CN1263772C - 硫酸糖 - Google Patents

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Abstract

本发明提供了下述式[I]所示硫酸糖，或以所述硫酸糖作为其基本构成糖组分的硫酸多糖以及它们的盐，其中：R是OH或OSO3H；且n是1-5的整数。

Description

硫酸糖
技术领域
本发明涉及用作药物、糖链工程学研究试剂、化妆品等的源自海藻的硫酸糖和硫酸多糖。
现有技术
已知属于褐藻类的海藻含有硫酸多糖，已有报道其中硫酸岩藻糖是其基本构成糖组分的岩藻多糖的结构随着该褐藻类型的不同而有很大不同。
已有报道，源自硫酸多糖的硫酸糖随着褐藻类型的不同而有很大不同。
本发明所要解决的问题
本发明的目的是，提供用作试剂、药物等的具有新结构的硫酸糖和硫酸多糖。
解决该问题的手段
为了实现上述目的，本发明者们已经对源自褐藻的硫酸多糖进行了充分研究，已经建立了制备其中下述式[I]所示硫酸糖是其基本构成糖组分的硫酸多糖(在下文中称为“本发明硫酸多糖”)和所述硫酸糖的方法，并完成了本发明。
简言之，本发明涉及下述式[I]所示硫酸糖，或以所述硫酸糖作为其基本构成糖组分的硫酸多糖以及它们的盐。
Figure C9980190100031
其中：R是OH或OSO3H；且n是1-5的整数。
本发明第二个发明涉及制备被多阳离子物质交联的硫酸多糖的方法，其特征在于，包括在非破坏性条件下将硫酸多糖与多阳离子物质的交联物从藻类物质中提取出来的步骤。
本发明第三个发明涉及制备被多阳离子物质交联的硫酸多糖的方法，其特征在于，将具有比硫酸多糖溶液pH高的等电点的多阳离子物质加到所述溶液中。
本发明第四个发明涉及增强硫酸多糖粘弹性的方法，其特征在于，将多阳离子物质加到硫酸多糖中。
本发明第五个发明涉及含有至少一种具有低粘弹性的硫酸多糖和多阳离子物质的组合物。
本发明第六个发明涉及药物制剂，其特征在于，所述药物制剂含有被多阳离子物质交联的硫酸多糖作为有效成分。
本发明第七个特征涉及润滑剂，其特征在于，所述润滑剂含有被多阳离子物质交联的硫酸多糖作为有效成分。
本发明第八个特征涉及化妆品，其特征在于，所述化妆品含有被多阳离子物质交联的硫酸多糖作为有效成分。
另外，本申请涉及如下发明。
1.制备被蛋白质交联的含硫酸岩藻糖的硫酸多糖的方法，其特征在于，所述方法包括在非破坏性条件下将含硫酸岩藻糖的硫酸多糖与蛋白质的交联物从属于褐藻类的藻类中提取出来的步骤。
2.制备被蛋白质交联的含硫酸岩藻糖的硫酸多糖的方法，所述含硫酸岩藻糖的硫酸多糖来自属于褐藻类的藻类，其特征在于，将具有比含硫酸岩藻糖的硫酸多糖溶液pH高的等电点的蛋白质加到所述溶液中。
3.增强含硫酸岩藻糖的硫酸多糖粘弹性的方法，所述含硫酸岩藻糖的硫酸多糖来自属于褐藻类的藻类，其特征在于，将具有比含硫酸岩藻糖的硫酸多糖溶液pH高的等电点的蛋白质加到所述溶液中。
4.含有被蛋白质交联的含硫酸岩藻糖的硫酸多糖的组合物，其中，所述含硫酸岩藻糖的硫酸多糖来自属于褐藻类的藻类。
5.药物制剂，其特征在于，所述药物制剂含有被蛋白质交联的含硫酸岩藻糖的硫酸多糖作为有效成分，所述含硫酸岩藻糖的硫酸多糖来自属于褐藻类的藻类。
6.5的药物制剂，所述药物制剂是口内制剂。
7.润滑剂，其特征在于，所述润滑剂含有被蛋白质交联的含硫酸岩藻糖的硫酸多糖作为有效成分，所述含硫酸岩藻糖的硫酸多糖来自属于褐藻类的藻类。
8.化妆品，其特征在于，所述化妆品含有被蛋白质交联的含硫酸岩藻糖的硫酸多糖作为有效成分，所述含硫酸岩藻糖的硫酸多糖来自属于褐藻类的藻类。
附图的简要说明
附图1表示的是硫酸糖的质谱结果。
附图2表示的是硫酸糖的1H-NMR光谱。
附图3表示的是硫酸糖的1C-NMR光谱。
附图4表示的是no.67级分的1H-NMR光谱。
附图5表示的是本发明硫酸多糖的1H-NMR光谱。
附图6表示的是本发明硫酸多糖的IP光谱。
实施本发明的最佳方式
下面将具体阐明本发明。
对于本发明所用的褐藻类型没有特别限制，只要其含有本发明硫酸多糖即可。属于昆布目的海藻例如Kjellmaniella crassifolia、海带(Laminaria japonica)、Undaria pinnatifida、鹅掌菜(Eckloniakurome)、Eisenia bicyclis、Ecklonia cava、巨藻(giant kelp)、Lessonia nigrescens等是特别优选的原料，这是因为它们含有大量本发明硫酸多糖。
在制备本发明硫酸多糖过程中，使用含水溶剂从褐藻中提取到了硫酸多糖。用于提取的海藻可以是未加工藻类物质，或者可以在提取前将褐藻干燥或制成干燥粉末。
此外，当用60-100％醇、丙酮等洗涤干燥的藻类物质时，可显著减轻有色物质对本发明硫酸多糖的污染，因此，这有利于随后进行的本发明硫酸多糖的制备。
依据本发明从褐藻中提取硫酸多糖优选在乙醇存在下进行，可用含水溶剂、优选在5-40％乙醇存在下、更优选在8-15％乙醇存在下选择性地提取本发明硫酸多糖。
此外，当在从褐藻中提取本发明硫酸多糖的过程中使用能与藻酸形成沉淀的无机盐例如氯化钙或乙酸钙时，可显著减轻藻酸的混入，对于其后进行的纯化，这是有利的。
提取本发明硫酸多糖所采用的温度优选为50℃或50℃以下，在15-30℃是有利的。
提取所采用的pH可与温度有关，但是，因为本发明硫酸多糖对酸和碱不稳定，因此优选在约pH 6-8的中性范围内进行提取。
提取可在搅拌下进行，但是在非剪切条件下进行是最有利的，由此可高效率地制备本发明硫酸多糖。
上述褐藻提取物经常被杂质例如中性糖和蛋白质污染。利用其中分子量约为100000或100000以下的分子被排除的超滤法可容易地将中性糖除去。在除去蛋白质时，用蛋白质酶等处理是有效的。
在制备是得自本发明硫酸多糖的低分子物质的本发明硫酸糖时，用能通过选择性地作用于本发明硫酸多糖而释放出本发明硫酸糖的内硫酸多糖降解酶处理本发明硫酸多糖。对于所述内硫酸多糖降解酶无特别限定，其实例是由Alteromonas sp.SN-1009(FERM BP-5747)产生的内硫酸多糖降解酶(在下文实施例1-(1)中提及)。
用上述内硫酸多糖降解酶处理后，所得反应产物可直接使用，但是当用作药物或试剂时，建议从反应溶液中纯化本发明硫酸糖。可采用超滤进行纯化，或使用阴离子交换树脂、疏水色谱用树脂、凝胶过滤树脂等进行纯化。
可从通过用上述内硫酸多糖降解酶直接处理未加工褐藻而获得的降解产物纯化本发明硫酸糖，或者可从通过用上述内硫酸多糖降解酶处理干燥的海藻、醇洗海藻、含有本发明硫酸多糖的物质等而获得的降解产物纯化本发明硫酸糖。当在上述酶反应中结合从反应溶液中分离本发明硫酸糖的步骤时，可改善制备本发明硫酸糖的效率。
本发明硫酸糖的实例是其中在式[I]中n是1-5的多种硫酸糖，并且根据用上述内硫酸多糖降解酶处理本发明硫酸多糖的酶作用条件，可制备具有不同分子量的硫酸多糖。每一所得硫酸多糖可通过上述纯化手段从利用例如凝胶过滤或超滤将硫酸糖进行分子量分级而获得的分级产物中纯化。凝胶过滤的实例是，使用Cellulofine GCL-300来制备分子量为例如25000以上、＜10000-25000、＜5000-10000等的分级部分，另一实例是使用Cellulofine GCL-90将分子量为20000或20000以下的部分分离成分子量为例如＜15000-20000、＜10000-15000、＜5000-10000等的分级部分。
对于超滤，可以使用超滤膜和超滤用中空纤维制品。例如，分子量为30000或30000以下和分子量为6000或6000以下的分级部分可分别用FE10-FUS0382和FE-FUS-653(二者皆由Daicel制造)制得。当联合使用凝胶过滤和超滤时，可制得任意分子量的分级部分，并且可从所制得的分级部分中分离到所需硫酸糖。因此，本发明硫酸糖也包括其中在式[I]中n大于等于5的硫酸糖。
对于本发明硫酸多糖和硫酸糖的盐，它们是可药用盐，并且可通过常规方法制得。
通过本发明制得的硫酸多糖或其盐具有非常高的岩藻糖残基含量及其硫酸化度，并可用作研究含有硫酸岩藻糖的多糖的结构的试剂，还可用作研究含有硫酸岩藻糖的多糖的生理功能的试剂。
对于本发明硫酸多糖和本发明硫酸糖中的硫酸酯基团，硫酸酯基团的数目可随硫酸多糖提取条件和硫酸糖制备条件的不同而不同。例如，硫酸酯基团的酯键在酸性条件下通常很弱，而键和在岩藻糖2-位和3-位上的硫酸酯在碱性情况下很弱。因此，对于本发明硫酸多糖和本发明硫酸糖中的硫酸酯基团数目无特别限定，但是通过设定适宜条件，任一硫酸酯基团含量都是可能的。
由于岩藻糖残基中的甲基，本发明硫酸糖、硫酸多糖或它们的盐还表现出疏水性，因此其对多种碱性有机物质和蛋白质都具有高度亲和力。因此，本发明硫酸糖、硫酸多糖或它们的盐不仅具有高度持水能力，还由于其疏水性而对例如角质层具有高度亲和力，因此本发明硫酸糖、硫酸多糖或它们的盐可用作化妆物质。
本发明硫酸糖、硫酸多糖或它们的盐可通过与适用于美容剂的任意物质混合来使用。通常情况下，本发明硫酸糖、硫酸多糖或它们的盐可通过与水、醇、脂肪/油、脂肪酸、甘油、无机盐、防腐剂、表面活性剂、维生素、氨基酸、糖等物质混合而作为洗剂、洗面奶、霜剂等来使用。
含有本发明硫酸多糖的物质是从属于褐藻例如Kjellmaniellacrassifolia、海带(Laminaria japonica)、Undaria pinnatifida、鹅掌菜(Ecklonia kurome)、巨藻(giant kelp)、Lessonia nigrescens等的未加工或干燥的海藻、或者通过用含有60％或60％以上有机溶剂的溶液洗涤上述海藻而获得的产物(所有这些物质在下文中都称为“海藻原料”)中提取的。水、盐例如氯化钾和氯化钠的水溶液、和/或有机溶剂例如40％或40％以下乙醇等可用作提取液。例如，在50℃或50℃以下温度或在搅拌下，将上述海藻材料浸泡在上述提取液中以制备含有本发明硫酸多糖的物质。对于含有本发明硫酸多糖的物质无特别限定，只要其含有其中本发明硫酸糖是基本构成糖组分的硫酸多糖即可，在所得含有本发明硫酸多糖的物质中，除了本发明硫酸多糖以外，还有可能含有多糖、藻酸、氨基酸、糖醇、脂肪/油、无机盐、蛋白质等。由于本发明硫酸多糖的生理活性，含有本发明硫酸多糖的物质表现出病毒感染抑制活性、受精抑制活性、抗炎活性、抑制血管内皮瘤增厚活性、抑制血栓形成活性、清除血脂活性、降低血清胆固醇的活性、抗过敏活性等，因此可用作药物。由于本发明硫酸多糖的生理活性，含有本发明硫酸多糖的物质表现出润湿活性、抑制黑色素染料合成活性等，因此可用作美容剂。在含有本发明硫酸多糖的物质中含有的本发明硫酸多糖的实例是，含有岩藻糖作为其构成糖和约2分子硫酸酯基团/岩藻糖分子的硫酸多糖。所述硫酸多糖的硫酸酯基团可以与海水或提取物中存在的阳离子例如钠离子、钾离子、钙离子、镁离子、锌离子、锰离子、铁离子等(作为抗衡离子)结合。从海藻中提取的所述硫酸多糖通常与源自海藻且具有强粘弹性的蛋白质交联，因此通过凝胶过滤法测定分子量是不合适的。然而，当在高浓度盐例如1M或1M以上的氯化钠存在下搅拌1小时或更长时间时，交联键可裂解，就能测定所述硫酸多糖的分子量。当使用支链淀粉作为标准物时，测定的分子量约为10000000。
含有本发明硫酸多糖的物质还包括如下所述制得的被多阳离子物质交联的硫酸多糖。因此，被多阳离子物质交联的硫酸多糖是通过包括下述步骤的方法制得的：在非破坏性条件下将硫酸多糖与多阳离子物质的交联物从海藻中提取出来，或者提取出所述硫酸多糖的溶液，然后向其中加入具有比所述硫酸多糖溶液pH高的等电点的多阳离子物质。
硫酸多糖性质的实例有吸水性、持水性、粘性、纤维形成性、以及粘弹性，这些性质随从原料中提取条件的微小不同而有很大不同。虽然这些性质使得它们非常适于用作化妆品、润滑剂和湿润剂，但是难以以良好再现性制备这些硫酸多糖，并难以控制它们的性质。
因此，当把硫酸多糖用作化妆品、润滑剂、湿润剂或一些类型药物时，由于不能获得良好使用感觉和再现这些性质，会给它们的上市带来严重问题，除非在吸水性、持水性、粘弹性等方面有良好再现性。然而，依据本发明，能提供含有其中吸水性、持水性、粘弹性等是稳定的本发明硫酸多糖的物质，所述物质的制备方法和应用。
因此，本发明者们已经对本发明硫酸多糖和多阳离子物质例如蛋白质之间的相互作用进行了充分研究，并已发现，当硫酸多糖在一定条件下与多阳离子物质共存时，粘弹性有显著增加。
本发明者们还发现，包含在褐藻中的硫酸多糖以其天然形式与包含在褐藻中的蛋白质交联，并且可以获得含有具有高粘弹性、同时在一定条件下保持其交联的硫酸多糖的物质。
对于本发明硫酸多糖无特别限定，其实例有含有硫酸岩藻糖的多糖、硫酸葡聚糖、角叉菜胶、肝素、硫酸鼠李糖和硫酸软骨素。
对于本发明中的多阳离子物质没有特别限定，例如可以使用蛋白质、多肽、多胺、聚乙二胺、聚葡萄胺、聚半乳糖胺等多阳离子物质。
当在下述条件下将硫酸多糖与多阳离子物质进行交联时，可显著提高硫酸多糖的粘弹性：pH比所用硫酸多糖的等电点高，pH比所用多阳离子物质的等电点低，共存电解质的浓度足够低以使硫酸多糖与多阳离子物质的交联不被破坏，并且多阳离子物质的加入量比将硫酸多糖所有电荷都抵消所需的量要少。
当使用具有相当高等电点的蛋白质例如明胶或胶原来作为多阳离子物质时，就有许多正电荷，并且它们易于与硫酸多糖交联，因此，就容易给出粘弹性。然而，甚至当蛋白质具有相当低的等电点时，如果使硫酸多糖溶液的pH低于所用蛋白质的等电点时，也能给硫酸多糖提供类似于使用明胶和胶原所给出的强粘弹性。
可用藻类物质制备依据本发明被多阳离子物质交联的硫酸多糖。例如，对于包含在褐藻中的含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖，其提取效率与性质随提取方法的不同而有很大不同。
如果只是为了在短时间内获得大量含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖，当把藻类物质粉碎、并在加热或搅拌下用水或酸、盐、碱等的水溶液提取时，可容易地提取到含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖。
然而，由此制得的含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖具有较小分子量，并且与在藻类物质中存在的形式相比，几乎没有表现出任何粘弹性。因此，当用于化妆品时，虽然可以获得作为硫酸多糖的效果，但是没有任何特性例如粘性和光滑性，并且也几乎不能用作润滑剂。
然而，当在不高于50℃的温度下、或优选在不高于约30℃的温度下、将搅拌速度设定为几乎不产生剪切力例如使具有强粘弹性的提取物质不从藻类物质中分离出来，把藻类物质浸泡在近中性的水或水溶液中时，就可能提取出与该藻类物质中的蛋白质交联的含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖。
与蛋白质交联的含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖本身具有类似于新鲜鸡蛋蛋白质的性质，即粘弹性。
能相当容易地将蛋白质与含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖之间的交联分开。当将与蛋白质交联的含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖搅拌时，液体沿着搅拌轴卷起(魏森贝格效应)，但是当在剪切力很强的情况下长时间搅拌时，粘弹性就降低了，并且液体表面在与搅拌轴接触的区域变得相当空。此外，可通过加热、加入高浓度盐、用蛋白质酶处理来将蛋白质与含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖之间的交联分开，由此粘弹性就消失了。
按上述方法制备的、与蛋白质交联的、含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖的强粘弹性并不是含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖所固有的性质，而是当把含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖与蛋白质交联时所获得的性质。
因此，可将失去其粘弹性的含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖的粘弹性复原，当把多阳离子物质例如蛋白质加到所述含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖中时，可容易地将粘弹性复原。通过改变加入多阳离子物质例如蛋白质的量，还能将粘弹性调至任意程度。因此，本发明提供了加强硫酸多糖的粘弹性的方法，其特征在于，将多阳离子物质加到硫酸多糖中。
例如，当在下述条件下进行混合时，即其中pH比多阳离子物质例如蛋白质的等电点稍低，并且多阳离子物质以能使得硫酸多糖例如含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖的电荷没有被抵消的量加入，在多阳离子物质例如蛋白质的混合量与含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖的溶液的粘弹性之间有正相关。
不言而喻，当硫酸多糖例如含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖的溶液的pH比加入的多阳离子物质的等电点低很多，或者多阳离子物质的加入量非常高以至于其抵销了含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖的电荷时，就会形成沉淀，并且使粘弹性降低。
对于用于制备与蛋白质交联的含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖的海藻来说无特别限定，只要含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖，可使用任意种类的褐藻，例如Kjellmaniella crassifolia、Kjellmaniella gyrate(tangleflake)、海带(Laminaria japonica)、Ecklonia cava、Eisenia bicyclis、Undaria pinnatifida、海蕴(Nemacystus decipens)、Cladosiphonokamuranus等。
褐藻可以以任意形式使用，例如未加工海藻、干燥的海藻、盐化海藻等。
在依据本发明提取与蛋白质交联的含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖之前，当用约60-100％醇洗涤海藻时，可除去海藻粘附的盐、色素等。在依据本发明提取与蛋白质交联的含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖的过程中，可使用多种溶剂例如水、盐水、含醇水等。然而，盐具有将含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖与蛋白质之间的交联打开的作用，从而导致粘弹性降低，因此，盐的浓度优选为100mM或100mM以下。至于醇，优选使用30％或30％以下的醇。
提取温度优选为50℃或50℃以下，在5-30℃是有利的。在提取期间，可并进行搅拌，但是如果不将提取溶液搅拌，则需要进行长时间提取。当进行搅拌时，应当将搅拌速度选定为，使与蛋白质交联的含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖的粘弹性不能低于必要以上。然而，剪切力的强度对粘弹性的影响比搅拌速度对粘弹性的影响大很多，因此，优选在低搅拌速度、非剪切条件下进行提取。
可通过加入多阳离子物质例如明胶或胶原来将由搅拌导致的减小的粘弹性复原。
因此，当把多阳离子物质加到具有低粘弹性的硫酸多糖中时，可增强该硫酸多糖的粘弹性，并且可以提供含有至少一种具有低粘弹性的硫酸多糖和多阳离子物质作为构成组分的组合物。所述组合物作为具有强粘弹性的组合物具有多种用途，包括用作化妆品和润滑剂。
对于被多阳离子物质交联的硫酸多糖，可使用由此获得的提取物，或在进一步纯化后使用。
含有本发明被多阳离子物质交联的硫酸多糖作为有效成分的药物制剂例如口内制剂可这样制得，即使用本发明被多阳离子物质交联的硫酸多糖作为活性组分，并与已知药物载体混合。
当唾液分泌不足以致于口干并且开口和闭口很困难时，把本发明口内制剂置于个体口中可显著改善症状。
此外，本发明被多阳离子物质交联的硫酸多糖可用作润滑剂。本发明这种润滑剂非常平滑，具有良好润滑作用，当把各种医疗器械或药物******或***时，其表现出非常好的润滑作用。其还可以在***或按摩期间用作润滑剂。
本发明被多阳离子物质交联的硫酸多糖可通过与可用作美容剂的任意物质混合来使用。通常情况下，将其与水、醇、脂肪/油、脂肪酸、甘油、无机盐、防腐剂、表面活性剂、维生素、氨基酸、糖等物质混合而作为洗剂、洗面奶、霜剂等来使用。
当本发明被多阳离子物质交联的硫酸多糖用作化妆品时，由于其粘弹性它在使用时表现出光滑和良好感觉，并且当涂在皮肤上时，其粘质物被立即吸附到皮肤上。因此，涂敷后没有任何粘性，对于化妆来说这是非常可取的特性。当把含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖用作硫酸多糖时，上述优选特征是特别显著的。
本发明硫酸糖和本发明硫酸多糖可用作抗原。可通过常规方法制备抗体，例如，用本发明硫酸糖或本发明硫酸多糖与佐剂一起使动物例如兔子免疫，由此可制得多克隆抗体。单克隆抗体可这样制得，将黑素瘤细胞与产生抗体的B细胞(将抗原免疫以选择能产生所需抗体的杂交瘤)融合，然后把所述细胞培养。由此制得的抗体可用于纯化本发明硫酸糖或本发明硫酸多糖。其还可用于在海藻中鉴定本发明硫酸多糖。例如，当使用本发明抗体时，可容易地测得本发明硫酸多糖在海藻提取物中的含量，因此能高效地制备含有高含量本发明硫酸多糖的提取物。因此，我们发现，在例如Kjellmaniella crassifolia、Lessonia nigrescens、海带(Laminaria japonica)等的提取物中含有高含量的本发明硫酸多糖，所以在工业上能高效地制备硫酸多糖。此外，能识别本发明硫酸糖或本发明硫酸多糖的抗体可用于搞清楚本发明硫酸糖或本发明硫酸多糖的生理功能。因此，例如，其可用于分析本发明硫酸糖或本发明硫酸多糖的抑制受精功能、抑制病毒感染功能、体内新陈代谢功能等。
本发明硫酸糖可用作糖链工程学用物质，当通过日本特公平5-65108中公开的方法将其进行2-氨基吡啶化以制备其2-氨基吡啶基衍生物时，就能提供非常适于用作糖链工程学用物质的物质。
此外，能制备含有本发明硫酸糖和/或本发明硫酸多糖作为有效成分的制剂，例如抗肿瘤剂、癌转移抑制剂、抗病毒剂、受精抑制剂、抗炎剂、内膜增生抑制剂、血栓形成抑制剂、血脂清除剂、血清胆固醇降低剂等药物。这些药物可用于治疗或预防需要将这些药物给药的疾病。含有本发明硫酸多糖的物质也可以用于制备这些药物。本发明还能提供具有上述生理活性的食品或饮料，其中包含选自本发明硫酸糖、本发明硫酸多糖、和含有本发明硫酸多糖的物质，或将所述物质稀释在所述食品或饮料中，或将所述物质加到所述食品和饮料中。此外，本发明还能提供包含选自本发明硫酸糖、本发明硫酸多糖、和含有本发明硫酸多糖的物质的化妆品。
                        实施例
下面通过下述实施例来更具体地举例说明本发明，但是本发明并不仅限于这些实施例所覆盖的范围。
实施例1
(1)将Alteromonas sp.SN-1009(FERM BP-5747)接种到含有600ml培养基(在120℃灭菌20分钟)(pH8.2)的两升锥形瓶中，其中所述培养基由含有0.25％葡萄糖、1.0％胨和0.05％酵母提取物的人造海水(Jamarin Laboratory出产)组成，在25℃培养26小时，以生成接种培养基。将由含有1.0％胨、0.02％酵母提取物、0.2％在下述实施例中提及的硫酸多糖、和0.01％防沫剂(KM 70，由Shin-Etsu ChemicalIndustry出产)的人造海水(pH8.0)组成的培养基置于30升广口瓶发酵器中，并在120℃灭菌20分钟。冷却后，将600毫升上述制备的接种培养基接种，并在换气10升/分钟和250rpm的搅拌下于24℃培养24小时。培养完成后，将培养基离心，以给出细胞和上清液。把所得上清液通过装配有排除分子量为10000的中空纤维的超滤***浓缩，并用硫酸铵(85％饱和度)盐析，通过离心分离收集所得沉淀物，并用含有1/10浓度人造海水的Tris-HCl缓冲液(pH8.2)透析，以获得能选择性地作用于本发明硫酸多糖的600ml内硫酸多糖降解酶。
(2)用装配有具有直径为1mm网眼的筛网的剪切碾磨机(由MasukoSangyo出产)将干燥的Kjellmaniella crassifolia(2kg)粉碎，把所得海带碎片悬浮在20升80％乙醇中，并在25℃搅拌3小时，用滤纸过滤，把残余物充分洗涤。将所得残余物悬浮在含有上述实施例1-(1)中制备的内硫酸多糖降解酶、10％乙醇、100mM氯化钠、50mM氯化钙和50mM咪唑的20升缓冲液(pH8.2)中，把所得悬浮液在25℃搅拌48小时。将悬浮液通过具有32μm网眼的不锈钢金属丝网过滤，并用含有50mM氯化钙的10％乙醇洗涤。将所得残余物再悬浮在10升含50mM氯化钙的10％乙醇中，搅拌3小时，通过不锈钢金属丝网过滤，然后洗涤。之后，将所得残余物在同一条件下再次悬浮，搅拌16小时，并通过直径为32μm的不锈钢金属丝网过滤，然后洗涤。
收集所得滤液和洗涤液，并流过装配有排除分子量为3000的中空纤维的超滤***，以分离成滤液和非滤液。
用旋转蒸发仪将滤液浓缩至约3升，并离心以获得上清液。用装配有排除分子量为300的膜的电透析器将所得上清液脱盐，向其中加入乙酸钙以使乙酸钙浓度为0.1M，通过离心除去生成的沉淀物。把上清液置于用50mM乙酸钙预平衡的DEAE-Cellulofine(树脂量：4升)，用50mM乙酸钙和50mM氯化钠充分洗涤，并用梯度为50mM-800mM的氯化钠洗脱。每管洗脱收集500ml洗脱液。通过乙酸纤维膜电泳法(《分析生物化学》(Analytical Biochemistry)，37，197-202(1970))分析收集部分，结果发现，其中硫酸钠浓度约为0.4M(no.63级分附近)的洗脱下来的硫酸糖是均质的。此外，在约0.6M(no.67级分附近)浓度洗脱下来的硫酸糖在电泳方面几乎是均质的。
因此，首先将no.63级分浓缩至150ml，向其中加入氯化钠以使氯化钠浓度为4M，置于用4M氯化钠预平衡的Phenyl-Cellulofine(树脂量：200ml)，用4M氯化钠充分洗涤。收集未吸附的硫酸糖部分，用装配有排除分子量为300的膜的电透析器进行脱盐，获得了505ml脱盐溶液。
将40ml所得脱盐溶液置于用含有10％乙醇的0.2M氯化钠预平衡的Cellulofine GCL-90柱(4.1cm×87cm)以进行凝胶过滤。以每级分9.2ml的速度进行收集。
通过苯酚-硫酸法(《分析化学》(Analytical Chemistry)，28，350(1956))来测定所有级分中糖的总量。
结果是，硫酸糖形成了峰值，收集所述峰值的中间部分(nos.63-70级分)，用装配有排除分子量为300的膜的电透析器进行脱盐，并冷冻干燥，获得了112mg本发明硫酸糖干燥产物。
把该干燥产物部分进行糖组成分析和质谱分析。
此外，通过常规方法将10mg该干燥产物用重水取代，并进行NMR分析。
糖组成分析结果是，所得硫酸糖仅由岩藻糖构成。
用API-III质谱仪(Perkin-Elmer Sciex)测得的硫酸糖的质谱结果如附图1所示，分析结果如下。因此，附图1是表明硫酸糖质谱结果的图，其中纵坐标表示相对强度(％)，横坐标表示m/z值。
对于分子量，当所有硫酸酯基团都呈钠盐形式时，结果是2264±1。因此，既然硫酸糖的构成糖仅是岩藻糖，已经发现，有7个岩藻糖分子和12个硫酸酯基团结合在一起，所有硫酸酯基团都呈钠盐形式，并且理论分子量为2265。
因此，当以“M”表示该物质时，附图1中主要信号的赋值如下：m/z 1109.09---[M-2Na+]2-(计算值：1109.5)
731.45---[M-3Na+]3-(计算值：732)
542.75---[M-4Na+]4-(计算值：543.25)
430.05---[M-5Na+]5-(计算值：430)
结果是，该物质是由7个岩藻糖分子和12个硫酸酯基团构成的低聚糖。
然后，为了测定岩藻糖的结合形式以及与硫酸酯基团的结合位点，用核磁共振仪(JNM-α500；由Nippon Denshi出产)进行NMR分析。通过HMBC法分析构成糖的结合形式，HMBC法是1H-检测异核探测法。对于1H-NMR赋值，使用DQF-COSY法和HOHAHA法，对于13C-NMR赋值，使用HSQC法。
NMR的赋值结果如下，本发明硫酸糖的1H-NMR光谱和13C-NMR光谱分别如附图2和附图3所示。对于在1H-NMR中的化学位移，二氧杂环己烷的化学位移值为3.53ppm，对于13C-NMR，二氧杂环己烷的化学位移值为66.5ppm。二者都是在60℃进行测定的。因此，附图2是表示本发明硫酸多糖1H-NMR光谱的图，附图3是表明本发明硫酸糖13C-NMR光谱的图。在附图2和附图3中，纵坐标和横坐标分别表示信号强度和化学位移值(ppm)。
1H-NMR(D2O)
δ5.30(1H，d，J＝3.1Hz，A-1-H)，5.23(1H，d，J＝3.4Hz，B-1-H)，5.20(1H，d，J＝3.4Hz，E-1-H)，5.19(1H，d，J＝3.7Hz，F-1-H)，5.18(1H，d，J＝2.8Hz，C-1-H)，5.16(1H，br-s，D-1-H)，5.09(1H，d，J＝4.3Hz，G-1-H)，4.72(1H，d，J＝2.4Hz，B-4-H)，4.67(1H，t，J＝2.3Hz，A-4-H)，4.65(1H，m，E-4-H)，4.64(1H，m，D-4-H)，4.62(1H，m，C-4-H)，4.49(1H，d，J＝3.1Hz，F-4-H)，4.37(1H，m，E-2-H)，4.36(1H，m，G-3-H)，4.35(1H，m，C-2-H)，4.33(1H，m，B-2-H)，4.32(1H，m，C-3-H)，4.30(1H，m，A-2-H)，4.27(1H，m，F-2-H)，4.27(1H，m，F-5-H)，4.25(1H，m，D-5-H)，4.24(1H，m，C-5-H)，4.21(1H，m，E-5-H)，4.18(1H，m，B-3-H)，4.18(1H，m，F-3-H)，4.17(1H，m，A-3-H)，4.17(1H，m，E-3-H)，4.16(1H，m，D-3-H)，4.14(1H，m，A-5-H)，4.10(1H，m，B-5-H)，3.98(1H，m，D-2-H)，3.97(1H，m，G-4-H)，3.96(1H，m，G-5-H)，3.78(1H，d-d，J＝4.3，10.4Hz，G-2-H)，1.34(3H，d，J＝7.0Hz，H3 of D-5-CH3)，1.15(3H，d，J＝6.7Hz，H3 of E-5-CH3)，1.12(3H，d，J＝6.7Hz，H3of A-5-CH3)，1.11(3H，d，J＝6.7Hz，H3 of C-5-CH3)，1.08(3H，d，J＝6.7Hz，H3 of B-5-CH3)，1.06(3H，d，J＝6.4Hz，H3 of F-5-CH3)，1.04(3H，d，J＝6.7Hz，H3 of G-5-CH3)
13C-NMR(D2O)
δ99.2(G-1-C)，98.9(C-1-C)，98.3(B-1-C)，97.1(E-1-C)，94.6(F-1-C)，89.3(A-1-C)，89.3(D-1-C)，81.3(F-4-C)，80.6(B-4-C)，78.6(A-4-C)，77.9(G-3-C)，77.5(C-4-C)，77.4(E-4-C)，75.9(B-3-C)，75.4(A-2-C)，74.8(F-2-C)，74.5(B-2-C)，74.2(D-3-C)，73.9(A-3-C)，73.9(D-2-C)，73.6(C-2-C)，73.0(D-4-C)，73.0(E-2-C)，70.9(C-3-C)，70.6(D-5-C)，70.1(G-4-C)，69.9(E-3-C)，68.0(B-5-C)，67.5(A-5-C)，67.5(E-5-C)，66.9(C-5-C)，66.7(G-5-C)，66.5(F-3-C)，66.3(F-5-C)，65.6(G-2-C)，16.0(C of C-5-CH3)，15.9(C of B-5-CH3)，15.8(C ofE-5-CH3)，15.8(C of F-5-CH3)，15.4(C of G-5-CH3)，15.3(C ofA-5-CH3)，13.1(C of D-5-CH3)
NMR峰的赋值的编号如下述式[II]所示。
Figure C9980190100191
从上述结果中可知，该物质是式[III]所示硫酸糖。
(3)按照与no.63级分完全相同的方式将在实施例1-(2)中提及的DEAE-Cellulofine的no.67级分纯化，以获得冷冻干燥产物。
HPLC的分析结果是，所得产物是具有比no.63更高分子量的硫酸多糖，依据NMR分析结果，其光谱与no.63几乎相同。
附图4表示的是no.67的1H-NMR光谱，其中使用重水作为溶剂，并且在1H-NMR中的化学位移以其中二氧杂环己烷的化学位移值是3.53ppm的方式表示。在60℃进行测定。因此，附图4是表示no.67的1H-NMR光谱的图，其中纵坐标表示的是信号强度，横坐标表示的是化学位移值(ppm)。
结果强烈地表明，no.67具有其中几个no.63分子被结合的结构。因此，用在实施例1-(1)中提及的内硫酸多糖降解酶将no.67降解，并通过HPLC分析该降解产物，因此有许多反应产物被洗脱至与实施例1-(2)中提及的DEAE-Cellulofine的no.63中获得的硫酸多糖相同的位置。
HPLC的分析条件如下：
柱：Shodex SB 802.5
柱温：25℃
溶液：含有5mM叠氮化钠的50mM氯化钠
检测：示差折射率检测器(Shodex RI-71)。
当用支链淀粉(由Showa Denko出产)作为标准物、通过凝胶过滤法测定上述no.67和no.63的分子量时，no.63具有基于支链淀粉的约8500的分子量，no.67具有约26000的分子量，由此发现no.67是no.63硫酸糖的三聚体。
对于7个糖残基的重复结合位点，详细地检查no.67级分的1H-NMR光谱，结果发现在式[II]中F岩藻糖的3位通过α-(1→3)键结合。
按类似方式制备式[III]所示硫酸糖的五聚体，即本发明硫酸多糖降解产物中的硫酸糖(在式[I]中n＝5)。
实施例2
(1)用装配有具有直径为1mm网眼的筛网的剪切碾磨机(由MasukoSangyo出产)将干燥的Kjellmaniella crassifolia(2kg)粉碎，把所得海带碎片悬浮在20升80％乙醇中，并在25℃搅拌3小时，用滤纸过滤，把残余物充分洗涤。将所得残余物悬浮在含有50mM氯化钠并加热至95℃的40升20mM磷酸钠缓冲液(pH6.5)中，在偶尔搅拌下将该悬浮液在95℃加热2小时以提取硫酸多糖。
将提取物中的悬浮物过滤，获得了滤液，将过滤后的残余物用3.5升100mM氯化钠洗涤，获得了另一份滤液。
将这两份滤液合并，冷却至30℃，加入3000单位的藻酸裂合酶(由Nagase Seikagaku Kogyo出产)，然后加入4升乙醇，将该混合物在25℃搅拌24小时。离心，把所得上清液通过装配有排除分子量为100000的中空纤维的超滤***浓缩至4升，然后用含有10％乙醇的100mM氯化钠继续进行超滤，直至不再有有色物质被滤出为止。
将在非滤液中形成的沉淀物通过离心除去，把上清液冷却至5℃，并用0.5N盐酸将pH调节至pH2.0，通过离心将由蛋白质等组成的沉淀物除去，用1N氢氧化钠将所得上清液的pH迅速调至pH8.0。
然后用装配有排除分子量为100000的中空纤维的超滤***进行超滤，将溶剂用pH为8.0的20mM氯化钠完全替代，然后再次将pH调节至8.0，进行离心，冷冻干燥，制得了约95g硫酸多糖。
(2)将10克实施例2-(1)中提及的干燥的硫酸多糖溶解在含有100mM氯化钠、50mM氯化钙和50mM咪唑的缓冲液(pH 8.0)中，向其中加入20ml在实施例1-(1)中提及的内硫酸多糖降解酶，把该混合物在25℃反应24小时，用排除分子量为3500的透析管将反应溶液全透析，将该透析液(低分子量物质)浓缩，并通过装配有排除分子量为300的膜的电透析器脱盐，将一部分脱盐液用Cellulofine GCL-90(4.1×87cm)进行凝胶过滤。每管收集10ml。
通过乙酸纤维膜电泳法和HPLC分析接近no.63的级分，结果发现，其表现出与实施例1-(2)提及的具有结构[III]的硫酸糖相同的特征。因此，式[III]所示硫酸糖是由硫酸多糖制得的。按类似方式制备式[III]所示硫酸多糖的三聚体和五聚体，即在式[I]中n分别是3和5的硫酸糖。
实施例3
按下述方式制备溶液(10升)，即将实施例2-(1)中提及的硫酸多糖溶解在含有100mM氯化钠、50mM氯化钙和50mM咪唑的缓冲液(pH8.0)中，其中使该硫酸多糖的浓度为5g/升。将30ml在实施例1-(1)中提及的内硫酸多糖降解酶加到2升所述硫酸多糖溶液中，用装配有排除分子量为3000的中空纤维的超滤***处理该混合物，并在25℃进行操作，过滤速度为200ml/小时。在操作期间，将上述硫酸多糖溶液以与滤液相同的量加到该酶反应溶液中。加入硫酸多糖溶液后，仅加入上述缓冲液。
之后，进行与实施例1-(2)中相同的操作将滤液浓缩和离心，将所得上清液脱盐，通过乙酸钙形成了沉淀物，通过离心获得了上清液。按照与实施例1-(2)中相同的方式，用DEAE-Cellulofine纯化所得上清液，以制备式[III]所示硫酸糖。
实施例4
将Kjellmaniella crassifolia(500g)切成碎片，用10升80％乙醇洗涤，在50升含有1mM氯化钾的10％乙醇中于25℃搅拌3天，通过具有32μm网眼的不锈钢金属丝网过滤，以获得本发明硫酸多糖提取物。
将100ml所示提取物置于排除分子量为12000的透析管中，用5升水透析2次。将未透析部分冷冻干燥，以获得本发明硫酸多糖，并测定本发明硫酸多糖的1H-NMR光谱(附图5)和红外光谱(IR)(附图6)。因此，附图5是表示本发明硫酸多糖1H-NMR光谱的图，其中纵坐标是表示信号强度，横坐标是表示化学位移值(ppm)。使用重水作为溶剂，对于1H-NMR中的化学位移，HOD的化学位移值表示为4.65ppm。附图6是表示通过KBr法测定的本发明硫酸多糖IR光谱的图，其中纵坐标表示的是透光度(％)，横坐标表示的是波数(cm-1)。IR光谱是用FTIR-8000PC红外分光光度计(由Shimadzu)测定的。
如附图5所示，本发明硫酸多糖的1H-NMR光谱与附图4所示的硫酸糖的1H-NMR光谱几乎相同。因此，本发明硫酸多糖是其中式[I]所示硫酸糖是其基本构成糖的硫酸多糖。
将4M氯化钠加到本发明硫酸多糖提取物中，将混合物在剧烈搅拌下混合，将终浓度调节为1M氯化钠溶液，通过HPLC分析来测定本发明硫酸多糖的分子量。本发明硫酸多糖具有基于标准物支链淀粉的约13000000的平均分子量。HPLC条件如下：
仪器：L-6200型HPLC(Hitachi出产)
柱：Shodex SB-806HQ(8×300mm)(Showa Denko出产)
洗脱液：50mM氯化钠
检测：示差折射率检测器，Shodex RI-71(Showa Denko出产)
柱温：25℃
当用在实施例1-(1)中提及的内硫酸多糖降解酶处理本发明硫酸多糖溶液时，检测到了式[I]所示硫酸糖。
实施例5
将Kjellmaniella crassifolia(500g)切成碎片，用10升80％乙醇洗涤，在内径为40cm的容器中，在50升含有1mM氯化钾的10％乙醇中于25℃以200rpm的速度搅拌2天，以提取本发明被海藻蛋白质交联的含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖。提取物具有强粘弹性，并表现出其中提取物沿着搅拌轴卷起的魏森贝格效应。含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖在Kjellmaniella crassifolia中的含量一般最多是占干燥海藻的约5％，因此，含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖在该提取物中的含量最多为0.05％。
然而，市售的含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖的水溶液(Fucoidan；Sigma出产)不仅在0.05％浓度不表现出任何粘弹性，而且即使在高达2％的浓度也是如此，并且表现出与本发明与蛋白质交联的含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖完全不同的特征。
当通过蛋白质分析仪(Bio-Rad制造)测定该提取物的蛋白质含量时，结果发现是7.5μg/ml。
当用Activenase E(一种蛋白质酶，Kaken Pharmaceutical出产)以0.1mg/ml浓度处理该提取物时，提取物的粘弹性有显著下降。
此外，当用10μl含有由Alteromonas sp.SN-1009(FERM BP-5747)生产的含有硫酸岩藻糖的多糖内降解酶的溶液处理5ml该提取物时，粘弹性完全消失了。
从上述结果可知，引起褐藻提取物粘弹性的物质是与蛋白质交联的含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖，并且当在特定条件下提取褐藻的含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖时，可高效率地提取到本发明被蛋白质交联的含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖。
当把所得提取物涂敷在皮肤上时，首先注意到强的粘性，但是当将其轻微摩擦时，粘性就被吸附到皮肤中，使得没有任何粘着性，并且皮肤润湿了，因此该提取物非常适于用作皮肤养护化妆品。
实施例6
(1)将Kjellmaniella crassifolia(50g)切成碎片，用2升80％乙醇洗涤，在内径为20cm的容器中，在5升含有1mM氯化钾和0.075％对羟基苯甲酸乙酯的水溶液中于25℃以200rpm的速度搅拌2天，以提取本发明被蛋白质交联的含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖。
该提取物具有强粘弹性，并表现出其中提取物沿着搅拌轴卷起的魏森贝格效应。该提取物的性质与实施例5提取物相同。对于其皮肤对乙醇敏感的人来说，该提取物是有效的化妆品。
(2)用装配有具有直径为1mm网眼的筛网的剪切碾磨机(由MasukoSangyo出产)将干燥的Kjellmaniella crassifolia(2kg)粉碎，把所得海带碎片悬浮在20升80％乙醇中，把所得悬浮液在25℃搅拌3小时，用滤纸过滤，把残余物充分洗涤。将所得残余物悬浮在含有50mM氯化钠并加热至95℃的40升20mM磷酸钠缓冲液(pH6.5)中，在偶尔搅拌下将该悬浮液在95℃加热2小时以提取含有硫酸岩藻糖的硫酸多糖。
将提取物中的悬浮物过滤，获得了滤液，将过滤后的残余物用3.5升100mM氯化钠洗涤，获得了另一份滤液。将由此制得的提取物冷却至25℃。与实施例5和实施例6-(1)中提及的提取物相比，该提取物含有更多的含硫酸岩藻糖的硫酸多糖，但是没有表现出粘弹性。此外，甚至通过装配有排除分子量为100000的中空纤维的超滤***全脱盐后，该提取物也没有表现出强粘弹性，虽然其表现出对硫酸多糖呈特异性的粘性。因此，已经发现，当提取温度太高时，不能制得本发明与蛋白质交联的含硫酸岩藻糖的硫酸多糖。
(3)将Kjellmaniella crassifolia(500g)切成碎片，用10升80％乙醇洗涤，在内径为40cm的容器中，在50升含有1mM氯化钾的10％乙醇中于25℃以800rpm的速度搅拌2天，以提取含硫酸岩藻糖的硫酸多糖。该提取物的粘弹性很弱，而且在搅拌期间，没有观察到魏森贝格效应。当涂敷在皮肤上时，虽然该提取物表现出对含硫酸岩藻糖的硫酸多糖呈特异性的润湿作用，但是其具有很小的对本发明与蛋白质交联的含硫酸岩藻糖的硫酸多糖呈特异性的粘性，并且实际使用时的感觉完全不同。然而，其中含有的蛋白质的浓度为7.5μg/ml，与实施例5提取物中的蛋白质浓度相同。因此，已经发现，当搅拌速度太快时，或者换句话说，当搅拌施加的剪切力太大时，蛋白质与含硫酸岩藻糖的硫酸多糖之间的交联被破坏了。
(4)当把实施例6-(1)中获得的提取物在内径为20cm的容器中以600rpm的速度在室温搅拌18小时时，相对粘弹性从2.0降到了1.2。当把不同量的1％明胶水溶液加到粘弹性降低的含硫酸岩藻糖的硫酸多糖中时，粘弹性复原了。粘弹性与明胶终浓度之间的关系如下表1所示。
在下表1中，以相对值表示粘弹性。因此，当测试溶液通过重力从内径为2mm的硅氧烷管垂直流下，并且通过玻璃棒将流到距离出口约1-5cm的测试溶液沿水平方向推动时，将在没有切断流动液情况下所能推动的最大距离(cm)定义为相对粘弹性。从测试溶液的液面到测试溶液出口的距离为20-21cm，水的相对粘弹性为0。
                 表1
  明胶的终浓度(％)   相对粘弹性
  00.010.0120.020.030.05   1.21.81.83.51.50
从上述结果可知，通过强剪切力搅拌，本发明与褐藻蛋白质交联的含硫酸岩藻糖的硫酸多糖的粘弹性降低了，但是当在适当pH或在适当盐浓度条件下加入适当量明胶时，可将粘弹性复原，由此可获得粘弹性产物。粘弹性产物具有表现出透明冻胶状外观的类溶胶性状。
当加入的明胶的量太多时，粘弹性消失了，因此，已经发现，明胶增加或减少的量取决于含硫酸岩藻糖的硫酸多糖的量。
实施例7
当把实施例5提取物涂到其中唾液分泌不足以致于口非常干燥并难以开口和闭口、而且没有任何制剂能改善该症状的80岁女士的口中时，口干燥、嘴唇裂口等得到了改善，并且开口和闭口的困难也得到了很大改善。此外，甚至当该提取物涂敷3个月或更长的连续时间时，该效果也维持下来。
实施例8
(1)将Kjellmaniella crassifolia(500g)切成碎片，用10升80％乙醇洗涤，在内径为40cm的容器中，在50升含有1mM氯化钾的10％乙醇中于25℃以120rpm的速度搅拌2天，以提取含硫酸岩藻糖的硫酸多糖。该提取物具有强的粘弹性，而且表现出其中提取物沿着搅拌轴卷动的魏森贝格效应。将该提取物通过具有32μm网眼的不锈钢金属丝网过滤，制备具有强粘弹性的含硫酸岩藻糖的硫酸多糖的溶液。
在搅拌下，将1升棕榈油溶液(将1g棕榈油(Kao出产，化妆用棕榈油)溶解在1升乙醇中)加到46升含有含硫酸岩藻糖的硫酸多糖的溶液中，然后向其中加入1升甘油，以制备化妆洗剂。所得化妆洗剂既表现出润湿作用(由于含硫酸岩藻糖的硫酸多糖的强粘弹性)，又表现出抗干作用(由于棕榈油的作用)，其中棕榈油是均匀分散，并不加入洗涤剂，因此所述化妆洗剂具有很好的使用感觉，没有油粘性，并具有良好展开性。
按照类似方法，用椰子油(Kao出产，化妆用椰子油)代替棕榈油制备另一化妆洗剂，结果发现所得化妆洗剂也具有良好使用感觉。
(2)将明胶和香料加到实施例6-(3)提取物中使其终浓度为0.02％，由此制得了含有明胶的化妆洗剂。以类似方式通过加入胶原制得了含有胶原的化妆洗剂。每一化妆溶液都含有具有高粘弹性的含硫酸岩藻糖的硫酸多糖，向其中加入蛋白质所导致的协同结果是，该化妆洗剂具有优良润湿性能和良好的展开性。
这样，当使用上述化妆洗剂时，由于其粘弹性，使得使用感觉良好并具有光滑触摸感，此外，当以适当量涂敷在皮肤上时，其表现出粘性被迅速吸附到皮肤中的性质。另外，其使用后无任何粘着性，作为化妆品这是非常有益的性质。
实施例9
将在实施例4中制备的本发明硫酸多糖提取物用作化妆洗剂。当涂敷在皮肤上时，由于具有光滑触摸感使得其使用感觉良好，并且粘性被皮肤立即吸附。此外，其使用后无任何粘着性，作为化妆品这是非常有益的性质。另外，当使用该化妆洗剂时，其具有使面部和手背上的斑点颜色变浅的作用。
本发明优点
本发明提供了用作药物或糖链工程学研究试剂的的硫酸糖、硫酸多糖或它们的盐。所述硫酸糖、硫酸多糖或它们的盐由于具有持水性能等而非常适于用作化妆物质。
本发明还提供了具有高粘弹性的硫酸多糖及其制备方法。此外，本发明也提供了含有所述高粘弹性硫酸多糖的药物制剂和化妆品。本发明药物可用作例如口内制剂。另外，本发明高粘弹性硫酸多糖不仅具有优良的持水性能和润滑性，还由于其疏水性而对皮肤角质层具有高亲和力，并且与皮肤有良好相容性，尤其是，本发明高粘弹性含硫酸岩藻糖的硫酸多糖非常适于用作化妆用素材。

Claims (8)

1.制备被蛋白质交联的含硫酸岩藻糖的硫酸多糖的方法，其特征在于，所述方法包括在非破坏性条件下将含硫酸岩藻糖的硫酸多糖与蛋白质的交联物从属于褐藻类的藻类中提取出来的步骤。
2.制备被蛋白质交联的含硫酸岩藻糖的硫酸多糖的方法，所述含硫酸岩藻糖的硫酸多糖来自属于褐藻类的藻类，其特征在于，将具有比含硫酸岩藻糖的硫酸多糖溶液pH高的等电点的蛋白质加到所述溶液中。
3.增强含硫酸岩藻糖的硫酸多糖粘弹性的方法，所述含硫酸岩藻糖的硫酸多糖来自属于褐藻类的藻类，其特征在于，将具有比含硫酸岩藻糖的硫酸多糖溶液pH高的等电点的蛋白质加到所述溶液中。
4.含有被蛋白质交联的含硫酸岩藻糖的硫酸多糖的组合物，其中，所述含硫酸岩藻糖的硫酸多糖来自属于褐藻类的藻类。
5.药物制剂，其特征在于，所述药物制剂含有被蛋白质交联的含硫酸岩藻糖的硫酸多糖作为有效成分，所述含硫酸岩藻糖的硫酸多糖来自属于褐藻类的藻类。
6.权利要求5的药物制剂，所述药物制剂是口内制剂。
7.润滑剂，其特征在于，所述润滑剂含有被蛋白质交联的含硫酸岩藻糖的硫酸多糖作为有效成分，所述含硫酸岩藻糖的硫酸多糖来自属于褐藻类的藻类。
8.化妆品，其特征在于，所述化妆品含有被蛋白质交联的含硫酸岩藻糖的硫酸多糖作为有效成分，所述含硫酸岩藻糖的硫酸多糖来自属于褐藻类的藻类。
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