CN1309839C - 三萜皂甙类化合物的提取方法及其制备的人用口服产品 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种三萜皂甙类化合物的提取方法，以三萜皂甙类植物为原料；加入酶解液反应后形成含有三萜皂甙类植物有效成分的溶液与沉淀部分；过滤并收集溶液部分，从溶液中分离出三萜皂甙类化合物。及其制备的人用口服产品，包括产品填料，在产品填料上添加含三萜皂甙类化合物的产品添加剂。可有效抑制口腔细菌，治疗胃酸过多。可广泛应用于牙周炎、口臭及胃酸分泌过多等症状的防治领域。

Description

三萜皂甙类化合物的提取方法及其制备的人用口服产品

所属技术领域：

本发明属于牙周炎、口臭及胃酸分泌过多等症状的防治领域，尤其涉及一种可抑制口腔细菌生长和消除胃痛的三萜皂甙类化合物的提取方法，及其制备的人用口服产品。

背景技术：

慢性感染和炎症普遍存在并难以治愈，尤其是老年人群。

对于慢性感染及炎症，西方推行的抗生素疗法已有50年以上的历史。长期使用抗生素会导致抗药性，因为致病微生物会产生遗传因子变异而成为抗药病株。

牙周炎和龋齿是慢性疾病的普遍病症。牙周炎会导致牙疼，口臭，牙脱等症状，其致病的根源为口腔微生物的大量生长繁殖。

另一种症状是胃酸过多造成的胸胀、返酸，这在孕妇中较为常见。通常治疗是服用中和酸碱的化学药，这种治标不治本，长期使用对孕妇身体不利。胃酸过多也多为胃肠中细菌大量繁殖所致。

可见现在需要一种可持续治疗的安全有效产品，抑制口腔细菌的以及根除胃酸过多的病源。

三萜皂甙类化合物中含罗汉果甜甙V，罗汉果甜甙V可以抑制口腔细菌的活性成分，例如：核酸杆菌(Fusob nucleatum，FN)牙龈卟啉菌(Porhp gingivalis，PG)。低浓度的罗汉果甜甙V能抑制口腔细菌繁殖，类似青霉素抑制口腔细菌，如引起牙龈炎的幽门螺旋杆菌和导致口臭的核酸杆菌菌(Fusob nucleatum)。

三萜皂甙类化合物也能有效治疗胃痛。

另外，由于三萜皂甙类化合物和罗汉果甜甙V都有天然的清甜口味，适于制成口服产品。

三萜皂甙类化合物可从植物中提取，如葫芦科植物的果实。三萜皂甙类化合物的提取方法已有文献记载，如美国专利No.6,124,442就记载了有关三萜皂甙类化合物，尤其是罗汉果甜甙V的提取方法。该专利公开的内容并位曾报导用酶解液处理原料可以有效地把三萜皂甙类化合物从植物原料中分离。

发明内容：

本发明的目的在于提供一种包括对胃酸、口臭、及牙周炎有防治作用的三萜皂甙类化合物的提取方法，抑制口腔细菌，以及根除胃痛的病源。

本发明的另一目的是提供一种抑制口腔细菌和有效治疗胃痛的口服产品。

本发明的三萜皂甙类化合物的提取方法，其步骤包括：

1)以三萜皂甙类植物为原料；

2)加入酶解液反应后形成含有三萜皂甙类植物有效成分的溶液与沉淀部分；

3)过滤并收集溶液部分。从溶液中分离出三萜皂甙类化合物。

其中酶解液把三萜皂甙类植物的有效成分分离出来，使步骤2)的溶液除去三萜皂甙类植物的可溶性非有效成分，这种可溶性非有效成分包括胶质，蛋白，纤维，糖酶及其化合物。

上述酶解液的成分选自胶质酶，蛋白酶，纤维素酶，淀粉酶，脂肪酶，核酸酶及其化合物的一种或多种。

以至少含有以下酶中的两种为佳：胶质酶，蛋白酶，纤维素酶，淀粉酶。

酶解液成分最好成绩由胶质酶，蛋白酶，纤维素酶，淀粉酶组成。

酶解液浓度最低为0.005％，可根据三萜皂甙类化合物原料的重量进行相应调整。最好酶解液浓度在0.005％与1％之间，据三萜皂甙类化合物原料的重量进行相应调整。

在罗汉果原料中加入酶解液后需达到反应温度才能进行酶解反应，加温至沸腾停止酶解反应，得到溶液和沉淀物。

酶解反应的温度在25℃到45℃之间为宜。

酶解反应最好持续30分钟到3.0小时。

本发明提取的三萜皂甙类化合物中包含罗汉果甜甙V，步骤3)所得的最终产物中至少含有35％罗汉果甜甙V。

上述步骤3)具体包括：

把收集的溶液与饱和溶液混合，饱和溶液至少含一个氧化物，形成混合液；

静止混合液得到沉淀物和含有三萜皂甙类有效成分的可溶性部分溶液；

把得到的溶液通过含有中性大孔树脂柱过滤，把含有罗汉果有效成分吸附在中性的大孔树脂上；

用酒精冲洗过滤柱得到含有三萜皂甙类有效成分可溶性部分的以酒精为溶剂的溶液；

浓缩酒精溶液得到三萜皂甙类植物有效成分溶液；

蒸发纯三萜皂甙类植物有效成分溶液，得到固体三萜皂甙类化合物。

本发明的三萜皂甙类化合物制备的人用口服产品，包括产品填料，在产品填料上添加含三萜皂甙类化合物的产品添加剂，罗汉果甜甙V在三萜皂甙类化合物的产品添加剂中最低含量为35％；产品添加剂最低占最终产品的0.03％。

上述产品填料中含有食用糖醇类物质。

所述产品填料中的食用糖醇类物质包括以下物质的一种或多种：木糖醇、车鲜糖醇、多聚葡萄醇、山梨糖醇、甘露醇、麦芽糖醇、淀粉水解物。

其中食用糖醇物质至少占最终产品总量15％。

所述产品填料可为口香糖、含片、颗粒、糖果的填料。还可含有防龋剂。

上述产品的有效成分还可含有甘草提取物的醇溶部分，其含量不低于终端产品的总量的0.01％。

上述产品的有效成分还可包括茶多酚。其中茶多酚的最低占最终产品的0.03％。

本发明涉及益齿、健胃的产品和核心成分的提取方法。

根据本发明制备的口服产品，含有三萜皂甙类化合物，特别是罗汉果甜甙V，可有效抑制口腔细菌，治疗胃酸过多。

同时，本发明采用酶解反应，有效去除了植物原料可溶解部分中的胶质、蛋白、纤维和糖酶等非有效成分，使得提取物三萜皂甙类化合物中罗汉果甜甙V的浓度可达到35％以上。

同时，由于本发明采用的三萜皂甙类化合物和罗汉果甜甙V都有天然的清甜口味，可与其他成分一起在口服产品中应用。

因为三萜皂甙类有效成分可方便地作为饮料和食物的成分之一，所以本发明的应用范围很广，同时使用方便。

附图说明：本发明提取方法流程图

具体实施方式：

本发明的产品的有效成分包括三萜皂甙类化合物，尤其是从葫芦科植物提取的，优选罗汉果甜甙V；食用糖醇包括木糖醇、车鲜糖醇、多聚葡萄醇、山梨糖醇、甘露醇、麦芽糖醇、淀粉水解物。

以下内容将展示产品的配制方法。另外展示有关从葫芦科植物提取罗汉果甜甙V的方法。

本发明产品中的三萜皂甙类化合物，尤其是罗汉果甜甙V，是产品重要组成部分。

三萜皂甙类化合物从植物中提取，优选葫芦科植物的果实。美国专利No.6,124,442是有关三萜皂甙类化合物尤其罗汉果总甜甙的提取方法。该专利公开的内容并未指导用酶解液处理原料可以地有效把三萜皂甙类化合物从植物原料中分离。

根据附图，本发明的酶解处理方法与美国专利No.6,124,442公开的步骤不一样。

本发明以新鲜的植物，比如刚收集的葫芦科植物果实作为原料。把原料在容器中与酶解液混合。在酶解反应条件下酶解反应持续预定时间，加热到一定温度使反应停止，比如加热至沸腾。用过滤方法把溶液与沉淀物分离。沉淀物可丢弃或作其他用途。含有植物原料可溶部分的溶液通过进一步处理后把三萜皂甙类化合物，尤其罗汉果甜甙V提取出来。本发明把三萜皂甙类化合物，尤其是罗汉果甜甙V从含植物原料可溶性部分分离出来的方法与No.6,124,442美国专利公开的内容不一样。该发明并没有提取三萜皂甙类化合物。

酶解反应后分离得到的沉淀物可通过配成水溶液得到有可溶性植物原料部分的溶液，把上述溶液与酶解反应后的溶液混合后进行下一步分离步骤。

根据本发明，酶解反应是溶解包括三萜皂甙类成分的植物原料，沉淀物包括不想得到的部分。酶解反应的优点在于去除了植物原料可溶解部分中的包括胶质，蛋白，纤维和糖酶，而这些成分会影响提取物的浓度，并影响树脂或其他过滤柱的过滤效果。去除这些成分后，将有利于提高提取物中罗汉果甜甙V的浓度。

合适的酶是胶质酶，蛋白酶，纤维素酶、淀粉酶或它们的混合物。含以上两种酶以上更适宜。最好是胶质酶，蛋白酶，纤维素酶和淀粉酶的混合物。

蛋白酶是指广谱的蛋白溶解酶，包括但不限于蛋白水解酶。相应地，纤维素酶包括但不限于半纤维素酶。

酶解液浓度最低为0.005％，可根据罗汉果原料的重量进行相应调整。酶解液浓度在0.005％与1％之间比较合适。

在以上最合适的酶解液浓度下，最好有两种等量酶，或者根据需要调成适合比例，如根据已知植物原料的特性。

酶解反应条件首要是反应温度，温度宜控制在25～45℃之间使反应充分完成。酶解反应时间持续30分钟至3.0小时比较适合。如果需要停止反应，可以加热酶解反应物所在的容器，比如可以加热至85～120℃之间，使植物原料和酶解液的混合物加热至沸腾而实现停止反应。

反应停止后的含植物原料可溶性部分的溶液和沉淀物通过不锈钢过滤网过滤，使沉淀物从溶液中分离。固体沉淀是由植物原料的不可溶部分和酶解反应的副产品。上述固体可丢弃或在进一步提纯步骤中使用或其他用途。

酶解反应后的溶液中含有植物的可溶部分，包括希望得到的三萜皂甙类化合物以及其他可溶部分。不过本发明的优点在于酶解反应去除了影响提取物有效成分浓度的物质。

根据附图，以及美国No.6,124,442专利的详细描述，酶解反应后的溶液加入饱和溶液或含自由离子的溶液产生沉淀，调整提纯后溶液的PH值，用没有毒性的酸使溶液的PH值在5.5-7之间。用中性大孔树脂拄过滤溶液，固体部分吸附在树脂过滤柱上，过滤后的液体可丢弃或其他途径使用。使用酒精溶解树脂过滤柱上的固体吸附物得到含三萜皂甙类物质的醇溶液。反复使用真空浓缩器对上述醇溶液进行浓缩。浓缩物经过干燥器干燥后得到最终产品。

最终产品可方便地制成粉末或者液体形态或者作为其他产品成分。最终产品证实有利于抑制微生物生长，可应用在牙科领域或者抑制口腔细菌生长，而且应用于治疗胃酸过多产品中。

本发明中的酶解反应步骤使提取物三萜皂甙类化合物中罗汉果甜甙V的浓度最少在35％以上。

罗汉果甜甙V可以抑制口腔细菌的活性成分，例如：核酸杆菌(Fusobnucleatum FN)、牙龈卟啉菌(Porhp gingivalis PG)。低浓度的罗汉果甜甙V能抑制口腔细菌繁殖，由于三萜皂甙类化合物和罗汉果甜甙V都有天然的清甜口味，所以很适合应用在口服产品上，具有益齿功能。

三萜皂甙类化合物也能有效治疗胃酸过多，制成三萜皂甙类化合物和胃治疗剂。例如，三萜皂甙类化合物与甘油水溶液混合。在三萜皂甙类有效成分最低含35％罗汉果甜甙的标准下，三萜皂甙类化合物治疗用量在每次40mg到80mg之间。

三萜皂甙类化合物(含罗汉果甜甙V)成分可以与其他成分在口服产品中应用。当该产品应用时，三萜皂甙类化合物成分类似青霉素抑制口腔细菌如引起牙龈炎的幽门螺旋杆菌和导致口臭的核酸杆菌。三萜皂甙类化合物作为成分之一的产品包括口香糖，低糖的糖果，止咳糖浆，嗽口水，含片等。其他含三萜皂甙类化合物的载体在口腔吸收也合适。

另外，三萜皂甙类有效成分可方便作为饮料和食物的成分之一，拥有广泛的应用范围，同时使用方便，只需将三萜皂甙类成分分布在口腔即可。

理想的可与三萜皂甙类化合物合并一起使用的成分，例如：食用糖醇，来源于绿茶的茶多酚，以及醇溶性甘草提取物。

经试验证明，食用糖醇可以方便与三萜皂甙类化合物组合，并能提高所有组成成分的活性。而且比如在口香糖中，食用糖醇可以作为填充剂。合适的糖醇包括木糖醇、车鲜糖醇、多聚葡萄醇、山梨糖醇、甘露醇、麦芽糖醇、淀粉水解物。在这些糖醇当中，木糖醇和赤藻糖醇是特别理想的选择。木糖醇很方便与其他成分如绿茶的茶多酚提取物或醇溶性甘草提取物组合。

如果要提高抗微生物的活性，糖醇，特别是木糖醇的至少占重量的1-2％。如果在口香糖中糖醇作为填充剂，糖醇至少占物品总量的15％。

在这点上，由于含糖醇的填充剂不会导致龋齿，所以含糖醇的填充剂是一种理想的填充剂，能避免像其他成分那样为口腔细菌提供营养，加快口腔细菌的繁殖。

甘草提取物也很方便作为添加剂。甘草醇溶液的提取物包含有抗微生物活性，特别适合作为益齿口服产品的添加剂，尤其是在和三萜皂甙类化合物、木糖醇组合使用的时候。

根据美国No6,103,240专利，甘草醇溶液的提取物和三萜皂甙类化合物的组合物是极好的甜味剂。甘草提取物至少占总量的0.01％，可作为口香糖等产品的有效成分。

茶多酚是可从绿茶中或者理想的组合物的成分之一。茶多酚可以抑制微生物的突变，可防止微生物产生上述资料曾提到的耐药株，绿茶茶多酚可以方便地添加到产品中，并至少占产品总量的0.03％。此添加物可以增强抗微生物地活性。并延长有效时间。

实施例1说明本发明中提取罗汉果甜甙V的步骤：

分为三组，把罗汉果鲜果100克捣碎，加500ml水并升温至25℃(组一)，40℃(组二)，45℃(组三)。加入含酶的混合物的酶解液。酶解液含等量的果胶酶，蛋白酶，纤维及半纤维酶等(酶解液浓度分别为0.005％(组一)，0.15％(组二)和1％(组三)。酶解2小时(组一)，30分钟(组二)，3小时(组三)后，升温到120℃(组一)，100℃(组二)，85℃(组三)。用40目的不锈钢过滤网过滤后，收集可溶部分。加800ml水到沉淀部分，并蒸发至剩600ml水。过滤后将溶液部分与前液体混合。加水到2000ml。加入150ml饱和钙离子(Ca++)，50ml饱和钠离子(Na++)溶液。静止1小时，过滤。收集液体部分。用食用酸将液体的PH值调至5.5-7。用含500g中和树脂的过滤柱过滤。用1500m浓度在10％-95％范围的酒精溶液冲洗过滤柱。将收集的液体浓缩到原来体积的1/20。加入5倍体积的95％的酒精溶液，生成沉淀。收集可溶部分。将溶液蒸发得到细粉末。

上述三组得到的细粉末均符合化学标准并含有35％以上的罗汉果甜甙V。

实施例2检验实施例1得到的罗汉果甜甙V提取物的抑制细菌的效果。

每个成分的从0.1％的浓度的溶液开始检验，在细菌生长的环境中逐渐稀释溶液浓度以测定抑制细菌繁殖的必要浓度。从最小的1mg/ml开始进行评估持续到100mg/ml。表格1公开此项检验的结果。

                           表1

样品                   溶剂   浓度     FN           PG

木糖醇                 水     0.1％    无效         无效

罗汉果甜甙V提取物      水     0.1％    15.6mg/ml    31.3mg/ml

根据上述数据，罗汉果甜甙V可在低浓度就能产生抑制细菌作用，)核酸杆菌(Fusob nucleatumFN)牙龈卟啉菌(Porhp gingivalisPG)相应浓度是15.6mg/ml与31.3mg/ml。相反地，木糖醇不能抑制这些细菌，即使在最大量的100mg/ml。

实施例3展示该发明的治疗胃酸过多功效。

三萜皂甙类化合物(含罗汉果甜甙V)与甘油水溶液中形成40ml/ml的溶液。分别给予10位有胃胀或返酸症状的患者。这检验中，包括4位孕妇，4位35岁到65岁的男子和2位55岁到65岁没有怀孕的妇女。给予每个患者2ml检验品，每天3次。表格展示检验结果。

                       表2

临床患者             症状             30分钟后症状改进

孕妇4人              胸胀/口臭        85％

男人(34-65)          胸胀/返酸        75％

非孕妇女(55-65岁)    胸胀             90％

如以上所示，每组患者都得到非常好的治疗效果。

实施例4展示三萜皂甙类化合物理想的非含糖成分在口香糖产品的应用。

根据实施例得到的罗汉果甜甙V，在以下的表格中，有关口香糖的配方。

                       表3

无糖口香糖配方1

原料                                    W/W

口香糖胶底                              25％

糖醇                                    67％

罗汉果甜甙V提取物                       0.03％-0.8％

醇溶甘草部分                            0.01-5％

甘油                                    6.5％

调味剂                                  1.2％

根据展示内容，罗汉果甜甙V与醇溶甘草部分添加到口香糖后，口香糖拥有益齿功效、好口味与无糖的特点。在此成分中，糖醇包括木糖醇、车鲜糖醇、多聚葡萄醇、山梨糖醇、甘露醇、麦芽糖醇、淀粉水解物。

实施例5展示茶多酚增强木糖醇的效果。

根据实施例2木糖醇自己本身没有抑制细菌生长的功效。绿茶的茶多酚提取物也没有抑制牙龈卟啉菌(Porhp gingivalis)PG核酸杆菌(Fusob nucleatum)FN的功效，根据本发明，茶多酚和木糖醇的混合物可以很好地抑制口腔细菌。在这个实施例中，混合物含80W/W的茶多酚，以及相应剂量的木糖醇，混合物最少可抑制浓度为62.5mg/ml的口腔细菌。试验结果如下表：

                               表4

材料样品           溶剂     浓度         FN           PG

木糖醇             水       0.1％        无效         无效

茶多酚             水       0.1％        无效         无效

木糖醇+茶多酚      水       0.1％        62.5         62.5mg/ml

实施例6

在这实施例中，根据本发明更具体地公开口腔保健，防治牙周炎及口臭的无糖型口香糖基本配方，在这产品中包括含三萜皂甙类化合物、木糖醇、绿茶提取物和甘草的醇溶液的提取物，展示如下：

                        表5

原料                                     W/W

产品底料^*                               25％

淀粉水解物                               15％

木糖醇                                   2.4％

茶多酚                                   0.03-1％

山梨糖醇                                 49.3％

罗汉果甜甙5提取物                        0.03-0.8％

甘草醇溶部分                             0.01-5％

甘油                                     6.5％

调味剂                                   1.2％

^*产品底料，根据不同产品类型所采用的产品底料不一样。

此合成物有很好的抑制口腔细菌的功效，所以减少牙齿与牙龈的疾病发生而且可以祛除口臭。

实施例7

此实施例展示另一个口香糖的配方，表6显示有效成分的组成。

                           表6

口香糖胶底                              25％

淀粉水解物                              15％

车鲜糖醇                                2.58％

从绿茶提取的茶多酚                      0.10％

山梨糖醇粉末                            49.3％

固体罗汉果甜甙V                         0.16％

甘草醇液部分                            0.15％

甘油                                    6.5％

香料                                    1.2％

根据表格6，该组合物包括三萜皂甙类化合物(罗汉果甜甙V)，甘草的醇溶液提取物，绿茶的提取物和车鲜糖醇。此产品也是有利于口腔保健的口香糖。

实施例8

在这实施例公开另一个口香糖的配方，具体如表7所示

                          表7

口香糖胶底                           25％

多聚葡萄糖                           15％

车鲜糖醇                             2.54％

从绿茶提取的茶多酚                   0.1％

山梨糖醇粉末                         49.3％

固体罗汉果甜甙V                      0.20％

甘草醇液部分                         0.16％

甘油                                 6.5％

香料                                 1.2％

此组合物选择多聚葡萄糖，比淀粉水解物更适合作为产品的填充剂。因为多聚葡萄糖不会引起龋齿，而且相应的口香糖即有抗微生物的活性又有好口感。

实施例9

将实施例7的口香糖进行临床试验，试验者是10位有牙龈出血，牙齿对冷热敏感以及牙齿或牙龈疼的患者。每组试验患者每天使用4次口香糖。三天后评估治疗效果。治疗效果如表8所示：

                         表8

试验人数       症状                       3天后症状好转

4              牙龈出                     90％

3              牙对冷、热敏感             70％

3              牙齿、牙周疼               85％

如上所示，4位有牙龈出血的试验者症状改善90％。3位牙齿对冷、热敏感的试验者症状改善70％，3位牙齿、牙周疼的试验者症状改善85％。所以口香糖可以有效改善上述症状。口香糖可以有效抑制引起以上症状的口腔细菌生长。

本发明的实施例是提供例证并不是对发明的限定。发明的保护范围根据权利要求，任何在本发明方法以及范围等同的改变都在专利权保护范围内。

Claims (9)

1、一种三萜皂甙类化合物的提取方法，其步骤包括：

1)以三萜皂甙类植物为原料；

2)加入酶解液反应后形成含有三萜皂甙类植物有效成分的溶液与沉淀部分，其中所述酶解液的成分选自胶质酶、蛋白酶、纤维素酶、淀粉酶、脂肪酶、核酸酶的一种或多种；

3)过滤并收集溶液部分，从溶液中分离出三萜皂甙类化合物。

2、如权利要求1所述的三萜皂甙类化合物的提取方法，其特征在于：酶解液至少含有下以下酶中的两种：胶质酶，蛋白酶，纤维素酶，淀粉酶。

3、如权利要求1所述的三萜皂甙类化合物的提取方法，其特征在于：酶解液浓度最低为0.005％。

4、如权利要求3所述的三萜皂甙类化合物的提取方法，其特征在于：酶解液浓度在0.005％与1％之间。

5、如权利要求1所述的三萜皂甙类化合物的提取方法，其特征在于：在原料加入酶解液后需达到反应温度才能进行酶解反应，加温至85-120℃停止酶解反应，得到溶液和沉淀物。

6、如权利要求5所述的三萜皂甙类化合物的提取方法，其特征在于：酶解反应的温度在25℃到45℃之间。

7、如权利要求5或6所述的三萜皂甙类化合物的提取方法，其特征在于：酶解反应持续30分钟到3.0小时。

8、如权利要求1所述的三萜皂甙类化合物的提取方法，其特征在于：提取三萜皂甙类化合物中包含罗汉果甜甙V，步骤3)所得的最终产物中至少含有35％罗汉果甜甙V。

9、如权利要求1所述的三萜皂甙类化合物的提取方法，其特征在于：步骤3)具体包括：

把收集的溶液与饱和溶液混合，饱和溶液至少含一个氧化物，形成混合液；

静止混合液得到沉淀物和含有三萜皂甙类有效成分的可溶性部分溶液；

把得到的溶液通过含有中性大孔树脂柱过滤，把含有罗汉果有效成分吸附在中性的大孔树脂上；

用酒精冲洗过滤柱得到含有三萜皂甙类有效成分可溶性部分的以酒精为溶剂的溶液；

浓缩酒精溶液得到三萜皂甙类植物有效成分溶液；

蒸发纯三萜皂甙类植物有效成分溶液，得到固体三萜皂甙类化合物。