CN1313433C

CN1313433C - 一个联苯环辛烯木脂素及其制备方法和用途

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Publication number: CN1313433C
Application number: CNB2004100967764A
Authority: CN
Inventors: 肖培根; 陈士林; 陈四保; 许利嘉; 黄峰
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2004-12-08
Filing date: 2004-12-08
Publication date: 2007-05-02
Anticipated expiration: 2024-12-08
Also published as: CN1634854A

Abstract

本发明涉及从五味子科药用植物铁箍散Schisandra propinqua(Wall.)Baill.的根和茎中分离得到的一个新的联苯环辛烯木脂素、制备方法和用途。体外抗肿瘤实验证明，该化合物具有显著的抗肿瘤作用。

Description

一个联苯环辛烯木脂素及其制备方法和用途

发明领域：

本发明涉及通过植化提取分离手段从五味子属药用植物铁箍散Schisandra propinqua(Wall.)Baill.的根和茎中分离出一个联苯环辛烯木脂素、制备方法以及该化合物在制备治疗和/或预防肿瘤药物中的应用。

背景技术：

五味子科植物主要含有木脂素和三萜等成分，其中木脂素是五味子科植物主要的生物活性成分，而联苯环辛烯类木脂素是五味子科的特征性化学成分，骨架独特，立体化学复杂。近年来，人们通过研究发现，木脂素除了具有人们熟知的保肝降酶，调节中枢神经等作用外，还有抗脂质过氧化、抗肿瘤、抗HIV等等。迄今为止，尚未发现有文献报道联苯环辛烯木脂素具有***的作用。铁箍散[Schisandra propinqua(Wall.)Baill.]是五味子科五味子属植物，木质藤本，是我国特有的药用植物，在我国分布广泛(甘，陕，豫，鄂，滇，川，黔，桂等地均有分布)，资源丰富，在民间用来治疗风湿麻木，神经衰弱，跌打损伤，风湿骨痛，***，外伤出血，疮疖肿痛，胃痛及脉管炎等疾病。本实验室在研究铁箍散的木脂素类化合物的过程中，分离并鉴定了一个联苯环辛烯木脂素，经体外试验表明该化合物具有显著的治疗癌症的用途。

发明内容：

本发明的目的是提供一种以药用植物箍散[Schisandra propinqua(Wall.)Baill.]的根和茎为原料提取分离的具有治疗或预防肿瘤的活性的联苯环辛烯木脂素类化合物。

本发明的技术方案包括如下步骤：

以药用植物铁箍散Schisandra propinqua(Wall.)Baill.的根和茎为原料，经95％乙醇回流提取，用蒸馏水混悬提取物，分层得到水不溶部分，之后，利用硅胶吸附柱层析、Sephardex LH-20柱层析和反相C-18低压柱层析分离手段得到式1化合物。流程详见图1。

式I

结构鉴定：

主要利用光谱，包括HRSI-MS，紫外，红外，质谱，核磁共振谱(1HNMR，13CNMR，2D-NMR)鉴定其结构。

化合物I为无色针晶，熔点：91～92℃。

紫外光谱(见图3)中的吸收峰222，255，288表明该化合物为联苯环辛烯类木脂素红外光谱(见图2)显示羟基的特征吸收(3487cm^-1)和酯基的特征吸收(1740cm^-1)高分辨质谱中(见图4)有很强的[M-C6H12O2]+和M-C6H12O2-C7H6O2]+峰，提示己酸酯和苯甲酸酯取代基结构的存在。

通过2D-NMR技术，尤其是HMQC和HMBC谱，解决了取代基的位置，结合高分辨质谱，对全部氢信号进行了确切的归属。

化合物I的1H谱中，两个单峰信号(δ6.71，6.79，1H each，s)是4位和11位质子的信号。四个单峰(δ3.93，3.97，3.32，3.22，3Heach，s)为甲氧基信号。五个芳质子信号：δ7.30(2H，t，J＝8)，7.40(1H，d，J＝8)，7.47(2H，t，J＝8)以及13C谱中的(δ164.88，δ129.14，δ129.54，δ128.18，δ133.28)确证了该化合物的苯甲酸酯结构。烷烃质子信号：1.81(2H，m)，1.18(6H，m)，0.84(3H，s，J＝7.2)以及13C谱中的(171.65，33.47，24.08，31.07，22.24，13.82)确证了该化合物具有己酸酯取代基。(见表1、图5、6)

化合物I的HMQC(1H-dettected heteromuclear multiple-quantum coherence)谱(见图8)揭示了芳香质子(δH 6.71→δc 107.82，δH 5.97→δc 85.14)，甲氧基质子(δH 3.93→δc60.84，δH 3.97→δc 59.77，δH 3.32→δc 59.74，δH 3.22→δc 55.94，)，甲基质子(δH 1.33→δc 17.25，δH 1.38→δc 28.82)等与其直接相连的碳质子具有明显的相关信号。

另外HMBC(1H-detected heteronuclear multiple-bond coherence)谱(见图7)揭示了甲氧基质子，进一步证实了化合物结构中的芳香环取代，芳香质子与其邻近的碳质子均有明显的相关信号，δ6.71(H-4)分别与δ135.28(C-2)，150.56(C-3)，85.14(C-6)，115.99(C-16)相关，δ6.79(H-11)分别与δ149.38(C-12)，138.74(C-13)，83.37(C-9)，118.89(C-15)相关，6位和9位质子与其邻近的碳质子的相关信号证实了己酸酯基和苯甲酸酯基的取代位置，δ5.97(H-6)分别与δ107.82(C-4)，129.83(C-5)，74.20(C-7)，42.98(C-8)，115.99(C-16)，28.82(C-18)，164.88(C＝0 ofBen)，δ5.78(H-9)分别与δ42.98(C-8)，74.20(C-7)，135.62(C-10)，109.83(C-11)，118.89(C-15)，17.15(C-17)，171.65(C＝0 of Cap)相关。

通过上述解析，推定化合物I为1，12-二羟基-2，3，13，14-四甲氧基-6-己酸酯基-7-羟基-8-甲基-9-苯甲酸酯基-联苯环辛二烯木脂素，结构如式I。

表1化合物I的¹H，¹³C-NMR的化学位移值(溶剂为CDCl3)

	C	H		C	H
	C	H		C	H	123456789101112131415161718	146.89135.28150.56107.82129.8385.1474.2042.9883.37135.62109.83149.38138.74149.54118.89115.9917.1528.82	6.71(1H，s)5.97(1H，s)2.37(1H，dd，J＝7.2)5.78(1H，s)6.79(1H，s)1.33(1H，d，J＝7.2)1.38(1H，s)	OCH₃231314CapBz	60.8459.7759.7455.941’171.652’33.473’24.084’31.075’22.246’13.82CO 164.881’129.142’，6’129.543’，5’128.184’133.28	3.93(3H，s)3.97(3H，s)3.32(3H，s)3.22(3H，s)2’1.81(2H，m)3’-5’1.18(6H，m)6’0.84(3H，s，J＝7.2)7.30(2H，t，J＝8)7.41(1H，d，J＝8)7.48(2H，t，J＝8)

附图说明：

图1：式I化合物的制备流程。

图2：式I化合物的红外光谱

图3：式I化合物的紫外光谱

图4：式I化合物的高分辨质谱

图5：式I化合物的氢谱

图6：式I化合物的碳谱

图7：式I化合物的HMBC谱

图8：式I化合物的HMQC谱

本发明还涉及含有式I的联苯环辛烯木脂素作为活性成分的药物组合物。本发明的药物组合物，含有生理有效量的式I联苯环辛烯类化合物和/或药物可接受的载体，所说的联苯环辛烯类化合物在组合物的重量比为0.1-99.9％，药物可接受的载体在组合物中的重量比为0.1-99.9％。本发明的药物组合物以适合药用的制剂形式存在，这些制剂形式是：片剂、糖衣片剂、薄膜衣片剂、肠溶衣片剂、缓释片剂、胶囊剂、硬胶囊剂、软胶囊剂、缓释胶囊剂、口服液、合剂、***剂、颗粒剂、冲剂、丸剂、散剂、膏剂、丹剂、混悬剂、溶液剂、注射剂、粉针剂、冻干粉针剂、栓剂、软膏剂、硬膏剂、霜剂、喷雾剂、滴剂、贴剂。

本发明进一步涉及式I所述的联苯环辛烯木脂素在制备治疗和/或预防肿瘤药物中的应用。细胞毒性试验采用人肝癌细胞株(HepG2)、人急性早幼粒白血病细胞株(HL-60)和人口腔鳞癌细胞株(KB)，结果表明式I化合物对实体瘤和血液瘤均有良好的杀伤作用。

具体实施方案：

下面所列实施例有助于本领域技术人员更好地理解本发明，但不以任何方式限制本发明。

实施例1：式I化合物的制备

以铁箍散Schisandra propinqua(Wall.)Baill.干燥根和茎30Kg为原料，用95％乙醇回流提取三次，每次2小时，浓缩至浸膏状，以适量蒸馏水混悬，静置过夜，分层得到水不溶部分A和水溶部分B。水不溶部分用适量乙醇溶解后拌以粗硅胶(100目)，依次以石油醚、氯仿、乙酸乙酯、丙酮洗脱后浓缩至浸膏。将乙酸乙酯部分浸膏(42g)经硅胶(200-300目)柱色谱分离，依次用石油醚至石油醚-丙酮(1∶2)不同比例的溶液梯度洗脱得到15个馏分，馏分11经Sephadex LH-20色谱柱分离，以氯仿∶甲醇(1∶1)为洗脱剂，得到12个馏分。其中5-7合并(约1.9g)利用反相硅胶柱(RP-18)分离，以65％甲醇梯度洗脱得到38个馏分，合并fr6-11得到式1化合物。

实施例3：式I化合物的体外抑制肿瘤试验：

1.材料：人急性早幼粒白血病细胞株(HL-60)、人肝癌细胞株(HepG2)、人口腔鳞癌细胞株(KB)购自美国ATCC。培养基DMEM、胎牛血清购自Gibico公司。MTT(3-(4，5-Dimethyiazol-2，5-diphenyl tetrazolium bromide)，购自Sigma公司。

2.肿瘤细胞培养：HL-60、HepG2和KB细胞分别培养在含10％FBS的DMEM(含100u/mlPemcillin以及100ug/ml的Streptomycin)培养基中，收集生长良好并取处于对数生长期的细胞用培养基配成密度为1×10⁵个细胞/ml的细胞悬液，均匀地接种于96孔培养板中，每孔100ul(即每孔细胞个数为10⁴个)，在5％ CO₂，95％空气，37℃细胞培养箱内培养24小时，待细胞完全贴壁后，给药组用不同浓度的式I化合物处理，化合物终浓度分别为50ug/ml，40ug/ml，30ug/ml，20ug/ml，10ug/ml，5ug/ml，1ug/ml。同时设对照组和空白组，每组6个复孔，在细胞培养箱内培养48hr后，加入10μl的10mg/ml^-1MTT使终浓度为0.05％，孵育4hr后，离心弃去上清液培养基，加入100μlDMSO，在酶标仪上振荡60s后，于595nm测定吸光度值。

3.式I化合物对肿瘤细胞的抑制率计算：根据测得的吸光度值进行细胞的存活率计算，各测试孔的OD值减去空白组OD值(完全培养基加MTT，无细胞)，各重复孔的OD值取均数。细胞的存活率以T/C％表示，T为加药组细胞的OD值，C为对照组细胞的OD值。化合物对肿瘤细胞的抑制率以(1-T/C)％表示。

4.实验结果

式I化合物体外对三种肿瘤细胞株的IC₅₀值

	HL-60	HepG2	KB
	HL-60	HepG2	KB	式I化合物(ug/ml)	5.2	6.9	8.1

实验结果表明：式I化合物对血液瘤和实体瘤具有显著的抑制作用。

实施例3

片剂的制备

式I化合物 20g

乳糖 80g

硬脂酸镁 1.0％

3％聚维酮乙醇溶液适量

共制成1000粒

取处方量化合物1与处方量乳糖混合均匀，加3％聚维酮乙醇溶液制软材，过18目筛制颗粒，50℃干燥30-45分钟，整粒，加入硬脂酸镁，混匀，压片。每片含化合物20mg。

实施例4

胶囊剂的制备

式I化合物 20g

乳糖 80g

硬脂酸镁 1.0％

3％聚维酮乙醇溶液适量

共制成1000粒

取处方量式I化合物与处方量乳糖混合均匀，加3％聚维酮乙醇溶液制软材，过18目筛制颗粒，50℃干燥30-45分钟，整粒，加入硬脂酸镁，混匀，充于1号胶囊。每粒含化合物20mg。

Claims

1、一种联苯环辛烯木脂素，结构如式I。

式I

2、权利要求1所述的联苯环辛烯木脂素的制备方法，包括以下步骤：以将药用植物铁箍散Schisandra propinqua(Wall.)Baill.的根和茎为原料，经95％乙醇回流提取，用蒸馏水混悬提取物，分层得到水不溶部分，之后，利用硅胶吸附柱层析、Sephardex LH-20柱层析和反相C-18低压柱层析分离手段得到式1化合物。

3、含有权利要求1所述的联苯环辛烯木脂素作为活性成分的药物组合物。

4、权利要求1所述的联苯环辛烯木脂素在制备治疗和/或预防肿瘤药物中的应用。