CN1243569C - 活性p40结合物在鼻腔途径给药中的应用 - Google Patents

活性p40结合物在鼻腔途径给药中的应用 Download PDF

Info

Publication number
CN1243569C
CN1243569C CNB998062650A CN99806265A CN1243569C CN 1243569 C CN1243569 C CN 1243569C CN B998062650 A CNB998062650 A CN B998062650A CN 99806265 A CN99806265 A CN 99806265A CN 1243569 C CN1243569 C CN 1243569C
Authority
CN
China
Prior art keywords
pro
lys
aaa
asn
ser
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Fee Related
Application number
CNB998062650A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1301176A (zh
Inventor
C·安德瑞珀尼
I·雷尤利
T·恩盖恩
J－F·亨尤
T·保斯安特
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Pierre Fabre Medicament SA
Original Assignee
Pierre Fabre Medicament SA
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Pierre Fabre Medicament SA filed Critical Pierre Fabre Medicament SA
Publication of CN1301176A publication Critical patent/CN1301176A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN1243569C publication Critical patent/CN1243569C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Fee Related legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
    • A61K2039/541—Mucosal route
    • A61K2039/543—Mucosal route intranasal
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6068—Other bacterial proteins, e.g. OMP

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明涉及至少一个肠细菌外膜蛋白A片段或克雷伯菌属膜蛋白片段在制备一种鼻腔施用以提高哺乳动物对抗原或半抗原的免疫性的药物组合物中的应用。

Description

活性P40结合物在鼻腔途径给药中的应用
本发明涉及在鼻腔给药中有效的免疫制剂的生产。因此，本发明涉及载体蛋白的应用，当半抗原/载体蛋白结合物(conjugate)通过鼻腔途径施用时，该载体蛋白可改善对半抗原的免疫应答。
通过口服或鼻腔给药方式使用疫苗被认为对致病微生物的根除有很大的影响。特别地，使疫苗在应用上具有更大的适应性(热稳定性，无需注射的施用等)的任何修饰都将导致更为有效和更为广泛使用的疫苗接种。另一方面，通过粘膜途径进行免疫使得有可能诱导构成防止微生物侵入的第一道屏障的局部免疫。
目前，市场上的口服疫苗仅涉及减毒或重组的活载体：-  抗脊髓灰质炎的四价口服疫苗，-  抗伤寒的口服疫苗。
鼻腔或口服接种疫苗的方法在文献中已有描述。
例如，对下列物质的粘膜给药已进行过实验：相应于肺炎球菌(Pneumococcus)表面蛋白A的PspA(Briles D.E.，专利EP0,682,950)、血凝素丝(hemaglutinin filaments)(Capron A.，专利FR 2,718,750；Kimura A.专利 EP 0,471,177；Shahin R.D.，美国专利7532327)、破伤风毒素片段(Dougan G.专利WO 93/21950)、和霍乱毒素B(CTB)。
脑膜炎奈瑟球菌(Neisseria meningitidis)一个外膜蛋白已被作为佐剂与半抗原混合用于鼻腔免疫(Vande Verg L.L.，感染和免疫(Infection and immunity)1996，64：5263-5268)。
意外地，本发明申请人发现来源于其它细菌的膜蛋白当其和抗原一起通过鼻腔施用时，可诱导具有令人满意强度和质量的免疫应答，足以用于制备疫苗。
为此，本发明的主旨是使用肠细菌膜蛋白OmpA的至少一个片段来制备拟通过鼻腔途径施用的药物组合物，以提高哺乳动物对抗原或半抗原的免疫性。
在本发明中，术语“OmpA”是指外膜A型蛋白(OmpA是外膜蛋白A，Outer membrane protein A)。
本发明的另一个主旨是使用克雷伯菌属(Klebsiella)膜蛋白的至少一个片段来制备通过鼻腔途径施用的药物组合物，以提高哺乳动物对抗原或半抗原的免疫性。
膜蛋白优选肺炎克氏杆菌(Klebsiella pneumoniae)的OmpA蛋白。
有利的是，根据本发明的肠细菌膜蛋白OmpA或克雷伯菌属膜蛋白的所述片段通过重组方法获得。
更有利的是，重组方法获得的所述膜蛋白或其片段经提纯后，可在下列去污剂之一存在的情况下复性：Zwittergent 3-14、Zwittergent 3-12和辛基吡喃葡糖苷，优选0.05％-2％(w/v)浓度的Zwittergent 3-14，最优选浓度接近0.1％的Zwittergent 3-14。
专利申请WO 96/14415显示肺炎克氏杆菌的主要膜蛋白，即称为P40的OmpA，与肽亚基抗原偶联，通过***免疫途径有很强的免疫原性。在大肠细菌中以包含体形式表达的重组P40蛋白被命名为rP40。
在本发明中，尤其适合的蛋白包含序列SEQ ID No 1。
本申请人已证明，由于肠细菌肺炎克氏杆菌是一种非常广泛的病原体，故在所有成人中均发现抗P40抗体的应答。这种致敏有利于增强对在偶联了载体蛋白P40时施用的抗原或半抗原的抗体应答。该施用是在无佐剂情况下经鼻腔途径进行的。
根据本发明的所述抗原或半抗原可选自蛋白、肽、多糖、寡糖和核酸。优选地，这些物质来源于细菌或病毒。
因此，本发明适用于制备抵抗任何呼吸道致病微生物的疫苗，这些微生物例如选自RSV、副流感病毒(PIV)、流感病毒、汉坦病毒、链球菌、肺炎球菌和脑膜炎球菌。
根据本发明的抗原或半抗原将包括所述微生物的至少一个片段，例如蛋白片段。本领域技术人员将明了如何采用诸如以下实施例中描述的常规技术检测该片段是否能赋予所期望的免疫性。
特别地，本发明适用于制备抗RSV(或呼吸道合胞病毒)、尤其是人或牛的RSV的疫苗。在该情况下，根据本发明的抗原或半抗原包含病毒RSV的至少一个蛋白片段，特别是RSV的蛋白G的至少一个片段。
这种片段的序列特别描述于专利申请WO95/27787。
优选地，病毒RSV的所述蛋白片段选自具有SEQ ID No 2至SEQ IDNo 74氨基酸序列的片段。
适于制备根据本发明疫苗的序列包括SEQ ID No 2至SEQ ID No 74的序列。
肽与克雷伯菌属膜蛋白如rP40的至少一个片段偶联形成的化学结合物可产生很好的结果，以肺炎克氏杆菌预先致敏后对免疫应答的评价显示出对这些肽的非常强的抗体应答。
优选地，来源于肠细菌膜蛋白OmpA或克雷伯菌属膜蛋白的蛋白片段与抗原或半抗原如RSV的蛋白片段共价连接。
本发明还包括根据本发明的肠细菌膜蛋白OmpA或克雷伯菌属膜蛋白的至少一个片段的应用，其特征在于所述片段与所述抗原或半抗原共价连接。
根据本发明，可引入一或多个成键成分，尤其是氨基酸，以利于膜蛋白片段和抗原或半抗原之间的偶联反应。
根据本发明，抗原或半抗原的共价偶联可发生在本发明的膜蛋白片段的N端或C端。能进行该偶联的双功能试剂的选择取决于选取用来进行偶联的膜蛋白片段的末端和被偶联的抗原或半抗原的性质。这些偶联技术是本领域技术人员所熟知的。
肽与肠细菌膜蛋白OmpA或克雷伯菌属膜蛋白的至少一个片段的结合物可通过遗传重组制备。事实上，该杂合蛋白(结合物)可通过重组DNA技术产生，即通过将抗原或半抗原肽的编码序列***或添加至编码膜蛋白片段的DNA序列上来获得。这些通过遗传重组制备杂合蛋白的技术是本领域技术人员所熟知的(见，例如S.C.MAKRIDES，1996，微生物学评论(Microbiologicals Reviews)，60，3，512-538)，在本说明书中不再详述。
因此，本发明还包括根据本发明的应用，其特征在于膜蛋白片段与蛋白性质的抗原或半抗原偶联获得的杂合蛋白，是通过遗传重组制备的。
本申请人还证明，在缺乏对肺炎克氏杆菌的致敏时，通过鼻腔施用偶联了膜蛋白如rP40蛋白的至少一个片段的半抗原，无需佐剂存在，即可诱导抗半抗原的抗体应答。
本发明涉及根据本发明的应用，尤其是在无佐剂的情况下的应用，其特征在于药物组合物含有根据本发明的偶联了抗原或半抗原的膜蛋白片段，或能表达杂合重组蛋白的转化宿主细胞，其中该杂合重组蛋白包含根据本发明的偶联了抗原或半抗原的膜蛋白片段。能表达所述杂合蛋白的转化宿主细胞优选革兰氏阴性细菌如肺炎克氏杆菌、目前用于发酵的K12类大肠杆菌、或转化了含有强启动子如色氨酸启动子(trp)操纵子的表达载体质粒的大肠杆菌。还优选革兰氏阳性菌如非致病性葡萄球菌(staphylococci)、肉葡萄球菌和木糖葡萄球菌,因为这些细菌膜表面不产生任何LPS(脂多糖)。这些葡萄球菌可被含有启动子如trp、或脂酶分泌信号或甚至是蛋白A的分泌信号、亦或是肺炎克氏杆菌OmpA启动子信号的表达载体转染。
最后，本发明还涉及通过重组途径制备蛋白或其一个片段的方法，其特征在于该蛋白或其片段提纯后，在含有下列去污剂之一的溶液中复性：Zwittergent 3-14、Zwittergent 3-12和辛基吡喃葡糖苷，而且所述重组蛋白不是干扰素β。
优选地，所述蛋白是肠细菌膜蛋白，尤其是OmpA类膜蛋白。非常优选地，所述蛋白是肺炎克氏杆菌的OmpA。
根据本发明的方法，Zwittergent 3-14的优选浓度是0.05％-2％，更优选为接近0.1％左右。
下列实施例旨在说明本发明，并非对其范围有任何限制。
在这些实施例中，将参考如下附图：
图1A和1B：SDS-PAGE电泳分析纯化后的rP40蛋白。
图1A：以考马斯兰检测
-  泳道1：第1批，2ug
-  泳道2：第1批，10ug
-  泳道3：第2批，2ug
-  泳道4：第2批，10ug
-  泳道5：第3批，2ug
-  泳道6：第3批，10ug
图1B：采用抗P40的兔多克隆血清进行的免疫印迹和检测
-  std：分子量标准
-  泳道1：变性的rP40，100ng
-  泳道2：天然rP40，100ng。
图2：根据ELISA检测的抗P40抗体的O.D.值(光密度值)划分病人。
图3：抗G1’的抗体应答。
图4：抗rP40的抗体应答。
图5：抗G1’的IgA型抗体应答。
图6：第二次应答中获得的抗G1’免疫球蛋白的同种型分析。
图7：第三次应答中获得的抗G1’免疫球蛋白的同种型分析。
图8：抗G1’的所有IgG类型的血清抗体应答。
图9：三次免疫后血清抗G1’免疫球蛋白的同种型分析。
图10：三次免疫后支气管-肺泡冲洗物的抗G1’免疫球蛋白的同种型分析。
实施例1：rP40的克隆
rP40基因的克隆：
通过PCR(聚合酶链式反应)从肺炎克氏杆菌IP I145株(描述于专利WO96/14415)的染色体DNA中扩增获得rP40的编码基因。经DNA测序鉴定后，将相应于rP40的片段克隆至各种表达载体中，尤其是trp操纵子启动子控制下的表达载体，其中该启动子位于前导肽的9个氨基酸(MKAIFVLNA)上游。rP40肽序列由序列列表中的SEQ ID No1表示。在各种大肠杆菌K12株中，rP40蛋白以包含体的形式产生，其产量相当高(＞10％，g蛋白/g生物固体)。
rP40融合蛋白的发酵
将转化了质粒pvaLP40的大肠杆菌K12接种于装有含氨苄青霉素(100ug/ml，Sigma)和四环素(8ug/m1，Sigma)的250ml TSB(TrypticSoy Broth，Difco)培养基的三角瓶中。在37℃振荡培养16小时。取200ml该培养物接种于含有2L培养基的发酵罐(CHEMAP CF3000，ALFA LAVAL)中。该培养基含有(g/l)：甘油，5；硫酸铵，2.6；磷酸二氢钾，3；磷酸氢二钾，2；柠檬酸钠，0.5；酵母提取物，1；氨苄青霉素，0.1；四环素0.008；硫胺素，0.07；硫酸镁，1和1ml/l的痕量元素溶液和0.65ml/l的维生素溶液。发酵过程中对下列参数进行控制：pH，搅拌，温度，充氧度，复合原料(甘油或葡萄糖)的供应。pH调至7.0。温度恒定在37℃。通过以恒定流速(12ml/h)提供甘油(87％)以维持溶解氧压信号在30％来控制生长。当(580nm处检测的)培养基浊度值达到80时(大约培养24小时后)，通过添加吲哚丙烯酸(IAA)至终浓度25mg/l来诱导蛋白的产生。诱导约4小时后，离心收获细胞。获得的生物量以湿生物量表示，为约200g。
实施例2：rP40的抽提和纯化
材料和方法
rP40的抽提
培养基离心(4000rpm，10分钟，4℃)后，将细胞重悬于pH8.5的25mM Tris-HCl缓冲液中。以溶菌酶处理(0.5g/l，1小时/室温/轻轻搅拌)，促使包含体释放。
将离心(10,000g，4℃，25分钟)获得的包含体沉淀悬浮于含有5mM MgCl2的25mM Tris-HCl(pH 8.5)缓冲液中，然后再离心(10,000g，15分钟)。
将包含体在含有7M尿素(变性剂)和10mM二硫苏糖醇(二硫桥还原)的25mM Tris-HCl(pH8.5)缓冲液中于37℃孵育2小时，以获得蛋白的变性。离心(10,000g，15分钟)可除去包含体的不溶部分。
以13倍体积的含有NaCl(8.76g/l)和Zwittergent3-14(0.1％，w/v)的25mM Tris-HCl(pH8.5)缓冲液稀释后，混合物在接触空气的情况下于室温搅拌过夜(通过稀释和二硫桥的再氧化实现蛋白复性)。
rP40蛋白的纯化
阴离子交换层析步骤
再一次离心后，将样品对含有0.1％Zwittergent3-14的25mMTris-HCl(pH8.5)缓冲液(100倍体积的缓冲液)4℃透析过夜。
将透析物上样至含有强阴离子交换剂类支持物(Biorad MacroPrep High Q gel)的柱子中，该柱子用上述缓冲液以15cm/h的线性流速进行过平衡。在280nm处检测蛋白。rP40蛋白用含有0.6M NaCl、0.1％Zwittergent3-14的25mM Tris-HCl(pH8.5)缓冲液以60cm/h的线性流速进行洗脱。
阳离子交换层析步骤
合并含有rP40蛋白的馏分，并借助以下***之一通过超滤进行浓缩：采用YM10型Diaflo膜(截流阈值为10kDa)用于约100ml体积的搅拌式Amicon小室***，或采用截流阈值为10kDa的膜片用于更大体积的Milipore Minitan切向流动过滤***。将由此浓缩的馏分在含有0.1％Zwittergent3-14的20mM柠檬酸缓冲液(pH3.0)中4℃透析过夜。
透析物上样于含有强阳离子交换剂类支持物(Biorad Macro PrepHigh Sgel)的柱子中，该柱子用含有0.1％Zwittergent3-14的20mM柠檬酸缓冲液(pH3.0)进行过平衡。rP40蛋白以0.7M浓度NaCl洗脱(速度61cm/h)。合并含有rP40的馏分，并按上述方法进行浓缩。
结果
从1升培养物开始，经一个变性/复性循环可获得300mg蛋白(根据Lowry法分析估计)。经两个层析步骤后纯化获得75mg rP40。
如上所述，为了获得5-10mg/ml的终浓度，rP40蛋白纯化后需浓缩。电泳图谱显示了大约95％的纯度(图1A)。经免疫印迹分析，该蛋白可特异地被来自小鼠的抗天然P40的单克隆抗体所识别(图1B)。
通过SDS-PAGE监测蛋白情况。取决于其变性或天然的形式不同，从肺炎克氏杆菌膜提取的P40蛋白具有特征性电泳行为(迁移)。天然形式(β-片层结构)的分子量实际上比用变性剂如尿素或盐酸胍处理或在SDS存在时加热至100℃处理后的变性形式(α-螺旋结构)的分子量低(图1B)。无论复性过程中是否存在0.1％(w/v)Zwittergent3-14，rP40蛋白在复性结束后均是不正确地复性。相反，在对含有0.1％(w/v)Zwittergent 3-14的25mM Tris-HCl(pH8.5)透析后可获得完全复性。然而，应该注意，只有在Zwittergent 3-14存在时进行稀释步骤和室温处理，才可获得这种复性(无去污剂存在时出现阴性结果)。
实施例3：G1’肽与rP40的偶联
材料和方法
G1’肽是15个氨基酸的合成肽，其序列如下(SEQ ID No74)：
N-1SIDSNNPTOWAISKC15-C
在C-末端位置无Cys(半胱氨酸)残基时，该肽(1-14部分)相应于呼吸道合胞病毒G蛋白的174-187部分，而且与天然肽相比存在两个主要修饰：
-13位Cys残基由Ser(苏氨酸)残基替换，
-形成二硫桥的3位和9位Cys残基分别由Asp(天冬氨酸)和Orn(鸟氨酸)替代，形成内酰胺型桥。
引入这些修饰的目的是为了去除天然蛋白中的Cys残基，以便能通过C-末端位置引入的Cys残基进行该肽与蛋白的一对一偶联，而同时通过内酰胺桥的引入又维持了该肽的结构。
所述肽与蛋白的偶联采用了BHA或溴-N-羟基琥珀酰亚胺乙酸酯试剂(Svenson等，1990，美国科学院院刊(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)87，1347；Bernatowicz和Matsueda，1986，分析生物化学(Anal.Biochem.)155，95)。这种异双功能试剂可通过溴乙酰化活化蛋白的Lys(赖氨酸)残基，然后通过Cys残基携带的自由硫醇基与肽偶联。
首先，用BHA活化rP40蛋白。将rP40对含有0.1％Zwittergent3-14的0.1M磷酸缓冲液(pH7)于4℃透析24小时。透析后，使用同样的缓冲液将浓度调至5mg/ml，之后按1.2mg(50ul)/mg rP40的比例加入BHA。
将整个溶液置于暗处在室温搅拌1小时。
之后将激活的rP40通过凝胶过滤层析脱盐(以上述缓冲液进行洗脱)。合并含有溴乙酰化蛋白的馏分。
进行偶联时，将肽(溶于含有0.1％Zwittergent 3-14的pH7的0.1M磷酸缓冲液中，浓度为10mg/ml)按0.4mg/mg蛋白的比例加入活化的蛋白中。在氮气流中饱和后，将试管再次置于暗处室温搅拌2小时。
未结合多肽可通过透析步骤或分子筛层析除去。
结果
获得的结合物通过蛋白分析(BCA或LOWRY法)和SDS-PAGE电泳鉴定。肽与蛋白的偶联程度可通过羧甲基半胱氨酸残基分析进行估计：经PITC(Pico-Tag法，Waters)衍生后通过HPLC分析水解(6N HCl)释放的氨基酸。
由该方法测定的偶联度大约为10G1’肽/摩尔rP40。
实施例4：成人的天然免疫
用ELISA检测分析来源于临床研究的人血清，以测定抗P40抗体的存在。
结果见图2。
在稀释400倍后测试的113个血清中，110个血清给出抗P40 IgG的比色信号。在所有的病人中均有抗P40的循环抗体，其水平或多或少依赖于所研究的患者。
实施例5：致敏和短间隔免疫后抗G1’的抗体应答
为模拟人的血清阳性，用肺炎克氏杆菌I145株致敏BALB/C小鼠两次，或不予致敏。致敏7天后在无佐剂的情况下给小鼠进行鼻腔免疫。该免疫采用小剂量抗原，小鼠接受10ug偶联了rP40的G1’等价物。第一次免疫的10到20天后小鼠接受一次加强免疫。第一次免疫后第9天和每次加强(第二次和第三次应答)后第10天对小鼠实施眶后窦穿刺。用ELISA方法分析血清的抗G1’(图3)和抗载体(图4)抗体。
5.1抗G1’血清IgG的分析
结果见图3。
在初次应答中，用肺炎克氏杆菌预先致敏和rP40-G1’免疫的小鼠是唯一产生抗G1’抗体的小鼠。
第二次免疫后，发现用肺炎克氏杆菌预先致敏和rP40-G1’免疫的小鼠产生的抗G1’抗体水平增加。在没有预先致敏的情况下，存在rP40-G1’结合物时进行的第二次免疫可诱导抗G1’的抗体应答。
三次免疫后，在预先致敏和未预先致敏的小鼠中抗G1’抗体应答均有增加。
5.2抗rP40血清IgG的分析
结果见图4。
抗P40抗体应答显示，无论所研究的小鼠是哪一批，其均会被肺炎克氏杆菌以相同的方式致敏。
存在rP40-G1’结合物时的免疫可轻度增加抗rP40的抗体应答。5.3抗G1’的血清IgA分析
其次，我们分析了血清IgA型抗G1’抗体应答：通过粘膜(鼻腔或口腔)途径进行的免疫特有的免疫球蛋白。
结果见图5。
单次免疫后，检测不到IgA。两次免疫后，在用肺炎克氏杆菌预先致敏和rP40-G1’免疫的小鼠中可实质上检测到抗G1’的IgA。第三次免疫使该应答增强。在没有预先致敏时，在以rP40-G1’结合物进行两次免疫后的小鼠中检测到抗G1’的IgA。第三次免疫增加了IgA的水平。
5.4抗G1’血清免疫球蛋白的同种型分析
可观察到两类应答，Th1和Th2。这两类应答在产生的细胞因子情况和免疫应答中的功能方面均不同。IgG1是Th2类应答所特有的，而IgG2a是Th1类应答所特有的。
Th1和Th2应答的混合情况仅在以rP40-G1’结合物免疫的小鼠中发现，而且不论这些小鼠是否经过肺炎克氏杆菌预先致敏处理(图6)。
三次免疫后(图7)，这种混合情况在rP40-G1’结合物免疫的小鼠中仍然存在。
实施例6：致敏和长间隔免疫后抗G1’的抗体应答
相对于上述实验步骤，第一次免疫和最后的致敏之间相隔3周而非1周。通过ELISA分析血清中的抗G1’抗体，以及第三次应答的支气管-肺泡冲洗物中的抗G1’抗体。
6.1抗G1’血清IgG的分析
如图8所示，第一次免疫的7天后，在用肺炎克氏杆菌预先致敏和rP40-G1’结合物免疫的小鼠中可检测到所有类型IgG的抗G1’血清抗体。两次再免疫后该抗体应答得到增强。
6.2血清免疫球蛋白的同种型分析
结果见图9。
在本例中，我们也观察到混合应答，实际上我们获得了相同滴度的IgG1和IgG2a(图9)。此外，在用肺炎克氏杆菌预先致敏和3周后rP40-G1’结合物免疫的小鼠中发现高水平的IgA。
6.3支气管-肺泡冲洗物中的免疫球蛋白同种型分析
在支气管-肺泡冲洗物中，仅在用肺炎克氏杆菌预先致敏和用rP40-G1’结合物免疫3次的小鼠中发现4种类型的免疫球蛋白(图10)。
                                      序列表
SEQ ID No：1的信息                                        rp40
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：344氨基酸，1032核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白质
                         1                                           12
                    N  -Met Lys Ala Ile Phe Val Leu Asn Ala Ala Pro Lys
                    5′-ATG AAA GCA ATT TTC GTA CTG AAT GCG GCT CCG AAA
                                                                     30
Asp Asn Thr Trp Tyr Ala Gly Gly Lys Leu Gly Trp Ser Gln Tyr His Asp Thr
GAT AAC ACC TGG TAT GCA GGT GGT AAA CTG GGT TGG TCC CAG TAT CAC GAC ACC
                                                                     48
Gly Phe Tyr Gly Asn Gly Phe Gln Asn Asn Asn Gly Pro Thr Arg Asn Asp Gln
GGT TTC TAC GGT AAC GGT TTC CAG AAC AAC AAC GGT CCG ACC CGT AAC GAT CAG
                                                                     66
Leu Gly Ala Gly Ala Phe Gly Gly Tyr Gln Val Asn Pro Tyr Leu Gly Phe Glu
GTT GGT GCT GGT GCG TTC GGT GGT TAC CAG GTT AAC CCG TAC CTC GGT TTC GAA
                                                                     84
Met GLy Tyr Asp Trp Leu GLy Arg Met Ala Tyr Lys Gly Ser Val Asp Asn Gly
ATG GGT TAT GAC TGG CTG GGC CGT ATG GCA TAT AAA GGC AGC GTT GAC AAC GGT
                                                                    102
Ala Phe Lys Ala Gln Gly Val Gln Leu Thr Ala Lys Leu Gly Tyr Pro Ile Thr
GCT TTC AAA GCT CAG GGC GTT CAG CTG ACC GCT AAA CTG GGT TAC CCG ATC ACT
                                                                    120
Asp Asp Leu Asp Ile Tyr Tnr Arg Leu Gly Gly Met Val Trp Arg Ala Asp Ser
GAC GAT CTG GAC ATC TAC ACC CGT CTG GGC GGC ATG GTT TGG CGC GCT GAC TCC
                                                                    138
Lys Gly Asn Tyr Ala Ser Thr Gly Val Ser Arg Ser Glu His Asp Thr Gly Val
AAA GGC AAC TAC GCT TCT ACC GGC GTT TCC CGT AGC GAA CAC GAC ACT GGC GTT
                                                                    156
Ser Pro Val Phe Ala Gly Gly Val Glu Trp Ala Val Thr Arg Asp Ile Ala Thr
TCC CCA GTA TTT GCT GGC GGC GTA GAG TGG GCT GTT ACT CGT GAC ATC GCT ACC
                                                                    174
Arg Leu Glu Tyr Gln Trp Val Asn Asn Ile Gly Asp Ala Gly Thr Val Gly Thr
CGT CTG GAA TAC CAG TGG GTT AAC AAC ATC GGC GAC GCG GGC ACT GTG GGT ACC
                                                                    192
Arg Pro Asp Asn Gly Met Leu Ser Leu Gly Val Ser Tyr Arg Phe Gly Gln Glu
CGT CCT CAT AAC GGC ATG CTG AGC CTG GGC GTT TCC TAC CGC TTC GGT CAG GAA
                                                                    210
Asp Ala Ala Pro Val Val Ala Pro Ala Pro Ala Pro Ala Pro Glu Val Ala Thr
GAT GCT GCA CCG GTT GTT GCT CCG GCT CCG GCT CCG GCT CCG GAA GTG GCT ACC
                                                                    228
Lys His Phe Thr Leu Lys Ser Asp Val Leu Phe Asn Phe Asn Lys Ala Thr Leu
AAG CAC TTC ACC CTG AAG TCT GAC GTT CTG TTC AAC TTC AAC AAA GCT ACC CTG
                                                                    246
Lys Pro Glu Gly Gln Gln Ala Leu Asp Gln Leu Tyr Thr Gln Leu Ser Asn Met
AAA CCG GAA GGT CAG CAG GCT CTG GAT CAG CTG TAC ACT CAG CTG AGC AAC ATG
                                                                    264
Asp Pro Lys Asp Gly Ser Ala Val Val Leu Gly Tyr Thr Asp Arg Ile Gly Ser
GAT CCG AAA GAC GGT TCC GCT GTT GTT CTG GGC TAC ACC GAC CGC ATC GGT TCC
                                                                    282
Glu Ala Tyr Asn Gln Gln Leu Ser Glu Lys Arg Ala Gln Ser Val Val Asp Tyr
GAA GCT TAC AAC CAG CAG CTG TCT GAG AAA CGT GCT CAG TCC GTC GTT GAC TAC
                                                                    300
Leu Val Ala Lys Gly Ile Pro Ala Gly Lys Ile Ser Ala Arg Gly Met Gly Glu
CTG GTT GCT AAA GGC ATC CCG GCT GGC AAA ATC TCC GCT CGC GGC ATG GGT GAA
                                                                    318
Ser Asn Pro Val Thr Gly Asn Thr Cys Asp Asn Val Lys Ala Arg Ala Ala Leu
TCC AAC CCG GTT ACT GGC AAC ACC TGT GAC AAC GTG AAA GCT CGC GCT GCC CTG
                                                                    336
Ile Asp Cys Leu Ala Pro Asp Arg Arg Val Glu Ile Glu Val Lys Gly Tyr Lys
ATC GAT TGC CTG GCT CCG GAT CGT CGT GTA GAG ATC GAA GTT AAA GGC TAC AAA
                            344
Glu Val Val Thr Gln Pro Gln Ala
GAA GTT GTA ACT CAG CCT CAG GCT
SEQ ID NO：2信息                        G2A
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：101氨基酸，303核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白质
    130
N  -Thr Val Lys Thr Lys Asn Thr Thr Thr Thr Gln Thr Gln Pro Ser Lys Pro Thr Thr Lys
5′-ACC GTG AAA ACC AAA AAC ACC ACG ACC ACC CAG ACC CAG CCG AGC AAA CCG ACC ACC AAA
                                                                                150
Gln Arg Gln Asn Lys Pro Pro Asn Lys Pro Asn Asn Asp Phe His Phe Glu Val Phe Asn Phe
CAG CGT CAG AAC AAA CCG CCG AAC AAA CCG AAC AAC GAT TTC CAT TTC GAA GTG TTC AAC TTC
171    173          176                 182                 186
Val Pro Cys Ser Ile Cys Ser Asn Asn Pro Thr Cys Trp Ala Ile Cys Lys Arg Ile Pro Asn
GTG CCG TGC AGC ATC TGC AGC AAC AAC CCG ACC TGC TGG GCG ATC TGC AAA CGT ATC CCG AAC
192
Lys Lys Pro Gly Lys Lys Thr Thr Thr Lys Pro Thr Lys Lys Pro Thr Phe Lys Thr Trh Lys
AAA AAA CCG GGC AAA AAA ACC ACG ACC AAA CCG ACC AAA AAA CCG AAC TTC AAA ACC ACC AAA
213                                                                 230
Lys Asp His Lys Pro Gln Thr Thr Lys Pro Lys Glu Val Pro Thr Thr Lys Pro - C
AAA GAT CAT AAA CCG CAG ACC ACC AAA CCG AAA GAA GTG CCG ACC ACC AAA CCG - 3′
SEQ ID NO：3的信息                          G2B
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：101氨基酸，303核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白质
    130
N  -Tgr Ala Gln Thr Lys Gly Arg Ile Thr Thr Ser Thr Gln Thr Asn Lys Pro Ser Thr Lys
5′-ACC GCG CAG ACC AAA GGC CGT ATC ACC ACC AGC ACC CAG ACC AAC AAA CCG AGC ACC AAA
150
ser Arg Ser Lys Asn Pro Pro Lys Lys Pro Lys Asp Asp Tyr His Phe Glu Val Phe Asn Phe
AGC CGT AGC AAA AAC CCG CCG AAA AAA CCG AAA GAT GAT TAC CAC TTC GAA GTG TTC AAC TTC
171     173         176                     182                         186
Val Pro Cys Ser Ile Cys Gly Asn Asn Gln Leu Cys Lys Ser Ile Cys Lys Thr Ile Pro Ser
GTG CCC TGC AGC ATC TGC GGC AAC AAC CAG CTG TGC AAA ACC ATC TGC AAA ACC ATC CCG AGC
192
Asn Lys Pro Lys Lys Lys Pro Thr Ile Lys Pro Thr Asn Lys Pro Thr Thr Lys Thr Thr Asn
AAC AAA CCG AAA AAG AAA CCG ACC ATC AAA CCG ACC AAC AAA CCG ACC ACC AAA ACC ACC AAC
213                                                                 230
Lys Arg Asp Pro Lys Thr Pro Ala Lys Met Pro Lys Lys Glu Ile Ile Thr Asn - C
AAA CGG GAT CCG AAA ACC CCG GCG AAA ATG CCG AAG AAG GAA ATC ATC ACC AAC - 3′
SEQ ID NO：4的信息                      G2AδCys
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：101氨基酸，303核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白质
    130
N  -Thr Val Lys Thr Lys Asn Thr Thr Thr Thr Gln Thr Gln Pro Ser Lys Pro Thr Thr Lys
5′-ACC GTG AAA ACC AAA AAC ACC ACG ACC ACC CAG ACC CAG CCG AGC AAA CCG ACC ACC AAA
150
Gln Arg Gln Asn Lys Pro Rro Asn Lys Pro Asn Asn Asp Phe His Phe Glu Val Phe Asn Phe
CAG CGT CAG AAC AAA CCG CCG AAC AAA CCG AAC AAC GAT TTC CAT TTC GAA GTG TTC AAC TTC
171    173          176                    182                          186
Val Pro Ser Ser Ile Cys Ser Asn Asn Pro Thr Cys Trp Ala Ile Ser Lys Arg Ile Pro Asn
GTG CCG AGC AGC ATC TGC AGC AAC AAC CCG ACC TGC TGG GCG ATC AGC AAA CGT ATC CCG AAC
192
Lys Lys Pro Gly Lys Lys Thr Thr Thr Lys Pro Thr Lys Lys Pro Thr Phe Lys Thr Thr Lys
AAA AAA CCG GGC AAA AAA ACC ACG ACC AAA CCG ACC AAA AAA CCG ACC TTC AAA ACC ACC AAA
213                                                                 230
Lys Asp His Lys Pro Gln Thr Thr Lys Pro Lys Glu Val Pro Thr Thr Lys Pro - C
AAA GAT CAT AAA CCG CAG ACC ACC AAA CCG AAA GAA GTG CCG ACC ACC AAA CCG - 3′
SEQ ID NO：5的信息               G2BδCys
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：101氨基酸，303核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白质
    130
N  -Thr Ala Gln Thr Lys Gly Arg Ile Thr Thr Ser Thr Gln Thr Asn Lys Pro Ser Thr Lys
5′-ACC GCG CAG ACC AAA GGC CGT ATC ACC ACC AGC ACC CAG ACC AAC AAA CCG AGC ACC AAA
150
Ser Arg Ser Lys Asn Pro Pro Lys Lys Pro Lys Asp Asp Tyr His Phe Glu Val Phe Asn Phe
AGC CGT AGC AAA AAC CCG CCG AAA AAA CCG AAA GAT GAT TAC CAC TTC GAA GTG TTC AAC TTC
171     173         176                     182             186
Val Pro Ser Ser Ile Cys Gly Asn Asn Gln Leu Cys Lys Ser Ile Ser Lys Thr Ile Pro Ser
GTG CCC AGC AGC ATC TGC GGC AAC AAC CAG CTG TGC AAA AGC ATC AGC AAA ACC ATC CCG AGC
192
Asn Lys Pro Lys Lys Lys Pro Thr Ile Lys Pro Thr Asn Lys Pro Thr Thr Lys Thr Thr Asn
AAC AAA CCG AAA AAG AAA CCG ACC ATC AAA CCG ACC AAC AAA CCG ACC ACC AAA ACC ACC ACC
213                                                                 230
Lys arg Asp Pro Lys Thr Pro Ala Lys Met Pro Lys Lys Glu Ile Ile thr Asn - C
AAA CGT GAT CCG AAA ACC CCG GCG AAA ATG CCG AAG AAG GAA ATC ATC ACC AAC - 3′
SEQ ID NO：6的信息                      G1ACys
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：14氨基酸，42核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：肽
    174     176                     182             186 187
N  -Ser Ile Cys Ser Asn Asn Pro Thr Cys Trp Ala Ile Cys Lys - C
5′-AGC ATC TGC AGC AAC AAC CCG ACC TGC TGG CGC ATC TGC AAA - 3′
SEQ ID NO：7的信息    G1BCys
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：14氨基酸，42核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：肽
     174     176                     18              186 187
 N  -Ser Ile Cys Gly Asn Asn Gln Leu Cys Lys Ser Ile Cys Lys - C
 5′-AGC ATC TGC GGC AAC AAC CAG CTG TGC AAA AGC ATC TGC AAA - 3′
SEQ ID NO：8的信息                 G1A
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：14氨基酸，42核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：肽
    174     176                     182             186 187
N  -Ser Ile Cys Ser Asn Asn Pro Tnr Cys Trp Ala Ile Ser Lys - C
5′-AGC ATC TGC AGC AAC AAC CCG ACC TGC TGG GCG ATC AGC AAA - 3′
SEQ ID NO：9的信息                    G1B
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：14氨基酸，42核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：肽
    174     176                     182             186 187
N  -Ser Ile Cys Gly Asn Asn Gln Leu Cys Lys Ser Ile Ser Lys - C
5′-AGC ATC TGC GGC AAC AAC CAG CTG TGC AAA AGC ATC AGC AAA - 3′
SEQ ID NO：10的信息    G1’A
序列类型：氨基酸
序列长度：14氨基酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：肽
    174     176                     182             186 187
N  -Ser Ile Asp Ser Asn Asn Pro Thr Orn Trp Ala Ile Cys Lys - C
SEQ ID NO：11的信息    G1’B
序列类型：氨基酸
序列长度：14氨基酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：肽
    174     176                     182             186 187
N  -Ser Ile Asp Gly Asn Asn Gln Leu Orn Lys Ser Ile Cys Lys - C
SEQ ID NO：12的信息    G1’AδC
序列类型：氨基酸
序列长度：14氨基酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：肽
    174     176                     182             186 187
N  -Ser Ile Asp Ser Asn Asn Pro Thr Orn Trp Ala Ile Ser Lys - C
SEQ ID NO：13的信息    G1’BδC
序列类型：氨基酸
序列长度：14氨基酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：肽
    174     176                     182            186 187
N  -Ser Ile Asp Gly Asn Asn Gln Leu Orn Lys Ser Lle Ser Lys - C
SEQ ID NO：14的信息    G2AδCF
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：101氨基酸，303核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白质
130
N  -Thr Val Lys Thr Lys Asn Thr Thr Thr Thr Gln Thr Gln Pro Ser Lys Pro Thr Thr Lys
5′-ACC GTG AAA ACC AAA AAC ACC ACG ACC ACC CAG ACC CAG CCG AGC AAA CCG ACC ACC AAA
150                                                 163     165         168     170
Gln Arg Gln Asn Lys Pro Pro Asn Lys Pro Asn Asn Asp Ser His Ser Glu Val Ser Asn Ser
CAG CGT CAG AAC AAA CCG CCG AAC AAA CCG AAC AAC GAT TCC CAT TCC GAA GTG TCC AAC TCC
171     173         176                     182            186
Val Pro Ser Ser Ile Cys Ser Asn Asn Pro Thr Cys Trp Ala Ile Ser Lys Arg Ile Pro Asn
GTG CCG AGC AGC ATC TGC AGC AAC AAC CCG ACC TGC TGG GCG ATC AGC AAA CGT ATC CCG AAC
l92
Lys Lys Pro Gly Lys Lys Thr Thr Thr Lys Pro Thr Lys Lys Pro Thr Phe Lys Thr Thr Lys
AAA AAA CCG GGC AAA AAA ACC ACG ACC AAA CCG ACC AAA AAA CCG ACC TTC AAA ACC ACC AAA
213                                                                 230
Lys Asp His Lys Pro Gln Thr Thr Lys Pro Lys Glu Val Pro Thr Thr Lys Pro - C
AAA GAT CAT AAA CCG CAG ACC ACC AAA CCG AAA GAA GTG CCG ACC ACC AAA CCG - 3′
SEQ ID NO：15的信息                      G4A
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：17氨基酸，51核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：肽
    171     173         176                     182             186 187
N  -Val Pro Cys Ser Ile Cys Ser Asn Asn Pro Thr Cys Trp Ala Ile Cys Lys - C
5′-GTG CCG TGC AGC ATC TGC AGC AAC AAC CCG ACC TGC TGG GCG ATC TGC AAA - 3′
SEQ ID NO：16的信息                G4AδC
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：17氨基酸，51核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：肽
    171     173         176                     182             186 187
N  -Val Pro Ser Ser Ile Cys Ser Asn Asn Pro Thr Cys Trp Ala Ile Ser Lys - C
5′-GTG CCG AGC AGC ATC TGC AGC AAC AAC CCG ACC TGC TGG GCG ATC AGC AAA - 3′
SEQ ID NO：17的信息               G4B
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：17氨基酸，51核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：肽
    171     173         176                     182             186 l87
N  -Val Pro Cys Ser Ile Cys Gly Asn Asn Gln Leu Cys Lys Ser Ile Cys Lys - C
5′-GTG CCC TGC AGC ATC TGC GGC AAC AAC CAG CTG TGC AAC AGC ATC TGC AAA - 3′
SEQ ID NO：18的信息                 G4BδC
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：17氨基酸，51核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：肽
    171     173         176                     182             186 187
N  -Val Pro Ser Ser Ile Cys Gly Asn Asn Gln Leu Cys Lys Ser Ile Ser Lys - C
5′-GTG CCC AGC AGC ATC TGC GGC AAC AAC CAG CTG TGC AAA AGC ATC AGC AAA - 3′
SEQ ID NO：19的信息              G4’A
序列类型：氨基酸
序列长度：17氨基酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：肽
     171     173         176                     182             186 187
 N  -Val Pro Asp Ser Ile Asp Ser Asn Asn Pro Thr Orn Trp Ala Ile Orn Lys - C
SEQ ID NO：20的信息                G4’AδC
序列类型：氨基酸
序列长度：17氨基酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：肽
    171     173         176                     182             186 187
N  -Val Pro Ser Ser Ile Asp Ser Asn Asn Pro Thr Orn Trp Ala Ile Ser Lys - C
SEQ ID NO：2 1的信息    G4’B
序列类型：氨基酸
序列长度：17氨基酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：肽
    171     173         176                 182                     186 187
N  -Val Pro Asp Ser Ile Asp Gly Asn Gln Leu Orn Lys Sern Lys Ser Ile Orn Lys - C
SEQ ID NO：22的信息           G4BδC
序列类型：氨基酸
序列长度：17氨基酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：肽
    171     173         176                     182             186 187
N  -Val Pro Ser Ser Ile Asp Gly Asn Asn Gln Leu Orn Lys Ser Ile Ser Lys - C
SEQ ID NO：23的信息    G200A
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：61氨基酸，183核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白质
    140
N  -Gln Thr Gln Pro Ser Lys Pro Thr Thr Lys Gln Arg Gln Asn Lys Pro Pro Asn
5′-CAG ACC CAG CCG AGC AAA CCG ACC ACC AAA CAG CGT CAG AAC AAA CCG CCG AAC
158                                                         173         176
Lys Pro Asn Asn Asp Phe His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Cys Ser Ile Cys
AAA CCG AAC AAC GAT TTC CAT TTC GAA GTG TTC AAC TTC GTG CCG TGC AGC ATC TGC
177                 182             186
Ser Asn Asn Pro Thr Cys Trp Ala Ile Cys Lys Arg Ile Pro Asn Lys Lys Pro Gly
AGC AAC AAC CCG ACC TGC TGG GCG ATC TGC AAA CGT ATC CCG AAC AAA AAA CCG GGC
196             200
Lys Lys Thr Thr Thr - C
AAA AAA ACC ACG ACC - 3′
SEQ ID NO：24的信息    G198A
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：59氨基酸，177核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
     140
 N  -Gln Thr Gln Pro Ser Lys Pro Thr Thr Lys Gln Arg Gln Asn Lys Pro Pro Asn
 5′-CAG ACC CAG CCG AGC AAA CCG ACC ACC AAA CAG CGT CAG AAC AAA CCG CCG AAC
 158                                                         173         176
 Lys Pro Asn Asn Asp Phe His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Cys Sar Ile Cys
 AAA CCG AAC AAC GAT TTC CAT TTC GAA GTG TTC AAC TTC GTG CCG TGC AGC ATC TGC
 177                 182             186
 Ser Asn Asn Pro Thr Cys Trp Ala Ile Cys Lys Arg Ile Pro Asn Lys Lys Pro Gly
 AGC AAC AAC CCG ACC TGC TGG GCG ATC TGC AAA CGT ATC CCG AAC AAA AAA CCG GGC
196    198
Lys Lys Thr - C
AAA AAA ACC - 3′
SEQ ID NO：25的信息    G196A
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：57氨基酸，171核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    140
N  -Gln Thr Gln Pro Ser Lys Pro Tnr Thr Lys Gln Arg Gln Asn Lys Pro Pro Asn
5′-CAG ACC CAG CCG AGC AAA CCG ACC ACC AAA CAG CGT CGA AAC AAA CCG CCG AAC
158                                                         173         176
Lys Psn Asn Asn Asp Phe His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Cys Ser Ile Cys
AAA CCG AAC AAC GAT TTC CAT TTC GAA GTG TTC AAC TTC GTG CCG TGC AGC ATC TGC
177                182              186
Ser Asn Asn Pro Thr Cys Trp Ala Ile Cys Lys Arg Ile Pro Asn Lys Lys Pro Gly
AGC AAC AAC CCG ACC TGC TGG GCG ATC TGC AAA CGT ATC CCG AAC AAA AAA CCG GGC
196
Lys - C
AAA - 3′
SEQ ID NO：26的信息    G194A
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：55氨基酸，165核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    140
N  -Gln Thr Gln Pro Ser Lys Pro Thr Thr Lys Gln Arg Gln Asn Lys Pro Pro Asn
5′-CAG ACC CAG CCG AGC AAA CCG ACC ACC AAA CAG CGT CAG AAC AAA CCG CCG AAC
158                                                         173         176
Lys Pro Asn Asn Asp Phe His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Cys Ser Ile Cys
AAA CCG AAC AAC GAT TTC CAT TTC GAA GTG TTC AAC TTC GTG CCG TGC AGC ATC TGC
177                 182             186                             194
Ser Asn Asn Pro Thr Cys Trp Ala Ile Cys Lys Arg Ile Pro Asn Lys Lys Pro - C
AGC AAC AAC GCG ACC TGC TGG GCG ATC TGC AAA CGT ATC CCG AAC AAA AAA CCG - 3′
SEQ ID NO：27的信息              G192A
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：52氨基酸，159核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    140
N  -Gln Thr Gln Pro Ser Lys Pro Thr Thr Lys Gln Arg gln Asn Lys Pro Pro Asn
5′-CAG ACC CAG CCG AGC AAA CCG ACC ACC AAA CAG CGT CAG AAC AAA CCG CCG AAC
158                                                         173         176
Lys Pro Asn Asn Asp Phe His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Cys Ser Ile Cys
AAA CCG AAC AAC GAT TTC CAT TTC GAA GTG TTC AAC TTC GTG CCG TGC AGC ATC TGC
177                 182             186                     192
Ser Asn Asn Pro Thr Cys Trp Ala Ile Cys Lys Arg Ile Pro Asn Lys - C
AGC AAC AAC CCG ACC TGC TGG GCG ATC TGC AAA CGT ATC CCG AAC AAA - 3′
SEQ ID NO：28的信息    G6A
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：51氨基酸，153核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
140
N  -Gln Thr Gln Pro Ser Lys Pro Thr Thr Lys Gln Arg Gln Asn Lys Pro Pro Asn
5′-CAG ACC CAG CCG AGC AAA CCG ACC ACC AAA CAG CGT CAG AAC AAA CCG CCG AAC
158                                                         173         176
Lys Pro Asn Asn Asp Phe His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Cys Ser Ile Cys
AAA CCG AAC AAC GAT TTC CAT TTC GAA GTG TTC AAC TTC GTG CCG TGC AGC ATC TGC
177                 182             186             190
Ser Asn Asn Pro Thr Cys Trp Ala Ile Cys Lys Arg Ile Pro - C
AGC AAC AAC CCG ACC TGC TGG GCG ATC TGC AAA CGT ATC CCG - 3′
SEQ ID NO：29的信息  G7A
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：33氨基酸，99核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白质
    158                                                         173
N  -Lys Pro Asn Asn Asp Phe His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Cys Ser Ile
5′-AAA CCG AAC AAC GAT TTC CAT TTC GAA GTG TTC AAC TTC GTG CCG TGC AGC ATC
176                     182             186             190
Cys Ser Asn Asn Pro Thr Cys Trp Ala Ile Cys Lys Arg Ile Pro - C
TGC AGC AAC AAC CCG ACC TGC TGG GCG ATC TGC AAA CGT ATC CCG - 3′
SEQ ID NO：30的信息                G200AδC
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：61氨基酸，183核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白质
    140
N  -Gln Thr Gln Pro Ser Lys Pro Thr Thr Lys Gln Arg Gln Asn Lys Pro Pro Asn
5′-CAG ACC CAG CCG AGC AAA CCG ACC ACC AAA CAG CGT CAG AAC AAA CCG CCG AAC
158                                                         173         176
Lys Pro Asn Asn Asp Phe His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Ser Ser Ile Cys
AAA CCG AAC AAC GAT TTC CAT TTC GAA GTG TTC AAC TTC GTG CCG AGC AGC ATC TGC
177                 182             186
Ser Asn Asn Pro Thr Cys Trp Ala Ile Ser Lys Arg Ile Pro Asn Lys Lys Pro Gly
AGC AAC AAC CCG ACC TGC TGG GCG ATC AGC AAA CGT ATC CCG AAC AAA AAA CCG GGC
196             200
Lys Lys Thr Thr Thr - C
AAA AAA ACC ACG ACC - 3′
SEQ ID NO：31的信息    G198AδC
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：59氨基酸，177核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白质
     140
 N  -Gln Thr Gln Pro Ser Lys Pro Thr Thr Lys Gln Arg Gln Asn Lys Pro Pro Asn
 5′-CAG ACC CAG CCG AGC AAA CCG ACC ACC AAA CAG CGT CAG AAC AAA CCG CCG AAC
 158                                                         173         176
 Lys Pro Asn Asn Asp Phe His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Ser Ser Ile Cys
 AAA CCG AAC AAC GAT TTC CAT TTC GAA GTG TTC AAC TTC GTG CCG AGC AGC ATC TGC
 177                 182             186
 Ser Asn Asn Pro Thr Cys Trp Ala Ile Ser Lys Arg Ile Pro Asn Lys Lys Pro Gly
 AGC AAC AAC CCG ACC TGC TGG GCG ATC AGC AAA CGT ATC CCG AAC AAA AAA CCG GGC
 196     198
 Lys Lys Thr - C
 AAA AAA ACC - 3′
 SEQ ID NO：32的信息              G196AδC
 序列类型：氨基酸和核苷酸
 序列长度：57氨基酸，171核苷酸
 链型：单链
 拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
   140
N  -Gln Thr Gln Pro Set Lys Pro Thr Thr Lys Gln Arg Gln Asn Lys Pro Pro Asn
5′-CAG ACC CAG CCG AGC AAA CCG ACC ACC AAA CAG CGT CAG AAC AAA CCG CCG AAC
158                                                         173         176
Lys Pro Asn Asn Asp Phe His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Ser Set Ile Cys
AAA CCG AAC AAC GAT TTC CAT TTC GAA GTG TTC AAC TTC GTG CCG AGC AGC ATC TGC
177                 182             186
Ser Asn Asn Pro Thr Cys Trp Ala Ile Ser Lys Arg Ile Pro Asn Lys Lys Pro Gly
AGC AAC AAC CCG ACC TGC TGG GCG ATC AGC AAA CGT ATC CCG CCG AAC AAA CCG GGC
196
Lys - C
AAA - 3′
SEQ ID NO：33的信息         G194AδC
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：55氨基酸，165核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    140
N  -Gln Thr Gln Pro Ser Lys Pro Thr Thr Lys Gln Arg Gln Asn Lys Pro Pro Asn
5′-CAG ACC CAG CCG AGC AAA CCG ACC ACC AAA CAG CGT CAG AAC AAA CCG CCG AAC
158                                                         173         176
Lys Pro Asp Asn Asp Phe His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Ser Ser Ile Cys
AAA CCG AAC AAC GAT TTC CAT TTC GAA GTG TTC AAC TTC GTG CCG AGC AGC ATC TGC
177                 182             186                             194
Ser Asn Asn Pro Thr Cys Trp Ala Ile Ser Lys Arg Ile Pro Asn Lys Lys Pro - C
AGC AAG AAG CCG ACC TGC TGG GCG ATC AGC AAA CGT ATC CCG AAC AAA AAA CCG - 3′
SEQ ID NO：34的信息           G192AδC
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：53氨基酸，159核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    140
N  -Gln Thr Gln Pro Ser Lys Pro Thr Thr Lys Gln Arg Gln Asn Lys Pro Pro Asn
5′-CAG ACC CAG CCG AGC AAA CCG ACC ACC AAA CAG CGT CAG AAC AAA CCG CCG AAC
158                                                         173         176
Lys Pro Asn Asn Asp Phe His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val pro Ser ser Ile Cys
AAA CCG AAC AAC GAT TTC CAT TTC GAA GTG TTC AAC TTC GTG CCG AGC AGC ATC TGC
177                 182             186                     192
Ser Asn Asn Pro Thr Cys Trp Ala Ile Ser Lys Arg Ile Pro ASn Lys - C
AGC AAC AAC CCG ACC TGC TGG GCG ATC AGC AAA CGT ATC CCG AAC AAA - 3′
SEQ ID NO：35的信息          G6AδC
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：51氨基酸，153核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
   140
N -Gln Thr Gln Rro Ser Lys Pro Thr Thr Lys Gln Arg Gln Asn Lys Pro Pro Asn
5′-CAG ACC CAG CCG AGC AAA CCG ACC ACC AAA CAG CGT CAG AAC AAA CG CCG AAC
158                                                         173        176
Lys Pro Asn Asn Asp Phe His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Ser Ser Ile Cys
AAA CCG AAC AAC GAT TTC CAT TTC GAA GTG TTC AAC TTC GTG CCG AGC AGC ATC TGC
177                 182             186             190
Ser Asn Asn Pro Thr Cys Trp Ala Ile Ser Lys Arg Ile Pro - C
AGC AAC AAC CCG ACC TGC TGG GCG ATC AGC AAA CGT ATC CCG - 3′
SEQ ID NO：36的信息    G7AδC
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：33氨基酸，99核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    158                                                         173
N  -Lys Pro Asn Asn Asp Phe His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Ser Ser Ile
5′-AAA CCG AAC AAC GAT TTC CAT TTC GAA GTG TTC AAC TTC GTG CCG AGC AGC ATC
176                     182             186             190
Cys Ser Asn Asn Pro Thr Cys Trp Ala Ile Ser Lys Arg Ile Pro - C
TGC AGC AAC AAC CCG ACC TGC TGG GCG ATC AGC AAA CGT ATC CCG - 3′
SEQ ID NO：37的信息             G200B
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：61氨基酸，183核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    140
N  -Ser Thr Gln Thr Asn Lys Pro Ser Thr Lys Ser arg Ser Lys Asn Pro Pro Lys Lys Pro
5′-AGC ACC CAG ACC AAC AAA CCG AGC ACC AAA AGC CGT AGC AAA AAC CCG CCG AAA AAA CCG
160                                         173                 176
Lys Asp Asp Tyr His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Cys Ser Ile Cys Gly Asn Asn Gln
AAA GAT GAT TAC CAC TTC GAA GTG TTC AAC TTC GTG GGC TGC AGC ATC TGC GGC AAC AAC CAG
    182             186                                                     200
Leu Cys Lys Ser Ile Cys Lys Thr Ile Pro Ser Asn Lys Pro Lys Lys Lys Pro Thr Ile - C
CTG TGC AAA ACG ATC TGC AAA ACC ATC CCG AGC AAC AAA CCG AAA AAG AAA CCG ACC ATC - 3′
SEQ ID NO：38的信息  G198B
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：59氨基酸，177核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    140
N  -Ser Thr Gln Thr Asn Lys Pro Ser Thr Lys Ser Arg Ser Lys Asn Pro Pro Lys Lys Pro
5′-AGC ACC CAG ACC AAC AAA CCG AGC ACC AAA AGC CGT AGC AAA AAC CCG CCG AAA AAA CCG
160                                                 173         176
Lys Asp Asp Tyr His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Cys Ser Ile Cys Gly Asn Asn Gln
AAA GAT GAT TAC CAC TTC GAA GTG GGC AAC TTC GTG CCC TGC AGC ATC TGC GGC AAC AAC CAG
    182             186                                             198
Leu Cys Lys Ser Ile Cys Lys Thr Ile Pro Ser Asn Lys Pro Lys Lys Lys Pro - C
CTG TGC AAA AGC ATC TGC AAA ACC ATC CCG AGC AAC AAA CCG AAA AAG AAA CCG - 3′
SEQ ID NO：39的信息                 G196B
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：57氨基酸，171核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    140
N  -Ser Thr Gln Thr Asn Lys Pro Ser Thr Lys Ser Arg Ser Lys Asn Pro Pro Lys Lys Pro
5′-AGC ACC CAG ACC AAC AAA CCG AGC ACC AAA AGC CGT AGC AAA AAC CCG CCG AAA AAA CCG
160                                                 173        176
Lys Asp Asp Tyr His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Cys Ser Ile Cys Gly Asn Asn Gln
AAA GAT GAT TAC CAC TTC GAA GTG TTC AAC TTC GTG CCC TCG AGC ATC TGC GGC AAC AAC CAG
    182             186                                     196
Leu Cys Lys Ser Ile Cys Lys Thr Ile Pro Ser Asn Lys Pro Lys Lys - C
CTG TGC AAA AGC ATC TGC AAA ACC ATC CCG AGC AAC AAA CCG AAA AAG - 3′
SEQ ID NO：40的信息               G194B
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：55氨基酸，165核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    140
N  -Ser Thr Gln Thr Asn Lys Pro Ser Thr Lys Ser Arg Ser Lys Asn Pro Pro Lys Lys Pro
5′-AGC ACC CAG ACC AAC AAA CCG AGC ACC AAA AGC CGT AGC AAA AAC CCG CCG AAA AAA CCG
160                                                 173         176
Lys Asp Asp Tyr His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Cys Ser Ile Cys Gly Asn Asn Gln
AAA GAT GAT TAC CAC TTC GAA GTG TTC AAC TTC GTG CCC TGC AGC ATC TGC GGC AAC AAC CAG
    182             186                             194
Leu Cys Lys Ser Ile Cys Lys Thr Ile Pro Ser Asn Lys Pro - C
GTG TGC AAA AGC ATC TGC AAA ACC ATC CCG AGC AAC AAA CCG - 3′
SEQ ID NO：41的信息  G192B
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：55氨基酸，159核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    140
N  -Ser Thr Gln Thr Asn Lys Pro Ser Thr Lys Ser Arg Ser Lys Asn Pro Pro Lys Lys Pro
5′-AGC ACC CAG ACC AAC AAA CCG AGC ACC AAA AGC CGT AGC AAA AAC CCG CCG AAA AAA CCG
160                                                 173         176
Lys Asp Asp Tyr His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Cys Ser Ile Cys Gly Asn Asn Gln
AAA GAT GAT TAC CAC TTC GAA GTG TTC AAC TTC GTG CCC TGC AGC ATC TGC GGC AAC AAC CAG
182                 186                     192
Leu Cys Lys Ser Ile Cys Lys Thr Ile Pro Ser Asn - C
CTG TGC AAA AGC ATC TGC AAA ACC ATC CCG AGC AAC - 3′
SEQ ID NO：42的信息            G6B
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度51氨基酸，153核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    140
N  -Ser Thr Gln Thr Asn Lys Pro Ser Thr Lys Ser Arg Ser Lys Asn Pro Pro Lys Lys Pro
5′-AGC ACC CAG ACC ACC AAA CCG AGC ACC AAA AGC CGT AGC AAA AAC CCG CCG AAA AAA CCG
160                                                 173         176
Lys Asp Asp Tyr His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Cys Ser Ile Cys Gly Asn Asn Gln
AAA GAT GAT TAC CAC TTC GAA GTG TTC AAC TTC GTG CCC TGC AGC ATC TGC GGC AAC AAC CAG
    182             186            190
Leu Cys Lys Ser Ile Cys Lys Thr Ile Pro - C
CTG TGC AAA AGC ATC TGC AAA ACC ATC CCG - 3′
SEQ ID NO：43的信息    G7B
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：33氨基酸，99核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    158                                                         173         176
N  -Lys Pro Lys Asp Asp Tyr His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Cys Ser Ile Cys Gly
5′-AAA CCG AAA GAT GAT TAC CAC TTC GAA GTG TTC AAC TTC GTG CCC TGC AGC ATC TGC GGC
                182             186             190
Asn Asn Gln Leu Cys Lys Ser Ile Cys Lys Thr Ile Pro - C
AAC AAC CAG CTG TGC AAA AGC ATC TGC AAA ACC ATC CCG - 3′
SEQ ID NO：44的信息            G200Bdc
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：61氨基酸，183核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    140
N  -Ser Thr Gln Thr Asn Lys Pro Ser Thr Lys Ser Arg Ser Lys Asn Pro Pro Lys Lys Pro
5′-AGC ACC CAG ACC AAC AAA CCG AGC ACC AAA AGC CGT AGC AAA AAC CCG CCG AAA AAA CCG
160                                                  173        176
Lys Asp Asp Tyr His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Ser Ser Ile Cys Gly Asn Asn Gln
AAA GAT GAT TAC CAC TTC GAA GTG TTC AAC TTC GTG CCC AGC AGC ATC TGC GGC AAC AAC CAG
    182             186                                                     200
Leu Cys Lys Ser Ile Ser Lys Thr Ile Pro Ser Asn Lys Pro Lys Lys Lys Pro Thr Ile - C
CTG TGC AAA AGC ATC AGC AAA ACC ATC CCG AGC AAC AAA CCG AAA AAG AAA CCG ACC ATC - 3′
SEQ ID NO：45的信息                      G198BδC
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：59氨基酸，177核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    l40
N  -Ser Thr Gln Thr Asn Lys Pro Ser Thr Lys Ser Arg Ser Lys Asn Pro Pro Lys Lys Pro
5′-AGC ACC CAG ACC AAC AAA CCG AGC ACC AAA AGC CGT AGC AAA AAC CCG CCG AAA AAA CCG
160                                                 173         176
Lys Asp Asp Tyr His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Ser Ser Ile Cys Gly Asn Asn Gln
AAA GAT GAT TAC CAC TTC GAA GTG TTC AAC TTC GTG CCC AGC AGC ATC TGC GGC AAC AAC CAG
    182             186                                             198
Leu Cys Lys Ser Ile Ser Lys Thr Ile Pro Ser Asn Lys Pro Lys Lys Lys Pro - C
CTG TGC AAA AGC ATC AGC AAA ACC ATC CCG AGC AAC AAA CCG AAA AAG AAA CCG - 3′
SEQ ID NO：46的信息                    G196BδC
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：57氨基酸，171核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    140
N  -Ser Thr Gln Thr Asn Lys Pro Ser Thr Lys Ser Arg Ser Lys Asn Pro Pro Lys Lys Pro
5′-AGC ACC CAG ACC AAC AAA CCG AGC ACC AAA AGC CGT AGC AAA AAC CCG CCG AAA AAA CCG
160                                                 173         176
Lys Asp Asp Tyr His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Ser Ser Ile Cys Gly Asn Asn Gln
AAA GAT GAT TAC CAC TTC GAA GTG TTC AAC TTC GTG CCC AGC AGC ATC TGC GGC AAC AAC CAG
    182             186                                     196
Leu Cys Lys Ser Ile Ser Lys Thr Ile Pro Ser Asn Lys Pro Lys Lys - C
CTG TGC AAA AGC ATC AGC AAA ACC ATC CCG AGC AAC AAA CCG AAA AAG - 3′
SEQ ID NO：47的信息              G194BδC
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：55氨基酸，165核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    140
N  -Ser Thr Gln Thr Asn Lys Pro Ser Thr Lys Ser Arg Ser Lys Asn Pro Pro Lys Lys Pro
5′-AGC ACC CAG ACC AAC AAA CCG AGC ACC AAA AGC CGT AGC AAA AAC CCG CCG AAA AAA CCG
160                                                 173         176
Lys Asp Asp Tyr His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Ser Ser Ile Cys Gly Asn Asn Gln
AAA GAT GAT TAC CAC TTC GAA GTG TTC AAC TTC GTG CCC AGC AGC ATC TGC GGC AAC AAC CAG
    182             186                             194
Leu Cys Lys Ser Ile Ser Lys Thr Ile Pro Ser Asn Lys Pro - C
CTG TGC AAA AGC ATC AGC AAA ACC ATC CCG AGC AAC AAA CCG - 3′
SEQ ID NO：48的信息         G192BδC
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：53氨基酸，159核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    140
N  -Ser Thr Gln Thr Asn Lys Pro Ser Thr Lys Ser Arg Ser Lys Asn Pro Pro Lys Lys Pro
5′-AGC ACC CAG ACC AAC AAA CCG AGC ACC AAA AGC CGT AGC AAA AAC CCG CCG AAA AAA CCG
160                                                 173         176
Lys Asp Asp Tyr His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Ser Ser Ile Cys Gly Asn Asn Gln
AAA GAT GAT TAC CAC TTC GAA GTC TTC AAC TTC GTG CCC AGC AGC ATC TGC GGC AAC AAC CAG
    182             186                 192
Leu Cys Lys Ser Ile Ser Lys Thr Ile Pro Ser Asn - C
CTG TGC AAA AGC ATC AGC AAA ACC ATC CCG AGC ACG - 3′
SEQ ID NO：49的信息              G6AδC
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：51氨基酸，153核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    140
N  -Ser Thr Gln Thr Asn Lys Pro Ser Thr Lys Ser Arg Ser Lys Asn Pro Pro Lys Lys Pro
5′-AGC ACC CAG ACC AAC AAA CCG AGC ACC AAA AGC CGT AGC AAA AAC CCG CCG AAA AAA CCG
160                                         173                 176
Lys Asp Asp Tyr His Phe Glu Val Phe Asn Phe Val Pro Ser Ser Ile Cys Gly Asn Asn Gln
AAA GAT GAT TAC CAC TTC GAA GTG TTC AAC TTC GTG CCC AGC AGC ATC TGC GGC AAC AAC CAG
    182             186             190
Leu Cys Lys Ser Ile Ser Lys Thr Ile Pro - C
CTG TGC AAA AGC ATC AGC AAA ACC ATC CCG - 3′
SEQ ID NO：50的信息              G7BδC
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：33氨基酸，99核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    158                                                         173         176
N  -Lys Pro Lys Asp Asp Tyr His Phe Glu Val Phe Asn Phe Va1 Pro Ser Ser Ile Cys Gly
5′-AAA CCG AAA GAT GAT TAC CAC TTC GAA GTG TTC AAC TTC GTG CCC AGC AGC ATC TGC GGC
                182             186             190
Asn Asn Gln Leu Cys Lys Ser Ile Ser Lys Thr Ile Pro - C
AAC AAC CAG CTG TGC AAA AGC ATC AGC AAA ACC ATC CCG - 3′
SEQ ID NO：51的信息                G2V
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：101氨基酸，303核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    130
N  -Gln Asn Arg Lys Ile Lys Gly Gln Ser Thr Leu Pro Ala Thr Arg Lys Pro Pro Ile Asn
5′-CAA AAC AGA AAA ATC AAA GGT CAA TCA ACA CTA CCA GCC ACA AGA AAA CCA CCA AAT AAT
150
Pro Ser Gly Ser Ile Pro Pro Glu Asn His Gln Asp His Asn Asn Phe Gln Tnr Leu Pro Tyr
CCA TCA GGA AGC ATC CCA CCA GAA AAC CAT CAA GAC CAC AAC AAC TTC CAA ACA CTC CCC TAT
171     173             176                 182             186
Val Pro Cys Ser Thr Cys Glu Gly Asn Leu Ala Cys Leu Ser Leu Cys His Ile Glu Thr Glu
GTT CCC TGC AGT ACA TGT GAA GGT AAT CTT GCA TGC TTA TCA CTC TGC CAT ATT GAG ACG GAA
192
Arg Ala Pro Ser Arg Ala Pro Thr Ile Thr Leu Lys Lys Thr Pro Lys Pro Lys Thr Thr Lys
AGA GCA CCA AGC AGA GCA CCA ACA ATC ACC CTC AAA AAG ACA CCA AAA CCA AAA ACC ACA AAA
213                                         230
Lys Pro Thr Lys Thr Thr Ile His His Arg Thr Ser Pro Glu Thr Lys Leu Gln - C
AAG CCA ACC AAG ACA ACA ATC CAT CAC AGA ACC AGC CCA GAA ACC AAA CTG CAA - 3′
SEQ ID NO：52的信息         G2VδC
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：101氨基酸，303核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    130
N  -Gln Asn Arg Lys Ile Lys Gly Gln Ser Thr Leu Pro Ala Thr Arg Lys Pro Pro Ile Asn
5′-CAA AAC AGA AAA ATC AAA GGT CAA TCA ACA CTA CCA GCC ACA AGA AAA CCA CCA ATT AAT
150
Pro Ser Gly Ser Ile Pro Pro G1u Asn His Gln Asp His Asn Asn Phe Gln Thr Leu Pro Tyr
CCA TCA GGA AGC ATC CCA CCA GAA AAC CAT CAA GAC CAC AAC AAC TTC CAA ACA CTC CCC TAT
171     173         176                     182             186
Val Pro Ser Ser Thr Cys Glu Gly Asn Leu Ala Cys Leu Ser Leu Ser His Ile Glu Thr Glu
GTT CCC AGC AGT ACA TGT GAA GGT AAT CTT GCA TGC TTA TCA CTC AGC CAT ATT GAG ACG GAA
192
Arg Ala Pro Ser Arg Ala Pro Thr Ile Thr Leu Lys Lys Thr Pro Lys Pro Lys Thr Thr Lys
AGA GCA CCA AGC AGA GCA CCA ACA ATC ACC CTC AAA AAG ACA CCA AAA CCA AAA ACC ACA AAA
213                                                                 230
Lys Pro Thr Lys Thr Thr Ile His His Arg Thr Ser Pro Glu Thr Lys Leu Gln - C
AAG CCA ACC AAG ACA ACA ATC CAT CAC AGA ACC AGC CCA GAA ACC AAA CTG CAA - 3′
SEQ ID NO：53的信息                            G200V
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：61氨基酸，183核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    140
N  -Leu Pro Ala Thr Arg Lys Pro Pro Ile Asn Pro Ser Gly Ser Ile Pro Pro Glu Asn His
5′-CTA CCA GCC ACA AGA AAA CCA CCA ATT AAT CCA TCA GGA AGC ATC CCA CCA GAA AAC CAT
160                                                 173         176
Gln Asp His Asn Asn Phe Gln Thr Leu Pro Tyr Val Pro Cys Ser Thr Cys Glu Gly Asn Leu
CAA GAC CAC AAC AAC TTC CAA ACA CTC CCC TAT GTT CCC TGC AGT ACA TGT GAA GGT AAT CTT
    182             186                                                     200
Ala Cys Leu Ser Leu Cys His Ile Glu Thr Glu Arg Ala Pro Ser Arg Ala Pro Thr Ile - C
GCA TGC TTA TCA CTC TGC CAT ATT GAG ACG GAA AGA GCA CCA AGC AGA GCA CCA ACA ATC - 3′
SEQ ID NO：54的信息        G198V
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：59氨基酸，177核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    140
N  -Leu Pro Ala Thr Arg Lys Pro Pro Ile Asn Pro Ser Gly Ser Ile Pro Pro Glu Asn His
5′-CTA CCA GCC ACA AGA AAA CCA CCA ATT AAT CCA TCA GGA AGC ATC CCA CCA GAA AAC CAT
160                                                 173         176
Gln Asp His Asn Asn Phe Gln Thr Leu Pro Tyr Val Pro Cys Ser Thr Cys Glu Gly Asn Leu
CAA GAC CAC AAC AAC TTC CAA  ACA CTC CCC TAT GTT CCC TGC AGT ACA TGT GAA GGT AAT CTT
    182             186                                              198
Ala Cys Leu Ser Leu Cys His Ile Glu Thr Glu Arg Ala Pro Ser Arg Ala Pro - C
GCA TGC TTA TCA CTC TGC CAT ATT GAG ACG GAA AGA GCA CCA AGC AGA GCA CCA - 3′
SEQ ID NO：55的信息                        G196V
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：57氨基酸，171核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    140
N  -Leu Pro Ala Thr Arg Lys Pro Pro Ile Asn Pro Ser Gly Ser Ile Pro Pro Glu Asn His
5′-CTA CCA GCC ACA AGA AAA CCA CCA ATT AAT CCA TCA GGA AGC ATC CCA CCA GAA AAC CAT
160                                                 173         176
Gln Asp His Asn Asn Phe Gln Thr Leu Pro Tyr Val Pro Cys Ser Thr Cys Glu Gly Asn Leu
CAA GAC CAC AAC AAC TTC CAA ACA CTC CCC TAT GTT CCC TGC AGT ACA TGT GAA GGT AAT CTT
    182             186                                     196
Ala Cys Leu Ser Leu Cys His Ile Glu Thr Glu Arg Ala Pro Ser Arg - C
GCA TGC TTA TCA CTC TGC CAT ATT GAG ACG GAA AGA GCA CCA AGC AGA - 3′
SEQ ID NO：56的信息                  G194V
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：55氨基酸，165核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    140
N  -Leu Pro Ala Thr Arg Lys Pro Pro Ile Asn Pro Ser Gly Ser Ile Pro Pro Glu Asn His
5′-CTA CCA GCC ACA AGA AAA CCA CCA ATT AAT CCA TCT GGA AGC ATC CCA CCA GAA AAC CAT
160                                                  173        176
Gln Asp His Asn Asn Phe Gln Thr Leu Pro Tyr Val Pro Cys Ser Thr Cys Glu Gly Asn Leu
CAA GAC CAC AAC AAC TTC CAA ACA CTC CCC TAT GTT CCC TGC AGT ACA TGT GAA GGT AAT CTT
    182             186                             194
Ala Cys Leu Ser Leu Cys His Ile Glu Thr Glu Arg Ala Pro - C
GCA TGC TTA TCA CTC TGC CAT ATT GAG ACG GAA AGA GCA CCA - 3′
SEQ ID NO：57的信息                   G192V
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：53氨基酸，159核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    140
N  -Leu Pro Ala Thr Arg Lys Pro Pro Ile Asn Pro Ser Gly Ser Ile Pro Pro Glu Asn His
5′-CTA CCA GCC ACA AGA AAA CCA CCA ATT AAT CCA TCA GGA AGC ATC CCA CCA GAA AAC CAT
160                                                 173         176
Gln Asp His Asn Asn Phe Gln Thr Leu Pro Tyr Val Pro Cys Ser Thr Cys Glu Gly Asn Leu
CAA GAC CAC AAC AAC TTC CAA ACA CTC CCC TAT GTT CCC TGC AGT ACA TGT GAA GGT AAT CTT
    182             186                     192
Ala Cys Leu Ser Leu Cys His Ile Glu Thr Glu Arg - C
GCA TGC TTA TCA CTC TGC CAT ATT GAG ACG GAA AGA - 3′
SEQ ID NO：58的信息                G6V
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：51氨基酸，153核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    140
N  -Leu Pro Ala Thr Arg Lys Pro Pro Ile Asn Pro Ser Gly Ser Ile Pro Pro Glu Asn His
5′-CTA CCA GCC ACA AGA AAA CCA CCA ATT AAT CCA TCA GGA TGC ATC CCA CCA GAA AAC CAT
160                                                 173         176
Gln Asp His Asn Asn Phe Gln Thr Leu Pro Tyr Val Pro Cys Ser Thr Cys Glu Gly Asn
CAA GAC CAC AAC AAC TTC CAA ACA CTC CCC TAT GTT CCC TGC AGT ACA TGT GAA GGT AAT CTT
    182             186             190
Ala Cys Leu Ser Leu Cys His Ile Glu Thr - C
GCA TGC TTA TCA CTC TGC CAT ATT GAG ACG - 3′
SEQ ID NO：59的信息          G7V
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：33氨基酸，99核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    158                                                         173         176
N  -Asn His Gln Asp His Asn Asn Phe Gln Thr Leu Pro Tyr Val Pro Cys Ser Thr Cys
5′-AAC CAT CAA GAC CAC AAC AAC TTC CAA ACA CTC CCC TAT GTT CCC TGC AGT ACA TGT
                    182             186             190
Glu Gly Asn Leu Ala Cys Leu Ser Leu Cys His Ile Glu Thr - C
GAA GGT AAT CTT GCA TGC TTA TCA CTC TGC CAT ATT GAG ACG - 3′
SEQ ID NO：60的信息           G200VδC
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：61氨基酸，183核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    140
N  -Leu Pro Ala Thr Arg Lys Pro Pro Ile Asn Pro Ser Gly Ser Ile Pro Pro Glu Asn His
5′-CTA CCA GCC ACA AGA AAA CCA CCA ATT AAT CCA TCA GGA AGC ATC CCA CCA GAA AAC CAT
160                                                 173          176
Gln Asp His Asn Asn Phe Gln Thr Leu Pro Tyr Val Pro Ser Ser Thr Cys Glu Gly Asn Leu
CAA GAC CAC AAC AAC TTC CAA ACA CTC CCC TAT GTT CCC AGC AGT ACA TGT GAA GGT AAT CTT
    182             186                                                     200
Ala Cys Leu Ser Leu Ser His Lle Glu Thr Glu Arg Ala Pro Ser Arg Ala Pro Thr Ile - C
GCA TGC TTA TCA CTC AGC CAT ATT GAG ACG GAA AGA GCA CCA AGC AGA GCA CCA ACA ATC - 3′
SEQ ID NO：61的信息          G198VδC
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：59氨基酸，177核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    140
N  -Leu Pro Ala Thr Arg Lys Pro Pro Ile Asn Pro Ser Gly Ser Ile Pro Pro Glu Asn His
5′-CTA CCA GCC ACA AGA AAA CCA CCA ATT AAT CCA TCA GGA AGC ATC CCA CCA GAA AAC CAT
160                                                 173         176
Gln Asp His Asn Asn Phe Gln Thr Leu Pro Tyr Val Pro Ser Ser Thr Cys Glu Gly Asn Leu
CAA GAC CAC AAC AAC TTC CAA ACA CTC CCC TAT GTT CCC AGC AGT ACA TGT GAA GGT AAT CTT
    182             186                                             198
Ala Cys Leu Ser Leu Ser His Ile Glu Thr Glu Arg Ala Pro Ser Arg Ala Pro - C
GCA TGC TTA TCA CTC AGC CAT ATT GAG ACG GAA AGA GAG CCA AGC AGA GCA CCA - 3′
SEQ ID NO：62的信息                       G196VδC
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：57氨基酸，171核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
140
N  -Leu Pro Ala Thr Arg Lys Pro Pro Ile Asn Pro Ser Gly Ser Ile Pro Pro Glu Asn His
5′-CTA CCA GCC ACA AGA AAA CCA CCA ATT AAT CCA TCA GGA AGC ATC CCA CCA GAA AAC CAT
160                                                 173         176
Gln Asp His Asn Asn Phe Gln Thr Leu Pro Tyr Val Pro Ser Ser Thr Cys Glu Gly Asn Leu
CAA GAC CAC AAC AAC TTC CAA ACA CTC CCC TAT GTT CCC AGC AGT ACA TGT GAA GGT AAT CTT
    182             186                                     196
Ala Cys Leu Ser Leu Ser His Ile Glu Thr Glu Arg Ala Pro Ser Arg - C
GCA TGC TTA TCA CTC AGC CAT ATT GAG ACG GAA AGA GCA CCA AGC AGA - 3′
SEQ ID NO：63的信息    G194VδC
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：55氨基酸，165核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    140
N  -Leu Pro Ala Thr Arg Lys Pro Pro Ile Asn Pro Ser Gly Ser Ile Pro Pro Glu Asn His
5′-CTA CCA GCC ACA AGA AAA CCA CCA ATT AAT CCA TCA GGA AGC ATC CCA CCA GAA AAC CAT
160                                                 173         176
Gln Asp His Asn Asn Phe Gln Thr Leu Pro Tyr Val Pro Ser Ser Thr Cys Glu Gly Asn Leu
CAA GAC CAC AAC AAC TTC CAA ACA CTC CCC TAT GTT CCC AGC AGT ACA TGT GAA GGT AAT CTT
    182             186                             194
Ala Cys Leu Ser Leu Ser His Ile Glu Thr Glu Arg Ala Pro - C
GCA TGC TTA TCA CTC AGC CAT ATT GAG ACG GAA AGA GCA CCA - 3′
SEQ ID NO：64的信息          G192VδC
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：53氨基酸，159核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    140
N  -Leu Pro Ala Thr Arg Lys Pro Pro Ile Asn Pro Ser Gly Ser Ile Pro Pro Glu Asn His
5′-CTA CCA GCC ACA AGA AAA CCA CCA ATT AAT CCA TCA GGA AGC ATC CCA CCA GAA AAC CAT
160                                                  173        176
Gln Asp His Asn Asn Phe Gln Thr Leu Pro Tyr Val Pro Ser Ser Thr Cys Glu Gly Asn Leu
CAA GAC CAC AAC AAC TTC CAA ACA CTC CCC TAT GTT CCC AGC AGT ACA TGT GAA GGT AAT CTT
    182             186                     192
Ala Cys Leu Ser Leu Ser His Ile Glu Thr Glu Arg - C
GCA TGC TTA TCA CTC AGC CAT ATT GAG ACG GAA AGA - 3′
SEQ ID NO：65的信息            G6VδC
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：51氨基酸，153核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    140
N  -Leu Pro Ala Thr Arg Lys Pro Pro Ile Asn Pro Ser Gly Ser Ile Pro Pro Glu Asn His
5′-CTA CCA GCC ACA AGA AAA CCA CCA ATT AAT CCA TCA GGA AGC ATC CCA CCA GAA AAC CAT
160                                                 173         176
Gln Asp His Asn Asn Phe Gln Thr Leu Pro Tyr Val Pro Ser Ser Thr Cys Glu Gly Asn Leu
CAA GAC CAC AAC AAC TTC CAA ACA CTC CCC TAT GTT CCC AGC AGT ACA TGT GAA GGT AAT CTT
    182             186             190
Ala Cys Leu Ser Leu Ser His Ile Glu Thr - C
GCA TGC TTA TCA CTC AGC CAT ATT GAG ACG - 3′
SEQ ID NO：66的信息        G7VδC
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：33氨基酸，99核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：蛋白
    158                                                         173         176
N  -Asn His Gln Asp His Asn Asn Phe Gln Thr Leu Pro Tyr Val Pro Ser Ser Thr Cys
5′-AAC CAT CAA GAC CAC AAC AAC TTC CAA ACA CTC CCC TAT GTT CCC AGC AGT ACA TGT
                    182             186             190
Glu Gly Asn Leu Ala Cys Leu Ser Leu Ser His Ile Glu Thr - C
GAA GGT AAT CTT GCA TGC TTA TCA CTC AGC CAT ATT GAG ACG - 3′
SEQ ID NO：67的信息       G4V
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：17氨基酸，51核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：肽
    171     173         176                     182             186 187
N  -Val Pro Cys Ser Tnr Cys Glu Gly Asn Leu Ala Cys Leu Ser Leu Cys His - C
5′-GTT CCC TGC AGT ACA TGT GAA GGT AAT CTT GCA TGC TTA TCA CTC TGC CAT - 3′
SEQ ID NO：68的信息    G4VδC
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：17氨基酸，51核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：肽
    171     173         176                     182             186 187
N  -Val Pro Ser Ser Thr Cys Glu Gly Asn Leu Ala Cys Leu Ser Leu Ser His - C
5′-GTT CCC AGC AGT ACA TGT GAA GGT AAT CGT GCA TGC TTA TCA CTC AGC CAT - 3 ′
SEQ ID NO：69的信息           G4’V
序列类型：氨基酸
序列长度：17氨基酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：肽
    171     173         176                     182             186 187
N  -Val Pro Asp Ser Thr Asp Glu Gly Asn Leu Ala Orn Leu Ser Leu Orn His - C
SEQ ID NO：70的信息            G4’VδC
序列类型：氨基酸
序列长度：17氨基酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：肽
    171     173         176                     182             186 187
N  -Val Pro Ser Ser Thr Asp Glu Gly Asn Leu Ala Orn Leu Ser Leu Ser His - C
SEQ ID NO：71的信息                  G1V
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：14氨基酸，42核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：肽
    174     176                     182             186 187
N  -Ser Thr Cys Glu Gly Asn Leu Ala Cys Leu Ser Leu Cys His - C
5′-AGT ACA TGT GAA GGT AAT CTT GCA TGC TTA TCA CTC TGC CAT - 3′
SEQ ID NO：72的信息              G1VδC
序列类型：氨基酸和核苷酸
序列长度：14氨基酸，42核苷酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：肽
    174     176                     182             186 187
N  -Ser Thr Cys Glu Gly Asn Leu Ala Cys Leu Ser Leu Ser His - C
5′-AGT ACA TGT GAA GGT AAT CTT GCA TGC TTA TCA CTC AGC CAT - 3′
SEQ ID NO：73的信息             G1’VδC
序列类型：氨基酸
序列长度：14氨基酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：肽
    174     176                     182             186 187
N  -Ser Thr Asp Glu Gly Asn Leu Ala Orn Leu Ser Leu Ser His - C
SEQ ID NO：74的信息          G1’
序列类型：氨基酸
序列长度：l5氨基酸
链型：单链
拓扑结构：线性
分子类型：肽
    174     176                 182                 186 187
N  -Ser Ile Asp ser Asn Pro Thr Orn Trp Ala Ile Ser Lys Cys - C

Claims (16)

1.肺炎克氏杆菌膜蛋白OmpA的至少具有SEQ ID NO 1序列的片段在制备通过鼻腔施用以改善哺乳动物对抗原或半抗原的免疫性的药物组合物中的应用。
2.根据权利要求1的应用，其特征在于所述片段通过重组技术获得。
3.根据权利要求2的应用，其特征在于所述膜蛋白或其片段在以下变性剂之一存在时复性：Zwittergent 3-14、Zwittergent 3-12和辛基吡喃葡糖苷。
4.根据权利要求1-3之一的应用，其特征在于该抗原或半抗原选自蛋白、肽、多糖、寡糖和核酸。
5.根据权利要求1-4之一的应用，其特征在于该抗原或半抗原来源于病毒或细菌。
6.根据权利要求1-5之一的应用，其特征在于该抗原或半抗原包括呼吸道致病性微生物的至少一个蛋白片段。
7.根据权利要求6的应用，其特征在于所述呼吸道致病性微生物选自RSV、副流感病毒(PIV)、流感病毒、汉坦病毒、链球菌、肺炎球菌和脑膜炎球菌。
8.根据权利要求1-7之一的应用，其特征在于该抗原或半抗原至少包括人或牛呼吸道合胞病毒(RSV)的一个蛋白片段。
9.根据权利要求8的应用，其特征在于该抗原或半抗原包括RSV蛋白G的至少一个片段。
10.根据权利要求8和9之任一项的应用，其特征在于该抗原或半抗原包括序列SEQ ID No 2至SEQ ID No 74中的至少一个序列。
11.根据权利要求1-10之一的应用，其特征在于所述膜蛋白片段与所述抗原或半抗原共价偶联。
12.根据权利要求11的应用，其特征在于一个或多个成键成分被引入膜蛋白和/或抗原或半抗原的片段中以利于偶联。
13.根据权利要求12的应用，其特征在于引入的成键成分是氨基酸。
14.根据权利要求11的应用，其特征在于当所述抗原或半抗原本质上是蛋白时，膜蛋白片段和该抗原或半抗原偶联后得到的杂合蛋白通过遗传重组制备。
15.根据权利要求14的应用，其特征在于所述药物组合物包含转化宿主细胞，该宿主细胞可表达含有偶联了所述抗原或半抗原的所述膜蛋白片段的杂合蛋白。
16.根据权利要求12-15之任一项的应用，其特征在于所述药物组合物不包含任何佐剂。
CNB998062650A 1998-03-27 1999-03-26 活性p40结合物在鼻腔途径给药中的应用 Expired - Fee Related CN1243569C (zh)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR9803814A FR2776521B1 (fr) 1998-03-27 1998-03-27 Utilisation de conjugues p40 actifs par voie nasale
FR98/03814 1998-03-27

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1301176A CN1301176A (zh) 2001-06-27
CN1243569C true CN1243569C (zh) 2006-03-01

Family

ID=9524572

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNB998062650A Expired - Fee Related CN1243569C (zh) 1998-03-27 1999-03-26 活性p40结合物在鼻腔途径给药中的应用

Country Status (8)

Country Link
EP (1) EP1066054A2 (zh)
JP (1) JP2002509897A (zh)
CN (1) CN1243569C (zh)
AU (1) AU764061B2 (zh)
BR (1) BR9909180A (zh)
CA (1) CA2324477A1 (zh)
FR (1) FR2776521B1 (zh)
WO (1) WO1999049892A2 (zh)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2798857B1 (fr) * 1999-09-23 2003-06-06 Pf Medicament Utilisation d'une proteine de membrane ompa d'enterobacterie associee a un peptide immunogene du vrs pour la preparation de vaccins administrables par voie nasale
FR2805163A1 (fr) * 2000-02-21 2001-08-24 Pf Medicament Utilisation d'un detergent de type zwittergent pour la preparation d'une composition pharmaceutique destinee a etre administree par voie nasale
AUPQ761200A0 (en) * 2000-05-19 2000-06-15 Hunter Immunology Limited Compositions and methods for treatment of mucosal infections
AU2001286405B2 (en) * 2000-07-31 2007-05-10 Yale University Innate immune system-directed vaccines
FR2827605B1 (fr) 2001-07-20 2004-07-16 Pf Medicament Nouveaux peptides derives de la proteine g du vrs et leur utilisation dans un vaccin
FR2828106A1 (fr) * 2001-08-02 2003-02-07 Pf Medicament Utilisation d'une omp d'enterobacterie de faible masse moleculaire comme porteur et/ou adjuvant
CN112062820B (zh) * 2020-08-24 2023-05-26 黑龙江八一农垦大学 大肠杆菌重组外膜蛋白a包涵体蛋白的复性纯化方法

Family Cites Families (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8927546D0 (en) * 1989-12-06 1990-02-07 Ciba Geigy Process for the production of biologically active tgf-beta
FR2718452B1 (fr) * 1994-04-06 1996-06-28 Pf Medicament Elément d'immunogène, agent immunogène, composition pharmaceutique et procédé de préparation.
FR2726472B1 (fr) * 1994-11-07 1997-01-31 Pf Medicament Proteine porteuse a effet adjuvant, complexe immunogene la contenant, leur procede de preparation, sequence nucleotidique et vaccin
FR2748476B1 (fr) * 1996-05-07 1998-08-14 Pf Medicament Complexe immunogene, son utilisation, son procede de preparation et vaccin le contenant

Also Published As

Publication number Publication date
AU2939199A (en) 1999-10-18
AU764061B2 (en) 2003-08-07
BR9909180A (pt) 2000-12-05
WO1999049892A2 (fr) 1999-10-07
CA2324477A1 (fr) 1999-10-07
JP2002509897A (ja) 2002-04-02
FR2776521A1 (fr) 1999-10-01
CN1301176A (zh) 2001-06-27
WO1999049892A3 (fr) 2000-03-30
EP1066054A2 (fr) 2001-01-10
FR2776521B1 (fr) 2000-12-15

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1246038C (zh) 全身性送递肉毒杆菌毒素口服疫苗
CN1132845C (zh) 获得具有正确键合的胱氨酸键的胰岛素前体的改进的方法
CN1918176A (zh) 用于诱导针对金黄色葡萄球菌的保护性免疫反应的多肽
CN1509293A (zh) 用于含杂合同种型抗体部分的蛋白质的表达技术
CN1909924A (zh) 含有细菌鞭毛蛋白作为活性成分的粘膜疫苗佐剂
CN1217724A (zh) 降钙素片段的重组制备方法和其在制备降钙素和相关类似物中的用途
CN1556857A (zh) 呼吸道合胞病毒(rsv)g蛋白的新肽及其在疫苗中的应用
CN1151252C (zh) 生产微生物转谷氨酰胺酶的方法
CN1195859C (zh) 修饰化人源粒细胞－集落刺激因子及其制备方法
CN101031647A (zh) 在大肠杆菌中制备猪丹毒杆菌表面保护性抗原变体的方法
CN1187203A (zh) 治疗由皮质甾类诱发的骨质减少的方法
CN1261579C (zh) 形成异源二聚体的杂种蛋白质
CN1241638C (zh) Ifnar2/ifn复合物
CN1642570A (zh) 含吸因子ⅷ的稳定药物组合物
CN1243569C (zh) 活性p40结合物在鼻腔途径给药中的应用
CN1161468C (zh) Mpl配体类似物
CN1726283A (zh) 利用c4bp支架制备多聚体融合蛋白
CN1154727C (zh) 人甲状旁腺素的重组表达载体
CN1849334A (zh) 胞内劳森氏菌亚单位疫苗
CN1778930A (zh) 激发机体抗鸡球虫感染的融合基因及其编码蛋白与应用
CN1765929A (zh) 含有肽载体和表皮生长因子的融合蛋白和核酸及其用途
CN1846785A (zh) 含有基因工程融合蛋白的冻干组合物
CN1495262A (zh) gp350/220的非剪接变异体
CN1827640A (zh) 血管生成抑制多肽及其制备方法和应用
CN1290579C (zh) 重组***病毒vp1融合蛋白疫苗

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
C19 Lapse of patent right due to non-payment of the annual fee
CF01 Termination of patent right due to non-payment of annual fee