CN1272069C - 含有睫状神经营养因子类似物的稳定药剂 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种含有睫状神经营养因子类似物的稳定药剂。它除了睫状神经营养因子(CNTF)类似物作为有效成分外，该药剂至少还包含一种物质是从可供药用的表面活性剂、蛋白质稳定剂、无机盐一类物质中选择而来的，以水溶液或冻干制剂形式使有效成分长期稳定保存。本发明的优点在于通过添加一些能被人体接受的成分，从而制备出一种适合于临床使用，特别是注射使用而且能稳定保存的睫状神经营养因子类似物制剂。这种制剂可以防止活性成分(睫状神经营养因子类似物)由于容器吸附，或因蛋白质变性、聚合、降解、氧化等多种因素而导致的丢失或失活，从而方便运输、长期保存和临床使用。

Description

含有睫状神经营养因子类似物的稳定药剂

                    技术领域

本发明涉及一种含有睫状神经营养因子类似物的稳定药剂。更具体地，本发明涉及一种含睫状神经营养因子类似物的稳定制剂，适用于皮下或静脉给药，用于治疗神经性疾病或肥胖症及相关疾病。

                    背景技术

CNTF最早是在体外发现具有促进鸡胚睫状神经节的存活而被发现的(Manthorpe et al.，1980，J.Neurochem.34：69-75)，在以后的几十年中，又有许多相关的生物学功能被发现。Hughes等发现它能促进围产期鼠视觉和脑神经中的神经胶质祖细胞分化(Hughes et al.，1988，Nature 335：70-73)，而且还发现能促进鸡胚背根神经节的生长(Skaper and Varon，1986，Brain Res.389：39-46)。此外，他还能促进运动神经元、海马神经元及副交感脊髓神经元的生长和分化(Ip，et al.1991，J.Neurosci.11：3124-3134；Blottner，et al.1989，Neurosci.Lett.105：316-320)。

鉴于CNTF的多种生物学功能，因此他被认为在修复神经损伤、治疗神经萎缩性疾病中能起到一定的作用，因此具有较好的临床应用前景。在进一步的研究中也发现，CNTF在治疗肥胖症，特别是Leptin耐受的肥胖症中也能起作用，显示了可能的临床用途(Isabelle Gloaguen，et al.1997，美国国家科学院院报)。此外，进一步的研究也表明，CNTF通过基因工程手段进行突变后所获得的其类似物，其生物学活性和稳定性有所提高。但是，作为蛋白药物，其稳定性还是无法与常规化学药物相比(Panayotatos；Nikos，1998，US 5846935)。因此，研究出一种能稳定保存睫状神经营养因子类似物，并适合于实际临床使用的制剂处方是极其有意义的。本发明涉及的就是此方面内容。

                    发明内容

本发明的目的是提出一种含有睫状神经营养因子类似物的稳定药剂。

它除了睫状神经营养因子(CNTF)类似物作为有效成分外，至少还有一种是从药物可接受的表面活性剂、蛋白质稳定剂、无机盐一类物质中选择而来的，其溶液pH或重建后溶液pH在5-8之间。

本发明的优点在于通过添加一些能被人体接受的成分，从而制备出一种适合于临床使用，特别是注射使用而且能稳定保存的睫状神经营养因子类似物制剂。这种制剂可以防止活性成分(睫状神经营养因子类似物)由于容器吸附，或因蛋白质变性、聚合、降解、氧化等多种因素而导致的丢失或失活，从而方便运输、长期保存和临床使用。

                    具体实施方式

本发明中涉及的睫状神经营养因子类似物是通过基因工程方法制备的重组产品，其制备方法可从美国专利US 5846935获得，也可以根据本发明同一申请人递交的一份专利进行(中国专利申请号：02136033.2)。所获得的产品与天然人CNTF相比其蛋白质序列是不一致的。任何高度提纯的睫状神经营养因子类似物都可以作为主要活性成分加至本发明的药剂中，最好的是经过基因工程改造后，由大肠杆菌表达后经分离纯化所得的产品。下面指出了最合适于本发明的几种CNTF类似物的氨基酸结构：

睫状神经营养因子类似物类似物序列1：

9	19	29	39	49
					AFTEHSPLT	PHRRDLASRS	IWLARKIRSD	LTALTESYVK	HQGLNKNINL
59	69	79	89	99
					DSADGMPVAS	TDRWSELTEA	ERLQENLQAY	RTFHVLLARL	LEDQQVHFTP
109	119	129	139	149
					TEGDFHQAIH	TLLLQVAAFA	YQIEELMILL	EYKIPRNEAD	GMPINVGDGG
159	169	179
					LFEKKLWGLK	VLQELSQWTV	RSIHDLRFIS	SHQTG

睫状神经营养因子类似物类似物序列2：

10	20	30	40	50
					MAFTEHSPLT	PHRRDLASRS	IWLARKIRSD	LTALTESYVK	HQGLNKNINL
60	70	80	90	100
					DSADGMPVAS	TDRWSELTEA	ERLQENLQAY	RTFHVLLARL	LEDQQVHFTP
110	120	130	140	150
					TEGDFHQAIH	TLLLQVAAFA	YQIEELMILL	EYKIPRNEAD	GMPINVGDGG
160	170	180
					LFEKKLWGLK	VLQELSQWTV	RSIHDLRFIS	SHQTG

睫状神经营养因子类似物类似物序列3：

10	20	30	40	50
					MAFTEHSPLT	PHRRDLCSRS	IWLARKIRSD	LTALTESYVK	HQGLNKNINL
60	70	80	90	100
					DSADGMPVAS	TDRWSELTEA	ERLQENLQAY	RTFHVLLARL	LEDQQVHFTP
110	120	130	140	150
					TEGDFHQAIH	TLLLQVAAFA	YQIEELMILL	EYKIPRNEAD	GMPINVGDGG
160	170	180
					LFEKKLWGLK	VLQELSQWTV	RSIHDLRFIS	SHQTGIP

但本发明并不仅限于这些结构的CNTF类似物。而且，本专利所提供的方法，也适用于那些通过基因工程方法进行类似蛋白质突变所获得的其他CNTF类似物。因为这些改变被专业人士认为是极其容易实现。因此在这方面的应用是受到本专利保护的。

目前，临床用于治疗肥胖症时使用睫状神经营养因子类似物的剂量极小，一般一次在1-500微克(最好为20-200微克)，连续使用一周以上(最好为10周以上)。因为给药时间较长，因此一般由病人带回家自行使用。

但是，睫状神经营养因子类似物作为蛋白本身稳定性并不好，虽然经过改造后比原来有所提高(Panayotatos；Nikos，1998，US 5846935)，但其活性在长期贮存时还是会受到多种环境因素的影响。例如温度，湿度，氧和紫外线高度敏感。由于这些因子的作用，可能发生多种物理或化学变化，例如结合，聚合，和氧化并且大大丧失活性。因此如果贮存期间睫状神经营养因子类似物的稳定性不能保证的话，会导致给药剂量的变化从而影响疗效。

因此设计一种稳定而且易于保存的睫状神经营养因子类似物制剂是极其必须的，它能够充分防止其有效组分活性下降。这就是本发明主要目标。

本发明人为了提高含有睫状神经营养因子类似物药剂的稳定性，进行了深入的研究并且发现如果从可药用的表面活性剂，合适的蛋白稳定剂(如糖、蛋白质、氨基酸及其衍生物、抗氧化剂和高分子化合物)和无机盐类中挑选至少一种加入制剂中，则可以有效达到这个目的。

本发明所提的表面活性剂、蛋白质稳定剂、无机盐类，在实际应用时可以只取其中一种，也可以几种物质组合使用。在本发明的基础上改变其浓度或加入其他一些物质，但对提高睫状神经营养因子类似物稳定性没有显著作用的改变，仍被视为本发明的一部分。

适用于本发明的表面活性剂典型例子叙述如下：

具有6-13HLB的非离子表面活性剂，例如脱水山梨醇脂肪酸酯，甘油脂肪酸酯(如脱水山梨糖醇辛酸单酯，脱水山梨糖醇月桂酸单酯和脱水山梨糖醇棕榈酸单酯)，聚甘油脂肪酸酯(例如甘油辛酸单酯，甘油肉豆蔻酸单脂霜和甘油硬脂肪酸单酯)，聚氧乙烯脱水山梨醇脂肪酸酯，聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯，聚氧乙烯甘油脂肪酸酯，聚氧乙烯乙二醇脂肪酸酯，聚氧乙烯烷基醚，聚氧乙烯聚氧丙烯烷基醚，聚氧乙烯苯醚，聚氧乙基化硬蓖麻油，聚氧乙基化蜂蜡衍生物，聚氧乙烯化羊毛脂衍生物或者聚氧乙烯脂肪酸酰胺，阳离子表面活性剂是烷基硫酸盐(如有一个C₁₀-C₁₈烷基的烷基硫酸盐)，聚乙烯烷基醚硫酸盐，磺基琥珀酸酯盐，天然表面活性剂是：卵磷脂，甘油磷脂，神经鞘磷脂，蔗糖脂肪酸酯等。当然这些表面活性剂既可以单独使用，可以混合用。

表面活性剂的添加量最好是按重量比与睫状神经营养因子类似物的比例在0.01-1000之间。

用于本发明制备的蛋白质稳定剂应是人体可接受的，可以是糖类、蛋白质、氨基酸及其衍生物和高分子化合物等。

其中的糖类可选择多种单糖，寡糖和多糖及磷脂和核苷酸衍生物。典型例子如下：三价和更高的蔗糖醇，例如甘油，，赤藓醇，阿糖醇，木糖醇，山梨醇和甘露糖醇；酸性糖例如葡萄糖醛酸，艾杜糖醛酸，神经氨糖酸，半乳糖醛酸，葡萄糖酮酸，甘露糖醛酸，透明质酸及其盐，硫酸软骨素及其盐，还有肝素，菊粉，几丁质及其衍生物，糊精，平均分子量为5000-1,50000的葡聚糖和海藻酸及其盐。这些糖类，可以单独添加，也可以联合使用。

糖类的添加量最好是按重量比与睫状神经营养因子类似物的比例在10-5000之间。

适用于本发明的蛋白质可以包括人血清白蛋白，人血清清蛋白，人血清球蛋白，明胶，平均分子量为5000-10,000的酸或碱处理过明胶，胶原蛋白。其中为了避免血源性污染，这些蛋白可以是天然提取，也可以是通过基因工程或其他方法等手段制备而得或得到的突变体。这些蛋白既可以单用也可以混合用。

所含蛋白质量，按重量比与睫状神经营养因子类似物的比例最好在1-5000之间。

适用于本发明的多肽、氨基酸及衍生物可以从从下述一组物质中选择而来的：谷胱甘肽、甘氨酸、丙氨酸、丝氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、苏氨酸、色氨酸、赖氨酸、羟赖氨酸、组氨酸、精氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、亮氨酸、异亮氨酸等以及它们的衍生物。其添加量按重量比与睫状神经营养因子类似物的比例在10-5000之间。

适用于本发明的高分子化合物典型例子包括天然多聚物例如羟丙基纤维素，羟甲基纤维素，羧甲基纤维素和羟乙基纤维素，合成的多聚物例如聚乙烯乙二酸(分子量在300-6,000)，聚乙烯醇(分子量在400-100,000)和聚乙烯吡咯烷酮(分子量在20,000-100,000)。当然这些高分子化合物既可以单用也可以混合用。

所含高分子化合物量，按重量比与睫状神经营养因子类似物的比例最好在1-5000之间。

除了上述表面活性剂，糖类，蛋白质，多肽和氨基酸或高分子化合物这些保护剂外，还可以从含硫还原剂和抗氧化剂类中选择至少一种加至本发明含有睫状神经营养因子类似物的药剂中。所指的含硫还原剂包括硫辛酸、硫二甘醇、硫乙醇胺、硫代硫酸盐，琉氢酸钠，焦亚硫酸钠，亚硫酸钠，二硫苏糖醇等。所提到的抗氧剂包括：异抗坏血酸，二丁羟甲苯，生育酚醋酸盐，L-抗坏血酸及其盐，l-抗坏血酸棕榈盐。L-抗坏血酸硬脂酸盐等。

含硫还原剂和抗氧化剂类的加量为按重量比与睫状神经营养因子类似物的比例在0.001-100之间。

本发明的药剂组合中，还可以加入多种无机盐类，来起到调节渗透压，维持pH，络合金属离子等作用。如加入氯化钠、氯化钾、尿素、磷酸盐、醋酸盐、柠檬酸盐、巴比妥盐、三羟甲基氨基甲烷、硼酸盐、琥珀酸盐、EDTA等。其添加量按重量比与睫状神经营养因子类似物的比例在0.01-1000之间。

为了以合适剂量形式配制本发明含睫状神经营养因子类似物的稳定制剂，还可以加入下列一种或多种试剂：稀释剂，助溶剂等，最合适的是注射用水。如果以水溶液形式制备，还可以加入一定量的防腐剂，如苯甲醇、三氯叔丁醇、尼泊金酯类等，以防止微生物的污染。

发明的稳定制剂最合适以非胃肠道方式使用，如皮下或静脉注射等。其最终制剂形式，可以是水针剂，也可以是冻干剂。冻干剂的稳定性较前者更佳。

上述这些药剂组成，可以选取一种加入，但更好的是可以选择几类物质组合加入，更能达到本发明的目的。比如：从表面活性剂，糖类，蛋白质或高分子化合物类物质中至少可选择一种加入，既可以防止睫状神经营养因子类似物吸附于容器壁或注射器上，而且可以在相当长时间内保持睫状神经营养因子类似物的稳定。利用上述物质稳定睫状神经营养因子类似物和防止吸附的详细机俐已部分清楚。在表面活性剂存在时，可以其疏水部分可以与睫状神经营养因子类似物结合而将其复盖，这样一来，既可以防止睫状神经营养因子类似物被吸附于容器壁和注射器上，也可以防止睫状神经营养因子类似物聚体的形成。糖类或亲水的高分子化合物在睫状神经营养因子类似物和容器及注射器壁之间形成水合层，因此可以有效防止吸附；蛋白则和睫状神经营养因子类似物竞争吸附于容器和注射器壁上，此可以有效抑制睫状神经营养因子类似物的吸附。氨基酸，肽类可能通过类似糖类机制起作用，含硫还原剂和抗氧化剂类可以保护睫状神经营养因子类似物侧链不被氧化而保持其生物学活性。

无机盐类主要起三方面的作用。第一，它提高了溶液的离子强度，既可以防止睫状神经营养因子类似物变性，也可以防止其与器壁吸附。第二，通过调节合适的渗透压使制剂易于为人体接受。第三，它可以维持一个合适的pH环境，有利于蛋白质的稳定。我们的研究发现在pH5-8之间，睫状神经营养因子类似物有较好的稳定性。

通过加入选自表面活性剂、蛋白质稳定剂、无机盐类的至少一种以上物质，睫状神经营养因子类似物高度稳定并可以长时间保持活性，这将在下面例子中得以证实。为了达到这一目的，这些物质中每一种的数量特别是表面活性剂蛋白质稳定剂的数量是关键的，如下的范围是理想的：按重量比每一份睫状神经营养因子类似物加入0.01-1000份表面活性剂，10-5000份糖，1-5000份蛋白质，1-5000份高分子化合物，10-5000份氨基酸及衍生物或肽类。此外，还可以添加无机盐类，最终使得制剂的渗透压在250-500mOsm，pH在4-9之间，最优的是5-8之间。

为了进一步阐明本发明，提供了下列例子，这些例子仅仅是为了进一步说明本发明，并不意味着作为一种限制。在这些例子中，采用下述任何一种方法都可以确定睫状神经营养因子类似物的剩余活性。

A)MTT法：

仪器

二氧化碳培养箱

超净工作台

离心机

酶标比色仪

MM-微型振荡器

试剂

(1)基本培养液：RPMI1640(GIBCOBRL公司)加10％胎血清，0.4mg/ml G-418

(2)完全培养液：基本培养液添加GIBCOBRL公司GM-CSF至2ng/ml。

(3)MTT溶液：MTT(Fluka公司)用磷酸盐缓冲液配成5.0mg/ml的溶液。用0.22um滤膜过滤除菌，4.C避光保存。

(4)溶解液：含0.01N HCl，10％SDS水溶液。

(5)细胞株：转染有CNTF受体α链的TF-1CNTF依赖细胞株，用完全培养液于37℃，5％CO₂条件下培养，间隔48-72hr传代，控制细胞浓度在1×10^5-6细胞/ml之间。

操作

(1)对照品和待检样品按蛋白含量用基本培养液稀释至2.0μg/ml，每步稀释不超过10倍。

(2)离心收集TF-1.CN5a.1细胞。用基本培养液洗两次，离心条件1000rpm，5分钟，重悬于基本培养液中，调整细胞浓度为2×10⁵细胞/ml。

(3)在96孔板上从1μg/ml向低浓度制备睫状神经营养因子类似物对照品和样品对倍稀释梯度，每个样品12个梯度，每个稀释度设2或3个复孔，每孔50μl，同时做空白对照，阴性对照和阳性对照(含GM-CSF 4μg/ml)各至少3孔。

(4)每孔加细胞悬液50μl，置37℃，5％CO₂，饱和湿度下培养72小时。细胞在培养终止前4小时加MTT溶液20μl/孔。

(4)培养终止后加溶解液100μl/孔，37℃过夜，待结晶完全溶解后，以空白对照调零，用酶标仪测定OD_570nm，参考波长为630nm。

结果计算

(1)以OD值为Y轴，板上稀释梯度的对数为X轴，作对照品和待检样品的量效关系散点图。利用Excel软件对实验结果进行回归分析，得到各样品的回归方程和相关系数。根据回归方程求出各样品的ED₅₀值。

(2)符合下述标准者本次实验成立，否则应重试：阳性对照均值和各样品最大OD值之间无显著差异，阴性对照均值和各样品最小OD值之间无显著差异，各样品回归系数之间无显著差异，各样品相关系数不小于0.90。

(3)按下式计算结果：

待检样品比活性(U/mg)＝对照品比活性(U/mg)×对照品 ED₅₀/待检样品ED₅₀

剩余的睫状神经营养因子类似物活性的比例按下述公式计算：

B)反相高效液相层析：

采用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以A相：三氟醋酸-水溶液(取1.0ml三氟醋酸加水999ml，摇匀)、B相：三氟醋酸-乙腈溶液(取1.0ml三氟醋酸加乙腈999ml，摇匀)为流动相，梯度洗脱，B相2、40分钟比例依次为30％、70％，检测波长214nm，理论板数不得低于2000。

剩余的睫状神经营养因子类似物活性的比例按下述公式计算：

两种方法测的睫状神经营养因子类似物剩余量有很好的相关性。

实施例1

表1列出的各种稳定剂加至0.2毫克/毫升的睫状神经营养因子类似物(其氨基酸组成同附图中的序列1)中，混合物中含10mM pH7.0磷酸盐缓冲液，无菌过滤后按0.5毫升/支密封于玻璃小瓶中。在不同条件下观察其变化。用方法(A)测定，结果见表1。其中“活性(％)”代表与起始相比的剩余睫状神经营养因子类似物活性量。

                            表1

稳定剂	数量(按重量比计)	活性(％)
				4℃保存3个月后	25℃保存1个月后
		甘露糖醇	500			89	85
山梨醇	500			88	83
		甘氨酸	200			89	83
半胱氨酸	200			81	74
		聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯	0.4			85	78

甘油	2000	95	92
				肝素	1000	82	77
海藻酸钠	200	89	84
				透明质酸	200	78	71
PEG6000	500	90	86
				人血清白蛋白	500	86	78
聚乙烯吡咯烷酮(50,000)	500	83	79
				羧甲基纤维素钠	200	82	77
谷胱甘肽(还原型)	200	78	73
				人血清白蛋白NaCl	50090	87	77
人血清白蛋白半胱氨酸	500100	90	81
				甘露糖醇抗坏血酸	50010	94	87
甘露糖醇聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯	5000.4	98	96
				甘露糖醇聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯抗坏血酸	5000.410	100	97
不加	-	79	68

实施例2

表2列出的数种稳定剂加至0.2毫克/毫升的睫状神经营养因子类似物(其氨基酸组成同附图中的序列2)中，混合物中含10mM不同pH的无机盐缓冲液，无菌过滤后按0.5毫升/支密封于瓶中。在不同条件下观察其变化。用方法(B)测定，结果见表2。

                                表2

稳定剂	数量(按重量比计)	溶液pH值	活性(％)
					4℃保存3个月后	25℃保存1个月后
			甘露糖醇聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯抗坏血酸乙酸盐缓冲液	5000.41010Mm			4.0	65	42
甘露糖醇聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯抗坏血酸乙酸盐缓冲液	5000.41010Mm	5.0			83	78
			甘露糖醇聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯抗坏血酸磷酸盐缓冲液	5000.41010Mm			6.0	95	92
甘露糖醇聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯抗坏血酸磷酸盐缓冲液	5000.41010Mm	7.0			100	97
			甘露糖醇聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯抗坏血酸磷酸盐缓冲液	5000.41010Mm			8.0	98	96
甘露糖醇聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯抗坏血酸甘氨酸-NaOH缓冲液	5000.41010Mm	9.0			93	90

实施例3

表3列出的各种稳定剂加至0.2毫克/毫升的睫状神经营养因子类似物(其氨基酸组成同附图中的序列1)中，混合物物中含20mM磷酸盐缓冲液中pH7.0，无菌过滤后按0.5毫升/支分装于玻璃小瓶中。再按下列程序冻干：在-35℃或低于-35℃冷冻4小时，接着进行第一次干燥10小时，从-35℃加热至-5℃，压力从0.015托增加至0.2托，然后进行第二次干燥，温度从-5℃加热至30℃，压力从0.2托将至0.05托，然后将消毒的干燥氮气充入小瓶内部，使其达到一个大气压，小瓶在无菌条件下将橡皮塞塞上，最后用铝盖密封。在不同条件下观察其变化。用方法(B)测定，结果见表3。

                        表3

稳定剂	数量(按重量比计)	活性(％)
				4℃保存6个月后	37℃保存1个月后
		甘露糖醇	500(5％)			91	86
山梨醇	500			92	86
		甘氨酸	200			92	87
半胱氨酸	200			86	74
		海藻酸钠	200			91	86
人血清白蛋白	500			95	91
		谷胱甘肽(还原型)	200			88	84
人血清白蛋白NaCl	50090			95	92
		人血清白蛋白半胱氨酸	500100			96	93
甘露糖醇抗坏血酸	50010			96	93
		甘露糖醇聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯	5000.4			97	96
甘露糖醇聚氧乙烯山梨醇脂肪酸酯抗坏血酸	5000.410			99	97
		不加	-			82	76

                            序列表

<110>杭州九源基因工程有限公司

<120>含有睫状神经营养因子类似物的稳定药剂

<160>3

<170>PatentIn version 3.1

<210>1

<211>184

<212>PRT

<213>人工序列

<400>1

Ala Phe Thr Glu His Ser Pro Leu Thr Pro His Arg Arg Asp Leu Ala

1                  5                       10                       15

Ser Arg Ser Ile Trp Leu Ala Arg Lys Ile Arg Ser Asp Leu Thr Ala

                20                      25                       30

Leu Thr Glu Ser Tyr Val Lys His Gln Gly Leu Asn Lys Asn Ile Asn

         35                      40                      45

Leu Asp Ser Ala Asp Gly Met Pro Val Ala Ser Thr Asp Arg Trp Ser

     50                     55                     60

Glu Leu Thr Glu Ala Glu Arg Leu Gln Glu Asn Leu Gln Ala Tyr Arg

65                     70                    75                       80

Thr Phe His Val Leu Leu Ala Arg Leu Leu Glu Asp Gln Gln Val His

                   85                    90                       95

Phe Thr Pro Thr Glu Gly Asp Phe His Gln Ala Ile His Thr Leu Leu

              100                    105                     110

Leu Gln Val Ala Ala Phe Ala Tyr Gln Ile Glu Glu Leu Met Ile Leu

         115                     120                     125

Leu Glu Tyr Lys Ile Pro Arg Asn Glu Ala Asp Gly Met Pro Ile Asn

     130                     135                    140

Val Gly Asp Gly Gly Leu Phe Glu Lys Lys Leu Trp Gly Leu Lys Val

145                    150                     155                    160

Leu Gln Glu Leu Ser Gln Trp Thr Val Arg Ser Ile His Asp Leu Arg

                  165                     170                    175

Phe Ile Ser Ser His Gln Thr Gly

                180

<210>2

<211>185

<212>PRT

<213>人工序列

<400>2

Met Ala Phe Thr Glu His Ser Pro Leu Thr Pro His Arg Arg Asp Leu

1                 5                       10                       15

Ala Ser Arg Ser Ile Trp Leu Ala Arg Lys Ile Arg Ser Asp Leu Thr

              20                        25                     30

Ala Leu Thr Glu Ser Tyr Val Lys His Gln Gly Leu Asn Lys Asn Ile

         35                      40                      45

Asn Leu Asp Ser Ala Asp Gly Met Pro Val Ala Ser Thr Asp Arg Trp

    50                     55                      60

Ser Glu Leu Thr Glu Ala Glu Arg Leu Gln Glu Asn Leu Gln Ala Tyr

65                     70                     75                   80

Arg Thr Phe His Val Leu Leu Ala Arg Leu Leu Glu Asp Gln Gln Val

                   85                    90                     95

His Phe Thr Pro Thr Glu Gly Asp Phe His Gln Ala Ile His Thr Leu

               100                   105                     110

Leu Leu Gln Val Ala Ala Phe Ala Tyr Gln Ile Glu Glu Leu Met Ile

         115                     120                    125

Leu Leu Glu Tyr Lys Ile Pro Arg Asn Glu Ala Asp Gly Met Pro Ile

    130                      135                    140

Asn Val Gly Asp Gly Gly Leu Phe Glu Lys Lys Leu Trp Gly Leu Lys

145                   150                     155                  160

Val Leu Gln Glu Leu Ser Gln Trp Thr Val Arg Ser Ile His Asp Leu

                  165                     170                   175

Arg Phe Ile Ser Ser His Gln Thr Gly

               180                   185

<210>3

<211>185

<212>PRT

<213>人工序列

<400>3

Met Ala Phe Thr Glu His Ser Pro Leu Thr Pro His Arg Arg Asp Leu

1                 5                       10                     15

Cys Ser Arg Ser Ile Trp Leu Ala Arg Lys Ile Arg Ser Asp Leu Thr

              20                      25                      30

Ala Leu Thr Glu Ser Tyr Val Lys His Gln Gly Leu Asn Lys Asn Ile

         35                      40                     45

Asn Leu Asp Ser Ala Asp Gly Met Pro Val Ala Ser Thr Asp Arg Trp

    50                     55                      60

Ser Glu Leu Thr Glu Ala Glu Arg Leu Gln Glu Asn Leu Gln Ala Tyr

65                     70                     75                   80

Arg Thr Phe His Val Leu Leu Ala Arg Leu Leu Glu Asp Gln Gln Val

                  85                     90                     95

His Phe Thr Pro Thr Glu Gly Asp Phe His Gln Ala Ile His Thr Leu

              100                    105                     110

Leu Leu Gln Val Ala Ala Phe Ala Tyr Gln Ile Glu Glu Leu Met Ile

        115                     120                     125

Leu Leu Glu Tyr Lys Ile Pro Arg Asn Glu Ala Asp Gly Met Pro Ile

    130                      135                    140

Asn Val Gly Asp Gly Gly Leu Phe Glu Lys Lys Leu Trp Gly Leu Lys

145                    150                    155                    160

Val Leu Gln Glu Leu Ser Gln Trp Thr Val Arg Ser Ile His Asp Leu

                  165                     170                     175

Arg Phe Ile Ser Ser His Gln Thr Gly

              180                     185

Claims (5)

1.一种含有睫状神经营养因子(Ciliary Neurotrophic Factor，CNTF)类似物的稳定药剂，其特征在于它除了睫状神经营养因子(CNTF)类似物作为有效成分外，还包括药物可接受的脱水山梨醇脂肪酸酯、甘露糖醇、L-抗坏血酸和磷酸盐，其溶液pH或重建后溶液pH在5-8之间，睫状神经营养因子类似物是指具有序列表中1-3号任意序列结构的蛋白。

2.根据权利要求1所述的一种含睫状神经营养因子类似物的稳定药剂，其特征在于所说的脱水山梨醇脂肪酸酯添加量按重量比与睫状神经营养因子类似物的比例在0.01-1000之间。

3.根据权利要求1所述的一种含睫状神经营养因子类似物的稳定药剂，其特征在于所说的甘露糖醇添加量按重量比与睫状神经营养因子类似物的比例在10-5000之间。

4.根据权利要求1所述的一种含有睫状神经营养因子类似物的稳定药剂，其特征在于所说的L一抗坏血酸添加量按重量比与睫状神经营养因子类似物的比例在0.001-100之间。

5.根据权利要求1所述的一种含有睫状神经营养因子类似物的稳定药剂，其特征在于所说的磷酸盐添加量按重量比与睫状神经营养因子类似物的比例在0.01-1000之间。