明涉及医药技术领域，是知母提取物及其制备方法和将知母提取物用于制备防治糖尿病药物的用途。

背景技术：

知母为百合科植物知母Anemarrhena asphodeloides Bunge的根茎，具有滋阴降火、润燥滑肠的功效，临床多用于消渴证。目前知母药用时主要为单味知母饮片或与其他中药配伍煎汤后服用。

知母的化学成分主要为皂苷、黄酮类成分，其中知母的黄酮类成分主要为芒果苷(mangiferin)、新芒果苷(neomangiferin)。有报道，自发性糖尿病高血清胰岛素动物模型KK-Ay小鼠(II型糖尿病的一种有效的动物模型)口服芒果苷或新芒果苷3周后降糖作用明显，能降低胰岛素抵抗，而对正常小鼠无明显作用(详见：1、Planta Med，1997，63(4)：320-2；2、Biol Pharm Bull，1998，21(12)：1389-90；3、Phytomedicine，2001，8(2)：85-7)。

发明内容：

本发明提供一种从知母中制备提取物的方法，经动物试验，口服制得的知母提取物，可显著降低糖尿病模型动物的血糖值。因此，本发明所制备的知母提取物可用于制备防治糖尿病的药物。

本发明制备方法为：

将知母粉碎后，用含水乙醇热提或冷浸，提取液浓缩后离心或过滤，取上清液或过滤液进行大孔树脂吸附，先用水淋洗除去杂质，再用含水低级醇洗脱，洗脱液浓缩至一定体积，静置，析出沉淀，过滤，将沉淀干燥粉碎得提取物1；在过滤液中加入乙醇醇沉，弃沉淀，再将上清液浓缩至干后干燥粉碎，或将上清液浓缩后喷雾干燥，得提取物2；合并提取物1与提取物2并混合均匀，即为本发明知母提取物。

获得的知母提取物成分分析：经硅胶、sephadexLH-20、ODS等反相色谱担体柱色谱获得了2个化合物，即芒果苷和新芒果苷，用化学、波谱法测定结构，化学结构通式如下：

            其中：芒果苷的R基团为H

                  新芒果苷的R基团为Glu(葡萄糖)

所以，知母提取物主要是芒果苷与新芒果苷的混合物，用HPLC定量分析表明，芒果苷与新芒果苷的含量总和占知母提取物的50％以上，且芒果苷与新芒果苷的含量比为1∶1～5∶1。生物活性测定：

制作糖尿病模型小鼠：ICR种小鼠，雌雄兼用，体重20g左右，先测空腹血糖值，选用血糖值正常者，然后一次性腹腔注射链佐菌素柠檬酸溶液260mg/kg，之后按胰岛素维持量，每天皮下注***蛋白锌胰岛素注射液0.2U/只，连续注射21天。末次注***蛋白锌胰岛素后7小时禁食12小时，再次测定空腹血糖值，取血糖值16.0mmol/L以上者作为糖尿病模型小鼠。

选75只糖尿病模型小鼠，按血糖值分为5组：溶剂对照组、阳性药(吡格列酮30mg/kg)对照组以及本发明知母提取物小、中、大剂量组(20，60，180mg/kg)。每组各15只。

每天固定时间，灌胃给药，同时每只小鼠继续皮下注***蛋白锌胰岛素(0.2U/只)，每日1次，连续7天，末次给药前禁食10小时，给药后2小时(继续禁食)测定血糖，比较各组给药前后血糖降值(见表1)。继续灌胃给药7天，但各组均停止注***蛋白锌胰岛素，同法测定血糖，比较各组血糖降值(见表2)。

表1知母提取物并同时注射小量胰岛素对糖尿病模型小鼠血糖影响(x±s)

              药物剂量          血糖(mmol/L)              血糖降值组别

              (mg/kg)       给药前        给药后          (mmol/L)模型对照组           -       20.45±2.75   19.01±2.96       1.44±2.57阳性药物对照组       30      20.33±2.55   6.68±1.51^**     13.65±3.16^**知母提取物组         20      20.26±2.76   16.53±2.76^*     3.73±2.40^*知母提取物组         60      20.44±2.62   10.23±1.78^**    10.21±2.76^**知母提取物组         180     20.64±2.79   7.85±2.66^**     12.79±2.31^**P＜0.05，^**P＜0.01与模型对照比较

表2知母提取物对不同时注射小量胰岛素的糖尿病模型小鼠血糖影响(x±s)

                   剂量            血糖(mmol/L)             血糖降值组别

                  (mg/kg)      给药前         给药后       (mmol/L)模型对照组              -        20.45±2.75    17.37±2.77    3.08±3.94阳性药物对照组          30       20.33±2.55    16.99±2.35    3.34±2.62知母提取物组            20       20.26±2.76    17.56±2.63    2.70±2.47知母提取物组            60       20.44±2.62    17.81±2.74    2.63±3.16知母提取物组            180      20.64±2.79    15.75±3.67    4.89±3.87

从表1可看出，联合使用小剂量胰岛素，知母提取物3个剂量均能够显著降低模型小鼠的血糖水平。从表2可看出，不使用小剂量胰岛素，知母提取物3个剂量对模型小鼠的血糖水平均无显著影响。结果表明，本发明所获得的知母提取物具有确切的降血糖作用，其作用机制可能与提高胰岛素敏感指数有关。故本发明所获得的知母提取物可用于制备防治糖尿病药物。具体实施方式：

将粉碎的知母药材用20～95％乙醇热提，首次溶媒用量约为生药量的4～8倍；或将粉碎的知母药材用20～95％乙醇渗漉提取，溶媒用量约为生药量的4～12倍；提取液浓缩，浓缩液离心或过滤；浓缩液的离心上清液或过滤液通过大孔树脂吸附(大孔树脂为以苯乙烯为架桥材料的聚苯乙烯型多孔性吸附树脂，如D101、D201、ZTC-1、AB-8、1300-1型大孔树脂等)，用水淋洗除去杂质；再用含水低级醇洗脱，低级醇为甲醇、乙醇或丙醇等C₁～C₅醇类，其浓度为15～25％，用量为生药量的5～15倍；收集低级醇洗脱液，浓缩至无醇，静置后有沉淀析出，离心或过滤，得沉淀，为提取物1；其离心上清液或过滤液再用乙醇醇沉，乙醇终浓度为70～95％，弃沉淀，上清液或浓缩至干，干燥粉碎得提取物2，或浓缩后喷雾干燥，也可得提取物2；合并提取物1与提取物2并混合均匀，即为本发明知母提取物，成品收率为生药量的1.0％以上。

下面给出最佳实施例进一步说明本发明但并不对本发明限制。

实施例1

100公斤粉碎后的知母药材，投入提取罐，在90～100℃依次用70％乙醇400升热提3次，每次提取时间为90分钟，合并3次提取液，浓缩至80升，过滤，将滤液用蒸馏水调节至100升。再缓缓通过装有350升ZTC-1型大孔树脂(天津正天成澄清技术有限公司生产)的吸附柱，用500升蒸馏水淋洗除去杂质；再用1000升20％乙醇洗脱，收集洗脱液，浓缩至10升，静置24小时，沉淀析出，过滤，干燥粉碎后得浅黄色沉淀0.4公斤，为提取物1；再将滤液在搅拌下缓缓加入100升95％乙醇，静置12小时，离心，并沉淀上清液浓缩至干，干燥粉碎后得黄色粉末1.6公斤，为提取物2；合并提取物1与提取物2并混合均匀，即为本发明知母提取物，共重2.0公斤，按生药量计得率为2.0％。

Claims (7)

1.一种知母提取物的制备方法，包括如下步骤：

(1)提取

知母粉碎后，用含水乙醇热提或冷浸得提取液，提取液浓缩后离心或过滤，弃沉淀，上清液或过滤液备用；

(2)吸附洗脱

上述上清液或过滤液经大孔树脂吸附、水淋洗除去杂质后，用含水低级醇洗脱得洗脱液；洗脱液浓缩至一定体积，静置，析出沉淀，过滤，所得沉淀为提取物1，过滤液备用；

(3)纯化

在过滤液中加入乙醇醇沉，弃沉淀，将上清液浓缩至干，得固体物为提取物2；或将上清液浓缩后喷雾干燥，也可得提取物2；

(4)成品制备

合并提取物1与提取物2并混合均匀，即为知母提取物。

2.根据权利要求1所述的知母提取物的制备方法，其特征在于所用的大孔树脂为聚苯乙烯型多孔性吸附树脂。

3.根据权利要求1所述的知母提取物的制备方法，其特征在于所说的洗脱液含水低级醇为C₁～C₅的低级醇。

4.根据权利要求3所述的知母提取物的制备方法，其特征在于含水低级醇洗脱液浓度为15～25％。

5.权利要求1、2、3、4所述知母提取物的制备方法所制得的知母提取物。

6.根据权利要求5所述的知母提取物，其特征在于芒果苷与新芒果苷的含量比为1∶1～5∶1。

7.根据权利要求5或6所述的知母提取物用于制备防治糖尿病药物的用途。