CN117752770A - 微藻/bFGF/COF水凝胶微针贴片及其在制备糖尿病创面的治疗体系中的应用 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种微针贴片，通过简单的包封，用聚四氟乙烯膜将微藻同bFGF和COF凝胶隔开，微藻所释放的溶解氧能够透过聚四氟乙烯微孔膜同bFGF和COF凝胶一同通过微针进入创面组织。同时，在贴片上层用透光膜包封，使得微藻能够通过外界的光照进行光合作用。本发明能够提高针对糖尿病复杂的免疫微环境的治疗效果。采用微针给药的方式进行治疗，不仅能够减轻患者的痛苦和副作用，而且能够促进活性药物有效进入伤口组织。同时本发明还具有良好的生物相容性，动物实验表明其具有适用于糖尿病复杂的免疫微环境的创面治疗效果。

Description

微藻/bFGF/COF水凝胶微针贴片及其在制备糖尿病创面的治 疗体系中的应用

技术领域

本发明涉及一种微藻/bFGF/COF水凝胶微针贴片及其在制备糖尿病创面的治疗体系中的应用，通过利用微藻、COF和碱性成纤维细胞生长因子合成的凝胶微针贴片用于治疗糖尿病创面尤其是糖尿病皮肤溃疡，属于医药技术领域。

背景技术

目前，临床上对于糖尿病皮肤溃疡的治疗方法主要包括药物治疗、手术治疗和物理治疗等。然而，这些方法存在疗效不一、副作用大、疗程长等问题，亟待寻求一种更加安全、高效的治疗方法。

针对糖尿病伤口缺血缺氧的情况，现主要方法依赖局部气态氧作为氧源，然而外部气体对组织的渗透有限，难以给伤口输送足够的氧气。与气态氧相比，局部溶解氧可以有效穿透人体皮肤，因此溶解氧供给具有改善伤口局部缺氧环境的潜力。光合作用被认为是自然生态***最重要的生理过程，是生物界氧气生成的基础。藻类作为一种微米级细胞生物，提供了人类80～90％的氧气。与高等植物相比，它们表现出较快的生长速度、易于大规模培养并且有良好的生物相容性等特点，开始在氧气治疗领域崭露头角。糖尿病创面中，高糖状态会阻碍HIF-1α的翻译后羟基化和降解，引起机体血管生成和氧气运输障碍，进一步加重组织和细胞缺氧，导致恶性循环，使得创面迁延不愈。

最近，基于生物材料的免疫调节已经引起了广泛的关注。其中水凝胶和微针(MN)载药被大量学者研究使用。水凝胶由亲水性聚合物链组成并且可以补充伤口中的水分。与其他***相比，水凝胶可与生物活性分子或细胞结合使用，在组织修复和再生方面具有独特的优势。在药物传输方面，医用微针可以无痛穿透皮肤角质层，改善皮肤通透性，从而增强疫苗、小分子药物、蛋白质和DNA等生物分子的经皮给药。与其他经皮给药方法相比，医用微针矩阵具有自我给药、微创性、安全性和易于处理等诸多优点。目前市场上已制备出不同类型的医用微针，如固体MN、涂层MN、可溶性/可降解MN、中空MN和多孔MN等。由于医用微针具有体积小、精确度高、无痛等特点，因此在生物医学测量中具有广泛的应用前景。

但是，糖尿病足的免疫微环境是一个复杂的***，涉及多种免疫细胞和免疫分子之间的相互作用。在DFUs中，过度的炎症反应和异常的免疫微环境是主要的病理特征，而免疫调节功能障碍的伤口愈合受损可能导致慢性伤口的产生。同时高血糖也会导致血管病变，使创面血流量减少，导致缺氧及营养供应不足。因此，目前尚缺乏有效针对糖尿病创面复杂的免疫微环境，消除炎症，促进血管再生的有效方案。

发明内容

本发明针对糖尿病创面免疫微环境的特点，提供了一种特异性的治疗措施，具体的是一种微藻/bFGF/COF水凝胶微针贴片，通过利用微藻、COF和碱性成纤维细胞生长因子合成的凝胶微针贴片用于治疗糖尿病创面尤其是糖尿病皮肤溃疡。更具体的，本发明采用如下技术方案：

其一，本发明提供了一种微藻/bFGF/COF水凝胶，其主要由活性微藻、bFGF、COF复合而成，其中COF与bFGF重量比1-10：1。

其二，本发明还提供了一种微藻/bFGF/COF水凝胶微针贴片，包括空心微针，空心微针的基部连通贴片腔室，贴片腔室内封装有微藻/bFGF/COF水凝胶，贴片腔室的上方设有透光膜。

其三，本发明还提供了另一种微藻/bFGF/COF水凝胶微针贴片，其包括空心微针，空心微针的基部连通贴片腔室，贴片腔室被分割膜分成上下两层，下层腔室内封装有bFGF/COF复合水凝胶，上层腔室内封装有活性微藻且位于上层腔室的上方设有透光膜，所述分割膜为具有微孔的透气膜，所述COF为硼酸酯共价有机框架COF-1，其为常见的共价有机框架，可参考文献方法制备得到，也可以通过简单的方法自制。

对于本发明所述的微藻/bFGF/COF水凝胶微针贴片，其中，优选的，所述分割膜为聚四氟乙烯微孔透气膜。所述聚四氟乙烯微孔透气膜为市售商品，透气膜的微孔通道在膜内结成网状立体结构，具有均匀密集的微孔分布，孔径低至0.1μm，具有防水透气功能；另一方面，微藻的细胞大小为微米级，一般几个微米，如此，透气膜则可以阻隔微藻进入下层腔室，却能够利于气体如溶解氧的透过。该种微针贴片的设计更利于微藻的光合作用而产生更多溶解氧，从而使用效果更佳。

优选的，所述透光膜为透光材料制成，如可以选择透光性能较佳的高分子材料比如聚氨酯(PU)、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、聚苯乙烯(PS)、聚碳酸酯(PC)、聚双烯丙基二甘醇碳酸酯(CR-39)、苯乙烯丙烯腈共聚物(SAN)、聚4-甲基戊烯-1(TPX)和透明聚酰胺等等，以利于活性微藻的光照进行光合作用以产生溶解氧。

优选的，所述bFGF/COF复合水凝胶中，COF与bFGF重量比1-10：1可确保COF与bFGF的有效连接，同时bFGF在凝胶中的浓度为1-20μg/mL为佳5-15μg/mL更佳。

本发明中，所述贴片腔室主要由包封材料围成，包封材料的选择不做特殊要求，以能够方便使用为佳；另外，包封材料也可以直接作为贴片使用，也可以在包封材料外部贴敷或者包裹一层贴片材料，以便于贴附于皮肤创口处。

对于本发明所述的微藻/bFGF/COF水凝胶微针贴片，其中，优选的，所述微藻制成微藻水溶液或者微藻水凝胶。进一步的，所述微藻水溶液是先将微藻培养至稳定浓度(0.08-1.05)×10⁷个细胞/mL，然后离心除上清，再经磷酸盐缓冲液(1×PBS，pH＝7.4)洗涤，然后再分散在PBS中得到微藻浓度(0.08-1.05)×10⁷个细胞/mL的微藻水溶液。进一步的，将微藻溶液与常用的凝胶材料复合可制成微藻水凝胶。

对于本发明所述的微藻/bFGF/COF水凝胶微针贴片，其中，优选的，所述水凝胶包括聚丙烯酸树脂凝胶、透明质酸凝胶、胶原蛋白凝胶中的至少一种，尤其以聚丙烯酸树脂凝胶为佳。发明人研究发现，如果不采用水凝胶，微针中则为水溶液，流动过快，起不到药物缓释作用。

其四，本发明所述的微藻/bFGF/COF水凝胶或者基于该水凝胶的微针贴片可用于糖尿病创面的愈合治疗。所述糖尿病创面包括糖尿病皮肤创面、糖尿病皮肤溃疡、糖尿病足、糖尿病足溃疡等等。

本发明提供了一种简单的微针贴片，通过微针贴片装载微藻、COF和碱性成纤维细胞生长因子后，使其能够有效的贴附在伤口表面，并将有效活性成分递送至创面。设计的微针贴片中含有活微藻，能够在光照条件下通过光合作用持续释放溶解氧以改善组织创面的缺氧状况。另外，bFGF具有良好的促血管生成和增殖的作用，是一种强大的血管生成因子。而COF中的硼酸酯键具有响应并清除活性氧的能力，在慢性创面起到降低炎症反应的作用。bFGF作为一种多肽，其中的氮原子可与COF表面的硼酸酯键形成B-N配位，形成双交联的给药体系。我们通过简单的包封，用聚四氟乙烯膜将微藻凝胶同bFGF和COF凝胶隔开，微藻所释放的溶解氧能够透过聚四氟乙烯微孔膜同bFGF和COF凝胶一同通过微针进入创面组织。同时，在贴片上层用透光膜包封，使得微藻能够通过外界的光照进行光合作用。

本发明中微藻光合作用产生大量的溶解氧，具有调节创面氧合反应、调控血管生成相关生长因子(如HIF-1α)等多种生物功能；COF是一种新型的多孔材料，不但具有高的比表面积和良好的生物相容性，而且其富含大量硼酸酯键，能够响应活性氧及葡萄糖，起到降低创面活性氧的作用。碱性成纤维细胞生长因子是一种能够促进血管和皮肤细胞生长和愈合的生长因子。将三者结合起来，不仅能够充分发挥各自的优势，而且能够提高针对糖尿病复杂的免疫微环境的治疗效果。采用微针给药的方式进行治疗，不仅能够减轻患者的痛苦和副作用，而且能够促进活性药物有效进入伤口组织。采用水凝胶，结合微针给药，可起到药物缓释作用。同时本发明还具有良好的生物相容性，动物实验表明其具有适用于糖尿病复杂的免疫微环境的创面治疗效果。

附图说明

图1为本发明一种微针贴片的结构示意图；图中：1、微针，2、bFGF，3、COF，4、微藻，5、透光膜，6、聚四氟乙烯微孔透气膜。

图2为微藻(2a)和COF(2b)的透射电镜图；图2c为COF化学结构式图；

图3为微藻光合作用供氧(3a)及bFGF药物释放图(3b)；

图4为bMPG/COF凝胶体内和体外生物相容性探究图，体外溶血实验4a、体内皮下注射实验4b、皮肤HE染色4c；

图5为微针贴片中不同材料成分对细胞活性的影响及促细胞增值和分化的能力(CCK-8实验5a、活死细胞染色5b和细胞划痕5c)。图中，每个浓度的四个柱状图从左往右依次指Control(对照组，生理盐水)、MPG(微藻凝胶组)、bFG(碱性成纤维细胞生长因子凝胶组)、bMPG(微藻+碱性成纤维细胞生长因子凝胶组)、COF(COF凝胶组)、bMPG/COF(微藻+碱性成纤维细胞生长因子组+COF凝胶组)；细胞实验中使用的细胞为脐静脉内皮细胞(HUVEC)。

图6为微针贴片中不同材料成分对糖尿病小鼠皮肤伤口治疗状况(伤口愈合过程图6a、HE染色6b、Masson染色6c)。

图7为为微针贴片中不同材料成分对糖尿病小鼠皮肤特征性伤口治疗效果评价(血管再生及降低活性氧的作用)。

具体实施方式

下述实施例是对于本发明内容的进一步说明以作为对本发明技术内容的阐释，但本发明的实质内容并不仅限于下述实施例所述，本领域的普通技术人员可以且应当知晓任何基于本发明实质精神的简单变化或替换均应属于本发明所要求的保护范围。

仪器和试剂:

JPBJ-608型便携式溶解氧测定仪购自上海雷兹互感器有限公司，透射电子显微镜(TEM)和SAED图像在Talos L120C G2电子显微镜(Thermo Fisher,America)上以120kV的加速电压获得。在LSM-800(Zeiss Inc.,Germany)显微镜上记录激光扫描共聚焦图像。使用FluoroMax-4荧光分光光度计(HORIBA Scientific，Japan)记录荧光光谱，激发和发射狭缝宽度为5nm。使用倒置荧光显微镜(Axio Observer 3，Zeiss，Germany)对细胞实验结果进行拍摄。微藻购自中国科学院淡水藻种库，4-苯甲二硼酸、1、3、5-三甲基苯、1、4-二恶烷和聚丙烯酸树脂(卡波姆940)购自上海麦克林生化科技股份有限公司，重组人bFGF(100μg)、牛血清白蛋白(BSA)、链脲佐菌素(STZ)和三乙醇胺购自上海阿拉丁试剂有限公司。

本发明的微针贴片所涉及的结构如图1所示，其制备方法大体如下：

1)利用购买的空心微针、透光膜和聚四氟乙烯微孔透气膜(ePTFE)制作微藻贴片；

2)将bFGF溶液和COF按照一定比例混合，冷冻干燥后得到产物；

3)将上述产物与水凝胶基质混合，制成bFGF/COF凝胶；

4)将培养后的微藻溶液置于贴片上层，bFGF/COF凝胶置于贴片下层制成我们所需要的微针贴片；

5)将装有微藻-COF-碱性成纤维细胞生长因子凝胶的微针贴片刺入糖尿病皮肤溃疡处，使凝胶在溃疡处释放，从而达到治疗糖尿病皮肤溃疡的目的。

实施例1

相关材料及贴片的制备如下：

COF-1的制备：向耐热玻璃管中,加入1,4-苯甲二硼酸(BDBA)(25mg,0.15mmol,Aldrich)和1mL体积比为1:1的1、3、5-三甲基苯(0.5mL):二氧六环(0.5ml)。在77K(液氮浴)温度下将玻璃管骤冻,内部抽真空并用火焰密封玻璃管。密封状态下将反应混合物在120℃温度下加热72小时后，在管子底部产生白色固体，将白色固体过滤分离，用丙酮清洗(30mL)洗涤3次，真空干燥24小时得到最终产物。

将微藻用BG11培养基培养于光照培养箱(GZLC-P160A)至稳定浓度(1×10⁷个细胞/mL)。将稳定浓度(1×10⁷个细胞/mL)的微藻溶液通过以6000rpm离心5分钟，除去上清液，然后将沉淀物用磷酸盐缓冲盐水(1×PBS，pH＝7.4)洗涤，然后再分散在PBS中形成微藻溶液。

将1g聚丙烯酸树脂均匀分散至60mL纯水中，充分搅拌后并放置过夜。随后在溶液中缓慢滴入三乙醇胺溶液，并同时进行搅拌，直至形成均匀的凝胶。在形成凝胶过程中加入bFGF，使其在凝胶中的浓度为10μg/mL，按照COF与bFGF重量比1：1再将COF-1加入凝胶中得到贴片下层混合物。

将购买的微针与硅胶软垫相连，用透光膜作为贴片顶层，用聚四氟乙烯微孔膜将贴片内部分隔为上下两层，在上层中加入微藻溶液，下层(与微针相连)中加入bFGF和COF凝胶，封装之后即为我们设计的微针贴片。

实施例2

凝胶材料相关表征实验：

1)电镜表征：

取样，分别用纯水稀释至25％浓度，滴加4-5μL样品溶液到lacey-carbonsubstrate(Cu mesh)TEM grids中，待样本干燥后，在透射电镜(Thermoscientific TalosL120C G2，USA)下观察样本并拍摄电镜图片。如图2所示，分别为微藻凝胶和COF-1的结构。在透射电镜下，微藻具有明显的细胞壁结构，证明了其在凝胶中结构完好，维持了生物活性。同时，COF为直径5nm的球形结构，其化学结构式中含有大量硼酸脂键。

2)氧释放及bFGF释放测定：

为测定微藻的光响应产氧效果，将培养后的微藻凝胶稀释液加入到青霉素瓶中，并在1500LUX光照度下照射培养1.5h，然后在黑暗条件下培养1.5h，共4个循环，在不同时间点使用氧电极(JPBJ-608,Ritz，China)测量溶液中的含氧量。结果如图3所示，与电镜结果相符，微藻溶液在光照下能够产生溶解氧。

使用BCA蛋白质定量试剂盒(碧云天)评估总蛋白(bFGF)的释放行为。根据BCA说明书，将1mLbMPG/COF与1mLPBS充分混合，取适当体积的待测样品加入到微孔板中，放置4小时后，在562nm处测定吸光度。根据牛血清白蛋白(BSA)标准溶液制定标准曲线，得到标准回归方程，通过该方程和bFGF的吸光度计算bFGF的量。结果如图3所示，测定2h内凝胶中碱性成纤维细胞生长因子的释放量为8.12μg/ml。表明凝胶中碱性成纤维细胞生长因子保持多肽结构并具有生物活性，能够在凝胶中缓慢释放。

实施例3

凝胶生物安全性探究：

1)体外溶血试验：

在PBS(pH＝7.4)中制备不同浓度(25、50、250、500μg mL-1)的COF-1和COF-1凝胶。采集BALB/c小鼠眼球全血，于含柠檬酸钠抗凝管中。以3000rad离心15分钟后取下层血细胞20μL，分别与下列溶液混合：1mL去离子水(DW)、1mLPBS、50μlMPG+1mLPBS、50μLbFG+1mLPBS、50μLCOF(含凝胶)+1mLPBS、50μLbMPG/COF+1mlPBS。在37℃孵育4小时，3000rpm离心15分钟。将100μL的上溶液转移到96孔板上，使用多功能酶标仪测定样品在542nm处的吸光度值。溶血率＝(OD(样品组)-OD(PBS组))/(OD(纯水组)-OD(PBS组))×100％。结果如图4a所示，bMPG/COF凝胶及参与其合成的材料的溶血率与对照组(PBS)相差很小，溶血率均在1％以下，几乎无溶血现象。

2)体内注射实验：

将100μLbMPG/COF凝胶植入健康balb/c小鼠皮下，以研究bMPG/COF凝胶在体内的降解行为，如图4b。在6、12、24h剥离凝胶用于拍照和称重。将凝胶部位周围的皮肤固定在4％***溶液中，用于进一步的H&E切片分析，4b右图。结果表明，在时间的推移下凝胶持续降解，凝胶能够在体内持续被吸收，在24小时后降至20％左右。同时，如图4c，皮肤HE染色结果显示在不同时间点，皮肤均无明显损伤。

实施例4

体外细胞验证实验：

1.bMPG/COF凝胶的细胞相容性通过CCK-8试剂盒来评估。

用DMEM培养基浸提bMPG/COF凝胶，得到浓度bMPG/COF凝胶的为400μL/mL的浸提液，用空白DMEM培养基系列稀释，得到200μL/mL、100μL/mL、50μL/mL、25μL/mL、12.5μL/mL的浸提液。将HUVEC细胞接种于96孔板中，用不同浓度的提取物干预并在光照下培养，根据CCK-8试剂盒检测细胞活力，如图5a。实验结果显示：与对照组相比(100％，)HUVEC的细胞活力均大于100％，证实bMPG/COF凝胶不会影响HUVEC的增值，而是能够促进他们的生长。

2活死细胞染色：

将HUVEC接种于24孔板中，用含有上述各种制剂(浓度为100μL/mL)的新鲜培养基替换培养基并在光照下培养。在预定时间点(12、24和36小时)，用PBS洗涤细胞，并根据制造商的方案用活/死细胞染色试剂盒处理，并在倒置显微镜(Axio Observer 3，Zeiss，Germany)拍摄图片。

3.细胞划痕实验：

将HUVEC接种于含完全培养基的6孔板中，并在37℃下孵育，直至达到90％汇合。用200μL移液器吸头刮擦每个孔，并用PBS洗涤以除去漂浮细胞。用水凝胶浸提液替换原始培养基并在光照下培养。于不同时间点(0、12和24h)在光学显微镜下观察细胞迀移，并测量划痕愈合的长度。如图5b所示活死细胞染色及图5c细胞划痕实验都显示了bMPG/COF凝胶优异的促细胞增值和迁移效果。

实施例5

体内动物实验：

用高脂高糖饲料喂养Balb/C雄性小鼠，维持在无特定病原体的环境中。将STZ(100mg/kg)混合于柠檬酸钠缓冲液中给药(腹膜内注射)，连续两天。在正常条件下在首次注射STZ2周后血糖水平≥16.7mM的小鼠被认为是造模成功的糖尿病。在造模成功后的糖尿病小鼠背部利用组织活检器和剪刀制作直径为5mm的皮肤全层伤口模型。

为了评估各组凝胶对于创面修复的效果，我们将40μl生理盐水、MPG、bFG、bMPG、COF、bMPG/COF凝胶分别运用于对应组的小鼠伤口表面，每3天更换一次凝胶敷料，并拍照记录伤口面积。在第6和12天取材，以进一步进行组织表征。通过ImageJ软件测量剩余伤口面积，并通过以下等式计算伤口闭合。

伤口闭合率(％)＝(A0-At)/A0×100，其中A0为第0天创面面积，At为不同时间点的伤口面积。手术后6天和12天，处死小鼠，收集伤口部位的组织并用4％多聚甲醛固定用于组织学分析，进行苏木精和伊红(H&E)染色、Masson三色染色。伤口的照片结果如图6a所示，在第6天、第9天和第12天，bMPG/COF组的伤口愈合率显著高于对照组。图6b，H&E染色结果显示，bMPG/COF在第12天实现了基本完全的再上皮化，并且产生了稳定的皮肤结构(皮脂腺和毛囊)，皮肤附件再生明显多于其他三组(箭头所示)，表示皮肤功能恢复，而对照组则表现为延迟生长。)。图6c，Masson染色显示，在第12天，bMPG/COF、bMPG、bFG、MPG四组水凝胶敷料均加速了慢性伤口愈合期间的胶原沉积，其中bMPG/COF组的胶原沉积最显著。

实施例6

凝胶作用效能探究(供氧、血管生成、降低活性氧)：

针对凝胶的微藻供氧、bFGF促进血管生成、COF-1降低ROS特点，我们分别对其进行HIF-1α免疫组化、CD31免疫荧光染色、ROS染色分析。结果分别如图7a、7b、7c所示，7d、7e分别对应于7b、7c的定量关系，*表示具有显著性差异。在伤口修复的第12天，添加了微藻的实验组中的HIF-1α明显降低，表明凝胶释放的氧气调节了HIF-1α的活性，在损伤修复的后期下降。在第六天，bMPG/COF组中新血管形成标志物CD 31的表达高于对照组，证明凝胶材料在创面修复前期能够促进血管再生，而在第12天，bMPG/COF组中新血管形成标志物CD 31的表达低于对照组，但形成的管腔结构较大，这是因为在重塑阶段，血管会逐渐成熟，形成功能完整的成熟血管结构，而一些未成熟的血管则会消失。这表明血管修复趋于成熟。而对照组的组织再生在第12天仍不完全，仍处于增殖阶段，需要大量的血管来维持足够的氧气和营养供应。同样的，在第6天，各组的ROS水平明显低于对照组，对于COF组，则是硼酸酯键的作用，对于微藻和bFGF组则是促进血管及组织生成进一步促进ROS降低的结果。总之，我们实验证实了凝胶的微藻供氧、bFGF促进血管生成、COF降低ROS的效果。

本发明的微藻/bFGF/COF水凝胶微针贴片通过微藻产氧向组织输送天然、高度可靠的溶解氧将会是改善糖尿病伤口缺血缺氧的潜在方法。碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)是一种强有力的促血管生成因子，其不仅能促进血管内皮细胞的增殖、移行、分化和存活，也可以改善糖尿病皮肤中晚期糖基化终产物的积累对皮肤微血管内皮细胞(HDMEC)的增殖和血管生成的抑制作用，进而在促进组织特别是糖尿病创面修复方面起着关键作用。硼酸酯共价有机框架(COF)是一种包含大量硼酸酯键的经典有机纳米聚合材料，近些年来因其独特的生物特性而被逐渐扩宽应用范围。硼酸酯键是一种由二醇和硼酸基团反应形成的动态共价键，而基于硼酸酯键的水凝胶不仅可实现药物的葡萄糖响应释放，也可以清除糖尿病伤口处过量的过氧化氢(H₂O₂)等氧自由基，改善炎性细胞浸润，促进糖尿病伤口愈合。

应当说明的是，本发明的上述所述之技术内容仅为使本领域技术人员能够获知本发明技术实质而进行的解释与阐明，故所述之技术内容并非用以限制本发明的实质保护范围。本发明的实质保护范围应以权利要求书所述之为准。本领域技术人员应当知晓，凡基于本发明的实质精神所作出的任何修改、等同替换和改进等，均应在本发明的实质保护范围之内。

Claims (10)

1.一种微藻/bFGF/COF水凝胶，主要由活性微藻、bFGF、COF复合而成，其中COF与bFGF重量比1-10：1。

2.一种微藻/bFGF/COF水凝胶微针贴片，包括空心微针，空心微针的基部连通贴片腔室，贴片腔室内封装有微藻/bFGF/COF水凝胶，贴片腔室的上方设有透光膜。

3.一种微藻/bFGF/COF水凝胶微针贴片，包括空心微针，空心微针的基部连通贴片腔室，贴片腔室被分割膜分成上下两层，下层腔室内封装有bFGF/COF复合水凝胶，上层腔室内封装有活性微藻且位于上层腔室的上方设有透光膜，所述分割膜为具有微孔的透气膜，所述COF为硼酸酯共价有机框架。

4.如权利要求3所述的微针贴片，其特征在于，所述分割膜为聚四氟乙烯微孔透气膜。

5.如权利要求2或3所述的微针贴片，其特征在于，所述透光膜为透光材料制成。

6.如权利要求3所述的微针贴片，其特征在于，所述bFGF/COF复合水凝胶中，COF与bFGF重量比1-10：1。

7.如权利要求3所述的微针贴片，其特征在于，所述微藻制成微藻水溶液或者微藻水凝胶。

8.如权利要求3所述的微针贴片，其特征在于，所述微藻水溶液是先将微藻培养至稳定浓度(0.08-1.05)×10⁷个细胞/mL，然后离心除上清，再经PBS缓冲液洗涤，然后再分散在PBS中得到。

9.权利要求1所述的微藻/bFGF/COF水凝胶或者权利要求2-8任一项所述微针贴片在制备用于糖尿病创面的治疗体系中的应用。

10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，所述糖尿病创面包括糖尿病皮肤溃疡、糖尿病足、糖尿病足溃疡中的至少一种。