CN117551589A - 长双歧杆菌婴儿亚种的溶胞产物的应用 - Google Patents
长双歧杆菌婴儿亚种的溶胞产物的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN117551589A CN117551589A CN202410036411.XA CN202410036411A CN117551589A CN 117551589 A CN117551589 A CN 117551589A CN 202410036411 A CN202410036411 A CN 202410036411A CN 117551589 A CN117551589 A CN 117551589A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- lysate
- bifidobacterium longum
- strain
- infantis
- personal care
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 239000006166 lysate Substances 0.000 title claims abstract description 50
- 241001608472 Bifidobacterium longum Species 0.000 title claims abstract description 21
- 229940009291 bifidobacterium longum Drugs 0.000 title claims abstract description 21
- 241000186015 Bifidobacterium longum subsp. infantis Species 0.000 claims abstract description 8
- 230000008439 repair process Effects 0.000 claims abstract description 7
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 claims abstract description 5
- 238000004321 preservation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 15
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 12
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 claims description 7
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 6
- 241001052560 Thallis Species 0.000 claims description 3
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims description 3
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 3
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 3
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 claims description 2
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 claims description 2
- 239000000686 essence Substances 0.000 claims description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 claims description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 claims 1
- 230000002087 whitening effect Effects 0.000 abstract description 11
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 abstract description 5
- 230000003796 beauty Effects 0.000 abstract 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 25
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 21
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 19
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 19
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 15
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 14
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 13
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 12
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N Melanin Chemical compound O=C1C(=O)C(C2=CNC3=C(C(C(=O)C4=C32)=O)C)=C2C4=CNC2=C1C XUMBMVFBXHLACL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 8
- 230000003828 downregulation Effects 0.000 description 8
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 8
- 102100026608 Aldehyde dehydrogenase family 3 member A2 Human genes 0.000 description 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 7
- 210000002780 melanosome Anatomy 0.000 description 7
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 6
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 6
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 6
- 230000008099 melanin synthesis Effects 0.000 description 6
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 6
- 239000012224 working solution Substances 0.000 description 6
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 5
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 5
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 5
- 238000012795 verification Methods 0.000 description 5
- LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 3-Amino-1-methyl-5H-pyrido[4,3-b]indole Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C=C(N)N=C2C LKKMLIBUAXYLOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101710163881 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid oxidase Proteins 0.000 description 4
- 102100031413 L-dopachrome tautomerase Human genes 0.000 description 4
- 101710093778 L-dopachrome tautomerase Proteins 0.000 description 4
- 108010050345 Microphthalmia-Associated Transcription Factor Proteins 0.000 description 4
- 101710173693 Short transient receptor potential channel 1 Proteins 0.000 description 4
- 101710173694 Short transient receptor potential channel 2 Proteins 0.000 description 4
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 4
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 4
- 238000012353 t test Methods 0.000 description 4
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108020004465 16S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 3
- 102100030310 5,6-dihydroxyindole-2-carboxylic acid oxidase Human genes 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- 102100031784 Loricrin Human genes 0.000 description 3
- 102000013760 Microphthalmia-Associated Transcription Factor Human genes 0.000 description 3
- LVTKHGUGBGNBPL-UHFFFAOYSA-N Trp-P-1 Chemical compound N1C2=CC=CC=C2C2=C1C(C)=C(N)N=C2C LVTKHGUGBGNBPL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 3
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 3
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 3
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 108700026241 pX Genes Proteins 0.000 description 3
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 3
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 3
- 102100039164 Acetyl-CoA carboxylase 1 Human genes 0.000 description 2
- 102000004161 Claudin-4 Human genes 0.000 description 2
- 108090000601 Claudin-4 Proteins 0.000 description 2
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 2
- 238000007400 DNA extraction Methods 0.000 description 2
- AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N Glycolic acid Chemical compound OCC(O)=O AEMRFAOFKBGASW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000963424 Homo sapiens Acetyl-CoA carboxylase 1 Proteins 0.000 description 2
- 101000620359 Homo sapiens Melanocyte protein PMEL Proteins 0.000 description 2
- 101001055386 Homo sapiens Melanophilin Proteins 0.000 description 2
- 102000010638 Kinesin Human genes 0.000 description 2
- 108010063296 Kinesin Proteins 0.000 description 2
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N Nicotinamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002123 RNA extraction Methods 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 2
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000007664 blowing Methods 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 230000012292 cell migration Effects 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 2
- 230000002550 fecal effect Effects 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108010033990 rab27 GTP-Binding Proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 description 2
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003827 upregulation Effects 0.000 description 2
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 5-oxo-L-proline Chemical compound OC(=O)[C@@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 1
- 102100036621 Glucosylceramide transporter ABCA12 Human genes 0.000 description 1
- 206010018910 Haemolysis Diseases 0.000 description 1
- 101000825204 Homo sapiens A-kinase anchor protein SPHKAP Proteins 0.000 description 1
- 101000929652 Homo sapiens Glucosylceramide transporter ABCA12 Proteins 0.000 description 1
- 101001053320 Homo sapiens Inositol polyphosphate 5-phosphatase K Proteins 0.000 description 1
- 101000836279 Homo sapiens SNW domain-containing protein 1 Proteins 0.000 description 1
- AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine Chemical compound ON AVXURJPOCDRRFD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100022430 Melanocyte protein PMEL Human genes 0.000 description 1
- 102100026158 Melanophilin Human genes 0.000 description 1
- 102000029749 Microtubule Human genes 0.000 description 1
- 108091022875 Microtubule Proteins 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N Pyroglutamic acid Natural products OC(=O)[C@H]1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-GSVOUGTGSA-N 0.000 description 1
- 238000011529 RT qPCR Methods 0.000 description 1
- 108091006192 SLC45 Proteins 0.000 description 1
- 108091007563 SLC45A2 Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 1
- 108091023040 Transcription factor Proteins 0.000 description 1
- 102000040945 Transcription factor Human genes 0.000 description 1
- 235000005811 Viola adunca Nutrition 0.000 description 1
- 240000009038 Viola odorata Species 0.000 description 1
- 235000013487 Viola odorata Nutrition 0.000 description 1
- 235000002254 Viola papilionacea Nutrition 0.000 description 1
- 244000172533 Viola sororia Species 0.000 description 1
- 238000002479 acid--base titration Methods 0.000 description 1
- ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N acide pyroglutamique Natural products OC(=O)C1CCC(=O)N1 ODHCTXKNWHHXJC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- GZCGUPFRVQAUEE-KAZBKCHUSA-N aldehydo-D-talose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O GZCGUPFRVQAUEE-KAZBKCHUSA-N 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 230000005779 cell damage Effects 0.000 description 1
- 208000037887 cell injury Diseases 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 230000019522 cellular metabolic process Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000002247 constant time method Methods 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 1
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 238000001647 drug administration Methods 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 230000001804 emulsifying effect Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 230000008588 hemolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002949 hemolytic effect Effects 0.000 description 1
- 235000020256 human milk Nutrition 0.000 description 1
- 210000004251 human milk Anatomy 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- BEJNERDRQOWKJM-UHFFFAOYSA-N kojic acid Chemical compound OCC1=CC(=O)C(O)=CO1 BEJNERDRQOWKJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004705 kojic acid Drugs 0.000 description 1
- WZNJWVWKTVETCG-UHFFFAOYSA-N kojic acid Natural products OC(=O)C(N)CN1C=CC(=O)C(O)=C1 WZNJWVWKTVETCG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 210000004688 microtubule Anatomy 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 239000012452 mother liquor Substances 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 229960003966 nicotinamide Drugs 0.000 description 1
- 235000005152 nicotinamide Nutrition 0.000 description 1
- 239000011570 nicotinamide Substances 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 239000003761 preservation solution Substances 0.000 description 1
- 238000002731 protein assay Methods 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000012797 qualification Methods 0.000 description 1
- 101150024395 rab1A gene Proteins 0.000 description 1
- 102000006581 rab27 GTP-Binding Proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000013215 result calculation Methods 0.000 description 1
- OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N safranin Chemical compound [Cl-].C=12C=C(N)C(C)=CC2=NC2=CC(C)=C(N)C=C2[N+]=1C1=CC=CC=C1 OARRHUQTFTUEOS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000007790 scraping Methods 0.000 description 1
- 230000005808 skin problem Effects 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 210000000434 stratum corneum Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 101150022728 tyr gene Proteins 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/99—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from microorganisms other than algae or fungi, e.g. protozoa or bacteria
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/02—Preparations for care of the skin for chemically bleaching or whitening the skin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
- A61Q19/08—Anti-ageing preparations
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/001—Amines; Imines
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/02—Monosaccharides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
- C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
- C12P7/18—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic polyhydric
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
- C12P7/42—Hydroxy-carboxylic acids
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
- C12P7/44—Polycarboxylic acids
- C12P7/48—Tricarboxylic acids, e.g. citric acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/40—Chemical, physico-chemical or functional or structural properties of particular ingredients
- A61K2800/52—Stabilizers
- A61K2800/522—Antioxidants; Radical scavengers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/74—Biological properties of particular ingredients
- A61K2800/78—Enzyme modulators, e.g. Enzyme agonists
- A61K2800/782—Enzyme inhibitors; Enzyme antagonists
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2800/00—Properties of cosmetic compositions or active ingredients thereof or formulation aids used therein and process related aspects
- A61K2800/80—Process related aspects concerning the preparation of the cosmetic composition or the storage or application thereof
- A61K2800/85—Products or compounds obtained by fermentation, e.g. yoghurt, beer, wine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/01—Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
- Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
- Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Birds (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Gerontology & Geriatric Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
本发明涉及化妆品领域,尤其涉及长双歧杆菌婴儿亚种的溶胞产物的应用。本发明提供了菌株的溶胞产物,所述菌株为长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp.infantis),其保藏编号为:CGMCC NO.27851。本发明涉及的菌种的溶胞产物可在食品及美妆领域达到屏障修护和美白等功效,能在美容护肤领域有更好的发挥。
Description
技术领域
本发明涉及化妆品领域,尤其涉及长双歧杆菌婴儿亚种的溶胞产物的应用。
背景技术
黑色素是存在于每个人皮肤基底层的一种蛋白质。紫外线的照射会令黑色素产生变化,生成一种保护皮肤的物质,然后黑色素又经由细胞代谢的层层移动,到了肌肤表皮层,形成了我们所看到的色斑和肤色不匀等皮肤问题。
所以,美白也是一个由内而外的护理工程。首先要选择一套适合自己的美白产品,因为美白成分各不相同,所以理论上最好是使用同一品牌同一系列的产品,这样可以防止不同美白成分互相冲突产生的不良反应。市面上比较多的美白产品都是以烟酰胺为主要成分,能够帮助肌肤抑制和调节黑色素的转移,并减淡已形成的色斑。
发明内容
有鉴于此,本发明提供了长双歧杆菌婴儿亚种的溶胞产物的应用。本发明提供的菌种的溶胞产物可在美妆领域达屏障修护和美白的功效,且效果更显著。
本发明提供了菌株的溶胞产物,所述菌株为长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp. infantis),其保藏编号为:CGMCC NO.27851。
在本发明的一些实施方案中,所述溶胞产物包括:有机酸10~20%、氨基酸1~10%、无机盐0.5~5%、糖醇1~5%和单糖0.1~3%。
在本发明的一些实施方案中,所述溶胞产物包括:有机酸17%、氨基酸4%、无机盐2%、糖醇2%和单糖1%。
在本发明的一些实施方案中,所述溶胞产物包括:乙醇酸17%、焦谷氨酸4%、羟胺2%、脱氧赤藓糖醇2%和D-塔罗糖1%。
本发明还提供了上述溶胞产物的制备方法,包括如下步骤:
S1:取所述长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp. infantis)接种培养后,获得种子液;
S2:取所述种子液发酵培养后,破碎菌体,离心,收集沉淀后,获得所述溶胞产物。
在本发明的一些实施方案中,上述制备方法S1中所述接种的接种量为5%。
在本发明的一些实施方案中,上述制备方法S2中所述离心的转速为3000 rpm,时间为30 min。
本发明还提供了上述溶胞产物和/或上述制备方法获得的溶胞产物在制备屏障修护的个护产品中的应用。
本发明还提供了上述溶胞产物和/或上述制备方法获得的溶胞产物在制备美白的个护产品中的应用。
在本发明的一些实施方案中,上述个护产品包括:化妆品。
在本发明的一些实施方案中,上述个护产品的剂型包括:膏霜型、乳液型、粉剂和精华型中的一种或多种。
在本发明的一些实施方案中,上述个护产品包括:基础护理产品和/或彩妆产品。
本发明提供了菌株的溶胞产物,所述菌株为长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp. infantis),其保藏编号为:CGMCC NO.27851。
本发明提供的菌种分离自母乳喂养的健康婴儿,试验结果表明,本发明提供的菌种的溶胞产物具有屏障修护和美白的功效,且效果更显著。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案,下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1示菌株形态图;
图2示菌株进化树;
图3示革兰氏染色图;
图4示无溶血环;
图5示菌株溶胞产物制备工艺;
图6示菌株溶胞产物在细胞划痕实验中促进细胞迁移的实物照片;
图7示菌株溶胞产物对SLS刺激损伤3D表皮皮肤模型组织形态的改善结果。
生物保藏说明
生物材料:YSGBifido001;分类命名:长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacteriumlongum subsp. infantis);于2023年07月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心;地址:北京市朝阳区北辰西路1号院3号 中国科学院微生物研究所;保藏编号:CGMCC No.27851。
具体实施方式
本发明公开了长双歧杆菌婴儿亚种的溶胞产物的应用。
应该理解,表述“……中的一种或多种”单独地包括每个在所述表述后叙述的物体以及所述叙述的物体中的两者或更多者的各种不同组合,除非从上下文和用法中另有理解。与三个或更多个叙述的物体相结合的表述“和/或”应该被理解为具有相同的含义,除非从上下文另有理解。
术语“包括”、“具有”或“含有”,包括其语法同义语的使用,通常应该被理解为开放性和非限制性的,例如不排除其他未叙述的要素或步骤,除非另有具体陈述或从上下文另有理解。
应该理解,只要本发明仍可操作,步骤的顺序或执行某些行动的顺序并不重要。此外,两个或更多个步骤或行动可以同时进行。
本文中的任何和所有实例或示例性语言如“例如”或“包括”的使用,仅仅打算更好地说明本发明,并且除非提出权利要求,否则不对本发明的范围构成限制。本说明书中的任何语言都不应解释为指示任何未要求保护的要素对于本发明的实践是必不可少的。
此外,用以界定本发明的数值范围与参数皆是约略的数值,此处已尽可能精确地呈现具体实施例中的相关数值。然而,任何数值本质上不可避免地含有因个别测试方法所致的标准偏差。因此,除非另有明确的说明,应当理解本公开所用的所有范围、数量、数值与百分比均经过“约”的修饰。在此处,“约”通常是指实际数值在一特定数值或范围的正负10%、5%、1%或0.5%之内。
本发明的菌种来源:
微生物来源(细菌来源),DNA序列验证为独家菌种,CGMCC NO.27851。
本发明的菌种类别:
长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp. infantis),细菌。
本发明的菌种介绍:
YSGBifido001分离自4月龄广州母乳喂养的健康婴儿,经16S rDNA序列比对鉴定为长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp. infantis)。其在MRS培养基(固体/液体)中生长情况良好,厌氧条件下培养1天即能达到对数生长期。在MRS固体培养基上生长的菌株菌落形态为乳白色圆形,边缘整齐。菌株在血平板上生长无明显溶血环。革兰染色后在显微镜下菌体呈蓝紫色,杆状,中间细两端膨大,似“杠铃”。
下面结合实施例,进一步阐述本发明。
本发明实施例1~实施例2和验证例1~验证例4中,所用原料及试剂均可由市场购得。
实施例1 长双歧婴儿亚种菌株的分离纯化
(1)、实验方法
1)粪便收集:细胞培养瓶中加入细菌冻存液(20 mL),使用灭菌棉签收集本地母乳喂养婴儿的粪便样本于细胞培养瓶中,将培养瓶封入厌氧袋里,置于冰盒中保存和运输。
2)稀释涂布:震荡后,以1:9的比例混合粪便悬液和PBS缓冲液,使用移液枪吹打混匀后再吸取100 μL上述悬液至900 μL PBS缓冲液中,依次梯度稀释10次。各取20 μL每个梯度的稀释液,分别涂布于CBA、MRS、BHI平板上,37℃有氧或厌氧条件下培养48~72 h。
3)单菌落增菌培养:选择菌落数量在5~100个的平板,使用一次性接种环随机挑选单菌落于20 μL PBS缓冲液中,吹打混匀后取15 μL的菌液涂布于步骤2)的同种平板上,37℃有氧或厌氧条件下培养48~72 h,另取5 μL菌液留待革兰氏染色鉴定。
4)细菌传代:使用一次性接种环尽可能得刮取平板上生长的细菌,重悬于200 μL的PBS中,接着将200 μL菌液再涂布到同种平板上,37℃有氧或厌氧条件下培养48~72 h。
5)细菌冻存:细菌增菌在平板上培养到足量后,将细菌用接种环收集于由胎BHI、牛血清培养基、甘油混合而成的无菌冻存液中,吹打混匀,-80℃保存。同时留取部分细菌待提取细菌基因组DNA。
6)革兰氏染色鉴定:在载玻片中央滴加挑选单菌落时制备的5 μL菌液,使用酒精灯间隔烘烤固定,滴加结晶紫染液覆盖1 min,流水洗净,然后滴加卢戈碘液染液1 min覆盖,流水洗涤,再用脱色酒精覆盖载玻片表面20-30 s,轻轻摇晃载玻片,流水洗净酒精后使用番红染液复染1 min覆盖,流水洗涤,待载玻片干燥后使用光学显微镜观察细菌形态。若发现菌落不纯,存在两种或以上的细菌形态,则重新对样本进行平板划线接种,培养后重新挑取单菌落。
7)细菌基因组DNA提取:使用细菌基因组DNA提取试剂盒(天根生化科技公司),按照说明书细菌基因组DNA提取,并用NanoDrop2000测定DNA浓度。
8)16S片段扩增:
<1>采用27F/1492R引物对,27F序列:3’-AGAGTTTGATCMTGGCTCAG-5’(如SEQ IDNO:1所示)
1492R序列:3’-GGTTACCTTGTTACGACTT-5’(如SEQ ID NO:2所示)。
反应体系如下所示:
表1
<2>PCR扩增程序如下:
表2
循环数为31;结束温度设为4℃。
9)琼脂糖凝胶电泳:配置25 mL含有1%(w/v)琼脂糖的1×TAE缓冲液,加热融化,加入2.5 μLGoldView,混匀后倒入制胶槽,***梳子,冷却。待冷却后拔掉梳子,放入水平电泳槽中,每孔加入5 μL扩增后的DNA样本及3 μL DL2000 DNA marker,10 V恒压电泳20 min,紫外灯下观察扩增条带是否单一,大小是否在1500 bp左右。
10)16S rRNA测序与结果比对:将扩增后并经琼脂糖凝胶电泳确认无误的DNA 16S片段样本测序(上海生工公司),得到测序结果后,使用ChromasPro软件对序列拼接,并在NCBI网站上blast,初步鉴定细菌的类型。
(2)、实验结果
将分离鉴定的菌株命名为长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longumsubsp. Infantis) YSGBifido001。YSGBifido001的16S rDNA的核苷酸序列如SEQ ID NO:3所示。其16S rDNA与已知长双歧杆菌菌株对比(National Center for Biotechnology数据库)至少存在两个碱基突变位点,其亲缘关系最近的菌株为B. longum subsp. infantisstrain ATCC 15697。
序列:3’-TGCAAGTCGAACGGGATCCATCAGGCTTTGCTTGGTGGTGAGAGTGGCGAACGGGTGAGTAATGCGTGACCGACCTGCCCCATACACCGGAATAGCTCCTGGAAACGGGTGGTAATGCCGGATGTTCCAGTTGATCGCATGGTCTTCTGGGAAAGCTTTCGCGGTATGGGATGGGGTCGCGTCCTATCAGCTTGACGGCGGGGTAACGGCCCACCGTGGCTTCGACGGGTAGCCGGCCTGAGAGGGCGACCGGCCACATTGGGACTGAGATACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGCAGCAGTGGGGAATATTGCACAATGGGCGCAAGCCTGATGCAGCGACGCCGCGTGAGGGATGGAGGCCTTCGGGTTGTAAACCTCTTTTATCGGGGAGCAAGCGTGAGTGAGTTTACCCGTTGAATAAGCACCGGCTAACTACGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACGTAGGGTGCAAGCGTTATCCGGAATTATTGGGCGTAAAGGGCTCGTAGGCGGTTCGTCGCGTCCGGTGTGAAAGTCCATCGCTTAACGGTGGATCCGCGCCGGGTACGGGCGGGCTTGAGTGCGGTAGGGGAGACTGGAATTCCCGGTGTAACGGTGGAATGTGTAGATATCGGGAAGAACACCAATGGCGAAGGCAGGTCTCTGGGCCGTTACTGACGCTGAGGAGCGAAAGCGTGGGGAGCGAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCACGCCGTAAACGGTGGATGCTGGATGTGGGGCCCGTTCCACGGGTTCCGTGTCGGAGCTAACGCGTTAAGCATCCCGCCTGGGGAGTACGGCCGCAAGGCTAAAACTCAAAGAAATTGACGGGGGTCCGCACAAGCGGCGGAGCATGCGGATTAATTCGATGCAACGCGAAGAACCTTACCTGGGCTTGACATGTTCCCGACGATCCCAGAGATGGGGTTTCCCTTCGGGGCGGGTTCACAGGTGGTGCATGGTCGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTCGCCCCGTGTTGCCAGCGGATTGTGCCGGGAACTCACGGGGGACCGCCGGGGTTAACTCGGAGGAAGGTGGGGATGACGTCAGATCATCATGCCCCTTACGTCCAGGGCTTCACGCATGCTACAATGGCCGGTACAACGGGATGCGACGCGGCGACGCGGAGCGGATCCCTGAAAACCGGTCTCAGTTCGGATCGCAGTCTGCAACTCGACTGCGTGAAGGCGGAGTCGCTAGTAATCGCGAATCAGCAACGTCGCGGTGAATGCGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCAAGTCATGAAAGTGGGCAGCA-5’(如SEQ ID NO:3所示)。
实施例2 菌株溶胞生产流程
(1)、甘油管菌种制备
将原始冻干粉菌种活化后待单菌落长大后,进行活化,获得菌液(OD*10>0.260、pH<4.50);
将上述菌5%接种量(培养20~24小时后检测OD*10>0.260可判定培养合格)转接如表3所示的培养基中,培养20小时检测镜检达标后(OD*10>0.260、pH<4.50),菌种甘油管(保菌液与菌液的体积比为1:1)保种,-80℃保存期3个月,每3月传代一次保种,每次传代必须检验菌种是否污染。
将上述获得的菌株长双歧杆菌婴儿亚种,接种于培养基(培养基配方如表3所示),接种量为5%,于37℃培养20~24h,离心得到沉淀后,添加PBS缓冲液乳化均匀,细胞破壁,得到溶胞产物。获得的菌株溶胞产物的成分如表4所示。
表3
表4
验证例1 总酸、pH、总蛋白测定
对实施例2获得的溶胞产物检测。
(1)采用酸碱滴定法测定总酸含量。
(2)采用pH计测定pH。
(3)采用BCA蛋白浓度测定试剂盒(Biosharp公司)测定总蛋白含量。
实验结果如表5所示。
表5
验证例2
(1)、竞品:CLR 二裂酵母(Repair Complex CLR PF),1%、3%、5%;
方法:qPCR;
模型:HaCat;
指标:LOR。
(2)实验结果
总结:发酵溶胞产物对LOR基因的扩增倍数均有所提高。
1)LOR PCR
LOR的引物:F:5'-CTTGGAACATGGCCTAGCTC-3'(如SEQ ID NO:4所示);
R:5'-CATTCCCAGCACAACAGAGA-3'(如SEQ ID NO:5所示)。
实验结果如表6所示,通过与相同竞品CLR的对比可发现,溶胞产物对LOR基因表达的提升较高。溶胞产物可通过上调LOR基因可达到修护功效。且溶胞产物在低浓度下,对LOR的基因表达量更高;
表6 实验结果
其中:*表示差异显著,**表示差异极显著。
验证例3 修护-基于角质形成细胞的测试
(1)、细胞划痕
表7
其中:滤液+溶胞中,滤液占比50%,溶胞占比50%。滤液和滤液+溶胞为对比例。
1)、测试方法
细胞接种:细胞复苏后至铺板率达到60%左右时,接种细胞至6孔板,37℃、5%CO2孵育过夜。
给药:根据表7分组,待细胞铺板率达到70%~80%左右时,进行分组给药,每组设3个重复。样品组每孔加入2 mL含有相应浓度待测样品的培养液,空白对照组每孔加入2 mL培养液,阳性对照组每孔加入2 mL含有EGF的培养液。给药完成后将6孔板放置在CO2培养箱中继续培养24 h。
划痕:孵育结束后,划痕。
清洗:划痕结束后,用PBS缓冲液清洗细胞3次,加入细胞培养液,CO2培养箱培养24h。
拍照:划痕0h后在4倍镜下拍照,划痕24 h后,用PBS清洗一次,在4倍镜下拍照。
提升率计算:提升率=(样品组-空白对照组)/空白对照组×100%
结果统计分析:应用GraphPad Prism作图,结果表示为Mean±SD。各组间比较采用t-test统计分析。统计分析均为双尾。P<0.05认为具有显著差异,P<0.01认为具有极显著差异。
2)、测试结果
表8
实验结果如图6和表8所示,溶胞能够促进细胞迁移,相比BC组具有显著性差异。
(2)、基因表达量
1)、测试方法
细胞接种:复苏细胞至铺板率达到60%左右时,接种细胞至6孔板,CO2培养箱(37℃、5%CO2)孵育过夜。
给药:根据表9~表11测试分组,待6孔板中细胞铺板率达到40%~60%时,进行分组给药,每组设3个重复。阳性对照组每孔加入2 mL含有VE的培养液,空白对照组每孔加入2 mL培养液,样品组每孔加入2 mL含有相应浓度待测样品的培养液。给药完成后将6孔板放置在CO2培养箱中继续培养24 h。
收集细胞:培养24 h后,吸弃旧液,PBS清洗两次,每孔加入1 mL RNAiso Plus,吹打裂解细胞后,收取细胞。
基因表达检测:提取RNA,反转录后,荧光定量PCR检测,采用2-△△CT方法进行结果计算。
上调率计算:上调率=(样品组-空白对照组)/空白对照组×100%
结果统计分析:应用GraphPad Prism作图,结果表示为Mean±SD。各组间比较采用t-test统计分析。统计分析均为双尾。P<0.05认为具有显著差异,P<0.01认为具有极显著差异。
其中:滤液+溶胞中,滤液占比50%,溶胞占比50%。
滤液和滤液+溶胞为对比例。
2)、测试结果
①Claudin-4 PCR
Claudin-4的引物:F:5'-TCTCCTCTGTTCCGGGTAGG-3'(如SEQ ID NO:6所示);
R:5'-CGTCCATCCACTCTGCACTT-3'(如SEQ ID NO:7所示)。
表9
实验结果如表9所示,溶胞能够显著提高Claudin-4的表达。
②ABCA12 PCR
ABCA12的引物:F:5'-GCTGGAAACCAACAAGACTGCTTTA-3'(如SEQ ID NO:8所示);
R:5'-TATAGTGGAACCTTGGCTGCTGGTA-3'(如SEQ ID NO:9所示)。
表10
实验结果如表10所示,溶胞能够显著提高ABCA12的表达。
③ACACA PCR
ACACA的引物:F:5'-AGTGAGGATGGCAGCTCTGGA-3'(如SEQ ID NO:10所示);
R:5'-ATGAGATGTGGGCAGCATGAAC-3'(如SEQ ID NO:11所示)。
表11
实验结果如表11所示,溶胞能够显著提高ACACA的表达。
(3)、基于SLS刺激3D表皮皮肤模型(EpiKutis®)的测试
表12
其中:滤液+溶胞中,滤液占比50%,溶胞占比50%。
滤液和滤液+溶胞为对比例。
1)、测试方法
工作液配制:
1)0.1% SLS工作液配置:称取0.006g SLS溶于6 mL PBS缓冲液中,0.22 µm过滤,配制成0.1% SLS工作液。
2)阳性对照组(50 μM WY14643)工作液配置:吸取10 µL 30 mM WY14643母液溶于6 mL培养液中,配置成50 μM WY14643。
模型给药:
<1>根据表12测试分组,将模型转移到6孔板中(提前添加0.9mL EpiGrowth培养液),在6孔板上标注测试组编号。
<2>PC组、NC组和样品组表面添加25 μL 0.1%的SLS工作液,孵育30 min。
<3>孵育结束后,PC组液下添加相应浓度的工作液,样品组将样品工作液均匀添加于模型表面,置于CO2培养箱中孵育24 h。
<4>孵育结束后,用无菌PBS缓冲液清洗模型表面残留的受试物,用无菌棉签拭去模型内、外剩余液体。
组织形态测试:
取用于组织形态检测的模型,用4%的多聚甲醛进行固定处理,固定24 h后,进行H&E染色检测,显微镜下拍照观察,采集图片并分析。
结果统计分析:
应用GraphPad Prism作图,结果表示为Mean±SD。各组间比较采用 t-test 统计分析。统计分析均为双尾。P<0.05认为具有显著差异,P<0.01认为具有极显著差异。
2)、测试结果
如图7所示,组织形态检测结果显示,与BC组相比,NC组表皮模型活细胞层受损,有空泡出现,角质层疏松,说明SLS刺激条件有效。
与NC组相比,PC组活细胞层细胞排列紧凑,空泡减少,活细胞受损现象明显改善,说明本次阳性对照检测有效。
与NC组相比,溶胞-5%组空泡减少,活细胞受损现象明显改善,说明溶胞-5%对模型组织形态具有修复作用。
验证例4 美白
(1)、PCR美白基因检测
1)测试方法
细胞接种:复苏细胞至铺板率达到60%左右时,接种细胞至6孔板,37℃、5%CO2孵育过夜。
给药:根据表13~23分组,待6孔板细胞铺板率达到50%~60%时,分组给药,每组设3个重复孔。阳性对照组每孔加入2 mL含有曲酸的培养液,空白对照组每孔加入2 mL培养液,样品组每孔加入2 mL含有相应浓度待测样品的培养液。给药完成后将上述孔板放置在CO2培养箱中继续培养24h。
收集细胞:弃旧液,PBS缓冲液清洗两次,每孔加入1 mL RNAiso Plus,吹打裂解细胞后,收取细胞。
基因表达检测:提取RNA后反转录,荧光定量PCR检测,采用2-△△CT方法
进行结果计算。
下调率计算:下调率=(空白对照组-样品组)/空白对照组×100%
结果统计分析:应用GraphPad Prism作图,结果表示为Mean±SD。各组间比较采用t-test统计分析。统计分析均为双尾。P<0.05认为具有显著差异,P<0.01认为具有极显著差异。
其中:滤液+溶胞中,滤液占比50%,溶胞占比50%。
2)测试结果
①TYR PCR
TYR的引物:F:5'-TGCGGTGGGAACAAGAAA-3'(如SEQ ID NO:12所示);
R:5'-GACAATCTGCCAAGAGGAGAAGA-3'(如SEQ ID NO:13所示)。
表13
实验结果如表13所示,溶胞可以显著下调TYR基因的表达。
②Rab27a PCR
Rab27a的引物:F:5'-GAATGGAACGGTGTGTGGAC-3'(如SEQ ID NO:14所示);
R:5'-CCCCTTTCTCCTTTTCTTCACTT-3'(如SEQ ID NO:15所示)。
表14
实验结果如表14所示,溶胞对黑素小体转运相关基因Rab27a的表达均具有显著的下调率,且高于对比例。
③Myo5a PCR
Myo5a的引物:F:5'- GTGAGCGAGGAGCTTGATGT-3'(如SEQ ID NO:16所示);
R:5'- TCATCCTTGGGTTGGATGGC-3'(如SEQ ID NO:17所示)。
表15
实验结果如表15所示,只有溶胞对黑素小体转运相关基因Myo5a具有较高的下调率。
④MLPH PCR
MLPH的引物:F:5'-CAGCGACCAGACAGATGAGG-3'(如SEQ ID NO:18所示);
R:5'-GACCTTGAGGCTGAGTGGAG-3'(如SEQ ID NO:19所示)。
表16
实验结果如表16所示,溶胞对黑素小体转运相关基因MLPH的表达具有较高的下调率,且好于滤液+溶胞。
⑤SLC45A2 PCR
SLC45A2的引物:F:5'-CCTCAATGGGGCTACTGTTGT-3'(如SEQ ID NO:20所示);
R:5'-GCCCATCAATGAAGTCGGCA-3'(如SEQ ID NO:21所示)。
表17
实验结果如表17所示,溶胞可以显著下调黑色素合成相关基因SLC45A2的表达,且下调率高于其他对比例。
MITF PCR
MITF的引物:F:5'-AATTGTCCATCTGCCTCTGAGTAG-3'(如SEQ ID NO:22所示);
R:5'-GTATGACCAGGTTGCTTGTATGC-3'(如SEQ ID NO:23所示)。
MITF参与黑素合成的转录因子。
表18
/>
实验结果如表18所示,溶胞可显著下调黑色素合成相关基因MITF的表达。
TRP-1 PCR
TRP-1的引物:F:5'-GTGCCACTGTTGAGGCTTTG-3'(如SEQ ID NO:24所示);
R: 5'-ATGGGGATACTGAGGGCTGT-3'(如SEQ ID NO:25所示)。
TRP-1参与到酪氨酸合成黑素的过程中。
表19
实验结果如表19所示,溶胞对黑色素合成相关基因TRP-1的表达的下调率高达37%。
TRP-2 PCR
TRP-2的引物:F:5'-AGGATATACACCCCTAATGGAGACA-3'(如SEQ ID NO:26所示);
R:5'-AAGCAAGCAAAGCGGAAACTAC-3'(如SEQ ID NO:27所示)。
TRP-2参与到酪氨酸合成黑素的过程中。
表20
实验结果如表20所示,溶胞对TRP-2的表达的下调率高于其他对比例。
Pmel17 PCR
Pmel17的引物:F:5'-AACAGCAGTGCAGATGACGA-3'(如SEQ ID NO:28所示);
R:5'-CGGTTGACCCTTCAGGTGTT-3'(如SEQ ID NO:29所示)。
表21
实验结果如表21所示,溶胞可显著下调黑素小体转运相关基因Pmel17的表达。
⑩Kinesin PCR
Kinesin的引物:F:5'-GGGGACTCCGTAAAACAGGG-3'(如SEQ ID NO:30所示);
R:5'-TCCTCGTGCACGCTTAAGTT-3'(如SEQ ID NO:31所示)。
Kinesin与Rab1、SKIP构成转运复合体,参与微管介导的黑素小体转运。
表22
实验结果如表22所示,溶胞可显著下调黑素小体转运相关基因Kinesin的表达。
①①CDC42PCR
CDC42的引物:F:5'-ATTACGACCGCTGAGTTATCCAC-3'(如SEQ ID NO:32所示);
R:5'-TCAGGCACCCACTTTTCTTTC-3'(如SEQ ID NO:33所示)。
表23
实验结果如表23所示,溶胞可显著下调黑素小体转运相关基因CDC42的表达。
以上所述仅是本发明的优选实施方式,应当指出,对于本技术领域的普通技术人员来说,在不脱离本发明原理的前提下,还可以做出若干改进和润饰,这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (8)
1.菌株的溶胞产物,其特征在于,所述菌株为长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp. infantis),其保藏编号为:CGMCC NO.27851。
2.如权利要求1所述的溶胞产物,其特征在于,所述溶胞产物包括:有机酸10~20%、氨基酸1~10%、无机盐0.5~5%、糖醇1~5%和单糖0.1~3%。
3.如权利要求1或2所述的溶胞产物的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:
S1:取所述长双歧杆菌婴儿亚种(Bifidobacterium longum subsp. infantis)接种培养后,获得种子液;
S2:取所述种子液发酵培养后,破碎菌体,离心,收集沉淀后,获得所述溶胞产物。
4.如权利要求1或2所述的溶胞产物和/或如权利要求3所述制备方法获得的溶胞产物在制备屏障修护的个护产品中的应用。
5.如权利要求1或2所述的溶胞产物和/或如权利要求3所述制备方法获得的溶胞产物在制备美白的个护产品中的应用。
6.个护产品,其特征在于,包括如权利要求1或2所述的溶胞产物和/或如权利要求3所述制备方法获得的溶胞产物以及可接受的辅料。
7.如权利要求6所述的个护产品,其特征在于,所述个护产品的剂型包括:膏霜型、乳液型、粉剂和精华型中的一种或多种。
8.如权利要求7所述的个护产品,其特征在于,所述个护产品包括:基础护理产品和/或彩妆产品。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202410036411.XA CN117551589B (zh) | 2024-01-10 | 2024-01-10 | 长双歧杆菌婴儿亚种的溶胞产物的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN202410036411.XA CN117551589B (zh) | 2024-01-10 | 2024-01-10 | 长双歧杆菌婴儿亚种的溶胞产物的应用 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN117551589A true CN117551589A (zh) | 2024-02-13 |
CN117551589B CN117551589B (zh) | 2024-05-07 |
Family
ID=89823512
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN202410036411.XA Active CN117551589B (zh) | 2024-01-10 | 2024-01-10 | 长双歧杆菌婴儿亚种的溶胞产物的应用 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN117551589B (zh) |
Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2003048343A1 (fr) * | 2001-12-07 | 2003-06-12 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | Bifidobacterium longum |
CN112481148A (zh) * | 2019-08-22 | 2021-03-12 | 丰华生物科技股份有限公司 | 用于美白功效的含乳酸菌发酵物的组合物及其用途 |
US20220143112A1 (en) * | 2019-04-02 | 2022-05-12 | Atogen Co., Ltd | Novel bifidobacterium longum strain or cosmetic composition comprising same |
CN116426456A (zh) * | 2023-03-08 | 2023-07-14 | 广州元基细胞生物科技有限公司 | 一种利用植物外泌体发酵制备二裂酵母产物溶胞物的方法及其应用 |
CN116555070A (zh) * | 2022-12-29 | 2023-08-08 | 陈盈如 | 一株双歧双歧杆菌及其应用 |
CN116716206A (zh) * | 2023-04-10 | 2023-09-08 | 微康益生菌(苏州)股份有限公司 | 一种参与肠道皮肤轴调控并改善皮肤健康状态的长双歧杆菌婴儿亚种及其应用 |
WO2023248144A1 (en) * | 2022-06-22 | 2023-12-28 | Fonterra Co-Operative Group Limited | Use of lactic acid bacteria to improve feed efficiency |
-
2024
- 2024-01-10 CN CN202410036411.XA patent/CN117551589B/zh active Active
Patent Citations (7)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
WO2003048343A1 (fr) * | 2001-12-07 | 2003-06-12 | Morinaga Milk Industry Co., Ltd. | Bifidobacterium longum |
US20220143112A1 (en) * | 2019-04-02 | 2022-05-12 | Atogen Co., Ltd | Novel bifidobacterium longum strain or cosmetic composition comprising same |
CN112481148A (zh) * | 2019-08-22 | 2021-03-12 | 丰华生物科技股份有限公司 | 用于美白功效的含乳酸菌发酵物的组合物及其用途 |
WO2023248144A1 (en) * | 2022-06-22 | 2023-12-28 | Fonterra Co-Operative Group Limited | Use of lactic acid bacteria to improve feed efficiency |
CN116555070A (zh) * | 2022-12-29 | 2023-08-08 | 陈盈如 | 一株双歧双歧杆菌及其应用 |
CN116426456A (zh) * | 2023-03-08 | 2023-07-14 | 广州元基细胞生物科技有限公司 | 一种利用植物外泌体发酵制备二裂酵母产物溶胞物的方法及其应用 |
CN116716206A (zh) * | 2023-04-10 | 2023-09-08 | 微康益生菌(苏州)股份有限公司 | 一种参与肠道皮肤轴调控并改善皮肤健康状态的长双歧杆菌婴儿亚种及其应用 |
Non-Patent Citations (2)
Title |
---|
WU J 等: "Anti-Melanogenic and Antioxidant Activity of Bifidobacterium longum Strain ZJ1 Extracts, Isolated from a Chinese Centenarian", 《INT J MOL SCI》, vol. 24, no. 16, 15 August 2023 (2023-08-15), pages 1 - 14 * |
彭芸燕 等: "婴儿肠道源长双歧杆菌B2-01的益生特性及其高密度培养", 《食品科学》, 23 October 2023 (2023-10-23), pages 1 - 20 * |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN117551589B (zh) | 2024-05-07 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
CN113604384B (zh) | 一种鼠李糖乳杆菌及其应用 | |
CN108004187A (zh) | 一种格氏乳杆菌及其用于制备***抑菌药物的应用 | |
CN114806977B (zh) | 一株唾液乳杆菌及其在制备抗皮炎的产品中的应用 | |
CN114686402A (zh) | 乳酸乳球菌乳酸亚种hfy14及其应用 | |
CN113913348B (zh) | 一种格氏克雷伯氏菌sa34及其应用 | |
US8506952B2 (en) | Probiotic compositions and process thereof | |
CN115261262A (zh) | 一株植物乳杆菌hsf-lab-1303及其用途 | |
CN118166123A (zh) | 一种长江江豚环境dna引物及其应用 | |
CN113444785B (zh) | 一种与仔猪C型产气荚膜梭菌感染性腹泻相关的ssc-miR-122-5p及其应用 | |
CN108866165B (zh) | 一种西瓜枯萎病菌定量检测引物及检测方法 | |
CN107904196B (zh) | 一种阎氏链霉菌及其应用 | |
CN117551589B (zh) | 长双歧杆菌婴儿亚种的溶胞产物的应用 | |
CN117100774A (zh) | 嗜酸乳杆菌jyla-16在制备治疗胆结石的产品中的应用 | |
CN116218694A (zh) | 扣囊覆膜孢酵母菌、具有紧致嫩肤、提亮光泽和修护功效的半乳糖酵母样菌发酵产物滤液 | |
CN113774000B (zh) | 动物双歧杆菌发酵滤液、制备方法及其应用 | |
CN116509764A (zh) | 一种含有重组17型人胶原蛋白的酵母发酵产物滤液 | |
CN113773983A (zh) | 一种长双歧杆菌长亚种菌株及其应用 | |
RU2518304C2 (ru) | ДВУХФАЗНАЯ ПИТАТЕЛЬНАЯ СРЕДА ДЛЯ ТОНКОСЛОЙНОГО КУЛЬТИВИРОВАНИЯ Helicobacter pylori И СПОСОБ ЕГО ОСУЩЕСТВЛЕНИЯ | |
CN113512559B (zh) | 牛支原体Mbov_0701突变基因及其突变株和应用 | |
CN105462928B (zh) | 一种中国人口腔黑色素瘤细胞系comm-1及其建立方法 | |
CN113667725A (zh) | Mstn重组蛋白在斜带石斑鱼筛选中的应用 | |
CN111793568B (zh) | 一种巴斯德毕赤酵母及其应用 | |
CN117625498B (zh) | 长双歧杆菌婴儿亚种的滤液的应用 | |
CN111635878A (zh) | 一种解淀粉芽孢杆菌及其在银鲳养殖中的应用 | |
CN104403996A (zh) | 一种具有5-氟尿嘧啶耐药性的人胃癌细胞系及其建立方法和应用 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |