CN1332711C

CN1332711C - 施用glp－1分子的方法

Info

Publication number: CN1332711C
Application number: CNB038043653A
Authority: CN
Inventors: M·A·汗; B·E·琼斯; J·M·麦吉尔
Original assignee: Eli Lilly and Co
Current assignee: Amy Ball Technology Co ltd
Priority date: 2002-02-20
Filing date: 2003-02-07
Publication date: 2007-08-22
Anticipated expiration: 2023-02-07
Also published as: RU2332229C2; US20150202296A1; ES2614603T3; EP2409569A2; KR101165431B1; JP2010006836A; US8492330B2; US20050148497A1; CA2473340C; CA2473340A1; JP5657230B2; EP1478233A2; ZA200406626B; CN1635832A; PL209734B1; EP1478233B1; IL230315A; IL163278A; AU2003208945A1; US20140005106A1

Abstract

本发明包括证明口服吸收可行的制剂，其中包含GLP-1化合物和特定递送剂的制剂。

Description

施用GLP-1分子的方法

发明领域

本发明涉及用于口服给药的制剂，其中包括胰高血糖素样肽-1(GLP-1)化合物和特定的递送剂。该制剂的口服给药可以用于治疗2型糖尿病以及各种其他病症。

发明背景

在过去的几十年中，对糖尿病的治疗不断地得到改进。大约90％的有糖尿病的人患有2型糖尿病，也称为非胰岛素依赖的糖尿病(NIDDM)。2型糖尿病通常仍然产生胰岛素，但这样的胰岛素不能被身体的细胞有效地利用。这主要是因为对应于血糖水平的升高产生的胰岛素的量不足以允许细胞有效地吸收葡萄糖，所以降低血糖的水平。

大量的临床前和临床研究的数据表明，胰高血糖素样肽-1(GLP-1)化合物在治疗2型糖尿病和其他症状中有很大的前景。GLP-1诱导了大量的生物学作用，如刺激胰岛素分泌，抑制胰高糖血素的分泌，抑制胃排空，增强葡萄糖的利用，诱导体重降低。另外，临床前的研究表明，GLP-1也可以起作用来防止随疾病发展而发生的β细胞破坏。也许，GLP-1的最突出的特征是它刺激胰岛素分泌但没有血糖过少的危险的能力，这一特征是当利用胰岛素治疗或一些类型的口服治疗时可以看到的，这些治疗是通过增加胰岛素表达而起作用的。

但是，GLP-1治疗剂的开发是非常困难的。这主要是由于肽在制造过程中在溶液制剂中不稳定，并且在体内不稳定。利用GLP-1化合物治疗血糖过多或其他症状的唯一公开的临床研究包括配制GLP-1化合物，从而使它们可以通过皮下注射或通过连续的皮下输注或连续的静脉给药来递送。多数需要减重的2型糖尿病或肥胖患者是不会愿意接受可能一天有几次注射的治疗方案的。所以，需要开发GLP-1化合物治疗剂，可以通过或选的非侵入方法如通过口服来递送。

不幸的是，有许多影响口服递送肽的障碍。消化道的高酸含量和普遍存在的消化酶将经常在达到吸收位点之前降解蛋白质和肽。另外，许多肽不能有效地穿过小肠中的上皮膜的细胞到达血流中。最后，许多药物在消化道中的低pH水平时变得不溶，所以不能有效吸收。

在溶液制剂中相对不稳定的GLP-1化合物仅仅在相对狭窄的条件下保留在溶液中，并且当作为溶液制剂给药时在体内有一个相对短的半衰期的事实表明，这些化合物不可以通过口服途径有效地递送。所以，可以配制GLP-1化合物，使能够在口服给药后将生物活性分子吸收进血流中，这是出人意料的。

本发明包括与GLP-1化合物以非共价方式相互作用的特定递送剂分子的用途，所述方式使得化合物穿过肠胃道膜并且仍然保持治疗活性。尽管在本发明中利用的递送剂已经在一系列的美国专利中公开(参见例如，美国专利5,541,155；5,693,338；5,976,569；5,643,957；5,955,503；6,100,298；5,650,386；5,866,536；5,965,121；5,989,539；6,001,347；6,071,510；5,820,881；和6,242,495；同时参见WO 02/02509；WO 01/51454；WO 01/44199；WO 01/32130；WO 00/59863；WO00/50386；WO 00/47188；和WO 00/40203)，但包括GLP-1化合物与这些递送剂的口服给药制剂还没有被公开或建议。另外，许多参数影响了是否一个特别类别的化合物可以有效地结合一个或多个类别的递送剂来递送。例如，肽的构象，在某些配制条件下的分子上的表面电荷，溶解性特征(solubility profile)，作为配制成分的稳定性，以及蛋白酶消化的敏感性和体内稳定性都影响口服递送化合物的能力。

发明概述

本发明包括开发可以口服给药的包含GLP-1化合物和递送剂的新制剂。本发明提供了可以口服给药的制剂，其中含有GLP-1化合物和特定的递送剂。GLP-1化合物可以是天然的GLP-1；GLP-1片段；GLP-1类似物；天然GLP-1、GLP-1片段或类似物的GLP-1衍生物；和Exendin-3和Exendin-4；递送剂选自美国专利5,541,155；5,693,338；5,976,569；5,643,957；5,955,503；6,100,298；5,650,386；5,866,536；5,965,121；5,989,539，6,001,347；6,071,510；5,820,881；和6,242,495；和WO 02/02509；WO 01/51454；WO 01/44199；WO 01/32130；WO 00/59863；WO 00/50386；WO 0047188；和WO00/40203描述的递送剂。

优选的GLP-1化合物是在下面的一个或多个位置有修饰的类似物或类似物的衍生物：8，12，16，18，19，20，22，25，27，30，33和37，并且与Val8-GLP-1(7-37)OH比较，效力增强。优选的GLP-1化合物也如SEQ ID NO：1，SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：3，SEQ IDNO：4，SEQ ID NO：5，SEQ ID NO：6，SEQ ID NO：7，SEQ ID NO：8，SEQ ID NO：9，SEQ ID NO：10，SEQ ID NO：11，SEQ ID NO：12，SEQ ID NO：13或SEQ ID NO：14所示。更优选的GLP-1化合物是SEQ ID NO：2，SEQ ID NO：12，SEQ ID NO：13和SEQ IDNO：14所示的化合物。

优选的递送剂如表1所述。更优选的递送剂是选自表1中第1，2，4，5，6，9，10，11，13，14，15，20，21，22，23，24，26，28，30，31，35，36，38，39，40，41，42，43，44，46，51，52和54号的递送剂。

本发明也包括在需要刺激的受试者中刺激GLP-1受体的方法，所述的方法包括对受试者施用有效量的本文所述的口服制剂的步骤。需要刺激GLP-1受体的受试者包括非胰岛素依赖型糖尿病和肥胖症患者。

发明详述

在本说明书中利用的氨基酸的三字母缩写编码符合PCTAdministrative Instructions的附件C，附录2的表3中的列表和37C.F.R.§1.822(d)(1)(2000)。

为公开和描述本发明的目的，术语和缩写定义如下。

术语“制剂”如本文所用指GLP-1化合物和与其结合的特定的递送剂，可以口服给药，以致GLP-1化合物可以通过肠胃道进入***循环，并且具有结合GLP-1受体的能力，启动信号转导途径，导致产生促胰岛素活性。

术语“口服”是指通过口腔释放一种化合物，使得该化合物穿过胃、小肠或大肠进入全身循环。

术语“GLP-1化合物”是一些多肽，包括天然存在的GLP-1多肽(GLP-1(7-37)OH和GLP-1(7-36)NH₂)；GLP-1片段；GLP-1类似物；天然存在的GLP-1多肽、GLP-1片段或GLP-1类似物的GLP-1衍生物；Exendin-3和Exendin-4，其具有结合GLP-1受体能力，启动信号传导途径，导致产生促胰岛素活性(insulinotropicactivity)。

术语“促胰岛素活性”指应答升高的葡萄糖水平刺激胰岛素分泌，从而导致细胞吸收葡萄糖，降低血浆葡萄糖水平的能力。例如，利用实施例1所述的方法可以确定促胰岛素活性。如果在存在GLP-1分子时胰岛细胞分泌的胰岛素水平在背景水平以上，GLP-1分子具有促胰岛素活性

术语“DPP IV抗性”指具有扩展的代谢稳定性和提高的生物活性的GLP-1分子。例如DPP IV抗性可以利用实施例2中所述的方法来确定。如果存在DPP IV时GLP-1分子是具有DPP IV抗性的，GLP-1分子是具有比延伸的天然GLP-1更高的代谢稳定性。DPP IV抗性GLP-1分子可能在DPP IV识别位点(位置8)具有氨基酸变化，或DPP IV抗性肽可能具有附加的基团，可以限制DPP IV到达识别位点的可能性。

“GLP-1片段”是GLP-1(7-37)OH的N末端和/或C末端的一个或多个氨基酸或其类似物或衍生物截短后得到的多肽。描述GLP-1(7-37)OH的名称也应用到GLP-1片段。例如，GLP-1(9-36)指从N末端截去两个氨基酸和从C末端截去一个氨基酸后的GLP-1片段。在该片段中的氨基酸由与GLP-1(7-39)OH中相应氨基酸相同的号数表示。例如，GLP-1(9-36)OH的N末端谷氨酸是在位置9；位置12，是苯丙氨酸；和位置22是甘氨酸，如在GLP-1(7-37)OH。对于GLP-1(7-36)OH，在GLP-1(7-37)OH中第37位的甘氨酸缺失。

“GLP-1类似物”与GLP-1(7-37)OH或GLP-1(7-37)OH的片段具有足够的同源性，使类似物具有促胰岛素活性。优选地，GLP-1类似物具有GLP-1(7-37)OH或其片段的氨基酸序列，已经过修饰，使氨基酸在GLP-1(7-37)OH或GLP-1(7-37)OH片段的对应位置中的氨基酸有一个，两个，三个，四个或五个氨基酸的区别。在本文的GLP-1化合物的命名法中，替换氨基酸和它的位置在亲本结构之前表示。例如，Glu²²-GLP-1(7-37)OH指这样一种GLP-1化合物，其中正常情况下在GLP-1(7-37)OH位置22的甘氨酸被谷氨酸替代；Val⁸-Glu²²-GLP-1(7-37)OH表示这样一种GLP-1化合物，其中正常情况下在GLP-1(7-37)OH位置8的丙氨酸和在位置22的甘氨酸分别被缬氨酸和谷氨酸替代。

GLP-1分子也包括多肽，其中在GLP-1(7-37)OH的N末端和/或C末端已经加入一个或多个氨基酸或其片段或类似物。优选地，这一类型的GLP-1分子已经达到约39个氨基酸。在“延伸”的GLP-1分子中的氨基酸由与GLP-1(7-37)OH中相应氨基酸相同的编号表示。例如，对于通过在GLP-1(7-37)OH的N末端加入两个氨基酸可得到的GLP-1分子，将N末端氨基酸定位于位置5；对于通过在GLP-1(7-37)OH的C末端加入一个氨基酸得到的GLP-1分子，在位置38定位C末端氨基酸。所以，占据位置12的是苯丙氨酸，在这些“延伸”的GLP-1化合物中，如在GLP-1(7-37)OH中在这些“延伸”的GLP-1化合物的两端是甘氨酸占据的位置22。延伸的GLP-1分子的氨基酸1-6优选地是与GLP-1(1-37)OH对应位置的氨基酸相同或是一个保守替换。延伸的GLP-1分子的氨基酸38-45优选地是与胰高糖血素或Exendin-4的对应位置上的氨基酸相同或有一个保守替换。

“GLP-1衍生物”是指具有GLP-1，GLP-1片段，或GLP-1类似物的氨基酸序列，但另外它的氨基酸侧链基团，α-碳原子，末端氨基基团或末端羧基基团具有一个或多个化学修饰。化学修饰包括，但不限于，加入化学部分(moieties)，产生新的键，除去化学部分。在氨基酸侧链基团上的修饰包括，但不限于赖氨酸ε-氨基基团的酰化，精氨酸、组氨酸或赖氨酸的N烷基化，谷氨酸或天冬氨酸羧酸基团的烷基化，谷氨酰胺或天冬酰胺的脱酰化(deamidation)。末端氨基基团的修饰包括，但不限于，脱氨基，N-低级烷基，N-二-低级烷基，N酰基修饰。末端羧基基团的修饰包括但不限于，酰胺，低级烷基酰胺，二烷基酰胺，低级烷基酯修饰。低级烷基是C₁-C₄烷基。另外，一个或多个侧链基团或末端基团可以通过普通的蛋白质化学家已知的保护基团来保护。氨基酸的α碳可以被单-或二甲基化。

为了本发明的目的，利用体外GLP-1受体-信号实验可以确定是否特别延伸的GLP-1肽将在体内展示促胰岛素活性。包括在本发明中的延伸的GLP-1肽具有已知为Val⁸-GLP-1(7-37)OH的DPP IV抗性GLP-1类似物的体外效力的不少于10分之1的体外效力。更优选地，本发明的延伸的GLP-1肽是与Val⁸-GLP-1(7-37)OH相同的效力或更有效力。

“体外效力”如本文所用是肽在基于细胞的实验中激活GLP-1受体的肽的能力的测量。体外效力表示为“EC₅₀”，是在单剂量应答实验中导致50％的活性的化合物有效浓度。为了本发明的目的，利用荧光实验确定体外效力，其中利用了HEK-293 Aurora CRE-BLAM细胞，这些细胞稳定地表达人的GLP-1受体。这些HEK-293细胞具有稳定整合的DNA载体，具有驱动表达β-半乳糖苷酶(BLAM)基因的cAMP应答元件(CRE)。GLP-1拮抗剂与受体的相互作用启动一个信号，导致cAMP应答元件的激活和随后的β半乳糖苷酶的表达。然后，当用β半乳糖苷酶(Aurora生物科学公司)裂解时可以在细胞中加入发射荧光的β半乳糖苷酶CCF2/AM底物，这些细胞已经接触了特定量的GLP-1拮抗剂，从而可以测定GLP-1拮抗剂效力。该实验进一步在Zlokarnik，et al.(1998)，科学，279：84-88(也参见实施例1)中进一步描述。在实施例1中列出的化合物的EC₅₀的值是通过稀释范围0.00003纳摩尔到30纳摩尔的剂量应答曲线，利用如上所述的BLAM实验来确定的。通过将Val⁸-GLP-1(7-37)OH作为对照，与作为对照的参考曲线1比较建立了相对的体外潜能值。

术语“递送剂(delivery agent)”指美国专利5,541,155；5,693,338；5,976,569；5,643,957；5,955,503；6,100,298；5,650,386；5,866,536；5,965,121；5,989,539；6,001,347；6,071,510；5,820,881；和6,242,495；和WO 02/02509；WO 01/51454；WO 01/44199；WO 01/32130；WO00/59863；WO 00/50386；WO 00/47188；和WO 00/40203中的分子。递送剂通常是从氨基酸衍生的，并且用于本发明的口服制剂中。衍生的氨基酸也可以是聚氨基酸和肽的形式。氨基酸是任意的如下羧酸，其至少具有一个游离的胺基团(amine group)，包括天然存在的和合成的氨基酸。聚氨基酸是通过可以连接例如酯，酸酐或酸酐键的其他基团形成的键连接的肽或两个或多个氨基酸。肽是肽键结合的两个或多个氨基酸。肽可以在长度上改变，从有两个氨基酸的二肽到有几百个氨基酸的多肽的改变。优选地肽包括二肽，三肽，四肽，和五肽。

另外，本发明的递送剂可任选是盐形式的。盐的例子包括钠，盐酸，硫酸，磷酸，柠檬酸，乙酸，硫酸盐，氯，溴，碘，乙酸盐，丙酸盐，氢溴酸，氢氧化钠，氢氧化钾，氢氧化铵，和碳酸钾。

本发明的各种口服制剂可任选地包括药物可接受缓冲液。药物可接受缓冲液的例子包括磷酸缓冲液，如二碱基磷酸钠，TRIS，甘氨酸基甘氨酸，马来酸，乙酸钠，柠檬酸钠，酒石酸钠，或氨基酸，如甘氨酸，组氨酸，赖氨酸或精氨酸。其他药物可接受缓冲液是本领域技术人员已知的。优选地，缓冲液选自磷酸，TRIS，马来酸和甘氨酸。更优选地，缓冲液是TRIS。

优选地，TRIS的浓度是在约1mM和100mM之间。甚至更优选地，浓度是在约10mM和约50mM之间，最优选地，缓冲液是约20mM。

调整口服制剂的pH，提供稳定性，是口服给药可接受的。优选地，调整pH到约7.0到约9.0之间，更优选地，pH是在约7.4到8.4之间。甚至更优选地，pH是在约7.8到8.4之间。最优选地，pH是在约7.8到8.1之间。

本发明的各种口服制剂可任选地包括一种悬浮剂。一些递送剂由于它们的可溶特征需要悬浮剂。悬浮剂的例子是羟丙基一甲基纤维素。优选地，羟丙基甲基纤维素的最后浓度是在约2％和约10％之间(重量/体积)。甚至更优选地，浓度是在约2％和约5％(w/v)之间。最优选地，浓度是在约3.9％(w/v)。

本发明的口服制剂可任选地包括共溶剂。由于它们的溶解特征，一些递送剂需要共溶剂。共溶剂的例子包括乙醇，N甲基吡咯烷酮，N，N-二甲基乙酰胺，N，N二甲基甲酰胺，glycofurol，ethoxydiol，丙二醇，聚乙二醇300和聚丙烯吡咯烷酮。优选地，共溶剂的最后的浓度是在约5％和约30％(体积/体积)之间。甚至更优选地，浓度是在约10％和约25％(v/v)之间。最优选地，浓度是约20％(v/v)。

本发明的口服制剂可任选地包括防腐剂。防腐剂指在制剂中加入化合物，作用是抗微生物试剂。在本领域已知的防腐剂中，如胃肠外制剂中有效和可接受的是酚防腐剂，对羟基苯甲酸烷基酯，苄醇，氯丁醇，复山梨醇和其他相似的防腐剂，和其各种混合物。酚衍生物的例子包括甲酚，苯酚或甲酚和苯酚的混合物。甲酚的例子包括间甲酚，邻甲酚，对甲酚，氯甲酚，或其混合物。对羟基苯甲酸烷基酯包括对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯、对羟基苯甲酸丁酯。浓度必须足够通过延迟微生物的生长来维持防腐剂的有效性。优选地，防腐剂是苯酚衍生物。更优选地，防腐剂是甲酚。甚至更优选地，防腐剂是间甲酚。

在最后的混合物中的防腐剂的优选的浓度是约1.0mg/ml到约20.0mg/ml。更优选地，最后的混合物的防腐剂的浓度范围是约2.0mg/mL到约8.0mg/ml，约2.5mg/ml到约4.5mg/ml和约2.0mg/ml到约4.0mg/ml。最后混合物中的防腐剂的最优选的浓度是约3.0mg/ml。

本发明的口服制剂可任选地包括等渗剂。等渗剂指，有生理耐受力的，只赋予制剂适当等渗性，防止静水流穿过细胞膜的化合物。这样的化合物的例子包括甘油，盐(例如NaCl)，和糖(例如葡聚糖，甘露糖和蔗糖)。这些化合物通常在已知浓度下用于这些目的。可以加入一个或多个等渗剂调整离子强度或等渗性。优选的等渗剂是NaCl。NaCl的浓度优选地在约10mM和200mM之间，更优选地是在约50mM和150mM之间，最优选地是约100mM。

给药组合物可任选地是固体形式的，如片剂，胶囊或颗粒，如粉末。固体剂量形式可以通过混合化合物的固体形式和活性试剂的固体形式来制备。或者，固体可以从化合物和活性试剂的溶液，通过本领域已知的方法如冷冻干燥，沉淀，结晶和固体分散的来得到。

适于在本发明中使用的GLP-1化合物：

本发明的GLP-1化合物可以通过本领域已知的各种方法来制备，如固相合成化学，从天然来源的GLP-1分子纯化，重组DNA技术，和这些方法的结合。例如，美国专利5,118,666，5,120,712，5,512,549；5,977,071；和6,191,102中描述了制备GLP-1肽的方法。

通过本领域的常规方法，GLP-1(7-37)OH的氨基末端已经赋予编号残基7，羧基末端已经赋予编号37。在多肽中的其他氨基酸也连续地编号，如SEQ ID NO：1所示。例如，位置12是苯丙氨酸，位置22是甘氨酸。

两个天然存在的截短的GLP-1肽是在式I，SEQ ID NO：1中表示。

His⁷-Ala-Glu-Gly¹⁰-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu²⁰-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala²⁵-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala³⁰-Trp-Leu-Val-Lys-Gly³⁵-Arg-Xaa³⁷

式I，SEQ ID NO：1

其中：

Xaa³⁷是甘氨酸，或-NH₂。

优选地，GLP-1化合物具有SEQ IDNO：1的氨基酸序列或者被修饰，使SEQ ID NO：1有一个，两个，三个，四个或五个氨基酸的区别。

优选的GLP-1化合物的组由式I(SEQ ID NO：2)的GLP-1类似物组成的。

His-Xaa⁸-Xaa⁹-Gly-Xaa¹¹-Phe-Thr-Xaa¹⁴-Asp-Xaa¹⁶-Xaa¹⁷-Xaa¹⁸-Xaa¹⁹-Xaa²⁰-Xaa²¹-Xaa²²-Xaa²³-Xaa²⁴-Xaa²⁵-Xaa²⁶-Xaa²⁷-Phe-Ile-Xaa³⁰-Xaa³¹-Xaa³²-Xaa³³-Xaa³⁴-Xaa³⁵-Xaa³⁶-Xaa³⁷-Xaa³⁸-Xaa³⁹-Xaa⁴⁰-Xaa⁴¹-Xaa⁴²-Xaa⁴³-Xaa⁴⁴-Xaa⁴⁵

式I(SEQ ID NO：2)

其中：

Xaa⁸是Ala，Gly，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，或Lys；

Xaa⁹是Glu，Asp，或Lys；

Xaa¹¹是Thr，Ala，Gly，Ser，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，或Lys；

Xaa¹⁴是Ser，Ala，Gly，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，或Lys；

Xaa¹⁶是Val，Ala，Gly，Ser，Thr，Leu，Ile，Tyr，Glu，Asp，Trp，或Lys；

Xaa¹⁷是Ser，Ala，Gly，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，或Lys；

Xaa¹⁸是Ser，Ala，Gly，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，Trp，Tyr，或Lys；

Xaa¹⁹是Tyr，Phe，Trp，Glu，Asp，Gln，或Lys；

Xaa²⁰是Leu，Ala，Gly，Ser，Thr，Ile，Val，Glu，Asp，Met，Trp，Tyr，或Lys；

Xaa²¹是Glu，Asp，或Lys；

Xaa²²是Gly，Ala，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，或Lys；

Xaa²³是Gln，Asn，Arg，Glu，Asp，或Lys；

Xaa²⁴是Ala，Gly，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Arg，Glu，Asp，或Lys；

Xaa²⁵是Ala，Gly，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，或Lys；

Xaa²⁶是Lys，Arg，Gln，Glu，Asp，或His；

Xaa²⁷是Leu，Glu，Asp，或Lys；

Xaa³⁰是Ala，Gly，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，或Lys；

Xaa³¹是Trp，Phe，Tyr，Glu，Asp，或Lys；

Xaa³²是Leu，Gly，Ala，Ser，Thr，Ile，Val，Glu，Asp，或Lys；

Xaa³³是Val，Gly，Ala，Ser，Thr，Leu，Ile，Glu，Asp，或Lys；

Xaa³⁴是Asn，Lys，Arg，Glu，Asp，或His；

Xaa³⁵是Gly，Ala，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，或Lys；

Xaa³⁶是Gly，Arg，Lys，Glu，Asp，或His；

Xaa³⁷是Pro，Gly，Ala，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，或Lys，或缺失；

Xaa³⁸是Ser，Arg，Lys，Glu，Asp，或His，或缺失；

Xaa³⁹是Ser，Arg，Lys，Glu，Asp，或His，或缺失；

Xaa⁴⁰是Gly，Asp，Glu，或Lys，或缺失；

Xaa⁴¹是Ala，Phe，Trp，Tyr，Glu，Asp，或Lys，或缺失；

Xaa⁴²是Ser，Pro，Lys，Glu，或Asp，或缺失；

Xaa⁴³是Ser，Pro，Glu，Asp，或Lys，或缺失；

Xaa⁴⁴是Gly，Pro，Glu，Asp，或Lys，或缺失；并且

Xaa⁴⁵是Ala，Ser，Val，Glu，Asp，或Lys，Ala-NH₂，Ser-NH₂，Val-NH₂，Glu-NH₂，Asp-NH₂，或Lys-NH₂，或缺失；

条件是，当37，38，39，40，41，42，43或44位的氨基酸缺失时，那么该氨基酸下游的各氨基酸也缺失。

优选地，式I的GLP-1化合物含有少于6个与GLP-1(7-37)OH或Exendin-4的对应的氨基酸不同的氨基酸。更优选地，与GLP-1(7-37)OH或Exendin-4的对应的氨基酸有不到5个氨基酸的区别。甚至更优选地，与GLP-1(7-37)OH或Exendin-4的对应的氨基酸有不到4个氨基酸的区别。

本发明的GLP-1化合物包括式I的衍生物，如C-1-6-酯，或酰胺，或C-1-6-烷基酰胺，或其C-1-6-二烷基酰胺。WO99/43706描述了式I的GLP-1化合物的衍生物，并且全部引入本文作为参考。如WO99/43706中所述衍生的式I的化合物和未衍生的包括在本发明中。

GLP-1化合物的另一个优选的组由式II(SEQ ID NO：3)的GLP-1类似物组成：

Xaa⁷-Xaa⁸-Xaa⁹-Gly-Xaa¹¹-Xaa¹²-Thr-Ser-Asp-Xaa¹⁶-Aer-Xaa¹⁸-Xaa¹⁹-Leu-Glu-Gly-Xaa²³-Xaa²⁴-Ala-Xaa²⁶-Xaa²⁷-Phe-Ile-Xaa³⁰-Xaa³¹-Leu-Xaa³³-Xaa³⁴-Xaa³⁵-Xaa³⁶-R³⁷

式II(SEQ ID NO：3)

其中：Xaa⁷：是L-组氨酸，D-组氨酸，脱氨基-组氨酸，2-氨基-组氨酸，β-羟基-组氨酸，高组氨酸(homohistidine)，α-氟甲基组氨酸，或α-甲基组氨酸；

Xaa⁸是Gly，Ala，Val，Leu，Ile，Ser，或Thr；

Xaa⁹是Thr，Ser，Arg，Lys，Trp，Phe，Tyr，Glu，或His；

Xaa¹¹是Asp，Glu，Arg，Thr，Ala，Lys，或His；

Xaa¹²是His，Trp，Phe，或Tyr；

Xaa¹⁶是Leu，Ser，Thr，Trp，His，Phe，Asp，Val，Tyr，Glu，或Ala；

Xaa¹⁸是His，Pro，Asp，Glu，Arg，Ser，Ala，或Lys；

Xaa¹⁹是Gly，Asp，Glu，Gln，Asn，Lys，Arg，或Cys；

Xaa²³是His，Asp，Lys，Glu，Gln，或Arg；

Xaa²⁴是Glu，Arg，Ala，或Lys；

Xaa²⁶是Trp，Tyr，Phe，Asp，Lys，Glu，或His；

Xaa²⁷是Ala，Glu，His，Phe，Tyr，Trp，Arg，或Lys；

Xaa³⁰是Ala，Glu，Asp，Ser，或His；

Xaa³¹是Asp，Glu，Ser，Thr，Arg，Trp，或Lys；

Xaa³³是Asp，Arg，Val，Lys，Ala，Gly，或Glu；

Xaa³⁴是Glu，Lys，或Asp；

Xaa³⁵是Thr，Ser，Lys，Arg，Trp，Tyr，Phe，Asp，Gly，Pro，，His，或Glu；

Xaa³⁶是Thr，Ser，Asp，Trp，Tyr，Phe，Arg，Glu，或His；

R³⁷是Lys，Arg，Thr，Ser，Glu，Asp，Trp，Tyr，Phe，His，Gly，Gly-Pro，或缺失。

GLP-1化合物的另一个优选的组由式III(SEQ ID NO：4)的GLP-1类似物组成：

Xaa⁷-Xaa⁸-Glu-Gly-Xaa¹¹-Xaa¹²-Thr-Ser-Asp-Xaa¹⁶-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Xaa²²-Xaa²³-Xaa²⁴-Xaa²⁵-Lys-Xaa²⁷-Phe-Ile-Xaa³⁰-Trp-Leu-Xaa³³-Xaa³⁴-Xaa³⁵-Xaa³⁶-R³⁷

式III(SEQ ID NO：4)

其中：Xaa⁷是L-组氨酸，D-组氨酸，脱氨基-组氨酸，2-氨基-组氨酸，β-羟基-组氨酸，高组氨酸，α-氟甲基组氨酸，或α-甲基组氨酸；

Xaa⁸是Gly，Ala，Val，Leu，Ile，Ser，或Thr；

Xaa¹¹是Asp，Glu，Arg，Thr，Ala，Lys，或His；

Xaa¹²是His，Trp，Phe，或Tyr；

Xaa¹⁶是Leu，Ser，Thr，Trp，His，Phe，Asp，Val，Glu，或Ala；

Xaa²²是Gly，Asp，Glu，Gln，Asn，Lys，Arg，或Cys；

Xaa²³是His，Asp，Lys，Glu，或Gln；

Xaa²⁴是Glu，His，Ala，或Lys；

Xaa²⁵是Asp，Lys，Glu，或His；

Xaa²⁷是Ala，Glu，His，Phe，Tyr，Trp，Arg，或Lys；

Xaa³⁰是Ala，Glu，Asp，Ser，或His；

Xaa³³是Asp，Arg，Val，Lys，Ala，Gly，或Glu；

Xaa³⁴是Glu，Lys，或Asp；

Xaa³⁵是Thr，Ser，Lys，Arg，Trp，Tyr，Phe，Asp，Gly，Pro，His，或Glu；

Xaa³⁶是Arg，Glu，或His；

GLP-1化合物的另一个优选的组由式IV(SEQ ID NO：5)的GLP-1类似物组成的：

Xaa⁷-Xaa⁸-Glu-Gly-Thr-Xaa¹²-Thr-Ser-Asp-Xaa¹⁶-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Xaa²²-Xaa²³-Ala-Ala-Xaa²⁶-Glu-Phe-Ile-Xaa³⁰-Trp-Leu-Val-Lys-Xaa³⁵-Arg-R³⁷

式IV(SEQ ID NO：5)

其中：Xaa⁷是L-组氨酸，D-组氨酸，脱氨基-组氨酸，2-氨基-组氨酸，β-羟基-组氨酸，高组氨酸，α-氟甲基-组氨酸，或α-甲基-组氨酸；

Xaa⁸是Gly，Ala，Val，Leu，Ile，Ser，Met，或Thr；

Xaa¹²是His，Trp，Phe，或Tyr；

Xaa¹⁶是Leu，Ser，Thr，Trp，His，Phe，Asp，Val，Glu，或Ala；

Xaa²²是Gly，Asp，Glu，Gln，Asn，Lys，Arg，或Cys；

Xaa²³是His，Asp，Lys，Glu，或Gln；

Xaa²⁶是Asp，Lys，Glu，或His；

Xaa³⁰是Ala，Glu，Asp，Ser，或His；

GLP-1化合物的另一个优选的组由式V(SEQ ID NO：6)的GLP-1类似物组成：

Xaa⁷-Xaa⁸-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu-Glu-Xaa²²-Xaa²³-Xaa²⁴-Ala-Lys-Glu-Phe-Ile-Xaa³⁰-Trp-Leu-Val-Lys-Gly-Arg-R³⁷

式V(SEQ ID NO：6)

其中：

Xaa⁷是：L-组氨酸，D-组氨酸，脱氨基-组氨酸，2-氨基-组氨酸，β-羟基-组氨酸，高组氨酸，α-氟甲基-组氨酸，或α-甲基-组氨酸；

Xaa⁸是Gly，Ala，Val，Leu，Ile，Ser，或Thr；

Xaa²²是Gly，Asp，Glu，Gln，Asn，Lys，Arg，或Cys；

Xaa²³是His，Asp，Lys，Glu，或Gln；

Xaa²⁴是Ala，Glu，His，Phe，Tyr，Trp，Arg，或Lys；

Xaa³⁰是Ala，Glu，Asp，Ser，或His；

式I，II，III，IV和V的优选的GLP-1化合物包括GLP-1类似物或GLP-1类似物的片段，其中类似物或片段在位置8(位置8类似物)含有一个除了丙氨酸以外的氨基酸。优选地，这些位置8的类似物在位置9，11，12，16，18，22，23，24，26，27，30，31，33，34，35，36，和37，对应于天然的GLP-1(7-37)OH的氨基酸含有一个或多个另外的变化。同样优选的是，这些类似物与天然GLP-1(7-37)OH或GLP-1(7-36)OH中对应的氨基酸比较，具有6个或更少的变化。更优选的类似物与天然GLP-1(7-37)OH或GLP-1(7-36)OH中对应的氨基酸比较具有5个或更少的变化，或与天然的GLP-1(7-37)OH或GLP-1(7-36)OH的对应的氨基酸比较具有4或更少的变化。甚至更优选地，这些类似物与天然GLP-1(7-37)OH或GLP-1(7-36)OH中的对应的氨基酸比较具有3或更少的变化。最优选地，这些类似物与天然的GLP-1(7-37)OH中的氨基酸比较具有2或更少的变化。

式II，III，IV和V的优选的GLP-1化合物包括GLP-1类似物或GLP-1类似物的片段，其中在位置22的甘氨酸和优选地在位置8的丙氨酸已经用另一个氨基酸替换。

当位置22是天冬氨酸，谷氨酸，精氨酸，或赖氨酸时，位置8优选地是甘氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，丝氨酸，苏氨酸，或甲硫氨酸，更优选地是缬氨酸，或甘氨酸。当位置22是磺酸(sulfonicacid)时，如半胱氨酸，位置8优选地是甘氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，丝氨酸，苏氨酸，或甲硫氨酸，更优选地是缬氨酸或甘氨酸。

其他优选的GLP-1化合物包括式IV的GLP-1类似物(SEQ IDNO：5)，其中类似物具有GLP-1(7-37)OH的序列，不同的是，位置8的氨基酸优选地是甘氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，丝氨酸，苏氨酸，或甲硫氨酸，更优选地是缬氨酸，或甘氨酸，位置30的是谷氨酸，天冬氨酸，丝氨酸，或组氨酸，更优选地是谷氨酸。

其他优选的GLP-1化合物包括式IV(SEQ ID NO：5)的GLP-1类似物，其中类似物具有GLP-1(7-37)OH的序列，不同的是，位置8的氨基酸优选地是甘氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，丝氨酸，苏氨酸，或甲硫氨酸，更优选地是缬氨酸，或甘氨酸，位置37是组氨酸，赖氨酸，精氨酸，苏氨酸，丝氨酸，谷氨酸，天冬氨酸，色氨酸，酪氨酸，苯丙氨酸，更优选地是组氨酸。

其他优选的GLP-1化合物包括式IV(SEQ ID NO：5)的GLP-1类似物，其中该类似物具有GLP-1(7-37)OH的序列，不同的是，位置8的氨基酸优选地是甘氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，丝氨酸，苏氨酸，或甲硫氨酸，更优选地是缬氨酸，或甘氨酸，位置22的是谷氨酸，赖氨酸，天冬氨酸，或精氨酸，更优选地是谷氨酸，或赖氨酸，位置23是赖氨酸，精氨酸，谷氨酸，天冬氨酸和组氨酸，更优选地是赖氨酸或谷氨酸。

其他优选的GLP-1化合物包括式V(SEQ ID NO：6)的GLP-1类似物，其中该类似物具有GLP-1(7-37)OH的序列，不同的是，位置8的氨基酸优选是甘氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，丝氨酸，苏氨酸或甲硫氨酸，更优选的是缬氨酸或甘氨酸；位置22是谷氨酸，赖氨酸，天冬氨酸或精氨酸，更优选的是谷氨酸或赖氨酸；位置27的是丙氨酸，赖氨酸，精氨酸，色氨酸，酪氨酸，苯丙氨酸，或组氨酸，更优选地是丙氨酸。

其他优选的GLP-1化合物包括式II的GLP-1类似物，其中该类似物具有GLP-1(7-37)OH的序列，不同的是，位置8的氨基酸，和选自位置9，位置11，位置12，位置16，位置18，位置22，位置23，位置24，位置26，位置27，位置30，位置31，位置33，位置34，位置35，位置36和位置37的一个，两个，或三个氨基酸在天然GLP-1(7-37)OH的对应位置的氨基酸是有区别的。

式II的其他优选的GLP-1化合物包括：Val⁸-GLP-1(7-37)OH，

Gly⁸-GLP-1(7-37)OH，Glu²²-GLP-1(7-37)OH，Asp²²-GLP-1(7-37)OH，

Arg²²-GLP-1(7-37)OH，Lys²²-GLP-1(7-37)OH，Cys²²-GLP-1(7-37)OH，

Val⁸-Glu²²-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Asp²²-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Arg²²-GLP-1(7-37)OH，

Val⁸-Lys²²-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Cys²²-GLP-1(7-37)OH，Gly⁸-Glu²²-GLP-1(7-37)OH，

Gly⁸-Asp²²-GLP-1(7-37)OH，Gly⁸-Arg²²-GLP-1(7-37)OH，Gly⁸-Lys²²-GLP-1(7-37)OH，

Gly⁸-Cys²²-GLP-1(7-37)OH，Glu²²-GLP-1(7-36)OH，Asp²²-GLP-1(7-36)OH，

Arg²²-GLP-1(7-36)OH，Lys²²-GLP-1(7-36)OH，Cys²²-GLP-1(7-36)OH，

Val⁸-Glu²²-GLP-1(7-36)OH，Val⁸-Asp²²-GLP-1(7-36)OH，Val⁸-Arg²²-GLP-1(7-36)OH，

Val⁸-Lys²²-GLP-1(7-36)OH，Val⁸-Cys²²-GLP-1(7-36)OH，Gly⁸-Glu²²-GLP-1(7-36)OH，

Gly⁸-Asp²²-GLP-1(7-36)OH，Gly⁸-Arg²²-GLP-1(7-36)OH，Gly⁸-Lys²²-GLP-1(7-36)OH，

Gly⁸-Cys²²-GLP-1(7-36)OH，Lys²³-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Lys²³-GLP-1(7-37)OH，

Gly⁸-Lys²³-GLP-1(7-37)OH，His²⁴-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-His²⁴-GLP-1(7-37)OH，

Gly⁸-His²⁴-GLP-1(7-37)OH，Lys²⁴-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Lys²⁴-GLP-1(7-37)OH，

Glu³⁰-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Glu³⁰-GLP-1(7-37)OH，Gly⁸-Glu³⁰-GLP-1(7-37)OH，

Asp³⁰-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Asp³⁰-GLP-1(7-37)OH，Gly⁸-Asp³⁰-GLP-1(7-37)OH，

Gln³⁰-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Gln³⁰-GLP-1(7-37)OH，Gly⁸-Gln³⁰-GLP-1(7-37)OH，

Tyr³⁰-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Tyr³⁰-GLP-1(7-37)OH，Gly⁸-Tyr³⁰-GLP-1(7-37)OH，

Ser³⁰-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Ser³⁰-GLP-1(7-37)OH，Gly⁸-Ser³⁰-GLP-1(7-37)OH，

His³⁰-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-His³⁰-GLP-1(7-37)OH，Gly⁸-His³⁰-GLP-1(7-37)OH，

Glu³⁴-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Glu³⁴-GLP-1(7-37)OH，Gly⁸-Glu³⁴-GLP-1(7-37)OH，

Ala³⁴-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Ala³⁴-GLP-1(7-37)OH，Gly⁸-Ala³⁴-GLP-1(7-37)OH，

Gly³⁴-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Gly³⁴-GLP-1(7-37)OH，Gly⁸-Gly³⁴-GLP-1(7-37)OH，

Ala³⁵-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Ala³⁵-GLP-1(7-37)OH，Gly⁸-Ala³⁵-GLP-1(7-37)OH，

Lys³⁵-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Lys³⁵-GLP-1(7-37)OH，Gly⁸-Lys³⁵-GLP-1(7-37)OH，

His³⁵-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-His³⁵-GLP-1(7-37)OH，Gly⁸-His³⁵-GLP-1(7-37)OH，

Pro³⁵-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Pro³⁵-GLP-1(7-37)OH，Gly⁸-Pro³⁵-GLP-1(7-37)OH，

Glu³⁵-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Glu³⁵-GLP-1(7-37)OH，Gly⁸-Glu³⁵-GLP-1(7-37)OH，

Val⁸-Ala²⁷-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-His³⁷-GLP-1(7-37)OH，

Val⁸-Glu²²-Lys²³-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Glu²²-Glu²³-GLP-1(7-37)OH，

Val⁸-Glu²²-Ala²⁷-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Gly³⁴-Lys³⁵-GLP-1(7-37)OH，

Gly⁸-His³⁷-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Glu²²-Ala²⁷-GLP-1(7-37)OH，

Gly⁸-Glu²²-Ala²⁷-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Lys²²-Glu²³-GLP-1(7-37)OH，和

Gly⁸-Lys²²-Glu²³-GLP-1(7-37)OH.

用于本发明的另外的GLP-1类似物和衍生物的优选的组由式VI的分子组成(SEQ ID NO：7)

R₁-X-Glu-Gly¹⁰-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp¹⁵-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu²⁰-Y-Gly-Gln-Ala-Ala²⁵-Lys-Z-Phe-Ile-Ala³⁰-Trp-Leu-Val-Lys-Gly³⁵-Arg-R₂

式VI(SEQ ID NO：7)

其中：R₁选自L-组氨酸，D-组氨酸，脱氨基-组氨酸，2-氨基-组氨酸，β-羟基-组氨酸，高组氨酸，α-氟甲基-组氨酸和α甲基组氨酸。

X选自Ala，Gly，Val，Thr，Ile和α-甲基-Ala；

Y选自Glu，Gln，Ala，Thr，Ser和Gly；

Z选自Glu，Gln，Ala，Thr，Ser和Gly；和

R₂是Gly-OH。

用于本发明的另一组优选的GLP-1化合物公开在WO 91/11457中，主要包括GLP-1(7-34)，GLP-1(7-35)，GLP-1(7-36)或者GLP-1(7-37)，或其酰胺形式，和其药物可接受盐，其中具有选自下面的至少一个修饰：

(a)甘氨酸，丝氨酸，半胱氨酸，苏氨酸，天冬酰胺，谷氨酰胺，酪氨酸，丙氨酸，缬氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，精氨酸，或D-赖氨酸替换位置26和/或位置34的赖氨酸；甘氨酸，丝氨酸，半胱氨酸，苏氨酸，天冬酰胺，谷氨酰胺，酪氨酸，丙氨酸，缬氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，甲硫氨酸，苯丙氨酸，赖氨酸，或D精氨酸替换位置36的精氨酸；

(b)氧化抗性氨基酸替换位置31的色氨酸；

(c)至少一个下面的替换：酪氨酸替换位置16的缬氨酸；赖氨酸替换位置18的丝氨酸；天冬氨酸替换位置21的谷氨酸；丝氨酸替换位置22的甘氨酸；精氨酸替换位置23的谷氨酸；精氨酸替换位置24的丙氨酸；谷氨酸替换位置26的赖氨酸；和

(d)至少下面的一个替换：甘氨酸，丝氨酸或半胱氨酸替换位置8的丙氨酸；天冬氨酸，甘氨酸，丝氨酸，半胱氨酸，苏氨酸，天冬氨酸，谷氨酰胺，酪氨酸，丙氨酸，缬氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，甲硫氨酸，或苯丙氨酸替换位置9的谷氨酸；丝氨酸，半胱氨酸，苏氨酸，天冬酰胺，谷氨酰胺，酪氨酸，丙氨酸，缬氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，甲硫氨酸，或苯丙氨酸替换位置10的甘氨酸；谷氨酸替换位置15的天冬氨酸；和

(e)在位置7用甘氨酸，丝氨酸，半胱氨酸，苏氨酸，天冬酰胺，谷氨酰胺，酪氨酸，丙氨酸，缬氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，甲硫氨酸，或苯丙氨酸或组氨酸的D或N酰化或烷基化形式替换组氨酸；其中，在替换中是(a)，(b)，(d)和(e)，替换的氨基酸可任选地是D形式，位置7替换的氨基酸可任选地是N酰化形式或N烷基化形式。因为，一种酶-二肽基-肽酶IV(DPP IV)，可能导致观察到的给药的GLP-1的快速体内失活[参见例如，Mentlein，R.，等人，Eur.J.Biochem.，214：829-835(1993)]，在融合蛋白质中能够免于DPP IV活性作用的GLP-1类似物和衍生物是优选的，其中GLP-1化合物是Gly⁸-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-GLP-1(7-37)OH，α-甲基-Ala⁸-GLP-1(7-37)OH，或者Gly⁸-Gln²¹-GLP-1(7-37)OH的融合蛋白更优选。另一组优选的用于本发明的GLP-1化合物包括美国专利5,512,549要求保护的式VII(SEQ ID NO：8)的化合物，其特别地引入本文作为参考：

R₁-Ala-Glu-Gly¹⁰-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp¹⁵-Val-Ser-Ser-Tyr-Leu²⁰-Glu-Gly-Gln-Ala-Ala²⁵-Xaa-Glu-Phe-Ile-Ala³⁰-Trp-Leu-Val-Lys-Gly³⁵-Arg-R₃

|

R₂

式VII(SEQ ID NO：8)

其中：R₁选自包括4-咪唑丙酰基，4-咪唑乙酰基，或者4-咪唑-α，α-二甲基-乙酰基；

R₂选自C₆-C₁₀不分支的酰基，或者不存在；

R₃选自Gly-OH或者NH₂；和

Xaa是Lys或者Arg。

用于本发明的式VII的更优选的化合物是其中Xaa是Arg，R₂是C₆-C₁₀未分支的酰基的化合物。用于本发明的式IV的更优选的化合物是其中Xaa是Arg，R₂是C₆-C₁₀未分支的酰基，R₃是Gly-OH的化合物。用于本发明的式IV的其他更优选的化合物是其中Xaa是Arg，R₂是C₆-C₁₀未分支的酰基，R₃是Gly-OH，R₁是4-咪唑丙酰基的化合物。用于本发明的特别优选的式IV的化合物是其中Xaa是Arg，R₂是C₈未分支的酰基，R₃是Gly-OH，R₁是4-咪唑丙酰基的化合物。

其他优选的GLP-1衍生物如美国专利6,268,343B1中所述。更优选的GLP-1衍生物是Arg³⁴Lys²⁶-(N-ε-(γ-Glu(N-α-十六烷酰基)))-GLP-1(7-37)。

优选地，GLP-1化合物包括GLP-1类似物，其中这样的类似物或片段的骨架在位置8含有一个不是丙氨酸的氨基酸(位置8类似物)。骨架也可以在位置7包括L-组氨酸，D-组氨酸，或组氨酸的修饰形式，如脱氨基-组氨酸，2-氨基-组氨酸，β-羟基-组氨酸，高组氨酸，α-氟甲基组氨酸，或α-甲基-组氨酸。优选地，与天然GLP-1(7-37)OH的对应氨基酸相比，这些位置8类似物在位置12，16，18，19，20，22，25，27，30，33和37含有一个或多个其他变化。更优选地，与天然GLP-1(7-37)OH的对应氨基酸相比，这些位置8类似物在位置16，18，22，25和33含有一个或多个其他的变化。

在优选的实施方案中，GLP-1类似物是GLP-1(7-37)OH，其中在位置12的氨基酸选自色氨酸或酪氨酸。更优选地，除了位置12的替换外，在位置8的氨基酸用甘氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，丝氨酸，苏氨酸，或甲硫氨酸来替换，更优选地用缬氨酸或甘氨酸来替换。甚至更优选地，除了在位置12和8的替换外，位置22的氨基酸是用谷氨酸替换的。

在另一个优选的实施方案中，GLP-1类似物是GLP-1(7-37)OH，其中位置16的氨基酸选自色氨酸，异亮氨酸，亮氨酸，苯丙氨酸或酪氨酸。更优选地，除了在位置16的替换外，在位置8的氨基酸是用甘氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，丝氨酸，苏氨酸，或甲硫氨酸来替换的，更优选地是用缬氨酸或甘氨酸来替换的。甚至更优选地，除了在位置16和8的替换外，可以用谷氨酸替换位置22的氨基酸。同样优选的是，除了位置16和8的替换外，位置30的氨基酸是用谷氨酸替换的。同样优选的是除了在位置16和8的替换外，位置37的氨基酸是用组氨酸替换的。

另一个优选的实施方案中，GLP-1类似物是GLP-1(7-37)OH，其中位置18的氨基酸选自色氨酸，酪氨酸，苯丙氨酸，赖氨酸，亮氨酸，或异亮氨酸，优选地是色氨酸，酪氨酸和异亮氨酸。更优选地，除了在位置18的替换外，用甘氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，丝氨酸，苏氨酸，或甲硫氨酸来替换位置8的氨基酸，甚至更优选地用缬氨酸或甘氨酸来替换。甚至更优选地，除了在位置18和8的替换外，用谷氨酸替换位置22的氨基酸。同样优选地，除了在位置18和8的替换外，用谷氨酸来替换位置30的氨基酸。同样优选的是，除了位置18和8的替换外，用组氨酸来替换位置37的氨基酸。

另一个优选的实施方案中，GLP-1类似物是GLP-1(7-37)OH，其中在位置19的氨基酸选自色氨酸或苯丙氨酸，优选色氨酸。更优选地，除了在位置19的替换外，用甘氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，丝氨酸，苏氨酸，或甲硫氨酸来替换位置8的氨基酸，更优选地用缬氨酸或甘氨酸来替换。甚至更优选地，除了在位置19和8的替换外，位置22的氨基酸用谷氨酸来替换。同样优选的是，除了位置19和8的替换外，在位置30的氨基酸是用谷氨酸来替换的。同样优选的是，除了在位置19和8的替换外，在位置37的氨基酸是用组氨酸来替换的。

在另一个优选的实施方案中，GLP-1类似物是GLP-1(7-37)OH，其中位置20的氨基酸是苯丙氨酸，酪氨酸，或色氨酸。更优选地，除了位置20的替换外，位置8的氨基酸用甘氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，丝氨酸，苏氨酸，或甲硫氨酸来替换，更优选地是用缬氨酸或甘氨酸来替换。甚至更优选地，除了在位置20和8的替换外，位置22的氨基酸是用谷氨酸来替换的。同样优选的是，除了位置20和8的替换，位置30的氨基酸可以用谷氨酸来替换。同样优选的是，除了位置20和8的替换，位置37的氨基酸是用组氨酸来替换的。

在另一个优选的实施方案中，GLP-1类似物是GLP-1(7-37)OH，其中位置25的氨基酸选自缬氨酸，异亮氨酸，和亮氨酸，优选缬氨酸。更优选地，除了在位置25的替换外，可以用甘氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，丝氨酸，苏氨酸，或甲硫氨酸来替换位置8的氨基酸，更优选地是用缬氨酸或甘氨酸来替换。甚至更优选地，除了位置25和8的替换外，位置22的氨基酸是用谷氨酸来替换的。同样优选的是，除了位置25和8的替换外，位置30的氨基酸是用谷氨酸来替换的。同样优选的是，除了位置25和8的替换外，位置37的氨基酸是用组氨酸来替换的。

另一个优选的实施方案中，GLP-1类似物是GLP-1(7-37)OH，其中位置27的氨基酸选自异亮氨酸或丙氨酸。更优选地，除了位置27的替换外，位置8的氨基酸用甘氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，丝氨酸，苏氨酸，或甲硫氨酸来替换，更优选地用缬氨酸或甘氨酸来替换。甚至更优选地，除了位置27和8的替换外，可以用谷氨酸替换位置22的氨基酸。同样优选地，除了位置27和8的替换外，可以用谷氨酸来替换位置30的氨基酸。同样优选地，除了位置27和8的替换外，可以用组氨酸来替换位置37的氨基酸。

在另一个优选的实施方案中，GLP-1类似物是GLP-1(7-37)OH，其中位置33的氨基酸是异亮氨酸。更优选地，除了位置33的替换外，位置8的氨基酸用甘氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，丝氨酸，苏氨酸，或甲硫氨酸来替换，更优选地是用缬氨酸或甘氨酸来替换。甚至更优选地，除了在位置33和8的替换外，位置22的氨基酸用谷氨酸来替换的。同样优选地，除了位置33和8的替换，位置30的氨基酸是用谷氨酸来替换的。同样优选的，除了位置33和8的替换外，可以用组氨酸来替换位置37的氨基酸。

GLP-1化合物在一个或多个下面的位置有修饰：8，12，16，18，19，20，22，25，27，30，33和37。这些GLP-1化合物与GLP-1(7-37)OH比较，显示了较高的效力，并且包括了式VIII的氨基酸序列(SEQ IDNO：9)：

Xaa⁷-Xaa⁸-Glu-Gly-Thr-Xaa¹²-Thr-Ser-Asp-Xaa¹⁶-Ser-Xaa¹⁸-Xaa¹⁹-Xaa²⁰-Glu-Xaa²²-Gln-Ala-Xaa²⁵-Lys-Xaa²⁷-Phe-Ile-Xaa³⁰-Trp-Leu-Xaa³³-Lys-Gly-Arg-Xaa³⁷

式VIII(SEQ ID NO：9)

其中：Xaa⁷是L-组氨酸，D-组氨酸，脱氨基-组氨酸，2-氨基-组氨酸，β-羟基-组氨酸，高组氨酸，α-氟甲基组氨酸，或α-甲基-组氨酸；

xaa⁸是Ala，Gly，Val，Leu，Ile，Ser，或Thr；

xaa¹²是Phe，Trp，或Tyr；

Xaa¹⁶是Val，Trp，Ile，Leu，Phe，或Tyr；

Xaa¹⁸是Ser，Trp，Tyr，Phe；Lys，Ile，Leu，Val；

Xaa¹⁹是Tyr，Trp，或Phe；

Xaa²⁰是Leu，Phe，Tyr，或Trp；

Xaa²²是Gly，Glu，Asp，或Lys；

Xaa²⁵是Ala，Val，Ile，或Leu；

Xaa²⁷是Glu，Ile，或Ala；

Xaa³⁰是Ala或Glu；

Xaa³³是Val或Ile；并且

Xaa³⁷是Gly，His，NH₂，或缺失.

式VIII的一些优选的GLP-1化合物包括GLP-1(7-37)OH，

GLP-1(7-36)NH₂，Gly⁸-GLP-1(7-37)OH，Gly⁸-GLP-1(7-36)NH₂，Val⁸-GLP-1(7-37)OH，

Val⁸-GLP-1(7-36)NH₂，Leu⁸-GLP-1(7-37)OH，Leu⁸-GLP-1(7-36)NH₂，

Ile⁸-GLP-1(7-37)OH，Ile⁸-GLP-1(7-36)NH₂，Ser⁸-GLP-1(7-37)OH，

Ser⁸-GLP-1(7-36)NH₂，Thr⁸-GLP-1(7-37)OH，Thr⁸-GLP-1(7-36)NH₂，

Val⁸-Tyr¹²-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Tyr¹²-GLP-1(7-36)NH₂，Val⁸-Tyr¹⁶-GLP-1(7-37)OH，

Val⁸-Tyr¹⁶-GLP-1(7-36)NH₂，Val⁸-Glu²²-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Glu²²-GLP-1(7-36)NH₂，

Gly⁸-Glu²²-GLP-1(7-37)OH，Gly⁸-Glu²²-GLP-1(7-36)NH₂，Val⁸-Asp²²-GLP-1(7-37)OH，

Val⁸-Asp²²-GLP-1(7-36)NH₂，Gly⁸-Asp²²-GLP-1(7-37)OH，Gly⁸-Asp²²-GLP-1(7-36)NH₂，

Val⁸-Lys²²-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Lys²²-GLP-1(7-36)NH₂，Gly⁸-Lys²²-GLP-1(7-37)OH，

Gly⁸-Lys²²-GLP-1(7-36)NH₂，Leu⁸-Glu²²-GLP-1(7-37)OH，Leu⁸-Glu²²-GLP-1(7-36)NH₂，

Ile⁸-Glu²²-GLP-1(7-37)OH，Ile⁸-Glu²²-GLP-1(7-36)NH₂，Leu⁸-Asp²²-GLP-1(7-37)OH，

Leu⁸-Asp²²-GLP-1(7-36)NH₂，Ile⁸-Asp²²-GLP-1(7-37)OH，Ile⁸-Asp²²-GLP-1(7-36)NH₂，

Leu⁸-Lys²²-GLP-1(7-37)OH，Leu⁸-Lys²²-GLP-1(7-36)NH₂，Ile⁸-Lys²²-GLP-1(7-37)OH，

Ile⁸-Lys²²-GLP-1(7-36)NH₂，Ser⁸-Glu²²-GLP-1(7-37)OH，Ser⁸-Glu²²-GLP-1(7-36)NH₂，

Thr⁸-Glu²²-GLP-1(7-37)OH，Thr⁸-Glu²²-GLP-1(7-36)NH₂，Ser⁸-Asp²²-GLP-1(7-37)OH，

Ser⁸-Asp²²-GLP-1(7-36)NH₂，Thr⁸-Asp²²-GLP-1(7-37)OH，Thr⁸-Asp²²-GLP-1(7-36)NH₂，

Ser⁸-Lys²²-GLP-1(7-37)OH，Ser⁸-Lys²²-GLP-1(7-36)NH₂，Thr⁸-Lys²²-GLP-1(7-37)OH，

Thr⁸-Lys²²-GLP-1(7-36)NH₂，Glu²²-GLP-1(7-37)OH，Glu²²-GLP-1(7-36)NH₂，

Asp²²-GLP-1(7-37)OH，Asp²²-GLP-1(7-36)NH₂，Lys²²-GLP-1(7-37)OH，

Lys²²-GLP-1(7-36)NH₂，Val⁸-Ala²⁷-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Glu²²-Ala²⁷-GLP-1(7-37)OH，

Val⁸-Glu³⁰-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Glu³⁰-GLP-1(7-36)NH₂，Gly⁸-Glu³⁰-GLP-1(7-37)OH，

Gly⁸-Glu³⁰-GLP-1(7-36)NH₂，Leu⁸-Glu³⁰-GLP-1(7-37)OH，Leu⁸-Glu³⁰-GLP-1(7-36)NH₂，

Ile⁸-Glu³⁰-GLP-1(7-37)OH，Ile⁸-Glu³⁰-GLP-1(7-36)NH₂，Ser⁸-Glu³⁰-GLP-1(7-37)OH，

Ser⁸-Glu³⁰-GLP-1(7-36)NH₂，Thr⁸-Glu³⁰-GLP-1(7-37)OH，Thr⁸-Glu³⁰-GLP-1(7-36)NH₂，

Val⁸-His³⁷-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-His³⁷-GLP-1(7-36)NH₂，Gly⁸-His³⁷-GLP-1(7-37)OH，

Gly⁸-His³⁷-GLP-1(7-36)NH₂，Leu⁸-His³⁷-GLP-1(7-37)OH，Leu⁸-His³⁷-GLP-1(7-36)NH₂，

Ile⁸-His³⁷-GLP-1(7-37)OH，Ile⁸-His³⁷-GLP-1(7-36)NH₂，Ser⁸-His³⁷-GLP-1(7-37)OH，

Ser⁸-His³⁷-GLP-1(7-36)NH₂，Thr⁸-His³⁷-GLP-1(7-37)OH，Thr⁸-His³⁷-GLP-1(7-36)NH₂。

具有多个替换的一些优选的式VIII的GLP-1化合物包括GLP-1(7-37)OH，其中位置8是缬氨酸或甘氨酸，位置22是谷氨酸，位置16是酪氨酸，亮氨酸，或色氨酸，位置18是酪氨酸，色氨酸，或异亮氨酸，位置25是缬氨酸，位置33是异亮氨酸。其他优选的GLP-1化合物包括如下：Val⁸-Tyr¹⁶-GLP-1(7-37)OH

Val⁸-Tyr¹²-Glu²³-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Tyr¹⁶-Phe¹⁹-GLP-1(7-37)OH，

Val⁸-Tyr¹⁶-Glu²²-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Trp¹⁶-Glu²²-GLP-1(7-37)OH，

Val⁸-Leu¹⁶-Glu²²-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Ile¹⁶-Glu²²-GLP-1(7-37)OH，

Val⁸-Phe¹⁶-Glu²²-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Trp¹⁸-Glu²²-GLP-1(7-37)OH，

Val⁸-Tyr¹⁸-Glu²²-GLP-1(7-37)OH，Val⁸-Phe¹⁸-Glu²²-GLP-1(7-37)OH，和

Val⁸-Ile¹⁸-Glu²²-GLP-1(7-37)OH。

本发明的GLP-1化合物也包括Exendin化合物。Exendin-3和Exendin-4是首先从Helodermatidae蜥蜴毒液分离的生物活性肽，并且已经显示与GLP-1受体结合，刺激了哺乳动物腔壁细胞中依赖cAMP的H⁺生产。Exendin-3和Exendin-4两者都是39个氨基酸肽，约与GLP-1具有53％的同源性。它们的作用是GLP-1活性的有效力的拮抗剂。值得注意的是，N末端截短的Exendin的衍生物，称为Exendin(9-39个氨基酸)，是Exendin-3，Exendin-4和GLP-1的抑制剂。

Exendin化合物通常包括具有Exendin-3，Exendin-4，或其类似物或片段的氨基酸序列的多肽。Exendin-3和Exendin-4在美国专利5,424,286中公开。

Exendin-3具有SEQ ID NO：10的氨基酸序列：

His⁷-Ser-Asp-Gly¹⁰-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp¹⁵-Leu-Ser-Lys-Gln-Met²⁰-Glu-Glu-Glu-Ala-Val²⁵-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu³⁰-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly³⁵-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly⁴⁰-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser⁴⁵-NH₂

(SEQ ID NO：10)

Exendin-4具有SEQ ID NO：11的氨基酸序列：

His⁷-Gly-Glu-Gly¹⁰-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp¹⁵-Leu-Ser-Lys-Gln-Met²⁰-Glu-Glu-Glu-Ala-Val²⁵-Arg-Leu-Phe-Ile-Glu³⁰-Trp-Leu-Lys-Asn-Gly³⁵-Gly-Pro-Ser-Ser-Gly⁴⁰-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser⁴⁵-NH₂

(SEQ ID NO：11)

GLP-1化合物也包括Exendin片段，是在从Exendin或Exendin类似物的N末端和/或C末端截短了一个或多个氨基酸后得到的多肽。另外，GLP-1化合物包括Exendin多肽，其中在Exendin或其片段的N末端和/或C末端已经加入了一个或多个氨基酸。这一类型的Exendin化合物具有至多大约45个氨基酸。

GLP-1化合物也包括“Exendin类似物”。Exendin类似物与Exendin-4，Exendin-3或其片段具有足够的同源性，使得类似物具有促胰岛素活性。Exendin片段和/或类似物的活性可以利用体外实验(如实施例1中所述的那些)来评估。

优选地，Exendin类似物具有Exendin-4或其片段的氨基酸序列，并且是经过修饰的，以致在Exendin-4或Exendin-4的片段的对应位置的氨基酸有一个，两个，三个，四个或五个氨基酸的区别。在命名本文所用Exendin化合物时，在原来的结构之前指明替代的氨基酸和它的位置。例如，Val⁸-Exendin-4指明了一个Exendin化合物，其中正常情况下在Exendin-4的位置8的甘氨酸被缬氨酸替换。

另一组优选的GLP-1化合物由式IX的GLP-1/Exendin-4类似物组成(SEQ ID NO：12)。

Xaa⁷-Xaa⁸-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaa¹⁶-Ser-Xaa¹⁸-Xaa¹⁹-Xaa²⁰-Glu-Xaa²²-Xaa²³-Ala-Xaa²⁵-Xaa²⁶-Xaa²⁷-Phe-Ile-Xaa³⁰-Trp-Leu-Xaa³³-Xaa³⁴-Gly-Xaa³⁶-R³⁷

式IX(SEQ ID NO：12)

其中：

Xaa⁷是：L-组氨酸，D-组氨酸，脱氨基-组氨酸，2-氨基-组氨酸，β-羟基-组氨酸，高组氨酸，α-氟甲基-组氨酸或α-甲基-组氨酸；

Xaa⁸是Gly，Ala，或Val；

Xaa¹⁶是Leu或Val；

Xaa¹⁸是Lys或Ser；

Xaa¹⁹是Gln或Tyr；

Xaa²⁰是Met或Leu；

Xaa²²是Glu或Gln；

Xaa²³是Glu或Gln；

Xaa²⁵是Val或Ala；

Xaa²⁶是Arg或Lys；

Xaa²⁷是Leu或Glu；

Xaa³⁰是Glu或Ala

Xaa³³是Val或Lys；

Xaa³⁴是Asn或Lys；

Xaa³⁶是Gly或Arg；并且

R³⁷是Gly，Pro，Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser，或缺失。

用于本发明的另外的Exendin类似物在PCT专利出版物WO 99/25728(Beeley等人)；WO 99/25727(Beeley等人)；WO98/05351(Young等人)；WO 99/40788(Young等人)；WO 99/07404(Beeley等人)；和WO 99/43708(Knudsen等人)中描述。

另一组优选的GLP-1化合物具有式X的氨基酸序列(SEQ IDNO：13)

Xaa⁷-Xaa⁸-Glu-Gly-Thr-Xaa¹²-Thr-Ser-Asp-Xaa¹⁶-Ser-Xaa¹⁸-Xaa¹⁹-Xaa²⁰-Glu-Xaa²²-Gln-Ala-Xaa²⁵-Lys-Xaa²⁷-Phe-Ile-Xaa³⁰-Trp-Leu-Xaa³³-Xaa³⁴-Gly-Xaa³⁶-Xaa³⁷-Xaa³⁸-Xaa³⁹-Xaa⁴⁰-Xaa⁴¹-Xaa⁴²-Xaa⁴³-Xaa⁴⁴-Xaa⁴⁵-Xaa⁴⁶-Xaa⁴⁷

式X(SEQ ID NO：13)

其中：Xaa⁷是L-组氨酸，D-组氨酸，脱氨基-组氨酸，2-氨基组氨酸，β-羟基-组氨酸，高组氨酸，α-氟甲基-组氨酸或α-甲基-组氨酸；

Xaa⁸是Ala，Gly，Val，Leu，Ile，Ser，或Thr；

Xaa¹²是Phe，Trp，或Tyr；

Xaa¹⁶是Val，Trp，Ile，Leu，Phe，或Tyr；

Xaa¹⁸是Ser，Trp，Tyr，Phe，Lys，Ile，Leu，Val；

Xaa¹⁹是Tyr，Trp，或Phe；

Xaa²⁰是Leu，Phe，Tyr，或Trp；

Xaa²²是Gly，Glu，Asp，或Lys；

Xaa²⁵是Ala，Val，Ile，或Leu；

Xaa²⁷是Glu，Ile，或Ala；

Xaa³⁰是Ala或Glu；

Xaa³³是Val或Ile；

Xaa³⁴是Lys，Asp，Arg，或Glu；

Xaa³⁶是Gly，Pro，或Arg；

Xaa³⁷是Gly，Pro，或Ser；

Xaa³⁸是Ser，Pro，或His；

Xaa³⁹是Ser，Arg，Thr，Trp，或Lys；

Xaa⁴⁰是Ser或Gly；

Xaa⁴¹是Ala，Asp，Arg，Glu，Lys，或Gly；

Xaa⁴²是Pro，Ala，NH₂，或缺失；

Xaa⁴³是Pro，Ala，NH₂，或缺失；

Xaa⁴⁴是Pro，Ala，Arg，Lys，His，NH₂，或缺失；

Xaa⁴⁵是Ser，His，Pro，Lys，Arg，NH₂，或缺失；

Xaa⁴⁶是His，Ser，Arg，Lys，NH₂或缺失；并且

Xaa⁴⁷是His，Ser，Arg，Lys，NH₂或缺失；

条件是，如果Xaa⁴²，Xaa⁴³，Xaa⁴⁴，Xaa⁴⁵，Xaa⁴⁶，或者Xaa⁴⁷缺失，那么下游的各氨基酸也缺失，并且GLP-1肽不具有在Xaa³⁶开始的下面的C末端氨基酸延伸：Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH₂。

另一组优选的GLP-1化合物具有式XI(SEQ ID NO：14)的氨基酸序列

Xaa⁷-Xaa⁸-Glu-Gly-Thr-Phe-Thr-Ser-Asp-Xaa¹⁶-Ser-Ser-Tyr-Lys-Glu-Xaa²²-Gln-Ala-Xaa²⁵-Lys-Glu-Phe-Ile-Ala-Trp-Leu-Xaa³³-Xaa³⁴-Gly-Xaa³⁶-Xaa³⁷-Xaa³⁸-Xaa³⁹-Xaa⁴⁰-Xaa⁴¹-Xaa⁴²-Xaa⁴³-Xaa⁴⁴-Xaa⁴⁵-Xaa⁴⁶-Xaa⁴⁷

式XI(SEQ ID NO：14)

Xaa⁸是Gly，Val，Leu，Ile，Ser，或Thr；

Xaa¹⁶是Val，Trp，Ile，Leu，Phe，或Tyr；

Xaa²²是Gly，Glu，Asp，或Lys；

Xaa²⁵是Ala，Val，Ile，或Leu；

Xaa³³是Val或Ile；

Xaa³⁴是Lys，Asp，Arg，或Glu；

Xaa³⁶是Gly，Pro，或Arg；

Xaa³⁷是Gly，Pro，或Ser；

Xaa³⁸是Ser，Pro，或His；

Xaa³⁹是Ser，Arg，Thr，Trp，或Lys；

Xaa⁴⁰是Ser或Gly；

Xaa⁴¹是Ala，Asp，Arg，Glu，Lys，或Gly；

Xaa⁴²是Pro或Ala；

Xaa⁴³是Pro或Ala；

Xaa⁴⁴是Pro，Ala，Arg，Lys，His，NH₂，或缺失；

Xaa⁴⁵是Set，His，Pro，Lys，Arg，NH₂或缺失；

Xaa⁴⁶是His，Ser，Arg，Lys，NH₂或缺失；并且

Xaa⁴⁷是His，Ser，Arg，Lys，NH₂或缺失；

条件是，如果Xaa⁴⁴，Xaa⁴⁵，Xaa⁴⁶，或者Xaa⁴⁷缺失，那么下游的各氨基酸缺失，并且GLP-1肽不具有在Xaa³⁶开始的下面的C末端的氨基酸延伸：Gly-Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser-NH₂。

式X和式XI的优选的实施方案包括GLP-1化合物，它在位置8具有缬氨酸或甘氨酸，在位置22具有谷氨酸。

适于在本发明中利用的递送剂：

可以通过本领域已知的有机化学方法和如WO 90/36480；WO 96/30036；美国专利5,643,957；美国专利6,242,495中所述制备本发明的递送剂，这些文献全部引入本文作为参考。

本发明的许多递送剂可以容易地一些氨基酸制备，这些氨基酸包括但不限于氨基辛酸，丁酰基羟基氨基酸，氨基苯基丁酸，氨基苯基己酸，氨基苯基丙酸，氨基唾液酸，氨基苯基琥珀酸，氨基壬酸，氨基尼克酸，氨基戊酸，氨基苯基乙酸，氨基辛酸，氨基十一烷酸，氨基庚酸，氨基羟苯酸，和氨基癸酸。

例如，通过将单一的酸与适当的试剂反应可以制备递送剂，所述适当的试剂是与存在于氨基酸中的游离氨基成分反应而形成酰胺的。保护基团可以用于避免如本领域的技术人员已知的不需要的副反应。

通过再结晶或通过在固体柱支持物上分级分离可以纯化递送剂。适当的再结晶溶剂***包括乙腈，甲醇和四氢呋喃。可以利用以甲醇/正丙醇混合物作为移动相的适当的固体柱支持物(如氧化铝)；以四氟乙酸/乙腈混合物作为移动相的反相柱支持物；以水作为移动相的离子交换层析进行分级分离。当进行阴离子交换层析时，优选地利用随后的0-500mM的氯化钠梯度。

本发明的有用的递送剂在美国专利5,541,155；5,693,338；5,976,569；5,643,957；5,955,503；6,100,298；5,650,386；5,866,536；5,965,121；5,989,539；6,001,347；6,071,510；5,820,881；和6,242,495；和WO 02/2509；WO 01/51454；WO 01/44199；WO 01/32130；WO00/59863；WO 00/50386；WO 00/47188；和WO 00/40203中有描述；并且全部引入本文作为参考。本领域技术人员将能认识到，递送剂的变化是允许的，并且可以用于本发明中。

递送剂的例子在表1中有描述。优选的表1的递送剂是递送剂号1，2，4，5，6，9，10，11，13，14，15，20，21，22，23，24，26，28，30，31，35，36，38，39，40，41，42，43，44，46，51，52，和54。

表1.递送剂

含有GLP-1化合物和递送剂的口服制剂可以用于治疗多种疾病和症状。GLP-1化合物主要通过作用于GLP-1受体发挥生物学效果。所以，可以通过口服本发明的制剂来治疗应答GLP-1受体刺激或施用GLP-1化合物的疾病和/或症状。这些受试者被称作是“需要GLP-1化合物的治疗”或者“需要GLP-1受体的刺激”。包括在本发明中的是具有非胰岛素依赖的糖尿病，胰岛素依赖的糖尿病，休克(参见WO 00/16797)，心肌梗塞(参见WO 98/08531)，肥胖(参见WO 98/19698)，在外科后的代谢变化(参见美国专利6,006,753)，功能性消化不良和刺激性肠道综合症(参见WO 99/64060)的受试者。同样包括在本发明中的是需要用GLP-1化合物预防性治疗的受试者，例如有发展成非胰岛素依赖的糖尿病的危险的受试者(参见WO00/07617)。葡萄糖耐受性受损或禁食葡萄糖受损的受试者，体重比正常身高和体形受试者体重高约25％以上的受试者，部分胰腺切除的受试者，一个或多个亲族有非胰岛素依赖的糖尿病的受试者，具有妊娠糖尿病的受试者，和具有急性或慢性胰腺炎的受试者是有发展成非胰岛素依赖的糖尿病危险的。

本发明可以参考下面的实施例来更好地理解。这些例子用来代表本发明的特定的实施方案，并不限制本发明的范围。

实施例1

促胰岛素活性的确定

胰腺组织的胶原酶消化物是在Ficoll梯度(在Hank的平衡溶液，pH7.4中27％，23％，20.5％，和11％)上分离的。从20.5％/11％的界面收集胰岛，洗涤并在立体显微镜下挑除外分泌腺和其他组织。在用10％的胎牛血浆补充并且含有11mM的葡萄糖的RPMI 1640培养基，在37℃和95％的空气/5％CO₂过夜温育胰岛。在一个浓度范围，优选地在含有10％胎牛血浆和16.7mM的葡萄糖的RPMI培养基中3纳摩尔到30纳摩尔中制备待研究的GLP-1化合物。然后，通过移液管将约8到10的分离胰岛转移到在96孔微滴盘中总体积250μL的含有培养基的GLP-1化合物。在37℃，95％的空气，5％CO₂下温育胰岛90分钟。然后，收集无胰岛培养基的等分试样，利用Equate胰岛素RIA试剂盒(Binax，Inc.，Portland，ME)放射性免疫测试其中的100μl中存在的胰岛素的量。

实施例2

存在DPP IV时的GLP-1的稳定性

通过在人血浆中温育GLP-1分子可以确定各个GLP-1分子的稳定性。在37℃，与300pmol/L的GLP-1分子温育从健康人的志愿者得到血浆(800μL)，时间达到6小时。然后根据Deacon等人，在J.Clin.Endocrinol.Metab.80：952-957(1995)进行逆相HPLC和RIA分析。

实施例3

递送剂号15的制剂

称重约600mg的15号递送剂到I型玻璃小瓶中，加入3mL的碱(0.1N NaOH，pH12.7)，最后浓度为200mg/mL。调节pH到7.1，估计浓度为171mg/ml。然后将15号递送剂用Milli-Q水稀释到150mg/ml。

实施例4

40号递送剂的制剂

在实施例1后，在需要的浓度150mg/ml下，40和9号递送剂是不溶的。用碱液进一步稀释到pH11.5也没有达到需要的150mg/mL的浓度。加入共溶剂也不能将递送剂溶解到需要的150mg/mL的浓度。测试的共溶剂包括乙醇，N甲基吡咯烷酮，N，N-二甲基乙酰胺，N，N-二甲基甲酰胺，glycofurol，乙氧二醇，丙二醇，聚乙二醇300，和聚乙烯吡咯烷酮。

但是，对于40号递送剂，称重150mg到I型小瓶中，在其中再加入1ml的Milli-Q水，用10N NaOH调节pH。利用这一途径，得到150mg/mL的40号递送剂(pH8.22)。

实施例5

9号递送剂的制剂

由于9号递送剂的水不溶性，在4％重量/体积(含水)的悬浮剂羟基丙基甲基纤维素(Klucel)中制备悬浮制剂。在含有300mg的9号递送剂的I型玻璃小瓶中加入约1.7mL的悬浮剂。在冰上冷却制备液3分钟，接着在冰上利用Misonix Sonicator Ultrasonic ProcessorXL(3/16^th英寸微尖头)探针超声30分钟。超声波处理导致在将9号递送剂的平均颗粒大小在pH7.98从48μM降低到8μM(CoulterLS颗粒大小分析仪)。然后，将制剂用悬浮剂稀释到150mg/mL。

实施例6

其他递送剂

如上面的实施例3和4所述制备所有其他递送剂，除了10，11，12，16，18，22，25，27，33和52号递送剂是如上面的实施例5中所述制备的。在两个分开的制剂中制备46号和54号递送剂：一个根据实施例3或4来制备，另一个根据实施例5来制备。

实施例7

稳定性研究

对9，15和40号递送剂进行稳定性研究。如上面所述新鲜制备的递送剂分别达到150mg/mL的需要的浓度。将样品分成3个2mL的等分试样，存储在-20℃，4℃和室温下3天。在存储期的最后进行HPLC测验和分析。结果表示在表2。

表2.递送剂9，15和40的稳定性数据

温度	递送剂40号(mg/mL)	递送剂15号(mg/mL)	递送剂9号(mg/mL)
温度	递送剂40号(mg/mL)	递送剂15号(mg/mL)	递送剂9号(mg/mL)	-20℃	134.0	135.5	153.2
4℃	135.1	138.2	148.6	-20℃	134.0	135.5	153.2
4℃	135.1	138.2	148.6	室温	135.3	137.4	146.0

实施例8

GLP-1化合物的制剂

通过在蒸馏水中溶解GLP-1化合物制备Val⁸-Glu²²-GLP-1的溶液，达到7mg/ml的浓度。慢慢将pH用2N NaOH调节到10.5，接着在室温下温育30分钟。加入一体积的1M Tris缓冲液，pH8.0，得到最后的缓冲液浓度20mM Tris，用1N或5N HCl将pH调节到7.8。然后，通过低蛋白质结合0.22μM针筒滤器(Millex GV，Millipore)过滤溶液，通过UV光谱确定GLP-1化合物的浓度。将溶液用20mM Tris缓冲液，pH7.8稀释到终浓度5.5mg/mL。然后，将肽溶液在-70℃储存在1.0mL等分试样中备用。

实施例9

最终的制剂

在体内施用之前约30分钟到1小时，将4.5mL的递送剂与0.5mL的GLP-1化合物结合，新鲜制备最终的制剂。通过口服管饲雄性Sprague Dawley大鼠施用2mL/kg(1.1mg/kg GLP-1化合物，300mg/kg递送剂)最终的制剂，这些大鼠在施用之前禁食了12小时。将GLP-1化合物单独进行皮下剂量给药，用作对照(0.011mg/kg)。在下面的表格中显示了平均药物动力学参数。

表3：递送剂9，15和40的平均药物动力学和生物利用率

递送剂#	制剂	T_max(min)	C_max(pg/mL)	AUC(pg^*min/mL)	％F^a
递送剂#	制剂	T_max(min)	C_max(pg/mL)	AUC(pg^*min/mL)	％F^a		溶液	10±0	3781±1097	93635±18531
	溶液	NC^b	NC^b	NC^b	NC^b		溶液	10±0	3781±1097	93635±18531
	溶液	NC^b	NC^b	NC^b	NC^b	40	溶液	6±3	6304±4929	94215±66732	1.01
15	溶液	5±0	25660±12522	254291±129387	2.72	40	溶液	6±3	6304±4929	94215±66732	1.01
15	溶液	5±0	25660±12522	254291±129387	2.72	9	Klucel悬液	7±3	2637±2695	28144±38576	0.30

^a相对于皮下给药的生物利用率

^bNC＝在检测水平以下没有计算

从上面的数据可知，在用递送剂15号的制剂中口服施用Val⁸-Glu²²-GLP-1的生物利用率经计算是2.72％，在含有递送剂40号的制剂中Val⁸-Glu²²-GLP-1利用率经计算是1.01％，含有Val⁸-Glu²²-GLP-1的制剂中的利用率经计算是0.3％。

下面的表4显示了所有递送剂的药物动力学数据。

表4.递送剂1到56号的Tmax，Cmax和AUC药物动力学数据

^a利用的肽：HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLVKGRG。

^b利用的肽：HVEGTFTSDVSSYLEEQAAKEFIAWLIKGGPSSGDPPPS。

^c由于数据不充分没有计算。

^d制剂是含有少量未溶解的/纤维颗粒的溶液。

^e制剂是混浊溶液。

^f制剂是含有少量未溶解的颗粒的溶液。

^g制剂是混浊的粘稠溶液。

^h制剂是含有少量半透明的颗粒的溶液。

ⁱ制剂是不均匀的，有些成块的悬浮液。

序列表

<110>Eli Lilly&Company

<120>施用GLP-1分子的方法

<130>X15557

<160>14

<170>PatentIn version 3.1

<210>1

<211>31

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>合成构建体

<220>

<221>misc_特征

<222>(31)..(31)

<223>Xaa＝Gly或缺失

<220>

<221>MOD_RES

<222>(30)..(30)

<223>酰胺化，如果第31位Xaa缺失

<400>1

His Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly

1 5 10 15

Gln Ala Ala Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Xaa

20 25 30

<210>2

<211>39

<212> PRT

<213>人工

<220>

<223>合成构建体

<220>

<221>misc_特征

<222>(2)..(2)

<223>Xaa是Ala，Gly，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(3)..(3)

<223>Xaa是Glu，Asp，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(5)..(5)

<223>Xaa是Thr，Ala，Gly，Ser，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(8)..(8)

<223>Xaa是Ser，Ala，Gly，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(10)..(10)

<223>Xaa是Val，Ala，Gly，Ser，Thr，Leu，Ile，Tyr，Glu，Asp，Trp，或

Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(11)..(11)

<223>Xaa是Ser，Ala，Gly，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(12)..(12)

<223>Xaa是Ser，Ala，Gly，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，Trp，Tyr，或

Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(13)..(13)

<223>Xaa是Tyr，Phe，Trp，Glu，Asp，Gln，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(14)..(14)

<223>Xaa是Leu，Ala，Gly，Ser，Thr，Ile，Val，Glu，Asp，Met，Trp，

Tyr，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(15)..(15)

<223>Xaa是Glu，Asp，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(16)..(16)

<223>Xaa是Gly，Ala，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(17)..(17)

<223>Xaa是Gln，Asn，Arg，Glu，Asp，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(18)..(18)

<223>Xaa是Ala，Gly，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Arg，Glu，Asp，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(19)..(19)

<223>Xaa是Ala，Gly，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(20)..(20)

<223>Xaa是Lys，Arg，Gln，Glu，Asp，或His

<220>

<221>misc_特征

<222>(21)..(21)

<223>Xaa是Leu，Glu，Asp，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(24)..(24)

<223>Xaa是Ala，Gly，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(25)..(25)

<223>Xaa是Trp，Phe，Tyr，Glu，Asp，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(26)..(26)

<223>Xaa是Leu，Gly，Ala，Ser，Thr，Ile，Val，Glu，Asp，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(27)..(27)

<223>Xaa是Val，Gly，Ala，Ser，Thr，Leu，Ile，Glu，Asp，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(28)..(28)

<223>Xaa是Asn，Lys，Arg，Glu，Asp，或His

<220>

<221>misc_特征

<222>(29)..(29)

<223>Xaa是Gly，Ala，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(30)..(30)

<223>Xaa是Gly，Arg，Lys，Glu，Asp，或His

<220>

<221>misc_特征

<222>(31)..(31)

<223>Xaa是Pro，Gly，Ala，Ser，Thr，Leu，Ile，Val，Glu，Asp，或Lys，

或缺失

<220>

<221>misc_特征

<222>(32)..(32)

<223>Xaa是Ser，Arg，Lys，Glu，Asp，或His，或缺失

<220>

<221>misc_特征

<222>(33)..(33)

<223>Xaa是Ser，Arg，Lys，Glu，Asp，或His，或缺失

<220>

<221>misc_特征

<222>(34)..(34)

<223>Xaa是Gly，Asp，Glu，或Lys，或缺失

<220>

<221>mise_特征

<222>(35)..(35)

<223>Xaa是Ala，Phe，Trp，Tyr，Glu，Asp，或Lys，或缺失

<220>

<221>misc_特征

<222>(36)..(36)

<223>Xaa是Ser，Pro，Lys，Glu，或Asp，或缺失

<220>

<221>misc_特征

<222>(37)..(37)

<223>Xaa是Ser，Pro，Glu，Asp，或Lys，或缺失

<220>

<221>misc_特征

<222>(38)..(38)

<223>Xaa是Gly，Pro，Glu，Asp，或Lys，或缺失

<220>

<221>misc_特征

<222>(39)..(39)

<223>Xaa是Ala，Ser，Val，Glu，Asp，或Lys，或缺失

<220>

<221>MOD_RES

<222>(39)..(39)

<223>酰胺化：Ala，Ser，Val，Glu，Asp，或Lys在此位置可被酰胺化

<220>

<221>misc_特征

<222>(31)..(38)

<223>当此位置的氨基酸缺失时，所有的后续氨基酸缺失

<400>2

His Xaa Xaa Gly Xaa Phe Thr Xaa Asp Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

1 5 10 15

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Phe Ile Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

20 25 30

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

35

<210>3

<211>31

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>合成构建体

<220>

<221>misc_特征

<222>(1)..(1)

<223>Xaa是L-组氨酸，D-组氨酸，脱氨基组氨酸，2-氨基组氨酸，beta-羟基组氨酸，高组氨酸，alpha-氟甲基组氨酸或alpha-甲基组氨酸

<220>

<221>misc_特征

<222>(2)..(2)

<223>Xaa是Gly，Ala，Val，Leu，Ile，Ser，或Thr

<220>

<221>misc_特征

<222>(3)..(3)

<223>Xaa是Thr，Ser，Arg，Lys，Trp，Phe，Tyr，Glu，或His

<220>

<221>misc_特征

<222>(5)..(5)

<223>Xaa是Asp，Glu，Arg，Thr，Ala，Lys，或His

<220>

<221>misc_特征

<222>(6)..(6)

<223>Xaa是His，Trp，Phe，或Tyr

<220>

<221>misc_特征

<222>(10)..(10)

<223>Xaa是Leu，Ser，Thr，Trp，His，Phe，Asp，Val，Tyr，Glu，或Ala

<220>

<221>misc_特征

<222>(12)..(12)

<223>Xaa是His，Pro，Asp，Glu，Arg，Ser，Ala，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(13)..(13)

<223>Xaa是Gly，Asp，Glu，Gln，Asn，Lys，Arg，或Cys

<220>

<221>misc_特征

<222>(17)..(17)

<223>Xaa是His，Asp，Lys，Glu，Gln，或Arg

<220>

<221>misc_特征

<222>(18)..(18)

<223>Xaa是Glu，Arg，Ala，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(20)..(20)

<223>Xaa是Trp，Tyr，Phe，Asp，Lys，Glu，或His

<220>

<221>misc_特征

<222>(21)..(21)

<223>Xaa是Ala，Glu，His，Phe，Tyr，Trp，Arg，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(24)..(24)

<223>Xaa是Ala，Glu，Asp，Ser，或His

<220>

<221>misc_特征

<222>(25)..(25)

<223>Xaa是Asp，Glu，Ser，Thr，Arg，Trp，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(27)..(27)

<223>Xaa是Asp，Arg，Val，Lys，Ala，Gly，或Glu

<220>

<221>misc_特征

<222>(28)..(28)

<223>Xaa是Glu，Lys，或Asp

<220>

<221>misc_特征

<222>(29)..(29)

<223>Xaa是Thr，Ser，Lys，Arg，Trp，Tyr，Phe，Asp，Gly，Pro，His，

或Glu

<220>

<221>misc_特征

<222>(30)..(30)

<223>Xaa是Thr，Ser，Asp，Trp，Tyr，Phe，Arg，Glu，或His

<220>

<221>misc_特征

<222>(31)..(31)

<223>Xaa是Lys，Arg，Thr，Ser，Glu，Asp，Trp，Tyr，Phe，His，Gly，

Gly-Pro，或缺失

<400>3

Xaa Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Thr Ser Asp Xaa Ser Xaa Xaa Leu Glu Gly

1 5 10 15

Xaa Xaa Ala Xaa Xaa Phe Ile Xaa Xaa Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

20 25 30

<210>4

<211>31

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>合成构建体

<220>

<221>misc_特征

<222>(1)..(1)

<220>

<221>misc_特征

<222>(2)..(2)

<223>Xaa是Gly，Ala，Val，Leu，Ile，Ser，或Thr

<220>

<221>misc_特征

<222>(5)..(5)

<223>Xaa是Asp，Glu，Arg，Thr，Ala，Lys，或His

<220>

<221>misc_特征

<222>(6)..(6)

<223>Xaa是His，Trp，Phe，或Tyr

<220>

<221>misc_特征

<222>(10)..(10)

<223>Xaa是Leu，Ser，Thr，Trp，His，Phe，Asp，Val，Glu，或Ala

<220>

<221>misc_特征

<222>(16)..(16)

<223>Xaa是Gly，Asp，Glu，Gln，Asn，Lys，Arg，或Cys

<220>

<221>misc_特征

<222>(17)..(17)

<223>Xaa是His，Asp，Lys，Glu，或Gln

<220>

<221>misc_特征

<222>(18)..(18)

<223>Xaa是Glu，His，Ala，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(19)..(19)

<223>Xaa是Asp，Lys，Glu，或His

<220>

<221>misc_特征

<222>(21)..(21)

<223>Xaa是Ala，Glu，His，Phe，Tyr，Trp，Arg，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(24)..(24)

<223>Xaa是Ala，Glu，Asp，Ser，或His

<220>

<221>misc_特征

<222>(27)..(27)

<223>Xaa是Asp，Arg，Val，Lys，Ala，Gly，或Glu

<220>

<221>misc_特征

<222>(28)..(28)

<223>Xaa是Glu，Lys，或Asp

<220>

<221>misc_特征

<222>(29)..(29)

<223>Xaa是Thr，Ser，Lys，Arg，Trp，Tyr，Phe，Asp，Gly，Pro，His，

或Glu

<220>

<221>misc_特征

<222>(30)..(30)

<223>Xaa是Arg，Glu，或His

<220>

<221>misc_特征

<222>(31)..(31)

<223>Xaa是Lys，Arg，Thr，Ser，Glu，Asp，Trp，Tyr，Phe，His，Gly，

Gly-Pro，或缺失

<400>4

Xaa Xaa Glu Gly Xaa Xaa Thr Ser Asp Xaa Ser Ser Tyr Leu Glu Xaa

l 5 10 15

Xaa Xaa Xaa Lys Xaa Phe Ile Xaa Trp Leu Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

20 25 30

<210>5

<211>31

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>合成构建体

<220>

<221>misc_特征

<222>(1)..(1)

<220>

<221>misc_特征

<222>(2)..(2)

<223>Xaa是Gly，Ala，Val，Leu，Ile，Ser，Met，或Thr

<220>

<221>misc_特征

<222>(6)..(6)

<223>Xaa是His，Trp，Phe，或Tyr

<220>

<221>misc_特征

<222>(10)..(10)

<223>Xaa是Leu，Ser，Thr，Trp，His，Phe，Asp，Val，Glu，或Ala

<220>

<221>misc_特征

<222>(16)..(16)

<223>Xaa是Gly，Asp，Glu，Gln，Ash，Lys，Arg，或Cys

<220>

<221>misc_特征

<222>(17)..(17)

<223>Xaa是His，Asp，Lys，Glu，或Gln

<220>

<221>misc_特征

<222>(20)..(20)

<223>Xaa是Asp，Lys，Glu，或His

<220>

<221>misc_特征

<222>(24)..(24)

<223>Xaa是Ala，Glu，Asp，Ser，或His

<220>

<221>misc_特征

<222>(29)..(29)

<223>Xaa是Thr，Ser，Lys，Arg，Trp，Tyr，Phe，Asp，Gly，Pro，His，

或Glu

<220>

<221>misc_特征

<222>(31)..(31)

<223>Xaa是Lys，Arg，Thr，Ser，Glu，Asp，Trp，Tyr，Phe，His，Gly，

Gly-Pro，或缺失

<400>5

Xaa Xaa Glu Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Xaa Ser Ser Tyr Leu Glu Xaa

1 5 10 15

Xaa Ala Ala Xaa Glu Phe Ile Xaa Trp Leu Val Lys Xaa Arg Xaa

20 25 30

<210>6

<211>31

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>合成构建体

<220>

<221>misc_特征

<222>(1)..(1)

<220>

<221>misc_特征

<222>(2)..(2)

<223>Xaa是Gly，Ala，Val，Leu，Ile，Ser，或Thr

<220>

<221>misc_特征

<222>(16)..(16)

<223>Xaa是Gly，Asp，Glu，Gln，Asn，Lys，Arg，或Cys

<220>

<221>misc_特征

<222>(17)..(17)

<223>Xaa是His，Asp，Lys，Glu，或Gln

<220>

<221>misc_特征

<222>(18)..(18)

<223>Xaa是Ala，Glu，His，Phe，Tyr，Trp，Arg，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(24)..(24)

<223>Xaa是Ala，Glu，Asp，Ser，或His

<220>

<221>misc特征

<222>(31)..(31)

<223>Xaa是Lys，Arg，Thr，Ser，Glu，Asp，Trp，Tyr，Phe，His，Gly，

Gly-Pro，或缺失

<400>6

Xaa Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Xaa

1 5 10 15

Xaa Xaa Ala Lys Glu Phe Ile Xaa Trp Leu Val Lys Gly Arg Xaa

20 25 30

<210>7

<211>31

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>合成构建体

<220>

<221>misc_特征

<222>(1)..(1)

<220>

<221>misc_特征

<222>(2)..(2)

<223>Xaa是Ala，Gly，Val，Thr，Ile，和alpha-甲基丙氨酸

<220>

<221>misc_特征

<222>(15)..(15)

<223>Xaa是Glu，Gln，Ala，Thr，Ser，和Gly

<220>

<221>misc_特征

<222>(21)..(21)

<223>Xaa是Glu，Gln，Ala，Thr，Ser，和Gly

<220>

<221>misc_特征

<222>(31)..(31)

<223>Xaa是Gly-0H

<400>7

Xaa Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Xaa Gly

1 5 10 15

Gln Ala Ala Lys Xaa Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Xaa

20 25 30

<210>8

<211>30

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>合成构建体

<220>

<221>MOD_RES

<222>(1)..(1)

<223>Ala被以下基团之一修饰：4-咪唑丙酰基，4-咪唑乙酰基，或4-咪唑-alpha，alpha-二甲基-乙酰基

<220>

<221>misc_特征

<222>(19)..(19)

<223>Xaa是Lys或Arg

<220>

<221>MOD_RES

<222>(27)..(27)

<223>Lys具有C6-C10未分支酰基取代基，或未被取代

<220>

<221>misc_特征

<222>(30)..(30)

<223>Xaa是Gly-0H或缺失

<220>

<221>MOD_RES

<222>(29)..(29)

<223>酰胺化，如果第30位Xaa缺失

<400>8

Ala Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Val Ser Ser Tyr Leu Glu Gly Gln

1 5 10 15

Ala Ala Xaa Glu Phe Ile Ala Trp Leu Val Lys Gly Arg Xaa

20 25 30

<210>9

<211>31

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>合成构建体

<220>

<221>misc_特征

<222>(1)..(1)

<220>

<221>misc_特征

<222>(2)..(2)

<223>Xaa是Ala，Gly，Val，Leu，Ile，Ser，或Thr

<220>

<221>misc_特征

<222>(6)..(6)

<223>Xaa是Phe，Trp，或Tyr

<220>

<221>misc_特征

<222>(10)..(10)

<223>Xaa是Val，Trp，Ile，Leu，Phe，或Tyr

<220>

<221>misc_特征

<222>(12)..(12)

<223>Xaa是Ser，Trp，Tyr，Phe，Lys，Ile，Leu，Val

<220>

<221>misc_特征

<222>(13)..(13)

<223>Xaa是Tyr，Trp，或Phe

<220>

<221>misc_特征

<222>(14)..(14)

<223>Xaa是Leu，Phe，Tyr，或Trp

<220>

<221>misc_特征

<222>(16)..(16)

<223>Xaa是Gly，Glu，Asp，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(19)..(19)

<223>Xaa是Ala，Val，Ile，或Leu

<220>

<221>misc_特征

<222>(21)..(21)

<223>Xaa是Glu，Ile，或Ala

<220>

<221>misc_特征

<222>(24)..(24)

<223>Xaa是Ala或Glu

<220>

<221>misc_特征

<222>(27)..(27)

<223>Xaa是Val或Ile

<220>

<221>misc_特征

<222>(31)..(31)

<223>Xaa是Gly，His，NH2，或缺失

<220>

<221>MOD_RES

<222>(30)..(30)

<223>酰胺化，如果第31位Xaa缺失

<400>9

Xaa Xaa Glu Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Glu Xaa

1 5 10 15

Gla Ala Xaa Lys Xaa Phe Ile Xaa Trp Leu Xaa Lys Gly Arg Xaa

20 25 30

<210>10

<211>39

<212>PRT

<213>Heloderma sp.

<220>

<221>MISC_特征

<222>(39)..(39)

<223>Exendin-3

<220>

<221>MOD_RES

<222>(39)..(39)

<223>第39位Ser可被酰胺化

<400>10

His Ser Asp Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu

1 5 10 15

Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Asn Gly Gly Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210>11

<211>39

<212>PRT

<213>Heloderma sp.

<220>

<221>MISC_特征

<222>(39)..(39)

<223>Exendin-4

<220>

<221>MOD_RES

<222>(39)..(39)

<223>第39位Ser可被酰胺化

<400>11

His Gly Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Leu Ser Lys Gln Met Glu Glu

1 5 10 15

Glu Ala Val Arg Leu Phe Ile Glu Trp Leu Lys Ash Gly Gly Pro Ser

20 25 30

Ser Gly Ala Pro Pro Pro Ser

35

<210>12

<211>31

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>合成构建体

<220>

<221>misc_特征

<222>(1)..(1)

<220>

<221>misc_特征

<222>(2)..(2)

<223>Xaa是Gly，Ala，或Val

<220>

<221>misc_特征

<222>(10)..(10)

<223>Xaa是Leu或Val

<220>

<221>misc_特征

<222>(12)..(12)

<223>Xaa是Lys或Ser

<220>

<221>misc_特征

<222>(13)..(13)

<223>Xaa是Gln或Tyr

<220>

<221>misc_特征

<222>(14)..(14)

<223>Xaa是Met或Leu

<220>

<221>misc_特征

<222>(16)..(16)

<223>Xaa是Glu或Gln

<220>

<221>misc_特征

<222>(17)..(17)

<223>Xaa是Glu或Gln

<220>

<221>misc_特征

<222>(19)..(19)

<223>Xaa是Val或Ala

<220>

<221>misc_特征

<222>(20)..(20)

<223>Xaa是Arg或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(21)..(21)

<223>Xaa是Leu或Glu

<220>

<221>misc_特征

<222>(24)..(24)

<223>Xaa是Glu或Ala

<220>

<221>misc_特征

<222>(27)..(27)

<223>Xaa是Val或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(28)..(28)

<223>Xaa是Asn或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(30)..(30)

<223>Xaa是Gly或Arg

<220>

<221>misc_特征

<222>(31)..(31)

<223>Xaa是Gly，Pro，Pro-Ser-Ser-Gly-Ala-Pro-Pro-Pro-Ser，

或缺失

<400>12

Xaa Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Glu Xaa

1 5 10 15

Xaa Ala Xaa Xaa Xaa Phe Ile Xaa Trp Leu Xaa Xaa Gly Xaa Xaa

20 25 30

<210>13

<211>41

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>合成构建体

<220>

<221>misc_特征

<222>(1)..(1)

<220>

<221>misc_特征

<222>(2)..(2)

<223>Xaa是Ala，Gly，Val，Leu，Ile，Ser，或Thr

<220>

<221>misc_特征

<222>(6)..(6)

<223>Xaa是Phe，Trp，或Tyr

<220>

<221>misc_特征

<222>(10)..(10)

<223>Xaa是Val，Trp，Ile，Leu，Phe，或Tyr

<220>

<221>misc_特征

<222>(12)..(12)

<223>Xaa是Ser，Trp，Tyr，Phe，Lys，Ile，Leu，Val

<220>

<221>misc_特征

<222>(13)..(13)

<223>Xaa是Tyr，Trp，或Phe

<220>

<221>misc_特征

<222>(14)..(14)

<223>Xaa是Leu，Phe，Tyr，或Trp

<220>

<221>misc_特征

<222>(16)..(16)

<223>Xaa是Gly，Glu，Asp，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(19)..(19)

<223>Xaa是Ala，Val，Ile，或Leu

<220>

<221>misc_特征

<222>(21)..(21)

<223>Xaa是Glu，Ile，或Ala

<220>

<221>misc_特征

<222>(24)..(24)

<223>Xaa是Ala或Glu

<220>

<221>misc_特征

<222>(27)..(27)

<223>Xaa是Val或Ile

<220>

<221>misc_特征

<222>(28)..(28)

<223>Xaa是Lys，Asp，Arg，或Glu

<220>

<221>misc_特征

<222>(30)..(30)

<223>Xaa是Gly，Pro，或Arg

<220>

<221>misc_特征

<222>(31)..(31)

<223>Xaa是Gly，Pro，或Ser

<220>

<221>misc_特征

<222>(32)..(32)

<223>Xaa是Ser，Pro，或His

<220>

<221>misc_特征

<222>(33)..(33)

<223>Xaa是Ser，Arg，Thr，Trp，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(34)..(34)

<223>Xaa是Ser或Gly

<220>

<221>misc_特征

<222>(35)..(35)

<223>Xaa是Ala，Asp，Arg，Glu，Lys，或Gly

<220>

<221>misc_特征

<222>(36)..(36)

<223>Xaa是Pro，Ala，或缺失

<220>

<221>misc_特征

<222>(37)..(37)

<223>Xaa是Pro，Ala，或缺失

<220>

<221>misc_特征

<222>(38)..(38)

<223>Xaa是Pro，Ala，Arg，Lys，His，或缺失

<220>

<221>misc_特征

<222>(39)..(39)

<223>Xaa是Ser，His，Pro，Lys，Arg，或缺失

<220>

<221>misc_特征

<222>(40)..(40)

<223>Xaa是His，Ser，Arg，Lys，或缺失

<220>

<221>misc_特征

<222>(41)..(41)

<223>Xaa是His，Ser，Arg，Lys，或缺失

<220>

<221>MOD_RES

<222>(35)..(41)

<223>酰胺化，如果紧接的位置上的氨基酸缺失

<220>

<221>MISC_特征

<222>(36)..(40)

<223>如果此位置缺失，则所有后续的氨基酸缺失

<400>13

Xaa Xaa Glu Gly Thr Xaa Thr Ser Asp Xaa Ser Xaa Xaa Xaa Glu Xaa

1 5 10 15

Gln Ala Xaa Lys Xaa Phe Ile Xaa Trp Leu Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa

20 25 30

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

35 40

<210>14

<211>41

<212>PRT

<213>人工

<220>

<223>合成构建体

<220>

<221>misc_特征

<222>(1)..(1)

<220>

<221>misc_特征

<222>(2)..(2)

<223>Xaa是Gly，Val，Leu，Ile，Ser，或Thr

<220>

<221>misc_特征

<222>(10)..(10)

<223>Xaa是Val，Trp，Ile，Leu，Phe，或Tyr

<220>

<221>misc_特征

<222>(16)..(16)

<223>Xaa是Gly，Glu，Asp，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(19)..(19)

<223>Xaa是Ala，Val，Ile，或Leu

<220>

<221>misc_特征

<222>(27)..(27)

<223>Xaa是Val或Ile

<220>

<221>misc_特征

<222>(28)..(28)

<223>Xaa是Lys，Asp，Arg，或Glu

<220>

<221>misc_特征

<222>(30)..(30)

<223>Xaa是Gly，Pro，或Arg

<220>

<221>misc_特征

<222>(31)..(31)

<223>Xaa是Gly，Pro，或Ser

<220>

<221>misc_特征

<222>(32)..(32)

<223>Xaa是Ser，Pro，或His

<220>

<221>misc_特征

<222>(33)..(33)

<223>Xaa是Ser，Arg，Thr，Trp，或Lys

<220>

<221>misc_特征

<222>(34)..(34)

<223>Xaa是Ser或Gly

<220>

<221>misc_特征

<222>(35)..(35)

<223>Xaa是Ala，Asp，Arg，Glu，Lys，或Gly

<220>

<221>misc_特征

<222>(36)..(36)

<223>Xaa是Pro或Ala

<220>

<221>misc_特征

<222>(37)..(37)

<223>Xaa是Pro或Ala

<220>

<221>misc_特征

<222>(38)..(38)

<223>Xaa是Pro，Ala，Arg，Lys，His，或缺失

<220>

<221>misc_特征

<222>(39)..(39)

<223>Xaa是Ser，His，Pro，Lys，Arg，或缺失

<220>

<221>misc_特征

<222>(40)..(40)

<223>Xaa是His，Ser，Arg，Lys，或缺失

<220>

<221>misc_特征

<222>(41)..(41)

<223>Xaa是His，Ser，Arg，Lys，或缺失

<220>

<221>misc_特征

<222>(38)..(40)

<223>如果此位置的Xaa缺失，则所有后续的氨基酸缺失

<220>

<221>MOD_RES

<222>(37)..(41)

<223>酰胺化，如果紧接的位置上Xaa缺失

<400>14

Xaa Xaa Glu Gly Thr Phe Thr Ser Asp Xaa Ser Ser Tyr Lys Glu Xaa

1 5 10 15

Gln Ala Xaa Lys Glu Phe Ile Ala Trp Leu Xaa Xaa Gly Xaa Xaa Xaa

20 25 30

Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa

35 40

Claims

1.一种制剂，其包括GLP-1化合物和选自第2、3、4、5、6、7、8、9、11、12、13、14、15、16 、19、20、21、23、24、26、27、28、29、30、31、32、33、34、36、38、39、40、41、43、44、45、46、48、49、51、53、54、55、56号递送剂的递送剂。

2.根据权利要求1所述的制剂，其中GLP-1化合物选自SEQ IDNO：1、SEQ ID NO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14的GLP-1化合物。

3.根据权利要求1所述的制剂，其中GLP-1化合物选自SEQ IDNO：2、SEQ ID NO：3、SEQ ID NO：4、SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14的GLP-1化合物。

4.根据权利要求1所述的制剂，其中GLP-1化合物选自SEQ IDNO：2、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：13和SEQ ID NO：14的GLP-1化合物。

5.根据权利要求1所述的制剂，其中GLP-1化合物是SEQ IDNO：13或SEQ ID NO：14。

6.根据权利要求1到5的任何一项所述的制剂，其中递送剂选自第2、4、5、6、9、11、13、14、15、20、21、23、24、26、28、30、31、36、38、39、40、41、43、44、46、51和54号递送剂。

7.根据权利要求1到5的任何一项所述的制剂，其中递送剂是第3号递送剂。

8.根据权利要求1到5的制剂，其中递送剂是第7号递送剂。

9.根据权利要求1到5的任何一项所述的制剂，其中递送剂是第8号递送剂。

10.根据权利要求1到5的任何一项所述的制剂，其中递送剂是第9号递送剂。

11.根据权利要求1到5的任何一项所述的制剂，其中递送剂是第5号递送剂。

12.根据权利要求1到5的任何一项所述的制剂，其中递送剂是第13号递送剂。

13.根据权利要求1到5的任何一项所述的制剂，其中递送剂是第15号递送剂。

14.根据权利要求1到5的任何一项所述的制剂，其中递送剂是第19号递送剂。

15.根据权利要求1到5的任何一项所述的制剂，其中递送剂是第27号递送剂。

16.根据权利要求1到5的任何一项所述的制剂，其中递送剂是第53号递送剂。

17.根据权利要求1到5的任何一项所述的制剂，其中递送剂是第54号递送剂。

18.根据权利要求1到5的任何一项所述的制剂，进一步包括选自药物可接受缓冲夜、悬浮剂、共溶剂、防腐剂和等渗剂的一种或多种赋形剂。

19.根据权利要求1到5的任何一项所述的制剂，它是固体形式。

20.根据权利要求19所述的制剂，它是片剂、胶囊或颗粒。

21.根据权利要求20所述的制剂，它是粉末形式。