CN117402243A - 抗Nectin-4抗体及其应用 - Google Patents

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张慧
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李胜峰
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Abstract

本发明提供了抗Nectin‑4抗体及其应用。本发明的抗Nectin‑4抗体或抗原结合片段可以特异性结合Nectin‑4，具有高亲和力和强内吞能力，可用于肿瘤(包括癌症和良性肿瘤)的诊断、预防和/或治疗。

Description

抗Nectin-4抗体及其应用
技术领域
本申请涉及免疫学领域。具体涉及抗Nectin-4抗体及其应用。
背景技术
Nectin-4是免疫球蛋白超家族(IgSF)中细胞黏附分子之一，是一种钙非依赖性细胞黏附分子(cell adhesionmolecules，CAM)，也被称为脊髓灰质炎病毒受体相关蛋白(poliovirus receptor-like protein 4，PVRL4)或脊髓灰质炎病毒相关受体(poliovirusreceptor-related，PRR4)。Nectin-4是一种单次跨膜蛋白，包含胞外区、跨膜区和胞内区，在胞外区含有三个高度糖基化的结构域，即靠近胞膜的两个C2结构域和远离细胞膜的一个V结构域。Nectin-4分子通过自身N-端的V结构域与H蛋白结合，从而实现病毒对细胞的感染。Nectin-4通过与钙黏素相互作用参与粘着连接的形成和维持。Nectin-4介导Ca2+非依赖性的粘附，通过驱动细胞间附着和基质非依赖性整合素蛋白β4/SHP-2/c-Src的活化来促进锚定非依赖性生长。
Nectin-4在胎儿发育过程中表达，与其他Nectins在成人组织中的广泛表达不同，其在成人组织中的表达显著下降。多个研究机构证实Nectin-4在包括乳腺癌、膀胱癌等多种肿瘤中过表达。Nectin-4在正常成人组织中的皮肤角质层、皮肤附属结构(汗腺和毛囊)、膀胱移行上皮、唾液腺、食管、乳腺和胃中弱到中等程度表达，在喉头、垂体，胎盘，睾丸，输尿管和子宫有较弱的表达。
发明内容
本申请涉及抗Nectin-4抗体及其应用。具体地，本发明涉及以下方面：
1.抗Nectin-4(例如来自人、猴如食蟹猴或鼠)抗体或抗原结合片段，所述抗Nectin-4抗体包含以下HCDR1，HCDR2，和HCDR3或其变体中的一个或多个：
(1)按照Kabat编号***，HCDR1的序列包含SEQ ID NO：8，SEQ ID NO：181-195，SEQID NO：234-248和SEQ ID NO：304-317任一项所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQID NO：9，SEQ ID NO：196-231，SEQ ID NO：251-303和SEQ ID NO：318-358任一项所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO：10，SEQ ID NO：12，SEQ ID NO：14，SEQ ID NO：16，SEQ ID NO：18，SEQ ID NO：20，SEQ ID NO：22和SEQ ID NO：24任一项所示的序列或由其组成；
(2)SEQ ID NO：7所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3；
在一些实施方案中，按照Kabat编号***，HCDR1的序列包含SEQ ID NO：8所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO：9所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO：10所示的序列或由其组成；
(3)SEQ ID NO：11所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3；
在一些实施方案中，按照Kabat编号***，HCDR1的序列包含SEQ ID NO：8所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO：9所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO：12所示的序列或由其组成；
(4)SEQ ID NO：13所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3；
在一些实施方案中，按照Kabat编号***，HCDR1的序列包含SEQ ID NO：8所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO：9所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO：14所示的序列或由其组成；
(5)SEQ ID NO：15所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3；
在一些实施方案中，按照Kabat编号***，HCDR1的序列包含SEQ ID NO：8所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO：9所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO：16所示的序列或由其组成；
(6)SEQ ID NO：17所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3；
在一些实施方案中，按照Kabat编号***，HCDR1的序列包含SEQ ID NO：8所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO：9所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO：18所示的序列或由其组成；
(7)SEQ ID NO：19所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3；
在一些实施方案中，按照Kabat编号***，HCDR1的序列包含SEQ ID NO：8所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO：9所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO：20所示的序列或由其组成；
(8)SEQ ID NO：21所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3；
在一些实施方案中，按照Kabat编号***，HCDR1的序列包含SEQ ID NO：8所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO：9所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO：22所示的序列或由其组成；
(9)SEQ ID NO：23所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3；
在一些实施方案中，按照Kabat编号***，HCDR1的序列包含SEQ ID NO：8所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO：9所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO：24所示的序列或由其组成；
(10)HCDR1的序列包含X1X2X3MS所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含X1’IX2’X3’X4’X5’X6’X7’X8’X9’YADSVKG所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ IDNO：12，14或16所示的序列或由其组成，其中X1，X2，X3，X1’，X2’，X3’，X4’，X5’，X6’，X7’，X8’，X9’和X10’表示独立选自G，A，V，L，I，S，T，C，M，N，Q，K，R，D，E，F，Y，H，P和W中的任意一种氨基酸，
在一些实施方案中，X1表示S，N，T，D或G，X2表示Y，F或S，X3表示A，G，S或Y，X1’表示A，R，G，I或W，X2’表示S，K，Y或D，X3’表示G，P，S，A，Q或W，X4’表示S，T，G，Y，H，D，W或I，X5’表示G，D，T，S，A或K，X6’表示G，S，D，A或W，X7’表示S，Y，T，N，D，V，E或G，X8’表示T，A，N，K，I，R，S或P，X9’表示Y，S，H，R，N，G，F或D；
在一些实施方案中，X1表示S，N，T，D或G，X2表示Y，N，F或S，X3表示A，G，S或不存在，X1’表示A，R，G，W或S，X2’表示S，K，Y或D，X3’表示G，P，S，T，A，Q或Y，X4’表示S，T，G，Y，H，D，W或I，X5’表示G，D，T，S，F或K，X6’表示G，S，D，A，W或不存在，X7’表示S，Y，T，N，D，V，E或G，X8’表示T，A，N，K，I，R，S或P，X9’表示Y，S，H，R，N，F或D；
在一些实施方案中，X1表示S，N，D，G或T，X2表示Y，F或S，X3表示A，D，W，S或Y，X1’表示A，S，G或V，X2’表示S，K，I，Y或D，X3’表示G，P，S，A，Q，Y，T或D，X4’表示S，T，G，Y，H，D或W，X5’表示G，D，T，S或K，X6’表示G，S，D，A或Y，X7’表示S，Y，T，N，D，V或G，X8’表示T，A，N，K，I，R或S，X9’表示Y，S，H，R，N，G，F或D；
在一些实施方案中，HCDR1的序列包含SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：181-195任一项所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：196-231任一项所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO：14所示的序列或由其组成；
在一些实施方案中，HCDR1的序列包含SEQ ID NO：8，SEQ ID NO：181，SEQ ID NO：185，SEQ ID NO：186，SEQ ID NO：187，SEQ ID NO：194和SEQ ID NO：234-248任一项所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO：9，SEQ ID NO：202和SEQ ID NO：251-303任一项所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO：12所示的序列或由其组成；
在一些实施方案中，HCDR1的序列包含SEQ ID NO：235，SEQ ID NO：238，SEQ IDNO：241和SEQ ID NO：304-317任一项所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO：318-358任一项所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO：16所示的序列或由其组成；
在一些实施方案中，所述HCDR1的序列包含SEQ ID NO：241所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含357所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO：16所示的序列或由其组成；
在一些实施方案中，所述HCDR1的序列由SEQ ID NO：241所示的序列组成，HCDR2的序列由357所示的序列组成，HCDR3的序列由SEQ ID NO：16所示的序列组成；
其中所述变体序列与所述对应的CDR序列分别具有3，2或1个氨基酸差异(优选保守氨基酸置换)或分别具有至少60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性，并且所述变体保留与Nectin-4的结合亲和力，如与Nectin-4结合的结合解离平衡常数(KD)为约1μM或更低，或KD在约100nM至约1pM之间或更低。
在一些实施方案中，所述抗Nectin-4抗体或抗原结合片段来自鸟类和哺乳动物；在一些实施方案中，所述抗Nectin-4抗体是人源、鼠源、驴源、兔源、山羊源、骆驼源、美洲驼源、马源或鸡源抗体。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：8所示的HCDR1，SEQ IDNO：9所示的HCDR2，SEQ ID NO：10所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：8所示的HCDR1，SEQ IDNO：9所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：8所示的HCDR1，SEQ IDNO：9所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：8所示的HCDR1，SEQ IDNO：9所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：8所示的HCDR1，SEQ IDNO：9所示的HCDR2，SEQ ID NO：18所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：8所示的HCDR1，SEQ IDNO：9所示的HCDR2，SEQ ID NO：20所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：8所示的HCDR1，SEQ IDNO：9所示的HCDR2，SEQ ID NO：22所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：8所示的HCDR1，SEQ IDNO：9所示的HCDR2，SEQ ID NO：24所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：181所示的HCDR1，SEQID NO：196所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：182所示的HCDR1，SEQID NO：197所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：183所示的HCDR1，SEQID NO：9所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：184所示的HCDR1，SEQID NO：199所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：185所示的HCDR1，SEQID NO：200所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：184所示的HCDR1，SEQID NO：201所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：186所示的HCDR1，SEQID NO：202所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：187所示的HCDR1，SEQID NO：203所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：183所示的HCDR1，SEQID NO：204所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：182所示的HCDR1，SEQID NO：205所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：187所示的HCDR1，SEQID NO：206所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：188所示的HCDR1，SEQID NO：207所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：189所示的HCDR1，SEQID NO：208所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：190所示的HCDR1，SEQID NO：209所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：184所示的HCDR1，SEQID NO：210所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：183所示的HCDR1，SEQID NO：211所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：185所示的HCDR1，SEQID NO：212所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：184所示的HCDR1，SEQID NO：213所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：189所示的HCDR1，SEQID NO：214所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：191所示的HCDR1，SEQID NO：215所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：183所示的HCDR1，SEQID NO：216所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：181所示的HCDR1，SEQID NO：217所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：183所示的HCDR1，SEQID NO：218所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：192所示的HCDR1，SEQID NO：219所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：8所示的HCDR1，SEQ IDNO：220所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：185所示的HCDR1，SEQID NO：207所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：190所示的HCDR1，SEQID NO：222所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：183所示的HCDR1，SEQID NO：223所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：184所示的HCDR1，SEQID NO：224所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：193所示的HCDR1，SEQID NO：225所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：184所示的HCDR1，SEQID NO：226所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：194所示的HCDR1，SEQID NO：227所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：184所示的HCDR1，SEQID NO：228所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：184所示的HCDR1，SEQID NO：229所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：189所示的HCDR1，SEQID NO：230所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：190所示的HCDR1，SEQID NO：231所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：195所示的HCDR1，SEQID NO：198所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：183所示的HCDR1，SEQID NO：221所示的HCDR2，SEQ ID NO：14所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：234所示的HCDR1，SEQID NO：251所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：8所示的HCDR1，SEQ IDNO：252所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：8所示的HCDR1，SEQ IDNO：253所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：181所示的HCDR1，SEQID NO：254所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：181所示的HCDR1，SEQID NO：255所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：181所示的HCDR1，SEQID NO：256所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：235所示的HCDR1，SEQID NO：257所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：186所示的HCDR1，SEQID NO：202所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：236所示的HCDR1，SEQID NO：258所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：237所示的HCDR1，SEQID NO：259所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：181所示的HCDR1，SEQID NO：260所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：238所示的HCDR1，SEQID NO：261所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：8所示的HCDR1，SEQ IDNO：262所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：235所示的HCDR1，SEQID NO：263所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：237所示的HCDR1，SEQID NO：264所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：8所示的HCDR1，SEQ IDNO：265所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：239所示的HCDR1，SEQID NO：266所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：237所示的HCDR1，SEQID NO：267所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：236所示的HCDR1，SEQID NO：268所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：238所示的HCDR1，SEQID NO：269所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：240所示的HCDR1，SEQID NO：270所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：241所示的HCDR1，SEQID NO：271所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：237所示的HCDR1，SEQID NO：272所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：242所示的HCDR1，SEQID NO：273所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：242所示的HCDR1，SEQID NO：274所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：185所示的HCDR1，SEQID NO：275所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：243所示的HCDR1，SEQID NO：276所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：187所示的HCDR1，SEQID NO：277所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：244所示的HCDR1，SEQID NO：278所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：245所示的HCDR1，SEQID NO：279所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：240所示的HCDR1，SEQID NO：280所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：181所示的HCDR1，SEQID NO：281所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：237所示的HCDR1，SEQID NO：282所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：8所示的HCDR1，SEQ IDNO：283所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：246所示的HCDR1，SEQID NO：284所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：247所示的HCDR1，SEQID NO：285所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：237所示的HCDR1，SEQID NO：286所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：237所示的HCDR1，SEQID NO：287所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：8所示的HCDR1，SEQ IDNO：288所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：194所示的HCDR1，SEQID NO：289所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：181所示的HCDR1，SEQID NO：290所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：243所示的HCDR1，SEQID NO：291所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：8所示的HCDR1，SEQ IDNO：292所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：181所示的HCDR1，SEQID NO：255所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：244所示的HCDR1，SEQID NO：293所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：247所示的HCDR1，SEQID NO：294所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：194所示的HCDR1，SEQID NO：295所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：238所示的HCDR1，SEQID NO：296所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：181所示的HCDR1，SEQID NO：297所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：181所示的HCDR1，SEQID NO：298所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：8所示的HCDR1，SEQ IDNO：299所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：248所示的HCDR1，SEQID NO：300所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：181所示的HCDR1，SEQID NO：301所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：237所示的HCDR1，SEQID NO：302所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：237所示的HCDR1，SEQID NO：9所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：181所示的HCDR1，SEQID NO：303所示的HCDR2，SEQ ID NO：12所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：304所示的HCDR1，SEQID NO：318所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：304所示的HCDR1，SEQID NO：319所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：305所示的HCDR1，SEQID NO：320所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：306所示的HCDR1，SEQID NO：321所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：307所示的HCDR1，SEQID NO：322所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：308所示的HCDR1，SEQID NO：323所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：306所示的HCDR1，SEQID NO：324所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：306所示的HCDR1，SEQID NO：321所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：305所示的HCDR1，SEQID NO：325所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：309所示的HCDR1，SEQID NO：326所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：310所示的HCDR1，SEQID NO：327所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：311所示的HCDR1，SEQID NO：328所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：305所示的HCDR1，SEQID NO：329所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：238所示的HCDR1，SEQID NO：330所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：309所示的HCDR1，SEQID NO：331所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：305所示的HCDR1，SEQID NO：332所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：308所示的HCDR1，SEQID NO：333所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：310所示的HCDR1，SEQID NO：334所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：307所示的HCDR1，SEQID NO：335所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：312所示的HCDR1，SEQID NO：336所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：310所示的HCDR1，SEQID NO：337所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：311所示的HCDR1，SEQID NO：338所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：313所示的HCDR1，SEQID NO：339所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：305所示的HCDR1，SEQID NO：340所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：310所示的HCDR1，SEQID NO：341所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：314所示的HCDR1，SEQID NO：339所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：315所示的HCDR1，SEQID NO：342所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：310所示的HCDR1，SEQID NO：343所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：310所示的HCDR1，SEQID NO：344所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：310所示的HCDR1，SEQID NO：339所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：305所示的HCDR1，SEQID NO：345所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：305所示的HCDR1，SEQID NO：346所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：306所示的HCDR1，SEQID NO：347所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：307所示的HCDR1，SEQID NO：339所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：235所示的HCDR1，SEQID NO：348所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：314所示的HCDR1，SEQID NO：349所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：316所示的HCDR1，SEQID NO：350所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：306所示的HCDR1，SEQID NO：351所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：304所示的HCDR1，SEQID NO：352所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：309所示的HCDR1，SEQID NO：353所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：310所示的HCDR1，SEQID NO：354所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：305所示的HCDR1，SEQID NO：355所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：305所示的HCDR1，SEQID NO：356所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3，SEQ ID NO：26所示的LCDR1，SEQ IDNO：27所示的LCDR2和SEQ ID NO：28所示的LCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：241所示的HCDR1，SEQID NO：357所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体包含SEQ ID NO：317所示的HCDR1，SEQID NO：358所示的HCDR2，SEQ ID NO：16所示的HCDR3。
在一些实施方式中，所述抗Nectin-4抗体还包含SEQ ID NO：26所示的LCDR1，SEQID NO：27所示的LCDR2和SEQ ID NO：28所示的LCDR3。
2.项目1所述的抗Nectin-4抗体或抗原结合片段，其中重链可变区中的框架区HFR1-HFR4的序列分别如SEQ ID NO：29-32所示。
3.项目1所述的抗Nectin-4抗体或抗原结合片段，其中重链可变区中的框架区HFR1的序列如SEQ ID NO：41-180任一项所示的序列的位置1-30位氨基酸序列所示，HFR2-HFR4的序列分别如SEQ ID NO：30-32所示。
4.项目1所述的抗Nectin-4抗体或抗原结合片段，其中所述抗Nectin-4抗体或抗原结合片段包含选自以下各项组成的组的重链可变区，或其变体：
(1)SEQ ID NO：7所示的序列或由其组成的重链可变区；
(2)SEQ ID NO：11所示的序列或由其组成的重链可变区；
(3)SEQ ID NO：13所示的序列或由其组成的重链可变区；
(4)SEQ ID NO：15所示的序列或由其组成的重链可变区；
(5)SEQ ID NO：17所示的序列或由其组成的重链可变区；
(6)SEQ ID NO：19所示的序列或由其组成的重链可变区；
(7)SEQ ID NO：21所示的序列或由其组成的重链可变区；
(8)SEQ ID NO：23所示的序列或由其组成的重链可变区；
(9)SEQ ID NO：41-180任一项所示的序列或由其组成的重链可变区；
(10)SEQ ID NO：179所示的序列或由其组成的重链可变区；
其中所述变体序列与所述对应的可变区序列分别具有3，2或1个氨基酸差异(优选保守氨基酸置换)或分别具有至少60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性，并且所述变体保留与Nectin-4的结合亲和力，如与Nectin-4结合的结合解离平衡常数(KD)为约1μM或更低，或KD在约100nM至约1pM之间或更低。
5.项目1-4任一项所述的抗Nectin-4抗体或抗原结合片段，其中所述抗Nectin-4抗体的重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO：37所示。在一些实施方案中，所述抗Nectin-4抗体的重链包含SEQ ID NO：7，SEQ ID NO：11，SEQ ID NO：13，SEQ ID NO：15，SEQ ID NO：17，SEQ ID NO：19，SEQ ID NO：21，SEQ ID NO：23和SEQ ID NO：41-180任一项所示的重链可变区和SEQ ID NO：37所示的重链恒定区。在一些实施方案中，所述抗Nectin-4抗体的重链氨基酸序列如SEQ ID NO：232，SEQ ID NO：233，SEQ ID NO：249和SEQ ID NO：360-363任一项所示。在一些实施方案中，其中所述抗Nectin-4抗体的重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：360所示。
6.项目1-5任一项所述的抗Nectin-4抗体或抗原结合片段，其中所述抗体还包含SEQ ID NO：25所示的轻链可变区包含的LCDR1，LCDR2和LCDR3。在一些实施方案中，按照Kabat编号***，LCDR1的序列包含SEQ ID NO：26所示的序列或由其组成，LCDR2的序列包含SEQ ID NO：27所示的序列或由其组成，LCDR3的序列包含SEQ ID NO：28所示的序列或由其组成。在一些实施方案中，轻链可变区中的框架区LFR1-LFR4的序列分别如SEQ ID NO：33-36所示。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO：25所示的轻链可变区。在一些实施方案中，所述抗体或抗原结合片段还包含SEQ ID NO：38所示的轻链恒定区。
7.项目1-6任一项所述的抗Nectin-4抗体或抗原结合片段，其中所述抗原结合片段选自Fab、Fab′、F(ab′)2、F(ab)2、Fd、Fv、dAb、Fab/c、互补决定区片段、scFv、scFv多聚体、二硫键稳定性Fv(dsFv)、(dsFv)2、双特异性dsFv(dsFv-dsFv′)、双链抗体(Diabody)、二硫键稳定的双链抗体(ds-Diabody)、由包含一个或多个CDR的抗体的一部分形成的多特异性抗体、单域抗体(sdAb)、纳米抗体、结构域抗体或二价结构域抗体。
8.特异性结合Nectin-4的多肽，其选自以下更项组成的组：
(1)多肽，其包含HCDR1，HCDR2和HCDR3的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分，其中HCDR1的序列包含SEQ ID NO：8，SEQ IDNO：181-195，SEQ ID NO：234-248和SEQ ID NO：304-317任一项所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO：9，SEQ ID NO：196-231，SEQ ID NO：251-303和SEQ ID NO：318-358任一项所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO：10，SEQ ID NO：12，SEQ ID NO：14，SEQ ID NO：16，SEQ ID NO：18，SEQ ID NO：20，SEQ ID NO：22和SEQ ID NO：24任一项所示的序列或由其组成；
(2)多肽，其包含HCDR1，HCDR2和HCDR3的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分，其中HCDR1的序列包含SEQ ID NO：8所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO：9所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQID NO：10所示的序列或由其组成；
(3)多肽，其包含HCDR1，HCDR2和HCDR3的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分，其中HCDR1的序列包含SEQ ID NO：8，SEQ IDNO：181，SEQ ID NO：185，SEQ ID NO：186，SEQ ID NO：187，SEQ ID NO：194和SEQ ID NO：234-248任一项所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO：9，SEQ ID NO：202和SEQ ID NO：251-303任一项所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO：12所示的序列或由其组成；
(4)多肽，其包含HCDR1，HCDR2和HCDR3的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分，其中HCDR1的序列包含SEQ ID NO：8和SEQ IDNO：181-195任一项所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：196-231任一项所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO：14所示的序列或由其组成；
(5)多肽，其包含HCDR1，HCDR2和HCDR3的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分，其中HCDR1的序列包含SEQ ID NO：8，SEQ IDNO：235，SEQ ID NO：238，SEQ ID NO：241和SEQ ID NO：304-317任一项所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO：9和SEQ ID NO：318-358任一项所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO：16所示的序列或由其组成；
(6)多肽，其包含HCDR1，HCDR2和HCDR3的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分，其中HCDR1的序列包含SEQ ID NO：8所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO：9所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQID NO：18所示的序列或由其组成；
(7)多肽，其包含HCDR1，HCDR2和HCDR3的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分，其中HCDR1的序列包含SEQ ID NO：8所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO：9所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQID NO：20所示的序列或由其组成；
(8)多肽，其包含HCDR1，HCDR2和HCDR3的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分，其中HCDR1的序列包含SEQ ID NO：8所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO：9所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQID NO：22所示的序列或由其组成；
(9)多肽，其包含HCDR1，HCDR2和HCDR3的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分，其中HCDR1的序列包含SEQ ID NO：8所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO：9所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQID NO：24所示的序列或由其组成；
(10)多肽，其包含SEQ ID NO：7所示的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分；
(11)多肽，其包含SEQ ID NO：11所示的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分；
(12)多肽，其包含SEQ ID NO：13所示的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分；
(13)多肽，其包含SEQ ID NO：15所示的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分；
(14)多肽，其包含SEQ ID NO：17所示的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分；
(15)多肽，其包含SEQ ID NO：19所示的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分；
(16)多肽，其包含SEQ ID NO：21所示的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分；
(17)多肽，其包含SEQ ID NO：23所示的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分；
(18)多肽，其包含SEQ ID NO：41-180任一项所示的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分。
在一些实施方案中，所述多肽还包含SEQ ID NO：26、SEQ ID NO：27和SEQ ID NO：28所示的序列。在一些实施方案中，所述多肽还包含SEQ ID NO：25所示的序列或其变体。
在一些实施方案中，所述变体序列与所述对应的序列分别具有3，2或1个氨基酸差异(优选保守氨基酸置换)或分别具有至少60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性，并且所述变体保留与Nectin-4的结合亲和力。
在一些实施方式中，本发明的抗体或抗原结合片段与Nectin-4结合的结合解离平衡常数(KD)为约1μM或更低。在一些实施方式中，本发明的抗体或抗原结合片段与Nectin-4结合的KD在约100nM至约1pM之间或更低。在一些实施方式中，本发明的抗体或抗原结合片段与Nectin-4结合的KD在约10nM至约1pM之间或更低。在一些实施方式中，本发明的抗体或抗原结合片段与Nectin-4结合的KD在约10nM至约1nM之间或更低。
在一些实施方式中，本发明的抗体或抗原结合片段与人Nectin-4(例如SEQ IDNO：2所示的抗原hNectin-4-His)结合的KD为约100nM至约1pM之间或更低。在一些实施方式中，本发明的抗体或抗原结合片段与人Nectin-4结合的KD在约10nM至约1pM之间或更低；或者，在约10nM至约1nM之间或更低。
9.生物材料，为
(1)核酸分子，其编码项目1-7任一项所述的抗Nectin-4抗体或抗原结合片段，或编码项目8所述的特异性结合Nectin-4的多肽；
(2)载体，其包含编码项目1-7任一项所述的抗Nectin-4抗体或抗原结合片段，或编码项目8所述的特异性结合Nectin-4的多肽的核酸分子；或
(3)宿主细胞，其包含编码项目1-7任一项所述的抗Nectin-4抗体或抗原结合片段，或编码项目8所述的特异性结合Nectin-4的多肽的核酸分子。
10.偶联物，其包含项目1-7任一项所述的抗Nectin-4抗体或抗原结合片段以及偶联部分，其中，所述偶联部分为纯化标签(如His标签)、可检测的标记、药物、毒素、细胞因子、酶、或其组合；或，所述偶联部分为放射性同位素、荧光物质如荧光素和罗丹明等、化学发光物质如异鲁米诺和吖啶酯等、有色物质如乳胶颗粒和胶体金等、化疗剂、生物毒素、治疗剂、药物前体、肽、蛋白质、酶、病毒、脂类、生物反应调节剂或聚乙二醇。
11.试剂盒，其包括项目1-7任一项所述的抗Nectin-4抗体或抗原结合片段、项目8所述的特异性结合Nectin-4的多肽、项目10所述的偶联物。在一些实施方案中，所述试剂盒还包括第二抗体，其特异性识别所述抗Nectin-4抗体。在一些实施方案中，所述第二抗体还包括可检测的标记，例如放射性同位素、荧光物质、化学发光物质、有色物质或酶。在一些实施方案中，所述试剂盒用于检测Nectin-4在样品中的存在或其水平。在一些实施方案中，所述试剂盒还包括针对其它抗原的抗体或其抗原结合片段，和/或细胞毒性剂，和任选地，使用说明书。
12.药物组合物，其包含项目1-7任一项所述的抗Nectin-4抗体或抗原结合片段、项目8所述的特异性结合Nectin-4的多肽、项目10所述的偶联物；可选地，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体和/或赋形剂。在一些实施方案中，所述药物组合物为适于通过皮下注射、皮内注射、静脉内注射、肌内注射或病灶内注射施用的形式。
13.项目1-7任一项所述的抗Nectin-4抗体或抗原结合片段、项目8所述的特异性结合Nectin-4的多肽、项目10所述的偶联物用于治疗和/或预防疾病或在制备治疗和/或预防疾病的药物中的用途。在一些实施方案中，所述疾病为Nectin-4表达或过表达相关的疾病。在一些实施方案中，所述疾病为Nectin-4异常表达相关的疾病。在一些实施方案中，所述疾病为表达或过表达Nectin-4的肿瘤。在一些实施方案中，所述疾病为表达或过表达Nectin-4的癌症。在一些实施方案中，所述疾病为实体瘤或血液肿瘤。在一些实施方案中，所述疾病选自乳腺癌、胰腺癌、膀胱癌、尿路上皮癌、黑色素瘤、肺癌、头颈癌、***、卵巢癌、绒毛膜癌、皮肤癌、食管癌、胃癌、子宫癌、胆囊癌、肝癌、肝细胞癌、尿道癌、肾盂癌、输尿管癌、结直肠癌、结肠癌和***癌。
14.治疗疾病的方法，包括向有需要的患者施用有效量的项目1-7任一项所述的抗Nectin-4抗体或其抗原结合片段、项目8所述的特异性结合Nectin-4的多肽、项目10所述的偶联物。在一些实施方案中，所述疾病为Nectin-4表达或过表达相关的疾病。在一些实施方案中，所述疾病为Nectin-4异常表达相关的疾病。在一些实施方案中，所述疾病为表达或过表达Nectin-4的肿瘤。在一些实施方案中，所述疾病为表达或过表达Nectin-4的癌症。在一些实施方案中，所述疾病为实体瘤或血液肿瘤。在一些实施方案中，所述疾病选自乳腺癌、胰腺癌、膀胱癌、尿路上皮癌、黑色素瘤、肺癌、头颈癌、***、卵巢癌、绒毛膜癌、皮肤癌、食管癌、胃癌、子宫癌、胆囊癌、肝癌、肝细胞癌、尿道癌、肾盂癌、输尿管癌、结直肠癌、结肠癌和***癌。
15.制备项目1-7任一项所述的抗Nectin-4抗体或抗原结合片段、项目8所述的特异性结合Nectin-4的多肽的方法，包括培养含有编码所述抗体或抗原结合片段或多肽的核酸分子的宿主细胞，可选的还包括分离所述抗体或抗原结合片段或多肽。
应理解，在本发明范围内，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
在本发明中涉及的术语具备本领域技术人员理解的常规含义。在本技术领域内使用和/或可接受的情况下，一个术语有两个或两个以上定义时，本文使用的术语的定义用于包括所有的含义。
“氨基酸”是指既含氨基又含羧基的有机化合物，比如α-氨基酸，其可直接或以前体的形式由核酸编码。单个氨基酸由三个核苷酸(所谓的密码子或碱基三联体)组成的核酸编码。每一个氨基酸由至少一个密码子编码。相同氨基酸由不同密码子编码称为“遗传密码的简并性”。氨基酸包括天然氨基酸和非天然氨基酸。天然氨基酸包括丙氨酸(三字母代码：Ala，一字母代码：A)、精氨酸(Arg，R)、天冬酰胺(Asn，N)、天冬氨酸(Asp，D)、半胱氨酸(Cys，C)、谷氨酰胺(Gln，Q)、谷氨酸(Glu，E)、甘氨酸(Gly，G)、组氨酸(His，H)、异亮氨酸(Ile，I)、亮氨酸(Leu，L)、赖氨酸(Lys，K)、甲硫氨酸(Met，M)、苯丙氨酸(Phe，F)、脯氨酸(Pro，P)、丝氨酸(Ser，S)、苏氨酸(Thr，T)、色氨酸(Trp，W)、酪氨酸(Tyr，Y)和缬氨酸(Val，V)。
“抗体”是指特异性识别和结合抗原的多肽或多肽复合物。抗体可以是完整的抗体及其任何抗原结合片段或其单链。因此术语“抗体”包括分子中含有具有与抗原结合的生物学活性的免疫球蛋白分子的至少一部分的任何蛋白质或肽。抗体包括但不局限的实施例包括重链、轻链、其配体结合部分的互补决定区(CDR)、重链可变区(VH)、轻链可变区(VL)、重链恒定区(CH)、轻链恒定区(CL)、框架区(FR)或其任何部分或结合蛋白的至少一部分。CDR区包括轻链的CDR区(LCDR1-3)和重链的CDR区(HCDR1-3)。
本领域普通技术人员可以理解，抗体的CDR区负责抗体对抗原的结合特异性。在已知抗体重链和轻链可变区序列的情况下，目前有几种确定抗体CDR区的方法，包括Kabat，IMGT，Chothia和AbM编号***。然而，每种关于抗体或其变体的CDR的定义的应用都将在本文定义和使用的术语的范围内。如果给定该抗体的可变区氨基酸序列，则本领域技术人员通常可确定哪些残基包含在特定CDR中，而不依赖于该序列自身之外的任何实验数据。
在本领域中，用性能相近或相似的氨基酸进行取代时，通常不会改变蛋白质的功能。又比如，在C末端和/或N末端添加一个或数个氨基酸通常也不会改变蛋白质的功能。出于比较两种或更多种氨基酸序列的目的，第一氨基酸序列和第二氨基酸序列之间的“序列同源性”百分数(在本文也称为“氨基酸同一性”)可以通过用[第一氨基酸序列中与第二氨基酸序列中相应位置的氨基酸残基相同的氨基酸残基数目]除以[第一氨基酸序列中的氨基酸残基总数]并且乘以[100％]而计算，其中第二氨基酸序列中氨基酸残基的每一删除、***、替换或添加——与第一氨基酸序列相比——都视作在单一氨基酸残基(位置)上的差异，即，视作本发明所定义的“氨基酸差异”。备选地，两种氨基酸序列之间的序列同一性程度可以使用已知的计算机算法进行计算，诸如NCBI Multiple Alignment(https：//www.ncbi.nlm.nih.gov/tools/cobalt/cobalt.cgi？LINK_LOC＝BlastHomeLink)。例如，在WO 04/037999，EP 0 967 284，EP 1 085 089，WO 00/55318，WO 00/78972，WO 98/49 185和GB 2 357 768-A中描述了用于确定序列同一性程度的一些其它的技术、计算机算法和设置。通常，出于按照上文列出的计算方法来确定两种氨基酸序列之间的“序列同一性”的百分数的目的，将具有最大氨基酸残基数目的氨基酸序列视作“第一”氨基酸序列，并且将另一种氨基酸序列视作“第二”氨基酸序列。
此外，在确定两种氨基酸序列之间的序列同一性程度时，专业技术人员可以考虑所谓的“保守”氨基酸替换，其通常可以描述为这样的氨基酸替换，即，其中氨基酸残基被具有相似化学结构的另一种氨基酸残基替换，并且其对所述多肽的功能、活性或其它生物学特性几乎没有或者基本上没有影响。这种保守氨基酸替换是本领域内公知的，例如，从WO04/037999，GB-A-3357768，WO 98/49185，WO 00/46383和WO 01/09300中可知；并且可以基于WO 04/037999以及WO 98/49185和其中所引用的其它参考文献的相关教导而选择这种替换的(优选)类型和/或结合。
“保守氨基酸替换”是其中氨基酸残基被具有类似侧链的氨基酸残基替换。具有类似侧链的氨基酸残基家族已在本领域中定义，其包括碱性侧链(例如赖氨酸、精氨酸、组氨酸)，酸性侧链(例如天冬氨酸，谷氨酸)，不带电荷的极性侧链(例如，甘氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸、酪氨酸、半胱氨酸)，非极性侧链(例如，丙氨酸、缬氨酸、亮氨酸、异亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、蛋氨酸、色氨酸)，β-支链的侧链(例如，苏氨酸、缬氨酸、异亮氨酸)和芳族侧链(例如酪氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、组氨酸)。因此，免疫球蛋白多肽的非必需氨基酸残基优选被来自相同侧链家族的其他氨基酸残基替换。在另一些实施方案中，一串氨基酸可被结构上类似的氨基酸串替换，后者在顺序上和/或侧链家族的组成上不同。
在下表中提供了保守性氨基酸替换的非限制性实例，其中相似性得分为0或更高表示在这两个氨基酸之间有保守替换。
C G P S A T D E N Q H K R V M I L F Y W
W -8 -7 -6 -2 -6 -5 -7 -7 -4 -5 -3 -3 2 -6 -4 -5 -2 0 0 17
Y 0 -5 -5 -3 -3 -3 -4 -4 -2 -4 0 -4 -5 -2 -2 -1 -1 7 10
F -4 -5 -5 -3 -4 -3 -6 -5 -4 -5 -2 -5 -4 -1 0 1 2 9
L -6 -4 -3 -3 -2 -2 -4 -3 -3 -2 -2 -3 -3 2 4 2 6
I -2 -3 -2 -1 -1 0 -2 -2 -2 -2 -2 -2 -2 4 2 5
M -5 -3 -2 -2 -1 -1 -3 -2 0 -1 -2 0 0 2 6
V -2 -1 -1 -1 0 0 -2 -2 -2 -2 -2 -2 -2 4
R -4 -3 0 0 -2 -1 -1 -1 0 1 2 3 6
K -5 -2 -1 0 -1 0 0 0 1 1 0 5
H -3 -2 0 -1 -1 -1 1 1 2 3 6
Q -5 -1 0 -1 0 -1 2 2 1 4
N -4 0 -1 1 0 0 2 1 2
E -5 0 -1 0 0 0 3 4
D -5 1 -1 0 0 0 4
T -2 0 0 1 1 3
A -2 1 1 1 2
S 0 1 1 1
P -3 -1 6
G -3 5
C 12
在一些实施方案中，所述保守替换是这样的替换，即，其中下列组(a)-(e)内的一个氨基酸被同组内的另一氨基酸残基替换：(a)小的脂肪族、非极性或弱极性的残基：Ala，Ser，Thr，Pro和Gly；(b)极性、带负电荷的残基及其(不带电荷的)酰胺：Asp，Asn，Glu和Gln；(c)极性、带正电荷的残基：His，Arg和Lys；(d)大的脂肪族、非极性残基：Met，Leu，Ile，Val和Cys；以及(e)芳族残基：Phe，Tyr和Trp。
在一些实施方案中，保守替换如下：Ala替换成Gly或替换成Ser；Arg替换成Lys；Asn替换成Gln或替换成His；Asp替换成Glu；Cys替换成Ser：Gln替换成Asn；Glu替换成Asp；Gly替换成Ala或替换成Pro；His替换成Asn或替换成Gln；Ile替换成Leu或替换成Val；Leu替换成Ile或替换成Val；Lys替换成Arg，替换成Gln或替换成Glu；Met替换成Leu，替换成Tyr或替换成Ile；Phe替换成Met，替换成Leu或替换成Tyr；Ser替换成Thr；Thr替换成Ser；Trp替换成Tyr；Tyr替换成Trp；和/或Phe替换成Val，替换成Ile或替换成Leu。
从α-氨基酸的结构通式可知，各种α-氨基酸的区别在于侧链R基的不同。根据R基的化学结构，氨基酸保守替换如下：Gly、Ala、Val、Leu、Ile可以彼此替换；Ser和Thr可以彼此替换；Cys和Met可以彼此替换，Asn和Gln可以彼此替换；Asp和Glu可以彼此替换；Lys和Arg可以彼此替换；Phe和Tyr可以彼此替换。
术语“抗体片段”或“抗原结合片段”包括但不限于，F(ab′)2、F(ab)2、Fab′、Fab、Fv、Fd、dAb、Fab/c、互补决定区(CDR)片段、单链Fvs(scFv）、二硫键稳定性Fv(Disulfide-stabilized Fv fragment，dsFv)、(dsFv)2、双特异性dsFv(dsFv-dsFv′)、双链抗体(Diabody)、二硫键稳定的双链抗体(ds-Diabody)、scFv多聚体(如scFv二聚体、scFv三聚体)、由包含一个或多个CDR的抗体的一部分形成的多特异性抗体、纳米抗体、单域抗体(sdab)、结构域抗体、二价结构域抗体，或任何其他与抗原结合但不包含完整的抗体结构的抗体片段。不管结构如何，抗原结合片段包括任何能够与亲本抗体或亲本抗体片段结合的相同抗原结合的多肽或多肽复合体。Mao C S等“Disulfide stabilized Fv Fragments(dsFv)：a New Type of Engineering Antibody Fragments”.Progress in Biochemistryand Biophysics，1998，25(6)：525-526介绍了dsFv的结构。Holt等″Domain antibodies：proteins for therapy″.Trends in Biotechnology(2003)：Vol.21，No.11：484-490综述了称为“结构域抗体(dAbs)”的抗原结合片段，它仅含有抗体的VH或VL结构域，因此比例如Fab和scFv更小。dAbs是抗体最小的已知的抗原结合片段，从11kDa到15kDa。术语“抗体片段”包括适配体、适配体对映体(spiegelmers)和双体(diabodies)。术语“抗体片段”也包括任何合成的或基因改造的蛋白，它们与抗体一样可结合至特定的抗原以形成复合体。通常，抗体片段具有本发明抗体的至少约50个连续氨基酸，较佳地至少约50个连续氨基酸，更佳地至少约80个连续氨基酸，最佳地至少约100个连续氨基酸。
本发明公开的抗体、抗原结合片段包括被修饰的衍生物，即通过任何类型的分子与抗体或抗原结合片段的共价连接进行修饰，其中共价连接不会阻止抗体或抗原结合片段与表位结合。抗体或抗原结合片段可以被糖基化、乙酰化、聚乙二醇化、磷酸化、酰胺化、通过已知的保护/封闭基团衍生化、蛋白水解切割、连接至细胞配体或其他蛋白质等等。众多化学修饰中的任一种修饰可以通过现有技术进行，包括但不限于特异性化学裂解、乙酰化、甲酰化、衣霉素的代谢合成等。
在一些实施方案中，抗体或抗原结合片段可以与治疗剂、药物前体、肽、蛋白质、酶、病毒、脂类、生物反应调节剂、药剂或聚乙二醇(PEG)缀合。
在一些实施方案中，Nectin-4抗原来自人，猴(如食蟹猴)或鼠。
本文所述的抗体可以来源于任何动物，包括鸟类和哺乳动物。较佳地，抗体是人源、鼠源、驴源、兔源、山羊源、骆驼源、马源或鸡源抗体。
本发明中关于细胞、核酸、多肽、抗体等所使用的术语“分离的”，例如“分离的”DNA、RNA、多肽、抗体是指分别于细胞天然环境中的其它组分如DNA或RNA中的一种或多种所分离的分子。本发明使用的术语“分离的”还指当通过重组DNA技术产生时基本上不含细胞材料、病毒材料或细胞培养基的核酸或肽，或化学合成时的化学前体或其他化学品。此外，“分离的核酸”意在包括不以天然状态存在的核酸片段，并且不会以天然状态存在。“分离的”也用于指从其他细胞蛋白质或组织分离的细胞或多肽。分离的多肽意在包括纯化的和重组的多肽。分离的多肽、抗体等通常通过至少一个纯化步骤制备。在一些实施方案中，分离的核酸、多肽、抗体等的纯度至少为约50％、约60％、约70％、约80％、约90％、约95％、约99％，或这些数值中的任何两个值之间的范围(包括终点)或其中任何值。
多聚核苷酸是由四个核苷酸碱基的特定序列组成：腺嘌呤(A)、胞嘧啶(C)、鸟嘌呤(G)、胸腺嘧啶(T)，或当多聚核苷酸是RNA时胸腺嘧啶换为尿嘧啶(U)。“多聚核苷酸序列”可以以多聚核苷酸分子的字母表示。该字母表示可以被输入到具有中央处理单元的计算机中的数据库中，并用于生物信息学应用，例如用于功能基因组学和同源性搜索。
术语“多聚核苷酸”和“核酸”可互换使用，是指任何长度的核苷酸的聚合形式，无论是脱氧核糖核苷酸还是核糖核苷酸或其类似物。多聚核苷酸可以具有任何三维结构并且可以执行已知或未知的任何功能。以下是不受限制的多聚核苷酸的实施例：基因或基因片段(例如探针、引物、EST或SAGE标签)、外显子、内含子、信使RNA(mRNA)、转运RNA、核糖体RNA、核糖酶、cDNA、dsRNA、siRNA、miRNA、重组多聚核苷酸、分支的多聚核苷酸、质粒、载体、任何序列的分离的DNA、任何序列的分离的RNA、核酸探针和引物。多聚核苷酸可以包含修饰的核苷酸，例如甲基化的核苷酸和核苷酸类似物。如果存在该修饰，则对核苷酸的结构修饰可以在组装多聚核苷酸之前或之后进行。核苷酸的序列可以被非核苷酸组分中断。聚合后可以进一步修饰多聚核苷酸，例如通过与标记组分缀合。这个术语也指双链和单链分子。除另有说明或要求外，本公开的任何多聚核苷酸的实施例包括双链形式和已知或预测构成双链形式的两种可互补单链形式中的每一种。
术语“编码”应用于多聚核苷酸时，是指被称为“编码”多肽的多聚核苷酸，在其天然状态或当通过本领域技术人员公知的方法操作时，经转录和/或翻译可以产生该多肽和/或其片段。
“治疗”是指治疗性治疗和预防性或防治性措施，其目的是预防、减缓、改善或停止不良的生理改变或紊乱，例如疾病的进程，包括但不限于以下无论是可检测还是不可检测的结果，症状的缓解、疾病程度的减小、疾病状态的稳定(即不恶化)、疾病进展的延迟或减缓、疾病状态的改善、缓和、减轻或消失(无论是部分还是全部)、延长与不接受治疗时预期的生存期限等。需要治疗的包括已经患有病症或紊乱的患者，容易患有病症或紊乱的患者，或者需要预防该病症或紊乱的患者，可以或预期从施用本发明公开的抗体、抗原结合片段或药物组合物用于检测、诊断过程和/或治疗中受益的患者。
对于治疗特定患者的有效剂量和治疗方案将取决于各种因素，包括所使用的特定抗体、抗原结合片段或衍生物、患者的年龄和体重、一般健康状况、性别和饮食，以及给药时间、***频率、药物组合，以及所治疗的特定疾病的严重程度。由包括在本领域普通技术人员范围内的医疗护理人员对这些因素进行判断。所用剂量可以通过本领域熟知的药理学和药代动力学原理确定。在一些实施方案中，本发明抗体施用于患者的剂量为每次0.01mg/kg至100mg/kg患者体重。在一些实施方案中，每星期、或每月给药一次。
“患者”指需要诊断、预后或治疗的任何哺乳动物，包括人类、狗、猫、兔子、鼠、马、牛等。在一些实施方案中，患者是人患者。
“药学上可接受的”是指药典中列出的用于动物、特别是用于人类药物的物料。此外，“药学上可接受的载体和/或赋形剂”通常将是任何类型的无毒固体、半固体或液体填充剂、稀释剂、包封材料或制剂助剂。
术语“载体”是指可以与活性成分一起施用于患者的稀释剂、佐剂、赋形剂或载体。这此类药物载体可以是无菌液体，如水和油，包括石油、动植物或合成来源的油，如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。当药物组合物静脉内给药时，水是优选的载体。盐水溶液和葡萄糖水溶液和甘油溶液也可用作液体载体，特别是用于注射溶液。合适的药物赋形剂包括淀粉、葡萄糖、明胶、麦芽、大米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、滑石、脱脂奶粉、甘油、丙烯、乙二醇、水、乙醇等。如有需要，组合物还可以含有少量的润湿剂或乳化剂，或pH缓冲剂。这些组合物可以采取溶液、悬液、乳剂、片剂、丸剂、胶囊、散剂、缓释制剂等形式。该组合物可以用传统的粘合剂和载体如甘油三酯配制成栓剂。口服制剂可以包括标准载体，例如药物等级的淀粉、硬脂酸镁、糖精钠、纤维素、碳酸镁等。合适的药物载体的实例在E.W.Martin的Remington′s Pharmaceutical Sciences中有描述，在此通过引用并入本发明。此类组合物将含有临床有效剂量的抗体或抗原结合片段，优选以纯化后的形式，连同合适数量的载体和/或赋形剂，以提供适合于患者的给药形式。该制剂应该适用于给药模式。亲本制剂可以封装在安瓿瓶、一次性注射器或由玻璃或塑料制成的多剂量小瓶中。
在一些实施方案中，根据常规步骤将组合物配制成适合静脉内注射于人体的药物组合物。用于静脉内给药的组合物是在无菌等渗水性缓冲液中的溶液。一般而言，有效成分以单位剂量形式单独供给或混在一起供给，如以干燥的冻干粉末或无水浓缩物的形式装在可指示活性剂份量的密封容器(如安瓿瓶或小袋)中。在通过输注施用组合物的情况下，可以用含有无菌药用级水或盐水的输液瓶来分装组合物。在通过注射施用组合物的情况下，可以使用注射用的无菌水或盐水的安瓿瓶，使得可以在施用之前混合有效成分。
本发明的抗体或抗原结合片段包括中性的或盐的形式。药学上可接受的盐包括但不限于与衍生自如盐酸、磷酸、乙酸、草酸、酒石酸等的阴离子形成的盐，以及与衍生自如钠、钾、铵、钙、氢氧化铁、异丙胺、三乙胺、2-乙氨基乙醇、组氨酸、普鲁卡因等的阳离子形成的盐。
“约”指相关技术领域技术人员容易知道的相应数值的常规误差范围。在一些实施方式中，本文中提到“约”指所描述的数值以及其±10％、±5％或±1％的范围。
“EC50”即半最大效应浓度(concentration for 50％of maximal effect)是指能引起50％最大效应的浓度。
抗体和编码抗体的多聚核苷酸的制备方法
本发明还公开了编码本发明所述抗体、抗原结合片段、及其衍生物的多聚核苷酸或核酸分子。本发明公开的多聚核苷酸可以编码重链可变区、轻链可变区、Fc区、部分重链可变区、部分轻链可变区、重链或轻链等。制备和编码抗体的多聚核苷酸和抗体的方法是本领域公知的并且在本发明中有所描述。
抗体可以通过本领域已知的多种方法制备，包括使用来自免疫球蛋白序列的抗体文库进行的噬菌体展示方法。也可参考美国专利4,444,887和4,716,111，以及PCT公布文本WO 98/46645、WO 98/50433、WO 98/24893、WO 98/16654、WO 96/34096、WO 96/33735和WO91/10741，每个专利的全部内容通过引用并入本文。
抗体可以通过使用常规重组DNA技术制备。使用本领域技术人员公知的技术可以选择、构建和培养生产抗体的载体及细胞系等。这些技术在各种实验室手册和主要出版物中均有描述，例如Recombinant DNA Technology for Production of ProteinTherapeutics in Cultured Mammalian Cells，D.L.Hacker，F.M.Wurm，in ReferenceModule in Life Sciences，2017，其全部内容包括补充内容通过引用并入全文。
在一些实施方案中，可以按常规方法根据本文所述抗体氨基酸序列设计合成编码抗体的DNA，将其置入表达载体中，然后转染宿主细胞，在培养基中培养被转染的宿主细胞产生单克隆抗体。在一些实施方案中，表达抗体载体包括至少一个启动子元件，抗体编码序列，转录终止信号和polyA尾。其他元件包括增强子，Kozak序列及***序列两侧RNA剪接的供体和受***点。可以通过SV40的前期和后期启动子，来自逆转录病毒的长末端重复序列如RSV、HTLV1、HIVI及巨细胞病毒的早期启动子来获得高效的转录，也可应用其它一些细胞的启动子如肌动蛋白启动子。合适的表达载体可包括pIRES1neo，pRetro-Off，pRetro-On，PLXSN，或者Plncx，pcDNA3.1(+/-)，pcDNA/Zeo(+/-)，pcDNA3.1/Hygro(+/-)，PSVL，PMSG，pRSVcat，pSV2dhfr，pBC12MI和pCS2等。常使用的哺乳动物细胞包括293细胞，Cos1细胞，Cos7细胞，CV1细胞，鼠L细胞和CHO细胞等。
在一些实施方案中，***基因片段需含有筛选标记，常见的筛选标记包括二氢叶酸还原酶，谷氨酰胺合成酶，新霉素抗性，潮霉素抗性等筛选基因，以便于转染成功的细胞的筛选分离。将构建好的质粒转染到无上述基因的宿主细胞，经过选择性培养基培养，转染成功的细胞大量生长，产生想要获得的目的蛋白。
scFv的制备可参见生产单链单元的技术(美国专利4,694,778；Bird，Science242：423-442(1988)、Huston et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 55：5879-5883(1988)和Ward et al.，Nature 334：544-554(1989)和Nie et al.，Antibody Therapeutics 3(1)：18-62(2020))。通过氨基酸桥接Fv区的重链和轻链片段形成单链单元，产生单链融合肽。也可以使用在大肠杆菌中组装功能性Fv片段的技术(Skerra et al.，Science 242：1038-1041(1988))。
可用于生产单链Fv(scFv)和抗体的技术的实例包括如美国专利4,946,778和5,258,498，以及Huston et al.，Methods in Enzymology 203：46-88(1991)、Shu et al.，Proc.Natl.Sci.USA 90：1995-1999(1993)和Skerra et al.，Science 240：1038-1040(1988)中所述。对于包括在人体内使用抗体和体外检测实验的某些用途，可以使用嵌合抗体、人源化抗体或全人源抗体。嵌合抗体是抗体的不同部分源自不同动物物种的一类分子，例如具有鼠源单克隆抗体的可变区和人源免疫球蛋白恒定区的抗体。生产嵌合抗体的方法是本领域已知的，参见Morrison，Science 229：1202(1985)；Oi et al.，BioTechniques 4：214(1986)；Gillies et al.，J.Immunol.Methods 125：191-202(1989)；Neuberger etal.，Nature 372：604-608(1984)；Takeda et al.，Nature 314：452-454(1985)；和美国专利5,807,715、4,816,567和4,816,397，其全部内容通过引用并入本文。
附图说明
图1：抗Nectin-4抗体的亲和力测定。
图2：抗Nectin-4抗体与T-47D细胞的结合活性。
图3：抗Nectin-4抗体对人Nectin-4同家族蛋白的特异性检测结果。
图4：抗Nectin-4抗体对不同种属Nectin-4的结合。
具体实施方式
以下通过实施例具体描述本发明。本领域技术人员将会理解，下面的实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体技术或条件者，按照本领域内的文献所描述的技术或条件(例如参考J.萨姆布鲁克等著，黄培堂等译的《分子克隆实验指南》，第三版，科学出版社)或按照产品说明书进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，为可以通过市场购买获得的常规产品。
实施例1：人Nectin-4胞外抗原表达
人Nectin-4胞外抗原(hNectin-4-His)按照常规方法进行制备：将人Nectin-4胞外序列(序列来源GenBank No.Q96NY8)蛋白信号肽序列更换为白蛋白信号肽(MKWVTFISLLFLFSSAYS，如SEQ ID NO：1所示)，并在其C-末端添加组氨酸标签8×His，获得抗原蛋白(序列如SEQ ID NO：2所示，表示为hNectin-4-His)，将抗原蛋白hNectin-4-His的DNA序列克隆至表达载体，瞬时转染真核细胞HEK293F细胞或稳定转染CHO细胞，挑选稳定细胞株，纯化表达。
MKWVTFISLLFLFSSAYSGELETSDVVTVVLGQDAKLPCFYRGDSGEQVGQVAWARVDAGEGAQELALLHSKYGLHVSPAYEGRVEQPPPPRNPLDGSVLLRNAVQADEGEYECRVSTFPAGSFQARLRLRVLVPPLPSLNPGPALEEGQGLTLAASCTAEGSPAPSVTWDTEVKGTTSSRSFKHSRSAAVTSEFHLVPSRSMNGQPLTCVVSHPGLLQDQRITHILHVSFLAEASVRGLEDQNLWHIGREGAMLKCLSEGQPPPSYNWTRLDGPLPSGVRVDGDTLGFPPLTTEHSGIYVCHVSNEFSSRDSQVTVDVLDPQEDSGKQVDLVSASHHHHHHHH(如SEQ ID NO：2所示，下划线部分为白蛋白信号肽)。
实施例2：对照抗体表达
对照抗体ASG-22的重链和轻链的氨基酸序列见表1。为了便于在宿主细胞中表达，在重链和轻链的N-末端分别添加信号肽，重链的N-末端连接的信号肽序列为MELGLCWVFLVAILEGVQC(如SEQ ID NO：3所示)，轻链的N-末端连接的信号肽序列为MDMRVPAQLLGLLLLWFPGSRC(如SEQID NO：4所示)。按照常规方法合成重链和轻链的DNA序列并表达该抗体，该抗体与实施例1中hNectin-4-His的结合正常。
表1：对照抗体ASG-22的氨基酸序列
实施例3：抗Nectin-4抗体制备
1)抗体序列
表2显示scFv的轻重链可变区，轻链可变区具有相同的氨基酸序列。
表2：重链可变区和轻链可变区的序列
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VH中的框架区HFR1-HFR4的序列如SEQ ID NO：29-32所示，VL中的框架区LFR1-LFR4的序列如SEQ ID NO：33-36所示。
VH中的框架区：
HFR1：
HFR2：
HFR3：
HFR4：
VL中的框架区：
LFR1：
LFR2：
LFR3：
LFR4：
2)scFv制备
将上述1F3、1G8和10F4的HCDR3克隆入HCDR1和HCDR2的scFv噬菌体库，经过筛选并挑选噬菌体克隆的上清检测，将上清液稀释50倍，通过ELISA测定对hNectin-4-His的结合OD值，3倍梯度稀释并通过ELISA测量上清液与抗原结合的滴度EC50数值，挑选OD值较高的克隆进行测序，获得如表3-8所示的各克隆的重链可变区序列及HCDR1和HCDR2序列，轻链可变区序列如SEQ ID NO：25所示。其中OD值表示ELISA检测的数值，EC50值表示上清与抗原结合活性滴度的EC50数值。
3)抗体制备
构建抗体：表2-5所示的重链可变区与重链恒定区(CH)组成抗体的重链，SEQ IDNO：25所示的轻链可变区与轻链恒定区(CL)组成抗体的轻链；CH的氨基酸序列如SEQ IDNO：37所示，CL的氨基酸序列如SEQ ID NO：38所示。为了便于在宿主细胞中表达，在重链和轻链的N-末端分别添加信号肽，重链的N-末端连接的信号肽序列为MEWSWVFLFFLSVTTGVHS(如SEQ ID NO：39所示)，轻链的N-末端连接的信号肽序列为MDMRVPAQLLGLLLLWLPGARC(如SEQ ID NO：40所示)。抗体编号与重链可变区对应的克隆编号一致。轻链的氨基酸序列如SEQ ID NO：250所示，轻链的核酸序列如SEQ ID NO：359所示。根据抗体序列实际合成核酸序列。以抗体1F3为例，其重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：232所示；以抗体1G8为例，其重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：233所示；以抗体10F4为例，其重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：249所示；以抗体10F4-3为例，其重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：360所示，重链的核酸序列如SEQ ID NO：364所示；以抗体1F3-1E4为例，其重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：361所示，重链的核酸序列如SEQ ID NO：365所示；以抗体1F3-2B9为例，其重链的氨基酸序列如SEQID NO：362所示，重链的核酸序列如SEQ ID NO：366所示；以抗体1G8-1C10为例，其重链的氨基酸序列如SEQ ID NO：363所示，重链的核酸序列如SEQ ID NO：367所示。按照常规操作方法构建轻重链表达载体，转化HEK293F细胞，获取抗体进行进一步检测。
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抗体重链恒定区(CH)氨基酸序列：
抗体轻链恒定区(CL)氨基酸序列：
抗体1F3的重链氨基酸序列如下：
抗体1G8的重链氨基酸序列如下：
抗体10F4的重链氨基酸序列如下：
抗体10F4-3的重链氨基酸序列如下：
抗体10F4-3的重链核酸序列如下：
抗体1F3-1E4的重链氨基酸序列如下：
抗体1F3-1E4的重链核酸序列如下：
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抗体1F3-2B9的重链氨基酸序列如下：
抗体1F3-2B9的重链核酸序列如下：
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抗体1G8-1C10的重链核酸序列如下：
抗体1G8-1C10的重链核酸序列如下：
共用轻链的氨基酸序列如下：
共用轻链的核酸序列如下：
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实施例4：结合活性检测
通过ELISA方法检测全抗体的结合活性，过程简述如下，包被实施例1的hNectin-4-His抗原蛋白，包被浓度为1μg/mL，脱脂奶粉过夜封闭后，分别加入梯度稀释的待检测抗体孵育(表9抗体的起始浓度为2μg/mL，2倍梯度稀释；表10和表11抗体的起始浓度为10μg/mL，3倍梯度稀释)，室温孵育2小时(h)后，加入HRP标记的抗人-kappa(Sigma，A7164)二抗孵育1h，随后加入TMB(湖州英创生物科技，TMB-S-001)显色，并用0.1M的H2SO4终止显色，酶标仪读取OD450的吸光度后，通过四参数拟合计算各抗体的结合EC50数值，比较各抗体的结合活性，结果见表9-11。
表9：抗Nectin-4抗体结合活性
抗体编号 EC50(μg/mL) 抗体编号 EC50(μg/mL)
ASG-22 0.042 1G8 0.068
3A10 0.068 1G7 0.022
10F4 0.038 1B4 0.025
10A4 0.041 1F3 0.041
1G12 0.073
表10：抗体结合活性
抗体编号 EC50(μg/mL) 抗体编号 EC50(μg/mL)
1G8-1E10 0.006 1F3-1C4 0.011
1G8-1C10 0.005 1F3-1D7 0.015
1G8-2B3 0.005 1F3-1E1 0.017
1G8-1G3 0.004 1F3-1F4 0.009
1G8-2C6 0.005 1F3-1F8 0.008
1G8-2G8 0.006 1F3-1G7 0.008
1G8-2F2 0.012 1F3-1G11 0.007
1G8-2F11 0.004 1F3-1D12 0.007
1G8-2H8 0.005 1F3-1H3 0.008
1F3-1A9 0.007 1F3-2B9 0.009
1G8-2H4 0.039 1F3-2D2 0.015
ASG-22 0.019 1F3-2E8 0.009
1F3 0.005 1F3-2F3 0.011
1F3-1B1 0.016 1F3-2B1 0.014
表11：抗体结合活性
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实施例5：亲和力测定
本研究采用表面等离子体共振(Surface Plasmon Resonance，SPR)技术(BIAcore：GE Healthcare，T200)对抗体与人Nectin-4胞外抗原的亲和力进行检测。
用Protein A芯片(Cat#29127556，GE Healthcare)进行捕获，5μg/ml抗体稀释液(稀释液是HBS-EP+(10x)：GE Healthcare，cat#BR-1006-69，工作浓度为1x)以10μl/min的流速通过实验流路(Fc2、Fc4)，捕获10秒(s)；之后流速调为30μl/min，依次进不同浓度的hNectin-4-His稀释液(0nM、1.23nM、3.7nM、11.1nM、33.3nM、100nM)，同时经过实验流路(Fc2、Fc4)和参比流路(Fc1、Fc3)表面，结合时间120s，解离时间180s，最后通过Glycine1.5对芯片进行再生。使用BiaEvaluation 3.2进行拟合分析，拟合模型用1∶1模型，拟合结果见表12-13和图1。
表12：抗Nectin-4抗体与hNectin-4-His的亲和力
抗体编号 KD(M) Ka(1/Ms) Kd(1/s) Chi2(RU2)
1G8 4.97E-09 6.05E+05 3.00E-03 0.626
ASG-22 6.03E-09 7.23E+05 4.36E-03 4.9
1G12 8.61E-09 5.39E+05 4.64E-03 0.891
1B4 5.33E-09 6.00E+05 3.20E-03 0.873
1G7 1.67E-08 3.77E+05 6.31E-03 0.124
10F4 2.77E-09 3.73E+05 1.03E-03 3.52
10A4 6.71E-09 3.46E+05 2.32E-03 1.15
3A10 2.1E-09 4.13E+05 8.67E-04 3.24
1F3 3.21E-09 8.13E+05 2.61E-03 8.81
表13：抗体亲和力
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实施例6：内吞效率测定
本试验通过FACS方法检测37℃孵育一定时间后残留在细胞表面抗体的相对数量，以反映内吞效率。方法简述如下，细胞使用T-47D细胞(人乳腺导管癌细胞，来源于中国科学院细胞库，目录号TCHu87)，将抗体调整至10μg/mL与细胞在冰上结合1h，预冷PBS洗3遍，随后放入37℃分别孵育0h、2h和4h，加入0.2％N3Na终止内吞反应，PBS洗三遍，随后加入PE标记的anti-human Fc(Invitrogen 12-4998-82)的二抗，4℃孵育30分钟(min)，流式细胞仪检测红色荧光信号。各待测抗体的内吞结果如表14-15。
表14：抗Nectin-4抗体的内吞结果
表15：抗Nectin-4抗体的内吞结果
实施例7：细胞结合曲线
本试验通过FACS检测不同抗体与Nectin-4表达阳性的T-47D细胞的结合活性，并通过四参数法分析抗体与细胞结合的EC50。方法简述如下，胰酶消化T-47D细胞(中国科学院细胞库，TCHu 87)，梯度稀释抗体并于4℃与T-47D细胞孵育0.5-1h，随后加入PE标记的anti-human Fc(Invitrogen，12-4998-82)的二抗，流式细胞仪检测红色荧光值的信号强度，并使用Graphpad Prism作图并计算EC50，结合曲线和EC50结果如表16和图2所示。
表16：抗Nectin-4抗体与细胞结合的EC50值
EC50 ASG-22 1F3 1G8 3A10 10F4
μg/mL 0.118 0.116 0.109 0.186 0.156
nM 0.788 0.770 0.727 1.241 1.039
实施例8：特异性检测
本试验通过ELISA方法检测不同抗体与人Nectin-4同家族蛋白hNectin-1(ACRO，PV1-H5223)、hNectin-2(ACRO，PV2-H52E2)、hNectin-3(ACRO，PV3-H52E4)、hNectin-4-His的结合情况，确认抗体的特异性。方法和过程参考实施例4，包被目的抗原(1μg/mL)，封闭后加入梯度稀释抗体(起始浓度为2μg/mL，2倍梯度稀释)，并加入HRP标记的抗人-Kappa二抗显色，结果见表17，抗体3A10与hNectin-3有较弱的结合外，其余抗体均有良好的特异性，不与同家族蛋白hNectin-1/2/3结合，与hNectin-4-His结合。结合曲线见图3。
表17：抗Nectin-4抗体对人Nectin-4同家族蛋白的结合
注NA表示本试验中不结合。
实施例9：种属特异性检测
Nectin-4在不同种属具有较高的同源性。
通过ELISA方法检测不同抗体与不同种属Nectin-4蛋白的结合情况。分别包被hNectin-4-His，猴cNectin-4蛋白(ACRO，NE4-C52H4)和小鼠mNectin-4蛋白(ACRO，NE4-M52H3)，梯度稀释抗体ASG-22、1F3、1G8、3A10和10F4，并加入HRP标记的抗人-Kappa二抗显色，结果见表18和图4，待检测抗体与人、食蟹猴和小鼠Nectin-4具有接近的结合活性，对照抗体与鼠Nectin-4结合有弱结合。
表18：抗Nectin-4抗体对不同种属Nectin-4的结合
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Claims (14)

1.抗Nectin-4抗体或抗原结合片段，所述抗Nectin-4抗体包含以下HCDR1，HCDR2，和HCDR3或其变体中的一个或多个：
(1)按照Kabat编号***，HCDR1的序列包含SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:181-195，SEQ IDNO:234-248和SEQ ID NO:304-317任一项所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ IDNO:9，SEQ ID NO:196-231，SEQ ID NO:251-303和SEQ ID NO:318-358任一项所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:10，SEQ ID NO:12，SEQ ID NO:14，SEQ ID NO:16，SEQ ID NO:18，SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:24任一项所示的序列或由其组成；
(2)SEQ ID NO:7所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3；
如按照Kabat编号***，HCDR1的序列包含SEQ ID NO:8所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:9所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:10所示的序列或由其组成；
(3)SEQ ID NO:11所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3；
如按照Kabat编号***，HCDR1的序列包含SEQ ID NO:8所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:9所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:12所示的序列或由其组成；
(4)SEQ ID NO:13所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3；
如按照Kabat编号***，HCDR1的序列包含SEQ ID NO:8所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:9所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:14所示的序列或由其组成；
(5)SEQ ID NO:15所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3；
如按照Kabat编号***，HCDR1的序列包含SEQ ID NO:8所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:9所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:16所示的序列或由其组成；
(6)SEQ ID NO:17所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3；
如按照Kabat编号***，HCDR1的序列包含SEQ ID NO:8所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:9所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:18所示的序列或由其组成；
(7)SEQ ID NO:19所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3；
如按照Kabat编号***，HCDR1的序列包含SEQ ID NO:8所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:9所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:20所示的序列或由其组成；
(8)SEQ ID NO:21所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3；
如按照Kabat编号***，HCDR1的序列包含SEQ ID NO:8所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:9所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:22所示的序列或由其组成；
(9)SEQ ID NO:23所示的重链可变区包含的HCDR1，HCDR2和HCDR3；
如按照Kabat编号***，HCDR1的序列包含SEQ ID NO:8所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:9所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:24所示的序列或由其组成；
(10)HCDR1的序列包含X1X2X3MS所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含X1’IX2’X3’X4’X5’X6’X7’X8’X9’YADSVKG(SEQ ID NO:368)所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:12，14或16所示的序列或由其组成，其中X1，X2，X3，X1’，X2’，X3’，X4’，X5’，X6’，X7’，X8’，X9’和X10’表示独立选自G，A，V，L，I，S，T，C，M，N，Q，K，R，D，E，F，Y，H，P和W中的任意一种氨基酸，
如，X1表示S，N，T，D或G，X2表示Y，F或S，X3表示A，G，S或Y，X1’表示A，R，G，I或W，X2’表示S，K，Y或D，X3’表示G，P，S，A，Q或W，X4’表示S，T，G，Y，H，D，W或I，X5’表示G，D，T，S，A或K，X6’表示G，S，D，A或W，X7’表示S，Y，T，N，D，V，E或G，X8’表示T，A，N，K，I，R，S或P，X9’表示Y，S，H，R，N，G，F或D；
或，X1表示S，N，T，D或G，X2表示Y，N，F或S，X3表示A，G，S或不存在，X1’表示A，R，G，W或S，X2’表示S，K，Y或D，X3’表示G，P，S，T，A，Q或Y，X4’表示S，T，G，Y，H，D，W或I，X5’表示G，D，T，S，F或K，X6’表示G，S，D，A，W或不存在，X7’表示S，Y，T，N，D，V，E或G，X8’表示T，A，N，K，I，R，S或P，X9’表示Y，S，H，R，N，F或D；
或，X1表示S，N，D，G或T，X2表示Y，F或S，X3表示A，D，W，S或Y，X1’表示A，S，G或V，X2’表示S，K，I，Y或D，X3’表示G，P，S，A，Q，Y，T或D，X4’表示S，T，G，Y，H，D或W，X5’表示G，D，T，S或K，X6’表示G，S，D，A或Y，X7’表示S，Y，T，N，D，V或G，X8’表示T，A，N，K，I，R或S，X9’表示Y，S，H，R，N，G，F或D；
或，HCDR1的序列包含SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:181-195任一项所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:196-231任一项所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:14所示的序列或由其组成；
或，HCDR1的序列包含SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:181，SEQ ID NO:185，SEQ ID NO:186，SEQ ID NO:187，SEQ ID NO:194和SEQ ID NO:234-248任一项所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:202和SEQ ID NO:251-303任一项所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:12所示的序列或由其组成；
或，HCDR1的序列包含SEQ ID NO:235，SEQ ID NO:238，SEQ ID NO:241和SEQ ID NO:304-317任一项所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:318-358任一项所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:16所示的序列或由其组成；
其中所述变体序列与所述对应的CDR序列分别具有3，2或1个氨基酸差异(优选保守氨基酸置换)或分别具有至少60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性，并且所述变体保留与Nectin-4的结合亲和力，
可选地，所述抗Nectin-4抗体或抗原结合片段来自鸟类和哺乳动物，或，所述抗Nectin-4抗体是人源、鼠源、驴源、兔源、山羊源、骆驼源、美洲驼源、马源或鸡源抗体。
2.权利要求1所述的抗Nectin-4抗体或抗原结合片段，其中重链可变区中的框架区HFR1-HFR4的序列分别如SEQ ID NO:29-32所示。
3.权利要求1所述的抗Nectin-4抗体或抗原结合片段，其中重链可变区中的框架区HFR1的序列如SEQ ID NO:41-180任一项所示的序列的位置1-30位氨基酸序列所示，HFR2-HFR4的序列分别如SEQ ID NO:30-32所示。
4.权利要求1所述的抗Nectin-4抗体或抗原结合片段，其中所述抗Nectin-4抗体或抗原结合片段包含选自以下各项组成的组的重链可变区，或其变体：
(1)SEQ ID NO:7所示的序列或由其组成的重链可变区；
(2)SEQ ID NO:11所示的序列或由其组成的重链可变区；
(3)SEQ ID NO:13所示的序列或由其组成的重链可变区；
(4)SEQ ID NO:15所示的序列或由其组成的重链可变区；
(5)SEQ ID NO:17所示的序列或由其组成的重链可变区；
(6)SEQ ID NO:19所示的序列或由其组成的重链可变区；
(7)SEQ ID NO:21所示的序列或由其组成的重链可变区；
(8)SEQ ID NO:23所示的序列或由其组成的重链可变区；
(9)SEQ ID NO:41-180任一项所示的序列或由其组成的重链可变区；
(10)SEQ ID NO:179所示的序列或由其组成的重链可变所；
其中所述变体序列与所述对应的可变区序列分别具有3，2或1个氨基酸差异(优选保守氨基酸置换)或分别具有至少60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性，并且所述变体保留与Nectin-4的结合亲和力。
5.权利要求1-4任一项所述的抗Nectin-4抗体或抗原结合片段，其中所述抗Nectin-4抗体的重链恒定区的氨基酸序列如SEQ ID NO:37所示；或，所述抗Nectin-4抗体的重链包含SEQ ID NO:7，SEQ ID NO:11，SEQ ID NO:13，SEQ ID NO:15，SEQ ID NO:17，SEQ ID NO:19，SEQ ID NO:21，SEQ ID NO:23和SEQ ID NO:41-180任一项所示的重链可变区和SEQ IDNO:37所示的重链恒定区；或，所述抗Nectin-4抗体的重链氨基酸序列如SEQ ID NO:232，SEQ ID NO:233，SEQ ID NO:249和SEQ ID NO:360-363任一项所示。
6.权利要求1-5任一项所述的抗Nectin-4抗体或抗原结合片段，其中所述抗体还包含SEQ ID NO:25所示的轻链可变区包含的LCDR1，LCDR2和LCDR3，如按照Kabat编号***，LCDR1的序列包含SEQ ID NO:26所示的序列或由其组成，LCDR2的序列包含SEQ ID NO:27所示的序列或由其组成，LCDR3的序列包含SEQ ID NO:28所示的序列或由其组成；或者，轻链可变区中的框架区LFR1-LFR4的序列分别如SEQ ID NO:33-36所示；或所述抗体或抗原结合片段包含SEQ ID NO:25所示的轻链可变区；或者所述抗体或抗原结合片段还包含SEQ IDNO:38所示的轻链恒定区。
7.权利要求1-6任一项所述的抗Nectin-4抗体或抗原结合片段，其中所述抗原结合片段选自Fab、Fab'、F(ab')2、F(ab)2、Fd、Fv、dAb、Fab/c、互补决定区片段、scFv、scFv多聚体、二硫键稳定性Fv(dsFv)、(dsFv)2、双特异性dsFv(dsFv-dsFv')、双链抗体(Diabody)、二硫键稳定的双链抗体(ds-Diabody)、由包含一个或多个CDR的抗体的一部分形成的多特异性抗体、单域抗体(sdAb)、纳米抗体、结构域抗体或二价结构域抗体。
8.特异性结合Nectin-4的多肽，其选自以下各项组成的组：
(1)多肽，其包含HCDR1，HCDR2和HCDR3的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分，其中HCDR1的序列包含SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:181-195，SEQ ID NO:234-248和SEQ ID NO:304-317任一项所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:196-231，SEQ ID NO:251-303和SEQ ID NO:318-358任一项所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:10，SEQ ID NO:12，SEQ IDNO:14，SEQ ID NO:16，SEQ ID NO:18，SEQ ID NO:20，SEQ ID NO:22和SEQ ID NO:24任一项所示的序列或由其组成；
(2)多肽，其包含HCDR1，HCDR2和HCDR3的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分，其中HCDR1的序列包含SEQ ID NO:8所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:9所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ IDNO:10所示的序列或由其组成；
(3)多肽，其包含HCDR1，HCDR2和HCDR3的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分，其中HCDR1的序列包含SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:181，SEQ ID NO:185，SEQ ID NO:186，SEQ ID NO:187，SEQ ID NO:194和SEQ ID NO:234-248任一项所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:9，SEQ ID NO:202和SEQID NO:251-303任一项所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:12所示的序列或由其组成；
(4)多肽，其包含HCDR1，HCDR2和HCDR3的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分，其中HCDR1的序列包含SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:181-195任一项所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:196-231任一项所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:14所示的序列或由其组成；
(5)多肽，其包含HCDR1，HCDR2和HCDR3的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分，其中HCDR1的序列包含SEQ ID NO:8，SEQ ID NO:235，SEQ ID NO:238，SEQ ID NO:241和SEQ ID NO:304-317任一项所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:9和SEQ ID NO:318-358任一项所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ ID NO:16所示的序列或由其组成；
(6)多肽，其包含HCDR1，HCDR2和HCDR3的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分，其中HCDR1的序列包含SEQ ID NO:8所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:9所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQIDNO:18所示的序列或由其组成；
(7)多肽，其包含HCDR1，HCDR2和HCDR3的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分，其中HCDR1的序列包含SEQ ID NO:8所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:9所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ IDNO:20所示的序列或由其组成；
(8)多肽，其包含HCDR1，HCDR2和HCDR3的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分，其中HCDR1的序列包含SEQ ID NO:8所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:9所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ IDNO:22所示的序列或由其组成；
(9)多肽，其包含HCDR1，HCDR2和HCDR3的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分，其中HCDR1的序列包含SEQ ID NO:8所示的序列或由其组成，HCDR2的序列包含SEQ ID NO:9所示的序列或由其组成，HCDR3的序列包含SEQ IDNO:24所示的序列或由其组成；
(10)多肽，其包含SEQ ID NO:7所示的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分；
(11)多肽，其包含SEQ ID NO:11所示的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分；
(12)多肽，其包含SEQ ID NO:13所示的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分；
(13)多肽，其包含SEQ ID NO:15所示的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分；
(14)多肽，其包含SEQ ID NO:17所示的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分；
(15)多肽，其包含SEQ ID NO:19所示的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分；
(16)多肽，其包含SEQ ID NO:21所示的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分；
(17)多肽，其包含SEQ ID NO:23所示的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分；
(18)多肽，其包含SEQ ID NO:41-180任一项所示的序列或其变体，其中所述多肽作为特异性结合Nectin-4的抗Nectin-4抗体的一部分；
可选的，所述多肽还包含SEQ ID NO:26、SEQ ID NO:27和SEQ ID NO:28所示的序列，或SEQ ID NO:25所示的序列或其变体，
其中所述变体序列与所述对应的序列分别具有3，2或1个氨基酸差异(优选保守氨基酸置换)或分别具有至少60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％同一性，并且所述变体保留与Nectin-4的结合亲和力。
9.生物材料，为
(1)核酸分子，其编码权利要求1-7任一项所述的抗Nectin-4抗体或抗原结合片段，或编码权利要求8所述的特异性结合Nectin-4的多肽；
(2)载体，其包含编码权利要求1-7任一项所述的抗Nectin-4抗体或抗原结合片段，或编码权利要求8所述的特异性结合Nectin-4的多肽的核酸分子；或
(3)宿主细胞，其包含编码权利要求1-7任一项所述的抗Nectin-4抗体或抗原结合片段，或编码权利要求8所述的特异性结合Nectin-4的多肽的核酸分子。
10.偶联物，其包含权利要求1-7任一项所述的抗Nectin-4抗体或抗原结合片段以及偶联部分，其中，所述偶联部分为纯化标签(如His标签)、可检测的标记、药物、毒素、细胞因子、酶、或其组合；或，所述偶联部分为放射性同位素、荧光物质、化学发光物质、有色物质、化疗剂、生物毒素、治疗剂、药物前体、肽、蛋白质、酶、病毒、脂类、生物反应调节剂或聚乙二醇。
11.试剂盒，其包括权利要求1-7任一项所述的抗Nectin-4抗体或抗原结合片段、权利要求8所述的特异性结合Nectin-4的多肽、权利要求10所述的偶联物；任选地，所述试剂盒还包括第二抗体，其特异性识别所述抗Nectin-4抗体；任选地，所述第二抗体还包括可检测的标记，例如放射性同位素、荧光物质、化学发光物质、有色物质或酶；任选地，所述试剂盒用于检测Nectin-4在样品中的存在或其水平；任选地，所述试剂盒还包括针对其它抗原的抗体或其抗原结合片段，和/或细胞毒性剂，和任选地，使用说明书。
12.药物组合物，其包含权利要求1-7任一项所述的抗Nectin-4抗体或抗原结合片段、权利要求8所述的特异性结合Nectin-4的多肽、权利要求10所述的偶联物；可选地，所述药物组合物还包括药学上可接受的载体和/或赋形剂；或者，所述药物组合物为适于通过皮下注射、皮内注射、静脉内注射、肌内注射或病灶内注射施用的形式。
13.权利要求1-7任一项所述的抗Nectin-4抗体或抗原结合片段、权利要求8所述的特异性结合Nectin-4的多肽、权利要求10所述的偶联物用于治疗和/或预防疾病或在制备治疗和/或预防疾病的药物中的用途；或者，所述疾病为Nectin-4异常表达相关的疾病；或者，所述疾病为表达或过表达Nectin-4的肿瘤；或者，所述疾病为表达或过表达Nectin-4的癌症；或者，所述疾病为实体瘤或血液肿瘤；或者，所述疾病选自乳腺癌、胰腺癌、膀胱癌、尿路上皮癌、黑色素瘤、肺癌、头颈癌、***、卵巢癌、绒毛膜癌、皮肤癌、食管癌、胃癌、子宫癌、胆囊癌、肝癌、肝细胞癌、尿道癌、肾盂癌、输尿管癌、结直肠癌、结肠癌和***癌。
14.治疗疾病的方法，包括向有需要的患者施用有效量的权利要求1-7任一项所述的抗Nectin-4抗体或其抗原结合片段、权利要求8所述的特异性结合Nectin-4的多肽、权利要求10所述的偶联物；或者，所述疾病为Nectin-4异常表达相关的疾病；或者，所述疾病为表达或过表达Nectin-4的肿瘤；或者，所述疾病为表达或过表达Nectin-4的癌症；或者，所述疾病为实体瘤或血液肿瘤；或者，所述疾病选自乳腺癌、胰腺癌、膀胱癌、尿路上皮癌、黑色素瘤、肺癌、头颈癌、***、卵巢癌、绒毛膜癌、皮肤癌、食管癌、胃癌、子宫癌、胆囊癌、肝癌、肝细胞癌、尿道癌、肾盂癌、输尿管癌、结直肠癌、结肠癌和***癌。
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