CN1242937A

CN1242937A - 多环醌类化合物的光敏作用杀灭血制品中艾滋病毒的方法

Info

Publication number: CN1242937A
Application number: CN 98103331
Authority: CN
Inventors: 许以明
Original assignee: Institute of Biophysics of CAS
Current assignee: Institute of Biophysics of CAS
Priority date: 1998-07-28
Filing date: 1998-07-28
Publication date: 2000-02-02

Abstract

本发明是利用多环醌类化合物,尤其是金丝桃蒽酮素的光敏作用杀灭血制品中艾滋病毒的实验结果,提供了一种优选出的高效低毒的(在治疗剂量是低毒的)实用剂量,适宜的激光波长和功率范围及其使用方法等。并且提供了实用性的拉曼光谱检测方法和一系列的参比(标准)拉曼光谱图。

Description

多环醌类化合物的光敏作用杀灭血制品中艾滋病毒的方法

本发明是属于杀灭血制品中艾滋病毒的药物及方法(包括最佳条件)。

本发明是关于利用多环醌类化合物的光敏作用杀灭血制品中艾滋病毒的方法和最佳条件。本发明属系列发明之一，是本发明人以前专利申请“检测艾滋病毒的光谱方法”(中国专利申请号97116856.3)和“抗艾滋病毒药物和特征检测的光谱方法”(中国专利申请号97116858.X)的继续和发展。

人类免疫缺损病毒(HIV)主要通过性接触，接触血和血液制品以及在产期从母亲到婴儿传染的。世界上每年因输血感染艾滋病而造成其它危重病人死亡及经济赔偿的悲剧也震撼着我们的心。因此，有效地杀灭血制品中的艾滋病毒已或为当前刻不容缓的重要任务。

光敏作用杀灭血制品中艾滋病毒的方法是指选择专门的染料(大多是植物色素)使艾滋病毒吸收，然后，用一定波长的激光照射以便达到杀灭该病毒的目的，多环醌类化合物主要包括金丝桃蒽酮素(HC)和竹红菌素及其衍生物(竹红菌甲素，竹红菌乙素，5-溴代竹红乙素，竹红菌乙素修饰物(-乙醇胺)，简称HA，HB，5-Br-HB，HB-E)，已有资料表明它们都有抗艾滋病毒HIV的活性，并且经比较，它们杀灭HIV的能力大小排列如下：HC＞HB＞HA。上述多环醌类化合物的分离、提取、纯化及其抗病毒的机理已被广泛地研究，为本发明方法提供了充分的理论依据。本发明经过一系列的试验和研究获得醌类化合物之一-金丝桃蒽酮素，杀灭艾滋病毒的最佳条件范围并用Raman光谱从分子水平给予阐明。即让多环醌类合化合物与含艾滋病毒的血液制品混合使它们在激光照射下，经过一段时间便可使其中的艾滋病毒杀灭。此后还可用我们的方法(专利号97116858.X)检测其杀灭HIV的结果。现已建立该方法，尚属世界首创，无国外协作。本发明的目的是(1)将多环醌类化合物的光敏作用应用于杀灭血制品中的艾滋病毒并寻找出低毒，有效的最佳剂量条件范围；(2)用发明专利(971168858.X)检验杀灭的效果。上述HIV即为“人类免疫缺损病毒”的英文术语缩写。

为了实验取得精确无误的结果，本发明所用材料是来自美国、德国著名公司的标准样品，即强阳性的人血清(含HIV1-HIV2)，它们来自美国V-TECH公司，金丝桃蒽酮素(Hypericin)由德国Carl Roth公司制造。据说国内已有廉价的金丝桃蒽酮素来源。

实验方法分为以下三个步骤：

1、试样制备：向标准含HIV血样中加入不同浓度的金丝桃蒽酮素光敏剂。将15μl的含HIV1-HIV2的人血清分别与金丝桃蒽酮素的溶液相混合(缓冲液(pH7)由0.01mol/L二甲砷酸钠和0.001mol/L EDTA配制)，金丝桃蒽酮素的终浓度为2μmol/L，4μmol/L和8μmol/L，。从而我们可以通过Raman光谱观察到在上述浓度下，杀灭HIV的效果。

2、对艾滋病毒杀灭程度的检测：将含有和受到金丝桃蒽酮素光敏作用的带HIV的血样，用一定波长和功率的激光或其它光源照射、杀灭血样中的艾滋病毒。本发明中优选的光敏作用的条件是，光源是美国光谱物理公司(spectra-physics co.)生产的氩离子激光器，照射HIV使用的波长是514.5nm，功率500mw。如果使用付里叶转换拉曼光谱(FT-Raman)，激光波长是1064nm，功率可增大至700-800mw。

3、用光谱学方法检测血样中艾滋病毒被上述金丝桃蒽酮素光敏药物杀灭的情况。本发明是利用激光拉曼光谱检测金丝桃蒽酮素(HC)引起的人血清中艾滋病毒(HIV1-HIV2)的光敏损伤，即在分子水平上提供病毒RNA、蛋白质、碳水化合物及脂类的结构变化信息。通过使用药物金丝桃蒽酮素之前和之后的光谱图差别比较，便可了解血样中艾滋病毒中的生物大分子结构的损坏程度。本发明的光谱学检测法，已在先前的系列专利申请(中国专利号97116858.X)中详细披露。

本发明的最主要的技术内容是利用光谱方法，尤其是拉曼光谱法，优选出了杀灭人血制品中艾滋病毒的金丝桃蒽酮素的高效、低毒的实用浓度(终浓度为4μmol/L)，将现有技术上尚属定性(仅知HC对艾滋病毒有杀灭作用)认识，推进到有效定量实用阶段。更进一步的贡献是提供了一套有关金丝桃蒽酮素不同剂量(用量)对艾滋病毒杀灭效果程度的一般参考(标准)拉曼光谱图，尤其4μmol/L的HC杀灭艾滋病毒的实用参照谱图。

本发明光谱测定不同浓度金丝桃蒽酮素杀灭艾滋病毒的结果如下：

艾滋病毒的光谱图及其结构信息详见附图1-5和表1。艾滋病毒在光敏药物金丝桃蒽酮素(HC)光敏损伤后的结构如图6-12所示。图1-10及表1已在本发明先前的专利申请(中国专利申请号97116858.X)中披露。附图说明

图1是阴性人血清的拉曼光谱图(A)和人血清中艾滋病毒(HIV1-HIV2)的拉曼光谱图(B)，选用的光谱区域为450-3100cm^-1。实验条件：激光线波长514.5nm；功率500mw；三单器的四个狭缝宽度分别为700，800，800，700μm，光谱分辨率4cm^-1，步长1cm^-1；积分时间和信号平均分别为0.1和7次扫描(在450-1750cm^-1)，0.2和5次扫描(2500-2600cm^-1)及0.2和2次扫描(2800-3100cm^-1)，室温18±2℃。

图2是阴性人血清的拉曼光谱图(450-1750cm^-1)，实验条件与图1相同。

图3是人血清中HIV1-HIV2的拉曼光谱图(450-1100cm^-1)，实验条件与图1相同。

图4是人血清中HIV1-HIV2的拉曼光谱图(1100-1750cm^-1)，实验条件与图1相同。

图5A是阴性人血清和B是人血清中HIV1-HIV2的拉曼光谱图(2800-3100cm^-1)，实验条件与图1相同。

图2-5是图1的局部放大图。

图6中A是在金丝桃蒽酮素(HC)光敏损伤前人血清中HIV1-HIV2的拉曼光谱图(450-3100cm^-1)和B是被2μmol/L的HC损伤后人血清中HIV1-HIV2的拉曼光谱图(450-3100cm^-1)，实验条件与图1相同。

图7是金丝桃蒽酮素光敏损伤后人血清中HIV1-HIV2的拉曼光谱图(450-1100cm^-1)，实验条件与图1相同。

图8是金丝桃蒽酮素光敏损伤后人血清中HIV1-HIV2的拉曼光谱图(1100-1750cm^-1)，实验条件同图1。

图9是金丝桃蒽酮素光敏损伤后人血清中HIV1-HIV2的拉曼光谱图(2800-3100cm^-1)，实验条件同图1。

图7-9是图6的局部放大图。

图10是艾滋病毒的结构示意图。

图11是4μmol/L的金丝桃蒽酮素光敏损伤的人血清中艾滋病毒的拉曼光谱图(450-1750cm^-1)。测试条件与图1相同。

图12是图11的局部放大图(450-1750cm^-1)。

表1是在18℃所测得的人血清中HIV1-HIV2的拉曼光谱图(450-3100cm^-1)的说明。

从本发明所用4μmol/L的金丝桃蒽酮素损伤的艾滋病毒的拉曼光谱图(图11和图12)，与图1，3，4，5中所示人血清中艾滋病毒拉曼光谱图(分别在450-3100cm^-1，450-1100cm^-1，1100-1750cm^-1，2800-3100cm^-1)以及图6，7，8，9中所示经受金丝桃蒽酮素对艾滋病毒光敏损伤后的拉曼光谱图(光谱范围同1，3，4，5)作比较，可看出在图3，4和图7，8中作为内标的，构象不灵敏的，属于蛋白质苯丙氨酸的单基取代苯基环的在1004cm^-1的谱线在图11，12中位移到1003cm^-1，并且强度显著下降。所以对4μmol/L终浓度的金丝桃蒽酮素光敏损伤的艾滋病毒结构的拉曼光谱分析只能做到定性。这说明4μmol/L终浓度的金丝桃蒽酮素光敏药物对艾滋病毒的蛋白质结构有明显的损伤。

下面将本发明选用的终浓度4μmol/L金丝桃蒽酮素对艾滋病毒光敏损伤的拉曼光谱测试结果(图11和12)作为实施例，与终浓度2μmol/L金丝桃蒽酮素对艾滋病毒光敏损伤的拉曼光谱图(图6-9)进行比较，并结合对该病毒的四种主要组份的结构的损伤加以说明(详见表2)，为了便于观察和分析，我们对图11，12作了适当的放大。

1、病毒碳水化合物(糖类)结构的光敏损伤

从图6中的图谱A(正常的艾滋病毒光谱)与图谱B(2μmol/L的金丝桃蒽酮素光敏损伤的艾滋病毒)及图11，12(4μmol/L的金丝桃蒽酮素光敏损伤的艾滋病毒)的比较可以看出：图6A中在880，1048，1089，1277及1456cm^-1的强谱线，在图6B中仅稍有减弱或位移，分别处于880，1046，1087，1275，1454cm^-1；而在图11，12中不但有较大的位移，分别位移到871，1050，1090，1268，1461cm^-1，而且强度陡然下降。这表明该碳水化合物有链的断裂并且其数量明显减少。碳水化合物(糖类)是病毒包膜糖蛋白gp 120和gp 41等不可缺少的组分，在HIV病毒附着到目标细胞上并进入其中时，这些糖蛋白起着关键的作用，因此糖类的损伤会破坏gp 120和gp 41的功能，以致使HIV无法进入人体。

2.病毒蛋白质的光敏损伤

(1)主链构象：从图4，8，12三者的比较可看出，图4中属于α-螺旋在1264cm^-1(酰胺III)的谱图在图8中消失了，图4中在1226cm^-1的β-折叠的谱线在图8中变成了肩峰并移至1228cm^-1，β-回折在1303cm^-1的谱线位移到1306cm^-1(酰胺III)，在1644，1684cm^-1的谱线位移到1645，1680cm^-1(酰胺I)，而属于α-螺旋或无规卷曲在1660cm^-1的谱线位移至无规卷曲在1664cm^-1之处。而图4中的β-折叠或无规卷曲在1669cm^-1的谱线在图8中消失了。在图12中(图11的局部放大)属于主链构象的谱线弱小，分别在1225，1247cm^-1(酰胺III)和1649，1664，1680cm^-1(酰胺I)，应该注意的是在1225，1234，1247和1649cm^-1的谱线也有人血清的贡献，加上属于C-H变形振动和C-H伸缩振动在1456cm^-1和2935cm^-1的谱线分别位移到1461和2946cm^-1，它们的强度陡然下降。可知蛋白质的多肽链在4μmol/L HC的光敏损伤下发生了断裂其数量也明显减少。

(2)侧链构象：将图1，3，4和图6，7，8作比较看出当金丝桃蒽酮素的浓度为2μmol/L时(图7)属于酪氨酸、色氨酸的对羟苯基环和吲哚环，半胱氨酸的巯基及二硫键都有不同程度的变化，但苯丙氨酸在1004cm^-1的谱线(内标)却无变化。说明该病毒蛋白质只有构象的变化。但从图11和12可看出当HC的浓度增至4μmol/L时上述基团的谱线强度则下降明显，特别是在1004cm^-1的苯丙氨酸的单基取代苯基环的谱线不但位移到1003cm^-1而且强度明显下降。说明该病毒蛋白质有构型的变化。其酪氨酸在830cm^-1的谱线从强峰变成了肩峰，并且双峰在845和830cm^-1的谱线强度之比大于1，说明酪氨酸已从原来的“埋藏”变成“暴露”的(图1与图6和图11比较。属于HIV的S-H基团在2578cm^-1(图1B)的谱线位移到2577(图6B)，2565cm^-1(图11)，而人血清的S-H基团在2554cm^-1的(图1A)谱线位移到2556(图6B)，2545cm^-1(图1B)。属于病毒HIV的在2578cm^-1的谱线强度明显下降，而属于人血清的在2554cm^-1的谱峰几乎不变。病毒蛋白质包括包膜糖蛋白gp120，gp41的蛋白质部分，病毒的反转录酶，整合酶，核糖核酸酶和病毒的核外壳蛋白，基质蛋白等，因此病毒蛋白质的损伤特别是主链的损伤必将影响甚至破坏上述组分的功能，导致病毒失去感染的能力。

3、对病毒RNA结构的破坏：

该RNA骨架结构上磷酸二酯基团(PO₂)在终浓度2μmol/L的金丝桃蒽酮素的光敏损伤下从814cm^-1移至808cm^-1(图3和图7)说明A-型病毒RNA变成了无序的RNA，然而HC为4μmol/L的该谱线在图12中位移至802cm^-1。磷酸离子(PO^- ₂)的对称伸缩振动谱线从图4的1106cm^-1位移至图8的1102cm^-1，而在图12中它位移到1100cm^-1并且强度明显下降。说明HC的光敏损伤使病毒RNA从A型变成无序。与此同时属于HIV的RNA的核糖和4个碱基(A，G，C，U)的谱线也有明显的变化，甚至消失。病毒RNA的损伤直接影响HIV的生长繁殖。

4、病毒脂类的结构损伤

正常的和HC光敏损伤的属于病毒脂类亚甲基CH₂的对称和非对称的C-H伸缩振动的两根谱线，分别出现在图9中的A，B图谱；图9A的病毒2883和2853cm^-1(正常)，变为图9B中的2883和2848cm^-1(2μmol/L HC损伤的HIV)，其强度比I₂₈₈₃/I₂₈₅₃，I₂₈₈₃/I₂₈₄₈几乎相同为5.6，说明它们是高度有序的凝胶相，并且2μmol/L的HC的光敏作用没有使其脂双层的结构受到明显的损伤。但当HC浓度增至4μmol/L时上述二根谱线分别位移到2840和2871cm^-1(图11)并且它们的比值I₂₈₇₁/I₂₈₄₀大约是1，表明其侧向相互作用序参数明显下降，该病毒膜脂的流动性和离子通透性增加，这意味着该病毒的脂双层功能的明显变化。

综上所述，当药物终浓度增至4μmol/L时，属于艾滋病毒HIV的4个组分的谱线位移、强度明显下降，有的消失。病毒的A型RNA变成了无序时的RNA，其蛋白质发生了肽链的断裂，糖类和脂类的碳氢链也有断裂使该病毒的包膜的流动性和离子通透性大大增加。上述结果直接证明了金丝桃蒽酮素对艾滋病毒的光敏作用的靶分子不仅有RNA，蛋白质，而且还有糖类和脂类，并在终浓度达到4μmol/L时上述组分的数量会明显减少及致严重的破坏。因此利用金丝桃蒽酮素的光敏作用杀灭血制品中的艾滋病毒时，HC的终浓度应以4μmol/L为宜。

从图11，12可清楚地看到一些较强的峰都有人血清的贡献，有些还是人血清图谱(图2)中的强峰，它们分别在545，629，923，946，1076，1342cm^-1和1225，1234，1247cm^-1。4μmol/L金丝桃蒽酮素HC的光敏作用使艾滋病毒的结构受到严重破坏。属于它的一系列谱线发生位移和强度下降，与此同时属于人血清的一些谱线却变化不大，因此在图谱上它们就显得比较凸出了。结果提示HC的光敏作用杀灭人血清中的HIV的过程中，其对人血清的影响很小。从而也证实了美国Valentine等人的重要发现-金丝桃蒽酮素在治疗剂量是低毒的(Science，1991，vol 254，P.522)另外在590，698的谱线归属待定，在1510cm^-1的谱线虽有病毒RNA腺嘌呤的贡献，但由于它很强使人认为还有别的物质分子的贡献，这也有待进一步研究。

*8μmol/L HC的实验结果在此省略。寻找杀灭HIV的最低有效浓度是本发明的宗旨，4μmol/L即是，故不再论述其它浓度。

表1.在18℃所测得的人血清中HIV1-HIV2的拉曼光谱

(450--3100cm^-1)频率(cm^-1) 病毒的四种组成

碳水化合物 RNA 蛋白质脂类

465

493 Man

503 skeletal modes r S-S str

515 GlcNac S-S str

521 S-S str

537 GlcNac S-S str

548 Trp

581 C，G Trp

596 C

602 Man

613

620 Phe

631 GlcNac r

640 Tyr

669 Man G

676

684

692

703 GlcNac C-S str

717 C-S str C-N sym

728 A

736 GlcNac

743 Man Ile，Asn

751 C

759 Trp，Val

769 Man

778

786 C，U Thr

814 P Asn

832 Man Tyr，Val

851 Tyr

859

880 β-configuration C-C str，Trp

Man Val

907 Man C-C str

926 COH C-C str

933 GlcNac C-C str

952 Man C-C str

表1.(续)频率(cm^-1) 病毒的四种组成

碳水化合物 RNA 蛋白质脂类

974 Man r

994 CH₂ rock

1004 r Phc

1048 Cl-H bending r C-N str

C-O，C-C，GlcNac

1089 COH C-N str C-C str

1106 Man P

1123 Man，GlcNac C，U C-N str

1132 Man C-N str C-C str

1157 r C-N str

1172

1178 G，A，C Tyr

1193

1205 Tyr，Phe

1226 A Amide III

1237 U，C Amide III

1244 Amide III

1250 A，C Amide III

1264 Amide III

1277 CH₂OH，Man Amide III

1282 Man，GlcNac，COH Amide III

1303 A，C Amide III

1322 GlcNac G C-H def

1330 C(6)-H₂，CH₃

COH

1341 A C-H def，Trp

1348 COH bending，Man

1356 Trp

1365 GlcNac G C-H def

1379 CH₃，GlcNac， G，U，A

Man

1394 C-H bending

1408 Man CO₂- sym str

1419 G，A

1433 GlcNac Trp(N-H def)

1456 CH₂ bending CH₂ bending CH₂ bending

1484 G，A

1494 Man

1508 A

1520

1527 C

1537 Man G

1555 GlcNac Amide II.Trp

1581 G，A Trp

1567

表1.(续)频率(cm^-1) 病毒的四种组成

碳水化合物 RNA 蛋白质脂类

1613

1620 Man C＝O str，U Trp，Tyr，Phe

1628

1635 GlcNac(Amide I)

1644 Amide I

1660 C＝O str， Amide I

U，G，C

1669 Amide I

1681 C＝O，str Amide I

U，G，C

1696

1725 C＝O str

1740 C＝O str

2552 S-H str，Cys

2578 S-H str，Cys

2853 CH₂ sym str

2883 C-H str CH₂ asym str

2900 C-Hstr，Man

2935 C-H str，Man C-H str C-H str CH₃ sym str

2979 C-H str，Man C-H str C-H str缩写词说明：

标准3-字符号是用于各氨基酸和碳水化合物；一字符是用于RNA碱基；r＝ribose，核糖；P＝骨架磷酸基团(PO₂ ^-，PO₂)；Man＝D-Mannose，甘露糖；GlcNac＝N-乙酰基-D-葡萄糖胺。其中已知有一些特殊类型的振动模式，它们由以下缩写词表示：sym＝对称，str＝伸缩，def＝变形，A＝腺嘌呤，U＝尿嘧啶，G＝嘌呤，C＝胞嘧啶，Trp＝色氨酸，Tyr＝酪氨酸，phe＝苯丙氨酸。表2 不同浓度HC对艾滋病毒(HIV1-HIV2)四种结构成分的光敏损伤的Raman光谱

(450-3100cm^-1)

一.对碳水化合物的损伤的Raman光谱
一.对碳水化合物的损伤的Raman光谱			H₁(cm^-1)	H₂(cm^-1)	H₃(cm^-1)
880104810891277	880104610871275	871105110901268	H₁(cm^-1)	H₂(cm^-1)	H₃(cm^-1)

二.对蛋白质主链的光敏损伤的Raman光谱
二.对蛋白质主链的光敏损伤的Raman光谱			H₁(cm^-1)	H₂(cm^-1)	H₃(cm^-1)
酰胺III126412261303	消失了12281306	消失了1225消失了	H₁(cm^-1)	H₂(cm^-1)	H₃(cm^-1)
酰胺III126412261303	消失了12281306	消失了1225消失了	酰胺I1644166016691684	16451664消失1680	16491664消失1680
C-H变形振动1465	1454	1461，强度陡降	酰胺I1644166016691684	16451664消失1680	16491664消失1680
C-H变形振动1465	1454	1461，强度陡降	C-H伸缩振动2935	2934	2946，强度陡降

表2续

三.对RNA磷酸骨架结构损伤的Raman光谱
三.对RNA磷酸骨架结构损伤的Raman光谱			H₁(cm^-1)	H₂(cm^-1)	H₃(cm^-1)
PO₂ 814	808	802强度明显下降	H₁(cm^-1)	H₂(cm^-1)	H₃(cm^-1)
PO₂ 814	808	802强度明显下降	PO₂ ^-1106	1102	1100强度明显下降

四.对病毒脂类结构损伤的Raman光谱
四.对病毒脂类结构损伤的Raman光谱			H₁(cm^-1)	H₂(cm^-1)	H₃(cm^-1)
CH₂反对称伸缩2883	2883脂双层无明显变化	2480脂双层明显变化	H₁(cm^-1)	H₂(cm^-1)	H₃(cm^-1)
CH₂反对称伸缩2883	2883脂双层无明显变化	2480脂双层明显变化	CH₂对称伸缩2853	2848脂双层无明显变化	2471脂双层明显变化

说明：H₁：人血清中的HIV1-HIV2。H₂：2μmol/L HC光敏损伤的人血清中的HIV1-HIV2H₃：4μmol/L Hc光敏损伤的人血清中的HIV1-HIV2。

Claims

1、一种使用不同浓度多环醌类化合物的光敏作用杀灭血制品中艾滋病毒的方法，其特征在于以下各步骤：

(1)试样制备：首先制备缓冲液，由0.01mol/L的二甲砷酸钠和0.001mol/L的EDTA配制，使pH＝7，然后向含有艾滋病毒的标准血试样中加入不同浓度的(用缓冲液稀释配制的)金丝桃蒽酮素(HC)光敏药物，即将15μl的含HIV1-HIV2的人血清分别与金丝桃蒽酮素的溶液相混合，金丝桃蒽酮素的终浓度为2-8μmol/L；

(2)用不同浓度的金丝桃蒽酮素的光敏作用对血清中的艾滋病毒杀灭：将混有金丝桃蒽酮素的含艾滋病毒的血制品，用波长488.0，514.5，554.8，599.1，632.8，1064nm和功率为300-800mw的激光照射(随着所述波长的红移，激光功率应增加)，光照使上述光敏剂产生单线态氧和自由基，从而杀灭艾滋病毒；

(3)对经过不同浓度金丝桃蒽酮素光敏作用后的含艾滋病毒血制品进行光谱法检测：利用光谱方法检测不同浓度光敏剂金丝桃蒽酮素对艾滋病毒的杀灭的效果和程度，通过使用金丝桃蒽酮素之前和之后艾滋病毒的光谱图样比较分析，得到金丝桃蒽酮素低毒、有效的合理浓度供实际使用。

2、如权利要求1所述的使用不同浓度多环醌化合物光敏作用杀灭血制品中艾滋病毒的方法，其特征在于：所说的多环醌化合物包括金丝桃蒽酮素(HC)和竹红菌素及衍生物竹红菌甲素(HA)、竹红菌乙素(HB)、5-溴代竹红菌乙素(5-Br-HB)、竹红菌乙素修饰物(-乙醇胺)(HB-E)，所说的不同浓度为其在血液制品中的终浓度为2-8μmol/L，所说的检测光谱方法包括拉曼光谱、付里叶转换拉曼光谱(FT-Raman)Raman微探针、红外光谱方法，可使用国内外出售的各种拉曼和红外光谱仪。

3、如权利要求1或2所述的方法，其特征在于：优选的多环醌化合物为金丝桃蒽酮素(HC)，其杀灭艾滋病毒的最低有效终浓度为4μmol/L，杀灭艾滋病毒的优选光源为波长488.0或514.5nm和功率350-500mw的激光，检测不同浓度HC对艾滋病毒杀灭程度的光谱方法中被优选者是拉曼光谱法。

4、一系列由不同浓度金丝桃蒽酮素光敏作用杀灭艾滋病毒的拉曼光谱图，包括图1-12，其特征在于为图6-12所示及表2所述的拉曼光谱图。

5、如权利要求4所述的拉曼光谱图，其特征在于图11和图12所示的4μmol/L金丝桃蒽酮素光敏作用损伤的人血清中艾滋病毒拉曼光谱图。