CN1290247A - 制备抗叶酸剂的方法和中间体 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及中间体及其制备方法,以及由这些中间体制备式(V)的系列嘧啶衍生物的方法,它们是可利用的抗叶酸化合物的中间体,或者它们本身是可利用的抗叶酸化合物。

Description

制备抗叶酸剂的方法和中间体
本发明涉及合成有机化学。具体地讲，本发明涉及用于合成有价值的抗叶酸化合物的中间体的制备方法。
将具有抗叶酸活性的化合物用作治疗癌症的化疗试剂是熟知的。式Ⅴ的一系列N-(6-氨基(吡咯并(2，3-d)嘧啶-3-基酰基)-谷氨酸衍生物：
其中
Y是 、O或S；
R3是氢原子、氯或氟；
R4是羟基、羧基保护基或NHCH*(C(O)R5)CH2CH2C(O)R5；
R5是氢原子或羧基保护基；
R6是氢原子或氨基保护基；
R7是羟基或氨基；且*标记的碳原子构型是S型；及其药用盐作为抗叶酸剂或其中间体公开于美国专利4684653和4882334。
公开于美国专利4684653和4882334的式Ⅴ化合物合成的关键步骤是下式Ⅵ化合物的氢化：
Figure 9980288300072
其中Z1和Z2都是氢原子或一起形成化学键；R4′是羧基保护基或NHC*H(C(O)R5′)CH2CH2C(O)R5′；
R5′是羧基保护基；且
R6′是氨基保护基；
以式Ⅴ(a)化合物的异构体混合物为条件：
Figure 9980288300081
所得式Ⅴ(a)的化合物选择性地除去保护基后得到式(Ⅴ)化合物的异构体混合物。
美国专利4684653和4882334进一步教导式Ⅴ的单一非对映异构体可以通过色谱简单地拆分或优选该单一非对映异构体可以通过与手性酸(如樟脑磺酸)形成非对映异构盐，随后将这些非对映异构体之一选择结晶来拆分。
美国专利4684653和4882334指出式Ⅵ的化合物可以通过先将式Ⅶ化合物与式Ⅷ化合物偶合得到：
其中X是溴或碘；在反应在如Sakamoto于Synthesis，1983，312(参照下文)中描述的钯／三取代的膦催化剂存在下进行。
上述合成具有很多缺陷。就工业规模生产而言，用贵金属催化剂成本高，需要纯化和环境保证，并可能由于催化反应中处于合适氧化态／复合物形式的贵金属量的改变而不稳定。此外，如果接着进行如上所述的优选的结晶分离方法，过滤分离非对映异构体后，滤液会含有两种非对映异构体的混合物。此滤液常不适于通过结晶进一步分离，于是如果不借助不必要的色谱分离，分离效果就不好。在某些情况下，例如，当Y是S，R3是氢原子，R4是NHCH*(C(O)R5)CH2CH2C(O)R5，而R7是羟基时，在滤液／馏份中可以发现约80％的所需异构体(具有较强抗叶酸活性的)。
对现有技术的改进将不依赖于贵金属催化来制备式Ⅵ化合物并将增加式Ⅵ的所需非对映异构体从含两种非对映异构体的混合物中通过结晶分离的绝对收率。
本发明涉及式Ⅲ化合物或其盐或溶剂化物：
其中Y是 、O或S；
R是C1-C6烷基；
R1和R2独立地为C1-C6烷基或一起与它们连接的氮原子形成杂环；
R3是氢原子、氯或氟；
R4是羟基、羧基保护基或NHCH*(C(O)R5)CH2CH2C(O)R5，其中*标记的碳原子构型为S型；而
R5是氢原子或羧基保护基。
本发明还涉及式Ⅳ的化合物或其盐或溶剂化物：
其中：
R6是氢原子或氨基保护基；而
R7是羟基或氨基。
此外，本发明涉及制备式Ⅳ化合物的方法：
Figure 9980288300101
该方法包括式Ⅲ(a)的化合物：
Figure 9980288300102
其中：
R4′是羧基保护基或NHC*H(C(O)R5′)CH2CH2C(O)R5′，其中*标记的碳原子构型为S型；
R5′是羧基保护基；
与2，4-二氨基-6-羟基嘧啶在适宜的酸和溶剂的存在下反应。
此外，本发明还涉及制备Ⅳ化合物或其盐或溶剂化物的方法，该方法包括式Ⅴ(b)的化合物或其盐或溶剂化物：
Figure 9980288300103
与氧化剂在适宜的溶剂存在下反应。
化合物
本申请的通式中，一般的化学术语具有其常用的含义。例如，术语“C1-C4烷基”指甲基、乙基、丙基、异丙基、环丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基和环丁基。术语“C1-C6烷基”包括C1-C4烷基中所列举的，另外还包括脂族的直链、支链或环，含5或6个碳原子的单价部分，包括但不限于戊基、环戊基、己基、环己基、2-甲基戊基等。术语“C1-C4烷氧基”指通过氧原子连接的C1-C4烷基。
术语“卤素”或“卤原子”指氯、溴或碘。
术语“杂环”指5或6元饱和的、部分饱和的或芳香杂环，其中含氮原子并可以选择性地含有其它选自N、S或O的杂原子。
术语“羧基保护基”指当在化合物的其它官能基进行反应时常用来封闭或保护羧基官能度的羰基的取代基。当与其连接的羰基在一起时，该取代基可以形成酯，例如，C1-C6烷基、取代的C1-C6烷基、C2-C6链烯基、取代的C2-C6链烯基、苄基、取代的苄基、二苯甲基、取代的二苯甲基、三苯甲基、取代的三苯甲基及三烷基甲硅烷基酯。只要该衍生后的羧基在随后的反应(一个或多个)中稳定并可以在不破坏分子的剩余部分的适当点除去，对羧基保护基的确切种类就无严格限制。当R4含羧基保护基时，保护基优选C1-C4烷氧基或苄氧基。最优选的保护基是甲氧基、乙氧基和苄氧基。“通过催化氢化除去”的羧基保护基，例如，包括苄基保护基。这些基团的其它实例描述于T．W．Greene，“Protective Groups in Organic Synthesis，”(John Wileyand Sons，New York，N．Y．，)(2nd ed．，1991)(下文中称为Greene)，第5章。
术语“C2-C6链烯基”指单不饱和的、单价的、含2至6个碳原子的烃部分，其可以是支链或直链构型。该术语的实例例如，但不限于乙烯基、丙烯基、烯丙基、丁烯基和戊烯基。
术语“取代的C1-C6烷基”和“取代的C2-C6链烯基”指分别被卤素、苯基、三(C1-C4烷基)甲硅烷基或取代的苯磺酰基独立地取代1至3次的C1-C6烷基及C2-C6链烯基。
术语“取代的苄基”、“取代的二苯甲基”及“取代的三苯甲基”指分别被硝基、C1-C4烷氧基、C1-C6烷基或羟基(C1-C6)烷基独立地取代1至5次的苄基、二苯甲基和三苯甲基。这些取代将只以立体化学可行的方式存在以便该部分是化学稳定的。
术语“三烷基甲硅烷基”指被C1-C6烷基独立地取代3次的单价甲硅烷基。
术语“取代的苯磺酰基”指其中苯基部分被C1-C6烷基、硝基或卤素在对位取代的苯基部分。
在本说明书中使用的术语“氨基保护基”指当该化合物的其它官能基反应时常用来封闭或保护该氨基功能度的氨基的保护基。当与其连接的氮原子在一起时，该氨基保护基可以形成环酰亚胺，例如，邻苯二甲酰亚氨基和四氯邻苯二甲酰亚氨基；氨基甲酸酯，例如甲基，乙基和9-氟enyl-甲基氨基甲酸酯；或酰胺，例如，N-甲酰氨基或N-乙酰胺。只要在该中间体分子的其它位置的随后反应(一个或多个)条件下此衍生的氨基是稳定的并可以在不破坏此分子的其余部分包括其它氨基保护基(一个或多个)前提下在适当的位点除去，所用氨基保护基的确切种类无严格限制。一般来说，优选通过酸水解除去的氨基保护基，即对酸不稳定的那些氨基保护基是优选的。因此，优选的氨基保护基是2，2-二甲基-1-氧丙基。上述术语所指的其它基团的实例和方法描述于Greene，第7章。
本文中所用术语“药用盐”和“盐”指通过本发明化合物与无机酸或有机酸(例如，盐酸、氢溴酸、氢碘酸或对甲苯磺酸)或无机碱(例如，钠、钾、锂和镁的氢氧化物、碳酸盐或碳酸氢盐)反应制备的盐。这些盐为酸加成盐和碱加成盐。这些盐的其它实例见，例如，Berge S．M，Bighley，L．D．，and Monkhouse，D．C．，J．Pharm．Sci．，66，1，1977。
术语“溶剂化物”指含一个或多个溶质分子，如式Ⅲ或Ⅳ化合物，和一个或多个溶剂分子的聚集物。
试剂
术语“适宜的溶剂”指对所进行反应为惰性的、足以溶解反应物得到一种介质、在该介质中能进行所需反应的任何溶剂或溶剂的混合物。
术语“适宜的酸”指Ka低得能进行所需反应而不显著带来任何不需要的反应的酸。
术语“氧化剂”指氧化电位高得足以进行所需反应而不显著带来任何不需要的反应的试剂。适宜的氧化剂包括金属如镍、钯、铂等；固体载体上的金属如钯碳或铂碳等；金属复合物如汞(Ⅱ)、二氧化锰或醋酸铜(Ⅱ)及含苯醌的氧化剂如2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(DDQ)和四氯-1，4-苯醌(氯醌)等。
术语“热力学碱”指使酸性底物进行可逆的脱质子反应的碱，或者作为给定的副产物产生的质子的质子捕获物并其反应性足以进行所需的反应而不显著带来任何不需要的反应的碱。热力学碱的实例包括但不限于乙酸盐、乙酸盐二水合物、碳酸盐、碳酸氢盐、C1-C4醇化物和氢氧化物(例如，锂、钠或钾的乙酸盐、乙酸盐二水合物、碳酸盐、碳酸氢盐、C1-C4醇化物或氢氧化物)、三(C1-C4烷基)胺或含芳香氮原子的杂环(例如，咪唑和吡啶)。
合成
如下方案1所示，可以由式Ⅰ和Ⅱ的化合物制备式Ⅲ的化合物，其中Lg是氯、溴、碘、OSO2Me、OSO2-苯基或OSO2-对甲苯基，而R、R1、R2、R3、R4、R4′和Y定义如上。
                                        方案1
可以将式Ⅰ的化合物加入到溶解或悬浮于适宜溶剂中的式Ⅱ化合物中，在热力学碱的存在下，形成式(Ⅲa)的化合物。优选且便利的溶剂是二氯甲烷。优选且便利的碱是三乙胺。较式Ⅱ化合物而言，优选使用一当量的碱和式Ⅰ化合物，但是稍过量0．01至0．1当量是可以允许的。该反应可以在-78℃至室温下进行，但优选-25℃至-20℃。该反应一般在30分钟至18小时内完成，但是当在优选的温度下进行时，其在1至3小时内完成。在式Ⅰ化合物中优选的卤代物是氯化物。R优选C1-C4烷基，特别是甲基或乙基。R1和R2优选C1-C4烷基，但是当两个都为甲基或乙基时是特别优选的。优选R4′是羧基保护基，其中保护基是C1-C4烷氧基，特别是甲氧基或乙氧基，或是可以通过催化氢化除去的基团，例如，苄氧基(如下述方案3)。在整个说明书中，R3优选是氢原子而Y优选是 或S。
虽然所得式Ⅲ(a)化合物可以如Greene所述除去其羧基保护基，但是为了方案1-3全部方法的进行，当进行方案2的反应(一个或多个)时，该羧基保护基优选是不变的。
通过下述方案2所示的新方法，可以由式Ⅲ(a)的化合物制备式Ⅳ的化合物，其中R、R1、R2、R3、R4、R4′、R6、R7和Y定义如上。
                                方案2
Figure 9980288300141
可以将2，4-二氨基-6-羟基嘧啶或2，4-二氨基嘧啶-6-酮(下文中称为2，4-二氨基-6-羟基嘧啶)的互变异构体混合物加入到溶解或悬浮于适宜溶剂的式Ⅲ(a)化合物中，在适宜酸的存在下，得到式Ⅳ(a)化合物。便利且优选的溶剂是乙腈和水的约1∶1(v∶v)的混合物。乙腈和水的比例不是严格的，但是当所有的起始物混合时，优选此比例适于形成溶液。便利且优选的酸是乙酸。该酸一般以摩尔过量使用。例如，较式Ⅲ(a)化合物而言，一般使用约2至4当量，优选3当量。较式Ⅲ(a)化合物而言，2，4-二氨基-6-羟基咪啶的当量数不是严格的但优选约1-2当量，更优选的量是约1至约1．5当量，首先约1至约1．1当量。此反应在室温至该混合物的回流温度下进行，但是优选在该混合物的回流温度下进行。此外，根据反应温度该反应可以进行12至约48小时。当此反应在此混合物的回流温度下进行时，一般在约18小时内基本完成反应。R优选是C1-C4烷基，特别是甲基或乙基。R1和R2优选C1-C4烷基，但是当两个都为甲基或乙基时是特别优选的。R3优选氢，如上所述，优选R4′是羧基保护基，其中保护基是C1-C4烷氧基，特别是甲氧基或乙氧基，或是可以通过催化氢化除去的基团，例如，苄氧基(如下述方案3)。
如上述美国专利4882334所述，其中R7是氨基的式Ⅳ化合物可以由式Ⅳ(a)化合物制备，但是优选R7是羟基。
R6是氨基保护基的式Ⅳ化合物可以如Greene所教导的或如下文中制备例8所述，由式Ⅳ(a)化合物制备。此外，氨基保护基，优选如下述方案5所述通过酸水解可除去的，例如，存在于R6中的2，2-二甲基-1-氧丙基，或氨基在进行下述方案3所述氢化反应前质子化，这些是必要的。此外，虽然式Ⅳ(a)化合物可以如Greene所指出的那样除去羧基保护基，但是为了进行方案2-3的整体反应，当进行方案3的反应时优选该羧基保护基保持不变。
如下述方案3所示，式Ⅴ(b)化合物的异构体混合物可以由式Ⅳ(b)化合物制备，其中R3、R4、R6′、R7和Y定义如上。
如方案1和2所述制备的式Ⅳ(b)化合物，可以基本如美国专利4684653和4882334所述进行氢化，将其中教导引入作为参考。为了与这两篇参考文献衔接，本发明的式Ⅳ(b)化合物相应于美国专利4684653的式Ⅲ化合物和美国专利4882334的式Ⅱ化合物。优选R6′上的氨基保护基如Greene所指出的方法除去，但是在下述方案4和5所述继续进行分离时保持不变。
如果用R4位带有优选基团即羧基保护基的式Ⅳ(b)化合物进行方案3的方法，且该保护基通过催化氢化除去时，则此保护基将通过方案3的氢化反应条件除去。除去后形成的R4是羟基的式Ⅴ(b)化合物有利于抗叶酸剂终产物即手性谷氨酸中R4基团的合成，具体讨论如下。
具有抗叶酸活性的式Ⅴ化合物为R4是NHC*H(C(O)R5)CH2CH2C(O)R5而R6是氢原子(此后称为“终产物”)的化合物，因此这些化合物是优选的。虽然在本发明的整体方法中谷氨酸的侧链可以在任何时间点合成，但是当方案1、2、3的方法顺序进行时，就上述优选的基团而言，合成谷氨酸残基的优选时间是在如方案3所述进行氢化反应之后。这通过将R4是羟基的式Ⅴ或Ⅴ(b)化合物与羧基保护的谷氨酸衍生物式NHC*H(C(O)R5′)CH2CH2C(O)R5′偶合来完成，其反应方式总体上描述于PCT申请WO86／05181，使用的是形成肽键的常规缩合技术。这些技术包括通过形成混合酸酐或酰氯将羧基活化，用二环己基碳二亚胺处理，或使用二苯基氯代磷酸盐。形成此酰胺键的总方法的进一步教导，例如见Badanszky，M．，Principles of Peptide Synthesis，第二版，Springer-Verlag，Berlin，Heidelberg，1993。当进行方案4和5的方法时，优选存在此谷氨酸侧链，而两个方案中该侧链上的R5基团都是羧基保护基，例如，C1-C6烷氧基。有关下述方案4和5的所有讨论和结构与如下情况有关，其中在R4位存在优选的取代基，但是这些取代基对于方案4和5方法的操作是不需要的。
终产物式Ⅴ化合物中，优选如下所示的式Ⅴ(c)(R)化合物，这是由于其较式Ⅴ(c)(S)而言抗叶酸活性高。如上所述制备的或在上述引入的参考文献美国专利4684653和4882334中制备的这些单一非对映异构体的终产物，可以按照那些专利中的教导分离，即通过色谱或优选重结晶的方式。例如，可以使用适当选择的手性酸形成更适于对一种非对映异构体有选择性的重结晶的非对映体盐的混合物，如方案4所示，其中R3、R5′、R6、R7和Y如上所述。
                            方案4
Figure 9980288300181
为了进行方案4的分离，需要在式Ⅴ(c)化合物中R6是氢原子。如果方案4的方法如用R6是优选取代基，即被酸水解除去的保护基如2，2-二甲基-1-氧丙基，则此保护基可通过加入手性酸除去，且不需要分离步骤。因此，R6是氢原子的式Ⅴ(c)化合物不需要必须在进行方案4的拆分方法前包括分离的制备步骤。将此额外步骤的除去是因为优选的酸是不稳定保护基。
方案4的第一个步骤是向溶解或悬浮于适宜溶剂中式Ⅴ(c)化合物中加入手性酸。此加入有两个作用：此手性酸除去R6位的氨基保护基，并形成式Ⅴ(d)化合物的非对映异构酸加成盐。当Y是 时，为此目的优选的酸是(1S)-(-)-樟脑磺酸。当Y是O或S时，优选的酸是(1R)-(-)-樟脑磺酸。除去此保护基并形成盐的优选溶剂是低级醇，优选乙醇。
一旦形成盐，步骤2的分离和重结晶是通过将式Ⅴ(d)的化合物悬浮于适宜溶剂中，将此混合物加热直到形成溶液，然后让此溶液冷却以便让所需的异构体沉淀。一般来说，手性拆分以及当拆分式Ⅴ(d)化合物时，重要参数是溶剂***、搅拌速率和温度。优选的溶剂***是低级醇(优选乙醇)和水的混合物。乙醇和水的体积比可以是约0．33至约3比1，但是优选1∶1的混合物。溶剂和溶质的比例可以是约10至约20比1，但是优选15∶1。结晶期间搅拌的速率可能对拆分产生显著的作用，优选一旦形成盐并通过加热溶解于重结晶溶剂中进行搅拌，当冷却时就不再搅拌样品。温度也影响拆分冷却至室温以下可以增加产品的收率，但是降低了分离效率。优选让此结晶发生在约20℃至34℃，首选室温(约22℃)下。
为了避免拆分的酸性水溶液条件下的对谷氨酸残基上的酯的水解，优选使用缓冲液如醋酸钠。在氨基酸保护基的溶剂水解作用完成后，优选加入用量约等于过量的酸的醋酸钠。
方案4中制备的滤液会含有式Ⅴ(d)非对映异构体的混合物。此混合物中式Ⅴ(d)(S)的非对映异构体，即Ⅴ(d)(S)的酸加成盐的含量提高，该酸加成盐不结晶。此混合物通常不适于通过结晶进一步分离。因此，所需异构体的大部分到此时没有通过进一步结晶回收。下述方案5，其中R3、R4′、R6、R7和Y定义如上，给出了制备式Ⅳ化合物的新方法，其有利于此混合物通过结晶进一步分离。
                              方案5
Figure 9980288300201
如果方案5的方法是用方案4的滤液作为起始物来源进行的，则优选先从此混合物中萃取式Ⅴ(c)化合物的游离碱。这可以通过用与水不混溶的有机溶剂稀释混合物，并用溶解于水的弱碱如碳酸氢钠的水溶液处理该混合物容易地完成。二氯甲烷和碳酸氢钠水溶液是为此目的优选的试剂。例如，用二氯甲烷(约0．33ml／g滤液)和约2当量的1M碳酸氢钠水溶液将此滤液室温下处理约30分钟，将得到两个清澈的、容易分离的相。分离有机相并在处理前优选用常用的干燥剂(一种或多种)干燥。用盐水和1M碳酸氢钠水溶液依次洗涤是优选的干燥程序。
一旦进行了萃取方法，R6的保护基必须再合成或此保护基必须在进行方案5所示方法前质子化。优选脱保护并可以按照如上所述Greene教导的方法完成或按照如下制备例9所述进行。优选此氨基保护基通过酸水解除去，例如，2，2-二甲基-1-氧丙基保护基。所得式Ⅴ(e)化合物再进行如下分离。
式Ⅴ(e)化合物的任何比例的单一非对映异构体或混合物可以溶解或悬浮于适宜的溶剂中并加入氧化剂，以得到式Ⅳ(b)化合物。溶剂、反应温度和时间的总体选择将依赖于所用的氧化剂。
DDQ是优选的氧化剂。当DDQ或氯醌用作氧化剂时，烃如戊烷、己烷和甲苯等，低级醇如甲醇、乙醇、异丙醇等，或氯代烃如氯仿、二氯甲烷等是适宜的。优选氯代烃，特别是二氯甲烷。当该氧化反应在优选的条件下用优选的式Ⅴ(e)化合物进行时，对所得式Ⅳ(b)化合物进行色谱纯化一般是不必要的。见，例如，下述实施例6。
此反应一般在0至200℃下进行约30分钟至约24小时。此反应优选在15至80℃下进行。更优选此反应在20至40℃下进行时，特别是在室温下反应20分钟至1小时。
氧化剂的用量将依赖于所用氧化剂变化，但是一般为式Ⅴ(e)化合物的约0．1至约5当量。当使用DDQ时，优选约1．1至约3当量。更优选约1．8至约2．2当量，而1．9至2．1当量是首选的。
式Ⅳ(b)中的羧基和／或氨基保护基优选不是按照Greene教导的方法除去。相反，优选的方法是将式Ⅳ(b)的化合物还原为式Ⅴ(e)化合物的50∶50的非对映异构体混合物，以便进行方案4教导的手性酸分离。
通过将式Ⅳ(b)的化合物溶解或悬浮于适宜的溶剂中，在氢化催化剂的存在下，并让此混合物接触氢气氛，进行氢化反应。便利的且优选的溶剂是四氢呋喃和乙醇的体积比约4∶1的混合物。便利且优选的氢化催化剂是5％的钯碳。相对于式Ⅳ(b)化合物的重量，一般使用的催化剂的量为约10％至约200％。优选为约20％至约75％，其中优选约25％。一般优选的氢气氛的压力等于或大于常压。典型的压力是约常压至约100psi的氢气。更优选的氢气压为40psi至约60psi，首选50psi。该反应可以在室温至该混合物的回流温度下进行。当氢气压为50psi时，优选的反应温度是约100℃，该反应一般在4小时内基本完成。
一旦按照方案5所述形成式Ⅴ(e)化合物的1∶1的混合物时，其适于进一步按照上述方案4所述分离。此循环可以按照操作者的希望重复多次，以便将式Ⅴ(d)(R)的非对映异构体的收率最大化。
2，4-二氨基-6-羟基咪啶，式NH*CH(C(O)R5′)CH2CH2C(O)R5′的被保护的谷氨酸及式Ⅰ和Ⅱ的化合物是本领域已知的，并且如果商购的可能性小，可以通过本领域常用的标准合成方法容易地制备。例如，见下述制备例1-6。
进行方案1-5反应的最佳时间可以通过常规色谱技术监控反应进程确定。溶剂的选择一般是不严格的，只要所用溶剂对进行的反应是惰性的并足以溶解反应物得到一种介质，在其中进行所需的反应。除非特别说明，本文中描述的所有反应优选在惰性气体氛下进行。优选的惰性气体是氮气。
下列制备例和实施例只是用来举例说明，不以任何方式限制本发明的范围。除非特别说明，在本发明实施例中使用的术语和缩略语具有其通常的含义。例如“℃”、“mmol”、“g”、“mg”、“d．e．”、“mL”、“M”、“HPLC”、“mp”、“EA”、“MS(FD)”、“MS(HR)”、“IR”和“1H MNR”分别指摄氏温度、常规或普通、毫摩尔、克、毫克、非对映异构体过量、毫升、摩尔或摩尔浓度、高压液相色谱、熔点、元素分析、场解析质谱、高分辨质谱、红外色谱和质子核磁共振光谱。此外，IR光谱列出的吸收最大值只是感兴趣的而不是观察到的所有最大值。
                      制备例1
         5-(3-[1，3-二噁烷-2-基]丙基)-2-噻吩甲酸
在25分钟内，向已冷却至-15℃的64．9g(640mmol，83．9m1)的二异丙基胺于400ml四氢呋喃溶液中，滴加存在于己烷中400ml的1．6M正丁基锂(640mmol)，维持反应温度低于-5℃。搅拌15分钟后，在30分钟内，滴加5-甲基-2-噻吩甲酸(41．4g，291mmol)于150ml四氢呋喃中的溶液，再将温度保持在-5℃以下。将所得暗绿色双阴离子溶液在-15℃至-10℃下搅拌90分钟。向此溶液中在15分钟内滴加2-(2-溴乙基)-1，3-二噁烷(57．9g，320mmo1)，并将此洋红色混合物在-10℃至-5℃下搅拌3小时。此时HPLC分析(30％乙腈／70％的1％乙酸水溶液，2mL／分钟，30cm C-18柱，λ=280nm)，显示9．0％5-甲基-2-噻吩甲酸和88．5％标题化合物。用600ml水停止反应并用6N盐酸酸化至pH=3。用500ml叔丁基甲基醚将此黄色混合物萃取3次，并用硫酸镁干燥合并的有机萃取物，过滤并浓缩。将此粗品用300ml庚烷研磨并将此固体过滤，用庚烷洗涤，并将其在过滤器上抽干，得到58．21g(82．5％)的标题化合物，其中含有小于3％的起始物。1H NMR．1H NMR(300MHz，CDCl3)δ1．81(m，4H)，2．91(t，J=7．4Hz，2H)，3．92(m，4H)，4．90(t，J=4．4Hz，1H)，6．84(d，J=3．7Hz，1H)，7．72(d，J=3．7Hz，1H)。
                      制备例2
    5-(3-[1，3-二噁烷-2-基]丙基)-2-噻吩甲酸甲酯
向5-(3-[1，3-二噁烷-2-基]丙基)-2-噻吩甲酸(58．0g，239mmol)于300ml二甲基甲酰胺溶液中，加入碳酸钾(41．4g，299mmol)，随后加入碘代甲烷(51．0g，359mmol)。将此浆状物在室温下搅拌17小时，然后倒入到600ml水中。用500ml叔丁基甲基醚将所得悬浮液萃取2次，并用水洗涤合并的萃取物，用硫酸镁干燥，过滤，并通过旋转蒸发浓缩得到57．84g(94．3％)的标题化合物，其纯度足以进行制备例3的反应)。
                                                       IR(CHCl3，cm-1)3021，1707，1541，1463，1296，1101．1H NMR(300MHz，CDCl3)d1．75(m，4H)，2．84(t，J=7．4Hz，2H)，3．81(s，3H)，3．82(m，2H)，3．92(m，2H)，4．84(t，J=4．3Hz，1H)，6．76(d，J=3．9Hz，1H)，7．58(d，J=3．7Hz，1H)。
                     制备例3
          5-(丁-4-醛基)-2-噻吩甲酸甲酯
将5-(3-[1，3-二噁烷-2-基]丙基)-2-噻吩甲酸甲酯(10．0g，39．0mmol)和1．0ml浓盐酸溶解于120ml的2∶1的乙酸／水中，并将所得黄色溶液在60℃油浴中加热2小时。让此溶液冷却至25℃并倒入到120ml水中。搅拌15分钟后，将此混合物用125ml叔丁基甲基醚萃取2次。用水洗涤此合并的有机萃取物2次，并用饱和碳酸氢钠水溶液洗涤2次，然后用硫酸镁干燥，过滤，并浓缩得到8．24g(99．5％)的标题化合物，其纯度足以用于制备例4。
        1H NMR(300MHz，CDCl3)δ2．01(m，2H)，2．50(t，J=7．4Hz，2H)，2．87(t，J=7．5Hz，2H)，3．84(s，3H)，6．79(d，J=3．7Hz，1H)，7．61(d，J=4．0Hz，1H)，9．75(s，1H)。
                        制备例4
        5-(4-二乙基氨基丁-3-烯基)-2-噻吩甲酸甲酯
搅拌下将5-(丁-4-醛基)-2-噻吩甲酸甲酯(16．7g，78．6mmol)冷却至0℃至-5℃，并用二乙胺(11．5g，157mmol)处理5分钟。移出冷却浴并一批加入27．6g碳酸钾。在60℃将此桔黄色混合物加热1小时并再冷却至25℃。用50ml二氯甲烷稀释此反应混合物，并通过Hyflo过滤，用过量的二氯甲烷清洗。将此滤液浓缩得到19．6g(93．4％)的标题化合物，其纯度足以用于制备例5。
                1H NMR (300 MHz，CDCl3)δ1．01(t，J=7．1Hz，6H)，2．28(q，J=7．4Hz，2H)，2．68(m，2H)，2．91(q，J=7．1Hz，4H)，3．89(s，3H)，4．12(m，1H)，5．84(d，J=13．9Hz，1H)，7．23(d，J=8．1Hz，2H)，7．94(d，J=8．1Hz，2H)。
                       制备例5
            羟基亚甲基-氰基乙酸甲酯钠盐
将金属钠(11．8g，0．511mol)溶解于450ml甲醇中，向此温溶液中在2分钟内加入甲酸乙酯(104g，1．41mol)和氰基乙酸甲酯(43．8g，0．440mol)的溶液。在加入过程中生成小量的沉淀。将此反应混合物加热至回流并保持1．5小时。让此粘稠的白色悬浮液冷却至20至25℃，并将沉淀过滤，用***洗涤，并在45℃下真空干燥，得到40．4g(61．6％)的标题化合物，其纯度足以用于制备例6。
                       制备例6
               氯亚甲基-氰基乙酸甲酯
往羟基亚甲基-氰基乙酸甲酯钠盐(19．0g，127mmol)在200ml二氯甲烷中的悬浮液中，一批加入五氯化磷(26．5g，127mmol)。让此反应混合物放热至回流并在搅拌下维持回流4小时。让所得淡黄色悬浮液冷却至23℃，然后倒入到400ml冷水中。将此混合物搅拌15分钟，并进行相分离。用100ml二氯甲烷萃取水层，用水将合并的有机层洗涤两次，用硫酸镁干燥，浓缩得到16．8g标题化合物，其纯度足以用于实施例1。
                  1H NMR(300MHz，CDCl3)δ3．88(s，3H)，7．58(s，0．35H)，8．04(s，0．65H)。
                      制备例7N-[[5-[2-[(6R)-2-氨基-3，4，5，6，7，8-六氢-4-氧代吡啶并(2，3-d)-嘧啶-6-基]乙基]-2-噻吩基]羰基]-L-谷氨酸，二乙酯(1R)-
               (-)-10-樟脑磺酸盐
                   (R-R-L)
将N-[[5-[2-[2-[(2，2-二甲基-1-氧丙基]氨基-3，4，5，6，7，8-六氢-4-氧代吡啶并-(2，3-d)-嘧啶-6-基]乙基]-2-噻吩基]羰基]-L-谷氨酸，二乙酯(456．1g，0．748mol)和无水(1R)-(-)-10-樟脑磺酸(197．6g，0．84mol)在3．4L无水乙醇中的混合物加热回流。28小时后，通过HPLC分析(C28柱，在40℃下，40∶60乙腈∶缓冲液，流速2．0ml／分钟，在280nm检测，缓冲液=1∶0．3∶100冰醋酸∶三乙胺∶水)发现该反应完成。让此混合物冷却至68℃，并加入6．34g醋酸钠、3．4L水和23g活性炭。通过加入将此混合物冷却至46℃，并搅拌20分钟，然后通过Hyflo过滤。搅拌所得溶液，冷却至34℃，并加入晶种。不搅拌下让此混合物在室温放置12小时，让结晶形成。过滤收集结晶并干燥。将此滤液放置过夜，又产生结晶。收集得自滤液的结晶，与第一批沉淀合并并干燥，得到292．2g R-R-L的标题化合物。用15倍的1∶1乙醇-水将部分纯化的盐重结晶两次。得到101．9g(理论产率的35．6％)的标题化合物，为单水合物，通过HPLC分析95．4％d．e．。
                                           mp 207℃-210℃，MS(FD)m／z 505(M+)；[a]589-52．8°，[a]365-267．7°(C1．0，DMSO)。EA计算值for C33H47N5O10S2·H2O(755．90)：C，52．44；H，6．53N，19．26测定值：C，52．31；H，6．35；N，19．20。
                   制备例8从制备例7的滤液中回收N-[[5-[2-[-2-氨基-1，4，5，6，7，8-六氢-4-氧代吡啶并(2，3-d)-嘧啶-6-基]乙基]-2-噻吩基]羰基]-L-谷
氨酸，二乙酯的R-L和S-L非对映异构体的2∶3的混合物
将1M碳酸氢钠水溶液加入到制备例7的滤液(1000g，约1．93％标题化合物(w／w))和二氯甲烷(333g)的搅拌的混合物中。再用1M碳酸氢钠水溶液(50．0g)将PH调节至5．0至约7。将所得混合物搅拌1小时。进行相分离得到392．9g清澈的、黄色有机相。用0．5M碳酸氢钠水溶液(50g)将此溶液洗涤30分钟。进行相分离得到341．3g略显絮状的黄色有机相。移出5g保留样品并用10％氯化钠水溶液(100g)将剩余的溶液洗涤15分钟。1小时后进行相分离，分离出293．4g略呈絮状的黄色有机相。移出5g保留样品并用旋转蒸发器将此溶液浓缩至泡沫。将残余物再溶解于二氯甲烷(100g)中，并再次浓缩为泡沫。在45℃／5Torr下真空干燥18小时，得到17．86g黄色泡沫(标题化合物36．8∶63．2的混合物的90．6％效力，基于原滤液效力检测的回收率为88．7％，基于在水或有机相中产物质量平衡的回收率为90．0％)。此物质进入实施例6和7的循环方法中，不用经过纯化。
                        制备例9N-[[5-[2-[-2-[(2，2-二甲基-1-氧丙基)氨基)-3，4，5，6，7，8-六氢-4-氧代吡啶并(2，3-d)-嘧啶-6-基]乙基]-2-噻吩基]羰基]-L-
谷氨酸，二乙酯的R-L和S-L非对映异构体的2∶3的混合物
将无水吡啶(50．9g，642．9gmmol)加入到制备例8的N-[[5-[2-[-2-氨基-1，4，5，6，7，8-六氢-4-氧代吡啶并(2，3-d)-嘧啶-6-基]乙基]-2-噻吩基]羰基]-L-谷氨酸二乙酯的R-L和S-L非对映异构体的2∶3的混合物(24．7g，49．0mmol)和4-二甲基氨基吡啶(1．49g，12．2mmol)中。搅拌下加热至100℃后，得到黄色溶液。在4分钟内加入新戊酸酸酐(19．0g，102．8mmol)；每滴入一滴都形成白色固体，然后扩散。在4．5小时，将此反应冷却至50℃(注意：在较低温度下固化)，将其转移至分液漏斗中并加入二氯甲烷(500ml)，然后加入1N盐酸(660ml)。分离有机相并用1N盐酸(250ml)加二氯甲烷(100ml)萃取以防止絮状沉淀。将所得有机层用盐水(200ml)洗涤，还需要加入二氯甲烷(100ml)防止絮状沉淀，然后用硫酸镁干燥。在26．5英寸Hg真空和40℃下部分除去溶剂直到蒸发几乎停止。向剩余的溶液中，在35分钟内加入无水***(300ml)，得到白色混合物。搅拌15分钟后，通过真空过滤收集固体，用***(100ml)洗涤两次。注意：此过滤需要15-30分钟，且在每次加入***后搅拌。在40℃／5Torr下真空干燥2小时，得到27．88g粗品。将此残余物在乙酸乙酯(700ml)中回流直到得到淡黄色溶液。让此物质在室温下搅拌1小时以达到平衡。将此白色混合物置于冰浴中并搅拌1．5小时。通过真空过滤分离此产物，用冷乙酸乙酯(50ml)洗涤三次，用***(100ml)洗涤一次。在40℃／5Torr下真空干燥，得到19．40g(68％)的标题化合物，为白色固体。
                                          mp 169℃-170℃。[a]20 D-0．2°(C1．01，MeOH)。EA计算值forC28H39N5O7S：C，57．03；H，6．67；N，11．88；O，18．99；S，5．44。测定值：C，57．05；H，6．47；N，11．66；O，19．16；S，5．66。
                       实施例15-(3-[2-氰基-2-乙氧羰基乙烯基]-4-二乙基氨基丁-3-烯基)-2-噻
                  吩甲酸甲酯
向冷却至-25℃的5-(4-二乙基氨基丁-3-烯基)-2-噻吩甲酸甲酯(19．4g，72．4mmol)和三乙胺(7．3g，72．4mmol)于160ml二氯甲烷中的溶液中，在25分钟内滴加氯亚甲基-氰基乙酸甲酯(10．5g，72．4mmol)于40ml二氯甲烷中的溶液，维持该反应器的温度在-20℃以下。在-25℃至-20℃下搅拌此絮状桔黄色溶液2小时，然后升温至20℃。用150ml水稀释此反应混合物并将此两层一起搅拌几分钟并分离。用硫酸镁干燥有机层，过滤并浓缩为桔黄色油状物。用***研磨此油状物，引起所需产物结晶。将所得固体过滤，用***洗涤并干燥得到19．6g(72％)的标题化合物，其纯度足以用于实施例2。MS m／z 377(M+H)。C19H24N2O4S的理论值：C，60．62；H，6．43；N，7．44。实测值：C，61．67；H，6．85；N，7．33。
                         实施例22-氨基-1，4-二氢-4-氧代吡啶并-6-(2-[2-甲氧羰基噻吩-5-基]乙
               基)[2，3-d]嘧啶
向5-(3-[2-氰基-2-乙氧羰基乙烯基]-4-二乙基氨基丁-3-烯基)-2-噻吩甲酸甲酯(10．0g，26．56mmol)于50ml乙腈中的溶液中，加入2，4-二氨基-6-羟基嘧啶(3．35g，26．56mmol)、45ml水和5ml乙酸。将所得悬浮液加热回流18小时，然后冷却至25℃。用2N氢氧化钠水溶液中和此反应混合物至pH6．7，引起沉淀至粘稠状。滤出此固体，用1∶1乙腈／水洗涤，并在50℃下真空干燥得到5．96g(68％)的标题化合物。
                         实施例32-氨基-1，4-二氢-4-氧代吡啶并-6-(2-[2-羧基噻吩-5-基]乙
             基)[2，3-d]嘧啶
将2-氨基-1，4-二氢-4-氧代吡啶并-6-(2-[2-甲氧羰基噻吩-5-基]乙基)[2，3-d]嘧啶(5．4g，16．35mmol)溶解于54ml2N氢氧化钠水溶液中，并在搅拌下加热至40℃。HPLC分析(30％乙腈／70％的1％乙酸水溶液，1ml／分钟，C8 25cm柱，1=280nm)显示甲酯完全水解。用81ml乙醇稀释此溶液并用6N盐酸水溶液酸化至PH3。将所得沉淀过滤，用1∶1乙醇／水洗涤，并在50℃下真空干燥得到5．02g(97％)的标题化合物，为淡黄色固体。
    1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ2．97(t，J=7．2Hz，2H)，3．15(t，J=7．2Hz，2H)，6．89(d，J=3．6Hz，1H)，7．50(d，J=3．6Hz，1H)，8．05(d，J=2．3Hz，1H)，8．45(d，J=1．8Hz，1H)。
                           实施例42-[(2，2-二甲基-1-氧代丙基)氨基]-1，4-二氢-4-氧代吡啶并-6-
     (2-[2-羧基噻吩-5-基]乙基)[2，3-d]嘧啶
向2-氨基-1，4-二氢-4-氧代吡啶并-6-(2-[2-羧基噻吩-5-基]乙基)[2，3-d]嘧啶(0．93g，2．94mmol)于20ml新戊酸酐中的悬浮液中加入二甲基氨基吡啶(0．036g，0．294mmol)，并将此混合物加热至150℃，维持18小时，在此期间将此反应混合物适当稀释。让此反应冷却至25℃，并通过加入100ml***沉淀产物。抽滤出此沉淀并用***洗涤。将所得固体悬浮于10ml水中并用1N氢氧化钠水溶液处理直到形成溶液。用6N盐酸将此溶液酸化至pH4，引起产物沉淀。滤出此固体，用水洗涤，然后用甲醇洗涤，在50℃真空干燥得到0．84g(71％)的标题化合物，为黄褐色固体。
                        1H NMR(300MHz，DMSO-d6)δ1．23(s，9H)，3．14(m，4H)，6．90(d，J=3．6Hz，1H)，7．48(d，J=3．6Hz，1H)，8．27(s，1H)，8．70(s，1H)，11．37(bs，1H)，12．25(s，1H)。
                        实施例5N-[[5-[2-[2-[(2，2-二甲基-1-氧丙基)氨基]-1，4-二氢-4-氧代吡啶-[2，3-d]-嘧啶-6-基]乙基]-2-噻吩基]羰基]-L-谷氨酸二乙酯
向2-[(2，2-二甲基-1-氧代丙基)氨基]-1，4-二氢-4-氧代吡啶并-6-(2-[2-羧基噻吩-5-基]乙基)[2，3-d]嘧啶(0．54g，1．35mmol)和N-甲基吗啉(0．41g，4．05mmol)在5ml二甲基甲酰胺中的混合物中，一批加入2-氯-4，6-二甲氧基-1，3，5-三嗪(0．31g，1．75mmol)。将所得悬浮液室温下搅拌16小时。此时，加入L-谷氨酸二乙酯(0．36g，1．48mmol)并在室温下继续搅拌3小时。将此反应混合物在30ml二氯甲烷和30ml水之间分配，并将此两层一起搅拌并任其分层。将此有机层浓缩为琥珀色油状物，将其用乙醇研磨，引起固体沉淀的形成。将此固体过滤，用乙醇洗涤并在50℃下真空干燥得到0．59g(75％)的标题化合物。
                     mp 72℃-76℃．1H NMR(300MHz，DMSO-d6)d1．14(m，6H)，1．22(s，9H)，2．04(m，2H)，2．38(t，J=7．3Hz，2H)，3．12(m，4H)，4．05(m，4H)，4．34(m，1H)，6．88(d，J=3．6Hz，1H)，7．63(d，J=3．7Hz，1H)，8．24(s，1H)，8．61(d，J=7．3Hz，1H)，8．72(s，1H)，10．85(vbs，2H)。
                         实施例6N-[[5-[2-[2-[(2，2-二甲基-1-氧丙基)氨基]-1，4-二氢-4-氧代吡啶并-[2，3-d]-嘧啶-6-基]乙基]-2-噻吩基]羰基]-L-谷氨酸二乙酯
将二氯甲烷(350ml)加入到制备例9的N-[[5-[2-[-2-[(2，2-二甲基-1-氧丙基)氨基)-3，4，5，6，7，8-六氢-4-氧代吡啶并(2，3-d)-嘧啶-6-基]乙基]-2-噻吩基]羰基]-L-谷氨酸，二乙酯的R-L和S-L非对映异构体的2∶3的混合物(17．0g，28．9mmol)中，并搅拌30分钟直到形成淡黄色溶液。加入2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌(DDQ)固体。该溶液开始变为紫色，然后在室温下搅拌30分钟，其变为淡粉色混合物。滤出粉色固体，用二氯甲烷(25ml)洗涤3次。将此滤液与饱和碳酸氢钠水溶液(200ml)搅拌3次，每次30分钟，并分离。将最终的有机层与碳酸氢钠(100ml)和水(100ml)搅拌30分钟并分离。用盐水(100ml)洗涤此有机层并用硫酸镁干燥。减压除去溶剂得到14．7g(87．1％)的标题化合物。
                             mp 57℃-87℃．IR(CHCl3)：3690-3025，2978，3000，1736，1677，1629，1558，1449，1245，1147，1022，811 cm-1．MS(HR)计算值for C28H35N5O7S：586．234100。测定值：586．233546。
                          实施例7N-[[5-[2-[2-[(2，2-二甲基-1-氧丙基)氨基)-3，4，5，6，7，8-六氢-4-氧代吡啶并-[2，3-d]-嘧啶-6-基]乙基]-2-噻吩基]羰基]-L-
谷氨酸二乙酯的R-L和R-S非对映异构体的1∶1的混合物
将N-[[5-[2-[2-[(2，2-二甲基-1-氧丙基)氨基]-1，4-二氢-4-氧代吡啶并-[2，3-d]-嘧啶-6-基]乙基]-2-噻吩基]羰基]-L-谷氨酸二乙酯(1．0g，1．8mmol)、5％钯碳催化剂(0．26g)、乙醇(4．0ml)和四氢呋喃(16．0ml)加入到氢化反应器中。将所得混合物用氮气(10psig)加压三次并排空。然后将此混合物用氢气(50psig)加压三次并排空。然后，将氢气压调节至50psig并将此温度升高至100℃。22小时后，通过HPLC检测显示残留7％的起始物，将此反应平衡至室温并通过Celite过滤除去催化剂，用4∶1四氢呋喃／乙醇洗涤。将此滤液蒸发，再溶解于二氯甲烷(25ml)中，用碳酸氢钠水溶液(25ml)萃取，用硫酸镁干燥，并蒸发。将此残余物在乙酸乙酯(10ml)中回流搅拌。1小时后，让此混合物冷却至室温并再在冰浴中搅拌30分钟。在冷却下搅拌后，将此反应过滤并用冷乙酸乙酯(3ml)洗涤此滤饼。将此滤饼在40℃／5Torr下真空干燥得到940mg(83％)的标题化合物，为白色固体。mp 169-170℃。C28H39N5O7S的理论值：C，57．03；H，6．67；N，11．88；0，18．99；S．5．44。实测值：C，57．26；H，6．45；N，11．86；0，18．73，S，5．74。
现已对本发明，包括其优选的实施方式进行的详细阐述。但是，应领会本领域技术人员基于本发明的公开内容，可以作出修饰和／或改进，这些都在下述权利要求给出的本发明的范围和实质内容内。
虽然式Ⅲ和Ⅲ(a)的化合物在说明书中给出的结构就其双键似乎只有一个特定的取向，但是所有可能的异构体包括在本发明的范围内。

Claims (18)

1．本发明涉及式Ⅲ化合物或其盐或溶剂化物：
其中Y是 、O或S；
R是C1-C6烷基；
R1和R2独立地为C1-C6烷基或一起与它们连接的氮原子形成杂环；
R3是氢原子、氯或氟；
R4是羟基、羧基保护基或NHC*H(C(O)R5)CH2CH2C(O)R5，其中*标记的碳原子构型为S型；而
R5是氢原子或羧基保护基。
2．权利要求1的化合物或其盐或溶剂化物，其中Y是 或S，R是C1-C4烷基，R1和R2独立地为C1-C4烷基，R3是氢原子，而R4是C1-C4烷氧基或苄氧基。
3．权利要求2的化合物或其盐或溶剂化物，其中R是甲基或乙基，R1和R2都是甲基或乙基，而R4是甲氧基、乙氧基或苄氧基。
4．式Ⅳ的化合物或其盐或溶剂化物：
Figure 9980288300022
其中：
Y是 、O或S；
R3是氢原子、氯或氟；
R4是羟基、羧基保护基或NHC*H(C(O)R5)CH2CH2C(O)R5，其中*标记的碳原子构型为S型；而
R5是氢原子或羧基保护基；
R6是氢原子或氨基保护基；而
R7是羟基或氨基。
5．权利要求4的化合物或其盐或溶剂化物，其中Y是 或S，R3是氢原子。
6．权利要求5的化合物或其盐或溶剂化物，其中R4是甲氧基、乙氧基、苄氧基或NHC*H(C(O)R5)CH2CH2C(O)R5；R5是C1-C6烷基；R6是氨基保护基；而R7是羟基。
7．权利要求6的化合物或其盐或溶剂化物，其中R4是NHC*H(C(O)R5)CH2CH2C(O)R5。
8．制备式Ⅳ化合物其盐或溶剂化物的方法：
其中：
Y是 、O或S；
R3是氢原子、氯或氟；
R4是羟基、羧基保护基或NHC*H(C(O)R5)CH2CH2C(O)R5，其中*标记的碳原子构型为S型；而
R5是氢原子或羧基保护基；
R6是氢原子或氨基保护基；而
R7是羟基或氨基。
该方法包括：
a)式Ⅲ(a)的化合物：
其中：
R是C1-C6烷基；
R1和R2独立地为C1-C6烷基或一起与它们连接的氮原子形成杂环；
R4′是羧基保护基或NHC*H(C(O)R5′)CH2CH2C(O)R5′，其中*标记的碳原子构型为S型；
R5′是羧基保护基；
与2，4-二氨基-6-羟基嘧啶在适宜的酸和溶剂的存在下反应；
b)选择性地在R6位加入氨基保护基；和
c)选择性地除去在R4′位上的任何羧基保护基。
9．权利要求8的方法，其中式Ⅳ化合物或其盐或溶剂化合是其中R7是羟基，Y是 或S，R3是氢的化合物。
10．权利要求9的方法，其中式Ⅲ(a)的化合物或其盐或溶剂化物是其中R4′是甲氧基、乙氧基或苄氧基的化合物；且进行权利要求7的步骤b)。
11．权利要求10的方法，其中式Ⅳ的化合物或其盐或溶剂化物是其中R6是2，2-二甲基-1-氧丙基的化合物。
12．权利要求8的方法，其中所述酸是乙酸，而所述溶剂是乙腈。
13．制备Ⅳ化合物或其盐或溶剂化物的方法，
Figure 9980288300042
其中：
Y是 、O或S；
R3是氢原子、氯或氟；
R4是羟基、羧基保护基或NHC*H(C(O)R5)CH2CH2C(O)R5，其中*标记的碳原子构型为S型；而
R5是氢原子或羧基保护基；
R6是氢原子或氨基保护基；而
R7是羟基或氨基。
该方法包括：
a)式Ⅴ(b)的化合物或其盐或溶剂化物：
Figure 9980288300051
其中：
R4′是羧基保护基或NHC*H(C(O)R5′)CH2CH2C(O)R5′；和
R5′是羧基保护基；
与氧化剂在适宜的溶剂存在下反应；和
b)选择性地除去在R4′和／或R6位上的任何羧基保护基；
其条件是如果式Ⅴ(b)化合物中的R6是氢原子，则式Ⅴ(b)的化合物必须是酸加成盐。
14．权利要求13的方法，其中式Ⅳ的化合物或其盐或溶剂化物是Y是 或S，而R3是氢原子的化合物。
15．权利要求14的方法，其中式Ⅴ(b)的化合物或其盐或溶剂化物是R4′为NHC*H(C(O)R5′)CH2CH2C(O)R5′，R5′是C1-C6烷基；R6是氨基保护基；而R7是羟基的化合物。
16．权利要求15的方法，其中式Ⅴ(b)化合物或其盐或溶剂化物是R5′是甲基或乙基，而R6是2，2-二甲基-1-氧丙基的化合物。
17．权利要求13的方法，其中氧化剂是2，3-二氯-5，6-二氰基-1，4-苯醌而溶剂是二氯甲烷。
18．权利要求15的方法，还包括式Ⅳ(d)化合物在适宜溶剂中的氢化步骤：
Figure 9980288300061
以形成含有式Ⅴ(f)(R)和Ⅴ(f)(S)的化合物或其各自的盐或溶剂化物的混合物。
Figure 9980288300062
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WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication