CN117480183A - 抗il-36r抗体及其用途 - Google Patents

抗il-36r抗体及其用途 Download PDF

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CN117480183A CN202280041588.8A CN202280041588A CN117480183A CN 117480183 A CN117480183 A CN 117480183A CN 202280041588 A CN202280041588 A CN 202280041588A CN 117480183 A CN117480183 A CN 117480183A
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徐宏江
施伟
王亮亮
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Abstract

提供了抗IL‑36R抗体及其用途，具体而言，提供了结合IL‑36R的小鼠、嵌合或人源化抗体或其抗原结合片段，还提供了编码所述抗体或其抗原结合片段的核酸分子，以及用于表达所述抗体或其抗原结合片段的表达载体和宿主细胞。此外，还提供了所述抗体或其抗原结合片段的制备方法和使用方法，包括治疗和预防IL‑36/IL‑36R介导的相关疾病和病症。

Description

抗IL-36R抗体及其用途
相关申请的引用
本公开要求于2021年6月18日提交的中国专利申请202110675925.6号的优先权，通过援引加入的方式将其内容整体并入本公开，并用于所有目的。
技术领域
本公开涉及分离的抗体，具体而言，本公开涉及特异性结合IL-36R的分离的抗体或其抗原结合片段，以及制备和使用所述抗体或其抗原结合片段的方法。
背景技术
白细胞介素36(IL-36)属于白细胞介素1(IL-1)家族的成员，包括3种激动性细胞因子IL-36α(IL-1F6)、IL-36β(IL-1F8)和IL-36γ(IL-1F9)以及1种抑制性细胞因子IL-36Ra。IL-36受体(IL-36R)是IL-36家族成员的共同受体，也称为白介素1受体样2(IL1RL2)或IL-1受体相关蛋白2(IL-1Rrp2)。IL-36α、IL-36β、IL-36γ通过结合IL-36R和IL-1受体辅助蛋白(IL-1RAcP)，激活丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)和核因子kappa B(NF-kB)信号通路，参与效应细胞活化、促进炎症细胞因子表达和炎症发生。
IL-36α、IL-36β和IL-36γ主要分布在皮肤、肺脏、关节、肠道等组织中，可由单核细胞、巨噬细胞、T淋巴细胞、B淋巴细胞、角质细胞等多种细胞产生；IL-36R主要分布于肺脏、附睾等组织中。研究者首次在泛发性脓疱型银屑病(GPP)和斑块型银屑病中发现了IL-36，并观察到GPP和斑块型银屑病病灶中IL-36Rα和IL-36γmRNA的过表达。多项表明IL-36与银屑病具有一定的相关性，例如在银屑病中发现，IL-36γ通过Wnt信号通路抑制角质形成细胞的分化并诱导角质形成细胞的炎症反应，IL-36γ还能促进IFN-γ、IL-1β和IL-6等促炎因子的产生(Wang等(2017),Int J Med Sci,14:1002-1007)；IL-36R缺陷的小鼠不会发生咪喹莫特诱导的银屑病样皮炎(Tortola等(2012),J Clin Invest,122:3965-3976)。另一研究组证实，IL-36α和IL-36γ的表达水平在IBD患者肠黏膜中上调，并且能诱发肠上皮细胞表达趋化因子，启动下游的信号通路，诱发炎症反应(Nishida等(2016),Inflamm Bowel Dis,22:303-314)。
因此，阻断IL-36与IL-36R结合，抑制IL-36/IL-36R信号通路，在治疗多种自身免疫性疾病和炎性疾病中具有重要作用。Spesolimab(BI655130)是Boehringer Ingelheim开发的一种用于治疗泛发性脓疱性银屑病(GPP)、掌plant脓疱病(PPP)、克罗恩病(CD)和特应性皮炎(AD)的抗IL-36R的单克隆抗体，已在临床I期中证明可显著改善GPP患者的症状(Bachelez Hervé等(2019),NEJM,380:981-983)。但是，本领域还需要更多具有更好药物特性的抗体，例如以高亲和力结合IL-36R并且能有效中和IL-36R活性的抗体。
发明概述
本公开提供了分离的抗体，例如，与IL-36R(例如，人和猴IL-36R)结合的小鼠、嵌合、人源化或人单克隆抗体或其抗原结合片段。具体而言，本公开的抗体或其抗原结合片段能够以高亲和力结合IL-36R(例如，人和猴IL-36R)，并能够阻断IL-36/IL-36R的相互作用。
本公开的抗体或其抗原结合片段具有多种用途，包括检测IL-36R蛋白，以及治疗或预防IL-36/IL-36R介导的相关疾病和病症，例如自身免疫性疾病、炎性疾病、呼吸***疾病、代谢紊乱或癌症等。
一方面，本公开提供了分离的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其包含：
i)重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，其中，
(1)重链CDR1包含如SEQ ID NO:1或85所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1或85具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:2具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和重链CDR3包含如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:3具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、 90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(2)重链CDR1包含如SEQ ID NO:21或86所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:21或86具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:22具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和重链CDR3包含如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:23具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(3)重链CDR1包含如SEQ ID NO:45或88所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:45或88具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:46具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和重链CDR3包含如SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:47具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(4)重链CDR1包含如SEQ ID NO:53或89所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:53或89具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:54具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和重链CDR3包含如SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:55具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，或
(5)重链CDR1包含如SEQ ID NO:61或90所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:61或90具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:62具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和重链CDR3包含如SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:63具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；和/或
ii)轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3，其中，
(1)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:4具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:5具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:6具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(2)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:24或87所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:24或87具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:25具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:26具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(3)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:48具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、 99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:49具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:50具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(4)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:56具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:57具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:58具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，或
(5)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:64具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:65具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:66具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其包含重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3，其中，
(1)重链CDR1包含如SEQ ID NO:1或85所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1或85具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:2具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链CDR3包含如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:3具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:4具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:5具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:6具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(2)重链CDR1包含如SEQ ID NO:21或86所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:21或86具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:22具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链CDR3包含如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:23具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:24或87所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:24或87具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:25具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、 95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:26具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(3)重链CDR1包含如SEQ ID NO:45或88所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:45或88具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:46具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链CDR3包含如SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:47具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:48具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:49具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:50具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(4)重链CDR1包含如SEQ ID NO:53或89所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:53或89具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:54具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链CDR3包含如SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:55具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:56具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:57具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:58具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，或
(5)重链CDR1包含如SEQ ID NO:61或90所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:61或90具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:62具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链CDR3包含如SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:63具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:64具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:65具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:66具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些具体的实施方案中，前述SEQ ID NO:2的氨基酸序列为YIX 1YSGYTYYNPSLKS，前述SEQ ID NO:6的氨基酸序列为QQX 2TTSPYT，其中，
X 1＝S或Y，X 2＝F或Y；
并且，前述SEQ ID NO:21的氨基酸序列为GYX 3FTSYWMN，前述SEQ ID NO:22的氨基酸序列为X 4IX 5PYDSETRX 6X 7QKFX 8G，其中，
X 3＝F或Y，X 4＝M或Y，X 5＝H或Y，X 6＝L或Y，X 7＝N或A，X 8＝K或Q。
在一些具体的实施方案中，前述SEQ ID NO:2的氨基酸序列为YIX 1YSGYTYYNPSLKS，前述SEQ ID NO:6的氨基酸序列为QQX 2TTSPYT，其中，
i)X1＝S或Y，X2＝F，或
ii)X1＝S或Y，X2＝Y；
并且，前述SEQ ID NO:21的氨基酸序列为GYX 3FTSYWMN，前述SEQ ID NO:22的氨基酸序列为X 4IX 5PYDSETRX 6X 7QKFX 8G，其中，
i)X3＝F或Y，X4＝M或Y，X5＝H或Y，X6＝L，X7＝N或A，X8＝K，或
ii)X3＝F或Y，X4＝M或Y，X5＝H或Y，X6＝Y，X7＝N或A，X8＝Q。
在一些具体的实施方案中，前述SEQ ID NO:2的氨基酸序列为YIX 1YSGYTYYNPSLKS，前述SEQ ID NO:6的氨基酸序列为QQX 2TTSPYT，其中，
i)X1＝S或Y，X2＝F，或
ii)X1＝S或Y，X2＝Y；
并且，前述SEQ ID NO:21的氨基酸序列为GYX 3FTSYWMN，前述SEQ ID NO:22的氨基酸序列为X 4IX 5PYDSETRX 6X 7QKFX 8G，其中，
i)X 3＝F或Y，X4＝M，X5＝H，X6＝L，X7＝N，X8＝K，
ii)X 3＝F或Y，X4＝M，X5＝H，X6＝Y，X7＝A，X8＝Q，
iii)X 3＝F或Y，X4＝Y，X5＝H，X6＝Y，X7＝A，X8＝Q，
iv)X 3＝F或Y，X4＝M，X5＝Y，X6＝Y，X7＝A，X8＝Q，或
v)X 3＝F或Y，X 4＝M，X 5＝H，X 6＝L，X 7＝A，X 8＝K。
一方面，本公开提供了分离的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其包含：SEQ ID NOs:7、9、11、13、27、29、31、33、35、37、51、59或67所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和/或SEQ ID NOs:15、17、19、39、41、43、52、60或68所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3。
在一些实施方案中，所述抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其包含：
(1)SEQ ID NO:7所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:15所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
(2)SEQ ID NO:9所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:17所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
(3)SEQ ID NO:11所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:17所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
(4)SEQ ID NO:13所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:17所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
(5)SEQ ID NO:9所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:19所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
(6)SEQ ID NO:11所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:19所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
(7)SEQ ID NO:13所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:19所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
(8)SEQ ID NO:27所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:39所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
(9)SEQ ID NO:29所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:41所 示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
(10)SEQ ID NO:31所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:41所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
(11)SEQ ID NO:33所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:41所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
(12)SEQ ID NO:35所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:41所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
(13)SEQ ID NO:37所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:41所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
(14)SEQ ID NO:29所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:43所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
(15)SEQ ID NO:31所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:43所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
(16)SEQ ID NO:33所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:43所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
(17)SEQ ID NO:35所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:43所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
(18)SEQ ID NO:37所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:43所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
(19)SEQ ID NO:51所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:52所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
(20)SEQ ID NO:59所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:60所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；或
(21)SEQ ID NO:67所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:68所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3。
在一些实施方案中，所述抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区，所述重链可变区包含如SEQ ID NOs:7、9、11、13、27、29、31、33、35、37、51、59或67所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NOs:7、9、11、13、27、29、31、33、35、37、51、59或67所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其包含轻链可变区，所述轻链可变区包含如SEQ ID NOs:15、17、19、39、41、43、52、60或68所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NOs:15、17、19、39、41、43、52、60或68所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些实施方案中，所述抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，其中，
(1)重链可变区包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:7具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:15具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(2)重链可变区包含如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:9具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:17具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(3)重链可变区包含如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:11具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:17具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(4)重链可变区包含如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:13具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:17具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(5)重链可变区包含如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:9具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:19具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(6)重链可变区包含如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:11具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:19具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(7)重链可变区包含如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:13具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:19具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(8)重链可变区包含如SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:27具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:39具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(9)重链可变区包含如SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:29具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:41具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(10)重链可变区包含如SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:31具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:41具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(11)重链可变区包含如SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:33具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:41具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(12)重链可变区包含如SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:35具有至少80％、81％、 82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:41具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(13)重链可变区包含如SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:37具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:41具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(14)重链可变区包含如SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:29具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:43具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(15)重链可变区包含如SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:31具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:43具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(16)重链可变区包含如SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:33具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:43具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(17)重链可变区包含如SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:35具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:43具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(18)重链可变区包含如SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:37具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:43具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(19)重链可变区包含如SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:51具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:52具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，
(20)重链可变区包含如SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:59具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:60具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，或
(21)重链可变区包含如SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:67具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、 99％或100％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:68具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列。
在一些具体的实施方案中，SEQ ID NOs:7、9、11、13、27、29、31、33、35和37所示的氨基酸序列可以分别由SEQ ID NOs:8、10、12、14、28、30、32、34、36和38所示的核酸编码，SEQ ID NOs:15、17、19、39、41和43所示的氨基酸序列可以分别由SEQ ID NOs:16、18、20、40、42和44所示的核酸编码。
在一些实施方案中，所述抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，所述重链包含重链可变区和重链恒定区，所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区，其中重链可变区的C末端与重链恒定区的N末端相连接，轻链可变区的C末端与轻链恒定区的N末端相连接。所述重链恒定区可以是人IgG1或人IgG4重链恒定区或其片段或其变体，例如包含SEQ ID NO:69所示氨基酸序列的人IgG1重链恒定区或其片段，或包含SEQ ID NO:71所示氨基酸序列的人IgG4重链恒定区或其片段，或者是与SEQ ID NOs:69或71所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、删除和添加的变体。所述轻链恒定区可以是人κ轻链恒定区或其片段，例如包含SEQ ID NO:73所示氨基酸序列的人κ轻链恒定区或其片段，或者是与SEQ ID NO:73所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、删除和添加的变体。在一些实施方案中，所述重链恒定区也可以包含小鼠IgG1或小鼠IgG4重链恒定区或其片段，所述轻链恒定区也可以包含小鼠κ轻链恒定区或其片段。
在一些实施方案中，所述抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其包含重链，所述重链包含重链可变区和重链恒定区，所述重链可变区包含如SEQ ID NOs:7、9、11、13、27、29、31、33、35、37、51、59或67所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NOs:7、9、11、13、27、29、31、33、35、37、51、59或67所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；所述重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:69或71所示，或与SEQ ID NOs:69或71所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加。
在一些实施方案中，所述抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其包含轻链，所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区，所述轻链可变区包含如SEQ ID NOs:15、17、19、39、41、43、52、60或68所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NOs:15、17、19、39、41、43、52、60或68所示的氨基酸序列具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列；所述轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:73所示，或与SEQ ID NO:73所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加。
在一些实施方案中，所述抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其包含重链和轻链，其中，
(1)所述重链包含重链可变区和重链恒定区，其中，重链可变区包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:7具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:71所示或与SEQ ID NOs:71所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区，其中，轻链可变区包含如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:15具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:73所示或与SEQ ID NO:73所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
(2)所述重链包含重链可变区和重链恒定区，其中，重链可变区包含如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:9具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:71所示或与SEQ ID NOs:71所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区，其中，轻链可变区包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:17具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:73所示或与SEQ ID NO:73所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
(3)所述重链包含重链可变区和重链恒定区，其中，重链可变区包含如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:11具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:71所示或与SEQ ID NOs:71所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区，其中，轻链可变区包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:17具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:73所示或与SEQ ID NO:73所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
(4)所述重链包含重链可变区和重链恒定区，其中，重链可变区包含如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:13具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:71所示或与SEQ ID NOs:71所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区，其中，轻链可变区包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:17具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:73所示或与SEQ ID NO:73所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
(5)所述重链包含重链可变区和重链恒定区，其中，重链可变区包含如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:9具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:71所示或与SEQ ID NOs:71所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区，其中，轻链可变区包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:19具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:73所示或与SEQ ID NO:73所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
(6)所述重链包含重链可变区和重链恒定区，其中，重链可变区包含如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:11具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:71所示或与SEQ ID NOs:71所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区，其中，轻链可变区包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:19具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:73所示或与SEQ ID NO:73所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
(7)所述重链包含重链可变区和重链恒定区，其中，重链可变区包含如SEQ ID NO:13所示的氨基酸 序列或与SEQ ID NO:13具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:71所示或与SEQ ID NOs:71所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区，其中，轻链可变区包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:19具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:73所示或与SEQ ID NO:73所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
(8)所述重链包含重链可变区和重链恒定区，其中，重链可变区包含如SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:27具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:71所示或与SEQ ID NOs:71所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区，其中，轻链可变区包含如SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:39具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:73所示或与SEQ ID NO:73所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
(9)所述重链包含重链可变区和重链恒定区，其中，重链可变区包含如SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:29具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:71所示或与SEQ ID NOs:71所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区，其中，轻链可变区包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:41具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:73所示或与SEQ ID NO:73所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
(10)所述重链包含重链可变区和重链恒定区，其中，重链可变区包含如SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:31具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:71所示或与SEQ ID NOs:71所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区，其中，轻链可变区包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:41具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:73所示或与SEQ ID NO:73所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
(11)所述重链包含重链可变区和重链恒定区，其中，重链可变区包含如SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:33具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:71所示或与SEQ ID NOs:71所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区，其中，轻链可变区包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:41具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、 92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:73所示或与SEQ ID NO:73所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
(12)所述重链包含重链可变区和重链恒定区，其中，重链可变区包含如SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:35具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:71所示或与SEQ ID NOs:71所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区，其中，轻链可变区包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:41具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:73所示或与SEQ ID NO:73所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
(13)所述重链包含重链可变区和重链恒定区，其中，重链可变区包含如SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:37具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:71所示或与SEQ ID NOs:71所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区，其中，轻链可变区包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:41具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:73所示或与SEQ ID NO:73所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
(14)所述重链包含重链可变区和重链恒定区，其中，重链可变区包含如SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:29具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:71所示或与SEQ ID NOs:71所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区，其中，轻链可变区包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:43具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:73所示或与SEQ ID NO:73所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
(15)所述重链包含重链可变区和重链恒定区，其中，重链可变区包含如SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:31具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:71所示或与SEQ ID NOs:71所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区，其中，轻链可变区包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:43具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:73所示或与SEQ ID NO:73所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
(16)所述重链包含重链可变区和重链恒定区，其中，重链可变区包含如SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:33具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链恒定区的氨基 酸序列如SEQ ID NO:71所示或与SEQ ID NOs:71所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区，其中，轻链可变区包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:43具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:73所示或与SEQ ID NO:73所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
(17)所述重链包含重链可变区和重链恒定区，其中，重链可变区包含如SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:35具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:71所示或与SEQ ID NOs:71所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区，其中，轻链可变区包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:43具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:73所示或与SEQ ID NO:73所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
(18)所述重链包含重链可变区和重链恒定区，其中，重链可变区包含如SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:37具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:71所示或与SEQ ID NOs:71所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区，其中，轻链可变区包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:43具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:73所示或与SEQ ID NO:73所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
(19)所述重链包含重链可变区和重链恒定区，其中，重链可变区包含如SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:51具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:71所示或与SEQ ID NOs:71所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区，其中，轻链可变区包含如SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:52具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:73所示或与SEQ ID NO:73所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
(20)所述重链包含重链可变区和重链恒定区，其中，重链可变区包含如SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:59具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:71所示或与SEQ ID NOs:71所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区，其中，轻链可变区包含如SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:60具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:73所示或与SEQ ID NO:73所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删 除和添加；或
(21)所述重链包含重链可变区和重链恒定区，其中，重链可变区包含如SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:67具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:71所示或与SEQ ID NOs:71所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加；
所述轻链包含轻链可变区和轻链恒定区，其中，轻链可变区包含如SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:68具有至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％同一性的氨基酸序列，轻链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:73所示或与SEQ ID NO:73所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加。
在一些具体的实施方案中，SEQ ID NOs:69、71和73所示的氨基酸序列可以分别由SEQ ID NO:70、72和74所示的核酸编码。
在一些实施方案中，本公开的抗IL-36R抗体包含两条重链和两条轻链，或由两条重链和两条轻链组成，重链和轻链通过二硫键相互连接，其中每条重链包含上述的重链恒定区、重链可变区或CDR，并且每条轻链包含上述的轻链恒定区、轻链可变区或CDR，其中重链可变区的C末端与重链恒定区的N末端相连接，轻链可变区的C末端与轻链恒定区的N末端相连接。本公开的抗IL-36R抗体可以是全长抗体，例如IgG1、IgG2或IgG4同种型的全长抗体，优选IgG1或IgG4。
在一些实施方案中，本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段可是IgG4同种型抗体。在其他实施方案中，本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段可以是单链可变区(scFv)抗体，或抗体片段，例如Fab、F(ab’) 2片段、Fd片段、Fv片段、dAb或分离的CDR区。
一方面，本公开提供了多特异性分子，其包含本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段与至少一个与其具有不同特异性的其他功能部分相连接，所述其他功能部分包括另一种肽或蛋白质(例如，另一种抗体或其抗原结合片段、细胞因子和/或受体配体)，以产生与至少两个不同结合位点或靶点结合的多特异性分子。本公开所述的“多特异性分子”涵盖具有两种(即双特异性分子)、三种(即三特异性分子)、四种(即四特异性分子)或更多种的特异性的分子。在一些具体的实施方案中，本公开所述的“多特异性分子”涵盖多特异性抗体，例如双特异性抗体、三特异性抗体或四特异性抗体。这些双特异性分子可以通过基因改造、化学法等进行制备。
本公开还提供了免疫缀合物，其包含本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，其中本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段与治疗剂(例如细胞毒素，细胞毒性药物等)相连接，例如抗体-药物偶联物(ADC)。在一些实施方案中，所述连接是共价连接。在一些实施方案中，所述连接是非共价连接。在一些实施方案中，所述连接是直接连接。在一些实施方案中，所述连接是通过接头连接。合适的接头包括但不限于氨基酸或多肽接头。
本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段也可以是嵌合抗原受体(CAR)的一部分。本公开还提供了包含所述嵌合抗原受体的免疫细胞，例如T细胞(即，CAR-T细胞)。
此外，本公开还提供了基因载体，所述基因载体包含编码本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段的基因，并且能使所述基因进入哺乳动物细胞(优选人细胞)，并在其中表达。这些基因载体包括但不限于，裸质粒载体、酵母质粒载体、腺病毒载体、腺相关病毒载体、逆转录病毒载体、痘病毒载体、棒状病毒载体或杆状病毒载体。用于将DNA***这些基因载体中的技术是本领域普通技术人员所熟知的。
一方面，本公开还提供了编码本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段的核酸分子，包含所述核酸分子的表达载体，以及包含所述核酸分子或表达载体的宿主细胞。
一方面，本公开还提供了药物组合物，其包含本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段、多特异性分子、免疫缀合物、CAR-T细胞、基因载体或核酸分子，以及药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
一方面，本公开还提供了制备抗IL-36R抗体或其抗原结合片段的方法，其包括以下步骤：(i)在宿主细胞中表达所述抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，和(ii)从宿主细胞或其细胞培养物中分离所述抗IL-36R抗体或其抗原结合片段。
另一方面，本公开提供了在受试者中抑制IL-36/IL-36R信号转导的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段、药物组合物、多特异性分子、免疫缀合物、CAR-T细胞、基因载体或核酸分子。在一些实施方案中，所述受试者是人。在一些实施方案中，所述受试者患有自身免疫性疾病、炎性疾病、呼吸***疾病、代谢紊乱或癌症。
另一方面，本公开提供了治疗或预防受试者IL-36/IL-36R介导的相关疾病和病症的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段、药物组合物、多特异性分子、免疫缀合物、CAR-T细胞、基因载体或核酸分子。本公开还提供了本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段、药物组合物、多特异性分子、免疫缀合物、CAR-T细胞、基因载体或核酸分子在制备用于治疗或预防IL-36/IL-36R介导的相关疾病和病症的药物中的用途。在一些实施方案中，在所述方法和用途中，所述受试者是人。
在一些实施方案中，在所述方法和用途中，所述IL-36/IL-36R介导的相关疾病和病症包括自身免疫性疾病、炎性疾病、呼吸***疾病、代谢紊乱或癌症。在一些实施方案中，在所述方法和用途中，所述IL-36/IL-36R介导的相关疾病和病症包括多发性硬化症、硬皮病、哮喘、慢性阻塞性肺病、化脓性汗腺炎、关节炎、强直性脊柱炎、银屑病、掌跖脓疱病、***性红斑狼疮、特异性皮炎、寻常性痤疮、皮疹、过敏性鼻炎、肾炎、炎性肠病和/或食物过敏。在一些具体的实施方案中，所述关节炎包括类风湿性关节炎、和银屑病关节炎。在一些具体的实施方案中，所述银屑病包括寻常型银屑病、脓疱病型银屑病、局限性脓疱型银屑病、泛发性脓疱型银屑病。在一些具体的实施方案中，所述炎性肠病包括克罗恩病和溃疡性结肠炎。在一些实施方案中，至少一种其他抗体可以与本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段一起施用，例如抗IgE抗体、抗IL4抗体、抗IL13抗体和/或抗IL5抗体。在一些实施方案中，至少一种其他药物可以与本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段一起施用，例如抗过敏剂。在一些实施方案中，在所述方法和用途中，所述IL-36/IL-36R介导的相关疾病和病症是实体瘤或非实体瘤。在一些实施方案中，至少一种其他的抗体可以与本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段一起施用，例如抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体和/或抗CTLA-4抗体。在一些实施方案中，至少一种其他药物可以与本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段一起施用，例如小分子抗癌剂。
基于以下具体描述和实施例，本公开的其他特征和优点将会更加清晰，具体描述和实施例不应解读为限制性的。在本申请中引用的所有文献、Genbank记录、专利和已公开专利申请的内容通过引用的方式明确地地并入本申请中。
附图说明
图1：通过ELISA检测嵌合抗IL-36R抗体与hIL-36R的结合。图1示出嵌合抗体xi72C1和xi84C4与hIL-36R的结合，BI655130的结合作为对照示出，IgG4的结合作为阴性对照示出。
图2：通过ELISA检测嵌合抗IL-36R抗体与CynoIL-36R的结合。图2示出嵌合抗体xi72C1和xi84C4与CynoIL-36R的结合，BI655130的结合作为对照示出，IgG4的结合作为阴性对照示出。
图3A-3B：通过FACS检测嵌合抗IL-36R抗体与过表达hIL-36R的细胞的结合。图3A示出嵌合抗体xi72C1和xi84C4与293T-hIL36R-NFκB细胞的结合，图3B示出嵌合抗体xi72C1和xi74B4D6与293T-hIL36R-NFκB细胞的结合，BI655130的结合作为对照示出，IgG4的结合作为阴性对照示出。
图4：通过FACS检测嵌合抗IL-36R抗体与过表达CynoIL-36R的细胞的结合。图4示出嵌合抗体xi72C1、xi84C4、xi58A8D1和xi6G10与293T-CynoIL36R-NFκB细胞的结合，BI655130的结合作为对照示出，IgG4的结合作为阴性对照示出。
图5A-5F：嵌合抗IL-36R抗体阻断hIL36α、hIL36β和hIL36γ蛋白与过表达hIL-36R的细胞相互作用的功能。图5A-5B示出嵌合抗体xi72C1、xi74B4D6、xi84C4、xi58A8D1和xi6G10阻断hIL36α与293T-hIL36R-NFκB细胞相互作用的结果，图5C-5D示出嵌合抗体xi72C1、xi74B4D6、xi84C4、xi58A8D1和xi6G10阻断hIL36β与293T-hIL36R-NFκB细胞相互作用的结果，图5E-5F示出嵌合抗体xi72C1、xi74B4D6、xi84C4、xi58A8D1和xi6G10阻断hIL36γ与293T-hIL36R-NFκB细胞相互作用的结果，BI655130的阻断作为对照示出，IgG4的阻断作为阴性对照示出。
图6A-6C：嵌合抗IL-36R抗体阻断hIL36α、hIL36β和hIL36γ蛋白与过表达CynoIL-36R的细胞相互 作用的功能。图6A示出嵌合抗体xi72C1和xi84C4阻断hIL36α与293T-CynoIL36R-NFκB细胞相互作用的结果，图6B示出嵌合抗体xi72C1和xi84C4阻断hIL36β与293T-CynoIL36R-NFκB细胞相互作用的结果，图6C示出嵌合抗体xi72C1和xi84C4阻断hIL36γ与293T-CynoIL36R-NFκB细胞相互作用的结果，BI655130的阻断作为对照示出，IgG4的阻断作为阴性对照示出。
图7A-7F：嵌合抗IL-36R抗体阻断hIL36α、hIL36β和hIL36γ蛋白与OVCAR8细胞相互作用的功能。图7A-7B示出嵌合抗体xi72C1、xi74B4D6、xi84C4、xi58A8D1和xi6G10阻断hIL36α与OVCAR8细胞相互作用的结果，图7C-7D示出嵌合抗体xi72C1、xi74B4D6、xi84C4、xi58A8D1和xi6G10阻断hIL36β与OVCAR8细胞相互作用的结果，图7E-7F示出嵌合抗体xi72C1、xi74B4D6、xi84C4、xi58A8D1和xi6G10阻断hIL36γ与OVCAR8细胞相互作用的结果，BI655130的阻断作为对照示出，IgG4的阻断作为阴性对照示出。
图8A-8D：嵌合抗IL-36R抗体阻断hIL36α、hIL36β和hIL36γ蛋白与keratinocytes(NHK)细胞相互作用的功能。图8A-8B示出嵌合抗体xi84C4、xi58A8D1、xi6G10和xi72C1阻断hIL36α与NHK细胞相互作用的结果，图8C示出嵌合抗体xi72C1、xi84C4、xi58A8D1和xi6G10阻断hIL36β与NHK细胞相互作用的结果，图8D示出嵌合抗体xi72C1、xi84C4、xi58A8D1和xi6G10阻断hIL36γ与NHK细胞相互作用的结果，BI655130的阻断作为对照示出，IgG4的阻断作为阴性对照示出。
图9A-9B：通过ELISA检测人源化抗IL-36R抗体与hIL-36R的结合。图9A示出人源化抗体hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2和hz72C1-2.3与hIL-36R的结合，图9B示出人源化抗体hz84C4-1.1、hz84C4-1.2、hz84C4-1.3、hz84C4-1.4、hz84C4-1.5、hz84C4-2.1、hz84C4-2.2、hz84C4-2.3、hz84C4-2.4和hz84C4-2.5与hIL-36R的结合，BI655130的结合作为对照示出，IgG4的结合作为阴性对照示出。
图10：通过ELISA检测人源化抗IL-36R抗体与CynoIL-36R的结合。图10示出人源化抗体hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2和hz72C1-2.3与CynoIL-36R的结合，BI655130的结合作为对照示出，IgG4的结合作为阴性对照示出。
图11A-11B：通过FACS检测人源化抗IL-36R抗体与过表达hIL-36R的细胞的结合。图11A示出人源化抗体hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2和hz72C1-2.3与293T-hIL36R-NFκB细胞的结合，图11B示出人源化抗体hz84C4-1.1、hz84C4-1.2、hz84C4-1.3、hz84C4-1.4、hz84C4-1.5、hz84C4-2.1、hz84C4-2.2、hz84C4-2.3、hz84C4-2.4和hz84C4-2.5与293T-hIL36R-NFκB细胞的结合，BI655130的结合作为对照示出，IgG4的结合作为阴性对照示出。
图12A-12B：通过FACS检测人源化抗IL-36R抗体与过表达CynoIL-36R的细胞的结合。图12A示人源化抗体hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2和hz72C1-2.3与293T-CynoIL36R-NFκB细胞的结合，图12B示人源化抗体hz84C4-1.1、hz84C4-1.2、hz84C4-1.3、hz84C4-1.4、hz84C4-1.5、hz84C4-2.1、hz84C4-2.2、hz84C4-2.3、hz84C4-2.4和hz84C4-2.5与293T-CynoIL36R-NFκB细胞的结合，BI655130的结合作为对照示出，IgG4的结合作为阴性对照示出。
图13A-13H：人源化抗IL-36R抗体阻断hIL36α、hIL36β、hIL36γ和hIL36αβγ蛋白与过表达hIL-36R的细胞相互作用的功能。图13A-13B示出人源化抗体hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2、hz72C1-2.3、hz84C4-1.1和hz84C4-2.5阻断hIL36α与293T-hIL36R-NFκB细胞相互作用的结果，图13C-13D示出人源化抗体hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2、hz72C1-2.3、hz84C4-1.1和hz84C4-2.5阻断hIL36β与293T-hIL36R-NFκB细胞相互作用的结果，图13E-13F示出人源化抗体hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2、hz72C1-2.3、hz84C4-1.1和hz84C4-2.5阻断hIL36γ与293T-hIL36R-NFκB细胞相互作用的结果，图13G-13H示出人源化抗体hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2、hz72C1-2.3、hz84C4-1.1和hz84C4-2.5阻断hIL36αβγ与293T-hIL36R-NFκB细胞相互作用的结果，BI655130的阻断作为对照示出，IgG4的阻断作为阴性对照示出。
图14A-14C：人源化抗IL-36R抗体阻断hIL36α、hIL36β和hIL36γ蛋白与过表达CynoIL-36R的细胞相互作用的功能。图14A示出人源化抗体hz72C1-1.1和hz72C1-1.3阻断hIL36α与293T-CynoIL36R-NFκB细胞相互作用的结果，图14B示出人源化抗体hz72C1-1.1和hz72C1-1.3阻断hIL36β与293T-CynoIL36R- NFκB细胞相互作用的结果，图14C示出人源化抗体hz72C1-1.1和hz72C1-1.3阻断hIL36γ与293T-CynoIL36R-NFκB细胞相互作用的结果，BI655130的阻断作为对照示出，IgG4的阻断作为阴性对照示出。
图15A-15H：人源化抗IL-36R抗体阻断hIL36α、hIL36β、hIL36γ和hIL36αβγ蛋白与OVCAR8细胞相互作用的功能。图15A-15B示出人源化抗体hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2、hz72C1-2.3、hz84C4-1.1、hz84C4-1.2、hz84C4-1.3、hz84C4-1.4、hz84C4-1.5、hz84C4-2.1、hz84C4-2.2、hz84C4-2.3、hz84C4-2.4和hz84C4-2.5阻断hIL36α与OVCAR8细胞相互作用的结果，图15C-15D示出示出人源化抗体hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2、hz72C1-2.3、hz84C4-1.1、hz84C4-1.2、hz84C4-1.3、hz84C4-1.4、hz84C4-1.5、hz84C4-2.1、hz84C4-2.2、hz84C4-2.3、hz84C4-2.4和hz84C4-2.5阻断hIL36β与OVCAR8细胞相互作用的结果，图15E-15F示出人源化抗体hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2、hz72C1-2.3、hz84C4-1.1、hz84C4-1.2、hz84C4-1.3、hz84C4-1.4、hz84C4-1.5、hz84C4-2.1、hz84C4-2.2、hz84C4-2.3、hz84C4-2.4和hz84C4-2.5阻断hIL36γ与OVCAR8细胞相互作用的结果，图15G-15H示出人源化抗体hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2、hz72C1-2.3、hz84C4-1.1、hz84C4-1.2、hz84C4-1.3、hz84C4-1.4、hz84C4-1.5、hz84C4-2.1、hz84C4-2.2、hz84C4-2.3、hz84C4-2.4和hz84C4-2.5阻断hIL36αβγ与OVCAR8细胞相互作用的结果，BI655130的阻断作为对照示出，IgG4的阻断作为阴性对照示出。
图16A-16H：人源化抗IL-36R抗体阻断hIL36α、hIL36β、hIL36γ和hIL36αβγ蛋白与keratinocytes(NHK)细胞相互作用的功能。图16A-16B示出人源化抗体hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2、hz72C1-2.3、hz84C4-1.1、hz84C4-1.2、hz84C4-1.3、hz84C4-1.4、hz84C4-1.5、hz84C4-2.1、hz84C4-2.2、hz84C4-2.3、hz84C4-2.4和hz84C4-2.5阻断hIL36α与NHK细胞相互作用的结果，图16C-16D示出示出人源化抗体hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2、hz72C1-2.3、hz84C4-1.1、hz84C4-1.2、hz84C4-1.3、hz84C4-1.4、hz84C4-1.5、hz84C4-2.1、hz84C4-2.2、hz84C4-2.3、hz84C4-2.4和hz84C4-2.5阻断hIL36β与NHK细胞相互作用的结果，图16E-16F示出人源化抗体hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2、hz72C1-2.3、hz84C4-1.1、hz84C4-1.2、hz84C4-1.3、hz84C4-1.4、hz84C4-1.5、hz84C4-2.1、hz84C4-2.2、hz84C4-2.3、hz84C4-2.4和hz84C4-2.5阻断hIL36γ与NHK细胞相互作用的结果，图16G-16H示出人源化抗体hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2、hz72C1-2.3、hz84C4-1.1、hz84C4-1.2、hz84C4-1.3、hz84C4-1.4、hz84C4-1.5、hz84C4-2.1、hz84C4-2.2、hz84C4-2.3、hz84C4-2.4和hz84C4-2.5阻断hIL36αβγ与NHK细胞相互作用的结果，BI655130的阻断作为对照示出，IgG4的阻断作为阴性对照示出。
发明详述
应当理解，本申请所用的术语只是为了描述具体实施例，并非旨在进行限制。除非另有定义，否则本文使用的所有技术和科学术语的含义与本公开所属领域的普通技术人员通常所理解的含义相同。
“IL-36R”是指IL-36受体，也称为白介素1受体样2(IL1RL2)或IL-1受体相关蛋白2(IL-1Rrp2)，包括IL-36R的变体、亚型、同源物、直系同源物和旁系同源物。例如，在一些实施例中，对人IL-36R蛋白特异的抗体可以在某些情况下与另一物种(例如猴)的IL-36R蛋白发生交叉反应。在另一些实施方案中，对人IL-36R蛋白特异的抗体可以完全地对人IL-36R蛋白特异而不与其他物种或其他类型的蛋白发生交叉反应，或者仅与某些其他物种但并非所有其他物种的IL-36R蛋白发生交叉反应。
术语“人IL-36R”或“hIL-36R”等在本文中可以互换，是指具有人IL-36R氨基酸序列的蛋白，例如SEQ ID NO:75所示的人IL-36R氨基酸序列。术语“猴IL-36R”、“食蟹猴IL-36R”或“CynoIL-36R”等在本文中可以互换，是指具有猴IL-36R氨基酸序列的蛋白，例如SEQ ID NO:78所示的猴IL-36R氨基酸序列。
“抗体”是指具有至少一个抗原(例如，IL-36R)结合结构域的结合蛋白，因此，本公开的抗体涵盖多克隆抗体、单克隆抗体或其片段和单克隆抗体变体或其片段、多特异性抗体、单特异性抗体、单价抗体或单链抗体。本公开的抗体可以衍生自任何物种，包括但不限于小鼠、大鼠、兔、灵长类动物、美洲驼和人。本公开的抗体包括但不限于小鼠抗体、嵌合抗体、人源化抗体和人抗体。除非另有说明，否则本公开的“抗体”包括全长抗体及其任何抗原结合部分(即“抗原结合片段”)或单链。常规的全长抗体是包含两 条重(H)链和两条轻(L)链的糖蛋白，其中重链和轻链通过二硫键连接。每条重链由重链可变区(VH)和重链恒定区组成。重链恒定区由三个结构域组成，即CH1，CH2和CH3。每条轻链由轻链可变区(VL)和轻链恒定区组成。轻链恒定区由一个结构域CL组成。VH和VL区还可以划分为高变区(即，互补决定区(CDR))和序列较为保守的骨架区(FR)。每个VH和VL由三个CDR和四个FR组成，从氨基端到羧基端以FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4的顺序排布。抗体的可变区包含与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子的结合，所述宿主组织或因子包括多种免疫***细胞(例如，效应细胞)和经典补体***的第一成分(C1q)。与此同时，如本领域技术人员所了解的，特殊的“全长抗体”，例如纳米抗体，其仅只有重(H)链而没有轻(L)链。
抗体的“抗原结合片段”或“抗原结合部分”是指抗体中保留特异性结合抗原(例如，IL-36R)功能的一个或多个片段。已证实，抗体的抗原结合功能可以通过全长抗体的片段来实施。涵盖在术语抗体的“抗原结合部分/片段”中的实例包括：(i)Fab片段：由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段；(ii)F(ab')2片段，包含在铰链区通过二硫键连接的两个Fab片段的二价片段；(iii)由VH和CH1结构域组成的Fd片段；(iv)由抗体单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；(v)由VH结构域组成的dAb片段(参见Ward et al.,Nature.341:544-546(1989))；(vi)分离的互补决定区(CDR)；以及(vii)纳米抗体，一种包含单个可变结构域和两个恒定结构域的重链可变区。此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由不同基因编码，但可以采用重组的方法通过合成接头将VH和VL连接成单蛋白链，其中VL和VH配对形成单价分子(称单链Fv(scFv)；参见例如Bird et al.,Science.242:423-426(1988)；Huston et al.,Proc.Natl.Acad.Sci.85:5879-5883(1988))。这些单链抗体也涵盖在术语抗体的“抗原结合部分/片段”中。此外，包含上述抗原结合部分/片段的重组多肽和融合蛋白也涵盖在术语抗原结合部分/片段中。这些抗体片段可以由本领域技术人员已知的常规技术获得，且可以通过与全长抗体相同的方法进行功能筛选。
“分离的抗体”是指基本上不含具有不同抗原特异性的其他抗体的抗体(例如，与IL-36R蛋白特异性结合的分离的抗体基本上不含特异性结合IL-36R蛋白以外抗原的抗体)。但是，特异性结合人IL-36R蛋白的分离抗体可能与其他抗原(例如，来自其他物种的IL-36R蛋白)具有交叉反应性。此外，分离的抗体基本上不含其他细胞成分和/或化学物质。
“小鼠抗体”或“鼠源抗体”是指可变区中骨架区和CDR区均来自小鼠种系免疫球蛋白序列的抗体。此外，如果抗体包含恒定区，则恒定区也来自小鼠种系免疫球蛋白序列。本公开的小鼠抗体可包括不由小鼠种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如，通过体外随机突变或点突变或通过体内体细胞突变引入的突变)，但“小鼠抗体”不包括在小鼠骨架序列中***源自其他哺乳动物种系CDR序列的抗体。
“嵌合抗体”是指通过将来自非人来源的遗传物质和来自人的遗传物质组合而成的抗体。或更笼统地说，嵌合抗体是指具有来自一种物种的遗传物质和来自另一物种的遗传物质的抗体。在本公开中，嵌合抗体也被表示为“xi”。
“人源化抗体”是下述抗体：所述抗体含有衍生自非人抗体的互补决定区(CDR)和衍生自人抗体的骨架区以及恒定区。例如，本文提供的结合IL-36R的人源化抗体可以包含衍生自一种或多种鼠类抗体的CDR以及人骨架区和恒定区。因此，在一些实施方案中，本文提供的人源化抗体与所述抗体的CDR所衍生自的鼠类抗体结合IL-36R上的相同表位。本文提供了示例性人源化抗体。包含本文提供的重链CDR和轻链CDR的另外的结合IL-36R的人源化抗体或其变体可以使用任何人骨架序列产生，并且也包括在本公开中。在一些实施方案中，适用于在本公开中使用的骨架序列包括在结构上与本文提供的骨架序列类似的那些骨架序列。可以在骨架区中进行另外修饰以改变本文提供的抗体的特性。此类另外的骨架修饰可以包括化学修饰，点突变以降低免疫原性或去除T细胞表位，或回复突变为原始种系序列中的残基。在一些实施方案中，此类修饰包括对应于本文示例的突变的那些修饰，包括对种系序列的回复突变。例如，在一些实施方案中，本文提供的人源化抗体的VH和/或VL的人骨架区中的一个或多个氨基酸被回复突变为亲本鼠类抗体中对应的氨基酸。在本公开中，人源化抗体也被表示为“hz”。
“同种型”是指由重链恒定区基因编码的抗体类别(例如，IgM或IgG1)。
“识别……的抗体”和“对……特异的抗体”在本文中与术语“与……特异性结合的抗体”和“特异性结合……的抗体”可互换使用。
“特异性结合人IL-36R”的抗体是指与人IL-36R蛋白(还可能是其他非人物种的IL-36R蛋白)结合 但基本上不结合非IL-36R蛋白的抗体。优选地，抗体以“高亲和力”结合人IL-36R，即以5.0×10 -8M或更小，优选为1.0×10 -8M或更小，更优选为5.0×10 -9M或更小的KD结合人IL-36R。
术语“基本上不结合”蛋白质或细胞是指不与蛋白质或细胞结合，或不以高亲和力与其结合，即以1.0×10 -5M或更大，优选为1.0×10 -4M或更大，更优选为1.0×10 -3M或更大，更优选为1.0×10 -2M或更大的KD结合蛋白质或细胞。
术语“高亲和力”对IgG而言，是指以1.0×10 -6M或更小，1.0×10 -7M或更小，优选为1.0×10 -8M或更小，更优选为5.0×10 -9M或更小的KD结合抗原。但对于其他抗体同种型，“高亲和力”结合可能有所不同。例如，IgM同种型的“高亲和力”结合是指以1.0×10 -6M或更小，优选为1.0×10 -7M或更小，更优选为1.0×10 -8M或更小的KD结合抗原。
“同一性”是指两个核酸序列之间或两个多肽之间的相似性。氨基酸序列的“同一性百分数(％)”是指将待比对序列与本文中所示的具体氨基酸序列进行比对并且如有必要的话为达到最大序列同一性百分数而引入空位后，并且不考虑任何保守置换作为序列同一性的一部分时，待比对序列中与本文中所示的具体氨基酸序列的氨基酸残基相同的氨基酸残基百分数。本公开的序列同一性至少为80％，85％，90％或95％，优选为至少95％，非限制性实施例包括：80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％、100％。同一性的氨基酸序列比对可以采用本领域范围内的多种方式进行，例如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)软件。本领域技术人员可决定用于比对序列的适宜参数，包括在比较序列的全长里获得最大比对需要的任何算法。
术语“EC50”，又称半数有效浓度，是指在特定暴露时间后，能达到50％最大效应的抗体浓度。
术语“IC50”，又称半数抑制浓度，是指相对于不存在抗体的情况，将特异性生物学或生化功能抑制50％的抗体浓度。
术语“抑制”或“阻断”包括部分和完全抑制/阻断。
术语“受试者”包括任何人或非人动物。术语“非人动物”包括所有脊椎动物，例如哺乳动物及非哺乳动物，优选哺乳动物，例如非人灵长类、羊、狗、猫、牛和马。
术语“治疗有效量”是指足以防止或改善疾病或病症相关症状的量，优选引起疾病症状的严重程度降低、无症状期频率和持续时间增加、或防止由疾病引起的损伤或无能的量。治疗有效量与被治疗的疾病相关，其中本领域技术人员可以方便地判别出实际的有效量。
如本文所用，“约”表示在本领域普通技术人员判定的对特定值可以接受的误差范围内，其部分取决于如何测量或测定该值，即测量***的限制。例如，“约”按照本领域实践可表示1倍或超过1倍标准偏差以内。或者，“约”可以表示多至±5％的范围，例如在所给定的具体数值范围±2％范围内、±1％范围内或±0.5％范围内波动。当本申请或权利要求中给出特定值时，除非另有说明，“约”的含义应认为是在该特定值的可接受的误差范围内。在本文中，除非另有说明，步骤参数或条件的值默认均由“约”修饰。
术语“X n”和“Xaa”等同，是指未指定的氨基酸(Unspecified Amino Acid)，通过相关表述中的后续定义来指定其涵盖的范围。
术语“包括”、“含有”或“包含”及其变换形式应理解为“包括但不限于”，意味着除所列出的要素、组分和步骤外，还可涵盖其它未指明的要素、组分和步骤。
除非另外特别说明，否则单数的使用包括复数。除非另外特别说明，否则词语“一个”或“一种”意指“至少一个”或“至少一种”。除非另外说明，短语“至少一个”的含义等同于“一个或多个”的含义，“和/或”的使用意指“和”或者“或”。
本公开的多个方面在以下更加具体地加以描述。
本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段以高亲和力结合IL-36R(例如，人IL-36R和猴IL-36R)。本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段：(a)结合人IL-36R；(b)结合猴IL-36R；(c)阻断IL-36与IL-36R的结合；和/或(d)抑制IL-36/IL-36R信号转导(例如抑制IL-8、IL-6和/或GM-CSF的产生)，更具体地，在OVCAR8细胞和/或NHK细胞中抑制IL-36(hIL36α、hIL36β、hIL36γ)/IL-36R信号转导，抑制IL-8的产生。
优选地，本公开的抗IL-36R抗体是人源化单克隆抗体。此外，本公开的抗IL-36R抗体可以是小鼠、 人或嵌合单克隆抗体。
本公开的示例性抗体或其抗原结合片段按下文和实施例中所述内容进行结构和化学上的表征。抗体或其抗原结合片段包含重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)，所述重链可变区包含VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3(即，重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3)，所述轻链可变区包含VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3(即，轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3)，其中示例性重链可变区、轻链可变区和CDR的氨基酸序列ID(SEQ ID NO.)提供于下表1.1和表1.2中。一些抗体具有相同的CDR，一些抗体具有相同的VH或VL。抗体的重链恒定区可以是包含SEQ ID NO:69所示氨基酸序列的人IgG1重链恒定区、或包含SEQ ID NO:71所示氨基酸序列的人IgG4重链恒定区，或者是与SEQ ID NOs:69或71所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、删除和添加的变体。抗体的轻链恒定区可以是包含SEQ ID NO:73所示氨基酸序列的人κ轻链恒定区，或者是与SEQ ID NO:73所示氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸取代、删除和添加的变体。这些抗体也可以包含小鼠IgG1或小鼠IgG4重链恒定区，和/或小鼠κ轻链恒定区。
本公开的示例性抗体或其抗原结合片段的可变区和CDR的氨基酸序列如表1.1所示。然而，如本领域所公知的，CDR区或“互补决定区”也可以基于重/轻链可变区序列由其他编号***例如Kabat(参见，Kabat等人，免疫学的蛋白质序列，第五版，美国国立卫生研究院，贝塞斯达，马里兰州(1991)、Chothia(参见JMol Biol 273:927-48,1997)、IMGT(Lefranc M.P.，Immunologist，7，132-136(1999)；Lefranc，M.P.等，Dev.Comp.Immunol.，27，55-77(2003)、AbM(Oxford Molecular的AbM抗体建模35软件定义)或Contact(基于对可用复杂晶体结构的分析)编号***/方法确定，CDR区也可以基于Kabat、Chothia、IMGT、AbM和Contact定义规则中的两种或多种组合确定。例如，表1.2中所示的CDR区由Kabat编号***定义。本领域技术人员应当理解的是，除非另有规定，否则术语给定抗体或其区(例如可变区)的“CDR”应了解为涵盖通过任何一种已知方案界定的CDR。在涉及用本申请某些划分定义的具体CDR序列限定抗体时，所述抗体的范围还涵盖了转换为其他任意编号***定义(例如本领域所公知的Kabat、Chothia、IMGT或Contact等定义中的一种或几种的结合)的CDR序列限定的抗体。
表1.1可变区和CDR的氨基酸序列ID(SEQ ID NO.)
表1.2由Kabat编号***定义的CDR的氨基酸序列ID(SEQ ID NO.)
与人IL36R结合的其他抗IL-36R抗体的VH和/或VL序列(或CDR序列)可以与本公开的抗IL-36R抗体的VH和/或VL序列(或CDR序列)“混合并配对”。优选地，当VH和VL链(或其CDR)混合并配对时，特定VH/VL对中的VH序列可以被结构相似的VH序列取代。同样，优选地将特定VH/VL对中的VL序列可以被结构相似的VL序列取代。
因此，在一个实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合片段包括：
(a)重链可变区，其包含列于表1.1中的氨基酸序列，和
(b)轻链可变区，其包含列于表1.1中的氨基酸序列，或另一种抗IL-36R抗体的VL；其中该抗体或 其抗原结合片段特异性结合人IL36R。
在另一个实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合片段包括：
(a)列于表1.1或表1.2的VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3，和
(b)列于表1.1或表1.2的VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，或另一种抗IL-36R抗体的轻链可变区的CDR；其中该抗体或其抗原结合片段特异性结合人IL36R。在另一个实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合片段包括本公开的抗IL-36R抗体的重链可变区的CDR2以及其他结合人IL-36R抗体的CDR，例如，另一抗IL-36R抗体的重链可变区的CDR1和/或CDR3，和/或轻链可变区的CDR1，CDR2和/或CDR3；其中该抗体或其抗原结合片段特异性结合人IL36R。
此外，本领域内公知，不依赖于CDR1和/或CDR2结构域，CDR3结构域可以单独确定抗体对同种抗原的结合特异性，并且基于共同的CDR3序列可以预测性地产生具有相同结合特异性的多种抗体。在一个实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合片段包括本公开的抗IL-36R抗体的重和/或轻链可变区的CDR3以及其他结合人IL-36R抗体的CDR，例如，另一抗IL-36R抗体的重链可变区的CDR1和/或CDR2，和/或轻链可变区的CDR1和/或CDR2；其中该抗体或其抗原结合片段特异性结合人IL36R。在另一个实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合片段包含本公开的抗IL-36R抗体的重链可变区的CDR2，以及本公开的抗IL-36R抗体的重和/或轻链可变区的CDR3或另一种抗IL-36R抗体的重和/或轻链可变区的CDR3，其中该抗体或其抗原结合片段特异性结合人IL-36R。优选地，这些抗体与本公开的抗IL-36R抗体(a)竞争结合IL36R；(b)保留功能特征；(c)结合相同的表位；和/或(d)具有相似的结合亲和力。在另一个实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合片段进一步包含本公开的抗IL-36R抗体的轻链可变区的CDR2或另一种抗IL-36R抗体的轻链可变区的CDR2，其中该抗体或其抗原结合片段特异性结合人IL36R。在另一个实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合片段进一步包括本公开的抗IL-36R抗体的重和/或轻链可变区的CDR1或另一种抗IL-36R抗体的重和/或轻链可变区的CDR1，其中该抗体或其抗原结合片段特异性结合人IL36R。
在另一个实施方案中，本公开的抗体或其抗原结合片段包含不同于本公开的抗IL-36R抗体的重和/或轻链可变区的CDR1，CDR2和CDR3序列，所述不同源自一个或多个保守修饰。本领域应理解，一些保守的序列修饰不会使抗原结合性消失。
因此，在一个实施方式中，本公开的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和/或轻链可变区，重链可变区和轻链可变区分别包含CDR1、CDR2和CDR3，其中：
(a)重链可变区的CDR1序列包含表1.1或表1.2列出的序列，和/或其保守修饰；和/或
(b)重链可变区的CDR2序列包含表1.1或表1.2列出的序列，和/或其保守修饰；和/或
(c)重链可变区的CDR3序列包含表1.1或表1.2列出的序列，和/或及其保守修饰；和/或
(d)轻链可变区的CDR1和/或CDR2和/或CDR3序列包含表1.1或表1.2列出的序列；和/或其保守修改；且
(e)抗体特异性结合人IL36R。
术语“保守序列修饰”是指不显著影响或改变抗体结合特性的氨基酸修饰。这样的保守修饰包括氨基酸取代、添加和删除。可以通过本领域已知的标准技术将修饰引入本公开的抗体中，例如点突变和PCR介导的突变。保守氨基酸取代是指氨基酸残基被具有相似侧链的氨基酸残基取代。具有相似侧链的氨基酸残基组在本领域中已知。这些氨基酸残基组包括具有碱性侧链(例如，赖氨酸，精氨酸，组氨酸)，酸性侧链(例如，天冬氨酸，谷氨酸)，不带电极性侧链(例如，甘氨酸，天冬酰胺，谷氨酰胺，丝氨酸，苏氨酸，酪氨酸，半胱氨酸，色氨酸)，非极性侧链(例如，丙氨酸，缬氨酸，亮氨酸，异亮氨酸，脯氨酸，苯丙氨酸，甲硫氨酸)，β支链侧链(例如，苏氨酸，缬氨酸，异亮氨酸)和芳香族侧链(例如，酪氨酸，苯丙氨酸，色氨酸，组氨酸)的氨基酸。因此，本公开的抗体的CDR中一个或多个氨基酸残基可以被同一侧链组的其他氨基酸残基取代，且得到的抗体可以使用本文所述的功能检测方法对其进行保留功能的检测。
本公开的抗体可以用具备本公开的抗IL-36R抗体的一个或多个VH/VL序列的抗体作为起始材料来工程化产生修饰抗体。可以对抗体的一个或两个可变区(即，VH和/或VL)内(例如，在一个或多个CDR区和/或一个或多个骨架区)的一个或多个残基进行工程化修饰。此外或可替代地，可以对恒定区中的残基进行修饰，以例如改变抗体的效应功能。
某些实施方案中，CDR移植可以用来修饰抗体的可变区。抗体主要通过位于重链和轻链的六个互补决 定区(CDR)中的氨基酸残基与靶抗原进行相互作用。因此，CDR内的氨基酸序列比CDR外的氨基酸序列在各种抗体之间更加地多样。因为CDR序列负责主要的抗体-抗原相互作用，可以通过构建这样的表达载体，其中特定天然抗体的CDR序列移植到具有不同特性的另一抗体的骨架区序列，来表达模拟特定天然抗体特性的重组抗体(参见，例如，Riechmann et al.,(1998)Nature 332:323-327；Jones et al.,(1986)Nature 321:522-525；Queen et al.,(1989)Proc.Natl.Acad.另外参见U.S.A.86:10029-10033；美国专利5,225,539；5,530,101；5,585,089；5,693,762和6,180,370)
因此，本公开的另一些实施方案涉及分离的单克隆抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和/或轻链可变区，所述重链可变区包含本公开上述的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，轻链可变区包含本公开上述的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3。尽管这些抗体包含本公开的单克隆抗体VH和VL的CDR序列，它们可以含有不同的骨架序列。
这样的骨架序列可以从包括抗体基因序列的公开DNA数据库或参考文献中获得。例如，用于人重链可变区基因和人轻链可变区基因的DNA序列可以在Vbase人种系序列数据库(www.mrc-cpe.cam.ac.uk/vbase)以及Kabat et al.,(1991)，同上；Tomlinson et al.,(1992)J.Mol.Biol.227:776-798；and Cox et al.,(1994)Eur.J.Immunol.24:827-836文献中获得，其内容各以引用的方式明确地并入本文。另一个实施方案中，用于人重链可变区和人轻链可变区基因的DNA序列可以在Genbank数据库中获得。使用本领域技术人员所熟知的Gapped BLAST序列相似性搜索方法(Altschul et al.,(1997)，同上)，将抗体蛋白序列与编译蛋白序列的数据库进行比较。
本公开所用的抗体骨架序列，优选在结构上与本公开的抗体骨架序列相似的那些。可以将VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3序列移植到与得到该骨架序列的种系免疫球蛋白基因中具有相同序列的骨架区中，或者CDR序列可以移植到包含与种系序列相比具有一个或多个突变的骨架区中。例如，在一些情况下，将骨架区中的残基进行突变是有益的，可以保持或增强抗体的抗原结合能力(参见例如美国专利5,530,101；5,585,089；5,693,762和6,180,370)。
另一类可变区修饰是将VH和/或VL的CDR1、CDR2和/或CDR3内的氨基酸残基进行突变，从而改善目标抗体的一种或多种结合特性(例如，亲和力)。可以通过点突变或PCR介导的突变引入突变，并且可以通过本领域已知的体外或体内检测评估突变对抗体结合或其他功能特性的影响。优选地，引入本领域已知的保守修饰。突变可以是氨基酸取代、添加或删除，但优选为取代。此外，通常改变每个CDR内不多于一个、两个、三个、四个或五个残基。
此外，在另一个实施方案中，本公开提供分离的抗IL-36R单克隆抗体或其抗原结合片段，包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区和轻链可变区包含：
(a)VH CDR1，其包含本公开的VH CDR1序列，或具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代、删除或添加的氨基酸序列；
(b)VH CDR2，其包含本公开的VH CDR2序列，或具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代、删除或添加的氨基酸序列；
(c)VH CDR3，其包含本公开的VH CDR3序列，或具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代、删除或添加的氨基酸序列；
(d)VL CDR1，其包含本公开的VL CDR1序列，或具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代、删除或添加的氨基酸序列；
(e)VL CDR2，其包含本公开的VL CDR2序列，或具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代、删除或添加的氨基酸序列；和
(f)VL CDR3，其包含本公开的VL CDR3序列，或具有一个、两个、三个、四个或五个氨基酸取代、删除或添加的氨基酸序列。
本公开的工程化抗体包括在VH和/或VL的骨架区残基中进行修饰以例如改变抗体特性的那些抗体。通常而言，此类骨架区修饰可用来降低抗体的免疫原性。例如，将一个或多个骨架区残基“回复突变”成相应的种系序列。更具体地，经历体细胞突变的抗体可能包含不同于得到该抗体的种系序列的骨架残基。这些残基可以通过将抗体骨架序列与得到该抗体的种系序列相比较而识别出来。
另一类的骨架区修饰包括对骨架区、或者甚至一个或多个CDR的一个或多个残基进行突变，以去除 T细胞表位，从而减少抗体可能导致的免疫原性。该方法也称为“去免疫化”，在美国专利公开20030153043中有更加详细的描述。
此外，作为骨架区或CDR修饰之外的另一种选择，可以对本公开的抗体的Fc进行修饰，通常用来改变抗体的一个或多个功能特性，例如血清半衰期、补体结合、Fc受体结合、和/或抗体依赖的细胞毒性。此外，还可以对本公开的抗体进行化学修饰(例如，可以将一个或多个化学功能基团连接至抗体)，或者修饰以改变其糖基化，来改变抗体的一个或多个功能特性。
在一个实施方案中，对铰链区进行修饰，从而改变(例如增加或减少)铰链区的半胱氨酸残基的数量。该方法在美国专利5,677,425中有具体描述。改变铰链区的半胱氨酸残基的数量，例如可以促进重链和轻链的组装、或增加或降低抗体的稳定性。
在另一个实施方案中，对抗体的Fc-铰链区进行突变，以增加或降低抗体的生物半衰期。更具体地，将一个或多个氨基酸突变引入Fc-铰链片段的CH2-CH3连接区，使得抗体相对于天然Fc-铰链结构域，具有减弱的葡萄球菌A蛋白(SpA)结合力。该方法在美国专利6,165,745中有更详细的描述。
在另一个实施方案中，改变抗体的糖基化。例如，制备去糖基化的抗体(即，抗体缺少糖基化)。这样的糖化修饰可以通过例如改变抗体序列中的一个或多个糖基化位点来实现。例如，可以进行一个或多个氨基酸替换，以消除一个或多个可变区的骨架区的糖基化位点，从而消除该位点的糖基化。这样的去糖基化可以增加抗体对抗原的亲和性。参见，例如美国专利5,714,350和6,350,861。
此外，可以制备糖基化类型改变的抗体，例如岩藻糖残基量减少的低岩藻糖基化抗体，或者具有增加的平分型GlcNac结构的抗体。已经证明这种糖基化类型的改变能增加抗体的ADCC活性。这样的糖修饰可以通过例如在糖基化机制改变的宿主细胞中表达抗体来实现。糖基化机制改变的细胞在本领域中已知，且可以用作表达本公开的重组抗体的宿主细胞，以制备糖基化类型改变的抗体。
抗体的另一种修饰是聚乙二醇化(PEG化)。将抗体PEG化，可以增加抗体的生物(例如，血清)半衰期。为使抗体PEG化，将抗体或其片段与聚乙二醇(PEG)，例如PEG的反应性酯或醛类衍生物，在使一个或多个PEG基团附着于抗体或抗体片段的条件下反应。优选地，通过与反应性PEG分子(或类似的有反应性的水溶性聚合物)的酰化反应或烷化反应进行PEG化。术语“聚乙二醇”包括用于衍生其他蛋白的任何形式的PEG，例如单(C1-C10)烷氧基聚乙二醇或芳氧基聚乙二醇或聚乙二醇-马来酰亚胺。PEG化蛋白的方法在本领域是已知的，且可以用于本公开的抗体。参见，例如EP0154316和EP0401384。
各抗体具有独特的等电点(pI)，通常落在6-9.5的pH范围内。IgG1抗体的pI通常落在7-9.5的pH范围内，而IgG4抗体的pI基本落在6-8的pH范围内。推测pI在正常范围外的抗体在体内可能会发生一些解折叠且不稳定。因此，优选pI值落在正常范围内的抗IL-36R抗体。这可以通过选择pI在正常范围内的抗体或通过突变带电的表面残基来实现。
在另一方面，本公开提供了编码本公开的抗体的重链可变区和/或轻链可变区或CDR的核酸分子。核酸分子可以存在于完整细胞中、细胞裂解液中、或以部分纯化或基本上纯的形式存在。当通过标准技术将核酸分子从其他细胞组分或其他污染物例如其他细胞核酸或蛋白中纯化出来后，核酸分子是“分离的”或“基本上纯的”。本公开的核酸分子可以是DNA或RNA，且可包含或不包含内含子序列。在优选的实施方案中，核酸分子是cDNA分子。
本公开的核酸可以通过标准的分子生物学技术获得。对于由杂交瘤表达的抗体，可以通过标准PCR扩增或cDNA克隆技术获得编码杂交瘤制备的抗体的轻链和重链的cDNA。对于从免疫球蛋白基因文库(例如使用噬菌体展示技术)中获得的抗体，可以从基因文库中回收编码这类抗体的核酸。
优选地，本公开的核酸分子包括编码本公开的抗IL-36R单克隆抗体的VH和VL序列或CDR的那些核酸分子。一旦获得了编码VH和VL的DNA片段，可以通过标准重组DNA技术对这些DNA片段进行进一步操作，例如将可变区基因转变为全长抗体链基因、Fab片段基因或scFv基因。在这些操作中，将编码VH或VL的DNA片段与编码另一蛋白(例如抗体恒定区或柔性接头)的DNA片段可操作地连接。这种情况下所使用的术语“可操作地连接”是指两个DNA片段连接在一起，从而使两个DNA片段编码的氨基酸序列都在阅读框内。
将编码VH的DNA与编码重链恒定区(CH1、CH2和CH3)的另一DNA分子可操作地连接，可以将编码VH的分离的DNA转变成全长重链基因。人重链恒定区基因的序列是本领域已知的，且可以通过标 准PCR扩增获得包括人重链恒定区基因的DNA片段。重链恒定区可以是IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA、IgE、IgM或IgD恒定区，但优选为IgG1或IgG4恒定区。对于Fab片段重链基因，可将编码VH的DNA可操作地连接至仅编码重链CH1恒定区的另一DNA分子。
将编码VL的DNA与编码轻链恒定区CL的另一DNA分子可操作地连接，可以将编码VL的分离的DNA转变成全长轻链基因。人轻链恒定区基因的序列是本领域已知的，且可以通过标准PCR扩增获得包括人轻链恒定区基因的DNA片段。在优选的实施方案中，轻链恒定区可以是κ或λ恒定区。
为了制备scFv基因，将编码VH和VL的DNA片段可操作地连接至编码柔性接头例如编码氨基酸序列(Gly4-Ser)3的另一片段，使得VH和VL序列可以表达为连续的单链蛋白，其中VL和VH区域通过该柔性接头连接(参见，例如Bird et al.,(1988)Science 242:423-426；Huston et al.,(1988)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 85:5879-5883；McCafferty et al.,(1990)Nature 348:552-554)。
本公开的单克隆抗体(mAbs)可以使用本领域熟知的Kohler and Milstein(1975)Nature 256:495的体细胞杂交(杂交瘤)技术进行制备。制备单克隆抗体的其他实施方案包括B淋巴细胞的病毒或致癌性转化以及噬菌体展示技术。嵌合或人源化抗体也是本领域熟知的。参见，例如美国专利4,816,567；5,225,539；5,530,101；5,585,089；5,693,762和6,180,370，其全部内容通过引用的方式明确地并入本文。
本公开的抗体还可以使用例如重组DNA技术结合基因转染的方法，在宿主细胞转染瘤中制备(例如Morrison,S.(1985)Science 229:1202)。在一个实施方案中，将通过标准分子生物技术得到的编码部分或全长轻链和重链的DNA***一个或多个表达载体中，使得基因可操作地连接至转录和翻译调控序列。在这种情况下术语“可操作地连接”是指抗体基因连接到载体中，使得载体内的转录和翻译调控序列行使它们既定的调控抗体基因转录和翻译的功能。
术语“调控序列”包括控制抗体基因转录或翻译的启动子、增强子和其他表达控制元件(例如，多腺苷酸化信号)。这样的调控序列在例如Goeddel(Gene Expression Technology.Methods in Enzymology 185,Academic Press,San Diego,Calif.(1990))中有过描述。优选的，用于哺乳动物宿主细胞表达的调控序列包括在哺乳动物细胞中的引导高水平蛋白表达的病毒元件，例如源自巨细胞病毒(CMV)、猿猴病毒40(SV40)、腺病毒(如腺病毒主要晚期启动子(AdMLP))和多瘤病毒的启动子和/或增强子。或者，可以使用非病毒调控序列，例如泛素启动子或β-珠蛋白启动子。另外，调控元件由不同来源的序列构成，例如SRα启动子***，其包含来自SV40早期启动子的序列和人T细胞白血病病毒1型的长末端重复序列(Takebe et al.,(1988)Mol.Cell.Biol.8:466-472)。选择与所使用的表达宿主细胞相容的表达载体和表达调控序列。
抗体轻链基因和抗体重链基因可以***到同一或不同的表达载体中。在优选的实施方案中，将可变区***到已经编码所需同种型的重链恒定区和轻链恒定区的表达载体中构建全长抗体基因，使VH与载体中的CH可操作地连接，VL与载体中的CL可操作地连接。此外，重组表达载体可以编码促进抗体链从宿主细胞分泌的信号肽。抗体链基因可以克隆到载体中，使得信号肽在阅读框内连接到抗体链基因的氨基端。信号肽可以是免疫球蛋白信号肽或异源信号肽(即，来自非免疫球蛋白的信号肽)。
除抗体链基因和调控序列外，本公开的重组表达载体还可以携带其他序列，例如调控载体在宿主细胞中复制的序列(例如，复制起始点)和可选择标记物基因。
为了表达轻链和重链，通过标准技术将编码重链和轻链的表达载体转染到宿主细胞中。不同形式的“转染”包括多种常用于将外源DNA导入原核或真核宿主细胞的技术，例如，电穿孔、磷酸钙沉淀、DEAE-葡聚糖转染等。尽管在原核或真核宿主细胞中表达本公开的抗体在理论上是可行的，但抗体优选在真核细胞中表达，最优选在哺乳动物宿主细胞中表达，因为真核细胞，特别是哺乳动物细胞，比原核细胞更可能组装抗体并分泌适当折叠且有免疫活性的抗体。优选的用于表达本公开的重组抗体的哺乳动物宿主细胞包括中国仓鼠卵巢(CHO细胞)(包括与DHFR可选择标记物一起使用的dhfr-CHO细胞，在Urlaub and Chasin,(1980)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77:4216-4220中有过描述，DHFR可选择标记物在例如R.J.Kaufman and P.A.Sharp(1982)J.Mol.Biol.159:601-621中描述)、NSO骨髓瘤细胞、COS细胞和SP2细胞。特别是在使用NSO骨髓瘤细胞时，另一优选的表达***是GS基因表达***，记载于WO 87/04462、WO 89/01036和EP 338,841。当编码抗体基因的重组表达载体导入哺乳动物宿主细胞后，通过将宿主细胞培养足以使得宿主细胞中抗体表达、或优选足以使得使抗体分泌到宿主细胞生长的培养基中的一段时间来制备抗体。抗体可以使用标准蛋白纯化方法从培养基中回收得到。
另一方面，本公开提供了药物组合物，其包含一个或多个本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段、多特异性分子、免疫缀合物、CAR-T细胞、基因载体或核酸分子，以及药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。在一些实施方案中，所述药物组合物可以任选地包含一种或多种其他药学上的有效成分，例如另一种抗体(例如抗IgE抗体)或药物。
本公开的药物组合物适合于静脉内、肌内、皮下、肠道外、脊柱或表皮施用(例如通过注射或输注)。基于给药途径，可以将活性成分包被在材料中，以保护其不受酸和可能使其失活的其他自然条件的影响。本文所用的短语“肠道外施用”是指除肠内和局部施用以外的施用方式，通常采用注射，并且包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注。或者，本公开的药物组合物可以通过非肠道外途径施用，例如局部、表皮或粘膜途径施用，如鼻内、口服、***、直肠、舌下或局部施用。
本公开的药物组合物可以为无菌水溶液或分散液的形式。它们也可以配制在微乳剂、脂质体或其他适于高浓度药物的有序结构中。
给药方案经调整提供最佳的所需反应(例如，治疗反应)。例如，可以施用单次大剂量，可以随时间推移施用多个分剂量，或者可以随治疗情况的危急程度成比例降低或提高剂量。特别有利的是，以易于施用和剂量均匀的剂量单位形式配制肠道外施用的组合物。此处所用的剂量单位形式是指适于待治疗受试者的单一剂量的物理上离散的单位，每个单位包含经计算可与所需的药物载体一起产生所需的治疗效果的预定量的活性成分。或者，抗体可以作为缓释剂施用，这种情况下所需的施用频率降低。
对于抗体的施用，剂量可以为0.0001至100mg/kg宿主体重的范围内。
本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段具有多种体外和体内应用，涉及IL-36/IL-36R介导的相关疾病和病症的诊断、治疗和/或预防。本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段、药物组合物、多特异性分子、免疫缀合物、CAR-T细胞、基因载体或核酸分子可以施用至人受试者，以预防、减轻、缓解或治疗所述IL-36/IL-36R介导的相关疾病和病症。
另一方面，本公开提供了一种在受试者中抑制IL-36/IL-36R信号转导的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段、药物组合物、多特异性分子、免疫缀合物、CAR-T细胞、基因载体或核酸分子。在一些实施方案中，所述受试者是人。在一些实施方案中，所述受试者患有自身免疫性疾病、炎性疾病、呼吸***疾病、代谢紊乱或癌症。
另一方面，本公开提供了一种在受试者中治疗或预防IL-36/IL-36R介导的相关疾病和病症的方法，其包括向所述受试者施用治疗有效量的本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段、药物组合物、多特异性分子、免疫缀合物、CAR-T细胞、基因载体或核酸分子。在一些实施方案中，所述受试者是人。
在一些具体的实施方案中，在所述应用和方法中，所述IL-36/IL-36R介导的相关疾病和病症包括自身免疫性疾病、炎性疾病、呼吸***疾病、代谢紊乱或癌症等。在一些具体的实施方案中，在所述应用和方法中，所述IL-36/IL-36R介导的相关疾病和病症包括银屑病、掌跖脓疱病、特异性皮炎、炎性肠病、肾炎、化脓性汗腺炎和/或类风湿性关节炎等。在一些具体的实施方案中，在所述应用和方法中，所述IL-36/IL-36R介导的相关疾病和病症包括癌症，例如实体瘤或非实体瘤。
另一方面，本公开提供了组合疗法，其中本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段与一种或多种其他抗体或其他药物共同施用，所述其他抗体或其他药物能够预防、减轻、缓解或治疗IL-36/IL-36R介导的相关疾病和病症。在一些实施方案中，所述IL-36/IL-36R介导的相关疾病和病症包括自身免疫性疾病、炎性疾病、呼吸***疾病、代谢紊乱或癌症等。
在一些具体的实施方案中，所述IL-36/IL-36R介导的相关疾病和病症包括银屑病、掌跖脓疱病、特异性皮炎、炎性肠病、肾炎、化脓性汗腺炎和/或类风湿性关节炎等。在一些具体的实施方案中，本公开提供了一种在受试者中治疗或预防银屑病、掌跖脓疱病、特异性皮炎、炎性肠病、肾炎、化脓性汗腺炎和/或类风湿性关节炎的方法，其包括向受试者施用本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段和一种或多种另外的抗体，例如IgE抗体、抗IL4抗体、抗IL13抗体和/或抗IL5抗体。在一些具体的实施方案中，本公开提供了一种在受试者中治疗或预防银屑病、掌跖脓疱病、特异性皮炎、炎性肠病、肾炎、化脓性汗腺炎和/或类风湿性关节炎的方法，其包括向受试者施用本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段和一种或多种另外的药物，例如抗过敏药。其他可以与本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段组合的疗法还包括：减 少或避免变应原接触、激素治疗、手术等。在一些实施方案中，所述受试者是人。
在一些具体的实施方案中，所述IL-36/IL-36R介导的相关疾病和病症包括癌症，例如实体瘤或非实体瘤。在一些具体的实施方案中，本公开提供了一种在受试者中治疗或预防癌症的方法，其包括向受试者施用本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段和一种或多种另外的抗体，例如抗PD-1抗体、抗PD-L1抗体和/或抗CTLA-4抗体。在一些具体的实施方案中，本公开提供了一种在受试者中治疗或预防癌症的方法，其包括向受试者施用本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段和一种或多种另外的药物，例如小分子抗癌剂，例如化疗剂。其他可以与本公开的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段组合的疗法还包括：手术和放射治疗等。在一些实施方案中，所述受试者是人。
自身免疫性疾病是指由免疫***过度活化引起的机体攻击和损害自身组织的任何疾病、紊乱或症状，例如，多发性硬化症、硬皮病、哮喘、化脓性汗腺炎、关节炎(包括类风湿性关节炎和银屑病关节炎)、强直性脊柱炎、银屑病(包括寻常型银屑病、脓疱病型银屑病，例如局限性脓疱型银屑病、泛发性脓疱型银屑病(GPP)、掌跖脓疱病(PPP)、***性红斑狼疮(SLE)、克罗恩病和溃疡性结肠炎。
炎性疾病是指由于过度或失控的炎性响应所导致的过度的炎性症状、宿主组织损害或功能丧失的任何疾病、紊乱或症状，包括皮肤、肾、肺、胃肠道和呼吸道的过敏性炎症，例如特应性皮炎、寻常性痤疮、皮疹、过敏性鼻炎、肾炎、炎性肠病(包括克罗恩病和溃疡性结肠炎)、食物过敏和其他过敏。
可以通过本公开的方法治疗的呼吸***疾病的实例包括但不限于：哮喘和慢性阻塞性肺病(COPD)。
癌症指一群广泛的各种疾病，其特征在于身体中异常细胞不受控制的生长。“癌症”或“癌症组织”可包括肿瘤。可以通过本公开的方法治疗的癌症包括但不限于：癌(carcinomas)、肉瘤、淋巴瘤、母细胞瘤及白血病。
本文讨论的治疗剂的组合可以作为在药学可接受载体中的单一组合物同时施用，或者作为分开的组合物同时施用，其中各药剂处于药学可接受载体中。在另一个实施方案中，治疗剂的组合可以按序施用。
此外，如果进行多次联合疗法施用，且药剂按序施用，则在各时间点的按序施用的次序可以反转或保持相同，按序施用可以与同时施用或其任何组合相结合。
尽管为了清楚理解的目的，已经通过举例说明和实施例详细地描述了前述发明，但是根据本公开的教义，本领域的普通技术人员将显而易见的是，可另外对本公开进行某些改变和修改而不背离所附权利要求的精神和范围。本公开通过以下实施例进一步说明，并非旨在进行限制。本领域的技术人员将容易地识别多种非关键性参数，所述参数可发生改变或修改以产生基本上类似的结果。
除非另外指出，否则本公开的实践将采用本领域技术范围内的蛋白质化学、生物化学、重组DNA技术和药理学的常规方法。
实施例
实施例1检测蛋白的制备
hIL36R-ECD mFc重组蛋白(SEQ ID NO:76)由hIL-36R胞外区和小鼠抗体重链Fc组成，hIL36R-ECD hFc重组蛋白(SEQ ID NO:77)由hIL-36R胞外区和人抗体重链Fc组成，CynoIL36R-ECD mFc重组蛋白(SEQ ID NO:79)由食蟹猴IL-36R胞外区和小鼠抗体重链Fc组成，CynoIL36R-ECD hFc重组蛋白(SEQ ID NO:80)由食蟹猴IL-36R胞外区和人抗体重链Fc组成。编码上述重组蛋白的cDNA通过基因合成获得，并且分别被亚克隆到表达载体pcDNA3.1(Invitrogen V-790)中，然后将表达载体转染到ExpiCHO细胞中进行瞬时表达。ExpiCHO细胞培养7天后，分别用Protein A柱(GE healthcare)纯化细胞培养上清液中的hIL36R-ECD mFc、CynoIL36R-ECD mFc、hIL36R-ECD hFc和CynoIL36R-ECD hFc重组蛋白，用于后期筛选检测。
实施例2杂交瘤抗IL-36R单克隆抗体的制备
以Human IL-1Rrp2/IL-1R6 Protein,His Tag(ACROBiosystems，IL2-H52H6)蛋白(100μg/鼠)作为免疫原，将其与等体积的完全弗氏佐剂(首次免疫)或不完全弗氏佐剂(加强免疫)充分混合并乳化，每2周皮下免疫BALB/c小鼠，持续6周。细胞融合前3天，腹腔注射不含佐剂的免疫原(50μg/鼠)。选择血清抗体滴度高且增长趋于平缓的小鼠，在无菌环境中分离出小鼠脾淋巴细胞。采用电融合的方法将免疫小 鼠的脾淋巴细胞(1×10 8个)与骨髓瘤细胞Sp2/0(5×10 7个)细胞进行融合，得到杂交瘤细胞。融合后，用HAT完全培养基重悬杂交瘤细胞，然后将杂交瘤细胞以1×10 7个/孔加到96孔板中，并在37℃、含5％CO 2的培养箱中培养。融合后的第6天～7天，去除培养基，每孔加入200μL HAT完全培养基，在37℃、含5％CO 2的培养箱中培养1天，然后收集96孔板中的培养上清，通过ELISA检测其中的抗体与hIL-36R的结合活性(方法参见实施例5)，通过FACS检测其中的抗体与过表达hIL-36R或CynoIL-36R细胞的结合活性(方法参见实施例6)，采用FACS检测其中的抗体阻断IL36蛋白与过表达hIL-36R或CynoIL-36R细胞结合的功能(方法参见实施例7)。筛选具有结合活性和阻断功能的抗体，将其对应的克隆，例如克隆72C1、84C4、74B4D6、58A8D1和6G10，再通过有限稀释法进行亚克隆。
实施例3嵌合抗hIL-36R抗体的构建和表达
使用总RNA提取试剂盒(Takara,Cat:9767)从实施例2筛选的杂交瘤细胞中分离出总RNA作为模板，使用superscript III逆转录酶(Thermo，18080051)合成第一链cDNA。以第一链cDNA作为模板，然后使用简并小鼠IgG引物通过PCR反应扩增抗体的可变区序列。将PCR混合物在含有0.5μg/mL溴化乙锭的1％琼脂糖/Tris-硼酸盐凝胶中进行电泳分离。确定扩增产物片段的位置，采用PCR产物回收试剂盒(康宁，AP-PCR-250)对PCR产物进行回收纯化。将纯化的PCR产物克隆到pMD-19T载体(Takara，6013)中，然后转化到DH5α感受态大肠杆菌细胞(Takara，9057)中。通过菌落PCR筛选阳性克隆，并对阳性克隆进行DNA测序，得到抗体的重链可变区序列和轻链可变区的序列，如72C1(SEQ ID NOs:7和15)、84C4(SEQ ID NOs:27和39)、74B4D6(SEQ ID NOs:51和52)、58A8D1(SEQ ID NOs:59和60)和6G10(SEQ ID NOs:67和68)。
将小鼠抗体的VL区基因合成片段连接到人κ轻链恒定区来构建嵌合轻链，将小鼠抗体的VH区基因合成片段连接到人IgG4重链恒定区来构建嵌合重链。将包含嵌合轻链DNA的载体和包含嵌合重链DNA的载体转染至Expi CHO细胞进行瞬时表达，Expi CHO细胞培养7天后，用Protein A柱(GE healthcare)纯化细胞培养上清液中的嵌合抗体。其中，所述人κ轻链恒定区具有SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列，所述人IgG4重链恒定区具有SEQ ID NO:71所示的氨基酸序列。本公开的“xi”表示嵌合抗体，例如xi72C1表示嵌合72C1抗体。
实施例4抗IL-36R抗体的亲和力测定
通过ForteBio分子相互作用仪检测抗IL-36R抗体与CynoIL36R-ECD mFc和Human IL-1Rrp2/IL-1R6 Protein,His Tag(ACROBiosystems，IL2-H52H6)的亲和力。首先，将ProA生物传感器(SARTORIUS，18-5010)活化，然后将生物传感器浸入含有5μg/mL本公开的抗IL-36R抗体或参照抗体(Boehringer Ingelheim公司的BI655130，内部制备，其重链和轻链的氨基酸序列见SEQ ID NOs:81和83)的溶液中，用以捕获抗IL36R抗体。再用生物传感器去结合梯度稀释(初始浓度为200nM，2倍梯度稀释)的CynoIL36R-ECD mFc或Human IL-1Rrp2/IL-1R6 Protein,His Tag，利用Fortebio分子相互作用仪(SARTORIUS，octet red 96e)实时检测反应信号从而获得结合和解离曲线。每个循环解离完成后，将生物传感器再生，继而进行下一次捕获，循环往复完成不同抗IL-36R抗体对IL-36R亲和力的测定。通过Fortebio Data Analysis 11.0软件以1:1(Langmuir)结合模型分析所得数据，来测定k a(k on)和k d(k off)值，并通过K D＝k d/k a计算解离常数K D。检测方法基本上遵循制造商的建议，更多信息参见www.fortebio.com。嵌合抗IL-36R抗体对人IL36R抗原的亲和力见表2.1和表2.2。
表2.1嵌合抗IL-36R抗体与hIL-36R的亲和力
表2.2嵌合抗IL-36R抗体与hIL-36R的亲和力
实施例5抗IL-36R抗体基于ELISA的结合分析
以human IL-1Rrp2/IL-1R6 Protein,His Tag(ACROBiosystems，IL2-H52H6)和CynoIL36R-ECD mFc(用于嵌合抗体和人源化抗体的检测)，以及hIL36R-ECD hFc和CynoIL36R-ECD hFc蛋白(用于杂交瘤抗体的检测)作为抗原，通过ELISA分析抗IL-36R抗体与IL-36R的结合活性。将2μg/mL的抗原以100μL/孔包被于96孔板(Costar，9018)中，4℃孵育过夜。洗涤缓冲液(含0.05％v/v吐温20的PBS)洗涤96孔板后，加入封闭缓冲液(含2％牛血清白蛋白的PBS)，于37℃封闭2小时。洗涤缓冲液洗涤96孔板后，每孔加入100μL梯度稀释的本公开的抗IL-36R抗体或参照抗体BI655130(抗体的初始浓度为66nM，4倍梯度稀释)，于室温孵育1小时。洗涤缓冲液洗涤96孔板后，每孔加入100μL偶联辣根过氧化物酶的重组蛋白A/G(TheroScientific，32490)，于室温孵育1小时。洗涤缓冲液洗涤96孔板后，每孔加入100μL TMB溶液(Thermo，00-4201-56)，于室温孵育2分钟。最后每孔加入100μL终止溶液(2N H 2SO 4)以终止反应。使用酶标仪(PE，Envision)在450nm处读取吸光度，使用GraphPad Prism分析所得数据，并计算EC50。嵌合抗IL-36R抗体在ELISA实验中与hIL-36R的结合EC50见图1，嵌合抗IL-36R抗体在ELISA实验中与CynoIL-36R的结合EC50见图2，BI655130的结合作为对照示出，IgG4的结合作为阴性对照示出。
实施例6抗IL-36R抗体基于细胞的结合分析
基于FACS的方法，分析抗IL-36R抗体与过表达人IL-36R(SEQ ID NO:75)的细胞系(293T-hIL36R-NFκB)和过表达食蟹猴IL-36R(SEQ ID NO:78)的细胞系(293T-CynoIL36R-NFκB)的结合活性。按照lipofectamine 3000转染试剂(Thermo，L3000015)的说明书，将质粒pGL4.32[luc2P/NF-κB-RE/Hygro]Vector(Promega，E8491)转染到HEK293T细胞中，得到293T-NFκB稳定细胞系。然后，在pcDNA3.1/Zeo(+)载体的BamHI以及XhoI位点分别***hIL-36R和CynoIL-36R的编码序列，得到重组质粒pcDNA3.1/Zeo(+)-hIL36R和pcDNA3.1/Zeo(+)-CynoIL36R。按照lipofectamine 3000转染试剂(Thermo，L3000015)的说明书，分别将两个重组质粒转染到293T-NFκB稳定细胞系中，得到293T-hIL36R-NFκB细胞系和293T-CynoIL36R-NFκB细胞系。
取指数生长期状态良好的293T-hIL36R-NFκB细胞和293T-CynoIL36R-NFκB细胞，分别以2x10 5个/孔加到96孔培养板中，弃上清，然后将梯度稀释的本公开的抗IL-36R抗体或参照抗体BI655130(在293T-hIL36R-NFκB结合试验中：抗体的初始浓度为20μg/mL，3倍梯度稀释；在293T-CynoIL36R-NFκB结合试验中：抗体的初始浓度为40μg/mL，2倍梯度稀释)添加到96孔培养板中，于室温孵育60分钟。PBS洗涤细胞后，每孔加入100μL按照1:200稀释的goat-anti-human IgG二抗(Jackson，109-116-170)，于室温孵育30分钟。PBS洗涤细胞后，用100μL PBS重悬细胞，然后使用流式细胞仪(BD，Accuri C6)检测荧光信号。通过染色的平均荧光强度(MFI)来测量抗IL-36R抗体与293T细胞表面的hIL36R和CynoIL36R的结合能力，倍数(Ratio)为实验组平均荧光强度(MFI)/背景MFI的比值，并使用GraphPad Prism分析所得数据。嵌合抗IL-36R抗体与293T-hIL36R-NFκB细胞上hIL-36R的结合EC50见图3A-3B，嵌合抗IL-36R抗体与293T-CynoIL36R-NFκB细胞上CynoIL-36R的结合EC50见图4，BI655130的结合作为对照示出，IgG4的结合作为阴性对照示出。
实施例7抗IL-36R抗体阻断IL36α、IL36β和IL36γ与过表达人IL-36R的细胞系和过表达食蟹猴IL-36R的细胞系相互作用的分析
基于化学发光的检测方法，分析抗IL-36R抗体阻断hIL36α(R&D，6995-IL-010)、hIL36β(R&D， 6834-ILB-025)和hIL36γ(R&D，6835-IL-010)与过表达人IL36R的细胞系(293T-hIL36R-NFκB)和过表达食蟹猴IL36R的细胞系(293T-CynoIL36R-NFκB)相互作用的功能。293T-hIL36R-NFκB和293T-CynoIL36R-NFκB细胞系的制备方法参见实施例6。当hIL36α、hIL36β或hIL36γ蛋白与细胞表面的IL-36R结合后，招募293T细胞表面天然的IL-1RAcP蛋白，共同作用激活下游NFκB信号通路，诱导Luciferase表达，并与检测底物反应产生荧光信号。因此，当检测体系中存在抗IL-36R抗体，其能够阻断hIL36α、hIL36β和hIL36γ与IL-36R结合，导致检测信号减弱。
取指数生长期状态良好的293T-hIL36R-NFκB细胞和293T-CynoIL36R-NFκB细胞，分别用培养基稀释至浓度为2.5×10 5个/mL，以5μL/孔接种于384孔板中。然后每孔加入15μL梯度稀释的本公开的抗IL-36R抗体或参照抗体BI655130(在293T-hIL36R-NFκB试验中：抗体的初始浓度为20μg/mL，3倍梯度稀释；在293T-CynoIL36R-NFκB试验中：抗体的初始浓度为40μg/mL，2倍梯度稀释)，于37℃、含CO 2的培养箱中孵育60分钟。孵育结束后，每孔加入5μL的hIL36α、hIL36β、hIL36γ或hIL36αβγ(在293T-hIL36R-NFκB试验中：hIL36α的终浓度为100ng/mL，hIL36β的终浓度为20ng/mL，hIL36γ的终浓度为10ng/mL，hIL36αβγ是由hIL36α、hIL36β和hIL36γ溶液混合而成，其中三者的终浓度分别是100ng/mL、20ng/mL和10ng/mL；在293T-CynoIL36R-NFκB试验中：hIL36α的终浓度为3.33ng/mL，hIL36β的终浓度为1ng/mL，hIL36γ的终浓度为0.006ng/mL，hIL36αβγ是由hIL36α、hIL36β和hIL36γ溶液混合而成，其中三者的终浓度分别是3.33ng/mL、1ng/mL和0.006ng/mL)，低速离心混匀，于37℃、含CO 2的培养箱中孵育过夜。然后，每孔加入25μL ONE-Glo TM Luciferase Assay(Promega，E6120)，避光反应2-5分钟，通过酶标仪(PE，Envision)读取化学发光信号。使用GraphPad Prism分析所得数据，并计算IC50值和抑制率(抑制率＝(不加抗体组发光值-抗体组发光值)/(不加抗体组发光值-空白对照组发光值)×100％)。嵌合抗IL-36R抗体阻断hIL36α、hIL36β和hIL36γ蛋白与293T-hIL36R-NFκB细胞上hIL-36R相互作用的结果依次见图5A-5B、5C-5D和5E-5F，嵌合抗IL-36R抗体阻断hIL36α、hIL36β和hIL36γ蛋白与293T-CynoIL36R-NFκB细胞上CynoIL-36R相互作用的结果依次见图6A、6B和6C。
实施例8抗IL-36R抗体阻断IL36α、IL36β和IL36γ蛋白与天然表达IL36R蛋白的OVCAR8或NHK细胞相互作用的分析
基于ELISA的检测方法，分析抗IL-36R抗体阻断hIL36α(R&D，6995-IL-010)、hIL36β(R&D，6834-ILB-025)和hIL36γ(R&D，6835-IL-010)与天然表达IL-36R的人卵巢癌细胞OVCAR8(购买自南京科佰)和正常人表皮角质形成细胞keratinocytes(也称为NHK细胞，购买自ATCC)相互作用的功能。当hIL36α、hIL36β或hIL36γ蛋白与细胞表面的IL-36R结合后，招募IL-1RAcP蛋白，诱导下游信号通路产生细胞因子IL-8。因此，当检测体系中存在抗IL-36R抗体，其能够阻断hIL36α、hIL36β和hIL36γ与IL-36R结合，抑制IL-8的产生。
取指数生长期状态良好OVCAR8细胞和NHK细胞，分别用培养基稀释至浓度为1×10 5个/mL，以100μL/孔接种于96孔板(即每孔10000个细胞)，于37℃、含CO 2的培养箱中培养过夜。弃上清，每孔加入100μL培养基。然后每孔加入50μL梯度稀释的本公开的抗IL-36R抗体或参照抗体BI655130(抗体的初始浓度为1000ng/mL，3倍梯度稀释)，于37℃、含CO 2的培养箱中孵育60分钟。孵育结束后，每孔加入50μL的hIL36α、hIL36β、hIL36γ或hIL36αβγ(hIL36α的终浓度为15ng/mL，hIL36β的终浓度为4ng/mL，hIL36γ的终浓度为2ng/mL，hIL36αβγ是由hIL36α、hIL36β和hIL36γ溶液混合而成，其中三者的终浓度分别是15ng/mL、4ng/mL和2ng/mL)，低速离心混匀，于37℃、含CO 2的培养箱中孵育48小时。收集上清，按照IL-8检测试剂盒(R&D，DY208)的说明书检测检测96孔板上清中IL-8的含量，通过酶标仪(PE，Envision)读取OD450值。使用GraphPad Prism分析所得数据，并计算IC50值和抑制率(抑制率＝(不加抗体组发光值-抗体组发光值)/(不加抗体组发光值-空白对照组发光值)×100％)。嵌合抗IL-36R抗体阻断hIL36α、hIL36β和hIL36γ与OVCAR8细胞相互作用的结果依次见图7A-7B、7C-7D和7E-7F，嵌合抗IL-36R抗体阻断hIL36α、hIL36β和hIL36γ与NHK细胞相互作用的结果依次见图8A-8B、8C和8D。
实施例9小鼠抗IL-36R单克隆抗体的人源化
选取小鼠抗体72C1和84C4进行人源化设计。采用CDR graft方法，筛选可用于小鼠抗体人源化的人类种系抗体骨架区。通过筛选与小鼠抗体可变区氨基酸序列具有最高序列同一性的人类种系抗体或其亚型，将小鼠抗体的CDR***到筛选的骨架区中。并进一步突变骨架区和/或CDR区的残基，以获得更多候选抗体。小鼠抗体72C1一共获得6个人源化抗体，小鼠抗体84C4一共获得10个人源化抗体，人源化抗体的重链可变区和轻链可变区的氨基酸序列如下所示：
hz72C1-1.1(SEQ ID NOs:9，17)、hz72C1-1.2(SEQ ID NOs:11，17)、hz72C1-1.3(SEQ ID NOs:13，17)、hz72C1-2.1(SEQ ID NOs:9，19)、hz72C1-2.2(SEQ ID NOs:11，19)、hz72C1-2.3(SEQ ID NOs:13，19)；hz84C4-1.1(SEQ ID NOs:29，41)、hz84C4-1.2(SEQ ID NOs:31，41)、hz84C4-1.3(SEQ ID NOs:33，41)、hz84C4-1.4(SEQ ID NOs:35，41)、hz84C4-1.5(SEQ ID NOs:37，41)、hz84C4-2.1(SEQ ID NOs:29，43)、hz84C4-2.2(SEQ ID NOs:31，43)、hz84C4-2.3(SEQ ID NOs:33，43)、hz84C4-2.4(SEQ ID NOs:35，43)、hz84C4-2.5(SEQ ID NOs:37，43)。
将人源化抗体的VL区基因合成片段连接到人κ轻链恒定区来构建人源化轻链，将人源化抗体的VH区基因合成片段连接到人IgG4重链恒定区来构建人源化重链。将包含人源化轻链DNA的载体和包含人源化重链DNA的载体转染至ExpiCHO细胞进行蛋白表达，ExpiCHO细胞培养7天后，用Protein A柱(GE healthcare)对细胞培养上清液中的人源化抗体进行纯化。其中，所述人κ轻链恒定区具有SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列，所述人IgG4重链恒定区具有SEQ ID NO:71所示的氨基酸序列。本公开中的“hz”表示人源化抗体，例如hz72C1表示人源化72C1抗体。
实例10人源化抗IL-36R抗体的生物学功能分析
按照实施例4、实施例5、实施例6、实施例7和实施例8的方法对人源化抗体hz72C1-1.1、hz72C1-1.2、hz72C1-1.3、hz72C1-2.1、hz72C1-2.2和hz72C1-2.3以及hz84C4-1.1、hz84C4-1.2、hz84C4-1.3、hz84C4-1.4、hz84C4-1.5、hz84C4-2.1、hz84C4-2.2、hz84C4-2.3、hz84C4-2.4和hz84C4-2.5进行亲和力、结合和阻断分析。人源化抗IL-36R抗体对hIL-36R和CynoIL-36R的亲和力见表3.1和表3.2。
表3.1人源化抗IL-36R抗体与hIL-36R和CynoIL-36R的亲和力
注：“/”表示未检测
表3.2人源化抗IL-36R抗体与hIL-36R的亲和力
人源化抗IL-36R抗体在ELISA实验中与hIL-36R的结合EC50见图9A-9B，人源化抗IL-36R抗体在ELISA实验中与CynoIL-36R的结合EC50见图10。
人源化抗IL-36R抗体与293T-hIL36R-NFκB细胞上hIL-36R的结合EC50见图11A-11B，人源化抗IL-36R抗体293T-CynoIL36R-NFκB细胞上CynoIL-36R的结合EC50见图12A-12B。
人源化抗IL-36R抗体阻断hIL36α、hIL36β、hIL36γ和hIL36αβγ蛋白与293T-hIL36R-NFκB细胞上hIL-36R相互作用的结果依次见图13A-13B、13C-13D、13E-13F和13G-13H，以及表4.1和表4.2。
表4.1人源化抗IL-36R抗体阻断hIL36α、hIL36β、hIL36γ和hIL36αβγ与293T-hIL36R-NFκB细胞上hIL-36R相互作用的能力
表4.2人源化抗IL-36R抗体阻断hIL36α、hIL36β、hIL36γ和hIL36αβγ与293T-hIL36R-NFκB细胞上hIL-36R相互作用的能力
人源化抗IL-36R抗体阻断hIL36α、hIL36β和hIL36γ蛋白与293T-CynoIL36R-NFκB细胞相互作用的结果依次见图14A、14B和14C，以及表5。
表5人源化抗IL-36R抗体阻断hIL36α、hIL36β和hIL36γ与293T-CynoIL36R-NFκB细胞上CynoIL-36R相互作用的能力
人源化抗IL-36R抗体阻断hIL36α、hIL36β、hIL36γ和hIL36αβγ蛋白与OVCAR8细胞相互作用的结果依次见图15A-15B、15C-15D、15E-15F和15G-15H，以及表6.1和表6.2。
表6.1人源化抗IL-36R抗体阻断hIL36α、hIL36β、hIL36γ和hIL36αβγ与OVCAR8细胞上IL-36R相互作用的能力
表6.2人源化抗IL-36R抗体阻断hIL36α、hIL36β、hIL36γ和hIL36αβγ与OVCAR8细胞上IL-36R相互作用的能力
注：“-”表示未拟合到数据
人源化抗IL-36R抗体阻断hIL36α、hIL36β、hIL36γ和hIL36αβγ蛋白与NHK细胞相互作用的结果依次见图16A-16B、16C-16D、16E-16F和16G-16H，以及表7.1和表7.2。
表7.1人源化抗IL-36R抗体阻断hIL36α、hIL36β、hIL36γ和hIL36αβγ与NHK细胞上IL-36R相互作用的能力
表7.2人源化抗IL-36R抗体阻断hIL36α、hIL36β、hIL36γ和hIL36αβγ与NHK细胞上IL-36R相互作用的能力
实施例11人源化抗IL-36R抗体表达量
编码hz72C1-1.1、hz72C1-1.3、hz84C4-1.1、hz84C4-2.5和参照抗体BI655130的cDNA通过基因合成获得，并且分别被亚克隆到表达载体pcDNA TM 3.1(Invitrogen V-790)中，然后将表达载体转染至ExpiCHO细胞中进行瞬时表达。然后用MabSelect SuRe LX柱(GE healthcare)分别纯化hz72C1-1.1、hz72C1-1.3、hz84C4-1.1、hz84C4-2.5和BI655130。采用超微量分光光度计(Thermo Scientific，Nanodrop2000)检测纯化的抗体的浓度；并采用Superdex 200increase 10/300GL(GE healthcare)分析纯化的抗体的纯度，其中流动相是磷酸盐缓冲液(1X，pH 7.4)，检测波长是A280。结果如表8.1和8.2所示，hz72C1-1.1、hz72C1-1.3、hz84C4-1.1和hz84C4-2.5的瞬时表达量均明显优于BI655130。
表8.1人源化抗IL-36R抗体的表达量及纯度
抗体 瞬转表达量(7天) SEC纯度
BI655130 27mg/L 99.9
hz72C1-1.1 103.5mg/L 98.59
hz72C1-1.3 87mg/L 99.21
表8.2人源化抗IL-36R抗体的表达量及纯度
抗体 瞬转表达量(8天) SEC纯度
BI655130 25mg/L 100
hz84C4-1.1 240mg/L 100
hz84C4-2.5 285mg/L 99.37
实施例12人源化抗IL36R抗体在体内的药代动力学分析
采用ICR小鼠(购买自上海西普尔-必凯实验动物有限公司)作为动物模型，将其随机分为3组，每组6只。实验当天，分别对ICR小鼠尾静脉注射hz72C1-1.1、hz72C1-1.3和参照抗体BI655130，给药剂量为10mg/kg，给药次数为1次。并在给药前0分钟，给药后30分钟、2小时(±1分钟)、8小时(±1分钟)、24小时(±2分钟)、2天(±2分钟)、4天(±2分钟)、7天(±2分钟)、14天(±5分钟)、21天(±5分钟)和28天(±5分钟)时间点进行采血。收集血样，通过离心分离上清，并采用ELISA方法(参见实施例5的方法)检测上清中的血药浓度等指标。hz84C4-1.1和hz84C4-2.5的实验方法与上述方法(即，hz72C1-1.1和hz72C1-1.3的实验方法)一致。
结果如表9.1和表9.2所示，其中，hz72C1-1.1和hz84C4-2.5的PK参数优于BI655130，hz72C1-1.3和hz84C4-1.1的PK参数与BI655130相当。
表9.1人源化抗IL-36R抗体在小鼠体内的PK参数
表9.2人源化抗IL-36R抗体在小鼠体内的PK参数
注：Tmax：达峰时间(peak time)；Cmax：药峰浓度(peak concentration)；AUC：药时曲线下面积(Area under concentration-time curve)；t1/2：半衰期(half-life)；MRT：平均驻留时间(Mean retention time)；CL：清除率(clearance)；Mean±SD：平均值±标准误；d：天；PK：药代动力学或药动学(Pharmacokinetics)
本申请的序列信息总结于下表10中。
表10序列信息汇总
虽然，上文中已经用一般性说明及具体实施方案对本公开作了详尽的描述，但在本公开基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本公开精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本公开要求保护的范围。

Claims (15)

  1. 一种分离的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：
    (i)重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，其中，
    (1)重链CDR1包含如SEQ ID NO:1或85所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1或85具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:2具有至少80％同一性的氨基酸序列，和重链CDR3包含如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:3具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (2)重链CDR1包含如SEQ ID NO:21或86所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:21或86具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:22具有至少80％同一性的氨基酸序列，和重链CDR3包含如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:23具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (3)重链CDR1包含如SEQ ID NO:45或88所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:45或88具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:46具有至少80％同一性的氨基酸序列，和重链CDR3包含如SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:47具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (4)重链CDR1包含如SEQ ID NO:53或89所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:53或89具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:54具有至少80％同一性的氨基酸序列，和重链CDR3包含如SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:55具有至少80％同一性的氨基酸序列；或
    (5)重链CDR1包含如SEQ ID NO:61或90所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:61或90具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:62具有至少80％同一性的氨基酸序列，和重链CDR3包含如SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:63具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (ii)轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3，其中，
    (1)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:4具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:5具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:6具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (2)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:24或87所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:24或87具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:25具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:26具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (3)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:48具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:49具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:50具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (4)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:56具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:57具有至少80％同一性的氨基 酸序列，和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:58具有至少80％同一性的氨基酸序列；或
    (5)轻链CDR1包含如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:64具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:65具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:66具有至少80％同一性的氨基酸序列；或
    (iii)如(i)所示的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，以及如(ii)所示的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；其中，
    SEQ ID NO:2的氨基酸序列为YIX 1YSGYTYYNPSLKS，SEQ ID NO:6的氨基酸序列为QQX 2TTSPYT，其中，X 1＝S或Y，X 2＝F或Y；
    并且，SEQ ID NO:21的氨基酸序列为GYX 3FTSYWMN，SEQ ID NO:22的氨基酸序列为X 4IX 5PYDSETRX 6X 7QKFX 8G，其中，X 3＝F或Y，X 4＝M或Y，X 5＝H或Y，X 6＝L或Y，X 7＝N或A，X 8＝K或Q；
    优选地，SEQ ID NO:2的氨基酸序列为YIX 1YSGYTYYNPSLKS，SEQ ID NO:6的氨基酸序列为QQX 2TTSPYT，其中，i)X1＝S或Y，X2＝F，或ii)X1＝S或Y，X2＝Y；
    并且，SEQ ID NO:21的氨基酸序列为GYX 3FTSYWMN，SEQ ID NO:22的氨基酸序列为X 4IX 5PYDSETRX 6X 7QKFX 8G，其中，i)X 3＝F或Y，X 4＝M或Y，X 5＝H或Y，X 6＝L，X 7＝N或A，X 8＝K，或ii)X 3＝F或Y，X 4＝M或Y，X 5＝H或Y，X 6＝Y，X 7＝N或A，X 8＝Q。
  2. 根据权利要求1所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链CDR1、重链CDR2、重链CDR3、轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3，其中，
    (1)重链CDR1包含如SEQ ID NO:1或85所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1或85具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:2具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR3包含如SEQ ID NO:3所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:3具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:4所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:4具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:5所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:5具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:6具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (2)重链CDR1包含如SEQ ID NO:21或86所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:21或86具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:22所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:22具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR3包含如SEQ ID NO:23所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:23具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:24或87所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:24或87具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:25所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:25具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:26所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:26具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (3)重链CDR1包含如SEQ ID NO:45或88所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:45或88具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:46所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:46具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR3包含如SEQ ID NO:47所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:47具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:48所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:48具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:49所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:49 具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:50所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:50具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (4)重链CDR1包含如SEQ ID NO:53或89所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:53或89具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:54所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:54具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR3包含如SEQ ID NO:55所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:55具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:56所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:56具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:57具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:58所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:58具有至少80％同一性的氨基酸序列；或
    (5)重链CDR1包含如SEQ ID NO:61或90所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:61或90具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR2包含如SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:62具有至少80％同一性的氨基酸序列，重链CDR3包含如SEQ ID NO:63所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:63具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR1包含如SEQ ID NO:64所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:64具有至少80％同一性的氨基酸序列，轻链CDR2包含如SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:65具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链CDR3包含如SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:66具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    其中，
    SEQ ID NO:2的氨基酸序列为YIX 1YSGYTYYNPSLKS，SEQ ID NO:6的氨基酸序列为QQX 2TTSPYT，其中，
    i)X1＝S或Y，X2＝F，或
    ii)X1＝S或Y，X2＝Y；
    并且，SEQ ID NO:21的氨基酸序列为GYX 3FTSYWMN，SEQ ID NO:22的氨基酸序列为X 4IX 5PYDSETRX 6X 7QKFX 8G，其中，
    i)X 3＝F或Y，X 4＝M或Y，X 5＝H或Y，X 6＝L，X 7＝N或A，X 8＝K，或
    ii)X 3＝F或Y，X 4＝M或Y，X 5＝H或Y，X 6＝Y，X 7＝N或A，X 8＝Q。
  3. 一种分离的抗IL-36R抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：
    (1)SEQ ID NO:7所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:15所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
    (2)SEQ ID NO:9所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:17所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
    (3)SEQ ID NO:11所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:17所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
    (4)SEQ ID NO:13所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:17所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
    (5)SEQ ID NO:9所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:19所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
    (6)SEQ ID NO:11所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:19所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
    (7)SEQ ID NO:13所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:19所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
    (8)SEQ ID NO:27所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:39所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
    (9)SEQ ID NO:29所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:41所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
    (10)SEQ ID NO:31所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:41所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
    (11)SEQ ID NO:33所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:41所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
    (12)SEQ ID NO:35所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:41所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
    (13)SEQ ID NO:37所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:41所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
    (14)SEQ ID NO:29所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:43所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
    (15)SEQ ID NO:31所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:43所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
    (16)SEQ ID NO:33所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:43所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
    (17)SEQ ID NO:35所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:43所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
    (18)SEQ ID NO:37所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:43所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
    (19)SEQ ID NO:51所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:52所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；
    (20)SEQ ID NO:59所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:60所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3；或
    (21)SEQ ID NO:67所示重链可变区中的重链CDR1、重链CDR2和重链CDR3，和SEQ ID NO:68所示轻链可变区中的轻链CDR1、轻链CDR2和轻链CDR3。
  4. 根据权利要求1-3中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含：
    (1)重链可变区，所述重链可变区包含如SEQ ID NOs:7、9、11、13、27、29、31、33、35、37、51、59或67所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NOs:7、9、11、13、27、29、31、33、35、37、51、59或67所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (2)轻链可变区，所述轻链可变区包含如SEQ ID NOs:15、17、19、39、41、43、52、60或68所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NOs:15、17、19、39、41、43、52、60或68所示的氨基酸序列具有至少80％同一性的氨基酸序列；或
    (3)如(1)所示的重链可变区以及如(2)所示的轻链可变区。
  5. 根据权利要求1-4中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，所述抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，其中，
    (1)重链可变区包含如SEQ ID NO:7所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:7具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:15所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:15具有至少80％同一性的氨 基酸序列；
    (2)重链可变区包含如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:9具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:17具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (3)重链可变区包含如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:11具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:17具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (4)重链可变区包含如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:13具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:17所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:17具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (5)重链可变区包含如SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:9具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:19具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (6)重链可变区包含如SEQ ID NO:11所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:11具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:19具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (7)重链可变区包含如SEQ ID NO:13所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:13具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:19所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:19具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (8)重链可变区包含如SEQ ID NO:27所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:27具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:39所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:39具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (9)重链可变区包含如SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:29具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:41具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (10)重链可变区包含如SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:31具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:41具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (11)重链可变区包含如SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:33具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:41具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (12)重链可变区包含如SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:35具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:41具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (13)重链可变区包含如SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:37具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:41所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:41具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (14)重链可变区包含如SEQ ID NO:29所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:29具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:43具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (15)重链可变区包含如SEQ ID NO:31所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:31具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:43具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (16)重链可变区包含如SEQ ID NO:33所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:33具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:43具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (17)重链可变区包含如SEQ ID NO:35所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:35具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:43具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (18)重链可变区包含如SEQ ID NO:37所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:37具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:43所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:43具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (19)重链可变区包含如SEQ ID NO:51所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:51具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:52所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:52具有至少80％同一性的氨基酸序列；
    (20)重链可变区包含如SEQ ID NO:59所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:59具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:60所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:60具有至少80％同一性的氨基酸序列；或
    (21)重链可变区包含如SEQ ID NO:67所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:67具有至少80％同一性的氨基酸序列，和轻链可变区包含如SEQ ID NO:68所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:68具有至少80％同一性的氨基酸序列。
  6. 根据权利要求1-5中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段是嵌合或人源化的；
    可选地，所述抗体或其抗原结合片段是IgG1、IgG2或IgG4同种型。
  7. 根据权利要求1-6中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段还包含重链恒定区和轻链恒定区，所述重链恒定区包含SEQ ID NOs:69或71所示的氨基酸序列或与SEQ ID NOs:69或71所示的氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加，所述轻链恒定区包含SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列或与SEQ ID NO:73所示的氨基酸序列相比具有1、2、3、4或5个氨基酸的取代、删除和添加。
  8. 根据权利要求1-7中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段选自单克隆抗体、融合蛋白、重组多肽、多特异性抗体、Fab片段、F(ab')2片段、Fd片段、Fv片段、dAb片段、分离的CDR区、单链Fv分子或其组合。
  9. 一种分离的抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段与权利要求1-8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段结合相同表位，或竞争结合IL-36R。
  10. 一种分离的核酸分子，其编码权利要求1-8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
  11. 一种免疫缀合物或多特异性分子，其包含权利要求1-8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段。
  12. 一种药物组合物，其包含权利要求1-8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。
  13. 一种在有需要的受试者中抑制IL-36/IL-36R信号转导的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的权利要求1-8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，权利要求11所述的免疫缀合物或多特异性分子， 或者权利要求12所述的药物组合物。
  14. 一种在有需要的受试者中治疗IL-36/IL-36R介导的相关疾病和病症的方法，所述方法包括向所述受试者施用治疗有效量的权利要求1-8中任一项所述的抗体或其抗原结合片段，权利要求11所述的免疫缀合物或多特异性分子，或者权利要求12所述的药物组合物。
  15. 根据权利要求14所述的方法，其中所述IL-36/IL-36R介导的相关疾病和病症包括自身免疫性疾病、炎性疾病、呼吸***疾病、代谢紊乱或癌症。
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