CN1398182A

CN1398182A - 用于皮脂腺疾病的胆甾醇酯和蜡酯合成的双重抑制剂

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Publication number: CN1398182A
Application number: CN01804520A
Authority: CN
Inventors: R·霍曼
Original assignee: Warner Lambert Co LLC
Current assignee: Warner Lambert Co LLC
Priority date: 2000-02-02
Filing date: 2001-01-23
Publication date: 2003-02-19
Also published as: UA75345C2; SK10972002A3; AP2002002612A0; DE60110897D1; EP1263421B1; US20030060507A1; KR20020073574A; MXPA02007309A; GEP20043286B; ZA200206075B; DE60110897T2; DZ3288A1; HUP0301010A3; YU57502A; OA12173A; EP1263421A2; JP2003531113A; WO2001056556A2; NO20023659L; US6730703B2

Abstract

本发明提供一种治疗皮脂腺疾病的方法，该方法包括给需要该治疗的患者施用有效量的命名为[(2，4，6－三异丙基－苯基)乙酰基]－氨基磺酸2，6－二异丙基－苯基酯的化合物或其药学可接受盐。具体而言，提供了治疗皮脂腺疾病的方法，其中所述疾病选自皮脂溢、痤疮、口周皮炎、酒渣鼻和皮质类固醇引起的痤疮样损害。本发明提供治疗痤疮的方法，例如绿痤疮、睫状肌痤疮、囊性痤疮、角化性痤疮、寻常痤疮、老年痤疮和药物性痤疮。

Description

用于皮脂腺疾病的胆甾醇酯和蜡酯合成的双重抑制剂

发明背景

本发明涉及一种应用命名为[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯的化合物或其药学可接受盐甾治疗皮脂腺疾病中的方法。具体而言，本发明提供了治疗皮脂腺疾病的方法，其中所述疾病选自皮脂溢、痤疮、口周皮炎、酒渣鼻和皮质类固醇引起的痤疮样损害。

痤疮是一类与多种病因有关的皮肤疾病。这类痤疮包括氯痤疮、睫状肌痤疮、囊性痤疮、角化性痤疮和寻常痤疮。在其寻常痤疮中，其主要出现在面部和躯干区域，影响患者的外观。它可能会带来更多的精神痛苦，并且从身体的观点看，比许多其他疾病更加严重地折磨病患者。

痤疮家族疾病共同的基本损害是毛囊皮脂腺囊的粉刺或″黑头″。这种情况可以较轻且短暂同时只有少数黑头，其可以很容易地通过挤压排出并且可以不必担心；或者这种情况会较严重，长时间持续并且非常有损于容颜，同时在更加严重的情况中会引起囊性损害并常常遗留下永久性瘢痕。

痤疮恶化中可能会出现毛囊中首先充入粘性、角质的物质。这种角质物质的嵌塞就是白头和黑头粉刺。由于细菌在这些角质嵌塞中的生长，毛囊破裂引发了疾病的炎性期，其为脓疱、丘疹、囊肿和小结节的形式。虽然业已利用许多不同的方式来治疗这种疾患，但没有一种方法普遍性有效，而且绝大多数具有不良副作用。

常用于痤疮治疗的一种方法是采用″去皮″，即，作为收敛剂，在较轻的情况中用这种试剂引起表皮脱落同时除去一些角质嵌塞。在存在脓疱或囊性损伤的较严重情况中，同样可以通过切口排除并排放出包含物。迄今为止已经利用了许多其他方法，例如：疫苗疗法，协助控制慢性感染并增强患者对葡萄球菌的抗性；可的松类甾族化合物；激素疗法，其仅仅适用于可以接受常规***避孕方案的女性患者；抗菌疗法，用于治疗大脓疱或囊性痤疮，其中可以用四环素、青霉素、红霉素或其他抗菌剂治疗患者，并且在某些情况中，可以采用一般性外科皮肤平刨术。激素和抗菌剂的全身性给药业已出现某些治疗功效，但对于慢性治疗来说是不可接受的。

有人建议口服施用大剂量的维生素A对痤疮有益(Straumford J.V.，″维生素A：其对痤疮的作用″，Northwest Med.，August 1943；42：219-225)，虽然其他研究人员发现其无效(Anderson J.A.D.等.，″维生素A在寻常痤疮中″，Brit.Med.J.，August 1963；2：294-296；LynchF.W.等，″用维生素A治疗寻常痤疮，″Arch Derm.，March 1947；55：355，357；和Mitchell G.H.等，″肌肉内注射维生素A对寻常痤疮治疗的结果″Arch.Derm.，October 1951；64：428-430)。

迄今为止发现无一普通局部治疗特别有效。业已局部使用维生素A酸(Beer Von P.，″Untersuchungen ber die Wirkung Vitamin A-Saure，″Dermatologica，March 1962；124：192-195和Stuttgen G.，″ZurLokalbehandlung von Keratosen mit Vitamin A-Saure，″Dermatologica，February 1962；124：65-80)，在那些全身角化性疾病中获得良好的结果，所述疾病对口服高剂量的维生素A具有应答。其中用Beer和Stuttgen治疗的那些人是患有痤疮的患者；然而，这些被调查人员报告对于这种疾病没有有效的结果。

Goldstein J.A.等在″sotretinoin和etretinate对痤疮和皮脂腺分泌的对比效果″J.Am Acad Dermatol，1982；6：760765中描述了用异维甲酸和依曲替酯治疗痤疮。Shapiro S.S.等在″潜在治疗物质在痤疮治疗中的评估″《Phannacology of Retinoids in the Skin.Pharmacol.Skin》Reichert和Shroot，编辑，Karger，Basel，1989；3：104-122中讨论了用多种可能有效的物质治疗痤疮。

Lambert R.W.和Smith R.E.在J.Invest Derm，1989；93(2)：321-325中业已进行讨论了″13-顺式视黄酸对于仓鼠睑板腺的作用″，而Lowe N.J.和David M.在″牛皮癣中的全身性视黄醛衍生物：对比功效和毒性″《Phannacology of Retinoids in the Skin.Pharmacol.Skin》Reichert and Shroot编辑，Karger，Basel，1989；3：104-122中讨论了视黄醛衍生物(retinoids)对牛皮癣的作用。

美国专利号3,729,568涉及维生素A酸(视黄酸或维甲酸)在寻常痤疮治疗中的应用。

国际专利申请PCT/US92/06485教导了维生素A衍生物在包括痤疮在内的皮肤疾病中的治疗。

美国专利号4,703,110描述了对位取代的苯甲酸衍生物在包括囊性痤疮在内的皮肤病的治疗中的应用。

美国专利号4,927,928教导了苯甲酰胺类化合物在具有炎性和/或免疫变应性成分的皮肤病的治疗中的应用，包括寻常痤疮、老年性痤疮，和药物性或职业性痤疮。

美国专利号4,716,175(1987年12月29日授权)公开了ACAT抑制剂，其包括命名为2，2-二甲基-N-(2，4，6-三甲氧基苯基)-十二烷酰胺的化合物。该化合物具有下面的结构：

该专利在此引入作为参考。

欧洲专利申请号EP0699439A2公开了有效治疗皮脂腺疾病，特别是痤疮的ACAT抑制剂。本申请在此引入作为参考。但化合物[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯没有公开在EP0699439A2或其中引入的参考文献中。

抑制酰基辅酶A：胆固醇基(cholesteryl)转移酶的化合物被称为ACAT抑制剂。一种ACAT抑制剂[(2，4，6-三异丙基苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯及其制备方法公开在美国专利号5,491,172及其分案5,633,287中，它们在此引入作为参考。命名为[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯的化合物通常也被称作avasimibe。该化合物可以应用在高胆固醇血症和动脉粥样硬化。

应用[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6二异丙基-苯基酯降低Lp(a)水平的方法在美国专利号6,117,909中有所教导。

应用[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6二异丙基-苯基酯防止血小板破裂的方法在待决专利申请60/163,814中(1999年11月5日提交)有所教导。

我们现在已经发现令人惊奇的和有益的结果。给予[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯可以抑制蜡酯合成。所以，现在发现[2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯对于皮脂腺疾病具有意想不到的有益效果，特别是痤疮、口周皮炎、酒渣鼻和皮质类固醇引起的痤疮样损害。痤疮选自，例如，绿痤疮、睫状肌痤疮、囊性痤疮、角化性痤疮、寻常痤疮、老年痤疮和药物性痤疮。

发明概述

本发明提供一种治疗皮脂腺疾病的方法，包括给需要所述治疗的患者施用有效量的命名为[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯的化合物或其药学可接受盐。还应理解本发明提供一种治疗哺乳动物、尤其是人体中的皮脂腺疾病的方法，包括施用治疗有效量的称作[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯的化合物及其药学可接受盐。

具体而言，本发明提供一种治疗皮脂腺疾病的方法，其中所述的疾病选自痤疮、酒渣鼻和皮质类固醇引起的痤疮样损害。本发明尤其提供治疗痤疮的方法，例如氯痤疮、睫状肌痤疮、囊性痤疮、角化性痤疮、寻常痤疮、老年痤疮和药物性痤疮。

附图简述

图1是一幅表示小鼠***腺和肝脏微粒体中胆固醇酯和蜡酯合成的百分抑制率相对于[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯和2，2-二甲基-N-(2，4，6-三甲氧基苯基)十二烷酰胺的抑制剂浓度的线图。

发明详述

本发明提供一种治疗皮脂腺疾病的方法，包括给需要所述治疗的患者施用有效量的命名为[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯的化合物或其药学可接受盐。化合物[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯(其通用名也称作avasimibe)首次公开在美国专利号5,491,172和分案专利美国专利号5,633,287中。avasimibe或式I的化合物具有下列结构：

本发明提供一种治疗哺乳动物、特别是人体中的皮脂腺疾病的方法，包括施用治疗有效量的式I的化合物[(2，4，6三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯或其药学可接受盐。

此外，本发明提供治疗上述皮脂腺疾病的方法，其中所述的疾病选自皮脂溢、痤疮、口周皮炎、酒渣鼻或皮质类固醇引起的痤疮样损害。

本发明提供治疗上述皮脂腺疾病的方法，其中所述的疾病选自氯痤疮、睫状肌痤疮、囊性痤疮、角化性痤疮、寻常痤疮、老年痤疮，或药物性痤疮。

本发明的一种优选实施方式提供治疗上述痤疮的方法，其中所述的痤疮选自氯痤疮、睫状肌痤疮、囊性痤疮、角化性痤疮、寻常痤疮、老年痤疮或药物性痤疮。

本发明进一步提供一种抑制需要所述治疗的人体中的皮脂生成的方法，包括给该人体施用皮脂生成抑制量的[(2，4，6-三异丙基-苯基)乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯或其药学可接受盐。这种方法适于治疗任何上述皮脂腺疾病，或者治疗或预防其他由于皮脂过度生成引起的病症，例如油性皮肤。在一个优选实施方式中，该化合物经局部给药。

本发明还提供一种药物组合物，其含有皮脂腺分泌抑制量的称作[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯的化合物和药学可接受载体。

本发明进一步提供一种药物组合物，其含有痤疮抑制量的命名为[(2，4，6-三异丙基苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯的化合物和药学可接受载体。此外，本发明提供一种药物组合物，含有痤疮抑制量的ACAT抑制剂[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯和药学可接受载体。

本发明还提供一种治疗痤疮的方法，包括给需要该治疗的患者施用痤疮抑制量的化合物[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯或其药学可接受盐。本发明还提供一种治疗痤疮的方法，包括给需要该治疗的患者施用含有痤疮抑制量的化合物[(2，4，6-三异丙基苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯和药学可接受载体的载体。另外，本发明提供了化合物[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯在制备治疗痤疮的药物中的应用。

而且，本发明提供了化合物[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯在制备治疗皮脂腺失调引起的疾病的药物中的应用。本发明还提供化合物[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯在制备在需要该治疗的患者中用于治疗由皮脂腺失调引起的疾病(包括痤疮)的药物组合物中的应用。

本发明进一步提供[(2，4，6-三异丙基苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯或其药学可接受盐在制备可以抑制人体中皮脂生成的药物中的用途。在一个优选实施方式中，所述的药物适合局部涂敷。

此外，本发明提供一种抑制AFAT的方法，包括给需要该治疗的患者施用AFAT抑制量的化合物[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯或其药学可接受盐。

本发明还提供一种抑制ACAT和AFAT的方法，包括给需要该治疗的患者施用ACAT和AFAT抑制量的化合物[(2，4，6-三异丙基-苯基)乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯。

Avasimibe业已显示出乎意料的抑制皮脂腺分泌的能力。这种活性有益于皮脂腺疾病的治疗，其中该疾病的一个组成特征在于皮脂的过度分泌。所以，Avasimibe可以有效治疗、特别是患有这类疾病的患者中的痤疮、口周皮炎、酒渣鼻和皮质类固醇引起的痤疮样损害。

Avasimibe尤其适合于痤疮的治疗，其包括氯痤疮、睫状肌痤疮、囊性痤疮、角化性痤疮、寻常痤疮、老年痤疮和药物性痤疮。痤疮是一种许多成年人和多数青少年患有的皮肤病。所以avasimibe被认为可以使许多人受益。

在此所用的术语″AFAT″是指酰基-辅酶A：脂肪醇酰基转移酶。

术语″ACAT″是指酰基-辅酶A：胆固醇基转移酶。

术语″患者″是指哺乳动物，其包括人体。

术语″蜡酯″是指由脂肪酸和长链醇(也称作脂肪醇)形成的酯。

术语″胆固醇酯″是指由脂肪酸和胆固醇形成的酯。

术语″皮脂″是指皮脂腺的分泌物，包括特别是甘油三酯、游离脂肪酸、蜡酯、角鲨烯、胆固醇和胆固醇酯。

本发明的化合物能够进一步形成药学可接受的盐，例如药学可接受碱加成盐。药学可接受碱加成盐是与金属或胺生成的，例如碱金属和碱土金属或有机胺。用作阳离子的金属的实例是钠、钾、镁、钙等。适当胺的实例是N，N’-二苄基乙二胺、氯普鲁卡因、胆碱、二乙醇胺、二环己基胺、乙二胺、N-甲葡糖胺和普鲁卡因(参见，例如，Berge S.M.等，″Pharmaceutical Salts，″J.of Pharma.Sci.，1977；66：1)。这些形式全部落入本发明的范围内。

通过以常规方式使游离酸与足够量的所需碱接触生成盐制备上述酸性化合物的碱加成盐。通过使盐形成与酸接触可以重新生成游离酸并且以常规方式分离出游离的酸。

游离酸形式在某些物理性质上、如在极性溶剂中的溶解度上多少不同于其各自的盐形式，但对于本发明的目的来说其盐等效于其各自的游离酸。

本发明的化合物可以以非溶剂化形式以及溶剂化形式存在，包括水合物形式。通常，溶剂化形式、包括水合物形式等效于非溶剂化形式并属于本发明的范围内。

本发明的化合物可以制备成并以多种不同的口服和非肠道剂型给药。所以，本发明的化合物可以通过注射给药，也就是静脉内、肌肉内、皮内、皮下、十二指肠内或腹膜内给药。另外，本发明的化合物可以通过吸入给药。例如经鼻内给药。而且，本发明的化合物可以经皮给药。对于所属领域技术人员来说显而易见的是，下列剂型可以含有式I的化合物或式I化合物的相应药学可接受盐作为活性成分。

为了从本发明的化合物制备药物组合物，药学可接受载体可以是固体或液体。固体形式的制剂包括，粉末剂、片剂、丸剂、胶囊、囊形片、栓剂和可分散颗粒剂。固体载体可以是一种或多种物质，其也可以作为稀释剂、矫味剂、增溶剂、润滑剂、助悬剂、粘合剂、防腐剂、片剂崩解剂或包封材料。

在粉末剂中，载体是细分的固体，其与细分的活性成分形成混合物。

在片剂中，活性成分与具有所需粘合性质的载体以适当比例混合并压缩成所需的形状和大小。

粉末剂和片剂优选含有5-约70％的活性化合物。适当的载体是碳酸镁、硬脂酸镁、滑石、蔗糖、乳糖、果胶、糊精、淀粉、明胶、黄蓍胶、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠、低熔点蜡、可可脂等。术语″制剂″包括活性化合物与作为载体的包封材料的制剂，得到一种胶囊，其中活性成分与或有或无的其他载体被一种与其有关的载体包围。同样地，包括扁囊剂和锭剂。片剂、粉末剂、胶囊、丸剂、扁囊剂和锭剂可以用作口服给药的固体剂型。

为了制备栓剂，首先使低熔点蜡，例如脂肪酸甘油酯的混合物或可可脂熔化并使活性成分均匀地分散在其中，如通过搅拌。随后将熔化的均匀混合物倾入普通大小的模具中，使其冷却并由此固化。

液体形式的制剂包括溶液、混悬剂和乳液，例如水或水-丙二醇溶液。为了非肠道注射，液体制剂可以在聚乙二醇水溶液中配制为溶液。

通过把活性成分溶解在水中并根据需要加入适当的着色剂、矫味剂、稳定剂和增稠剂可以制备适合口服的水溶液。

通过把细分的活性成分分散在带有粘性物质的水中，如天然或合成树胶、树脂、甲基纤维素、羧甲基纤维素钠和其他已知助悬剂中可以制备适合口服使用的水性混悬液。

还包括那些在使用之前可立刻转化为用于口服给药的液体形式制剂的固体形式的制剂。此类液体形式包括溶液、混悬液和乳液。这些制剂除了含有活性成分以外还可以含有着色剂、矫味剂、稳定剂、缓冲剂、人工和天然甜味剂、分粉末剂、增稠剂、增溶剂等。

还包括局部形式的制剂，例如凝胶、霜剂、洗剂、溶液、软膏等。局部形式的制剂还包括例如胶冻、糊剂、软膏、油膏等。局部形式的制剂可以通过将一种或多种成膜剂与细分形式和溶液形式的活性成分混合来制成。成膜剂包括，硬脂醇、鲸蜡醇、丙二醇、甘油、羧甲基纤维素、羟乙基纤维素等并且为所属领域技术人员熟知。

用于涂覆本发明的活性化合物的载体的实例包括水或水-醇溶液，水包油或油包水型溶液，乳化凝胶，或两相体系。优选地，本发明的组合物是洗剂、霜剂、奶液、凝胶、面膜、微球或毫微球的形式，或囊形分散体。在囊形分散体的情况中，构成囊泡的液体可以是离子或非粒子型的，或它们的混合物。

除了上述成膜剂以外，可以在本发明局部给药的组合物中掺入多种其他成分以提高其治疗功效和稳定性。这些包括防腐剂如苄醇和适当的促进皮肤渗透的辅剂，例如癸二酸二乙酯(diethyl sebecate)等。这些组分是所属领域技术人员熟知的。

所述的药物制剂优选是单位剂型。在此类剂型中，制剂被进一步分为含有适量活性成分的单位剂量。所述的单位剂型可以是包装的制剂，包装中含有离散量的制剂，如包装的片剂、胶囊和存在于小瓶或安瓿中的粉末剂。此外，单位剂型可以是胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂本身，或者它可以是适当数量的任意上述剂型的包装形式。

活性成分在单位剂量制剂中的量可以根据具体用途或活性成分的效价在1mg-1000mg、优选10mg-100mg内变化或调整。如果需要，所述的组合物也含有其他相容的治疗剂。

在作为治疗皮脂腺疾病的药物的治疗应用中，本发明的药学方法中所用的化合物可以以约1mg-约100mg/kg/天的起始剂量给药。所以，所述的有效量、痤疮抑制量、皮脂腺分泌抑制量、AFAT抑制量，以及ACAT和AFAT抑制量一般是在约1mg-约100mg/kg体重/天内变化。日剂量范围优选是约25mg-约75mg/kg。

在决定有效量、痤疮抑制量、皮脂腺分泌抑制量、皮脂生成抑制量、AFAT抑制量，以及ACAT和AFAT抑制量时，诊断医生要考虑许多因素。所以，剂量可以根据患者的需要、被治疗病症的严重性以及化合物所采用的制剂而变化。针对具体情况决定适当的剂量属于该领域技术人员的职权范围内。通常，治疗是从小于该化合物的最佳剂量的剂量开始。此后，通过小的增量来增加剂量直至在该情况下达到最佳效果。一般地，如果必要全天日剂量可以细分并在当天内分次给药。

下面是一种口服制剂的实例。片剂制剂：

组分含量(mg)[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基- 25氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯

乳糖 50

玉米淀粉(用于混合) 10

玉米淀粉(糊) 10

硬脂酸镁(1％) 5

总量 100

所述的氨基磺酸、乳糖和玉米淀粉(混合用)均匀混合。使玉米淀粉(糊)悬浮在200mL的水中并加热搅拌形成糊。用该糊将混合的粉末制粒。使湿的颗粒通过8号手筛且在80℃下干燥。干颗粒用1％硬脂酸镁润滑并且压缩为片剂。将该片剂给予患者、例如人体，每天4次用于治疗皮脂腺疾病。

制备具有下面配方的口服溶液：口服溶液：

组分重量百分比((2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨 2.0基磺酸，2，6-二异丙基-苯基酯

乙醇 10.0

苄醇 1.0

薄荷矫味剂 0.2

香草醛 0.2

多氧乙基醚40 0.1

蔗糖 50.0

纯水余量

合并组分并混合形成均匀溶液。

制备具有下面组成的凝胶：局部用凝胶：

组分重量百分比[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基 0.50

磺酸，2，6-二异丙基-苯基酯

丙二醇 20.00

乙醇 20.00羧乙烯基聚合物[Carbomer 940(商标)] 1.00

羟乙基纤维素 0.40

苄醇 1.00

氢氧化钠1N 至pH6

蒸馏水余量

将除了氢氧化钠之外的组分合并生成均匀的分散体。加入氢氧化钠使该混合物胶凝生成备用的半固体。

制备组成如下的霜剂：局部用霜剂：

组分重量百分比[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基 0.50

磺酸，2，6-二异丙基-苯基酯

硬脂酸 7.00

硬脂醇 5.00

鲸蜡醇 2.00

甘油 10.00

十二烷基硫酸钠 1.00

对羟基苯甲酸丙酯 0.05

对羟基苯甲酸甲酯 0.25

乙二胺四乙酸二钠 0.05

蒸馏水余量

将前四种组分加热至约70℃生成均匀的熔融物。混合其余的组分，加热至约75℃，混合下将其加入到前面制备的熔融物中。由此形成的乳液随后匀浆并冷却，生成柔滑的白色霜剂。

制备具有下面组成的洗剂：局部用洗剂：

组分重量百分比[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基 0.50

磺酸2，6-二异丙基-苯基酯

甘油一硬脂酸酯 1.00

棕榈酸异丙酯 4.00

聚乙二醇400二硬脂酸酯 2.00

甘油 10.00

对羟基苯甲酸甲酯 0.10

鲸蜡基硫酸钠 5.00

蒸馏水余量

先将前四种组分加热至约70℃。随后搅拌下加入到其余组分的混合物中，其余组分混合物的温度也约为70℃。将乳液适当匀浆并冷却生成柔滑的白色可倾倒洗剂。

制备具有下面组成的局部用溶液：局部用溶液：

组分重量百分比[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基-氨基 0.50

磺酸，2，6-二异丙基-苯基酯

丙二醇 20.00

乙醇 50.00

苄醇 1.00

乙二胺四乙酸二钠 0.01

没食子酸丙酯 0.10

柠檬酸 0.20

氢氧化钠1N 至pH6

蒸馏水余量

将除氢氧化钠之外的所有组分搅拌混合，并且用1N氢氧化钠将所得溶液的pH调至6，得到自由流动的、快速干燥的局部用溶液。

本发明的材料和方法如下所述：I.微粒体的制备

溶液：

A.洗涤缓冲液(300mM蔗糖，5mM DTT)102.7g蔗糖+0.77g二硫苏糖醇(DTT)+水至1L。

B.均化缓冲液(洗涤缓冲液含有亮抑蛋白酶肽和乙二醇-双(β-氨基乙基醚)四乙酸[EGTA])。制备如上所述的含有25mg亮抑蛋白酶肽和380mg EGTA的洗涤缓冲液。

C.磷酸盐缓冲液(0.2M，pH 7.4)，混合100mL的1M KH₂PO₄和100mL的3M K₂HPO₄并用水使之达到1000mL。检测pH并用0.1N H₃PO₄或0.1N KOH调至pH 7.4。微粒体的分离：

从大鼠或小鼠取出***腺(PG)

a)用***麻醉大鼠或小鼠，取出PG且置于含有洗涤缓冲液的烧杯(冰冷)内。

b)一旦可以，将PG在Potter-Elvehjem匀浆器中与15mL的均化缓冲液一起均匀化。匀浆器保持在小冰浴上。操作活塞直至它10次触到管的底部。

c)用均匀化缓冲液稀释至200mL的体积。

d)将匀浆倾入置于冰浴中的15×100mm sorvall管内。各管含有13.5mL至刻度。

e)在Sorvall离心机中、在5℃和10,000rpm(12,000×G)下离心15分钟。

f)用药刀的平刀片除去浮在顶部的脂肪并将上清液倾入新管内。

g)重复步骤e和f。

h)小心地将尽可能多的上清液转移到超速离心瓶中但不打散管底部的碎片，用于50 Ti或60 Ti Beckman超速离心器。该管保持在冰浴中。

i)在Beckman超速离心机中、在105,000×g下、在14℃下离心1小时。

j)弃去上清液。

k)向置于水浴中的瓶中加入1mL的0.2M KPO₄缓冲液pH 7.4至瓶的一半。用聚四氟乙烯棒将全部沉淀团刮松并转移到15mL匀浆器中。用1mL的缓冲液洗涤瓶子且转移到一个只有沉淀团但没有缓冲液的瓶内。用手轻轻均化。

1)将等份试样置于冷冻管(Nalgene^TM)中且储藏在液氮中。微粒体的活性至少能保持2年。

m)通过劳里(Lowry)法测定匀浆的蛋白浓度。用180μL盐水稀释20μL并测定2×10μL和2×20μL。注：KPO₄会在Lowry法中导致沉淀形成(Lowry O.H.，Rosebrough N.T.，Farr A.I.和Randal R.J.，J.Biol.Chem.，1951；193：265-275)。期望的蛋白浓度是20mg/mL大鼠或小鼠PG微粒体。II.ACAT试验

溶液：

A.蔗糖缓冲液(300mM蔗糖，40mM KH₂PO₄，50mM KCl，30mM EDTA，pH7.4)。制备1M磷酸盐缓冲液。将70.89g的K₂HPO₄和12.65g KH₂PO₄溶解在480mL水中。用KOH或H₃PO₄根据需要调整pH 7.4。用水调整体积至500mL。将20mL的1M磷酸盐缓冲液与1.865g KCl、51.35g蔗糖和5mgEDTA混合。用水调整体积至480mL，按上述方法调节pH至7.4且用水调至500mL。使终溶液通过0.45μm过滤灭菌单元(例如，Nalgene450-0045)。

B.1％甲基-β-环糊精：10mL蔗糖缓冲液加100mg甲基-β-环糊精。

C.[4-¹⁴C]胆固醇或[1-¹⁴C]十六烷醇。蒸发除去瓶中的甲苯。使放射性标记重新悬浮在0.1mL 2-丙醇中。

D.油基辅酶A(1mM存在于蔗糖缓冲液中)。将10.3mg油基辅酶A(Sigma 0-7002)溶解在10mL蔗糖缓冲液中。注：保存在-10℃下。在分析测定之前即时用蔗糖缓冲液稀释5倍至200μM。

E.[¹⁴C]胆固醇标记的微粒体或[¹⁴C]十六烷醇标记的微粒体。用蔗糖缓冲液将储备微粒体的瓶子稀释至4mg蛋白/ml。对于每1mL的稀释微粒体溶液来说，使用玻璃注射器(Hamilton，GASTIGHT，1702)并且通过把注射针头浸没在该微粒体溶液中把2.5μL的放射性标记物转移至上述稀释的微粒体中，并且在射出注射器的内容物同时旋转。采用微粒体溶液冲洗1次注射器。通过液体闪烁计数(LSC)测定小份试样的溶液中的dpm。需要约4×10⁶dpm/mL在微粒体溶液中。

F.酸中止溶液(0.5％H₂SO₄)。取0.5mL的36N H₂SO₄(浓)加入到100mL的水中。

G.试验化合物溶液。称重试验化合物制备1mM或4mM的二甲基亚砜(DMSO)储备溶液。这些溶液用来制备含有40倍试验化合物浓度的DMSO溶液。这些溶液可以在测定之前24小时制备并保存在室温下。ACAT

测定方法：

a)通过在两只试管的每只内加入5μL的试验化合物溶液来制备一式两份样品。对照和空白样品不含有抑制剂。注：在110×17mm聚丙烯圆锥形底的管(Thermowells)内进行孵育。

b)向各管内加入100μL的1％mβCD溶液。

c)向各管内加入20μl的所需浓度(mg/mL)放射标记的微粒体。

d)试管在37℃的振摇水浴中孵育30分钟。

e)通过向除空白之外的所有试管内加入10L的299μM油基辅酶A来引发该反应。

f)向空白中加入10μl蔗糖缓冲液。

g)加入油基辅酶A后三分钟，加入10μL的H₂SO₄中止溶液停止该反应。

h)将40μL的酸化溶液转移到Whatman LK6D硅胶TLC平板的预吸附区域，其随后在热平板上干燥5分钟并且在三甲基戊烷/***/乙酸(75∶25∶2)中展开。检测含有放射标记物的色带并且通过磷光成象借助分子动力学磷光成像仪(phosphorimager)定量分析。III.数据分析和统计学评估

TLC可以使游离醇与其酯分开。通过磷光成像测定这些色带中各自的放射性的相对量。该数据用来计算形成的酯的分数，用E/E+A表示，其中

(％抑制率＝[(Ec/Ec+Ac)-(Et/Et+At)]×(Ec+Ac/Ec)×100)其中，E＝酯带的强度和A＝醇带的强度。通过数据对逻辑函数的非线性最小二乘方拟合计算出产生50％抑制率(IC₅₀)时的抑制剂浓度：

Y=100/1+(X/C)^b其中Y是百分抑制率，X是抑制剂浓度，C是IC₅₀并且b是独立拟合参数(independent fitting parameter)。

对于这个研究，我们假设-总体分布至少大致标准。-如果X₁，X₂，....X_N是正态分布中的随机样本，标准变量

具有t分布和n-1的自由度。-H_o：μ＝μ_o-Ha：μ＜μ_o对检验统计量T。当H_o是准确时，检验统计量具有t分布和n-1的自由度。当H_o是准确(“零分布”)时检验统计量的分布的常识能够构建舍弃域，其中I型误差概率被控制在预期的水平。

P(I型误差)=P(当其准确时H_o可以被舍弃)＝α

表1和图1表示[(2，4，6-三异丙基一苯基)一乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基一苯基酯(化合物1)和2，2-二甲基-N-(2，4，6-三甲氧基苯基)-十二烷酰胺(化合物2)抑制胆固醇酯(CE)和蜡酯(WE)合成的试验结果。利用小鼠肝脏微粒体标本得到CE合成抑制作用的数据。用小鼠***微粒体标本得到WE合成抑制作用的数据。表1中的数据表示为IC₅₀其是以微摩尔计的抑制50％合成时所需的抑制剂浓度。

表1.胆固醇酯(CE)和蜡酯(WE)合成的抑制作用

化合物序号 IC₅₀(μM)

CE WE

1 0.09 13.9

2 0.27 ＞100

对于各个化合物，蜡酯合成抑制作用和胆固醇酯合成抑制作用之间的差别表明不同的酶独立地对蜡酯合成和胆固醇酯合成起作用。数据进一步证实被称作ACAT抑制剂的化合物不一定就是AFAT的抑制剂，如化合物2的结果所示。Avasimibe(化合物1)的数据首次提供了能够同时抑制AFAT皮脂腺疾病的确定ACAT抑制剂的描述。这种令人惊奇的双重抑制活性有益于皮脂腺疾病的治疗，因为AFAT和ACAT的蜡酯和胆固醇酯产物分别是构成皮脂的主要部分，它们是在皮脂溢和有关痤疮发作期间由皮脂腺过度分泌的。总之，表1和图1的数据证实Avasimibe是第一种并且是目前仅有的可同时抑制ACAT和AFAT的化合物。Avasimibe对AFAT和ACAT的意外的双重抑制作用有益于患有以皮脂分泌过度为特征的疾病的患者，这是只能抑制ACAT的化合物所不能提供的。

附图详述

图1是2，2-二甲基-N-(2，4，6三甲氧基苯基)-十二烷酰胺(化合物2)对小鼠肝脏线粒体中胆固醇酯(CE)合成的百分抑制率以及[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯(化合物1)对小鼠***中的腺微粒体中蜡酯(WE)合成和在小鼠肝脏线粒体中CE合成的百分抑制率相对于0.01μM-100μM的抑制剂浓度的线图。由于IC₅₀＞100μM，化合物2对小鼠***腺微粒体中的WE合成的抑制作用没有表示在图1中。

在图1中：

▲表示[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯(化合物1)对小鼠***皮脂腺微粒体中的蜡酯合成的抑制作用数据点

●表示[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯(化合物1)对小鼠肝脏微粒体中的胆固醇酯的抑制作用数据点。

◆表示2，2-二甲基-N-(2，4，6-三甲氧基苯基)-十二烷酰胺(化合物2)对小鼠肝脏微粒体中胆固醇酯合成的抑制作用数据点。

图1中所示的抑制曲线表明，化合物1和2均为大鼠肝脏ACAT的有效抑制剂。然而，而化合物2不具有对小鼠***微粒体中WE合成的抑制作用，而化合物1意外地能够抑制WE合成，其IC₅₀＝13.9μM。

Claims

1.一种治疗皮脂腺疾病的方法，包括给需要该治疗的患者施用有效量的命名为[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基苯基酯的化合物或其药学可接受盐。

2.按照权利要求1的方法，其中所述疾病是皮脂溢。

3.按照权利要求1的方法，其中所述疾病是痤疮。

4.按照权利要求1的方法，其中所述疾病是氯痤疮。

5.按照权利要求1的方法，其中所述的疾病是睫状肌痤疮。

6.按照权利要求1的方法，其中所述疾病是囊性痤疮。

7.按照权利要求1的方法，其中所述疾病是角化性痤疮。

8.按照权利要求1的方法，其中所述疾病是寻常痤疮。

9.按照权利要求1的方法，其中所述疾病是老年痤疮。

10.按照权利要求1的方法，其中所述疾病是药物性痤疮。

11.一种药物组合物，含有痤疮抑制量的命名为[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯的化合物和药学可接受载体。

12.一种治疗痤疮的方法，该方法包括给需要该治疗的患者施用痤疮抑制量的命名为[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯的化合物或其药学可接受盐。

13.命名为[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯的化合物在制备用于治疗痤疮的药物中的用途。

14.按照权利要求1的方法，其中所述的疾病是口周皮炎。

15.按照权利要求1的方法，其中所述疾病是酒渣鼻。

16.按照权利要求1的方法，其中所述疾病是皮质类固醇引起的痤疮样损害。

17.一种药物组合物，其中含有皮脂腺分泌抑制量的命名为[(2，4，6-三异丙基-苯基)乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯的化合物和药学可接受载体。

18.命名为[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯的化合物在制备用于治疗由皮脂腺疾病引起的疾病的药物中的用途。

19.一种抑制AFAT的方法，包括给需要该治疗的患者施用AFAT抑制量的命名为[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯的化合物或其药学可接受盐。

20.一种抑制ACAT和AFAT的方法，包括给需要该治疗的患者施用ACAT和AFAT抑制量的命名为[(2，4，6-三异丙基-苯基)-乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯的化合物。

21.一种在需要所述治疗的人体内抑制皮脂生成的方法，该方法包括给该人体施用皮脂生成抑制量的[(2，4，6-三异丙基-苯基)乙酰基]-氨基磺酸2，6-二异丙基-苯基酯或其药学可接受盐。

22.按照权利要求21的方法，其用于治疗油性皮肤。