CN1289100C - 一种具有延缓衰老、免疫调节功能的胶囊及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种具有延缓衰老、免疫调节功能的胶囊及其制备方法，由蝙蝠蛾拟青霉菌粉和西洋参为原料，按重量份比为1-4∶1的比例配制而成。取西洋参洗净，于80℃烘箱内烘4小时，置粉碎机中粉碎，过80目筛，与蝙蝠蛾拟青霉菌粉混合均匀制成胶囊，包装后经7KGy60Coγ射线辐照即可。本发明具有有效的抗衰老和提高免疫功能，同时可保证在长期服用下也不会对人体产生副作用。
Description
技术领域：本发明涉及保健药品，具体涉及一种具有延缓衰老、免疫调节功能的胶囊及其制备方法。
背景技术：人体的衰老是一种自然规律，其免疫调节功能也相对减弱，人们为实现延缓衰老和延长寿命的目的，采取了各种办法，除经常运动外，采用最多的方法是服用各种具有长寿作用的药物来延缓身体衰老，提高免疫功能，但是，目前市场上提供的各种抗衰老长寿药品或保健品均达不到很好的延缓衰老和提高免疫功能的效果，有的只是一时的强壮功能，不能标本兼治，有的药品还采用化学合成的方法制备，长期服用有副作用，不同程度损害身体。
发明内容：本发明的目的就是提供一种可延缓衰老和免疫功能的胶囊，采用中草药为原材料制成，具有有效的抗衰老和提高免疫功能，同时可保证在长期服用下也不会对人体产生副作用。
本发明的另一目的就是提供一种用于制备上述胶囊的工艺。
本发明的胶囊由蝙蝠蛾拟青霉菌粉和西洋参为原料，按重量份比为1-4∶1的比例配制而成。
上述原料的优先重量份比为：1-3∶1
上述原料的最佳重量份比为：2.5∶1
所述蝙蝠蛾拟青霉菌粉，也叫发酵虫草菌粉(Cs-4)，系从新鲜冬虫夏草分离所得的虫草菌经深层发酵培养，将发酵产物过滤、干燥制成。现代医学研究表明，蝙蝠蛾拟青霉菌粉，含有腺嘌呤核苷，脲嘧啶核苷、甘露醇、麦角甾醇以及天门冬氨酸、谷氨酸、赖氨酸等19种氨基酸，此外，还含有锌、钾、锰、磷、硒、铜、铁、钙和维生素E等，与天然虫草有类似的化学成份和药理功能，具有温和平补之性，为虚疟、虚痞、虚胀、虚痛之圣药，功胜九香虫，凡阴虚阳亢，而为喘逆痰咳者，投之悉效，为君药。
所述西洋参，其味甘微苦，性寒，亦入肺、肾经，功能补气养阴，清火生津，故可为臣佐助君药。现代医学研究表明，西洋参，主含三萜皂苷，以齐墩果烷为苷元的有：人参皂苷-Ro；以20(S)原人参二醇为苷元的有：人参皂苷-Rb1、-Rb2、-Rb3、Rc，-Rd、-RAo、-F2，丙二酰基人参皂苷-Rb1、-Rb2、-Rd，西洋参皂苷-R1，绞股蓝苷XI、X、XII；以20(S)原人参三醇为苷元的有人参皂苷-Re、-Rf、-Rg1、-Rg2、-Rg3、-Rh、-F3等皂苷，还含有多种氨基酸多，多糖、微量元素及维生素等，西洋参与蝙蝠蛾拟青霉菌粉合用，可以相互协同共奏补益肺肾，益气养阴，生精养血、益气健脾、延缓衰老的功效。
本发明的制造工艺如下：取西洋参洗净，于80℃烘箱内烘4小时，置粉碎机中粉碎，过80目筛，与蝙蝠蛾拟青霉菌蛾粉混合均匀制成胶囊，包装后经7KGy60Coγ射线辐照即可。
本发明的另一制造工艺如下：取西洋参洗净，于80℃烘箱内烘4小时，置粉碎机中粉碎，过80目筛，以流通蒸汽105℃灭菌30分钟，取出，置80℃烘箱内烘2小时，与蝙蝠蛾拟青霉菌粉混合均匀，并制成胶囊，包装后经7KGy60Coγ射线辐照杀菌。
本发明具有延缓衰老、免疫调节等保健功能，可长期服用，无副作用。
本发明经江西省食品卫生监督检验所进行毒理学试验，其报告如下：
1、材料和方法：
1.1样品：由申请人提供的胶囊产品为土黄色粉末，人体推荐量2.1g/60kgBW/d。
1.2试验动物：选用江西医学院实验动物中心提供的健康昆明种小鼠(批准文号为动许字第021-9602号)及江西省动物中心提供的清结级SD大鼠(批准文号为医动字第021-9704号)。
1.3小鼠急性毒性试验：选用健康昆明种小白鼠20只，雌雄各10只，禁食16小时后试验，小鼠体重为18-22克。取粉碎后的样品10g加蒸馏水至20ml，按0.4ml/20gBW的动物体重比例灌胃，2次/日，剂量达20g/kgBW，连续观察7天。记录中毒表现及死亡情况。
1.4遗传毒性试验：
1.4.1Ames试验：
1.4.1.1样品处理：称取1g样品，用蒸馏水溶解至10ml，以下用蒸馏水稀释成各浓度，按100ul/皿计，分别为10.0、5.0、2.5、1.0、0.5mg/皿5个剂量，高压灭菌备用。
1.4.1.2采用经监定符合要求的鼠伤寒门氏菌组氨酸缺陷型TA97、TA98、TA100、TA102四株试验菌株进行试验，采用多氯联苯(PCB)诱导的大鼠肝匀浆作为体外代谢活化***。试验设10.0、5.0、2.5、1.0、0.5mg/皿5个剂量，同时设阴性对照和阳性对照。在顶层琼脂中加入0.1ml试验菌株增菌液，0.1ml受试物溶液和0.5mlS-9混合液(当需要代谢活化时)，混均后倒入底层培养基平板上。在37℃培养48h，计算每皿落回变数。如果受试物的回变菌落数是阴性对照菌落数2倍以上，并具有剂量一反应关系者，则定为阳性。整套试验在相同条件下重复做一次。
1.4.2小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验：采用间隔24h两次经口灌胃法进行试验。用体重25-30克小白鼠50只，按体重随机分为5组，每组10只，雌雄各半。以40ml/kgBW剂量的环磷酰胺为阳性对照(CP)，蒸馏水为阴性对照。取粉碎后的样品10.00g、5.00g、2.50g/kgBW，末次给样品后6h，颈椎脱臼处死动物，取股骨骨髓用小牛血清稀释涂片，甲醇固定，Giemsa染色。在光学显微镜下，每只动物计数1000个嗜多染红细胞(PRC)，微核发生率以含微核的PRC千分率计，并进行统计处理(X2检验)。
1.4.3小鼠***畸形试验：用体重25-35克的性成熟雄性小白鼠25只，按体重随机分为5组，每组5只。以40mg/kgBW剂量的环磷酰胺为阳性对照(CP)，蒸馏水为阴性对照。称取样品5.00g溶于蒸馏水中，过滤，取滤液浓缩至20ml，为灌胃的最高浓度，以0.4ml/20g.BW灌胃，剂量为5.00g/KgBW。以下设2.50、1.25g/kgBW两剂量。连续灌胃五天，每日一次于末次灌胃后30天处死动物，取两侧附睾制片，伊红染色，每组计数5只动物，每只动物计数1000个结构完整的***，计算畸变***发生率(以百分率计)，并进行统计处理(X2检验)。
1.5 30天喂养试验
1.5.1仪器：全自动生化分析仪，日立7060
全自动血球计数仪，Couter-JTIR
1.5.2用体重70克左右清洁级断乳大鼠80只，雌雄各半随机分为4组，即对照组，3个受试物组。每100克基础饲料分别加入样品3.50g、1.75g、0.87g给予各剂量组大鼠喂饲，剂量达到3.50g、1.75g、0.87g/Kg.BW(相当于人体推荐量的100、50、25倍)，对照组给予基础饲料。连续30天，单笼喂养，自由饮食，记录大鼠进食量、体重，连续观察30天。
1.5.3观察指标
1.5.3.1动物的一般表现、体重、食物利用率。
1.5.3.2血常规及生化指标：白细胞计数及其分类、红细胞计数、血红蛋白、谷草转氨酶、谷丙转氨酶、尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三酯、血糖、总蛋白、白蛋白。
1.5.3.3病理解剖：脏体比、大体观察及病理组织检查(肝、心、肾、胃及十二指肠)。
2结果
2.1小鼠急性毒性试验：由表1可见，以20g/kgBW的剂量灌胃两种性别的小鼠，观察7天后，未见明显中毒症状，也无死亡。受试物对两种性别小鼠的急性毒性LD50均大于20g/kgBW。根据急性毒性分级，属无毒物
表1 表1 本胶囊样品对小鼠的急性毒性
| 动物品种 | 性别 | 数量 | 途径 | 剂量(g/kgBW) | 死亡数 | LD50(g/kgBW) | 结论 |
| 小鼠 | 雄 | 10 | 经口 | 20 | 0 | ＞20 | 无毒 |
| 雌 | 10 | 经口 | 20 | 0 | ＞20 | 无毒 |
2.2遗传毒性试验：
2.2.1Ames试验：由表2-3可见，本发明胶囊各剂量组回变菌落数均未超过阴性对照菌落数2倍，亦无剂量反应关系，对鼠伤寒沙门氏菌TA97、TA98、TA100、TA102四株试验菌株在加与不加S-9时，均未呈现遗传毒性。
表2 本发明胶囊Ames试验第1次结果
| 剂量(mg/皿) | TA97 | TA98 | TA100 | TA102 | |||||
| -S9 | +S9 | -S9 | +S9 | -S9 | +S9 | -S9 | +S9 | ||
| 受试物 | 10.05.02.51.00.5 | 94±4125±893±5107±19116±12151±22 | 105±8116±1284±1397±392±3142±25 | 27±427±229±428±327±331±4 | 26±130±628±128±425±327±7 | 170±44220±26224±16172±44201±26190±4 | 185±53183±37127±15168±29187±65141±15 | 281±24266±32265±37285±71278±10285±68 | 278±15311±32227±12263±34274±49242±38 |
| 自发回变 | |||||||||
| 阳性对照物 | 剂量(ug/皿) | TA97 | TA98 | TA100 | TA102 | ||||
| -S9 | +S9 | -S9 | +S9 | -S9 | +S9 | -S9 | +S9 | ||
| SA2-AF2.7-AFMMS9A | 1.010.0100.04.050.0 | 823±22 | 803±49 | 775±80 | 718±25 | 908±42 | 855±50 | 1009±25 | 1020±70 |
注：以上结果为平均值
表3 本发明胶囊Ames试验第2次结果
| 剂量(mg/皿) | TA97 | TA98 | TA100 | TA102 | |||||
| -S9 | +S9 | -S9 | +S9 | -S9 | +S9 | -S9 | +S9 | ||
| 受试物 | 10.05.02.51.00.5 | 124±8145±19170±48160±33142±14121±5 | 151±43156±41128±13128±17161±31130±57 | 36±535±537±436±440±136±4 | 29±230±333±135±432±234±9 | 151±21150±34135±25152±26156±21145±11 | 141±3163±21144±20154±5162±21147±32 | 265±19263±3308±58289±22293±36320±19 | 254±18308±13299±2308±12294±14287±34 |
| 自发回变 | |||||||||
| 阳性对照物 | 剂量(μg/皿) | TA97 | TA98 | TA100 | TA102 | ||||
| -S9 | +S9 | -S9 | +S9 | -S9 | +S9 | -S9 | +S9 | ||
| SA2-AF2，7-AFMMS9A | 1.010.0100.04.050.0 | 856±66 | 936±96 | 723±96 | 861±115 | 952±89 | 1035±100 | 1170±77 | 1090±83 |
注：以上结果为平均值
2.2.2小鼠骨髓嗜多染红细胞微核试验：见表4，本发明胶囊各剂量组微核率均在正常值范围内，而环磷酰胺阳性对照组与阴性对照组比较差异有极显著性(P＜0.01)。未见本发明胶囊对小鼠骨髓嗜多染红细胞微核产生影响。
表4 本发明胶囊对小鼠骨髓微核发生率的影响
| 性别 | 剂量(g/kgBW) | 动物数(只) | 检查细胞数(个) | 微核数(个) | 微核率(‰) |
| 雄 | 10.005.002.500.00 | 5555 | 5000500050005000 | 7666 | 1.41.21.21.2 |
| 40mg/kgBW(CP) | 5 | 5000 | 118 | 23.6* | |
| 雌 | 10.005.002.500.00 | 5555 | 5000500050005000 | 6566 | 1.21.01.21.2 |
| 40mg/kgBW(CP) | 5 | 5000 | 117 | 23.4* |
*与阴性对照组比较差异有极显著性(P＜0.01)
2.2.3小鼠***畸形试验：由表5可见，本发明胶囊各剂量组小鼠***畸形发生率均在正常值范围内，而环磷酰胺阳性对照组与阴性对照组比较差异有极显著性(P＜0.01)。
表5 本发明胶囊对小鼠***畸形发生率的影响
| 剂量(g/kg.bw) | 动物数(只) | 受检***数(个) | ***畸形数(个) | ***畸形率(％) |
| 5.002.501.250 | 5555 | 5000500050005000 | 911038492 | 1.822.061.681.84 |
| 40mg/kgBW(CP) | 5 | 5000 | 480 | 9.60 |
2.3 30天喂养试验：
2.3.1生长状况及食物利用率：由表6-7可见，以3.50g、1.75g、0.87g/kgBW剂量的本发明胶囊给予大鼠30天，动物未出现拒食现象，动物活动生长正常，被毛浓密有光泽。各剂量组动物体重、食物利用率与对照组比较差异无显著性(t检验，P＞0.05)。
表6 本发明胶囊对大鼠体重影响
| 性别 | 剂量(g/kgBW) | 动物数(只) | 始重(g) | 第1周(g) | 第2周(g) | 第3周(g) | 第4周 | |
| (g)0 | P值 | |||||||
| 雄 | 3.501.750.870 | 10101010 | 56.32±9.2056.64±8.3656.14±8.4656.98±8.89 | 95.5±13.1696.2±8.2195.9±11.3293.8±12.09 | 143.6±16.89146.5±12.10141.6±15.25139.4±16.97 | 206.7±19.21209.2±16.07211.4±17.96205.2±21.39 | 260.4±25.65263.1±19.19264.7±18.43261.4±27.2 | ＞0.05＞0.05＞0.05- |
| 雌 | 3.501.750.870 | 10101010 | 58.45±8.1858.64±8.2858.81±8.3458.59±7.73 | 90.8±8.9190.9±8.0795.2±9.7094.7±9.53 | 127.0±11.62120.8±11.24131.0±10.56121.6±9.34 | 133.9±13.57148.6±14.01149.3±10.92140.4±5.31 | 195.6±14.56194.6±13.35202.2±14.1194.0±10.94 | ＞0.05＞0.05＞0.05- |
表7 本发明胶囊对大鼠食物利用率的影响
| 性别 | 剂量(g/kgBW) | 动物数(只) | 体重增重(g) | 进食量(g) | 食物利用率 | |
| (％) | P值 | |||||
| 雄 | 3.501.750.870 | 10101010 | 204.08±21206.46±26208.50±28204.42±20 | 668.18±36664.28±40674.62±41646.86±49 | 30.8±2.832.7±3.331.9±3.631.1±2.9 | P＞0.05P＞0.05P＞0.05- |
| 雌 | 3.501.750.870 | 10101010 | 137.15±17135.96±19143.39±15135.41±16 | 542.51±37527.17±40553.13±37541.46±35 | 25.28±2.725.41±3.025.01±2.924.34±2.8 | P＞0.05P＞0.05P＞0.05- |
2.2血常规及血生化指标：
由表8-11可见，该受试物以3.50、1.75、0.87g/kgBW剂量给予大鼠30天，对照组和各剂量组的白细胞计数及其分类、红细胞计数、血红蛋白及各项生化指标(谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三脂、血糖、总蛋白、白蛋白)均在本室历史性对照范围内。
表8 本发明胶囊30天喂养试验血液学检查结果
| 性别 | 剂量(g/kgBW) | 动物数(只) | 白细胞计数(×109/L) | 红细胞计数(×1012/L) | 血红蛋白(g/L) |
| 雄 | 3.501.750.870 | 10101010 | 20.65±3.1520.15±2.9421.02±4.0420.97±4.60 | 6.66±0.426.77±0.406.65±0.466.82±0.42 | 142.0±3.85144.6±5.10143.4±6.8144.0±3.85 |
| 雌 | 3.501.750.870 | 10101010 | 18.08±2.6118.96±3.2619.19±3.5617.43±3.01 | 6.96±0.316.74±0.266.81±0.316.69±0.46 | 143.1±5.52138.4±5.91142.2±5.75139.9±4.7 |
表9 本发明胶囊对大鼠WBC的影响
| 性别 | 剂量(g/kgBW) | 动物数(只) | 淋巴细胞(％) | 单核与嗜酸细胞(％) | 中性细胞(％) |
| 雄 | 3.501.750.870 | 10101010 | 77.3±3.2476.3±2.1379.4±2.9478.9±4.13 | 8.32±2.9110.37±1.658.05±2.578.25±3.19 | 14.38±1.9913.36±1.7413.2±1.9212.84±2.75 |
| 雌 | 3.501.750.870 | 10101010 | 80.98±5.0179.12±3.6680.30±5.1280.37±3.24 | 6.41±1.547.53±1.558.23±4.346.05±2.12 | 12.61±3.7813.35±1.4412.30±3.0213.57±3.27 |
表10 本发明胶囊30天喂养试验末期生化检验结果(1)
| 性别 | 剂量g/kgBW | 动物数(只) | 谷丙转氨酶(U/L) | 谷草转氨酶(U/L) | 尿素氮(mmol/L) | 肌酐(umol/L) |
| 雄 | 3.501.750.870 | 10101010 | 30.2±4.238.1±4.338.2±3.630.0±4.3 | 112.4±9.34114.5±8.60112.8±13.9113.1±11.3 | 5.97±0.65.92±0.75.84±0.65.77±0.7 | 43.7±3.444.2±2.943.2±2.945.9±2.9 |
| 雌 | 3.501.750.870 | 10101010 | 31.1±5.639.3±5.138.8±5.339.2±3.2 | 116.2±15.7107.8±15.0106.4±14.7118.7±13.9 | 5.91±0.85.82±1.05.81±1.15.84±0.7 | 44.5±2.542.9±2.642.7±2.443.7±3.0 |
表11 本发明胶囊30天喂养试验末期生化检验结果(2)
| 性别 | 剂量(g/kgBW) | 动物数(只) | 胆固醇(mmol/L) | 甘油三脂(mmol/L) | 血糖(mmol/L) | 总蛋白(g/L) | 白蛋白g/L) |
| 雄 | 3.501.750.870 | 10101010 | 1.57±0.181.60±0.261.56±0.131.62±0.21 | 1.33±0.241.28±0.431.23±0.261.46±0.3 | 8.35±0.918.46±0.468.56±0.658.56±0.99 | 51.35±4.753.83±4.651.99±3.054.43±5.1 | 29.6±1.630.5±2.630.1±0.730.8±1.9 |
| 雌 | 3.501.750.870 | 10101010 | 1.48±0.221.48±0.211.53±0.131.54±0.21 | 1.35±0.431.43±0.231.30±0.361.34±0.43 | 8.91±0.688.48±0.598.82±0.598.95±0.42 | 50.68±1.850.04±3.950.31±3.453.62±4.6 | 28.45±1.328.22±1.328.36±1.429.55±1.4 |
2.3大体解剖及组织学检查：大体解剖观察未发现异常，该受试物各剂量组的脏体比与对照组比较差异无显著性(t检验，P＞0.05)见表12。对肝，肾，心，胃，十二指肠病理组织学镜下检查，各剂量组受检脏器均未见有意义的病理变化。
表12 本发明胶囊对大鼠脏体比的影响
| 性别 | 剂量(g/kgBW) | 动物数(只) | 肝/体％ | 脾/体％ | 肾/体％ | 睾丸(卵巢)/体％ |
| 雄 | 3.501.750.870 | 10101010 | 4.38±0.974.05±1.324.08±1.434.53±0.60 | 0.33±0.040.38±0.070.36±0.040.37±0.06 | 1.07±0.151.01±0.090.91±0.211.01±0.14 | 1.15±0.141.10±0.091.09±0.091.07±0.14 |
| 雌 | 3.501.750.870 | 10101010 | 4.52±0.494.44±0.554.87±1.284.81±0.55 | 0.27±0.050.25±0.030.28±0.080.25±0.02 | 1.08±0.101.09±0.151.06±0.0771.01±0.12 | 0.07±0.0090.07±0.0110.07±0.0100.06±0.008 |
3小结：
3.1急性毒性试验：本发明胶囊对两种性别的小鼠LD50均大于20g/kgBW。
3.2三项遗传毒性试验：Ames、骨髓微核和***畸形试验均阴性。
3.3 30天喂养试验：
本发明胶囊分别按3.50、1.75、0.87g/KgBW/d剂量掺入饲料给予各剂量组大鼠30天，结果显示：试验期间动物未出现拒食现象，动物生长活动正常，被毛浓密有光泽。各剂量组动物体重、食物利用率、主要脏体比与对照组比较差异无显著性(P＞0.05)。对照组和各剂量组的白细胞计数及其分类、红细胞计数、血红蛋白及各项生化指标(谷丙转氨酶、谷草转氨酶、尿素氮、肌酐、胆固醇、甘油三脂、血糖、总蛋白、白蛋白)均在本室正常值范围内。大体解剖与主要脏器病理组织检查各组动物均未见明显病理变化。
本发明具有的延缓衰老功能由湖北省疾病预防控制中心进行检验，其检验报告如下：
样品来源及处理：受试物由申请人提供，为塑料袋装胶囊，去掉胶囊内容为土黄色固体粉沫。实验时用蒸馏水配成不同浓度供实验用。
1、果蝇生存实验：
1.1实验动物：Oregon K野生型黑腹果蝇(Drosophila melanogaster)
1.2饲养方法：采用平底培养指管培养，每管20只，置25±1℃，，相对湿度为45-75％的恒温培养室中，每四天换一次培养基。基础培养基配方如下(以100ml培养基为例)：
| 组份 | 玉米粉(g) | 蔗糖(g) | 琼脂(g) | 丙酸(ml) | 干酵母粉(g) | 水(ml) |
| 用量 | 85 | 65 | 7.5 | 5 | 7.5 | 1000 |
1.3剂量：设1个空白对照组和0.008％、0.023％、0.07％、0.21％四个剂量组。
1.4实验方法：收集八小时内新羽化的果蝇成虫，***麻醉下区分雌雄随机分组、分别称重后进行试验。每组用果蝇400只，雌雄各半。对照组给予普通玉米粉培养基；常规饲养25天后试验组分别给予含本发明胶囊0.008％、0.023％、0.07％、0.21％的培养基。每天观察记录果蝇生存数和死亡数，直到果蝇全部死亡为止。计算出半数死亡天数、平均寿命和平均最高寿命等三个指标。
1.5结果：见表1，从表1可见，本发明胶囊0.07％、0.21％剂量组可明显延长雄果蝇的平均寿命，与对照组比较差异有显著性(P＜0.05，P＜0.05)，0.023％、0.07％、0.21％剂量组可明显延长雌果蝇的平均寿命，与对照组比较差异有显著性(P＜0.05，P＜0.05，P＜0.05)，0.07％、0.21％剂量组可明显延长雄果蝇的最高寿命，与对照组相比，差异有显著性(P＜0.05，P＜0.05)。0.21％剂量组雄果蝇半数死亡天数大于对照组5天，0.07％、0.21％剂量组雌果蝇半数死亡天数分别大于对照组8天、6天。
表1.本发明胶囊 对果蝇生存实验的影响(x±s)
| 试物浓度(％) | 样本数(只) | 平均体重(ug) | 半数死亡时间(天) | 平均寿命(天) | 平均最高寿命(天)a | |||||
| 雄 | 雌 | 雄 | 雌 | 雄 | 雌 | 雄 | 雌 | 雄 | 雌 | |
| 0.00.0080.0230.070.21 | 200200200209203 | 217223200216201 | 818825834789796 | 99810129969971008 | 4548494950 | 4646505452 | 46.5±9.847.2±9.548.2±8.350.6±11.6*51.1±10.0* | 49.1±15.049.7±15.553.2±15.8*55.5±14.4*54.6±14.4* | 64.3±5.664.5±4.963.3±2.976.6±8.4*74.6±7.7* | 81.7±3.182.5±5.681.4±4.382.6±2.580.9±4.2 |
与老龄对照组比较*p＜0.05
a平均最高寿命由寿命最长的20只果蝇计算得出。
2、生化指标检测：
2.1动物：SPF级12月龄昆明种雌性小鼠，共40只，2月龄雌性小鼠10只。湖北省预防医学科学院实验动物中心提供，批准号为鄂动管字19-082号。
2.2剂量分组：设置对照组和低、中、高剂量组。对照组灌胃蒸馏水；低、中、高剂量组，分别以0.35、0.70、1.05g/kg.bw剂量的本发明胶囊蒸馏水配制液经口灌胃；低、中、高剂量组分别相当于本发明推荐人体摄入量(2.1g/60kg.bw)的10、20、30倍。连续喂养一个月。
2.3实验方法：实验结束时，动物眼球取血，分离血清，测定LPO含量和SOD活性：处死动物，取肝脏作匀浆，制备1％的肝匀浆作SOD活力测定；制备10％的肝匀浆作LPO含量的测定。SOD测定采用羟胺法，LPO测定采用共轭双键法(试剂盒购自南京建成生物工程公司)。
结果：见表3，本发明胶囊中、高剂量组可明显减少老龄小鼠10％肝匀浆LPO含量，与老龄对照组比较差异有显著性(P＜0.05，P＜0.05)；低、中、高剂量组明显升高老龄小鼠1％肝匀浆SOD活性，与老龄对照组比较，差异有显著性(P＜0.05，P＜0.05 P＜0.05)。
表2 本发明胶囊 对老龄小鼠体重的影响(x±s)
| 组别 | 剂量(g/kg.bw) | 动物数(只) | 初重g | 终重g |
| 老龄对照低剂量组中剂量组高剂量组 | 0.00.350.701.05 | 10101010 | 56.4±8.955.0±8.152.9±6.453.0±7.2 | 55.9±8.354.9±7.154.4±5.255.1±6.8 |
表3 本发明胶囊 对老龄小鼠血清、肝匀浆SOD、LPO的影响(x±s)
| 组别 | 剂量(g/kg.bw) | 动物数(只) | SOD(NU/ml) | LPO(nmol.MDA/ml) | |
| 1％肝匀浆 | 血清 | 10％肝匀浆 | |||
| 老龄对照低剂量组中剂量组高剂量组少龄对照 | 0.00.350.701.050.0 | 1010101010 | 370.3±32.8429.8±35.4*412.2±39.7*406.9±23.6*442.7±28.2* | 302.5±52.4302.5±18.7306.3±28.9290.3±38.3360.4±26.9* | 22.8±2.723.6±2.320.3±3.0*20.3±2.0*19.9±2.8* |
与老龄对照组比较*p＜0.05
本发明具有免疫调节功能，由湖北省疾病预防控制中心进行检验，其检验报告如下：
1.样品给予途径：将本发明胶囊里的土黄色固体粉沫用水配成相应浓度，各组小鼠每天经口灌服相应剂量，连续给予一个月进行以下试验工作。空白对照组灌服普通自来水。
2.动物：昆明种雌性小鼠，20g左右。湖北省医学院实验动物中心提供。动物批准号为鄂动医管字19-007。
3.分组：按本发明推荐人群日饮用2.1g/60kg.bw，扩大10、20、30倍，设计低、中、高三个剂量组，即0.35、0.7、1.05g/kg.bw。
4.试验方法与结果：
4.1试验前后动物体重记录：见表1.各组动物间体重无明显差异。
表1 试验前后动物体重记录(x±S)
| 组别 | 剂量(g/kg.bw) | 动物数(只) | 体重(克) | 增重(克) | |
| 试验前 | 试验后 | ||||
| 空白组低剂量组中剂量组高剂量组 | 00.350.701.05 | 10101010 | 19.99±0.719.93±0.519.98±0.719.95±0.7 | 36.80±0.436.72±0.536.91±0.736.91±0.6 | 16.81±0.416.79±0.416.94±0.416.96±0.4 |
4.2对动物淋巴器官/体重比值的影响：见表2.各组动物间胸腺/体重比值和脾脏/体重值无明显差异。
表2 对动物淋巴器官/体重比值的影响(x±S)
| 组别 | 剂量(g/kg.bw) | 动物数(只) | 胸腺/体重比值(×10-3) | 脾脏/体重比值(×10-3) |
| 空白组低剂量组中剂量组高剂量组 | 00.350.701.05 | 10101010 | 2.83±0.102.83±0.102.82±0.092.84±0.09 | 4.46±0.104.47±0.094.47±0.104.47±0.07 |
4.3ConA诱导的小鼠脾淋巴细胞转化试验
方法：MTT法(步骤同功能实验程序规定)
结果：见表3.从表3可见，与空白组比较，本发明胶囊低、中、高剂量组显著性增强ConA诱导的脾淋巴细胞增殖能力。
表3 本发明胶囊 对小鼠细胞免疫功能影响
| 组别 | 剂量(g/kg.bw) | 注ConA诱导脾淋巴细胞增殖 | DNFB诱导DTH | ||
| N | OD差值 | N | 左右耳重量差(mg) | ||
| 空白组低剂量组中剂量组高剂量组 | 00.350.701.05 | 10101010 | 0.039±0.0030.043±0.003#0.049±0.003*0.056±0.004* | 10101010 | 16.46±0.617.15±0.4#18.27±0.4*19.49±0.4* |
与空白组比较*P＜0.01 #0.05＞P＞0.01
注：取0.1ml测定OD570值
4.4二硝基氟苯(DNFB)诱导迟发型***反应(DTH)
方法：耳肿胀法。用DNFB致敏小鼠后，第5天再用DNFB攻击右耳，24h后处死动物剪下左右耳壳用打孔器取下直经8mm的耳片，称重，以左右耳的重量之差来表示DTH的程度。
结果：见表3.从表3可见：与空白组比较，本发明胶囊低、中、高剂量组显著性增强小鼠对DNFB诱发的DTH反应。
4.5血清溶血素的测定
方法：血凝法。按照功能实验程序操作，根据血清凝聚程度的级别计算出抗体积数。
结果：从表4可见，本发明胶囊低、中、高剂量组可显著性升高血清溶血素含量。
表4 本发明胶囊 对小鼠体液免疫功能的影响
| 组别 | 剂量(g/kg.bw) | 动物数(只) | 血清溶血素(抗体积数) |
| 空白组低剂量组中剂量组高剂量组 | 00.350.701.05 | 10101010 | 67.8±14.987.0±13.0*100.8±17.7*115.0±15.0* |
与空白组比较*P＜0.01
4.6腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞试验
方法：半体内法。制备20％的鸡红细胞悬液；每只鼠腹腔注射1mL该悬液，30min后处死动物，将其仰位固定于鼠板上，开腹，经腹腔注入生理盐水2mL，转动鼠板1min，然后，吸出腹腔洗液1mL，平均分滴于2片载玻片上，37℃温育30min；育毕用生理盐水漂洗，凉干，以1∶1的丙酮甲醇溶液固定，4％Giemsa-磷酸缓冲液染色3min，再用蒸馏水漂洗晾干。油镜下计数100个巨噬细胞，按下式计算吞噬率和吞噬指数：
结果：见表5.从表5可见，本发明胶囊低、中、高剂量组吞噬百分数、吞噬指数均明显高于空白对照组。
表5 本发明胶囊 对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响
| 组别 | 剂量(g/kg.bw) | 动物数(只) | 吞噬百分率(％) | 吞噬指数 |
| 空白组低剂量组中剂量组高剂量组 | 00.350.701.05 | 10101010 | 37.2±2.842.4±2.6*46.1±1.6*48.3±2.7* | 0.42±0.020.47±0.03*0.51±0.02*0.54±0.03* |
与空白组比较*P＜0.01
4.7小鼠碳廓清试验
方法：依程序规定的方法。根据注入墨汁2min、10min后血中碳浓度(测吸光值)，计算出各组小鼠的吞噬指数。
结果：见表6.从表6可见，本发明胶囊低、中、高剂量组可显著性提高小鼠碳廓清吞噬指数。
表6 本发明胶囊 对小鼠碳廓清功能的影响
| 组别 | 剂量(g/kg.bw) | 动物数(只) | 吞噬指数 |
| 空白组低剂量组中剂量组高剂量组 | 00.350.701.05 | 10101010 | 6.753±0.26.067±0.2*5.606±0.2*5.345±0.2* |
与空白组比较*P＜0.01
4.8抗体生成细胞检测
方法：改良Jerne玻片法(略)。
结果：见表7.从表7可见，本发明胶囊低、中、高剂量组均明显高于正常对照组，经统计学分析差异有显著性(p＜0.01)。
表7 本发明胶囊 对抗体生成细胞功能的影响
| 组别 | 剂量(g/kg.bw) | 动物数(只) | 溶血空斑数(个/106脾细胞) |
| 空白组低剂量组中剂量组高剂量组 | 00.350.701.05 | 10101010 | 484±28.7519±11.4*569±26.2*590±30.6* |
与空白组比较*P＜0.01
Claims (5)
1、一种具有延缓衰老、免疫调节功能的胶囊，其特征是制成有效成份的原料药按重量份组成为：蝙蝠蛾拟青霉菌粉∶西洋参＝1-4∶1。
2、根据权利要求1所述的胶囊，其特征是所述原料药按重量份组成为：蝙蝠蛾拟青霉菌粉∶西洋参＝1-3∶1。
3、根据权利要求1所述的胶囊，其特征是所述原料药按重量份组成为：蝙蝠蛾拟青霉菌粉∶西洋参＝2.5∶1。
4、一种用来制备权利要求1、2、3任一所述胶囊的工艺，取西洋参洗净，于80℃烘箱内烘4小时，置粉碎机中粉碎，过80目筛，与蝙蝠蛾拟青霉菌粉混合均匀制成胶囊，包装后经7KGy60Coγ射线辐照即可。
5、一种用来制备权利要求1、2、3任一所述胶囊的工艺，取西洋参洗净，于80℃烘箱内烘4小时，置粉碎机中粉碎，过80目筛，以流通蒸汽105℃灭菌30分钟，取出，置80℃烘箱内烘2小时，与蝙蝠蛾拟青霉菌粉混合均匀，并制成胶囊，包装后经7KGy60Coγ射线辐照杀菌。
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