CN1275618A - 一种t－淋巴细胞培养方法 - Google Patents
一种t－淋巴细胞培养方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1275618A CN1275618A CN 00109663 CN00109663A CN1275618A CN 1275618 A CN1275618 A CN 1275618A CN 00109663 CN00109663 CN 00109663 CN 00109663 A CN00109663 A CN 00109663A CN 1275618 A CN1275618 A CN 1275618A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lymphocyte
- nutrient solution
- cultural method
- culture fluid
- lymphocytes
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 title claims abstract description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 19
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims abstract description 9
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims abstract description 9
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 9
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 claims description 7
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 claims description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 abstract description 4
- 238000012136 culture method Methods 0.000 abstract 1
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 230000000527 lymphocytic effect Effects 0.000 description 3
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 3
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 2
- 244000309466 calf Species 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 2
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 2
- 229960001008 heparin sodium Drugs 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 238000005498 polishing Methods 0.000 description 2
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 2
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 2
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 2
- QTENRWWVYAAPBI-YCRXJPFRSA-N streptomycin sulfate Chemical compound OS(O)(=O)=O.OS(O)(=O)=O.OS(O)(=O)=O.CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@H]1O.CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@@H](N=C(N)N)[C@H](O)[C@H]1O QTENRWWVYAAPBI-YCRXJPFRSA-N 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 2,2'-piperazine-1,4-diylbisethanesulfonic acid Chemical compound OS(=O)(=O)CCN1CCN(CCS(O)(=O)=O)CC1 IHPYMWDTONKSCO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OTMSDBZUPAUEDD-UHFFFAOYSA-N Ethane Chemical compound CC OTMSDBZUPAUEDD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000594182 Sarcophaga sigma Species 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 108010086652 phytohemagglutinin-P Proteins 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 238000005204 segregation Methods 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及一种T－淋巴细胞培养方法,其不需要进行淋巴细胞的分离,具有用血量少、操作简单的特点。
Description
本发明涉及一种细胞的培养方法，特别是一种淋巴细胞的培养方法。
现有技术中T-淋巴细胞的培养方法，需要进行细胞分离，操作过程复杂。
本发明的T-淋巴细胞培养方法克服了现有技术的不足，操作简单，而且用血量少。
本发明的T-淋巴细胞培养方法，适用于使用自制的T-淋巴细胞培养液进行的T-淋巴细胞培养，有关自制T-淋巴细胞培养液的组成、配方及其制备方法，已另行申请发明专利，所述自制T-淋巴细胞培养液的组成成分及配制1000克培养液的用量为：
N-(2-羟乙基)哌嗪-N’-2-乙烷磺酸(Hepes) 3-6g
碳酸氢钠 1-3g
RPMI 1640培养基(以干粉量计) 5-10g
L-谷氨酰胺(LG) 0.1-0.3g
肝素钠(150u/mg) 0.1-0.3g
植物血凝素(PHA) 5-20mg
胎牛血清 100-300ml
青霉素(80万u/2ml) 0.1-0.5ml
链霉素(100万u/2ml) 0.1-0.5ml
余量用蒸馏水补齐。
该培养液的PH值为6.5-7.5。
本发明的T-淋巴细胞培养方法及其步骤为：
(1)取上述冰冻的T-淋巴细胞培养液，在室温下解冻；
(2)抽取静脉血注入盛培养液的容器内，立即将两者混匀，血量与培养液的体积比为1∶8-12；
(3)将上述容器置于37℃±0.5℃培养箱中，48-96小时后即完成细胞培养。
在实施本发明的过程中，所使用的器皿及其它用具均需要消毒灭菌处理，而且所有操作均应符合无菌操作，消毒灭菌方法和无菌操作方法均属于本领域的公知技术。
本发明的T-淋巴细胞培养方法与现有技术相比具有如下优点：
(1)用血量少，仅需要0.4-0.5ml血样，而现有技术一般需要5-10毫升；
(2)方法简便、省时、易操作、设备简单，而现有技术中需要用淋巴细胞分离液做淋巴细胞分离，而且需要较昂贵的二氧化碳培养箱，操作繁琐、费时、仪器昂贵。
下面结合实施例进一步说明本发明：
步骤一、取组成成分及配制1000克培养液的用量如下的T-淋巴细胞培养液：
Hepes 4.76g
碳酸氢钠 1.6g
RPMI 1640培养基 8.32g
L-谷氨酰胺(LG) 0.3g
肝素钠(150u/mg) 0.1g
美国sigma生产的PHA-P 10mg
青霉素(80万u/2ml) 0.35ml
链霉素(100万u/2ml) 0.3ml
胎牛血清 200ml
余量用蒸馏水补齐。
该培养液的PH值为7.0-7.2。
步骤二、依下列方法及步骤进行T-淋巴细胞的培养：
(1)室温下将上述4ml冰冻的淋巴细胞培养液解冻；
(2)抽取静脉血0.4-0.5ml注入盛培养液的容器内，立即将两者混匀；
(3)将上述容器置于37℃±0.5℃培养箱中，72小时后即完成细胞培养。
依此方法，T-淋巴细胞转化率达80％以上，而且胞核涨大，核仁***。
Claims (1)
1.一种T-淋巴细胞培养方法，其特征在于其是通过如下步骤实现的：
(1)室温下将冰冻的T-淋巴细胞培养液解冻；
(2)抽取静脉血注入盛培养液的容器内，立即将两者混匀，血与培养液的体积比为1∶8-12；
(3)将上述容器置于37℃±0.5℃培养箱中48-96小时。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 00109663 CN1275618A (zh) | 2000-06-21 | 2000-06-21 | 一种t－淋巴细胞培养方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 00109663 CN1275618A (zh) | 2000-06-21 | 2000-06-21 | 一种t－淋巴细胞培养方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1275618A true CN1275618A (zh) | 2000-12-06 |
Family
ID=4579774
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 00109663 Pending CN1275618A (zh) | 2000-06-21 | 2000-06-21 | 一种t－淋巴细胞培养方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1275618A (zh) |
Cited By (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1306027C (zh) * | 2002-12-12 | 2007-03-21 | 中国医学科学院基础医学研究所 | 一种体外扩增γδT淋巴细胞的方法 |
| CN100410368C (zh) * | 2005-07-19 | 2008-08-13 | 翁炳焕 | 染色体核型分析淋巴细胞培养标本预处理方法 |
| CN101129405B (zh) * | 2007-07-31 | 2011-05-11 | 崔澂 | 一种治疗习惯性流产的生物学制剂 |
| CN103184193A (zh) * | 2013-04-12 | 2013-07-03 | 阳小卫 | T细胞快速增殖方法 |
| CN103898192A (zh) * | 2014-04-23 | 2014-07-02 | 重庆庞通医疗器械有限公司 | 一种血液培养方法 |
| CN110669730A (zh) * | 2019-10-23 | 2020-01-10 | 杭州宝荣科技有限公司 | 一种人外周血淋巴细胞培养基 |
-
2000
- 2000-06-21 CN CN 00109663 patent/CN1275618A/zh active Pending
Cited By (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1306027C (zh) * | 2002-12-12 | 2007-03-21 | 中国医学科学院基础医学研究所 | 一种体外扩增γδT淋巴细胞的方法 |
| CN100410368C (zh) * | 2005-07-19 | 2008-08-13 | 翁炳焕 | 染色体核型分析淋巴细胞培养标本预处理方法 |
| CN101129405B (zh) * | 2007-07-31 | 2011-05-11 | 崔澂 | 一种治疗习惯性流产的生物学制剂 |
| CN103184193A (zh) * | 2013-04-12 | 2013-07-03 | 阳小卫 | T细胞快速增殖方法 |
| CN103898192A (zh) * | 2014-04-23 | 2014-07-02 | 重庆庞通医疗器械有限公司 | 一种血液培养方法 |
| CN103898192B (zh) * | 2014-04-23 | 2015-01-28 | 重庆庞通医疗器械有限公司 | 一种血液培养方法 |
| CN110669730A (zh) * | 2019-10-23 | 2020-01-10 | 杭州宝荣科技有限公司 | 一种人外周血淋巴细胞培养基 |
| CN110669730B (zh) * | 2019-10-23 | 2022-03-29 | 杭州杰毅麦特医疗器械有限公司 | 一种人外周血淋巴细胞培养基 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Robinson et al. | Competition between sulfate-reducing and methanogenic bacteria for H 2 under resting and growing conditions | |
| FI112116B (fi) | Menetelmä proteiinin 3-ulotteisen rakenneinformaation määrittämiseksi ja ravintoväliaine | |
| Büntemeyer et al. | Optimization of serum-free fermentation processes for antibody production | |
| Rossignol et al. | Comparison of two membrane–photobioreactors, with free or immobilized cells, for the production of pigments by a marine diatom | |
| CN1275618A (zh) | 一种t－淋巴细胞培养方法 | |
| CN106399113A (zh) | 一种膜光生物反应器中利用市政污水高密度培养微藻的方法 | |
| CN1445215A (zh) | 光化学合成维生素d3的方法 | |
| CN103952361A (zh) | 一种沉水型光合细菌的培养方法 | |
| CN111747520A (zh) | 利用磁性材料结合移动磁场促进好氧污泥颗粒化的装置及方法 | |
| CN101077819A (zh) | 厌氧发酵制备生物质能源的方法 | |
| CN1280194A (zh) | 一种t－淋巴细胞培养液 | |
| CN1239471C (zh) | 利用鱼类废水连续生产氨基酸的方法 | |
| CN1304583C (zh) | 二羟基丙酮的生产方法 | |
| CN1824634A (zh) | 利用虎杖产白藜芦醇内生菌培养提取白藜芦醇的方法 | |
| CN1169941C (zh) | 半无菌培养异养小球藻的方法 | |
| CN117887641B (zh) | 一株兼具苯胺降解及聚羟基丁酸酯合成能力的菌株及其应用 | |
| CN1800368A (zh) | 无血清配方的动物细胞培养基胎牛血清替代剂 | |
| CN1280193A (zh) | 一种细胞染色方法 | |
| CN216274047U (zh) | 一种基于麦角硫因高产菌株工艺初筛的微流控装置 | |
| CN1513872A (zh) | 一种胸腺五肽液相合成法 | |
| CN1238273C (zh) | 糖蜜酒精废液净化回用的方法 | |
| CN113717251B (zh) | 一种草鱼鱼鳞高活性抗冻多肽及其制备方法 | |
| CN1096540A (zh) | 气升式悬浮微载体培养贴壁依赖细胞 | |
| CN1176209C (zh) | 一种动物细胞堆积床大规模培养的接种方法 | |
| CN220265708U (zh) | 一种干细胞的培养装置 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| ASS | Succession or assignment of patent right |
Owner name: BEIJING JIANERKANG MEDICINE EQUIPMENT CO., LTD. Free format text: FORMER OWNER: ZHANG GUOQING Effective date: 20010912 |
|
| C41 | Transfer of patent application or patent right or utility model | ||
| TA01 | Transfer of patent application right |
Effective date of registration: 20010912 Address after: 100088 Building No. 7, West Lane, Zhichun Road, Haidian District, Beijing, Luozhuang Applicant after: Beijing jianerkang Medical Equipment Co., Ltd. Address before: 100080 Beijing city Haidian District Xiyuan No. 15 Haidian Sports Institute in the playground Applicant before: Zhang Guoqing |
|
| C02 | Deemed withdrawal of patent application after publication (patent law 2001) | ||
| WD01 | Invention patent application deemed withdrawn after publication |