CN118001383A - Hpv疫苗组合物及其制备方法和应用 - Google Patents
Hpv疫苗组合物及其制备方法和应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN118001383A CN118001383A CN202311488835.1A CN202311488835A CN118001383A CN 118001383 A CN118001383 A CN 118001383A CN 202311488835 A CN202311488835 A CN 202311488835A CN 118001383 A CN118001383 A CN 118001383A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- component
- hpv
- adjuvant
- vaccine composition
- oil
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title claims abstract description 85
- 229960002566 papillomavirus vaccine Drugs 0.000 title claims description 19
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title abstract description 23
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims abstract description 150
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 85
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 85
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 85
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 claims abstract description 71
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 claims abstract description 55
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 52
- GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N α-tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2O[C@@](CCC[C@H](C)CCC[C@H](C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-IEOSBIPESA-N 0.000 claims abstract description 42
- 239000007764 o/w emulsion Substances 0.000 claims abstract description 32
- YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N (6E,10E,14E,18E)-2,6,10,15,19,23-hexamethyltetracosa-2,6,10,14,18,22-hexaene Chemical compound CC(C)=CCCC(C)=CCCC(C)=CCCC=C(C)CCC=C(C)CCC=C(C)C YYGNTYWPHWGJRM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 23
- BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N Tetramethylsqualene Natural products CC(=C)C(C)CCC(=C)C(C)CCC(C)=CCCC=C(C)CCC(C)C(=C)CCC(C)C(C)=C BHEOSNUKNHRBNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 23
- PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N dodecahydrosqualene Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C PRAKJMSDJKAYCZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 23
- 229940031439 squalene Drugs 0.000 claims abstract description 23
- TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N squalene Natural products CC(=CCCC(=CCCC(=CCCC=C(/C)CCC=C(/C)CC=C(C)C)C)C)C TUHBEKDERLKLEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 23
- 229940087168 alpha tocopherol Drugs 0.000 claims abstract description 21
- 235000010482 polyoxyethylene sorbitan monooleate Nutrition 0.000 claims abstract description 21
- 229920000053 polysorbate 80 Polymers 0.000 claims abstract description 21
- 229960000984 tocofersolan Drugs 0.000 claims abstract description 21
- 239000002076 α-tocopherol Substances 0.000 claims abstract description 21
- 235000004835 α-tocopherol Nutrition 0.000 claims abstract description 21
- 239000004411 aluminium Substances 0.000 claims abstract description 16
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 35
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 33
- WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K aluminium hydroxide Chemical compound [OH-].[OH-].[OH-].[Al+3] WNROFYMDJYEPJX-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 22
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 22
- ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K aluminium phosphate Chemical compound O1[Al]2OP1(=O)O2 ILRRQNADMUWWFW-UHFFFAOYSA-K 0.000 claims description 8
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 7
- DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H aluminium sulfate (anhydrous) Chemical compound [Al+3].[Al+3].[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O.[O-]S([O-])(=O)=O DIZPMCHEQGEION-UHFFFAOYSA-H 0.000 claims description 6
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 5
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 4
- 229940037003 alum Drugs 0.000 claims description 3
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims description 3
- 108091036414 Polyinosinic:polycytidylic acid Proteins 0.000 claims description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 2
- 239000012931 lyophilized formulation Substances 0.000 claims description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 claims description 2
- 229930182490 saponin Natural products 0.000 claims description 2
- 150000007949 saponins Chemical class 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims 1
- 235000017709 saponins Nutrition 0.000 claims 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 abstract description 62
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 8
- 241000701806 Human papillomavirus Species 0.000 description 106
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 20
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 17
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 16
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 15
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 15
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 14
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 14
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 13
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 12
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 11
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 11
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 10
- 229910017119 AlPO Inorganic materials 0.000 description 9
- 241001112090 Pseudovirus Species 0.000 description 9
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 9
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 8
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 8
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 8
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 6
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 6
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 5
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 5
- 239000004094 surface-active agent Substances 0.000 description 5
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 229940124866 human papillomavirus vaccine Drugs 0.000 description 4
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 4
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 4
- 238000011725 BALB/c mouse Methods 0.000 description 3
- 230000000240 adjuvant effect Effects 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 3
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 3
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 3
- 241000341655 Human papillomavirus type 16 Species 0.000 description 2
- 101000641175 Human papillomavirus type 18 Major capsid protein L1 Proteins 0.000 description 2
- 101710135729 Major capsid protein L1 Proteins 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 2
- PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N Sorbitan trioleate Chemical compound CCCCCCCC\C=C/CCCCCCCC(=O)OC[C@@H](OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)CCCCCCC\C=C/CCCCCCCC PRXRUNOAOLTIEF-ADSICKODSA-N 0.000 description 2
- 238000003917 TEM image Methods 0.000 description 2
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 2
- AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N alumane Chemical class [AlH3] AZDRQVAHHNSJOQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 230000032798 delamination Effects 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 108700042300 human papillomavirus type 52 L1 Proteins 0.000 description 2
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000000244 polyoxyethylene sorbitan monooleate Substances 0.000 description 2
- 229940068968 polysorbate 80 Drugs 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 239000007762 w/o emulsion Substances 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O.OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O GHCZTIFQWKKGSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940124957 Cervarix Drugs 0.000 description 1
- 206010008342 Cervix carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 229940124897 Gardasil Drugs 0.000 description 1
- 101100209954 Human papillomavirus type 16 L1 gene Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 101710163801 Minor capsid protein L2 Proteins 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 208000009608 Papillomavirus Infections Diseases 0.000 description 1
- 241000235648 Pichia Species 0.000 description 1
- 241001631648 Polyomaviridae Species 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000007313 Reproductive Tract Infections Diseases 0.000 description 1
- 230000024932 T cell mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 208000006105 Uterine Cervical Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 229910021502 aluminium hydroxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 description 1
- 230000036755 cellular response Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 201000010881 cervical cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 210000003022 colostrum Anatomy 0.000 description 1
- 235000021277 colostrum Nutrition 0.000 description 1
- 239000002131 composite material Substances 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000013365 dairy product Nutrition 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 230000001066 destructive effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000004945 emulsification Methods 0.000 description 1
- 239000003995 emulsifying agent Substances 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 229940102767 gardasil 9 Drugs 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 239000010410 layer Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 239000002105 nanoparticle Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 229940032313 prophylactic HPV vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 239000001397 quillaja saponaria molina bark Substances 0.000 description 1
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 1
- 238000007086 side reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002356 single layer Substances 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000010415 tropism Effects 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
Landscapes
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
Abstract
本发明涉及一种疫苗组合物,其包含独立包装的第一组分和第二组分,所述第一组分包含HPV抗原和铝佐剂,所述第二组分包含水包油乳剂佐剂,所述水包油乳剂佐剂包含角鲨烯、α‑生育酚和吐温80。本发明的疫苗组合物在制备时不需要将两种组分配制为成品制剂,两种组分可以独立包装,从而可以避免抗原或/铝佐剂与乳剂佐剂之间的相互影响,达到更加高效、更加安全、同时更加稳定的技术效果。
Description
技术领域
本发明属于生物医药工程领域,特别涉及一种HPV疫苗组合物及其制备方法和其在免疫治疗及预防领域的应用。
背景技术
人***瘤病毒(human papillomavirus,HPV)是一种无包膜的闭环双链DNA病毒,属乳多空病毒科多瘤病毒亚科,主要侵犯人体的上皮黏膜组织,进而诱发各种良性及恶性增生病变。目前已鉴定出来的不同亚型HPV超过200种,HPV感染具有明显的组织特异性,不同型别的HPV对于皮肤和黏膜的嗜向性不同,能诱发不同的***状病变,大约有30多种HPV型别与生殖道感染有关,其中有20多种与肿瘤相关。
接种预防性HPV疫苗是预防***有效可行的预防手段,目前已上市疫苗都是基于HPV主要衣壳蛋白L1形成的病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP)为抗原的疫苗,通过基因重组表达的L1蛋白可在一定条件下形成类似病毒的VLP。作为疫苗重要组成部分的佐剂主要是铝盐佐剂,其通过抗原储库效应和诱发炎症等免疫刺激效应发挥增强免疫应答的作用。然而,铝盐佐剂也存在着一系列局限性,例如无法诱导细胞免疫应答,抗原提呈效果不理想、免疫应答产生时间滞后,易引发副反应等。
乳剂型佐剂(包括水包油乳剂、油包水乳剂等)是新型佐剂的一个重要分支,乳剂可联合多种弱抗原(重组蛋白、多肽等)使用,并诱发高滴度的抗原特异性抗体。乳剂型佐剂通常包含油相成分、水相成分和乳化剂。其中,水包油乳剂以水相成分为主,人体耐受性较高,且与多数疫苗抗原的相容性较好。
尽管乳剂型佐剂和铝佐剂都已经被广泛使用,但迄今为止,仍然需要有新的免疫制剂和免疫方法,以提供更加安全有效的,方便配制的,成本低廉的,能够快速诱导高效免疫应答的疫苗制剂。
发明内容
本发明的目的是提供一种安全性和免疫刺激活性好,方便配制的,成本低廉的,能够快速诱导高效免疫应答的HPV疫苗组合物。同时本发明提供简便的制备方法和具有广阔前景的应用。
为了达到上述目的,本发明一方面提供一种HPV疫苗组合物,包含独立包装的第一组分和第二组分,所述第一组分包含HPV抗原和铝佐剂,所述第二组分包含水包油乳剂佐剂,所述水包油乳剂佐剂包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80。
HPV的衣壳是由主要衣壳蛋白L1和次要衣壳蛋白L2组成。已上市疫苗都是基于HPVL1病毒样颗粒(Virus-like particle,VLP)为抗原的疫苗,通过基因重组表达的L1蛋白可在一定条件下形成类似病毒的颗粒,有着较好的免疫原性。
在本发明中,来源于人***瘤病毒(HPV)的抗原为各型别HPV的L1蛋白和/或L2蛋白。在本发明的实施方式中,HPV可以为低危型HPV(例如HPV6、11、40、42、43、44、54、61、70、72、81、89),中等风险型HPV(例如HPV26、53、66、73、82),或者高危型HPV(例如HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)。在优选的实施方式中,所述抗原包含HPV6型、11型、16型、18型、31型、33型、35型、39型、45型、51型、52型、56型、58型及59型中的一种或多种的L1蛋白和/或L2蛋白。
在NCBI数据库中,已有许多现有的HPV各型L1蛋白(HPV 6L1、11L1、16L1、18L1、31L1、33L1、45L1、52L1及58L1)序列可供本领域技术人员进行选择,这些序列均可以作为抗原蛋白的理想选择基础。在本发明的一些实施方式中,采用了具有高度的保守性的序列,具体情况如下:HPV 6L1的氨基酸序列已于1995年在NCBI数据库中收录,登录号为AAA74218.1;HPV 11L1的氨基酸序列已于1994年在NCBI数据库中收录,登录号为AAA46935.1;HPV 16L1的氨基酸序列已于1998年在NCBI数据库中收录,登录号为AAC09292.1;HPV 18L1蛋白的氨基酸序列已于2003年在NCBI数据库中收录,登录号为AAQ92369.1;HPV 31L1蛋白的氨基酸序列已于1994年在NCBI数据库中收录,登录号为AAA46956.1;HPV 33L1蛋白的氨基酸序列已于2009年在NCBI数据库中收录,登录号为ACL12333.1;HPV 45L1蛋白的氨基酸序列已于2009年在NCBI数据库中收录,登录号为ABP99831.1(截短了N端26个氨基酸,上述26个氨基酸为疏水区,疏水区可能影响L1蛋白形成VLP,故而截短);HPV52 L1蛋白的氨基酸序列已于2005年在NCBI数据库中收录,登录号为CAA52590.1(截短了N端27个氨基酸,上述27个氨基酸为疏水区,疏水区可能影响L1蛋白形成VLP,故而截短);HPV 58L1蛋白的氨基酸序列已于2009年在NCBI数据库中收录,登录号为CAX48979.1。需要说明的是,本发明中的抗原并不限于具有上述氨基酸序列的L1蛋白,可以是具有免疫原性的其它L1蛋白,包括已上市疫苗所采用的L1蛋白。
根据本发明的一些实施方式,第一组分中抗原HPV各型L1和/或L2蛋白的含量在1-100μg之间,更优选在5-50μg之间,例如10μg、20μg、30μg或40μg。
在一些实施方式中,所述铝佐剂选自氢氧化铝、磷酸铝、硫酸铝和明矾中的至少一种。
在一些实施方式中,所述第一组分中铝佐剂的含量约在10-1000μg之间,优选在50-800μg之间,更优选在100-600μg之间,例如200μg、300μg、400μg或500μg。
在一些实施方式中,所述第一组分是冻干制剂、溶液或混悬液。
在一些实施方式中,所述第一组分的溶液或混悬液的体积为0.2-1ml,优选为0.5ml。
在一些实施方式中,所述第一组分是HPV疫苗成品制剂,例如市售的二价、四价、九价或更高价次的HPV疫苗。
在一些实施方式中,所述水包油乳剂佐剂包含5-15mg角鲨烯、5-15mgα-生育酚和2-10mg吐温80,优选地,所述水包油乳剂佐剂包含10.69mg角鲨烯、11.86mgα-生育酚和4.86mg吐温80。
在一些实施方式中,所述水包油乳剂佐剂的体积为0.2-1ml,优选为0.5ml。
在一些实施方式中,所述水包油乳剂佐剂进一步包含MPL、皂苷、poly I:C和CpG中的一种或多种。
本发明同时提供所述HPV疫苗组合物的制备方法,所述方法包括以下步骤:
(i)制备包含HPV抗原和铝佐剂的第一组分;
(ii)制备作为第二组分的包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80的水包油乳剂佐剂;
(iii)将所述第一组分与第二组分分别独立包装,制得HPV疫苗组合物。
其中步骤(i)和(ii)可以以任意顺序进行,包括先后进行、同时进行或分场地进行。
本发明第一组分的具体制备方式可参考例如《Vaccine Design:The Subunit andAdjuvant Approach》(ISBN:0-306-44867-X)。在一些实施方式中,本发明所提供的制备方法为将HPV各型L1蛋白的VLP吸附至铝佐剂上,以保持VLP稳定性和增强其免疫原性。
根据本发明的实施方式,制备第二组分的方法包括:首先将角鲨烯和α-生育酚混合,然后加入含有吐温80的磷酸盐缓冲液,通过搅拌进行乳化,最后进行均质得到水包油乳剂佐剂。
本发明还提供了所述的疫苗组合物在制备用于治疗或预防疾病的药物中的用途。
另一方面,本发明提供一种包含所述疫苗组合物的试剂盒,其包含独立包装的第一组分和第二组分,所述第一组分包含HPV抗原和铝佐剂,所述第二组分包含水包油乳剂佐剂,所述水包油乳剂佐剂包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80。
另一方面,本发明提供一种包含所述疫苗组合物的多室注射器,其包含第一隔室和第二隔室,所述第一隔室装有第一组分,所述第一组分包含HPV抗原和铝佐剂;第二隔室装有第二组分,所述第二组分包含水包油乳剂佐剂,所述水包油乳剂佐剂包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80。
另一方面,本发明提供一种使用所述疫苗组合物诱导免疫应答的方法,其将第一组分和第二组分分开施用于受试者。所述方法包括以下步骤:
(i)向所述受试者施用所述第一组分;
(ii)向所述受试者施用所述第二组分,
其中步骤可以以任意顺序同时或间隔特定时间进行。
在一些实施方式中,所述第一组分和第二组分施用于受试者的同一部位。在另一些实施方式中,所述第一组分和第二组分分别施用于受试者的不同部位。
本发明还提供另一种使用所述疫苗组合物诱导免疫应答的方法,其将第一组分和第二组分同时施用于受试者。所述方法包括以下步骤:
(i)将所述第一组分和所述第二组分混合;
(ii)向所述受试者施用步骤(i)获得的混合物。
另一方面,本发明提供一种利用所述疫苗组合物改善CD4 T-细胞免疫应答和/或改善B-记忆细胞应答的方法,向受试者分别同时施用或不同时施用所述第一组分和所述第二组分,或者将所述第一组分和所述第二组分混合后施用于受试者。
相比现有技术,本发明具有如下有益效果:
本发明在包含抗原性物质和铝佐剂的免疫成分的基础上进一步增加了乳剂佐剂,两种组分可以分开施用或共同施用并能基本上达到与传统制剂形式一致甚至更优的协同佐剂效果,可以有效改善免疫应答,快速刺激抗体的产生。
另一方面,本发明的疫苗组合物在制备时不需要将包含抗原性物质和铝佐剂的免疫成分与乳剂佐剂配制为成品制剂,乳剂佐剂和包含抗原性物质和铝佐剂的免疫成分可以独立包装,从而可以避免抗原性物质或/铝佐剂与乳剂佐剂之间的相互影响,铝佐剂可以吸附抗原性物质,起到保护抗原的作用,同时,铝佐剂与抗原性物质形成整体,与乳剂混合时,抗原性物质无论是被铝佐剂吸附或被乳剂携带,均能同时发挥铝佐剂和乳剂的双重佐剂效果,因此,本发明的疫苗组合物可以达到更加高效、更加安全、同时更加稳定的技术效果。
附图说明
以下附图仅旨在于对本发明做示意性说明和解释,并不限定本发明的范围。其中:
图1为本发明实施例3中氢氧化铝佐剂的透射电镜照片;
图2为本发明实施例3中抗原吸附于铝佐剂的示意图;
图3为本发明实施例3中乳剂佐剂的透射电镜照片;
图4为本发明对比例2中制备的佐剂***的分层现象;
图5为本发明对比例3中制备的佐剂***的分层现象;
图6为本发明对比例4中由铝佐剂、水包油乳剂和抗原组成的疫苗复合物的示意图;
图7为本发明实施例4的4.1部分中HPV 45型抗原联合不同佐剂免疫小鼠后针对HPV45型假病毒的中和抗体滴度;
图8为本发明实施例4的4.2部分中HPV 45型抗原联合不同佐剂免疫小鼠后针对HPV45型假病毒的中和抗体滴度;
图9为本发明实施例5中九价HPV抗原联合不同佐剂免疫小鼠后针对HPV31型假病毒的中和抗体滴度;
图10为本发明实施例5中九价HPV抗原联合不同佐剂免疫小鼠后针对HPV6型、45型和58型假病毒的中和抗体滴度;
图11为本发明实施例6中HPV疫苗与乳剂佐剂在不同时间、不同部位免疫小鼠后的中和抗体滴度,
其中,注射1表示在同部位注射乳剂佐剂后马上注射吸附于氢氧化铝佐剂的抗原;
注射2表示在同部位注射乳剂佐剂2小时后注射吸附于氢氧化铝佐剂的抗原;
注射3表示在不同部位注射乳剂佐剂后马上注射吸附于氢氧化铝佐剂的抗原。
具体实施方式
为使本发明的目的、技术方案和优点更加清楚明白,以下结合具体实施例,并参照附图,对本发明作进一步的详细说明。
本发明的HPV疫苗组合物包含独立包装的第一组分和第二组分,第一组分包含HPV抗原和铝佐剂,第二组分包含水包油乳剂佐剂。
在本发明的实施方式中,来源于人***瘤病毒(HPV)的抗原可以为各型别HPV的L1蛋白。在本发明的实施方式中,HPV可以为低危型HPV(例如HPV6、11、40、42、43、44、54、61、70、72、81、89),中等风险型HPV(例如HPV26、53、66、73、82),或者高危型HPV(例如HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68)。
在优选的实施方式中,来源于人***瘤病毒(HPV)的抗原包含由HPV6型、11型、16型、18型、31型、33型、35型、39型、45型、51型、52型、56型、58型及59型中的一种或多种的L1蛋白和/或L2蛋白组装而成的HPV病毒样颗粒。
在一个优选的实施方式中,来源于人***瘤病毒(HPV)的抗原包含由HPV 6型和11型的L1蛋白和/或L2蛋白组装而成的HPV病毒样颗粒。
在一个优选的实施方式中,来源于人***瘤病毒(HPV)的抗原包含由HPV16型和18型的L1蛋白和/或L2蛋白组装而成的HPV病毒样颗粒。
在一个优选的实施方式中,来源于人***瘤病毒(HPV)的抗原包含由HPV 6型、11型、16型和18型的L1蛋白和/或L2蛋白组装而成的HPV病毒样颗粒。
在一个优选的实施方式中,来源于人***瘤病毒(HPV)的抗原包含由HPV6型、11型、16型、18型、31型、33型、45型、52型及58型的L1蛋白和/或L2蛋白组装而成的HPV病毒样颗粒。
在一个优选的实施方式中,来源于人***瘤病毒(HPV)的抗原包含由HPV6型、11型、16型、18型、31型、33型、35型、39型、45型、51型、52型、56型、58型及59型中的一种或多种的L1蛋白和/或L2蛋白组装而成的HPV病毒样颗粒。
本发明中的HPV抗原可以利用任何的现有技术来制备。制备的HPV抗原可以进一步与铝佐剂混合,制得本发明中的第一组分。其中,铝佐剂可选自氢氧化铝、磷酸铝、硫酸铝和明矾。铝佐剂可以利用任何的现有技术来制备,也可以采用市售的铝佐剂,例如CRODA的氢氧化铝佐剂ALHYDROGEL。
在优选的实施方式中,本发明的第一组分还可以是市售的HPV疫苗成品制剂,例如,默沙东公司的四价人***瘤病毒疫苗(酿酒酵母)-佳达修(GARDASIL)和九价人***瘤病毒疫苗(酿酒酵母)-佳达修9(GARDASIL 9),GSK的双价人***瘤病毒吸附疫苗-希瑞适(CERVARIX)、厦门万泰沧海生物技术有限公司的双价人***瘤病毒疫苗(大肠杆菌)-馨可宁(Cecolin)、玉溪泽润生物技术有限公司的双价人***瘤病毒疫苗(毕赤酵母)-沃泽惠等。
在本发明中,作为第二组分的水包油乳剂佐剂包含水相、油相和表面活性剂。其中,水相可以为选自磷酸盐缓冲溶液、柠檬酸盐缓冲液、Tris-HCl缓冲液、醋酸盐缓冲液或柠檬酸-磷酸缓冲液的缓冲溶液。油相包含可代谢油,优选为角鲨烯,并优选进一步包含α-生育酚。表面活性剂包含聚氧乙烯失水山梨糖醇脂肪酸酯(吐温)、失水山梨糖醇脂肪酸酯(司盘)、辛苯聚醇-9(曲拉通X-100或聚乙二醇辛基苯基醚以及卵磷脂中的一种或多种。例如,水包油乳剂佐剂可以包含角鲨烯、司盘85和吐温80,更优选地,水包油乳剂佐剂包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80。
实施例1制备包含乳剂佐剂和吸附于铝佐剂的HPV抗原的双组分疫苗组合物
第一组分的制备:将HPV各型L1 VLP的抗原原液与氢氧化铝佐剂(ALHYDROGEL,CRODA,下同)或磷酸铝佐剂混合,在15℃,100rpm下震荡10h,使VLP吸附到氢氧化铝或磷酸铝佐剂上,得到吸附于铝佐剂的HPV抗原作为第一组分。
第二组分的制备:首先将2.14g角鲨烯和2.37gα-生育酚混合,然后加入45ml含有5wt.%吐温80的磷酸盐缓冲液混合后,在15℃下以8000rpm搅拌15min,在15℃下以80MPa的压力进行狭缝式均质后,再以100MPa的压力进行微射流均质,均质2个循环后粒径即可降至160.5nm,PDI为0.077,停止均质,用0.22μm的过滤器进行过滤,得到水包油乳剂。
实施例2制备包含乳剂佐剂和吸附于铝佐剂的HPV抗原的双组分疫苗组合物
第一组分的制备:将HPV各型L1 VLP的抗原原液与氢氧化铝佐剂或磷酸铝佐剂混合,在15℃,100rpm下震荡10h,使VLP吸附到氢氧化铝或磷酸铝佐剂上,得到吸附于铝佐剂的HPV抗原作为第一组分。
第二组分的制备:称取2.47g吐温80溶解于柠檬酸缓冲液中,调节pH至6.5,定容至500ml作为水相。称取3.90g角鲨烯和0.47g司盘85,混合均匀,作为油相。室温下,向4.37g的油相中加入水相至100ml,混合均匀后,10000rpm高速剪切15min,制备得到初乳。
在20℃下,以50MPa的压力进行狭缝式均质后,再以120MPa的压力进行微射流均质,均质2个循环后粒径即可降至165.3nm,PDI为0.062,停止均质,用0.22μm的过滤器进行过滤,得到水包油乳剂。
对比例1制备包含复合佐剂和抗原的疫苗组合物
称取4.29g角鲨烯、4.74gα-生育酚、1.94g聚山梨酯80,混合作为油相。将10ml氢氧化铝佐剂加入80ml磷酸盐缓冲液,得到呈白色碎絮状、乳状液体。20℃,8000rpm分散10min,经1bar前级阀、120MPa微射流阀均质8循环,获得油性乳剂。将27μlHPV抗原,加873μl磷酸盐缓冲液,混合作为水相,将油性乳剂和水相等体积混合,得到疫苗组合物。
对比例2制备包含复合佐剂和抗原的疫苗组合物
称取1.28g角鲨烯、1.43gα-生育酚、0.58g聚山梨酯80,混合作为油相。将360μl氢氧化铝佐剂、108μl HPV抗原加入到132μl磷酸盐缓冲液中,混合作为水相。将500μl水相加入约2.5ml油相中,超声乳化(300W,4min,5s/5s),得到油包水乳剂,最后加入相同体积的磷酸盐缓冲液稀释。
对比例3制备包含复合佐剂和抗原的疫苗组合物
称取1.29g角鲨烯和1.43gα-生育酚,混合作为油相。将400μl氢氧化铝纳米颗粒加入3080μl磷酸盐缓冲液,加120μl HPV抗原原液,混合为水相。取300μl油相和2.7ml水相混合,超声乳化(300W,4min,5s/5s),获得Pickering乳液,取相同体积的Pickering乳液与磷酸盐缓冲液混合,得到疫苗组合物,离心后样品明显分层。
对比例4制备包含铝佐剂、乳剂佐剂和抗原的疫苗组合物
首先将2.14g角鲨烯和2.37gα-生育酚混合,然后加入45ml含有5wt.%吐温80的磷酸盐缓冲液混合后,在15℃下以8000rpm搅拌15min,在15℃下以80MPa的压力进行狭缝式均质后,再以100MPa的压力进行微射流均质,均质2个循环后粒径即可降至160.5nm,PDI为0.077,停止均质,用0.22μm的过滤器进行过滤,得到水包油乳剂。
将铝含量为10mg/ml的400μl氢氧化铝或磷酸铝佐剂和上述4ml水包油乳剂加入离心管中,用涡旋震荡仪,震荡1min,混合均匀。将60μl HPV抗原加入到1740μl磷酸盐缓冲液,混合作为抗原溶液。在1.1ml佐剂混合物中添加900μl抗原溶液,然后在15℃,100rpm下震荡10h,制得疫苗组合物。
实施例3疫苗组合物性质分析
氢氧化铝佐剂实际上是Al(OH)3的不完全脱水产物,即纤维状结晶形态的偏氢氧化铝AlO(OH),如图1所示。在实施例1和2中,当氢氧化铝佐剂与作为抗原的HPV VLP混合时,HPV VLP被吸附到氢氧化铝佐剂上,如图2所示。
实施例1和2中的水包油乳剂的油相和表面活性剂形成的液滴均匀分布在水中,如图3所示。实施例1和2中的吸附于铝佐剂的HPV抗原和水包油乳剂的稳定性均较高,由于两个组分相互独立,互不影响,因此制备的双组分疫苗组合物的稳定性也较高。
在对比例1中,由于形成的复合佐剂为油性乳剂,将其与包含抗原的水相混合后并经长时间放置发现有分层现象。类似地,对比例2中复合佐剂为油包水乳剂,经磷酸盐缓冲溶液稀释、静置后发现有白絮状、沉淀和分层现象,如图4所示。在对比例3中制备的Pickering乳液是一种由固体颗粒代替表面活性剂的乳液体系。乳液的稳定机理主要是通过固体颗粒吸附在油水界面,形成固体颗粒单层或多层结构,从而使乳液稳定。但该技术对制备工艺条件要求较高,且乳液稳定性较差,发明人发现长时间放置或者离心后有分层现象,如图5所示。
对比例4中将铝佐剂、水包油乳剂和抗原三种组分先后混合,油相和表面活性剂形成的液滴以及抗原先后被吸附到铝佐剂上,如图6所示。油相和表面活性剂形成的液滴和铝佐剂之间的吸附会与抗原和铝佐剂之间的吸附形成竞争,铝佐剂难以有效吸附和保护抗原,另一方面,铝佐剂会破坏乳剂的水油界面的平衡,从而破坏乳剂的形态,与抗原混合后,难以发挥乳剂自身的优势。
实施例4单价HPV疫苗小鼠免疫实验
4.1双组分疫苗与包含复合佐剂和抗原的疫苗组合物的比较
利用实施例1和对比例1-3中的疫苗组合物免疫BALB/c小鼠,设置Al(OH)3对照组,每组10只,肌肉免疫,HPV抗原包含HPV45 L1 VLP 5μg,佐剂用量如表1所示。分别在第0和14天免疫小鼠,第二次免疫7天后杀鼠并分离血清,通过基于HPV假病毒的方法进行血清中和抗体检测。
表1
检测结果如图7所示。可以发现,实施例1和对比例1中制备的免疫组合物诱导产生的中和抗体滴度均高于Al(OH)3对照组,但两组之间没有显著性差异。对比例2和3中制备的免疫组合物诱导产生的中和抗体滴度低于Al(OH)3对照组,这可能是由于一方面这两个对比例中的免疫组合物稳定性较差所致,另一方面,抗原和铝佐剂作为水相与油相一起乳化,形成乳剂的过程会对抗原产生很大的破坏作用,可能会影响抗原的免疫效果。
综合来看,本发明中采用独立包装的双组分疫苗组合物,一方面可以避免将铝佐剂和乳剂佐剂混合时导致的稳定性问题,另一方面还可以显著提高抗原的免疫效果。
4.2双组分疫苗与包含佐剂混合物和抗原的疫苗组合物的比较
分别按照实施例1和对比例4的方法制备疫苗组合物。其中,在按照对比例4的方法制备疫苗组合物时,分别于免疫前14天、7天、3天和当天配制氢氧化铝和水包油乳剂的佐剂混合物,免疫当天将佐剂混合物与HPV45 L1抗原混合,对应的疫苗组合物分别记为H-14、H-7、H-3和H-0,实施例1中的双组分疫苗在免疫当天混合。
利用实施例1和对比例4制备的疫苗组合物免疫BALB/c小鼠,每组9只,肌肉免疫,HPV抗原包含HPV45 L1 VLP 2μg,乳剂佐剂用量均为25μl,Al(OH)3佐剂用量均为50μg。分别在第0和21天免疫小鼠,第二次免疫14天后杀鼠并分离血清,通过基于HPV假病毒的方法进行血清中和抗体检测。
由图8可以看出,按照对比例4的方法制备疫苗组合物时,佐剂混合物的放置时间可能对免疫效果产生影响,即佐剂混合物在放置至少3天以后,所制备的疫苗组合物的免疫效果才逐渐增强。这可能是在将氢氧化铝和水包油乳剂混合后的初始阶段,由于氢氧化铝的吸附作用,佐剂混合物并不稳定,不能充分提高抗原的免疫效果,而在放置一段时间后,整个体系变得更加稳定和均匀,从而能够充分发挥佐剂效应。而将实施例1中的双组分疫苗组合物在混合后进行免疫,即可获得较好的免疫效果,这可能是因为第一组分中的抗原吸附于氢氧化铝,将水包油乳剂与其混合后立即接种,整个体系的稳定性不会受到明显影响。
实施例5九价HPV疫苗小鼠免疫实验
利用制备的疫苗组合物免疫BALB/c小鼠,每组8只,肌肉免疫,HPV抗原包含HPV6L1 3μg、HPV11 L1 4μg、HPV16 L1 6μg、HPV18 L1 4μg、HPV31 L1 2μg、HPV33L1 2μg、HPV45L1 2μg、HPV52 L1 2μg及HPV58 L1 2μg,佐剂用量如表2所示。分别在第0和14天免疫小鼠,第二次免疫7天后杀鼠并分离血清,通过基于HPV假病毒的方法进行血清中和抗体检测。
表2
第1组和第3组是按照对比例1的方法制备的包含Al(OH)3/乳剂或AlPO4/乳剂复合佐剂和HPV抗原的疫苗组合物,第2组和第4组是按照实施例1或2的方法制备的双组分疫苗组合物(HPV抗原吸附在Al(OH)3或AlPO4上作为第一组分,乳剂作为第二组分),两种组分在施用前混合,第5组是将乳剂与HPV抗原的混合物作为疫苗组合物,不包含铝佐剂,第6组和第7组是将HPV抗原吸附在Al(OH)3或AlPO4上作为疫苗组合物,不包含乳剂佐剂。
针对HPV31型假病毒的中和抗体检测结果如图9所示。可以看出,在使用单一佐剂的情况下,使用乳剂佐剂时诱导产生的中和抗体滴度最高,使用AlPO4佐剂时的中和抗体滴度最低。而在使用乳剂与Al(OH)3或AlPO4两种佐剂时,第2组(标记为“乳剂+Al(OH)3”)诱导产生的中和抗体滴度显著高于使用任何单一佐剂情况下的中和抗体滴度,说明包含Al(OH)3佐剂的疫苗联合乳剂佐剂可以显著增强免疫效果,而第4组(标记为“乳剂+AlPO4”)以及第1组和第3组(标记为“乳剂/Al(OH)3”和“乳剂/AlPO4”)诱导产生的中和抗体滴度略低于单独使用乳剂佐剂时的中和抗体滴度,但显著高于单独使用Al(OH)3或AlPO4时的中和抗体滴度。
针对HPV6型、45型和58型假病毒的中和抗体检测结果如图10所示。结果同样显示,第2组(标记为“乳剂+Al(OH)3”)或第4组(标记为“乳剂+AlPO4”)诱导产生的中和抗体滴度显著高于单独使用Al(OH)3或AlPO4佐剂情况下的中和抗体滴度,且大于第1组(标记为“乳剂/Al(OH)3”)诱导产生的中和抗体滴度,说明包含Al(OH)3或AlPO4佐剂的疫苗联合乳剂佐剂可以显著增强免疫效果,且优于成分相近但制备方法截然不同的疫苗组合物“抗原+乳剂/Al(OH)3复合佐剂”。
以上结果表明,乳剂佐剂可以明显增强HPV抗原的免疫原性,在现有的含铝佐剂的HPV疫苗的基础上简单地增加乳剂佐剂,即可获得更佳的免疫效果。
实施例6乳剂佐剂和吸附于铝佐剂的HPV抗原的注射部位和施用顺序对免疫效果的影响
本发明实施例1中的疫苗组合物包含独立的两个组分,本发明研究了两个组分的注射部位以及施用顺序对免疫效果的影响,探索多种注射部位和施用顺序的组合,以期筛选出能够获得最佳免疫效果的施用方式。
在同时施用时,可以将吸附于铝佐剂的抗原、和乳剂佐剂两个组分混合后施用,或者用两个注射器分别施用两个组分。两个组分的施用间隔较短时(例如在1min之内,优选在30s内),仍可认为属于同时施用。
在不同时施用时,吸附于铝佐剂的抗原和乳剂佐剂两个组分的施用间隔应至少1h,该实施例中间隔时间为2h。分组情况如表3所示。各组抗原的剂量与实施例5相同。
表3
/>
如图11所示,两种组分无论是先后施用,还是在不同部位施用,疫苗组合物诱导产生的中和抗体滴度均低于将两种组分混合后在同一部位施用时的中和抗体滴度,在不同部位施用时的中和抗体滴度最低。因此,研究结果发现最优的方式是将两种组分混合后施用、其次是将两种组分先后在同一部位使用。
以上所述的具体实施例,对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明,应理解的是,以上所述仅为本发明的具体实施例而已,并不用于限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所做的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (15)
1.一种疫苗组合物,其特征在于,包含独立包装的第一组分和第二组分,所述第一组分包含HPV抗原和铝佐剂,所述第二组分包含水包油乳剂佐剂,所述水包油乳剂佐剂包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80。
2.根据权利要求1所述的疫苗组合物,其特征在于,所述HPV抗原包含HPV6型、11型、16型、18型、31型、33型、35型、39型、45型、51型、52型、56型、58型及59型中的一种或多种的L1蛋白和/或L2蛋白。
3.根据权利要求2所述的疫苗组合物,其特征在于,所述第一组分中HPV各型L1和/或L2蛋白的含量在1-100μg之间,更优选在5-50μg之间。
4.根据权利要求1所述的疫苗组合物,其特征在于,所述铝佐剂选自氢氧化铝、磷酸铝、硫酸铝和明矾中的至少一种。
5.根据权利要求1所述的疫苗组合物,其特征在于,所述第一组分中铝佐剂的含量在10-1000μg之间,优选在50-800μg之间。
6.根据权利要求1所述的疫苗组合物,其特征在于,所述第一组分是冻干制剂、溶液或混悬液。
7.根据权利要求6所述的疫苗组合物,其特征在于,所述第一组分的溶液或混悬液的体积为0.2-1ml,优选为0.5ml。
8.根据权利要求1-7任一项所述的疫苗组合物,其特征在于,所述第一组分为HPV疫苗成品制剂,例如市售的二价、四价、九价或更高价次的HPV疫苗。
9.根据权利要求1所述的疫苗组合物,其特征在于,所述水包油乳剂佐剂包含5-15mg角鲨烯、5-15mgα-生育酚和2-10mg吐温80,优选地,所述水包油乳剂佐剂包含10.69mg角鲨烯、11.86mgα-生育酚和4.86mg吐温80。
10.根据权利要求1或9所述的疫苗组合物,其特征在于,所述水包油乳剂佐剂的体积为0.2-1ml,优选为0.5ml。
11.根据权利要求1所述的疫苗组合物,其特征在于,所述水包油乳剂佐剂进一步包含MPL、皂苷、poly I:C和CpG中的一种或多种。
12.一种权利要求1-11任一项所述疫苗组合物的制备方法,所述方法包括以下步骤:
(i)制备包含HPV抗原和铝佐剂的第一组分;
(ii)制备作为第二组分的包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80的水包油乳剂佐剂;
(iii)将所述第一组分与第二组分分别独立包装,制得HPV疫苗组合物,
其中步骤(i)和(ii)可以以任一顺序进行,包括先后进行、同时进行或分场地进行。
13.权利要求1-11任一项所述HPV疫苗组合物在制备用于治疗或预防疾病的药物中的用途。
14.一种包含权利要求1-11任一项所述疫苗组合物的试剂盒,其特征在于,包含独立包装的第一组分和第二组分,所述第一组分包含HPV抗原和铝佐剂,所述第二组分包含水包油乳剂佐剂,所述水包油乳剂佐剂包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80。
15.一种包含权利要求1-11任一项所述疫苗组合物的多室注射器,其特征在于,包含第一隔室和第二隔室,所述第一隔室装有第一组分,所述第一组分包含HPV抗原和铝佐剂;第二隔室装有第二组分,所述第二组分包含水包油乳剂佐剂,所述水包油乳剂佐剂包含角鲨烯、α-生育酚和吐温80。
Applications Claiming Priority (4)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN2022113884433 | 2022-11-08 | ||
CN202211388443 | 2022-11-08 | ||
CN202310881092 | 2023-07-18 | ||
CN2023108810928 | 2023-07-18 |
Publications (1)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN118001383A true CN118001383A (zh) | 2024-05-10 |
Family
ID=90949245
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202311488835.1A Pending CN118001383A (zh) | 2022-11-08 | 2023-11-08 | Hpv疫苗组合物及其制备方法和应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN118001383A (zh) |
-
2023
- 2023-11-08 CN CN202311488835.1A patent/CN118001383A/zh active Pending
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
JP5956974B2 (ja) | パピローマウイルスワクチン組成物 | |
CN104013955B (zh) | 一种不含表面活性剂的水包油乳液及其用途 | |
EP2293813A2 (en) | Nanoemulsion vaccines | |
JP2018065821A (ja) | 粒子状ワクチン製剤 | |
CN107188932B (zh) | 截短型人***瘤病毒16型l1蛋白及其应用 | |
CN104338126B (zh) | 一种具有治疗或预防hpv病毒的疫苗组合物及其应用 | |
Wang et al. | Immune responses to varicella-zoster virus glycoprotein E formulated with poly (lactic-co-glycolic acid) nanoparticles and nucleic acid adjuvants in mice | |
CN109701010A (zh) | 疫苗复合佐剂***及其在抗原中的应用 | |
CN101146551A (zh) | 含有磷酸铝和3d-mpl的佐剂组合物 | |
CN103784953A (zh) | 作为疫苗佐剂的水包油型亚微乳及其制备方法 | |
Taleghani et al. | Immunogenicity of HPV and HBV vaccines: adjuvanticity of synthetic analogs of monophosphoryl lipid A combined with aluminum hydroxide | |
CN104043119B (zh) | 一种新型疫苗佐剂及其制备方法 | |
CN118001383A (zh) | Hpv疫苗组合物及其制备方法和应用 | |
US20080019989A1 (en) | Immunity Adjuvant Containing a Complexed Metal Cation and Vaccine Containing Same | |
CN115192703A (zh) | 一种带状疱疹疫苗及其用途 | |
TWI811248B (zh) | 經鼻b型肝炎疫苗組成物及其製造方法 | |
CN113967252A (zh) | 一种禽用免疫增强剂、含有免疫增强剂的疫苗组合物及其应用 | |
CN109876140A (zh) | 一种治疗慢性乙肝的疫苗及其制备方法和应用 | |
CN112545992B (zh) | 一种兽用疫苗纳米乳液及其制备方法 | |
CN105031645B (zh) | 一种人用狂犬病疫苗及其制备方法 | |
CN117582491A (zh) | 流感疫苗组合物及其制备方法和应用 | |
CN117462667A (zh) | 一种复合佐剂及其在疫苗制备中的应用 | |
CN117281899A (zh) | 一种佐剂***及其制备方法和应用 | |
TWI756948B (zh) | 胜肽奈米管之製備方法、用途及其免疫組成物 | |
US20150150967A1 (en) | Composition comprising a colloidal synthetic bioresorbable vector and a viral vector |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination |