CN1259871A - 治疗慢性进行性血管疤痕疾病的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种治疗患有慢性进行性血管疤痕疾病(CPVSD)尤其是动脉硬化疾病如动脉粥样硬化的哺乳动物患者的方法,该方法能够中止或至少使该疾病的进程明显缓慢并能够引起消除和/或减少已经形成的疤痕和损伤。该方法包括给患者服用一种含有有效量的戊聚糖多磺酸酯(PPS)或药学上可接受的盐的药用组合物。优选口服,PPS或PPS盐的每日总剂量在大约5到大约30mg/kg患者体重,成人每天大约350到大约2,000mg。

Description

治疗慢性进行性血管疤痕疾病的方法
本发明涉及用于治疗慢性进行性血管疤痕疾病的方法和药用组合物。
慢性进行性血管疤痕疾病(CPVSD)是一种好几个常见疾病的并发症，这些折磨发达国家的常见疾病包括糖尿病的糖尿症、高血压、各种高脂血症等。目前解决CPVSD的治疗方式是针对根本原因为目的。令人遗憾的是，对大多部分都没有治愈或者在一般人口中对它们的控制很难实现。另外，CPVSD经常不仅容易产生而且病情发展很快，直到目前才对其根本原因给予医疗关注。因此人们正尝试治疗第二并发症，其中CPVSD是最严重的，这是因为它会导致肾衰竭、中风、心脏病和致盲。
CPVSD一般是以血管平滑肌细胞的变化为特征的。主要变化之一是数量的增长和它们结合的***类型的改变。这会导致疤痕和功能上的显著变化。在血管中，这会导致弹性的丧失，造成血管不能扩张和收缩并且血管具有增厚的管壁和变窄的管腔。最终结果是降低血流或完全阻塞。以这些病理生理过程为特征的血管疤痕疾病的例子包括慢性进行性肾小球疾病如糖尿病诱发的肾小球硬化症(疤痕)；移植后的进行性肾衰竭；提供给用血液透析治疗的肾衰竭晚期患者血液进入的支路闭塞；其他慢性小血管疾病(如在一些高血压患者中)；已进行过冠状动脉分流术患者的狭窄复发和糖尿病性的视网膜病。
对CPVSD的任何疗法的治疗目的必须是减少已经形成的额外的细胞外基层(疤痕)以恢复正常血管的开放和功能，或者至少预防或实际上减慢进程。但是，目前没有直接干扰平滑肌组织代谢异常化或者调整***合成的方法，尽管它们在慢性进行性疾病中是非常中重要的。现已把这些疾病的进程看作是不可避免的和不可逆的。
所以，开发CPVSD的治疗方法尤其重要，优选该方法包括口服一种低毒的药物，该药物通过引起已建立的损伤退化和降解来治疗和逆转CPVSD是有效的。
戊聚糖多磺酸酯(PPS)是一种高度磺化的半合成多糖，分子量为大约1,500到6,000道尔顿，这取决于分离的方法。PPS是在肝素和类肝素的相同的大类中，但在化学结构上、衍生的方法上和理化特性方面PPS与肝素存在许多不同。其中肝素一般是从哺乳动物组织如牛和猪的肌肉、肝脏和肠中分离得到，而PPS是一种半合成的化合物，它的多糖骨架木聚糖是从山毛榉的皮中或其他植物源提取出来，然后用磺化剂如氯磺酸或三氯磺酰和酸处理得到的。磺化后，PPS一般用氢氧化钠处理以获得钠盐。
下式对应于肝素和戊聚糖多磺酸酯，
         肝素            戊聚糖多磺酸酯肝素是一种重复双糖单体(D)-葡糖胺和(D)-葡糖醛酸(都是6-碳己糖)的磺化聚合物，在葡糖胺上带有氨基功能团；PPS是一个重复单一单体(D)-木糖的磺化的线性聚合物，其中5-碳木糖是其吡喃糖环形式。当肝素旋转平面极性光为右旋方向时，PPS旋转光为左旋方向。
在生化特性方面，PPS能够延长部分促凝血酶原激酶并已经用于预防深度静脉的血栓形成，但它只有肝素抗凝效力的十五分子一(主要参见，Wardle，医学研究杂志，20：361-370，1992)。现在也公开了PPS用于治疗尿道感染和间质性膀胱炎(US 5,180,715)，并且与一种血管扩张性甾体化合物结合用于治疗血管生成和毛细血管、细胞或膜的泄漏(US 4,820,693)。
一些研究者已经证实PPS能够抑制平滑肌细胞的增生并且能够降低高脂血症，在此基础上暗示PPS能够用于预防有限的动脉粥样硬化斑块的形成，抑制肾小球系膜细胞的增生并且能够预防胶原的形成和肾小球硬化症(Paul等，血栓研究，46：793-801，1987；Wardle，ibid.)。但是，没有人曾经注意到CPSVD如动脉粥样硬化的疤痕方面(与抑制细胞增生相反)或者证实它可适用于中止和/或可逆血管疤痕，即在这方面没有人想到PPS。而且，没有现有技术通过在完整动物所产生的任何实质性的科学试验的疗效数据来支持PPS可能用于疤痕疾病的提示，但替代的是以体外动物组织的试验为主，而体外动物试验经常不能预见体内功效。
尽管目前已有记载PPS在抑制纤维变性和疤痕形成方面的用途的公开出版物(参见，如Roufa等，US 5,605,938)，但是这些教导解决的是抑制皮肤的成纤维细胞对皮肤和相邻组织区域的侵害，但是没有平滑肌细胞的疤痕疾病，它们在病因学和病理学上是完全不同的。
本发明的目的是提供一种治疗CPVSD的方法，该方法不仅能够中止疾病的进程而且还能实质性地逆转该进程并引起现存的疤痕或损伤退化。本发明的另一个目的是提供这样一种治疗方法，即用一种通常可得到的药物，该药物用常规方法给药，该药物无毒并不会引起严重的副作用，在治疗CPVSD方面是非常有效的。
为了使这些目的和其他目的在本文后逐渐清楚，简要地说，本发明是涉及治疗患有CPVSD的哺乳动物患者的方法，该方法能够中止该疾病的进程并能够使在受影响的器官或血管***中已经形成的疤痕或纤维性损伤消除或减小，该方法包括给患者服用一种含有有效治疗血管疤痕疾病用量的戊聚糖多磺酸酯或其药学上可接受的盐的药用组合物。给药方式优选以例如片剂、胶囊或液体形式口服PPS。
                  附图的简要描述
图1表示了在十分之一的来自正常5周龄小鼠的肾小球上，通过竞争性PCR得到的α1IV胶原mRNA的量(如下列实施例1中所述的)，描述：
a)在其顶部中，PCR扩增后反应路线和相应的溴化3，8-二氨基-5-乙基-6-苯基菲啶鎓染色的凝胶；和
b)在较低的部分中，绘制了一幅每个肾小球中突变的胶原CDNA与输入含有所有PCR试剂的9个试管中每个中突变的cDNA的量的比。
图2描述了：
a)在上部中，来自两个肾切除术的肾癌样本的PAS-染色的切片(A-正常的肾小球组织学；B-显著的硬化)；
b)在中部中(C-D)，免疫荧光显微术，在相同的肾中抗体对IV型胶原；和
c)在较低部分中(E)，一幅图反映了在相同肾中的硬化系数；在50个显微解剖的肾小球库中通过竞争性的PCR定量法测定α2IV胶原CDNA(值是：145±22对1046±74×10-4阿托摩尔数/肾小球数)。
图3是一幅反映没有肾小球硬化的5名患者相对于硬化的5名患者肾中的硬化系数的图，用肾小球相对细胞数和α2IV胶原cDNA的含量表示。
图4是一幅反映患有膜性肾小球肾炎(MN)和糖尿病性肾病(DM)以及患有肾小球硬化的肾切除(NX GS)和没有肾小球硬化的肾切除患者的α2/α3IV胶原mRNA比率的图。
图5是一幅反映PPS钠对正常肾小球系膜细胞DNA合成的作用图，其中所述作用是通过滴定胸苷***法(24小时培养)测定的并按照每103个细胞每分钟的滴定数对PPS钠的浓度(μg/ml)绘成的图。
图6是一幅反映PPS钠对正常肾小球系膜的细胞中细胞生长的作用图，该图是用培养三天后的细胞数对所加的PPS钠的浓度(μg/ml)绘成的。
图7是一幅反映在温育三天和五天后PPS钠和肝素(用一个未治疗的对照组)对正常肾小球系膜细胞的细胞生长的作用的对比图。
图8是一幅反映用血浆和PPS钠培养的细胞与仅用血浆培养的对照细胞相比随着时间正常肾小球系膜细胞的增生图。
图9是一幅不同时期和逆转录的暴露于PPS钠(10μg/ml)的正常肾小球系膜细胞层的MRNA值的表，它反应了在α1IV和α1-I胶原mRNA、胶原酶(金属蛋白酶)72KDa和92KDa mRNA、生长因子TGF-βmRNA和细胞蛋白质β-肌动蛋白mRNA的含量增长、下降或没有变化。
图10是一幅反映α1IV胶原/GAPDH比率的图，该比率是通过竞争性PCR测定的，分别详细描述了把PPS钠饮用水给GH基因转移小鼠服用10-12周的肾小球和接受没有处理的水的对照GH小鼠的肾小球。
图11描述了未处理对照组中的无痛苦死亡的Watanabe兔和其他用皮下PPS钠(Elmiron)治疗组中的Watanabe兔的腹主动脉纵切片照片。
图12是一幅反应只接受高胆固醇饮食的Watanabe兔的各种主动脉的支脉的内膜纵切面区和从接受含有高胆固醇饮食和PPS钠的饮用水的其他组的Watanabe兔得到的可比较的纵切片的内膜区的图。
图13是一幅反应只接受高胆固醇的Watanabe兔主动脉的不同支脉内至中膜交叉区的比例和在从其他组中接受含有高胆固醇饮食和PPS钠的饮用水的Watanabe兔得到的纵切片中所测定的可对照的比例图。
本发明涉及一种治疗患有慢性进行性血管疤痕疾病(CPVSD)的哺乳动物患者的方法，该方法能够在受影响的血管***尤其是在动脉如主动脉中中止或客观地使该疾病的进程减缓并且能够引起已经形成的疤痕损伤消除和/或减小。该方法包括给患者服用一种含有有效治疗血管疤痕用量的戊聚糖多磺酸酯(PPS)或其药学上可接受的盐的药用组合物。
按照该新方法治疗的疾病包括但不限定为慢性进行性肾小球疾病包括疤痕型糖尿病诱发的肾小球硬化症；由动脉硬化引起的动脉疤痕，包括动脉硬化症；由肾移植后间质疤痕引起的进行性肾衰竭；提供给用血液透析治疗的肾病晚期患者血液进入的支路闭塞；其他慢性疤痕小血管疾病(如在一些高血压患者中)；已进行过冠状动脉分流术患者的疤痕狭窄复发和糖尿病性的视网膜病。
由于这些疾病的流行和危害，采用新方法治疗慢性动脉硬化疤痕病理来逆转或预防该疾病的进程并解决现存的血管疤痕和损伤是特别重要的。例如，按照本发明服用PPS能够中止和逆转主要血管的动脉硬化，使得受动脉粥样硬化斑块的动脉壁中包括的已经形成的疤痕消除和/或减少并实质性地增加纵切内膜区以使更大的血液通过血管腔。
本文所用的术语“有效治疗血管疤痕用量”指的是掺入药用组合物中的PPS或其盐的用量，其中的药用组合物在给药期每天一次或多次给药时能够有效中止和逆转CPVSD的进行性症状。在人类患者中，大约5到30mg/kg患者体重，或者成人每天大约350到大约2,000mg，并优选大约500到大约1,500mg的PPS或其盐的每日总剂量以一次到四次相等的分开剂量给药可以有效达到治疗和逆转CPVSD的治疗目的。在较小的哺乳动物中，剂量范围可以按照体重、品种和状况性质向下调节。
新治疗方法的优选实施方案是对患者服用含有有效量的PPS和至少一种药学上可接受的惰性成分的药用组合物。该组合物可以是任何标准的药用剂型，但优选口服剂型。
口服剂型包括常规的片剂、包衣片、胶囊或小丸，持续释放的片剂、胶囊或小丸，锭剂、液体、酏剂或任何其他药学领域已知的口服剂型。
作为药学上可接受的惰性成分，包括不干扰PPS治疗CPVSD活性的填充剂、粘合剂、溶剂等。如果需要的话，如粘土或硅质土类的填充剂也可以调节剂型的大小。
对赋予剂型所需的物理特性，其他的成分如赋型剂和载体也是必需的。例如这种物理特性是释放率、特征和大小。用于口服剂型的赋型剂和载体的例子有蜡类如蜂蜡、蓖麻蜡、糖蜡和巴西蜡棕蜡，纤维素化合物如甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素、邻苯二甲酸乙酸纤维素、羟丙基纤维素和羟丙基甲基纤维素，聚氯乙烯、聚乙烯吡咯烷酮、硬脂醇、硬脂酸单甘油酯、异丁烯酸酯化合物类如聚甲基丙烯酸酯、异丁烯酸甲酯和二异丁烯酸乙二醇酯，聚乙二醇和亲水胶。
在本发明的组合物中，PPS活性成分理想地是在每个单位剂量以大约50和大约300mg之间的量存在的。给每个患者服用的精确剂量将是被治疗病情和患者的生理特性如年龄和体重的函数。
药物活性成分能够是PPS或其药学上可接受的盐如钠盐。用于本发明方法的一种优选口服剂型是Elmiron明胶胶囊(Baker Norton制药公司，Miami，佛罗里达)，它含有100mg的PPS钠和作赋型剂的微晶纤维素和硬脂酸镁。
尽管优选口服给药，本发明治疗方法也包括通过肠胃外、经皮、经粘膜途径或通过其他医疗和药学领域中已知的常用的给药途径服用PPS或其盐。类似的，本发明组合物可在药学上可接受的胃肠外、经皮、经粘膜或其他常规的载体和剂型中包括PPS及适当的惰性溶剂、赋型剂和附加剂。这类药学上可接受的载体的许多例子能够在Remington药物科学(第17版(1985))和其他标准课本中找到。无论使用那种给药途径或药物剂型，PPS活性成分的剂量范围都是从大约5到大约30mg/kg患者体重或大约350到大约2,000mg，并优选大约500到大约1,500mg，尽管在胃肠外给药时应当适当使用该范围较低端的剂量。
用于本发明方法的药用组合物可以包括除PPS或其盐的其他活性成分例如其他可用于治疗CPVSD的药物。
该新方法能够方便、安全和有效地治疗患有各种形式的CPVSD患者，在许多情况下，这种疾病可以威胁人的生命或器官，通过这种方法，使用已被证实具有低毒和副作用低发病率的药物能够不仅中止长期被认为是无法制止的慢性进行性血管疤痕疾病，而且实质上阻止和/或逆转已经形成的疤痕损伤从而使正常血管潜力和功能恢复正常。
下列实施例包括(a)已经在医学文献中公开的试验的描述，这些试验证实了在给疤痕型胶原mRNA的定量中使用的某些竞争性的PCR(聚合酶链反应)技术以及肾小球中的相关因素；并证实了相应的肾小球细胞数与生产疤痕型的胶原量无关；(b)在发明人的监督下进行的试验，用来证实体内和体外PPS在下调疤痕型胶原和细胞生长因素和上调胶原酶活性来降解存在的疤痕胶原的沉积方面的功效；以及(c)在发明人监督下的试验，它用来证实体内PPS在逆转动脉粥样硬化的功效，包括实质上减少动脉粥样硬化斑块在受影响的血管中的量和分布。这些试验的目的不是用来设定为了实施本发明而必须使用的材料、技术或剂量范围，或者以任何方式限定本发明。
                      实施例1
                     胶原的定量
如Penten等在美国生理学杂志，32：F951-957(1992)，用下列方法给小鼠肾小球中的α1IV和α2IV的胶原定量：在好几只试管的每一只里加入正常5周龄小鼠的十分之一的肾小球中代表mRNA的cDNA的量和标准量的α1IV和α2IV的胶原引物，其中试管中含有所有来自GeneAmp DNA扩增试剂盒(PerkinElmer Cetus，Norwalk，Connecicut)的PCR试剂。向扩增前的这种混合物中加入含有一种新的限制酶切割位点或者是缺失的突变cDNA的连续稀释液(如图1所示的步骤，顶部条带)。在一个设定在托架等点(y＝1)上的前试验中测定突变体的浓度。
在PCR扩增后，把整个反应基质直接装载到H5 Horizon凝胶装置(Life Technologies)中的4％的Nusieve：Seakem(3∶1)(FMCBioproducts，Rockland，ME)琼脂凝胶上并使其电泳。用溴化乙锭染色并紫外光透明化来使DNA的电泳条带可见。用55 Polaroid的正/反胶片(Polaroid，Cambridge，MA)照像(见图1中部条带)。通过单反光密度测定法扫描凝胶负向来进行竞争性PCR分析(Shimadzu；科学仪器，哥伦比亚，MD)。
计算试验的密度测定值和突变体条带并把各反应管的比率作为所加入的突变体模板量的函数绘制成图(图1，低部条带)。对α2IV的胶原突变体来说，在绘制突变体/试验带比率图前，用562/479因子校正所测定的密度测定带的强度。对α2IV的突变体带来说，在除以原始型(试验)带值前加入它们的密度值。通过线性回归分析绘制直线。计算试验样本中的CDNA的量即突变体/试验带密度比等于1时的量。重复两次或三次进行竞争性PCR分析。
                     实施例2
                  硬化肾小球的变化
如Peten等在实验医学杂志，176：1571-1576(1992)所述，从人患者取肾癌单侧肾切除样本。该患者没有糖尿病、高血压或其他与肾小球疾病相关的全身疾病的历史。把远离明显肿瘤的皮层组织样本用甲基丙烯酸树脂或石蜡包埋后放在Carnoy的固定液中，并用过碘酸-Schiff(PAS)给切片染色。通过PAS-染色材料的组织检查(图2，顶部条带)和在把IV型胶原(PHM-12，Silenus，Westbury，NY)暴露给抗体后对冷冻切片的免疫荧光显微检查分别评价用肾小球膜基质膨胀定义的肾小球硬化症(图2，中部条带)。
按照实施例1所述的进行竞争性的PCR测定来确定α2IV(疤痕型)细胞外胶原的量。按照图2低部条带中所示测定以前发现正常或硬化的肾小球中胶原型的相应浓度。
把没有肾小球硬化的5名患者的肾小球中相应的细胞数与患有硬化的5名患者的进行比较。如图3所反映的，各组之间的肾小球相关数量的差异没不具有显著性(p＞0.8)，而对α2IV胶原cDNA的浓度而言，在统计学上差异显著(0.01＜p＜0.025)。
                      实施例3
      正常和有病肾的肾小球中相对胶原的mRNA比
使用实施例1和2中所述的方法，给肾小球中α2/α3IV胶原mRNA的相对比进行定量，其中的肾小球取自于患有粘膜性肾小球肾炎(MN)和糖尿病型肾病(DM)的人患者和患有伴有肾小球硬化症肾切除(NXGS)和不伴有肾小球硬化症的肾切除(NX NI)的人患者的诊断性活组织检查。如图4所反应出来的，α2/α3IV胶原mRNA的比在DM和在NSGS中比在NX NI中显著更高。(**p＝0.0002，*p＝0.02)。
                      实施例4
                  用PPS的体外试验试验A试验设计：
把正常肾小球膜细胞(8)以2-2.5×104个细胞/孔的密度平板接种在24孔平皿(Nunc，PGC Scientific Corp.，Gaithersburg，MD)中加有20％胎牛血清的基础培养基中(Gibco，Grand Island，NY)。在24小时时，去掉培养基，用PBS把细胞洗涤两次并在含有0.1％牛血清白蛋白(RIA级，Sicjma)的无血清培养基中温育24-72小时。把该培养基用加有含或不含5-100μg/ml的PPS的20％胎牛血清的新鲜基础培养基替换或者与标准肝素(100μg/ml)作对照。用胰蛋白酶消化两份孔中的细胞并在+3和+5天用一台Elzone细胞计数器(Particle Data Inc.，Elmhurst，IL)计数。在平行孔中，通过加入1μCi/孔的[3H]胸苷([甲基-3H]胸苷)；2.0Ci/mM；DuPont NEN，Boston，MA)来测定胸苷的掺入。在第1天或第3天测定数目。结果：
在第1天(24小时)中，50μg/ml为最大剂量-反应(图5)，而在第3天，25μg/ml为最大抑制反应(图6)。
在没有加入(对照)和肝素(100μg/ml)及PPS(100μg/ml)之间进行对照，显示出在基础摩尔的PPS大约是原始肝素功效的两倍(图7)。该反应是非常可再现的(误差非常窄)。
总结图(图8)比较了加到血清中的PPS对仅暴露给血清的对照细胞的功效。试验B
在不同时期把正常肾小球膜细胞层暴露给PPS(100μg/ml)，并且在第1天测定选择分子的逆转录mRNA含量并与第3天和第5天的mRNA的含量对照(参见图9)，IV型的胶原mRNA没有变化，I型的胶原mRNA实际上下降，TGF-βmRNA减少了50％并且92kDa酶活性增加了50％以上。对照是β-肌动蛋白，它没有变化，在治疗细胞中一直没有增生。
                      实施例5
                用GH转基因小鼠的试验试验设计：
使用特殊的引物对来自尾部活组织检查的去污剂提取物质进行PCR分析来鉴别12只6周龄的GH转基因小鼠的牛生长激素cDNA，其中的牛生长激素cDNA不与鼠的GH序列交叉反应。在6只GH小鼠的饮用水中加有口服的PPS钠(Elmiron，Baker Norton制药公司)来对它们治疗10-12周并且在同一时期使6只同龄GH转基因小鼠饮用自来水。在饮用水中PPS钠的量是大约每千克动物体重100mg。分离肾小球并原位逆转录：
在RNase抑制剂存在下，通过显微切片来分离肾小球。用生理盐水灌注左肾接着用含有可溶的核糖核酸酶抑制剂的胶原溶液灌注。在胶原酶灌注前除去较低的极性并把酶在干冰上迅速冷冻。在胶原酶酶解后，在氧钒核糖核苷复合物存在下在4℃分离40-60个肾小球用于逆转录(RT)。在原位把RT如上所述进行操作，不同的是，在加入RT组份前，用丙酮干冰把肾小球冻融一次并且在2％氘核和4个单位/μl的人胎盘核糖核酸酶抑制剂(Boehringer Mannheim，Indianapolis，NJ)存在下于2℃进行超声处理5分钟。使用显微超声细胞破碎器(Kontes，Vineland，NJ)在超声处理过程中冷冻样品。标准的和竞争性的PCR分析：
在PCR-Mate(Applied Biosystems，Foster City，CA)上合成小鼠α1IV和α1I胶原的引物、α平滑肌细胞肌动蛋白、β-肌动蛋白、层粘连蛋白B1、韧粘素、92kDa金属蛋白酶和7kDa金属蛋白酶mRNAs，以及牛生长激素基因组的DNA。通过大小和通过限制酶分析来证实各扩增产物的一致。通过忽略逆转录酶来测定引物对mRNA的专一性。用GeneAmp DNA扩增试剂盒(Perkin Elmer Cetus，Norwalk，CT)进行PCR。开始使用PCR扩增的线性对数部分通过标准PCR来分析来自40-60肾小球/小鼠库中的cDNA。这是一个快速的非定量的mRNA含量的测定。之后，使用竞争性的PCR来测定α1IV胶原(并且计算α1IV胶原与GAPDH酶的比率来使动物之间的数据正常化)、PDGF-B、α平滑肌细胞肌动蛋白、β-肌动蛋白和层粘连蛋白B1 cDNA，通过使用内部少量缺失或新的限制酶部位构建各分子的cDNA突变体。用装有Quantity One图像分析软件的PDI密度计进行PCR产物的分析。把竞争性PCR分析重复进行两次或三次。结果：
如图10所示，在用口服的PPS钠治疗的小鼠组与未治疗(对照)小鼠组相比，IV型胶原/GAPDH的平均比小于一半。这种差异表明与未治疗动物相比，在治疗动物的肾小球中存在显著少的裂痕型胶原，通过组织检查和免疫荧光显微检查证实了这一事实。
                      实施例6
                    Watanbe兔试验
Watanbe兔1作为天然内源性血胆固醇过多的动物模型。用纯合子状态完全表达这种性状，用杂合子状态部分表达并且由于单一基因缺失。纯合子Watanabe兔具有比正常日本白兔高8到14倍的血浆胆固醇浓度。
1.该类兔子已知作为Watarabe遗传高脂血兔子(WHHL)。
Watanabe兔具有非常高的动脉粥样硬化斑块的发病率尤其在主动脉。给该兔饲喂高胆固醇饮食来增加动脉粥样硬化的发展速度和严重性。
进行以下两种试验来证实PPS对Watanabe兔的抗动脉粥样硬化活性。试验A：对PPS的皮下评估
把12只Watanabe兔分成两组，每组六只(A组和B组)并饲喂高胆固醇饮食(0.5％胆固醇)。对A组动物每天用正常的生理盐水皮下治疗，同时对B组动物每天用10mg/kgPPS钠(Elmiron)皮下治疗。
在试验结束之前，四只PPS治疗的动物(B组)死亡，在第22天一只并且在第80到86天之间三只。在第89天，杀死A组的动物和B组剩余的两只动物并进行尸检和对它们组织的评价，特别是来自主动脉不同主要支脉的切片。结果：
如下表I所示，发现相对于A组的对照兔，在所有检查的主动脉纵切片中治疗组B的动物具有许多较小的斑块沉积和较高的平滑肌层与斑块的比率(高6.8倍)。这些发现在图11所示的图片中直观地显示出来。对照组动物的腹部主动脉的纵切片表示几乎所有横切片区具有较高发生的动脉粥样硬化斑块。用PPS钠治疗的动物的腹部主动脉的纵切片显示出几乎没有斑块的痕迹，尽管用与对照组相同的高胆固醇饮食饲喂治疗组。
                        表1
                     Watanabe兔
                主动脉病灶的形态测定
对照(cm2) 平滑肌/斑块     PPS(cm2) 平滑肌/斑块 斑块大小下降的倍数(X)
上行的主动脉 平滑肌层   0.328   0.61   0.243   4.12     6.8X
斑块   0.54   0.59
主动脉弓 平滑肌层
斑块
胸部的主动脉 平滑肌层   0.244   0.47   0.334   1.184     2.5X
斑块
腹部主动脉 平滑肌层   0.265   0.74   0.303   7.58     10.2X
斑块   0.358   0.04
试验B：对PPS的口用评估
把20只Watanabe兔分成四组A到D，每组5只。所有的兔都用相同的高胆固醇饮食(0.5％胆固醇)饲喂。对A和B组的动物给自来水饮用，而对C和D组的动物给含有0.5mg/ml PPS钠(Elmiron)的自来水饮用。以试验前动物消耗的水的观察为准，在治疗组中每只动物各消耗的PPS的每日总剂量为大约30mg/kg。
因为与PPS不相关的明显脓肿，在第4天和第11天分别除去治疗兔中的两只。
在试验的第50天杀死A和C组的动物并进行尸检和对它们的主动脉检查。在A组(对照)动物的内膜和C组(治疗)动物的内膜之间肉眼观察到显著差异，后者存在较少的动脉粥样硬化斑块的发生。
在试验的第64天杀死B和D组的兔子并进行尸检。从组织上和内膜横切片区检查这些组的主动脉并且测定不同主动脉支脉中内膜和中膜层的横切片区。
图12是一幅反映在纵切片中测定的内膜平均区，这些纵切片分别来自对照组(B组)和治疗组(D组)兔的主动脉的各种支脉。图12显示了在治疗动物与未治疗动物相比，所检查的内膜区的各主动脉支脉明显较少，这说明在治疗组的血管组织中实际存在较少的动脉粥样硬化的病灶和斑块的沉积。
图13显示了在相同主动脉纵切片中内膜至中膜区的比率平均值，其中的纵切片取自如图12所述的B和D组的兔。该比率反映了疤痕组织和沉积在静脉壁上的斑块(这样的沉积增加了内膜的横切片区)的相对量。治疗兔(D组)与未治疗动物(B组)相比，各主动脉支脉中该比率是较低的。
经科学所证实的试验步骤产生的上述数据证实了PPS在降低额外细胞外基质胶原的合成和特定细胞生长因子同时增加胶原降解酶活性的功效。这些作用表明PPS在临床治疗CPVSD的逆转特别是动脉硬化和动脉粥样硬化中是高效的。
这样，通过所提供的方法和组合物完成了本发明的各种目的，并且很好适用于实际使用的状况。
因为各种可能的实施方案组成了本发明，并且因为在上述实施方案中可以作各种变化，所以，应当理解为本文所述的所有内容是为了详细地解释发明而不是限定。

Claims (16)

1.治疗患有慢性进行性血管疤痕疾病(CPVSD)的哺乳动物患者的方法，其中该疾病使受影响的血管***引起血管腔的狭窄和扩张性下降，该方法能够中止该疾病的进程并能够引起消除或减少已经形成的疤痕损伤，该方法包括给患者服用含有对血管疤痕疾病有效治疗量的戊聚糖多硫酸酯(PPS)或其药学上可接受的盐的药用组合物。
2.按照权利要求1所述的方法，其中受影响的血管***是动脉血管。
3.按照权利要求2所述的方法，其中该动脉是主动脉或其主要支脉。
4.按照权利要求2所述的方法，其中该疾病是已疤痕为特征的动脉硬化的一种形式并且其中的动脉硬化疤痕过程是可以被该方法逆转的。
5.按照权利要求4所述的方法，该动脉硬化形式是动脉粥样硬化并且该疤痕包括受动脉粥样硬化斑块影响的动脉血管壁。
6.按照权利要求1所述的方法，其中把足够用量的药用组合物对患者给药以提供大约5到30mg/kg患者体重的每日总剂量或大约350到2,000mg的PPS或其药学上可接受的盐。
7.按照权利要求6所述的方法，其中该每日剂量为大约500到大约1,500mg。
8.按照权利要求6所述的方法，其中以一次到四次等分剂量把该每日剂量给药。
9.按照权利要求1所述的方法，其中该药用组合物是口服剂型。
10.按照权利要求9所述的方法，其中该剂型选自于由常规或持续释放片剂、包衣片、胶囊、小丸、锭剂、液体和酏剂。
11.按照权利要求9所述的方法，其中该剂型包括至少一种药学上可接受的惰性成分。
12.按照权利要求11所述的方法，其中该惰性成分是填充剂、粘合剂、溶剂、赋性剂或载体。
13.按照权利要求9所述的方法，其中该剂型包括每份大约50到大约300mg的PPS或其药学上可接受的盐。
14.按照权利要求1所述的方法，其中该药学上可接受的盐是钠盐。
15.按照权利要求14所述的方法，其中该组合物是含有PPS钠、微晶纤维素和硬脂酸镁的明胶胶囊。
16.按照权利要求1的方法，其中该患者是人。
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