CN1279686A - 核苷代谢的抑制剂 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及式(Ⅰ)化合物,或其互变异构体;或其制药上可以接受的盐类;或其酯类;或其前药;其中A为CH或N;B选自OH,NH2,NHR,H或卤素;D选自OH NH2,NHR,H,卤素或SCH3;R为任意取代的烷基,芳烷基或芳基基团;且X和Y独立地选自H,OH或卤素,除了当X或Y中的一个为氢或卤素时,另一个为氢;并且Z选自氢,卤素,羟基,SQ或OQ,Q为任意取代的烷基,芳烷基或芳基基团;以及具有式(Ⅰa)的化合物或其互变异构体;或其制药上可以接受的盐类;或其酯类;或其前药,其中A,X,Y,Z和R的定义同式(Ⅰ)化合物中所述;E选自CO2H或相应的盐类形式,CO2R,CN,CONH2,CONHR或CONR2;且G选自NH2,NHCOR,NHCONHR或NHCSNHR。本发明化合物还提供了上述化合物作为药物的用途以及含有这些化合物的药物组合物和这些化合物的制备方法。

Description

核苷代谢的抑制剂
本申请是美国专利申请08／949，388的部分继续申请，后者于1997年10月14日提交，它的内容作为参考文献被全部引入本文。
本发明涉及一些核苷同类物，这些化合物作为药物的用途，含有这些化合物的药物组合物和这些化合物的制备方法。
嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)可以催化核糖核苷及脱氧核糖核苷的磷酸化断裂，例如胍和次黄嘌呤，得到相应的糖－1－磷酸酯以及胍、次黄嘌呤或其它嘌呤碱。
缺乏嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)的人由于dGTP的积蓄以及其对兴奋的T－淋巴细胞的毒性，患有特殊的T－细胞免疫缺损。由于这一点，抵抗PNP的抑制剂是具有免疫抑制活性的，并且具有T－细胞恶性肿瘤抵抗活性。在临床上，采用9－(3－吡啶基甲基)－9－脱氮杂胍局部治疗牛皮癣以及口服治疗T－细胞淋巴瘤和免疫抑制已经取得了一些进展(BioCryst Pharmaceuticals，Inc)。该化合物对酶的IC50值为35nM。在动物研究中，小鼠耳接触敏感肿胀分析中达到活性需要的剂量为50mg／kg。对于人类而言，这大约意味着3．5g／70kg。就此抑制剂而言，由于血液和哺乳动物组织中酶活性相对较高，很难抑制PNP。
核苷及脱氧核苷水解酶可以催化核苷及脱氧核苷的水解。在哺乳动物中没有发现这些酶，但是它们在一些原生寄生虫中是核苷补救(salvage)所需要的。嘌呤磷酸核糖基转移酶(PPRT)可以催化嘌呤碱向5－磷酸－α－D－核糖－1－焦磷酸酯的转化，生成嘌呤核苷酸5’－磷酸酯。原生质和其它寄生虫含有PPRT，其参与基本的嘌呤补救途径。恶性肿瘤组织也含有PPRT。某些原生寄生虫含有嘌呤核苷磷酸化酶，其也作用于嘌呤补救途径。可以预计核苷水解酶、嘌呤核苷磷酸化酶以及PPRT抑制剂可以干扰寄生虫的代谢，因此，可以用于抵抗原生寄生虫，PNP以及PPRT抑制剂可以干扰恶性肿瘤组织中的嘌呤代谢，因此可以用于抵抗恶性肿瘤组织。
本发明的目标是提供药物，其为PNP、PPRT和／或核苷水解酶的有效抑制剂。
附图简要描述图1：图1显示了在实施例1产物(化合物Ib)的不同浓度下，嘌呤核苷磷酸化酶活性随时间的变化。图2：图2显示了嘌呤核苷磷酸化酶活性进展曲线与动力学模型的配合。图3：图3显示了借助曲线fit方法得到的化合物Ib对于牛嘌呤核苷磷酸化酶抑制的Ki*测定。图4：图4显示了显示出化合物Ib对牛嘌呤核苷磷酸化酶慢发作抑制作用进展曲线。图5：图5显示了口服给予化合物Ib对于小鼠血液中PNP活性的作用。图6：图6显示了用原生质核苷水解酶进行的化合物Ib的Ki测定。图7：图7显示了显示出化合物Ib对嘌呤磷酸核糖基转移酶的5’－磷酸酯慢发作抑制作用的进展曲线。疟疾酶的抑制。图8：图8显示了化合物Ib的5’－磷酸酯对于人类嘌呤磷酸核糖基转移酶抑制的Ki*测定。
本发明的一个方面提供了具有下式的化合物或其互变异构体；或其制药上可以接受的盐类；或其酯类；或其前药，
Figure 9881148900121
其中，A为CH或N；B选自OH，NH2，NHR，H或卤素；D选自OH，NH2，NHR，H，卤素或SCH3；R为任意取代的烷基，芳烷基或芳基基团；且X和Y独立地选自H，OH或卤素，除了当X或Y中的一个为羟基或卤素时，另一个为氢；并且Z为OH，或当X为羟基时，Z选自氢、卤素，羟基，SQ或OQ，Q为任意取代的烷基，芳烷基或芳基基团。
优选地，当B和／或D为NHR时，R为C1－C4烷基
优选地，当存在一或多个卤素时，它们选自氯和氟。
优选地，当Z为SQ或OQ时，Q为C1－C5烷基或苯基。
优选地，当D为H，或当D不为H时，B为OH。
更优选地，B为OH，D为H，OH或NH2，X为OH或H，Y为H，最优选地，Z为OH，H或甲硫基，特别是OH。
式(Ⅰ)化合物(其中B和／或D为羟基基团)具有相应的酰胺烯醇型互变异构体的形式是比较可取的，它们大部分以酰胺的形式存在。烯醇型互变异构体表达的使用使得可以用较少的结构式来表示本发明化合物。
本发明还提供了具有下式的化合物或其互变异构体；或其制药上可以接受的盐类；或其酯类；或其前药，
Figure 9881148900122
其中A，X，Y，Z和R的定义同式(Ⅰ)化合物中所述；E选自CO2H或相应的盐类形式，CO2R，CN，CONH2，CONHR或CONR2；且G选自NH2，NHCOR，NHCONHR或NHCSNHR。
优选地，E为CONH2且G为NH2。
更优选地，E为CONH2，G为NH2，X为OH或H，Y为H，更优选地Z为OH，H或甲硫基，特别为OH。
特别优选的是下列化合物：
1．(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(4－羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－D－核糖醇
2．(1S)－1－C－(2－氨基－4－羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－D－核糖醇
3．(1R)－1－C－(4－羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－1，2，4－三脱氧－D－赤型－戊五醇
4．(1S)－1－C－(4－羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－1，4，5－三脱氧－D－核糖醇
5．(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(4－羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－5－甲硫基－D－核糖醇
6．(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(2，4－二羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－D－核糖醇
7．(1R)－1－C－(2，4－二羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－1，2，4－三脱氧－D－赤型－戊五醇
8．(1S)－1－C－(2，4－二羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－1，4，5－三脱氧－D－核糖醇
9．(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(2，4－二羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－5－甲硫基－D－核糖醇
10．(1R)－1－C－(2－氨基－4－羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－1，2，4－三脱氧－D－赤型－戊五醇
11．(1S)－1－C－(2－氨基－4－羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－1，4，5－三脱氧－D－核糖醇
12．(1S)－1－C－(2－氨基－4－羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－5－甲硫基－D－核糖醇
13．(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(7－羟基吡唑并[4，3－d]嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－D－核糖醇
14．(1R)－1－C－(7－羟基吡唑并[4，3－d]嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－1，2，4－三脱氧－D－赤型－戊五醇
15．(1S)－1－C－(7－羟基吡唑并[4，3－d]嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－1，4，5－三脱氧－D－核糖醇
16．(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(7－羟基吡唑并[4，3－d]嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－5－甲硫基－D－核糖醇
17．(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(5，7－二羟基吡唑并[4，3－d]嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－D－核糖醇
18．(1R)－1－C－(5，7－二羟基吡唑并[4，3－d]－嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－1，2，4－三脱氧－D－赤型－戊五醇
19．(1S)－1－C－(5，7－二羟基吡唑并[4，3－d]－嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－1，4，5－三脱氧－D－核糖醇
20．(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(5，7－二羟基吡唑并[4，3－d]嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－5－甲硫基－D－核糖醇
21．(1S)－1－C－(5－氨基－7－羟基吡唑并[4，3－d]－嘧啶－3－基)－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－D－核糖醇
22．(1R)－1－C－(5－氨基－7－羟基吡唑并[4，3－d]－嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－1，2，4－三脱氧－赤型－戊五醇
23．(1S)－1－C－(5－氨基－7－羟基吡唑并[4，3－d]－嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－1，4，5－三脱氧－D－核糖醇
24．(1S)－1－C－(5－氨基－7－羟基吡唑并[4，3－d]－嘧啶－3－基)－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－5－甲硫基－D－核糖醇
25．(1S)－1－C－(3－氨基－2－甲酰胺基－4－吡咯基)－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－D－核糖醇
26．(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(4－羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－D－核糖醇－5－磷酸酯
27．(1S)－1－C－(2－氨基－4－羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－D－核糖醇－5－磷酸酯
28．(1S)－1－C－(3－氨基－2－甲酰胺基－4－吡咯基)－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－D－核糖醇
最优选的是式Ⅰb和Ⅰc化合物，它们的互变异构体以及制药学上可接受的盐类。
通过将式(Ⅰ)或(Ⅰa)化合物转化为前药形式可以提高其生物利用率。相对于式(Ⅰ)或(Ⅰa)化合物，这类前药的亲脂性有所改进，并导致膜渗透性增加。前药的一种特别有用的形式是酯衍生物形式。它的用途基于以下作用：一或多种普遍存在的细胞内的脂酶催化这些酯基团水解并在其或近其作用部位释放出式(Ⅰ)或(Ⅰa)化合物。
在一种前药形式中，式(Ⅰ)或(Ⅰa)化合物的一或多个羟基基团可以被O－酰基化，制备得到5－O－丁酸酯或2，3－二－O－丁酸酯衍生物。
也可以制备式(Ⅰ)或(Ⅰa)化合物5－磷酸酯衍生物的前药形式，并且由于5－磷酸酯的阴离子性质可以限制其穿过细胞膜的能力因而特别有用。常规地，可以将这类5－磷酸酯衍生物转化为不带电荷的双(酰氧基甲基)酯衍生物。这类前药的用途基于以下作用：一或多种普遍存在的细胞内的脂酶催化这些酯基团水解，并在其或近其作用部位释放出甲醛分子和式(Ⅰ)或(Ⅰa)化合物。
Kang等人在核苷核苷酸17(1998)1089；Jiang等在J．bio．Chem．273(1998)11017；Li等人在Tetrahedron 53(1997)12017；以及Kruppa等人在Bioorg．Med．Chem．Lett．(1997)945中描述了制备这类磷酰化碳水合物衍生物的酰氧基甲基酯前药形式的方法以及其应用的特定实例。
根据本发明的另一个方面，其提供了含有药物有效剂量的本发明第一方面化合物的药物组合物。
优选地，药物组合物含有选自本发明第一方面的优选化合物；更优选地，化合物选自第一方面的多个优选化合物。最优选地，化合物为式Ⅰb和Ⅰc化合物。
本发明的另一个方面提供了治疗一些疾病或状况的方法，在这些疾病或状况中，需要降低T淋巴细胞的活性水平。该方法包含给予需要治疗的患者制药有效剂量的本发明化合物。
疾病包括T细胞恶性肿瘤以及包括关节炎和狼疮在内的自身免疫疾病。本发明的这个方面还包括将这些化合物用于器官移植的免疫抑制以及炎症失调。本发明包括使用这些化合物来制备用于这些治疗的药物。
本发明的另一个方面提供了治疗和／或预防寄生虫感染的方法，尤其是那些由原生寄生虫引起的感染。这些原生寄生虫包括贾第鞭毛虫属、毛滴虫属、利什曼(原)虫属、锥虫属、短膜(鞭毛)虫属、匐滴虫属、细滴虫属、组织滴虫属、艾美球虫属、Isopora和疟原虫属等的寄生虫。一种由疟原虫引起的寄生虫感染的实例即为疟疾。该方法可以具有优势地应用于任何可被本发明化合物所抑制的寄生虫，其含有一或多种核苷水解酶，且当在酶的所在位置给予能提供有效浓度的化合物时。
本发明的另一个方面提供了制备本发明第一方面化合物的方法。该方法包括方法(A)－(Z)以及(AA)－(AF)中的一或多种方法。方法(A)：(4－羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶以及5’－脱氧，5’－脱氧－5’－卤代，5’－醚和5’－硫代同类物)
使式(Ⅱ)化合物[其中Z’为氢或卤原子，具式SQ或OQ的基团或三烷基甲硅烷氧基，烷基二芳基甲硅烷氧基或任意取代的三芳基甲氧基基团，且Q为选择取代的烷基、芳烷基或芳基基团，](典型地，Z’为叔丁基二甲基甲硅烷氧基，三苯甲氧基或相似的基团)依次与N－氯代琥珀酰亚胺及具有空间位阻的碱(例如四甲基哌啶锂化物)进行反应，形成亚胺，然后与乙腈的阴离子(典型地是用正丁基锂对乙腈进行处理得到的)进行反应，再与二叔丁基二碳酸酯进行反应。由此产生了式(Ⅲ)化合物[其中Z’的定义同上述式(Ⅱ)中第一次出现的一样]，其可以按照制备9－去氮杂肌苷的方法[Lim等人，J．Org．Chem．48(1983)780]进行精制，在上述方法中，式(Ⅲ)化合物与(Me2N)2CHOBut进行缩合，并在弱酸性的条件下水解成为式(Ⅳ)化合物，
Figure 9881148900173
[其中Z’的定义同上述式(Ⅱ)中第一次出现的一样]，然后使之依次进行下列反应：在温和的条件下，与甘氨酸酯(例如甘氨酸乙酯)进行缩合，通过与氯代甲酸酯(例如氯代甲酸苄酯或氯代甲酸甲酯)反应进行环合，然后如果是苄基基团，在贵金属催化剂(例如Pd／C)存在下，如果是烷基基团(例如甲基)，在温和的碱性条件下，对吡咯氮通过氢解进行脱保护反应，得到式(Ⅴ)化合物，
Figure 9881148900181
[其中Z’的定义同上述式(Ⅱ)中第一次出现的一样，R为烷基基团](典型地R为甲基或乙基基团)，其可与甲脒乙酸盐缩合得到式(Ⅵ)化合物
Figure 9881148900182
[其中Z’的定义同上述式(Ⅱ)中第一次出现的一样]，其再于酸性条件下进行彻底的脱保护，例如用三氟乙酸处理。
Furneaux等人在Tetrahedron 53(1997)2915及其参考文献中详细描述了式(Ⅱ)化合物(其中Z’为叔丁基二甲基甲硅烷氧基基团)的制备方法。
可从式(Ⅱ)化合物[其中Z’为羟基基团]制备得到式(Ⅱ)化合物[其中Z’为卤原子]，通过选择性的N－烷基化或芳烷基－氧羰基化作用(典型地是用二叔丁基二碳酸酯，氯代甲酸苄酯或氯代甲酸甲酯和碱)或N－酰基化作用(典型地是用三氟乙酸酐和碱)得到式(Ⅶ)化合物：[其中R为烷基或芳烷基－氧羰基基团或任意取代的烷基或芳基－羰基基团，且Z’为羟基基团]，其接着进行：
(ⅰ)或是5－O－磺酰化反应(典型地是与对甲苯磺酰氯，甲磺酰氯或三氟甲磺酸酐和碱)，得到式(Ⅶ)化合物[其中R为烷基或芳烷基－氧羰基基团或选择取代的烷基或芳基－羰基基团，且Z’为选择取代的烷基或芳磺酰氧基基团]，然后与能够提供卤化物离子亲核源的试剂(典型的是钠、锂或四烷基铵的氟化物、氯化物、溴化物或碘化物)进行磺酸酯取代反应；或者
(ⅱ)采用直接可以用卤原子代替伯羟基基团的试剂***，例如Mitsunobu反应中所采用的(如使用三苯基膦，偶氮二羧酸二乙酯以及上述卤化物离子亲核源)，通过与二乙基氨基硫三氟化合物(DAST)进行反应，或与甲基三苯氧基磷鎓碘化物的二甲基甲酰胺溶液进行反应[参见Stoeckler等人，Cancer Res46(1986)1774]，或在极性溶剂中(例如六甲基磷酰胺)与亚硫酰氯或亚硫酰溴进行反应[Kitagawa和Ichino，Tetrahedron Lett(1971)87]，得到式(Ⅶ)化合物[其中R为烷基－或芳烷基－氧羰基基团或选择取代的烷基或芳基－羰基基团，且Z’为卤原子]，然后根据所用的N－保护基团的需要，通过酸或碱催化的水解或醇解或催化氢解反应进行选择性的N－脱保护反应。
还可以从式(Ⅱ)化合物[其中Z’为三烷基甲硅烷氧基，烷基二芳基甲硅烷氧基或任意取代的三芳基甲氧基基团]开始，通过上述的N－烷基化或芳烷基羧酸化或N－酰化反应，制备得到式(Ⅶ)化合物[其中R为烷基或芳烷基－氧羰基基团或任意取代的烷基或芳基－羰基基团，且Z’为羟基基团]，然后通过酸或碱催化的水解或醇解或催化氢解反应进行选择性的5－O－脱保护反应或根据所用的5－O－保护基团的需要，用氟离子源(例如四丁基铵氟化物)对其进行处理。
式(Ⅱ)化合物[其中Z’为氢原子]可用下述方法制备：
(ⅰ)从式(Ⅶ)5－羟基化合物[其中R为烷基或芳烷基－氧羰基基团或任意取代的烷基或芳基－羰基基团，且Z’为羟基基团]，通过－5－O－硫酰基衍生物的形成和基团脱氧化作用；
(ⅱ)从式(Ⅶ)5－脱氧－5－卤代化合物[其中Z’为氯、溴或碘原子]，通过使用氢化试剂，例如处于游离基状态的三丁基锡氢化物进行还原反应，或通过催化氢化反应，典型的是在Pd催化剂下使用氢气进行反应；接着根据所用的N－保护基团的需要，通过酸或碱催化的水解或醇解或催化氢解反应进行选择性的N－脱保护反应。
使式(Ⅶ)5－脱氧－5－卤代或5－0－磺酸酯衍生物[其中R为烷基或芳烷基－氧羰基基团或任意取代的烷基或芳基－羰基基团，且Z’为卤原子或上述任意取代的烷基或芳磺酰氧基基团]与具有相应任意取代的烷硫醇、芳烷硫醇或芳基硫代醇的碱金属或四烷基铵盐进行反应，接着根据所用的N－保护基团的需要，通过酸或碱催化的水解或醇解或催化氢解反应进行选择性的N－脱保护反应[例如可参见Montgomery等人，J．Med．Chem17(1974)1197]，可以制备得到式(Ⅱ)化合物[其中Z’为选择取代的烷硫基、芳烷硫基或芳硫基]。
从式(Ⅶ)5－羟基化合物[其中R为烷基或芳烷基－氧羰基基团或任意取代的烷基或芳基－羰基基团，且Z为羟基基团]，通过下列反应，可以制备得到式(Ⅱ)化合物[其中Z’为式OQ基团，Q为任意取代的烷基、芳烷基或芳基基团]，
(ⅰ)在碱存在下(例如四氢呋喃作溶剂的碘甲烷和氢化钠或溴苄和氢化钠中)，与烷基卤化物或芳烷基卤化物进行反应；或者
(ⅱ)顺序转化为5－O－磺酸酯衍生物(如上所述)，并与所需苯酚的碱金属或四烷基铵盐进行反应，再根据在用的N－保护基团的需要，通过酸或碱催化的水解或醇解或催化氢解反应进行选择性的N－脱保护反应。
在上述转化中，应用碳水化合物化学中常规的方法是比较可取的。可以采用许多可以影响这些转化的替换试剂和条件，这些内容可以参见专家期刊报告“碳水化合物化学”，1－28册，由Royal Society ofChemistry出版，特别应参看卤代糖、氨基糖、硫代糖、酯、脱氧糖以及核苷等章节。方法(B)：(2－氨基－4－羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶)
按照制备9－去氮杂肌苷及其衍生物的方法[例如参见Montgomery等人，J．Med．Chem36(1993)55，Lim等人，J． Org．Chem．48(1983)780以及其中的参考文献]，使式(Ⅴ)化合物[其中Z’的定义同上述式(Ⅱ)中第一次出现的一样，R为烷基基团]在碱存在下(例如DBU或DBN)，与异硫氰酸苯甲酰酯然后与碘化甲进行反应，得到式(Ⅷ)化合物，
Figure 9881148900211
[其中的Z’为三烷基甲硅烷氧基，烷基二芳基甲硅烷氧基或任意取代的三芳基甲氧基基团，氢或卤原子，SQ或OQ，其中Q为任意取代的烷基、芳烷基或芳基基团，且R为烷基基团](典型地，当为保护羟基基团时，Z’为叔丁基二甲基甲硅烷氧基，三苯甲氧基或相似的基团，且R为甲基或乙基基团)，然后在氨气存在下进行环合反应，得到可分离的式(Ⅸ)化合物[其中D为氨基或甲硫基，且Z’和R的定义同上述式(Ⅷ)中第一次出现的一样，或Z’为羟基基团](其中在反应条件下，叔丁基二甲基甲硅烷氧基已经被断开)的混合物，在酸性条件下，用方法(A)中所给出的操作步骤，使式(Ⅸ)化合物[其中D为氨基或甲硫基]进行充分的脱保护反应。方法(C)：(4－氨基吡咯并[3，2－d]－嘧啶)
使式(Ⅳ)化合物[其中Z’的定义同上述式(Ⅱ)中第一次出现的一样]在温和的碱性条件下，与氨基乙腈进行反应，再与氯代甲酸酯(典型的是氯代甲酸苄酯或氯代甲酸甲酯)进行反应，使产物环合，得到式(Ⅹ)化合物，[其中的Z’为三烷基甲硅烷氧基，烷基二芳基甲硅烷氧基或任意取代的三芳基甲氧基基团，氢或卤原子，SQ或OQ，其中Q为任意取代的烷基、芳烷基或芳基基团，且R为芳烷基基团或烷基基团](典型地，当为保护羟基基团时，Z’为叔丁基二甲基甲硅烷氧基，三苯甲氧基或相似的基团，且R为苄基或甲基基团)，然后如果是苄基基团，在贵金属催化剂(例如Pd／C)存在下，如果是烷基基团(例如甲基基团)，在温和的碱性条件下，对吡咯氮进行脱保护反应，并按照上述(Ⅴ)→(Ⅵ)→(Ⅰ)或(Ⅴ)→(Ⅷ)→(Ⅸ)→(Ⅰ)的转化进行操作。这一方法与制备9－去氮杂肌苷及其同类物所采用的方法[Lim和Klein，Tetrahedron Lett22(1981)25以及Xiang等人，核苷核苷酸15(1996)1821]一致。方法(D)：(7－羟基吡唑并[4，3－d]－嘧啶－Daves’方法学)
使式(Ⅱ)化合物[与第一次出现的定义一致]依次与N－氯代琥珀酰亚胺及具有空间位阻的碱(例如四甲基哌啶锂化物)进行反应，形成亚胺，然后与从式(Ⅺb)化合物或(Ⅺc)化合物中抽出的溴或碘原子而产生的阴离子进行缩合反应，[其中R3为溴或碘原子，且R4为四氢吡喃－2－基基团]，典型地是采用丁基锂或镁，得到产物，其在酸性条件下进行充分的脱保护反应(同方法(A))。Zhang和Dares在J．Org．Chem．57(1992)4690，Stone等人在J．Org．Chem．44(1979)505及其参考文献中描述了制备式(Ⅺb)和(Ⅺc)化合物及其混合物的方法。
当四氢吡喃－2－基基团作为本反应优选的保护基团时，还可以使用其它O，N－保护基团，并且采用式(Ⅺb)和(Ⅺc)化合物的同类物(其中任何羟基或氨基基团可离子化的氢原子已经被合适的保护基团所取代)，还可以将这个方法应用到在吡唑并[4，3－d]－嘧啶环的5－位和／或7－位上具有取代基的同类吡唑并[4，3－d]－嘧啶的合成中去，这些取代基独立地选自羟基、氨基、烷基氨基或芳烷基氨基基团或氢原子。方法(E)：(7－羟基吡唑并[4，3－d]－嘧啶－Yokoyama方法)
使5－O－醚保护的2，3－O－异亚丙基－D－呋喃核糖衍生物(其中典型地，5－醚取代基为三烷基甲硅烷基，烷基二芳基甲硅烷基，任意取代的三芳基甲基或任意取代的芳烷基基团，特别是叔丁基二甲基甲硅烷基，叔丁基二苯基甲硅烷基，三异丙基甲硅烷基，三苯甲基或苄基基团)顺序进行下列反应：
(ⅰ)与得自方法(D)的由式(Ⅺb)或(Ⅺc)化合物中的溴或碘原子而产生的阴离子进行缩合反应，
(ⅱ)将生成的二醇氧化为二酮，典型的是使用Swern氧化或其改进方法，采用二甲基亚砜为基础的氧化剂(例如在低温下，典型的是－78℃下，使二甲基亚砜和三氟乙酸酐试剂在二氯甲烷溶液中混合，接着加入三乙胺，并升温至室温)；
(ⅲ)双重的还原氨化反应，形成1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－D－核糖醇基团，典型地是采用氰基硼氢化钠和甲酸铵，乙酸铵或二苯甲胺的甲醇溶液；并且
(ⅵ)通过酸催化水解反应(例如用70％的三氟乙酸水溶液)脱保护基团，如有所需(在产物是用二苯甲胺制备的情况下或其中任意取代的芳烷基基团被用来保护亚胺核糖醇基团中的伯羟基基团时)，进行金属催化的氢解反应(一般为钯催化剂)，或如有所需(在甲硅烷基醚保护基团的情况下)，将其暴露于能够作为氟离子源(例如四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液或氟化铵的甲醇溶液)的试剂下。Yokoyama等人在J．Org．Chem．61(1996)6079中报告了上述序列反应的合适条件，Furneaux等人在Tetrahedron，42(1993)9605及其参考文献中报告了用乙酸铵或二苯甲胺进行双重还原氨化反应的条件。方法(F)：(7－羟基吡唑并[4，3－d]－嘧啶－Kalvoda方法)
使式(Ⅱ)化合物[与第一次出现的定义一致]依次与N－氯代琥珀酰亚胺及具有空间位阻的碱(例如四甲基哌啶锂化物)进行反应，形成亚胺，然后与三甲基甲硅烷基氰化物和Lewis酸结合(典型地是三氟化硼二***合物)，接着进行酸催化水解，得到式(Ⅻ)化合物[其中的Z’为氢或卤原子，羟基或式SQ或OQ基团，其中Q为任意取代的烷基、芳烷基或芳基基团]，然后顺序地进行选择性的N－保护(典型地是用三氟乙酸酐，二叔丁基二碳酸酯，氯代甲酸苄酯或氯代甲酸甲酯和碱)及用酰氯或酸酐及碱(典型地是乙酸酐或苯甲酰氯的吡啶溶液)进行O－保护，得到适当保护的式(ⅩⅢ)化合物，[其中R1为烷基或芳烷基－氧羰基基团或任意取代的烷基或芳基－羰基基团，且Z’为氢或卤原子，式SQ或OQ基团，其中Q为任意取代的烷基、芳烷基或芳基基团，或式R2O基团，且R2为烷基羰基或任意取代的芳基羰基基团](典型地，R1为三氟乙酰基，叔丁氧羰基或苄氧羰基基团，且R2为乙酰基或苯甲酰基基团)。
然后按照Kalvoda[Collect．Czech．Chem．Commun43(1978)1431]所述的方法，以下列顺序进行反应，将生成的式(ⅩⅢ)化合物的羧酸基团转化为吡唑并[4，3－d]－嘧啶－7－酮－3－基基团：
(ⅰ)在惰性溶剂中，使羧酸基团进行氯化反应形成酰氯，典型地是用带有催化量二甲基甲酰胺的亚硫酰氯；
(ⅱ)在叔丁氧羰基三苯基正瞵烷(即Ph3P=CHCO2But)存在下，将生成的酰氯转化与酰化的氰化氢反应，得到3－氰基－2－丙烯酸酯衍生物；
(ⅲ)将所得产物与二偶氮乙腈(可从氨基乙腈盐酸盐和亚硝酸钠进行制备)进行环合加成，其伴随有氰化氢的消除，得到吡唑衍生物；
(ⅳ)此吡唑衍生物中叔丁基酯进行酸催化水解，得到其相应的羧酸；
(ⅴ)Curtius反应，典型地是在三乙胺的存在下，使用苯基膦酰基叠氮化物和2，2，2－三氯乙醇，其可使羧酸基团转化为2，2，2－三氯乙氧基羰基胺基氨基基团(即氨基甲酸酯产物)；
(ⅵ)一般用含有氯化铵的锌粉甲醇溶液使上述氨基甲酸三氯乙酯进行还原性断裂；
(ⅶ)使生成的4－氨基－3－取代－1H－吡唑－5－羧酸乙酯与甲脒乙酸盐进行缩合，得到式(ⅩⅣ)化合物，
Figure 9881148900261
[其中R1为烷基或芳烷基－氧羰基基团或任意取代的烷基或芳基－羰基基团，且Z’为氢或卤原子，SQ或OQ，其中Q为任意取代的烷基、芳烷基或芳基基团，或式R2O基团，且R2为烷基羰基或任意取代的芳基羰基基团，A为氮原子，B为羟基基团，且D为氢原子]，再根所使用中对O－和N－保护基团的需要，通过酸或碱催化的水解或醇解或催化氢解反应进行O－脱保护反应。方法(G)：(7－氨基吡唑并[4，3－d]－嘧啶－Buchanan方法)
使式(Ⅱ)化合物[与第一次出现的定义一致]依次与N－氯代琥珀酰亚胺及具有空间位阻的碱(例如四甲基哌啶锂化物)进行反应，形成亚胺，然后按照Buchanan和其同事制备的间型霉素及其同类物的方法[J．Chem．SocPerkin Trans I(1991)1077及其中的参考文献]，以下列顺序进行反应，将其转化为7－氨基吡唑并[4，3－d]－嘧啶衍生物：
(ⅰ)往亚胺中加入3，3－二乙氧丙炔基镁溴化物或3，3－二乙氧丙炔基镁锂化物；
(ⅱ)N－保护反应，典型地是用三氟乙酸酐，二叔丁基二碳酸酯，氯代甲酸苄酯或氯代甲酸甲酯和碱；
(ⅲ)温和的酸水解反应，除去酸敏感的O－保护基团，并将二乙缩醛基团转化为醛基团；
(ⅳ)与肼缩合，将3－取代的丙－2－炔醛衍生物转化为3－取代的吡唑衍生物；
(ⅴ)酰化反应，典型的是用乙酸酐或苯甲酰氯的吡啶溶液；
(ⅵ)硝化反应，典型的是用硝酸铵，三氟乙酸酐以及三氟乙酸，得到3－取代的1，4－二硝基吡唑衍生物；
(ⅶ)与能提供氰根离子的试剂进行反应，典型的是***的乙醇水溶液，获得两个硝基基团其中之一的cine－取代；
(ⅷ)残留的硝基基团还原，典型的是采用连二亚硫酸钠或金属催化下的催化氢化反应；
(ⅸ)与甲脒乙酸盐缩合，得到式(ⅩⅣ)化合物[其中R1为烷基或芳烷基－氧羰基基团或任意取代的烷基或芳基－羰基基团，且Z’为氢或卤原子，SQ或OQ，其中Q为任意取代的烷基、芳烷基或芳基基团，或式R2O基团，且R2为烷基羰基或任意取代的芳基羰基基团，A为氮原子，B为氨基基团，且D为氢原子]，再根据使用中对O－和N－保护基团的需要，通过酸或碱催化的水解或醇解或催化氢解反应进行O－脱保护反应。方法(H)：(2’－脱氧同类物)
按照下列顺序，进行式(Ⅰ)化合物[其中X和Z为羟基基团，Y为氢原子，并且A、B和D的定义同第一次出现的一样]全部的2’－脱氧反应：
(ⅰ)进行选择性的这类式(Ⅰ)化合物中1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－D－核糖醇基团的N－烷基或芳烷氧羰基化反应(典型地是使用二叔丁基二碳酸酯，氯代甲酸苄酯或氯代甲酸甲酯和碱)或N－酰化反应(典型地是使用三氟乙酸酐和碱)；并且
(ⅱ)使生成的产物与1，3－二氯－1，1，3，3－四异丙基二硅氧烷及碱反应，进行3’，5’－O－保护作用，得到式(ⅩⅤ)化合物：
Figure 9881148900281
[其中R1为烷基或芳烷基－氧羰基基团或任意取代的烷基或芳基－羰基基团，且R2或与R1相同或为氢原子，且A、B和D的定义同第一次出现的一样]；
(ⅲ)使生成的式(ⅩⅤ)化合物进行2’－O－硫代酰化反应(典型地是使用苯氧硫代羰基氯化物和碱；或氢化钠，二硫化碳以及碘甲烷)；
(ⅳ)Barton基团脱氧化反应(典型地是使用三丁基锡氢化物以及基团引发剂)；
(ⅴ)用能够用作氟离子源的试剂，例如四丁基氟化铵的四氢呋喃溶液或氟化铵的甲醇溶液将甲硅烷基保护基团断裂掉；并且
(ⅵ)根据所用保护基团的需要，通过酸或碱催化的水解或醇解或催化氢解反应，将残余的N－和O－保护基团断裂掉。
在Robins等人J．Am．Chem．Soc105(1983)4059；Solan和Rosowsky，核苷核苷酸8(1989)1369；Upadhya等人，核酸研究，14(1986)1747中可以找到适合实施本转化中关键步骤的试剂和反应条件。
人们可看到，根据所采用的反应条件不同，式(Ⅰ)化合物在其吡咯或吡唑环上的氮原子可在步骤(ⅰ)中进行烷基－或芳烷基－氧羰基化或者在步骤(ⅱ)中能够进行硫代酰化反应。这样所生成的衍生物，其中的吡咯或吡唑N－取代基应既能可靠地在温和的酸或碱催化水解或醇解反应条件下除去，又不干扰亚胺基核糖醇基团中随后的化学反应，并能够在最终的脱保护步骤中除去。如有所需，该方法能够应用于式(ⅩⅤ)化合物[同上述定义，但在吡咯并或吡唑并嘧啶基团上带有N－保护基团]。在Ciszewski等人，核苷核苷酸12(1993)487；Kambhampati等人，核苷和核苷酸8(1986)539中可以找到适合制备这类N－保护化合物的方法，以及可以影响它们进行2’－脱氧化作用和适合N－脱保护的条件。方法(I)：(2’－表－同类物)
通过式(ⅩⅤ)化合物[同第一次出现的定义一样]的氧化和还原，进行式(Ⅰ)化合物整个的C－2’差向异构化，得到式(ⅩⅥ)化合物：
Figure 9881148900291
[其中R1，R2，A，B和D同式(ⅩⅤ)化合物中第一次出现的一样]，其存在于与式(ⅩⅤ)起始醇的混合物中，然后，按照方法(H)中的步骤(ⅴ)和(ⅵ)使式(ⅩⅥ)化合物进行彻底的脱保护。
在Robins等人，Tetrahedron 53(1997)447中可以找到适合实施本转化中关键步骤的试剂和反应条件。方法(J)：(2’－脱氧－2’－卤代和2’－脱氧－2’－表－2’－卤代同类物)
按照方法(A)中所列的制备式(Ⅱ)化合物[其中的Z’为卤原子]的方法，使式(ⅩⅤ)或(ⅩⅥ)化合物[与第一次出现的定义一样]进行下列反应：
(ⅰ)用卤离子进行2’－O－磺酰化反应和磺酸酯取代；或者
(ⅱ)用卤原子直接取代2’－羟基基团，例如通过Mitsunbu反应或与二乙基氨基硫三氟化物(DAST)进行反应，得到C－2’位发生了立体化学转化的化合物，然后按照方法(H)中的步骤(ⅴ)和(ⅵ)使之进行彻底的脱保护。
比较可取的是，根据所采用的反应条件，式(ⅩⅤ)和式(ⅩⅥ)化合物在其吡咯或吡唑环上的氮原子可在步骤(ⅰ)中进行磺酰化反应。这样所生成的衍生物，其中的吡咯或吡唑N－取代基应既能可靠地在温和的酸或碱催化水解或醇解反应条件下除去，又不干扰亚胺基核糖醇基团中随后的化学反应，并能够在最终的脱保护步骤中除去。
如有所需，该方法能够应用于式(ⅩⅤ)或式(ⅩⅥ)化合物[同上述定义，但在吡咯并或吡唑并嘧啶基团上带有N－保护基团]。在Ciszewski等人，核苷核苷酸12(1993)487；Kambhampati等人，核苷和核苷酸8(1986)539中可以找到适合制备这类N－保护化合物的方法，以及可以影响它们进行2’－O－三氟甲磺酸盐形成和卤离子取代以及适合N－脱保护的条件。方法(K)：(5’－脱氧，5’－脱氧－5’－卤代，5’－醚和5’－硫代同类物)
按照方法(A)中所述的转化式(Ⅶ)化合物[其中R为烷基或芳烷基－氧羰基基团或任意取代的烷基或芳基－羰基基团，且Z’为羟基基团]至式(Ⅱ)化合物[其中Z’为卤原子或氢原子，或SQ或OQ，其中Q为任意取代的烷基、芳烷基或芳基基团及1－5碳的烷硫基团]的操作，得到式(ⅩⅦ)化合物：
Figure 9881148900301
[其中R为烷基或芳烷基－氧羰基基团或任意取代的烷基或芳基－羰基基团，且Z’为羟基基团，且A，B和D同式Ⅰ)化合物中第一次出现的一样]，其在酸性条件下，例如用三氟乙酸水溶液处理，进行彻底的脱保护。
以任意的顺序应用下列两步反应，从式(Ⅰ)化合物[其中X和Z均为羟基基团，Y为氢原子，且A，B和D同式(Ⅰ)化合物中第一次出现的一样]可以制备得到这类式(ⅩⅦ)化合物：
(ⅰ)1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－D－核糖醇基团的选择性N－烷基或芳烷氧羰基化反应(典型地是使用二叔丁基二碳酸酯，氯代甲酸苄酯或氯代甲酸甲酯和碱)或N－酰化反应(典型地是使用三氟乙酸酐和碱)；并且
(ⅱ)2’，3’－O－异亚丙基化反应，其可用许多试剂来进行，例如丙酮和加有或不加硫酸的无水硫酸铜；丙酮和硫酸；2，2－二甲氧基丙烷和酸催化剂；或2－甲氧基丙烷和酸催化剂。
比较可取的是，根据所采用的反应条件，式(Ⅰ)或式(ⅩⅦ)化合物在其吡咯或吡唑环上的氮原子可进行磺酰化反应、硫酰化反应或酰化反应。这样所生成的衍生物，其中的吡咯或吡唑N－取代基应既能可靠地在温和的酸或碱催化水解或醇解反应条件下除去，又不干扰亚胺基核糖醇基团中随后的化学反应，并能够在最终的脱保护步骤中除去。方法(L)：(2－和4－氨基吡咯并[3，2－d]－嘧啶和5－和7－氨基吡唑并[4，3－d]－嘧啶同类物)
用氯化剂使式(ⅩⅧ)化合物进行氯化，[其中R1为烷基或芳烷基－氧羰基基团或任意取代的烷基或芳基－羰基基团，R2或为烷羰基或任意取代的芳基羰基基团，X和Y独立地选自氢或卤原子，或式R2O基团，除了当X或Y之一为卤原子或式R2O基团时，另一个为氢原子，Z’为式R2O基团，或当X为式R2O基团时，Z’为氢或卤原子，式R2O基团或OQ或SQ，其中Q为任意取代的烷基、芳烷基或芳基基团，A为氮原子或次甲基基团，B或D之中的一个为羟基基团，另一个为氯、溴或氢原子]，然后按照下列方法之一，采用氮亲核取代氯原子：
(ⅰ)氨解，典型的是用液氨，浓氨水，或氨的醇溶液，例如甲醇；或
(ⅱ)向氯化物和1，2，4－***基团的吡啶溶液中加入二氯代磷酸4－氯代苯酯，首先将其转化为***衍生物，并用氢氧化铵使***基团和酯保护基团进行碱水解；
(ⅲ)与叠氮离子源进行反应，例如碱金属叠氮化物或四烷基铵叠氮化物，并还原生成的产物，典型的是用催化氢化反应；或者
(ⅳ)与烷基胺或芳烷基胺(例如甲基胺或苄基胺)的甲醇溶液进行反应。
这些条件的碱性需要足以使得O－酯基团可被断裂掉，然后再根据所用保护基团的需要，通过酸或碱催化的水解或醇解或催化氢解反应，除去任何残余的O－或N－保护基团。
合适的氯化试剂有亚硫酰氯－二甲基甲酰胺复合物[Ikehara和Uno，Chem．Pharm．Bull13(1965)221]，三苯基磷的四氯化碳溶液以及加有或不加1，8－二氮杂双环[5．4．0]十一－7－烯(DBU)的二氯甲烷[De Napoli等人，J．Chem．SocPerkin Trans 1(1995)15以及其中的参考文献]，磷酰氯[Imai，Chem．Pharm．Bull12(1964)1030]，或苯基磷酰氯和氢化钠。
在Ikehara和Uno，Chem．Pharm．Bull13(1965)221和Robins和Tripp，Biochemistry 12(1973)2179以及Marumoto等人，Chem．Pharm．Bull23(1975)1759和Hutchinson等人，J．Chem．Soc33(1990)1919中可以找到适合进行上述氨解或与烷基胺进行反应的条件。
在Lin等人，Tetrahedron 51(1995)1055中可以找到适合上述氯化物经过四唑衍生物向胺进行转化的条件。
在Chem．Pharm．Bull23(1975)759中可以找到适合与叠氮化离子反应并接着进行还原反应的条件。
通过式(Ⅰ)化合物选择性的N－烷基－或芳烷基－氧羰基化反应(典型地是与二叔丁基二碳酸酯，氯代甲酸苄酯或氯代甲酸甲酯和碱进行反应)或1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－D－核糖醇基团的N－酰化反应以及随后的O－酰化反应(典型地是使用乙酸酐或苯甲酰氯的吡啶溶液)，可以制备得到这样的式(ⅩⅧ)化合物。
比较可取的是，根据所采用的反应条件不同，式(Ⅰ)化合物在其吡咯或吡唑环上具有能够进行烷基－或芳烷基－氧羰基化或酰化反应的氮原子。这样所生成的衍生物，其中的吡咯或吡唑N－取代基应既能可靠地在温和的酸或碱催化水解或醇解反应条件下除去，又不干扰随后的化学反应，并能够在最终的脱保护步骤中除去。
上述氯化－胺化－脱保护系列反应也可以应用于式(ⅩⅦ)化合物[其中B为羟基基团，D为氢原子，Z’为氢或卤原子，或R2O基团，R2为三烷基甲硅烷氧基或烷基二芳基甲硅烷氧基基团，或任意取代的三芳基甲氧基、烷基羰基或芳基羰基基团，R和A同式(ⅩⅦ)化合物中第一次出现的一样]。在Ikehara等人，Chem．Pharm．Bull12(1964)267]中可以找到适合实施上述系列反应的条件。方法(M)：(2，4－二羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶和5，7－二羟基吡唑并[4，3－d]－嘧啶同类物)
通过下列方法进行氧化反应：
(ⅰ)使式(ⅩⅧ)化合物[其中R2为氢原子；X和Y独立地选自氢或卤原子，或羟基基团，除了当X和Y之中一个为卤原子或羟基基团时，另一个为氢原子；Z’为羟基基团，或当X为羟基基团时，Z’为氢或卤原子，羟基基团，或OQ；其中Q为任意取代的烷基、芳烷基或芳基基团，B为羟基基团或氨基基团；D为氢原子；R1和A的定义同式(ⅩⅧ)化合物中第一次出现的一样]与溴的水溶液进行反应；或者
(ⅱ)使式(ⅩⅧ)化合物[其中Z’为氢或卤原子，或R2O基团，或OQ；其中Q为任意取代的烷基、芳烷基或芳基基团；B为羟基基团或氨基基团；D为氢原子，并且R1，R2，X，Y和A的定义同式(ⅩⅧ)化合物中第一次出现的一样]与溴或高锰酸钾在水中或在水性溶剂混合物中(其中含有惰性的可与水混溶的溶剂，用来改善底物的溶解性)进行反应，得到相应的式(ⅩⅧ)化合物[但其中B和D现在为羟基基团]，然后根据所用保护基团的需要，通过酸或碱催化水解或醇解或催化氢解反应除去任何O-和N-保护基团。
通过选择性的N－烷基－或芳烷基－氧羰基化反应(典型地是使用二叔丁基二碳酸酯，氯代甲酸苄酯或氯代甲酸甲酯和碱)或1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－D－核糖醇基团的N－酰化反应以及随后的O－酰化反应(典型地是使用三氟乙酸酐和碱)，可以从式(Ⅰ)化合物[其中Z为Z’，并且X，Y，Z，A，B和D的定义与需要的式(Ⅷ)化合物的定义一致]制备得到上述步骤(ⅰ)需要的式(Ⅷ)化合物。然后通过O－酰化反应(典型地是使用乙酸酐或苯甲酰氯的吡啶溶液)将其转化为相应上述步骤(ⅱ)需要的式(Ⅷ)化合物。比较可取的是，根据所采用的反应条件不同，式(Ⅰ)化合物在其吡咯或吡唑环上具有能够进行烷基－或芳烷基－氧羰基化或酰化反应的氮原子。这样所生成的衍生物，其中的吡咯或吡唑N－取代基应既能可靠地在温和的酸或碱催化水解或醇解反应条件下除去，又不干扰随后的化学反应，并能够在最终的脱保护步骤中除去。方法(N)：(4－氨基－2－氯代吡咯并[3，2－d]－嘧啶和7－氨基－5－氯代吡唑并[4，3－d]－嘧啶同类物)
氯化式(Ⅷ)化合物[其中B和D为羟基基团，并且R1，R2，X，Y，Z’和A的定义与式(Ⅷ)化合物第一次出现的定义一致]，得到式(Ⅷ)化合物相应的二氯代衍生物[其中B和D为氯原子]，典型地是使用粒状(neat)氯化氧磷，然后通过氨解选择性地取代活性较大的氯取代基，典型地是使用处于压力弹中无水液态氨或氨的甲醇溶液，其可以同时断裂掉O－酯保护基。然后根据所用保护基团的需要，通过酸催化水解或醇解或催化氢解反应除去残余的N－保护基团，得到式(Ⅰ)化合物[其中B为氨基基团，并且D为氯原子]。
根据所用保护基团的需要，通过酸或碱催化水解或醇解或催化氢解反应除去O－和N－保护基团，可以将上述式(Ⅷ)化合物的二氯代衍生物转化为式(Ⅰ)化合物[其中B和D为氯原子]。比较可取的是，前述的式(Ⅷ)化合物或式(Ⅰ)化合物中的氯原子之中的一个非常活泼，选择用来进行脱保护的反应条件必须足够温和，以限制该原子被卷入不需要的反应当中。
在Upadhya等人，Nucleic AcidRes，14(1986)1747和Kitagawa等人，J．Med．Chem16(1973)1381中可以找到本方法关键步骤的合适反应条件。方法(O)：(从二氯化合物制备2－氯－4－羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶和5－氯－7－羟基吡唑并[4，3－d]-嘧啶同类物)
在惰性的可与水混溶的溶剂(例如二噁烷，以便根据需要提高溶解度)存在下，使作为方法(N)第一个反应中间体的式(Ⅷ)化合物[其中B和D为氯原子]进行水解，典型地是使用氢氧化钾或碳酸钠的水溶液。然后根据所用保护基团的需要，通过酸催化水解或醇解或催化氢解反应除去残余的N－保护基团，得到式(Ⅰ)化合物[其中B为羟基基团，并且D为氯原子]。方法(P)：(从氨基氯代化合物制备2－氯－4－羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶和5－氯－7－羟基吡唑并[4，3－d]－嘧啶同类物)
使作为方法(N)中氯化和氨解反应后中间体的式(Ⅷ)化合物[其中B为氨基基团，D为氯原子，R1为烷基或芳基氧羰基基团或任意取代的烷基或芳基羰基基团，R2为氢原子，Z为Z’，并且X，Y，Z和A的定义与式(Ⅰ)化合物第一次出现的一致]与亚硝酰氯进行反应，接着按照方法(N)中所述方法进行脱保护。在Sanghvi等人，核酸核苷酸10(1991)1417中可以找到典型的反应条件。方法(Q)：(4－卤代吡咯并[3，2－d]－嘧啶和7－卤代吡唑并[4，3－d]－嘧啶同类物)
按照制备卤代间型霉素同类物相同的方法[Watanabe等人，J．Antibiotic，Ser．A19(1966)93]，使式(Ⅷ)化合物[其中R1为叔丁氧羰基基团，B为羟基基团，D为氢原子，并且R2，X，Y，Z’和A的定义与式(Ⅷ)化合物第一次出现的一致]按照下列顺序进行反应：
(ⅰ)与五硫化磷一起在吡啶和水中加热回流，得到巯基衍生物；
(ⅱ)与碘甲烷进行反应，得到甲硫基衍生物；
(ⅳ)在单一醇或单一醇的水溶液中与碱进行反应，例如甲醇中的甲醇钠，以除去O－保护基团；并且
(ⅳ)与无水甲醇中的氯、溴和碘进行反应，得到卤代衍生物，然后与酸的水溶液(典型的是浓三氟乙酸溶液)进行反应，使之脱去N－保护。方法(R)：(吡咯并[3，2－d]－嘧啶和吡唑并[4，3－d]－嘧啶同类物)
使得自方法(L)第一步氯化反应的氯化物中间体，或得自方法(Q)步骤(ⅳ)氯化反应的氯化物中间体或方法(Q)得到的式(Ⅰ)化合物进行氢解断裂，典型的是采用Pd／C催化剂存在下的氢气进行该反应，可以任意地带有氧化镁，其作用是用来中和释放出来的酸，接着根据所用保护基团的需要，通过酸或碱催化水解或醇解反应断裂掉任何残余的O－或N－保护基团。方法(S)：(N－烷基化4－氨基吡咯并[3，2－d]－嘧啶和7－氨基吡唑并[4，3－d]－嘧啶同类物)
在一个密封的管或弹中，于无水甲醇中，使方法(Q)步骤(ⅲ)中得到的O－保护甲硫基衍生物与胺(例如甲胺)进行反应。然后通过与酸的水溶液反应除去N－保护基团，典型的是采用浓三氟乙酸溶液。此方法已经用来制备了N－烷基化间型霉素同类物[Watanabe等人，J．Antibiotic，Ser．A19(1966)93]；或使式(Ⅰ)化合物[其中B和D均为氨基基团]与1，2－双[(二甲基氨基)亚甲基]肼及三甲基甲硅烷基氯化物在甲苯中进行反应，将氨基基团转化为1，3，4－***基团，水解断裂掉O－甲硅烷基基团(例如用乙酸的乙腈水溶液)，在极性溶剂(例如水或吡啶水溶液)中用烷基胺取代1，3，4－***基团。此方法已经用来制备了N，N－二甲基－间型霉素A[Miles等人，J．Am．Chem．Soc117(1995)5951]；或者使式(Ⅰ)化合物[其中B和D均为氨基基团]与过量的烷基胺一起加热，进行一个交换反应。此方法已经用来制备了N－烷基－间型霉素A衍生物[Hecht等人，J．Biol．Chem250(1975)7343]。方法(T)：(2－氯代－4－羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶和5－氯代－7－羟基吡唑并[4，3－d]－嘧啶同类物)
利用2，4－二羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶衍生物上4－羟基基团以及5，7－二羟基吡唑并[4，3－d]－嘧啶衍生物上7－羟基基团具有较高活性的优势，使式(ⅩⅧ)二羟基化合物[其中B和D均为羟基基团，R1，R2，X，Y，Z’和A的定义与式(Ⅷ)化合物第一次出现的一致]进行选择性的氯化反应，接着按照方法(N)所述除去保护基团。方法(U)：(2－卤代－，4－卤代－以及2，4－二卤代吡咯并[3，2－d]－嘧啶和5－卤代－，7－卤代－以及5，7－二卤代吡唑并[4，3－d]－嘧啶同类物)
使式(ⅩⅧ)化合物[其中B和D之中一个为氨基基团，另一个独立地选自氨基基团或卤素或氢原子，并且R1，R2，X，Y，Z’和A的定义与式(Ⅷ)化合物第一次出现的一致]进行重氮化反应，随后进行下列反应之一：
(ⅰ)在卤离子源的存在下，与硝酸(由亚硝酸钠就地制备)进行反应。为了用氟原子取代氨基基团，可以采用浓氟硼酸水溶液[Gerster和Robins，J．Org．Chem31(1966)3258；Montgomery和Hewson，J．Org．Chem．33(1968)432]或在低温下(例如－25℃至－30℃)采用氟氢酸和吡啶[Secrist等人，J．Med．Chem．29(1986)2069]兼作矿物酸和氟离子源；或者
(ⅱ)在非水溶剂中并在卤离子源的存在下，与烷基亚硝酸盐(酯)进行反应，典型的是采用叔丁基或正丁基亚硝酸盐(酯)。为了用氯原子取代一个氨基基团，可以在氯仿溶剂中使用氯和氯化亚铜的组合，或三氯化锑[Niiya等人，J．Med．Chem．35(1992)4557及其中的参考文献]；或者
(ⅲ)在非水溶剂中，与亚硝酸烷基酯(盐)进行反应，典型的是采用叔丁基或正丁基亚硝酸酯(盐)，并用光卤代反应偶联。为了用氯、溴或碘原子取代氨基基团，可以使用四氯化碳、溴仿或二碘甲烷作为试剂和溶剂，并且采用白炽灯光源(例如200W钨灯)进行光卤代反应[Ford等人，J．Med．Chem．38(1995)1189；Driscoll等人，J．Med．Chem．39(1996)1619；及其中的参考文献]；得到相应的式(Ⅷ)化合物[其中B为卤原子，且D为卤原子或为氨基基团]，接着按照方法(N)所述除去保护基团。
如果羟基基团首先转化为硫醇基团的话，相应的式(Ⅷ)起始化合物[其中B或D之中的一个为氨基基团，另一个为羟基基团]也可以实施同样的转化[Gerster和Robins，J．Org．Chem31(1966)3258]。该转化可通过于回流的吡啶和水中与五硫化磷反应得以实现(参见方法(Q))。方法(Ⅴ)：(4－碘代吡咯并[3，2－d]－嘧啶和7－碘代吡唑并[4，3－d]－嘧啶同类物)
按照Gerster等人，J．Org．Chem28(1963)945中所述的方法，用浓盐酸水溶液处理相应的式(Ⅰ)氯代同类物[其中B为氯原子]。方法(W)：(5’－脱氧－5’－卤代以及5’－硫代同类物)
使式(ⅩⅧ)化合物[其中R2为氢原子；X和Y独立地选自氢或卤原子，或羟基基团，除了当X和Y之中一个为卤原子或羟基基团时，另一个为氢原子；Z为羟基基团；并且R1，A，B和D的定义同式(ⅩⅧ)化合物中第一次出现的一样]与下列化合物进行反应：
(ⅰ)与三取代膦及二硫化物进行反应，例如三丁基膦和二苯基二硫化物；或者
(ⅱ)与三取代膦(例如三苯基膦)和四溴化碳进行反应；或者
(ⅲ)与亚硫酰氯或溴进行反应。
然后根据所用保护基团的需要，通过酸或碱催化水解或醇解反应或催化氢解去除N－保护基团。
在Chern等人，J．Med．Chem．36(1993)1024和Chu等人，核酸核苷酸5(1986)185中可以找到适合用硫基团或卤原子进行5’－羟基基团选择性取代的反应条件。方法(X)：(5’－二氧磷基吡唑并[3，2－d]－嘧啶和5’－二氧磷基吡唑并[4，3－d]－嘧啶同类物)
使式(ⅩⅦ)化合物[R，Z’，A，B和D的定义同第一次出现的一样]与下列化合物进行反应：
(ⅰ)与亚磷酸酸化试剂进行反应，例如N，N－二乙基－1，5－二氢－2，4，3－苯并二氧杂phosphepin－3－胺，然后将亚磷酸酯氧化为磷酸酯，例如用3－氯代过苯甲酸；或者
(ⅱ)与磷酰化试剂进行反应，例如磷酰氯或二苄基氯代磷酸酯，并通过氢解及按照方法(A)所述在酸性条件下进行处理，除去保护基团。方法(Y)：(3－氨基吡咯－2－羧酸及4－氨基－1H－吡唑－5－羧酸同类物)
根据所用O－和N－保护基团的需要，通过酸或碱催化水解或醇解反应或催化氢解使式(Ⅴ)化合物(同第一次出现所定义的)或由方法(F)步骤(ⅵ)制得的中间体4－氨基－3－取代－1H－吡唑－5－羧酸乙酯进行彻底的脱保护。方法(Z)：(3－氨基－2－氰基吡咯及4－氨基－5－氰基－1H－吡唑)
根据所用O－和N－保护基团的需要，通过酸或碱催化水解或醇解反应或催化氢解使式(Ⅹ)化合物(同第一次出现所定义的)或由方法(G)步骤(ⅷ)制得的中间体4－氨基－5－氰基吡唑进行彻底的脱保护。方法(AA)：(3－氨基吡咯－2－羧酰胺和4－氨基－1H－吡唑－5－羧酰胺同类物)
将式(Ⅹ)化合物(同第一次出现所定义的)的氰基基团或由方法(G)步骤(ⅷ)制得的4－氨基－5－氰基－1H－吡唑中间体转化为羧酰氨基基团，常规的是在二甲基亚砜中与过氧化氢和碳酸钾进行反应，然后根据所用O－和N－保护基团的需要，通过酸或碱催化水解或醇解反应或催化氢解使生成的产物彻底脱保护。方法(AB)：(3－(硫代)氨基甲酰基吡咯和4－(硫代)氨基甲酰基－1H－吡唑)
使式(Ⅴ)或式(Ⅹ)化合物(同第一次出现所定义的)或由方法(AA)制得的保护的羧酰氨基中间体或由方法(F)步骤(ⅵ)制得的4－氨基－3－取代－1H－吡唑－5－羧酸乙酯与式RNCO或RNCS的异氰酸酯或异硫代氰酸酯进行反应，其中R的定义同式(Ⅰ)化合物，然后根据所用O－和N－保护基团的需要，通过酸或碱催化水解或醇解反应或催化氢解使生成的产物彻底脱保护。方法(AC)：(3－氨基吡咯－2－羧酸酯和4－氨基－1H－吡唑－5羧酸酯同类物)
使式(Ⅰa)化合物的羧酸基团进行转化，使其中的E从CO2H转化为酯，该转化可以通过许多已知的酯化反应来实现。常规的，使羧酸在醇的酸性溶液(例如醇性盐酸)中进行反应，可以制备得到酯。方法(AD)：(3－酰基氨基吡咯和4－酰基氨基－1H－吡唑)
在碱(例如三乙胺，碳酸钾或吡啶)存在下，使式(Ⅴ)或式(Ⅹ)化合物(同第一次出现所定义的)或由方法(F)步骤(ⅵ)制得的4－氨基－3－取代－1H－吡唑－5－羧酸乙酯中间体与酰化剂进行反应，例如酰氯(如苯甲酰氯)，酸酐(如乙酸酐)，然后根据所用O－和N－保护基团的需要，通过酸或碱催化水解或醇解反应或催化氢解使生成的产物彻底脱保护。方法(AE)：(N－单－和N， N－二取代的3－氨基吡咯－2－羧酰胺和4－氨基－1H－吡唑－5－羧酰胺同类物)
使式(Ⅰa)化合物的羧酸基团进行转化，使其中的E从CO2H转化为酰胺，常规地，用碳化二亚胺(例如N，N－二环己基碳化二亚胺)诱导羧酸与伯或仲胺进行缩合，可以制备得到酰胺。方法(AF)：(N－单－和N，N－二取代的3－氨基吡咯－2－羧酰胺和4－氨基－1H－吡唑－5－羧酰胺同类物)
使式(Ⅴ)化合物(同第一次出现所定义的)或由方法(F)步骤(ⅵ)制得的4－氨基－3－取代－1H－吡唑－5－羧酸乙酯中间体与伯或仲胺进行缩合，然后根据所用O－和N－保护基团的需要，通过酸或碱催化水解或醇解反应或催化氢解使生成的产物彻底脱保护。
比较可取的是，在方法(H)，(I)，(J)，(K)和(W)中所列出的方法也可以等价地应用于式(Ⅰa)化合物的合成，在1，4－亚氨基－戊五醇基团处得到类似的不同产物。方法(AG)：(酰氧基甲基酯前药)
在碱存在下(常规的是采用碳酸氢钠水溶液)，使式(Ⅰ)或式(Ⅰa)化合物的5－磷酸酯与氯代甲酸苄酯进行反应，得到N－苄氧羰基衍生物。在碱存在下，使此衍生物与式RCO2CH2X(其中R为烷基基团，例如甲基、乙基、丙基或叔丁基，并且X为氯、溴或碘)酰氧基甲基卤化物进行反应，得到5－磷酸酯双(酰氧基甲基)酯。在Kruppa等人，Bioorg．Med．Chem．Lett7(1997)945中可以找到在二甲基甲酰胺中，采用乙酰氧基甲基溴化物和二异丙基乙胺进行乙氧基甲基酯制备的合适的反应条件。
当需要时，例如当前述的N－苄氧基羰基衍生物在反应溶剂中的溶解度不够时，可以按照Kang等人，核苷核苷酸17(1998)1089中所述的方法，在与酰氧基甲基卤化物进行反应之前(有四丁基溴化铵存在)，首先在甲醇中与三丁基锡甲氧化物进行反应，将该衍生物转化为相应的甲锡烷基中间体，例如双(三丁基甲锡烷基)磷酸酯衍生物。
只要不使用强酸或强碱条件即可去除保护基团的话，利用O－和／或N－保护的式(Ⅰ)或(Ⅰa)(如有所需)化合物的衍生物来实现这类5－磷酸基团向相应的双(酰氧基甲基)酯的转化是比较可取的。典型地，这需要采用脱保护水解条件，因此O－和O－苄基，－苄氧基甲基或－苄氧基羰基基团是可取的。
本发明化合物也可以采用那些本领域内技术人员显而易见的其它方法进行制备。
本发明化合物既可以采用其游离碱的形式，也可以采用其盐类形式。术语“制药学上可接受的盐类”是指衍生自无机或有机酸的非毒性盐，例如包括衍生自盐酸、硫酸、磷酸、乙酸、乳酸、富马酸、琥珀酸、酒石酸、葡糖酸、柠檬酸、甲磺酸及对甲苯磺酸的盐类。
本发明化合物是嘌呤核苷磷酸化酶、核苷水解酶和／或磷酸核糖基转移酶的强抑制剂。例如，式Ⅰb化合物和式Ⅰc化合物对于小牛脾脏PNP以及人类红细胞PNP的IC50值均小于0．1nM。下列实例进一步提供了本抑制剂有效性的详细情况。采用肌苷作为嘌呤底物，利用偶联的黄嘌呤氧化酶方法可以进行嘌呤核苷磷酸化酶抑制活性的测定(H．M．Kalckar，J．Biol．Chem．167(1947)429－443)。采用肌苷5’－磷酸酯作为嘌呤底物，用同样的分析方法，可以进行嘌呤磷酸核糖基转移酶活性的测定。按照Merkler等人的方法(Biochemistry 29(1990)8358－64)可以测定慢发作抑制剂的结合情况。按照PCT国际专利申请WO97／31008及其中所列的参考文献中所公开的方法，可以测定寄生虫核苷水解酶的活性。
由于血中及哺乳动物组织中PNP活性相对较高，因此本发明抑制剂比先有技术得到的产物具有更重要的优势。如前所述，成人所需的9－(3－吡啶基甲基)－9－脱氮杂胍的一次剂量为3．5g。本发明的优势在于所需要的化合物的量非常低，其可以降低费用并减少不需要的副反应。
根据患者的情况及所要治疗的失调程度，活性成分的给予量可以在一个很宽的范围内进行变化。成人的典型剂量范围为1－1000mg，优选的是0．1－100mg。活性化合物可与常规的制药载体一起给药，并可以进行口服、注射或局部给药。
优选的给药途径是口服给药。对于这一途径而言，可将化合物配制成固体或液体制剂，例如片剂、胶囊、粉末剂、溶液、悬浮液和分散剂。这类制剂如同其它未在这里列出的剂型一样是本领域内熟知的。在本发明化合物的优选实施例中，采用常规的片剂基质(例如乳糖、蔗糖以及玉米淀粉)及粘合剂、崩解剂和润滑剂进行制片。这些赋形剂是本领域内已知的。粘合剂的实例有玉米淀粉和明胶，崩解剂的实例有土豆淀粉或藻酸，润滑剂有硬脂酸镁。还可以包括增色剂和香味剂等其它成分。
本发明中所用的液体制剂包括载体，例如水和乙醇，其可带有或不带其它试剂，例如制药学上可接受的表面活性剂或悬浮剂。
本发明化合物还可以溶于生理上可接受的稀释剂(例如水或盐水)中，通过注射给药。稀释剂中可以包含一或多种其它成分，例如乙醇，丙二醇，油或制药学上可接受的表面活性剂。
本发明化合物可以应用于皮肤或粘膜。它们可作为成分存在于霜剂中，优选地包括制药学上可接受的溶剂，用以帮助药物通过皮肤或粘膜。合适的霜剂基质对于本领域内的专家来说是熟知的。
本发明化合物可以借助缓释***进行给药，例如可将它们混入含有来自天然或合成聚合物的固体或多孔或基质形式的缓慢溶解的片剂或胶囊中。
实施例
下列实施例将进一步说明本发明的具体操作。溶剂的比例为体积比。实施例1－(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(4－羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－D－核糖醇的制备
实施例1．1
将5－O－叔丁基二甲基甲硅烷－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－2，3－O－异亚丙基D－核糖醇(Furneaux等人，Tetrahedron 53(1997)以及其中的参考文献)(2．0g)的戊烷溶液(40ml)与N－氯代琥珀酰亚胺(1．2g)一起搅拌1h。去除固体和溶剂，将残余物溶于干燥的四氢呋喃(40ml)中，并冷却至－78℃。向其中慢慢滴加四甲基哌啶锂溶液(25ml，溶于0．4M的四氢呋喃中)。－78℃下，经套管将生成的溶液加到锂化(lithiated)的乙腈溶液中[其制备方法如下：于－78℃下，将乙腈(2．08ml，40mmol)滴加到丁基锂(29．8g，41．8mmol)的无水四氢呋喃(50ml)溶液中，搅拌45分钟，然后加入四甲基哌啶(0．67ml，4mmol)]。混合物搅拌15分钟，用水终止反应，并在水和氯仿之间在进行分配。有机层干燥浓缩，层析得到(1S)－5－O－叔丁基二甲基甲硅烷－1－C－氰甲基－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－2，3－O－异亚丙基D－核糖醇(1)(0．83g)。
实施例1．2
将含有二叔丁基二碳酸酯(0．59g)的实施例1．1中得到产物(0．80g)的二氯甲烷溶液(20ml)在室温下搅拌16h。浓缩溶液，层析得到(1S)－N－叔丁氧羰基－5－O－叔丁基二甲基甲硅烷－1－C－氰甲基－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－2，3－O－异亚丙基D－核糖醇(2)(0．89g)。
实施例1．3
向实施例1．2产物(0．88g)的N，N－二甲基甲酰胺(5ml)溶液中加入叔丁氧双(二甲胺)甲烷(1．5ml)，将溶液于65－70℃下加热1h。加入甲苯(20ml)，溶液用水洗涤3次，干燥并浓缩至干。室温下将残余物溶于四氢呋喃／乙酸／水(1∶1∶1 v／v／v，40ml)中。1．5h后，加入氯仿(50ml)，混合物用水(2次)及碳酸氢钠溶液洗涤，干燥并蒸发至干。残余物层析，得到(1S)－N－叔丁氧羰基－5－O－叔丁基二甲基甲硅烷－1－C－(1－氰基－2－羟乙烯基)－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－2，3－O－异亚丙基－D－核糖醇(3)(0．68g)。
实施例1．4
将甘氨酸盐酸盐乙酯(0．76g)以及乙酸钠(0．9g)加到搅拌着的实施例1．3产物(0．51g)的甲醇(10ml)溶液中。混合物在室温下搅拌16h并浓缩至干。残余物层析，得到(1S)－N－叔丁氧羰基－5－O－叔丁基二甲基甲硅烷－1－C－[1－氰基－2－乙氧羰基甲基氨基)乙烯基]－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－2，3－O－异亚丙基－D－核糖醇(4)(0．48g)，其为非对映体混合物。
实施例1．5
含有1，8－二氮杂双环[5．4．0]十一－7－烯(1．5ml)和氯代甲酸苄酯(0．74ml)的实施例1．4产物(0．28g)的无水二氯甲烷溶液(12ml)加热回流8h，冷却并用稀盐酸、碳酸氢钠洗涤，干燥并浓缩，残余物层析得到(1S)－1－C－[3－氨基－1－N－苄氧羰基－2－乙基羰基－4－吡咯基]－N－叔丁氧羰基－5－O－叔丁基二甲基甲硅烷－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－2，3－O－异亚丙基－D－核糖醇(5)(0．22g)。
实施例1．6
在常压氢气下，将实施例1．5产物(0．22g)的乙醇(10ml)溶液与10％Pd／C(50mg)进行搅拌3h。去除固体和溶剂，将残余物溶于含有甲脒乙酸盐(0．40g)乙醇(10ml)中，溶液加热回流8h。蒸除溶剂，残余物层析得到(1S)－N－叔丁氧羰基－5－O－叔丁基二甲基甲硅烷－1，4－二脱氧－1－C－[4－羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基]－1，4－亚氨基－2，3－O－异亚丙基－D－核糖醇(6)(156mg)。
实施例1．7
使实施例1．6产物(66mg)的三氟乙酸(3ml)溶液放置过夜。浓缩溶液，残余物用氯仿洗涤2次并蒸发。将残余物溶于甲醇中，用大孔树脂A21碱性树脂处理直至溶液的pH达到7左右。去除固体和溶剂，将残余物溶于水中，用过量的HCl处理，然后冷冻干燥。残余物用乙醇研制，得到(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(4－羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－D－核糖醇(7)盐酸盐(25mg)，其为白色固体。用90％乙醇重结晶，结晶固体变暗，但在300℃下不熔。
(相对于33．2ppm处的内标丙酮)58．1(C－1′)，61．4(C－5′)，68．8(C－4′)，73．3(C－3′)，76．7(C－2′)，107．5(q)，121．4(q)，133．5(C－2)，135．0(q)，148．0(C－6)和155．4(q)；1H (相对于2．20ppm处的内标丙酮)，3．90(H－4′)，3．96(m，H－5′，5″)，4．44(dd，H－3′，J2′，3′ 5．4Hz，J3′，4′3．2 Hz)，4．71(dd，J1′，2′9．0Hz，H－2′)，5．00(d，H－1′)，8．00(s，H－6)和9．04(s，H－2)。
Figure 9881148900471
实施例2－(1S)－1－C－(2－氨基4－羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－D－核糖醇的制备
实施例2．1
在常压氢气下，将实施例1．5中的(1S)－1－C－(3－氨基－1－N－苄氧羰基－2－乙氧羰基－4－吡咯基]－N－叔丁氧羰基－5－O－叔丁基二甲基甲硅烷基－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－2，3－O－异亚丙基－D－核糖醇产物(0．87g)的乙醇溶液与10％Pd／C(100mg)进行搅拌1．5h。去除固体和溶剂，得到残余物(0．61g)。0℃下，向此残余物的一部分(0．12g)的二氯甲烷溶液(10ml)中加入苯甲酰基异硫氰酸酯的二氯甲烷溶液(31ml溶于1ml中)。0．5h后，将溶液升温至室温，加入1，8－二氮杂双环[5．4．0]十一－7－烯(80ml)和碘甲烷(100ml)。再过0．5h，将反应溶液直接上硅胶柱层析并进行洗脱，得到0．16g(1S)－1－C－(3－(N－苯甲酰基－S－甲基异硫代氨甲酰基)氨基－2－乙氧羰基－4－吡咯基]－N－叔丁氧羰基－5－O－叔丁基二甲基甲硅烷基－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－2，3－O－异亚丙基－D－核糖醇。
实施例2．2
将此S－甲基异硫代氨甲酰基氨基衍生物(0．20g)的氨气饱和甲醇溶液置于密封的管子中，在95℃下加热16h。去除溶剂，残余物进行层析，得到(1S)－1－C－(2－氨基－4－羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基]－N－叔丁氧羰基－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－2，3－O－异亚丙基－D－核糖醇。
实施例2．3
使此保护的亚氨基核糖醇(64mg)的三氟乙酸溶液于室温下放置16h。除去溶剂，将残余物溶于甲醇水溶液(1∶1)中，用大孔树脂A21碱性树脂处理，直至溶液的pH值达到7左右。去除固体和溶剂，用过量的HCl处理残余物的水溶液，浓缩至干。乙醇研制，得到(1S)－1－C－(2－氨基－4－羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基]－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－D－核糖醇盐酸盐(24mg)，其在260℃时颜色变暗，但300℃以下不熔化。NMR(300 MHz，D2O带有DCl，δppm)：13C(相对于33．1ppm处的内标丙酮)
58．0(C－1′)，61．4(C－5′)，68．6(C－4′)，73．3(C－3′)，76．3(C－2′)，105．2(q)，114．8(q)，132．1(C－6)，135．3(q)，153．4(q)和156．4(q)；1H(相对于2．20ppm处的内标丙酮)
3．87(m，H－4′)，3．94(m，H－5′，5″)，4．40(dd，J2′，3′5．0 Hz，J3′，4′3．2 Hz，H－3′)，4．65(dd，J1′，2′9．1 Hz，H－2，)，4．86(d，H－1，)和7．71(s，H－6)。
实施例3－24
按照通用描述中公开的方法可以制备下列化合物：3．用方法(H)，从实施例1产物可以制备(1R)－1－C－(4－羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－1，2，4－三脱氧－D－赤型－戊五醇。4．用方法(K)，从实施例1产物可以制备(1S)－1－C－(4－羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－1，4，5－三脱氧－D－核糖醇。5．用方法(K)，从实施例1产物可以制备(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(4－羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－5－甲硫基－D－核糖醇。6．用方法(M)，从实施例1或2产物可以制备(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(2，4－二羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－D－核糖醇。7．用方法(H)，从实施例6产物可以制备(1R)－1－C－(2，4－二羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－1，2，4－三脱氧－D－赤型－戊五醇。8．用方法(K)，从实施例6产物可以制备(1S)－1－C－(2，4－二羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－1，4，5－三脱氧－D－核糖醇。9．用方法(K)，从实施例6产物可以制备(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(2，4－二羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－5－甲硫基－D－核糖醇。10．用方法(H)，从实施例2产物可以制备(1R)－1－C－(2－氨基－4－羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－1，2，4－三脱氧－D－赤型－戊五醇。11．用方法(K)，从实施例2产物可以制备(1S)－1－C－(2－氨基－4－羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基1，4，5－三脱氧－D－核糖醇。12．用方法(K)，从实施例2产物可以制备(1S)－1－C－(2－氨基－4－羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－5－甲硫基－D－核糖醇。13．用方法(D)、(E)和(F)，可以制备(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(7－羟基吡唑并[4，3－d]嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－D－核糖醇14．用方法(H)，从实施例13产物可以制备(1R)－1－C－(7－羟基吡唑并[4，3－d]嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－1，2，4－三脱氧－D－赤型－戊五醇。15．用方法(K)，从实施例13产物可以制备(1S)－1－C－(7－羟基吡唑并[4，3－d]嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－1，4，5－三脱氧－D－核糖醇。16．用方法(K)，从实施例13产物可以制备(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(7－羟基吡唑并[4，3－d]嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－5－甲硫基－D－核糖醇。17．用方法(M)，从实施例13产物可以制备(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(5，7－二羟基吡唑并[4，3－d]嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－D－核糖醇。18．用方法(H)，从实施例17产物可以制备(1R)－1－C－(5，7－二羟基吡唑并[4，3－d]－嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－1，2，4－三脱氧－D－赤型－戊五醇。19．用方法(K)，从实施例17产物可以制备(1S)－1－C－(5，7－二羟基吡唑并[4，3－d]－嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－1，4，5－三脱氧－D－核糖醇。20．用方法(K)，从实施例17产物可以制备(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(5，7－二羟基吡唑并[4，3－d]嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－5－甲硫基－D－核糖醇。21．用方法(D)(其中式Ⅺb或式Ⅺc被相应的化合物取代，其中的5－位上的氢原子被保护氨基取代)的改进，可以制备(1S)－1－C－(5－氨基－7－羟基吡唑并[4，3－d]－嘧啶－3－基)－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－D－核糖醇。22．用方法(H)，从实施例21产物可以制备(1R)－1－C－(5－氨基－7－羟基吡唑并[4，3－d]－嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－1，2，4－三脱氧－赤型－戊五醇。23．用方法(K)，从实施例21产物可以制备(1S)－1－C－(5－氨基－7－羟基吡唑并[4，3－d]－嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－1，4，5－三脱氧－D－核糖醇。24．用方法(K)，从实施例21产物可以制备(1S)－1－C－(5－氨基－7－羟基吡唑并[4，3－d]－嘧啶－3－基)－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－5－甲硫基－D－核糖醇。
实施例25－酶抑制结果
实施例25．1
嘌呤核苷磷酸化酶的抑制。为了评价实施例1和2(相应于化合物Ⅰb和Ⅰc)产物作为嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂的有效性，进行了酶分析。该分析在磷酸缓冲液的存在下，采用带有肌苷的人类RBC和小牛的脾脏嘌呤核苷磷酸化酶(ex Sigma，纯度为90％)作为底物，用黄嘌呤氧化酶偶联反应对释放的次黄嘌呤进行检测。
材料。肌苷来自Sigma。黄嘌呤氧化酶(EC 1．1．3．22，酪乳)，人类红细胞(冷冻干燥粉末)以及牛脾脏(存在于3．2M硫酸铵中)嘌呤核苷磷酸化酶(EC 2．4．2．1)购自Sigma。粉末状的人类嘌呤核苷磷酸化酶在100mM的磷酸钠缓冲液(pH 7．4)中进行重组，并迅速冷冻储存于－80℃下。用Uvikon 933双束紫外／可见分光光度计(Kontron Instruments，San Diego，CA)进行动力学实验。
蛋白浓度。在定量紫外吸收的基础上，于280nm处，采用E1cm1％=9．64[Stoelkler等人，Biochemistry，32(1978)278]和32，000的单体分子量[Williams等人，核酸研究，12(1984)5779]，对两种同功酶的蛋白浓度进行了测定。
酶分析。采用偶联的黄嘌呤氧化方法[Kalckar，J．Biol．Chem167(1947)429；Kim等人，J．Biol．Chem243(1968)1763]，借助分光光度计对酶进行了分析。在293nm处检测尿酸的形成。在293nm处，当肌苷完全转化为尿酸和核糖1－磷酸酯时，40mM的肌苷溶液给出了0．523单位的吸收变化。除非特别说明，标准的分析反应含有：肌苷(500μM)，磷酸钾(50mM，pH7．5)；黄嘌呤氧化酶(0．06单位)以及终体积为1．0mL的嘌呤核苷磷酸化酶。
One－Third－the－Sites抑制。将含有不同量化合物Ⅰb的6．7nM牛嘌呤核苷磷酸化酶反应混合物在30℃下预培养1小时。加入底物(40μM肌苷，Km值的3倍)启动反应，并在30℃下进行分析。含有0．6nM抑制剂([化合物Ⅰb]／[嘌呤核苷磷酸化酶]的浓度比为0．09)的反应显示出29％的抑制，含有1nM抑制剂([化合物Ⅰb]／[嘌呤核苷磷酸化酶]的浓度比为0．15)的反应显示出44％的抑制，而含有3nM抑制剂([化合物Ⅰb]／[嘌呤核苷磷酸化酶]的浓度比为0．44)的反应显示出96％的速率抑制，含有6nM抑制剂([化合物Ⅰb]／[嘌呤核苷磷酸化酶]的比为87％)的反应显示出99％的抑制。这些相互作用显示于图1。
已知嘌呤核苷磷酸化酶为一个高三聚体，其在每三个蛋白质亚单位上有一个催化部位[Stoelkler等人，Biochemistry 32，(1978)278]。当酶亚单位的浓度为6．7nM，大约在1．1nM处出现50％的嘌呤核苷磷酸化酶的抑制。这一结果证明化合物Ⅰb结合紧密，化合物Ⅰb与三聚酶上一个部位的结合导致了完全的抑制。
嘌呤核苷磷酸化酶与化合物Ⅰb复合物的活性恢复。使嘌呤核苷磷酸化酶(6．7μM)和足够量的可以抑制96％嘌呤核苷磷酸化酶活性的化合物Ⅰb(3μM)在30℃下培养1小时。将此溶液的等分试样在含有黄嘌呤氧化酶(0．06单位)的500μM肌苷缓冲液中稀释1000倍。检测尿酸的生成，其进展曲线(progress curve)与图2的动力学模型相配合。
将被抑制的嘌呤核苷磷酸化酶在没有抑制剂的情况下稀释成大体积的溶液提供了化合物Ⅰb从被抑制的嘌呤核苷磷酸化酶中释放的速率。在图2的实验条件下，获得新的酶－抑制剂平衡时间为5000秒，这是一个慢速、紧密结合抑制剂的指征[Morrison和Walsh，AdvancesEnzymol．61(1988)201]。速率常数k6是在这些实验条件下复合物解离的表观第一级(first－order)速率常数，在此实验中为2．9×10－4秒－1。
抑制机理。慢速、紧密结合抑制剂通常遵循下列动力学机理[Morrison和Walsh，Advances Enzymol．61(1988)201]：
Figure 9881148900541
其中EI为迅速形成的最初嘌呤核苷磷酸化酶(E)与化合物Ⅰb(Ⅰ)的碰撞复合物，其慢慢异构化成紧密的复合物EI*。下列集合速率方程1描述了产物的形成曲线：P=vst+(v0－vs)(1－e－kt)／k   1其中P为产物次黄嘌呤(在本分析***中以尿酸来观察)的量，t为时间，v0为起始速率，vs为最终稳定状态速率，并且k为方程2给出的总(所观察到的)速率常数：k=k6+k5[(I／ki)／(1+(s／km)+(I／ki))]    2其中km为嘌呤核苷磷酸化酶的Michaelis复合物，S为肌苷浓度，Ⅰ为化合物Ⅰb的浓度，并且ki如下所述。
紧密结合复合物的形成速率为k5，其解离速率为k6。标准竞争抑制(其影响v0)的抑制常数ki以及总抑制常数ki*(其影响vs)如下定义：
Figure 9881148900542
ki*测定。在抑制剂的浓度范围内测定反应的ki*，绘制vs对[I]的曲线，将此曲线与竞争性的抑制方程3相配合：vs=VmaxS／[km(1+(I／ki*)+S]    3其中Vmax为嘌呤核苷磷酸化酶的非抑制反应速率，其余的术语如上所述。此分析结果显示了化合物Ⅰb(图3)2．5+0．2×10－11M(25±2pM)的总有效抑制常数(ki*)。
ki，k5和k6的近似值。直接从v0和上述的竞争性抑制方程来计算化合物Ib的ki是比较困难的，因为作为化合物Ⅰ的作用，在可以引起慢发作之后完全抑制的抑制剂浓度下，v0的变化非常小。这一结果使得最初的解离常数ki比平衡解离常数ki*要大得多这一结论得以充分的承认。
使用方程2可以从k(从与方程1相配合的曲线上得到它的值)来计算k5和ki的近似值。根据经验，k6＜＜k5[(I／ki)／1+(A／km)+(I／ki)]，因此可以重组方程2以使1／k对1／[I]的双重倒数绘图(double reciprocal plot)给出一条直线，其中Y交点=I／k5且X交点=(I／k5)／[(ki／k5)*(A／km))]。将这些值带入方程2，得到k6的近似值。图4证明了慢发作、紧密结合的抑制，该抑制发生在有500μM肌苷存在下，小浓度的酶(0．8nM)与200nM化合物Ⅰb发生竞争时。在这些条件下，图4中抑制发作的表观第一级速率常数为26×10－4秒－1。
图4中的这些结果表明，即使在肌苷浓度超过人体血清或组织中现存浓度100倍的情况下，在慢发作抑制发生几分钟后，化合物Ⅰb也可以给出99％的酶抑制率。在图1－4所显示类型的实验分析基础上，带有化合物Ⅰb的牛嘌呤核苷磷酸化酶的实验估计解离常数和速率为：
km=15μM
ki=19±4μM
ki*=25±2μM
k5=1．4±0．2×10-2秒－1
k6=1．8±0．5×10－5秒－1
人类嘌呤核苷磷酸化酶的抑制。按照与上述处理牛嘌呤核苷磷酸化酶相似的方法，对来自人类红细胞中的嘌呤核苷磷酸化酶(PNP)进行研究。人及牛的PNP与化合物Ⅰb之间相互作用的总抑制常数ki*值为：
酶         ki*，化合物Ⅰb    ki*，化合物Ⅰc
人类PNP    72±26pM          29±8pM
牛PNP      23±5pM           30+6pM
对于人类酶来说，化合物Ⅰc比化合物Ⅰb更有效，但对于牛酶来说，化合物Ⅰb稍微更有效一些。在抑制以上两种PNP酶时，化合物Ⅰb和Ⅰc比起先前报道的化合物来说更有效。
化合物Ⅰb和Ⅰc可作为嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂。抑制剂通常通过与每一个催化部位结合，在活的有机体内引起功能性抑制而发挥作用。上述One－Third－the－Sites抑制以及慢发作紧密结合抑制表明，化合物Ⅰb和Ⅰc是很强的嘌呤核苷磷酸化酶抑制剂，其可以在过量的底物存在下发挥作用。
在Merkler，D．JBrenowitz，M和Schramm，V．L．Biochemistry 29(1990)8358－8364中详细地描述了动力学常数的测定方法。
实施例25．2
作为PNP抑制剂的化合物Ⅰb的口服利用率和体内效果。将化合物Ⅰb(27μg)10－7mole的单口服剂量随食物给予年轻成年雄性小鼠。按照图5所给出的时间从尾部收集血液样品。用含有0．2％***(Triton)X－100(最终浓度为0．15％)的生理盐水稀释血液样品，使血细胞溶解并使酶释放。如上所述，用作为底物的肌苷和磷酸酯测量PNP的活性。结果表明化合物Ⅰb被血液吸收进而被血细胞吸收，引起PNP抑制，其半衰期(t1／2)为14分钟。在此后的一段时间内采集血样，分析PNP活性以测定化合物Ⅰb作为血液PNP抑制剂的生物t1／2。血液PNP活性复原的t1／2为100小时。这些结果表明，化合物Ⅰb是可以口服利用的，并且具有较长的生物有效期。这些实验表明这里所描述的化合物具有较好的药理学寿命。
化合物Ⅰb和Ⅰc对原生核苷水解酶的抑制。原生寄生虫利用嘌呤核苷(例如肌苷)的水解可以提供嘌呤碱(例如次黄嘌呤)，从而提供了RNA和DNA合成必要的前体。原生寄生虫为嘌呤营养缺陷型(auxotrophs)。采用与上述相似的抑制方法，使来自束状短膜(鞭毛)虫属[Parkin等人J．biol．Chem．266(1991)20658]的核苷水解酶以及来自锥虫属布鲁(杆)菌布鲁(杆)菌属(Trypanosome bruceibrucei)[Parkin等人，biol．Chem，266(1996)21713]的核苷水解酶进行上述化合物Ⅰb和Ⅰc的抑制实验。图6中例举了化合物Ⅰb对来自束状短膜(鞭毛)虫属的核苷水解酶的抑制。相似的研究表明，对于来自束状短膜(鞭毛)虫属和锥虫属布鲁(杆)菌布鲁(杆)菌属的核苷水解酶来说，化合物Ⅰb和Ⅰc是毫微克分子(nanamolar)抑制剂。化合物Ⅰc(A=CH，B=NH2，D=H，X=OH，Y=H，Z=OH)是毫微克分子抑制剂，并且化合物Va(OR=NH2，z’=OH，CO2Bu=H或H2，且异亚丙基基团移动后形成了两个羟基基团)也是这两种酶的毫微克分子抑制剂。结果总结于下表中。
    ki值(nM)
    酶来源 化合物Ⅰa a 化合物Ⅰb b 化合物Ⅰc b 化合物Ⅰa b
束状短膜(鞭毛(虫属的核苷水解酶 42±2nM  40nM  7nM  3nM
锥虫属布鲁(杆)菌布鲁(杆)菌属的核苷水解酶 24±3nM  108nM  0．9nM  23nM
a多次测4定的平均值以及相关误差bki的单次测定值
抑制剂以直接竞争与底物进行结合，因此ki抑制常数是直接竞争抑制的值。在容易达到的药理剂量下，化合物对嘌呤核苷水解酶提供了足够的抑制，从而获得了对原生寄生虫的抑制。
在公开的采用对硝基苯基核苷作为底物的PCT国际专利申请WO97／31008中描述了所采用的方法和材料。
实施例25．3
化合物Ⅰb和Ⅰc的5’－磷酸酯对嘌呤核糖基转移酶(PPRT)的抑制。原生寄生虫、人类组织和肿瘤利用PPRT解救嘌呤碱。阻断PPRT活性预期可以干扰这些酶中的嘌呤代谢。就化合物Ⅰb和Ⅰc的5’－磷酸酯对于来自人类和疟疾起源的PPRT的抑制进行了分析。图7说明了化合物Ⅰb的5’－磷酸酯对疟疾PPRT的慢发作抑制曲线。化合物Ⅰb的5’－磷酸酯对疟疾PPRT抑制的ki*测定列于图8。化合物Ⅰb和Ⅰc的5’－磷酸酯对来自人类和疟疾的酶作用的分析结果列于下表中。
化合物Ⅰb－5’－磷酸酯     化合物Ⅰc－5’－磷酸酯
酶来源     ki     ki*     ki     ki*
人类PPRT     40nM     3nM     14nM     8nM
疟疾PPRT     33nM     3nM     48nM 慢发作，没有观察到
全部的抑制研究表明，抑制剂与IMP竞争。两种抑制剂对两种酶的毫微克分子抑制常数是这些抑制剂很容易达到的药理剂量。可以预期人类和／或寄生虫有机物核苷激酶的活性将使这里所述的一或多种化合物转化为相应的5’－磷酸酯。因此这些化合物提供了药理剂量的5’－磷酸酯前体，这些前体可以阻断细胞内PPRT的活性。化合物Ⅰ和Ⅰc的细胞吸收已由小鼠和人类红细胞证实。
实施例26－片剂
将4g实施例1产物与96g乳糖及96g淀粉进行混合。过筛后与2g硬脂酸镁混合，将混合物压制成250mg的片剂。
实施例27－明胶胶囊
将10g实施例1产物研细后与5g滑石及85g研细的乳糖进行混合。将粉末填充进硬胶囊中。实施例28－(1R)－1，2，4－三脱氧－1－C－(4－羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－D－赤型－戊五醇的制备
实施例28．1
使(1S)5－O－叔丁基二甲基甲硅烷－1－C－氰基甲基－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－2，3－O－异亚丙基－D－核糖醇(1．93g)的三氟乙酸(20ml)溶液于室温下放置过夜。浓缩溶液，残余物的水溶液用氯仿洗涤(×2)，蒸发得到(1S)1－C－氰基甲基－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－D－核糖醇(1．0g)，为三氟乙酸盐形式。
实施例28．2
加入三乙胺，将含有二叔丁基二碳酸酯(2．09g)的实施例3．1中产物粗品(1．0g)的甲醇溶液(20ml)的pH调至中性，室温搅拌16h。浓缩溶液，层析得到(1S)－N－叔丁氧羰基－1－C－氰基甲基－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－D－核糖醇(0．80g)，
实施例28．3
0℃下，将1，3－二氯－1，1，3，3－四异丙基二硅氧烷(0．9ml)滴加到实施例3．2产物(0．8g)及咪唑(0．7g)的N，N－二甲基甲酰胺(10ml)溶液中。使生成的溶液升温至室温，用甲苯稀释，水洗涤(×3)，干燥，浓缩并层析得到(1S)－N－叔丁氧羰基－1－C－氰基甲基－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－3，5－O－(1，1，3，3－四异丙基二硅氧烷－1，3－二基)－D－赤型－戊五醇(1．4g)。
实施例28．4
90℃下，将含有硫代羰基二咪唑(0．9g)的实施例3．3产物(1．5g)的甲苯溶液(20ml)搅拌2h。浓缩并层析得到(1S)－N－叔丁氧羰基－1－C－氰基甲基－1，4－二脱氧－2－O－[咪唑(硫代羰基)]－1，4－亚氨基－3，5－O－(1，1，3，3－四异丙基二硅氧烷－1，3－二基)－D－赤型－戊五醇(1．8g)。
实施例28．5
向实施例28．4产物(1．8g)的甲苯溶液(50ml)中加入三正丁基锡氢化物(1．0ml)，溶液于80℃下加热3h。浓缩并层析得到(1S)－N－叔丁氧羰基－1－C－氰基甲基－1，2，4－三脱氧－1，4－亚氨基－3，5－O－(1，1，3，3－四异丙基二硅氧烷－1，3－二基)－D－赤型－戊五醇(0．74g)。
实施例28．6
向实施例3．5产物(0．74g)的N，N－二甲基甲酰胺溶液(10ml)中加入叔丁氧基双(二甲基氨基甲烷(1．5ml)，溶液于65－70℃下加热1h。加入甲苯(20ml)，用水(×3)洗涤，干燥并浓缩至干。室温下将残余物溶于四氢呋喃／乙酸／水(1∶1∶1v／v／v，40ml)中。1．5h后，加入氯仿(50ml)，混合物用水(×2)及碳酸氢钠溶液洗涤，干燥并蒸发至干。残余物层析，得到(1R)－N－叔丁氧羰基－1－C－(1－氰基－2－羟乙烯基)－1，2，4－三脱氧－1，4－亚氨基－3，5－O－(1，1，3，3－四异丙基二硅氧烷－1，3－二基)－D－赤型－戊五醇(0．68g)。
实施例28．7
将甘氨酸盐酸盐乙酯(0．90g)以及乙酸钠(1．0g)加到搅拌着的实施例3．6产物(0．68g)的甲醇(10ml)溶液中。混合物在室温下搅拌16h并浓缩至干。残余物层析，得到(1R)－N－叔丁氧羰基－1－C－[1－氰基－2－乙氧羰基甲基氨基)乙烯]－1，2，4－三脱氧－1，4－亚氨基－3，5－O－(1，1，3，3－四异丙基二硅氧烷－1，3－二基)－D－赤型－戊五醇(0．80g)，其为非对映体混合物。
实施例28．8
含有1，8－二氮杂双环[5．4．0]十一－7－烯(3．6ml)和氯代甲酸苄酯(1．7ml)的实施例3．7产物(0．80g)的干燥二氯甲烷溶液(20ml)加热回流过夜。冷却并用稀盐酸、碳酸氢钠洗涤，干燥并浓缩，残余物层析得到(1R)－1－C－[3－氨基－1－N－苄氧羰基－2－乙氧羰基－4－吡咯基]－N－叔丁氧羰基－1，2，4－三脱氧－1，4－亚氨基－3，5－O－(1，1，3，3－四异丙基二硅氧烷－1，3－二基)－D－赤型－戊五醇(0．70g)。
实施例28．9
搅拌下，将实施例28．8产物(0．28g)的乙醇(10ml)溶液与甲脒乙酸盐(0．50g)回流8h。蒸除溶剂，残余物层析得到(1R)－N－叔丁氧羰基－1，2，4－三脱氧－1－C－(4－羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－3，5－O－(1，1，3，3－四异丙基二硅氧烷－1，3－二基)－D－赤型－戊五醇(120mg)。
实施例28．10
使实施例28．9产物(120mg)的三氟乙酸(2ml)溶液室温下放置过夜。浓缩溶液，残余物的水溶液用氯仿洗涤2次并蒸发。将残余物溶于四氢呋喃中，用四丁基氟化铵三水合物(200mg)处理并搅拌1h。蒸除溶剂，层析后得到残余物，将其再溶于甲醇化的HCl中，过滤生成的沉淀，得到(1R)－1，2，4－三脱氧－1－C－(4－羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－D赤型－戊五醇盐酸盐，为白色固体(17mg)，其颜色变暗，但在300℃以下不熔。NMR(300 MHz，D2O，d ppm)：
13C 38．8(C－2′)，53／4(C－1′)，59．3(C－5＇)，69．1(C－4′)，
71．5(C－3＇)，107．6(q)，118．6(q)，130．4(C－2)，135．9(q)，
144．6(C－6)，和153．7(q)；1H 2．69(dd，J 14．3Hz，J 6．4Hz，H－2′)，2．60(ddd，J 14．3 Hz，J 12．2Hz，J 5．7Hz，H－2″)，3．87(m，3H，H－4′，H－5′)，4．57(m，1H，H－3′)，5．26(dd，1H，J 12．1 Hz，J 6．4 Hz，H－1′)，7．80(s，H－6)和8．65(s，H－2)．HRMS(MH+)C11H14N4O3理论值：251．1144；实测值：251．1143。实施例29－(1R)－1－C－(2－氨基4－羟基吡咯[3，2－d]嘧啶－7－基)－1，2，4－三脱氧－1，4－亚氨基－D－赤型－戊五醇的制备
实施例29．1
在常压氢气下，使实施例28．8产物(1R)－1－C－[3－氨基－1－N－苄氧羰基－2－乙氧羰基－4－吡咯基]－N－叔丁氧羰基－1，2，4－三脱氧－1，4－亚氨基－3，5－O－(1，1，3，3－四异丙基二硅氧烷－1，3－二基)－D－赤型－戊五醇(0．78g)的乙醇(10ml)溶液与10％Pd／C(100mg)进行搅拌15h。去除固体和溶剂，得到残余物(0．62g)。0℃下，向此残余物的二氯甲烷(10ml)溶液中加入苯甲酰基异硫氰酸酯的二氯甲烷(0．30ml溶于10ml中)溶液(4．8ml)。0．5h后，使溶液升温至室温，加入1，8－二氮杂双环[5．4．0]十一－7－烯(0．32ml)和碘甲烷(0．70ml)溶液。再过0．5h后，将其直接进行硅胶层析并洗脱，得到0．67g(1R)－1－C－[3－(1－苯甲酰氨基－1－甲基硫代亚甲基氨基)－2－乙氧羰基－4－吡咯基]－N－叔丁氧羰基－1，2，4－三脱氧－1，4－亚氨基－3，5－O－(1，1，3，3－四异丙基二硅氧烷－1，3－二基)－D－赤型－戊五醇。
实施例29．2
使实施例29．1产物(0．67g)溶于用氨水饱和的甲醇中(20ml)，105℃下于密封管中加热16h。蒸除溶剂并层析，得到(1R)－1－C－(2－氨基－4－羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－N－叔丁氧羰基－1，2，4－三脱氧－1，4－亚氨基－3，5－O－(1，1，3，3－四异丙基二硅氧烷－1，3－二基)－D－赤型－戊五醇(0．30g)。
实施例29．3
使实施例29．2产物(300mg)的三氟乙酸(5ml)溶液于室温下放置16h。浓缩溶液，残余物溶于四氢呋喃中，用四丁基氟化铵三水合物(200mg)处理并搅拌1h。蒸除溶剂，残余物溶于甲醇(5．0ml)中，向其中滴加乙酰氯(0．75ml)，溶液于室温下放置16h。用***(25ml)稀释，过滤生成的结晶，得到(1R)－1－C－(2－氨基－4－羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－1，2，4－三脱氧－1，4－亚氨基－D赤型－戊五醇盐酸盐(89mg)，其在300℃以下不熔。
NMR(300 MHz，D2O d ppm)：13C 38．8(C－2′)，53．4(C－1′)，59．3(C－5′)，69．1(C－4′)，71．5(C－3′)，107．6(q)，118．6(q)，130．4(C－2)，135．9(q)，144．6(C－6)，和153．7(q)；1H 2．69(dd，1H，J 14．3．Hz，J 6．3 Hz，H－2′)，2．63(ddd，1H，J 14．1 Hz，J 12．3Hz，J 5．7 Hz，H－2″)，3．88(m，3H，H－4′，H－5′)，4．55(m，1H，H－3′)，5．14(dd，1H，J12．2 Hz，J 6．3 Hz，H－1′)，和7．63(s，H－6)。实施例30－(1S)－1，4，5－三脱氧－1－C－(4－羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－D－核糖醇盐酸盐的制备
用三乙胺(0．45ml)和4－二甲基氨基吡啶(20mg)对实施例1．5产物(0．45g)的二氯甲烷(10ml)溶液进行处理，然后加入甲磺酰氯(0．1ml)。溶液搅拌1h，用2M的HCl水溶液、碳酸氢钠水溶液进行洗涤，并进行常规操作。将粗品溶于含有四丁基溴化铵(1．55g)的甲苯中(10ml)，溶液在100℃下加热2小时。冷却后用水洗涤，处理并层析后得到(1S)－1－C－(3－氨基－1－N－苄氧羰基－2－乙氧羰基－4－吡咯基]－N－叔丁氧羰基－5－溴－1，4，5－三脱氧－1，4－亚氨基－2，3－O－异亚丙基－D－核糖醇(0．27g)。
实施例30．2
在常压氢气下，使含有三乙胺(0．19ml)的实施例30．1产物(0．27g)的乙醇(10ml)溶液与20％Pd(OH)2／C(0．1g)一起搅拌16h。去除固体和溶剂，层析得到(1S)－1－C－(3－氨基－2－乙氧羰基－4－吡咯基]－N－叔丁氧羰基－1，4，5－三脱氧－1，4－亚氨基－2，3－O－异亚丙基－D－核糖醇(0．15g)。
实施例30．3
使含有甲脒乙酸盐(0．15g)的实施例30．2产物(75mg)的乙醇溶液加热回流4h。去除溶剂，层析得到(1S)－N－叔丁氧羰基－1，4，5－三脱氧－1－C－[4－羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基]－1，4－亚氨基－2，3－O－异亚丙基－D－核糖醇(69mg)。
实施例30．4
使实施例30．4产物(69mg)溶于三氟乙酸(5ml)中，并于室温下放置16h。浓缩溶液，残余物溶于50％甲醇(10ml)中，用大孔树脂A21碱性树脂处理直至溶液的pH达到7左右。去除固体和溶剂，残余物用过量的HCl处理，冷冻干燥后，得到(1S)－1，4，5－三脱氧－1－C－(4－羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－D－核糖醇盐酸盐(46mg)。13C NMR(75MHz，D2O带有DCl，dppm)：155．6(C)，147．1(CH)，137．4(C)，132．6(CH)，121．0(C)，108．2(C)，76．5(C－3)，75，6(C－2)，63．2(C－4)，58．2(C－1)，18．1(C－5)。实施例31－(1S)－1－C－(2－氨基－4－羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－1，4，5－三脱氧－1，4－亚氨基－D－核糖醇盐酸盐的制备
实施例31．1
0℃下，向实施例5．2产物(75mg)的二氯甲烷溶液(5ml)中加入0．33ml苯甲酰基异硫氰酸酯溶液(0．4ml溶于5ml二氯甲烷中)。1h后，向其中加入1，8－二氮杂双环[5．4．0]十－－7－烯(0．06ml)和碘甲烷(0．1ml)，溶液于室温下搅拌1h。层析得到(1S)－1－C－[3－(1－苯甲酰氨基－1－甲基硫代亚甲基氨基)－2－乙氧羰基－4－吡咯基]－N－叔丁氧羰基－1，4，5－三脱氧－1，4－亚氨基－2，3－O－异亚丙基－D－核糖醇(0．10g)。将此物质溶于用氨水饱和的甲醇中(5ml)，95℃下于密封管中加热16h。蒸发层析，得到(1S)－1－C－(2－氨基－4－羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－N－叔丁氧羰基－1，4，5－三脱氧－1，4－亚氨基－2，3－O－异亚丙基－D－核糖醇(28mg)。
实施例31．2
按照上述实施例30．4所述方法处理实施例31．1产物(28mg)，得到(1S)－1－C－(2－氨基－4－羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－1，4，5－三脱氧－1，4－亚氨基－D－核糖醇盐酸盐(16mg)。13C NMR(75MHz，D2O带有DCl，d ppm)：156．5(C)，153．5(C)，135．8(C)，131．7(CH)，114．9(C)，105．6(C)，76．7(C－3)，75．7(C－2)，63．4(C－4)，58．1(C－1)，18．4(C－5)。实施例32－(1S)－1－C－(4－氨基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－D－核糖醇盐酸盐的制备
实施例32．1
使含有氨基乙腈(0．12g)和乙酸钠(0．20g)的实施例1．3产物(0．15g)的甲醇溶液(5ml)加热回流4h，然后浓缩。层析得到(1S)－N－叔丁氧羰基－5－O－叔丁基二甲基甲硅烷基－1－C－[1－氰基－2－氰甲基氨基－乙烯基]－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－2，3－O－异亚丙基－D－核糖醇(0．12g)，其为非对映体混合物。将此物质溶于含有1，8－二氮杂双环[5．4．0]十一－7－烯(0．7ml)和氯代甲酸苄酯(0．33ml)的二氯甲烷中(10ml)，加热回流1h。常规操作后，层析得到(1S)－1－C－(3－氨基－1－N－苄氧羰基－2－氰基－4－吡咯基)－N－叔丁氧羰基－5－O－叔丁基二甲基甲硅烷基－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－2，3－O－异亚丙基－D－核糖醇(0．125g)。
实施例32．2
在常压氢气下，使实施例32．1产物(0．125g)的乙醇(10ml)溶液与10％Pd／C(20mg)一起搅拌0．5h。去除固体，向滤液中加入甲脒乙酸盐(0．21g)，溶液加热回流16h后浓缩。残余物层析得到(1S)－1－C－(4－氨基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－N－叔丁氧羰基－5－O－叔丁基二甲基甲硅烷基－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－2，3－O－异亚丙基－D－核糖醇(80mg)。
实施例32．3
按照上述实施例30．4所述方法处理实施例32．2产物(80mg)，得到(1S)－1－C－(4－氨基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－D－核糖醇盐酸盐(35mg)。13C NMR(75MHz，D2O带有DCl，d
ppm)：152．1(C)，146．2 (CH)，140．7(C)，135．3(CH)，115．4
(C)，107．7(C)，76．0(C－2)，7 3．1(C－3)，68．4(C－4)，61．3(C－
5)，58．3(C－1)。实施例33－(1S)－1－C－(2－氨基－4－羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－1，4－二脱氧1，4－亚氨基－D－核糖醇5－磷酸酯双铵盐的制备
室温下，向含有四唑(0．105g)的实施例2．2产物(0．13g)的干燥乙腈溶液(6ml)中慢慢滴加N，N－二乙基－1，5－二氢－2，4，3－苯并二氧杂phosphepin－3－胺，直至t．l．c．显示反应完全。然后加入间过氯苯甲酸(60mg)，再接着加入小量氧化剂，直至t．l．c．显示最初的产物已充分反应。加入氯仿，用碳酸氢钠洗涤，干燥并浓缩，层析得到磷酸酯(190mg)。在常压氢气下，使其乙醇(10ml)溶液与10％Pd／C(80mg)一起搅拌1h。去除固体和溶剂，将残余物溶于三氟乙酸(5ml)，室温放置16h。蒸发浓缩，残余物的水溶液用大孔A15酸性树脂进行层析，用水及2M氨水洗脱产物。浓缩并用水研制残余物，得到(1S)－1－C－(2－氨基－4－羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－D－核糖醇5－磷酸酯双铵盐(50mg)，又称为化合物Ⅰb的5’－磷酸酯。13C NMR(75MHz，TFA－D，d ppm) ： 146．9 (C)， 144．0 (C)， 127．0 (C) ， 124．5 (CH)， 105．1(C)， 95．6 (C)， 66．3 (CH)， 64．0 (CH)， 59．2 (CH)， 56．2 (CH2)，50．2 (CH)。实施例34－(1S)－1，4，5－三脱氧－5－氟－1－C－(4－羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－D－核糖醇盐酸盐的制备
实施例34．1
向实施例1．2产物(1．48g)的四氢呋喃(10ml)溶液中加入四丁基氟化铵(6ml，1M的THF溶液)。2h后蒸发溶液，残余物层析得到(1S)－N－叔丁氧羰基－1－C－氰甲基－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－2，3－O－异亚丙基－D－核糖醇(1．15g)。将含有三乙胺(1．0ml)的此物质(0．84g)的二氯甲烷(20ml)溶液进行搅拌，与此同时加入二乙基氨基硫三氟化物(0．36ml)。2h后，加入甲醇(1ml)，蒸发溶液。层析得到(1S)－N－叔丁氧羰基－1－C－氰甲基－1，4，5－三脱氧－5－氟－1，4－亚氨基－2，3－O－异亚丙基－D－核糖醇(0．36g)。
实施例34．2
按照上述实施例1．3及1．4和1．5所述方法处理实施例34．1产物(0．36g)，得到(1S)－1－C－(3－氨基－1－N－苄氧羰基－2－乙氧羰基－4－吡咯基)－N－叔丁氧羰基－1，4，5－三脱氧－5－氟－1，4－亚氨基－2，3－O－异亚丙基－D－核糖醇(0．23g)。实施例34．3
按照上述实施例1．6及1．7所述方法处理实施例34．2产物(0．12g)，冷冻干燥后，得到(1S)－1，4，5－三脱氧－5－氟－1－C－(4－羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－D－核糖醇盐酸盐(43mg)。13C NMR (75MHz，D2O带有DCl，dppm)：146．8(CH)，132．6(CH)，83．0(JC，F 169Hz，C－5)，76．1(C－2)，72．7(C－3)，66．4(JC，F 18Hz，C－4)，59．0(C－1)。实施例35－(1S)－1－C－(3－氨基－2羧酰胺基－4－吡咯基]－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－D－核糖醇的制备
实施例35．1
将过氧化氢(0．5ml)滴加到实施例32．1产物(90mg)和碳酸钾(50mg)的二甲亚砜(1．0ml)溶液中。混合物搅拌10分钟，用水(50ml)稀释，乙酸乙酯提取(3×20ml)。合并的有机层干燥并浓缩。生成的残余物进行层析，得到(1S)－1－C－(3－氨基－2－羧酰胺基－4－吡咯基]－N－叔丁氧羰基－5－O－叔丁基二甲基甲硅烷基－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－2，3－O－异亚丙基－D－核糖醇(20mg)。
实施例35．2
使实施例35．1产物(20mg)的三氟乙酸(1ml)溶液于室温下放置16h。浓缩溶液，残余物溶于四氢呋喃中，用四丁基氟化铵三水合物(200mg)处理并搅拌1h。蒸除溶剂，残余物的水溶液(20ml)用二氯甲烷洗涤(2×5ml)。蒸发水层并层析，得到(1S)－1－C－(3－氨基－2－羧酰胺基－4－吡咯基)－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－D－核糖醇(10mg)。NMR(300MHz，D2O)：13C 59．3 (C－4′)，64．0 (C－5＇)， 67．7 (C－1＇)，74．4(C－3′)，77．6 (C－2′)，113．2 (q)，124．1 (C－5)，126．2 (q)，41．0(q)，和168．7(q)。HRMS(MH+)C10H17N4O4：理论值：257．12498；实测值：257．12535。实施例36－(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(2，4－二羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－D－核糖醇的制备
实施例36．1
将2，4－二氰基－6－甲基－5－硝基嘧啶(G．N．Mitchell和R．L．Mckee，J．Org．Chem．1974，39，176－179)(20g)悬浮于含有N，N－二乙基苯胺(20ml)的磷酰氯(200ml)中，混合物加热回流2h。将此黑色的溶液浓缩至干，残余物在水(600ml)和***(150ml)中间进行分配。水层进一步用***(150ml)提取，合并的有机层用碳酸氢钠溶液洗涤，常规操作后得到2，4－二氯－6－甲基－5－硝基嘧啶(23．1g)。
实施例36．2
向实施例36．1产物(17g)的苄醇(80ml)溶液中加入1．1M苄化钠的苄醇溶液(199ml)。室温保持1h后，加入***(500ml)，用水洗涤溶液。有机层干燥后在高真空下蒸发至干。将干燥的粗品残余物溶于N，N－二甲基甲酰胺(100ml)中，与N，N－二甲基甲酰胺二甲缩醛(25ml)于100℃下加热3h，然后将溶液浓缩至干。用乙醇研制残余物，过滤，得到2，4－二苄氧基－6－(2－二甲基氨基乙烯基)－5－硝基嘧啶(24．5g)，其为橙色固体。
实施例36．3
向实施例36．2产物(20g)的乙酸(300ml)溶液中加入锌粉(30g)，此过程中需冷却控制产热。生成的混合物搅拌2h，过滤，滤液浓缩至干。残余物在氯仿和碳酸氢钠之间进行分配，有机层干燥后浓缩至干，得到固体残余物2，4－二苄氧基吡咯并[3，2－d]嘧啶(15．2g)。实施例36．4
向实施例36．3产物(2．0g)的四氢呋喃(40ml)溶液中加入氢化钠(0．5g，60％的油状分散液)，再接着加入叔丁基二甲基甲硅烷基氯化物(1．37g)，混合物搅拌1h。滴加水终止反应，使反应物在***(100ml)和水(150ml)之间进行分配。有机层干燥后浓缩至干，搅拌残余物的二氯甲烷溶液(40ml)并慢慢滴加N－溴代琥珀酰亚胺，直至t．l．c．分析显示反应物转化为极性较小的产物为止。用水和碳酸氢钠溶液洗涤，浓缩干燥。残余物层析后得到2，4－二苄氧基－7－溴－9－N－叔丁基二甲基甲硅烷基吡咯并[3，2－d]嘧啶(1．8g)，其为白色固体。
实施例36．5
采用N－氯代琥珀酰亚胺对5－O－叔丁基二甲基甲硅烷基－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－2，3－O－异亚丙基－D－核糖醇(0．30g)进行N－氯化反应，接着按照实施例1．1所述方法，用四甲基哌啶锂进行氯化氢消除反应，可以制备得到亚胺，但需要做以下修饰：(ⅰ)当四甲基哌啶锂加入完毕后，加入石油醚，溶液用水洗涤，干燥并浓缩至干；(ⅱ)残余物层析用0．2％三乙胺和30％乙酸乙酯的己烷溶液进行洗脱，得到纯亚胺(0．215g)。将丁基锂(1．4M的己烷溶液)慢慢加到实施例36．4产物(0．786g)的苯甲醚(20ml)和***(30ml)溶液中，然后于－70℃下，将上述纯亚胺的***(2ml)溶液加入其中，直至t．l．c．分析显示锂与起始物质的交换完成。使混合物慢慢升温至－15℃，用水洗涤，干燥并浓缩，残余物层析，得到(1S)－1－C－(2，4－二苄氧基－9－N－叔丁基二甲基甲硅烷基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－5－O－叔丁基二甲基甲硅烷基－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－2，3－O－异亚丙基－D－核糖醇(0．225g)。
实施例36．6
在常压氢气下，使实施例36．5产物(0．10g)的乙醇(5ml)溶液与10％Pd／C(0．05g)一起搅拌2h。去除固体和溶剂，向残余物的甲醇(5ml)溶液中加入浓氯化氢溶液(1ml)。放置过夜后，溶液浓缩至干，残余物用***提取，乙醇研制，过滤得到(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(2，4－二羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－D－核糖醇盐酸盐(0．025g)。13C NNR(D2O)，δ(ppm)：159．8 (C)，155．8 (C)，137．1 (C)，131．4(CH)，114．2(C)，104．1(C)，76．2(CH)，73．7(CH)，68．5(CH)，61．6(CH2)和58．5(CH)。实施例37－1，4－二脱氧－(1S)－1－C－(2，4－二羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－D－核糖醇5－磷酸酯双铵盐的制备
实施例37．1
向实施例36．5产物(110mg)的四氢呋喃溶液中加入四丁基铵氟化物(1M，05ml)。2h后，用甲苯稀释，水洗涤(×2)，干燥并浓缩至干。将生成的浆状物溶于甲醇中，加入叔丁基氧碳酸酐(65mg)。30分钟后，将混合物浓缩至干，层析得到(1S)－1－C－(2，4－二苄氧基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－N－叔丁氧羰基－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－2，3－O－异亚丙基－D－核糖醇(64mg)。
实施例37．2
按照实施例33所述的方法，将实施例37．2产物(64mg)转化为1，4－二脱氧－(1S)－1－C－(2，4－二羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－D－核糖醇5－磷酸酯双铵盐(11mg)。13C－NMR(D2O)，δ(ppm)：156．0(C)，151．9(C)，134．0(C)，127．3(CH)，110．9(C)，102．8(C)，75．1(CH)，70．4(CH)，65．1(CH)，61．9(CH2)，和54．5(CH)。
通过上述实施例描述了本发明，在不背离本发明范围的前提下，进行一些修饰和添加是可取的。

Claims (39)

1．具式(Ⅰ)化合物，或其互变异构体；或其制药上可以接受的盐类；或其酯类；或其前药，
Figure 9881148900021
其中A为CH或N；B选自OH，NH2，NHR，H或卤素；D选自OH，NH2，
NHR，H，卤素或SCH3；R为任意取代的烷基，芳烷基或芳基基团；且X和Y独立地选自H，OH或卤素，除了当X或Y中的一个为氢或卤素时，另一个为氢；并且Z为OH或，当X为氢时，Z选自氢，卤素，羟基，SQ或OQ，Q为任意取代的烷基，芳烷基或芳基基团。
2．权利要求1中的化合物，其中当B和／或D之中的一个为NHR时，R为C1－C4烷基。
3．权利要求1中的化合物，其中或D为H，或B为OH，或两者均有。
4．权利要求1中的化合物，其中或D为H，OH或NH2，X为OH或H，Y为H。
5．权利要求4中的化合物，其中Z为OH，H或甲硫基。
6．权利要求5中的化合物，其中Z为OH。
7．权利要求4中的化合物，其选自：
(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(4－羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－D－核糖醇，
(1S)－1－C－(2－氨基－4－羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－D－核糖醇，
(1R)－1－C－(4－羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－1，2，4－三脱氧－D－赤型－戊五醇，
(1S)－1－C－(4－羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－1，4，5－三脱氧－D－戊五醇，
(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(4－羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－5－甲硫基－D－核糖醇，
(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(2，4－二羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－D－核糖醇，
(1R)－1－C－(2，4－二羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－1，2，4－三脱氧－D－赤型－戊五醇，
(1S)－1－C－(2，4－二羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－1，4，5－三脱氧－D－核糖醇，
(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(2，4－二羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－5－甲硫基－D－核糖醇，
(1R)－1－C－(2－氨基－4－羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－1，2，4－三脱氧－D－赤型－戊五醇，
(1S)－1－C－(2－氨基－4－羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－1，4，5－三脱氧－D－核糖醇，
(1S)－1－C－(2－氨基－4－羟基吡咯并[3，2－d]－嘧啶－7－基)－1， 4－二脱氧－1，4－亚氨基－5－甲硫基－D－核糖醇，
(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(7－羟基吡咯唑并[4，3－d]嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－D－核糖醇，
(1R)－1－C－(7－羟基吡唑并[4，3－d]嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－1，2，4－三脱氧－D－赤型－戊五醇，
(1S)－1－C－(7－羟基吡唑并[4，3－d]嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－1，4，5－三脱氧－D－核糖醇，
(1S)－1，4－脱氧－1－C－(7－羟基吡唑并[4，3－d]嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－5－甲硫基－D－核糖醇，
(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(5，7－二羟基吡唑并[4，3－d]嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－D－核糖醇，
(1R)－1－C－(5，7－二羟基吡唑并[4，3－d]－嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－1，2，4－三脱氧－D－赤型－戊五醇，
(1S)－1－C－(5，7－二羟基吡唑并[4，3－d]－嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－1，4，5－三脱氧－D－核糖醇，
(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(5，7－二羟基吡唑并[4，3－d]嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－5－甲硫基－D－核糖醇，
(1S)－1－C－(5－氨基－7－羟基吡唑并[4，3－d]－嘧啶－3－基)－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－D－核糖醇，
(1R)－1－C－(5－氨基－7－羟基吡唑并[4，3－d]－嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－1，2，4－三脱氧－赤型－戊五醇，
(1S)－1－C－(5－氨基－7－羟基吡唑并[4，3－d]－嘧啶－3－基)－1，4－亚氨基－1，4，5－三脱氧－D－核糖醇，
(1S)－1－C－(5－氨基－7－羟基吡唑并[4，3－d]－嘧啶－3－基)－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－5－甲硫基－D－核糖醇，
或其互变异构体，或其制药学上可接受的盐类。
8．权利要求1中的化合物，其为(1S)－1，4－二脱氧－1－C－(4－羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－1，4－亚氨基－D－核糖醇，或其互变异构体，或其制药学上可接受的盐类。
9．权利要求1中的化合物，其为(1S)－1－C－(2－氨基－4－羟基吡咯并[3，2－d]嘧啶－7－基)－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－D－核糖醇，或其互变异构体，或其制药学上可接受的盐类。
10．用于抑制T－细胞功能的药物组合物，其包含有效抑制嘌呤核苷磷酸化酶量的权利要求1化合物以及制药学上可接受的载体或稀释剂。
11．用于抑制T－细胞功能的药物组合物，其包含有效抑制嘌呤核苷磷酸化酶量的权利要求2化合物以及制药学上可接受的载体或稀释剂。
12．用于抑制T－细胞功能的药物组合物，其包含有效抑制嘌呤核苷磷酸化酶量的权利要求3化合物以及制药学上可接受的载体或稀释剂。
13．用于抑制T－细胞功能的药物组合物，其包含有效抑制嘌呤核苷磷酸化酶量的权利要求4化合物以及制药学上可接受的载体或稀释剂。
14．用于抑制T－细胞功能的药物组合物，其包含有效抑制嘌呤核苷磷酸化酶量的权利要求5化合物以及制药学上可接受的载体或稀释剂。
15．用于抑制T－细胞功能的药物组合物，其包含有效抑制嘌呤核苷磷酸化酶量的权利要求6化合物以及制药学上可接受的载体或稀释剂。
16．用于抑制T－细胞功能的药物组合物，其包含有效抑制嘌呤核苷磷酸化酶量的权利要求7化合物以及制药学上可接受的载体或稀释剂。
17．用于抑制T－细胞功能的药物组合物，其包含有效抑制嘌呤核苷磷酸化酶量的权利要求8化合物以及制药学上可接受的载体或稀释剂。
18．用于抑制T－细胞功能的药物组合物，其包含有效抑制嘌呤核苷磷酸化酶量的权利要求9化合物以及制药学上可接受的载体或稀释剂。
19．治疗和／或预防原生物感染的药物组合物，其包含有效抑制至少一种寄生虫嘌呤核苷磷水解酶、嘌呤核苷磷酸化酶和／或嘌呤磷酸核糖基转移酶量的权利要求1化合物以及制药学上可接受的载体或稀释剂。
20．抑制哺乳动物体内T－细胞功能的方法，其包含给予哺乳动物权利要求1中的化合物，所述的化合物可以抑制嘌呤核苷磷酸化酶。
21．治疗和／或预防由原生寄生虫所引起感染的方法，其包含给予对象一定剂量至少可以有效抑制嘌呤核苷磷水解酶、嘌呤核苷磷酸化酶和／或嘌呤磷酸核糖基转移酶的权利要求1化合物。
22．杀死寄生虫的方法，其包含给予寄生虫一定剂量至少可以有效抑制一种嘌呤核苷磷水解酶、嘌呤核苷磷酸化酶和／或嘌呤磷酸核糖基转移酶的权利要求1化合物。
23．具式(Ⅰa)化合物，或其互变异构体；或其制药上可以接受的盐类；或其酯类；或其前药
Figure 9881148900071
其中A为CH或N；X和Y独立地选自H，OH或卤素，除了当X或Y中的一个为羟基或卤素时，另一个为氢；并且Z为OH或，当X为氢时，Z选自氢，卤素，羟基，
SQ或OQ，Q为任意取代的烷基，芳烷基或芳基基团；E选自CO2H或相应的盐类形式，CO2R，CN，CONH2，CONHR或CONR2；且G选自NH2，NHCOR，
NHCONHR或NHCSNHR。
24．权利要求23中的化合物，其中E为CONH2且G为NH2。
25．权利要求23中的化合物，其中E为CONH2，G为NH2，X为OH或H，Y为H。
26．权利要求23中的化合物，其中Z为OH，H或甲硫基。
27．权利要求26中的化合物，其中Z为OH。
28．权利要求23中的化合物，其为(1S)－1－C－(3－氨基－2－羧酰胺基－4－吡咯基)－1，4－二脱氧－1，4－亚氨基－D－核糖醇，或其互变异构体，或其制药学上可接受的盐类。
29．用于抑制T－细胞功能的药物组合物，其包含有效抑制嘌呤核苷磷酸化酶量的权利要求23化合物以及制药学上可接受的载体或稀释剂。
30．用于抑制T－细胞功能的药物组合物，其包含有效抑制嘌呤核苷磷酸化酶量的权利要求24化合物以及制药学上可接受的载体或稀释剂。
31．用于抑制T－细胞功能的药物组合物，其包含有效抑制嘌呤核苷磷酸化酶量的权利要求25化合物以及制药学上可接受的载体或稀释剂。
32．用于抑制T－细胞功能的药物组合物，其包含有效抑制嘌呤核苷磷酸化酶量的权利要求26化合物以及制药学上可接受的载体或稀释剂。
33．用于抑制T－细胞功能的药物组合物，其包含有效抑制嘌呤核苷磷酸化酶量的权利要求27化合物以及制药学上可接受的载体或稀释剂。
34．用于抑制T－细胞功能的药物组合物，其包含有效抑制嘌呤核苷磷酸化酶量的权利要求28化合物以及制药学上可接受的载体或稀释剂。
35．抑制哺乳动物体内T－细胞功能的方法，其包含给予哺乳动物权利要求23中的化合物，所述的化合物可以抑制嘌呤核苷磷酸化酶。
36．治疗和／或预防由原生寄生虫所引起感染的方法，其包含给予对象一定剂量至少可以有效抑制一种嘌呤核苷磷水解酶、嘌呤核苷磷酸化酶和／或嘌呤磷酸核糖基转移酶的权利要求23化合物。
37．权利要求36中所述的方法，其中的原生寄生虫为疟原虫。
38．权利要求36中所述的方法，其中的感染为疟疾感染。
39．杀死寄生虫的方法，其包含给予寄生虫一定剂量至少可以有效抑制一种嘌呤核苷磷水解酶、嘌呤核苷磷酸化酶和／或嘌呤磷酸核糖基转移酶的权利要求23化合物。
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