CN1262638C - 一种虫草真菌及其分离方法 - Google Patents
一种虫草真菌及其分离方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN1262638C CN1262638C CN 200410025774 CN200410025774A CN1262638C CN 1262638 C CN1262638 C CN 1262638C CN 200410025774 CN200410025774 CN 200410025774 CN 200410025774 A CN200410025774 A CN 200410025774A CN 1262638 C CN1262638 C CN 1262638C
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- cordyceps
- present
- caterpillar fungus
- fungus
- chinese caterpillar
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Expired - Fee Related
Links
Landscapes
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
本发明公开了一种虫草真菌及其分离方法。本发明从野生大团囊虫草子实体上分离并筛选出单一囊菌。本发明分离该虫草真菌的方法分为选择大团囊虫草子实体、消毒灭菌、接种和培养等步骤。
Description
技术领域
本发明涉及一种药用真菌，特别地，涉及一种大团囊虫草(Cordycepsophioglossoides)纯菌株及其分离的方法。
背景技术
由于野生资源的匮乏和生长环境的恶化，许多名贵药用真菌濒临灭绝，如何挽救这些宝贵的药用资源、满足药物开发需要显得尤为重要，利用微生物技术分离筛选出活性菌株，采用现代发酵技术进行大规模的药材生产很有必要。
大团囊虫草是一种名贵中草药，我国南方地区民间使用较为普遍，具有悠久的历史。其子实体内含丰富的生物碱，总称麦角碱，在治疗妇科疾病方面药用价值极高，主要用于治疗***、痛经、闭经等病，对产后出血、促进产后子宫复原也具有显著效果。
发明内容
本发明的目的在于从一种名贵药用虫草真菌的野生子实体上分离得到单一菌株，并根据其形态特征及基于18S rDNA序列的***进化分析对其进行鉴定，从而使得采用现代发酵技术进行大规模的药材生产成为可能。
为了实现本发明的目的，本发明采用的技术方案如下：本发明分离出的虫草真菌，其特征在于，它是从大团囊虫草(Cordyceps ophioglossoides)子实体上分离纯化得到的该真菌的纯菌株，其18S rDNA具有SEQ ID No.1的序列。保存在中国专利局指定的保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保存编号为：CGMCC No.1146。
本发明还提供了一种分离权利要求1所述的药用虫草真菌的方法，其特征在于，分为以下步骤：(1)选择大团囊虫草子实体：选子囊果大、柄短、八九分成熟的大团囊虫草子实体，切去盖两基部；(2)消毒灭菌：在无菌箱内以浓度为0.1％的升汞水浸泡，再用浓度为75％酒精棉球擦拭菌盖与菌柄，进行表面消毒；3)接种：接种时，将子实体切开，在其萌盖和菌柄交界处，挑取一小块组织；移接到马铃薯蔗糖基础培养基PSA上；4)培养：在20℃～30℃温度下培养7～10天，待组织上产生白色绒毛状菌丝，转管扩大即得到大团囊虫草菌种。
本发明具有以下技术效果：大团囊虫草是我国传统的具有药用价值的大型真菌，目前只有对野生资源的利用，以致药源锐减。本发明利用从野生植株上分离纯化得到纯的大团囊虫草菌株，并通过传统的形态学方法、发酵方法以及现代基因手段进行鉴定，为利用此菌进行大规模发酵生产该药材、缓解野生资源的匮乏提供了基础和可能。
本发明的大团囊虫草菌已在中国专利局指定的保藏单位“中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心”保藏，保藏日期为2004年5月14日，保藏编号为：CGMCC No.1146。
具体实施方式
下面详细说明本发明。本发明的虫草真菌的分离方法如下
本发明的大团囊虫草野生植株寄生在地下生长的大团囊菌(Elaphomycesgranulatus Fr)的子实体上，子囊果球形，直径为1～4.5厘米，褐色，坚硬；子座根状生于基物外，直立，头状，有长柄多分枝，高矮不等，一般2～15厘米，棍棒状，褐色。子囊柄不易水解，子囊孢子线形。分离得到的菌株在固体平板上的形态特征，菌落丛生、白色丝状菌丝体。液体培养时菌液变混，产生球状菌丝体，初菌丝体为白色，后渐变为褐色。
本发明采用组织分离培养法，选子囊果大、柄短、八九分成熟的野生品种，切去盖两基部，在无菌箱内以体积百分比浓度为0.1％的升汞水浸10～20分钟，再用体积百分比浓度为75％酒精棉球擦拭菌盖与菌柄2次，进行表面消毒。接种时，将种子实体切开，在萌盖和菌柄交界处，挑取一小块组织；移接到马铃薯蔗糖基础培养基(PSA)上。在20℃～30℃温度下培养7～10天，待组织上产生白色绒毛状菌丝，转管扩大即得到大团囊虫草菌种。
下面进行虫草真菌菌种的鉴定
(1)虫草真菌的形态及理化特征
群体形态：固体培养基上，菌落丛生、产生白色丝状菌丝体、菌丝发达，液体振荡培养时产生球状菌丝体，初菌丝体为白色，后渐变为褐色。个体形态：菌丝体具有规则的分隔，隔膜有简单隔孔，有伏鲁宁体，细胞壁双层，内层厚而透明，外层薄而密集，子囊孢子线形。
理化特征：对双糖的利用效果比单糖要好，可以利用淀粉作为碳源。不能固定氮素，对无机氮源的利用效果较差。生长过程中产生一种抗生素-抗真菌素(ophiocordin)。
该菌株的培养特征及形态特征见表1。
| 固体培养特征 | 菌落 | 丛生 |
| 菌丝体 | 有 | |
| 菌丝体形状 | 丝状，放射状 | |
| 菌丝体颜色 | 白色 | |
| 产生色素 | 无 | |
| 液体培养特征 | 混浊 | 有 |
| 菌丝体 | 有 | |
| 菌丝体形状 | 集结成球状 | |
| 产生色素 | 初为白色后变为褐色 | |
| 个体特征 | 孢子 | 有 |
| 孢子特征 | 线状 | |
| 菌丝体有无间隔 | 有隔膜，隔膜上有孔 | |
| 细胞壁形态 | 双层，内层厚而透明，外层薄而密集 | |
| 伏鲁宁体 | 有 |
表1
(2)18S rDNA序列的***进化分析
测定大团囊虫草真菌(CGMCC No.1146)18S rDNA部分的序列
表2为本发明所述的依据虫草真菌序列从GeneBank中调出的部分相关菌株的18S rDNA序列的登录号。
| 序列登录号 | 相似度(％) | |
| Cordyceps sphingum | AY245673.1 | 99 |
| Cordyceps militaris | AY245671.1 | 99 |
| Paecilomyces canadensis | AY245666.1 | 99 |
| Cordyceps sinensis | AY245670.1 | 99 |
| Cordyceps heteropoda | AY245656.1 | 99 |
| Cordyceps brongniartii | AY245653.1 | 99 |
| Phytocordycepsninchukispora | AY245668.1 | 99 |
| Cordyceps japonica | AY245669.1 | 99 |
| Cordyceps isarioides | AY245657.1 | 99 |
| Cordyceps subsessilis | AY245665.1 | 99 |
| Cordyceps memorabilis | AY245658.1 | 99 |
| Cordyceps agriota | AY245651.1 | 99 |
表2
结合上述形态特征及18S rDNA序列分析，可以确定该菌为子囊菌纲、球壳菌目、麦角菌科、虫草属真菌，从而确定分离得到的菌株确为大团囊虫草菌。大团囊虫草菌18S rDNA部分的序列SEQ ID No.1表：
<110>浙江大学
<120>一种虫草真菌及其分离方法
<160>1
<170>PatentIn version 3.1
<210>1
<211>1519
<212>DNA
<213>Cordyceps sp.
<400>1
aaagattaag ccatgcatgt ctaagtataa gcaattatac agcgaaactg cgaatggctc 60
attatataag ttatcgttta tttgatagta ccttactact tggataaccg tggtaattct 120
agagctaata catgctaaaa atcccgactt cggaagggat gtatttatta gattaaaaac 180
caatgccctc tgggctctct ggtgattcat gataacttct cgaatcgcat ggccttgcgc 240
cggcgatggt tcattcaaat ttcttcccta tcaactttcg atgtttgggt agtggccaaa 300
catggttgca acgggtaacg gagggttagg gctcgacccc ggagaaggag cctgagaaac 360
ggctactaca tccaaggaag gcagcaggcg cgcaaattac ccaatcccga cacggggagg 420
tagtgacaat aaatactgat acagggctct tttgggtctt gtaattggaa tgagtacaat 480
ttaaatccct taacgaggaa caattggagg gcaagtctgg tgccagcagc cgcggtaatt 540
ccagctccaa tagcgtatat taaagttgtt gtggttaaaa agctcgtagt tgaaccttgg 600
gcctggctgg ccggtccgcc tcaccgcgtg tactggtccg gccgggcctt tccctctgtg 660
gaaccccatg cccttcactg ggtgtggcgg ggaaacagga cttttacttt gaaaaaatta 720
gagtgctcca ggcaggccta tgctcgaata cattagcatg gaataatgaa ataggacgtg 780
cggttctatt ttgttggttt ctaggaccgc cgtaatgatt aatagggaca gtcgggggca 840
tcagtattca attgtcagag gtgaaattct tggatttatt gaagactaac tactgcgaaa 900
gcatttgcca aggatgtttt cattaatcag gaacgaaagt taggggatcg aagacgatca 960
gataccgtcg tagtcttaac cataaactat gccgactagg gatcggacga tgttattttt 1020
tgactcgttc ggcaccttac gagaaatcaa agtgcttggg ctccaggggg agtatggtcg 1080
caaggctgaa acttaaagaa attgacggaa gggcaccacc aggggtggag cctgcggctt 1140
aatttgactc aacacgggga aactcaccag gtccagacac aatgaggatt gacagattga 1200
gagctctttc ttgattttgt gggtggtggt gcatggccgt tcttagttgg tggagtgatt 1260
tgtctgctta attgcgataa cgaacgagac cttaacctgc taaatagccc gtattgcttt 1320
ggcagtacgc tggcttctta gagggactat cggctcaagc cgatggaagt ttgaggcaat 1380
aacaggtctg tgatgccctt agatgttctg ggccgcacgc gcgctacact gacggagcca 1440
gcgagtactc ccttggccgg aaggcccggg taatcttgtt aaactccgtc gtgctgggga 1500
agagcattgc aattattgc 1519
Claims (1)
1、一种虫草真菌，其特征在于，它是从大团囊虫草(Cordycepsophioglossoides)子实体上分离纯化得到的该真菌的纯菌株，其18S rDNA具有SEQ ID No.1的序列；保存在中国专利局指定的保藏单位中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保存编号为：CGMCC No.1146。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200410025774 CN1262638C (zh) | 2004-06-30 | 2004-06-30 | 一种虫草真菌及其分离方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN 200410025774 CN1262638C (zh) | 2004-06-30 | 2004-06-30 | 一种虫草真菌及其分离方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN1594541A CN1594541A (zh) | 2005-03-16 |
| CN1262638C true CN1262638C (zh) | 2006-07-05 |
Family
ID=34663838
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN 200410025774 Expired - Fee Related CN1262638C (zh) | 2004-06-30 | 2004-06-30 | 一种虫草真菌及其分离方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN1262638C (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114231574A (zh) * | 2021-11-25 | 2022-03-25 | 浙江大学 | 一种生产蛋白激酶C抑制剂balanol的培养基及其方法 |
Families Citing this family (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1302101C (zh) * | 2005-06-22 | 2007-02-28 | 浙江大学 | 一种液体深层发酵生产大团囊虫草菌体的方法 |
| CN101230380B (zh) * | 2007-12-26 | 2010-06-23 | 广东省微生物研究所 | 鉴别尖头虫草的特征性核苷酸序列和方法 |
| CN102440141B (zh) * | 2010-10-08 | 2012-12-26 | 镇江市食用菌研究所 | 一种北虫草菌种的分离方法 |
| CN102229595B (zh) * | 2011-04-30 | 2013-06-12 | 浙江大学 | 大团囊虫草菌中的倍半萜类化合物及用途 |
| CN102523927A (zh) * | 2012-01-17 | 2012-07-04 | 辽宁仙榆湾北冬虫夏草（集团）有限公司 | 自然环境中培养蛹虫草的方法 |
| CN103232995A (zh) * | 2012-12-03 | 2013-08-07 | 中国食品发酵工业研究院 | 一种冬虫夏草原草粉的高纯基因组dna提取方法 |
| CN103262797B (zh) * | 2013-06-04 | 2014-10-29 | 神舟太空产品高科技成果推广中心集团有限公司 | 太空诱变高效蛹虫草菌、其应用及其胶囊制剂的制备方法 |
| CN104611234B (zh) * | 2015-01-12 | 2017-12-26 | 北京林业大学 | 一种木生药用真菌的分离方法 |
| CN107723308B (zh) * | 2017-09-14 | 2020-04-24 | 浙江大学 | 一种化合物balanol的生物合成方法及基因簇 |
| CN108913607B (zh) * | 2018-07-19 | 2021-06-15 | 安徽大学 | 一种具有高效去除染料功能的野生茅草菇菌丝体的制备方法及其用途 |
-
2004
- 2004-06-30 CN CN 200410025774 patent/CN1262638C/zh not_active Expired - Fee Related
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN114231574A (zh) * | 2021-11-25 | 2022-03-25 | 浙江大学 | 一种生产蛋白激酶C抑制剂balanol的培养基及其方法 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN1594541A (zh) | 2005-03-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN112458012B (zh) | 一种贝莱斯芽孢杆菌微生物菌剂及其应用 | |
| Zhu et al. | Trichoderma (Hypocrea) species with green ascospores from China | |
| CN107058160B (zh) | 一株花生根际解淀粉芽孢杆菌及其应用 | |
| CN1262638C (zh) | 一种虫草真菌及其分离方法 | |
| CN113025505B (zh) | 一种莱氏绿僵菌及其在草地贪夜蛾蛹期的生物防治方法与应用 | |
| CN117417840B (zh) | 一种外生菌根真菌云南硬皮马勃zss01及其应用 | |
| CN1793315A (zh) | 尖顶羊肚菌菌株的筛选及菌种制备方法 | |
| Kwon et al. | First report of Botrytis cinerea as a postharvest pathogen of blueberry in Korea | |
| CN1796539A (zh) | 冬虫夏草大规模发酵生产及菌粉加工工艺 | |
| CN102703333B (zh) | 一种与杜鹃幼苗高效共生的菌根真菌菌株 | |
| CN1813513A (zh) | 一种白灵菇新品种及菌种生产和栽培方法 | |
| CN113801808B (zh) | 一株阿比科恩链霉菌及其应用 | |
| CN112592835A (zh) | 一种适宜于工厂化栽培的金耳菌株 | |
| CN100340654C (zh) | 黑脉羊肚菌菌株的筛选及菌种制备方法 | |
| Kwon et al. | Occurrence of pink mold rot of strawberry caused by Trichothecium roseum in Korea | |
| CN110343621A (zh) | 一种棘孢木霉菌株及其应用 | |
| CN107893034B (zh) | 一种金针菇病原细菌的鉴定及抗病白色金针菇菌株的筛选方法 | |
| CN1478886A (zh) | 一种中国被毛孢液体菌种发酵工艺方法 | |
| CN113046249B (zh) | 一株蜡蚧轮枝菌ll-01及其生防应用 | |
| CN101921723A (zh) | 一种根围金黄杆菌及其应用 | |
| Kaushik et al. | Identification, optimization of culture conditions, and bioactive potential of Chinese caterpillar mushroom Ophiocordyceps sinensis (Ascomycetes) mycelium isolated from fruiting body | |
| CN105779349B (zh) | 一种溶解池塘优势甲藻—锥状斯氏藻的蜡样芽孢杆菌菌株jzbc1及其应用 | |
| CN101955892B (zh) | 一株克雷伯氏菌及其应用 | |
| CN1279159C (zh) | 白耙齿菌cz－81菌株及其人工培养方法 | |
| CN104126508A (zh) | 一种兰花无菌苗快速菌根化的方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| C14 | Grant of patent or utility model | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20060705 |
|
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |